生物选择性必修3基因工程的基本操作程序教学ppt课件

这是一份生物选择性必修3基因工程的基本操作程序教学ppt课件，共18页。PPT课件主要包含了PCR，DNA半保留复制，聚合酶链式反应，各种组分，反应条件，目的基因的核苷酸序列，大量复制，解旋酶，DNA母链，种脱氧核苷酸等内容，欢迎下载使用。
4.利用PCR扩增目的基因
穆里斯等人发明1993年获诺贝尔奖
_______________的缩写
是一项在______提供参与DNA复制的________与_________，对________________________进行_____________的技术。
含目的基因的DNA母链
4种脱氧核苷酸（dNTP）
耐高温的DNA聚合酶（Taq酶)
（1）DNA复制所需的基本条件:
耐高温的DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶）
稳定的缓冲溶液（一般添加Mg2+）
四种脱氧核苷酸(dNTP)
①DNA模板（需含有目的基因）②分别与模板DNA相结合的2种引物③四种脱氧核苷酸④耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）⑤稳定的缓冲溶液（一般添加Mg2+）⑥能严格控制温度的温控设备
变性当温度超过_____时，双链DNA受热变性，断开氢键，形成__________。
复性当温度下降到______左右，___种引物通过______________与两条单链DNA结合。
延伸 当温度上升到_____左右，以_________为模板，4种脱氧核苷酸在_______________________酶的作用下，根据______________原则合成新的DNA链，该DNA链的延伸方向是_____________。
耐高温的DNA聚合（Taq）
PCR过程中，每个循环得到的产物都将作为下一个循环的模板，因此经过n次循环，1个DNA分子将被扩增为_____个，成______式扩增。
PCR过程可以在PCR扩增仪（PCR仪）中自动完成，完成以后，常采用琼脂糖凝胶电泳来鉴定PCR的产物。
PCR技术扩增与DNA复制的比较
热稳定的DNA聚合酶（Taq酶）
1.利用PCR在体外进行DNA片段扩增
①PCR利用了DNA的热变性原理，通过调节温度来控制DNA双链的解聚与结合；PCR仪实质上就是一台能够自动调控温度的仪器，一次PCR一般要经历30次循环。
②PCR扩增DNA片段还利用了DNA半保留复制原理。
DNA片段的扩增及电泳鉴定
①带电粒子：DNA分子具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团可带正电荷或负电荷。
②迁移动力与方向：在电场的作用下，带电分子会向着与它所带电荷相反的电极移动，这个过程就是电泳。
③迁移速率：在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子的大小和构象有关。
④检测：凝胶中的DNA分子通过染色，可以在波长为300 nm的紫外灯下被检测出来。
4种脱氧核苷酸等量混合液、2种引物、TaqDNA聚合酶、模板DNA、扩增缓冲液、无菌水。电泳缓冲液、凝胶载样缓冲液、琼脂糖和核酸染料等
1．用微量移液器按照配方或PCR试剂盒的说明书，在微量离心管中依次加入各组分。
2．待所有的组分都加入后，盖严离心管的盖子。将微量离心管放在离心机上，离心约10s，使反应液集中在管的底部。
3．参照下表参数，设置好PCR仪的循环程序。将装有反应液的微量离心管放入PCR仪中，设置程序进行反应。
预变性使DNA充分变性以利引物和模板更好结合
4．用电泳缓冲液配制琼脂糖溶液，常配制质量分数为0.8%～1.2%的琼脂糖溶液，在沸水浴或微波炉熔化，稍冷却加入适量核酸染料混匀。
5．将温热的琼脂糖溶液迅速倒入模具，并插入合适大小的梳子，以形成加样孔。待凝胶溶液完全凝固，小心拔出梳子，取出凝胶放入电泳槽内。
6．将电泳缓冲液加入电泳槽中，电泳缓冲液没过凝胶1mm为宜。
7．将扩增得到的PCR产物与凝胶载样缓冲液（内含指示剂）混合，再用微量移液器将混合液缓慢注入凝胶的加样孔内。留一个加样孔加入指示分子大小的标准参照物。
接通电源，根据电泳槽阴阳极间的距离来设定电压（1～5V/cm）。待指示剂前沿移近凝胶边时停止。
8．取出凝胶置于紫外灯下观察和照相。
1.你是否成功扩增出DNA片段？判断的依据是什么？
可以在紫外灯下直接观察到DNA条带的分布及粗细程度来评价扩增的结果。进行电泳鉴定的结果应该是一条条带，该片段大小约为750bp。