高考生物二轮复习考点重难点训练重难点17 微生物的培养与计数（2份，原卷版+解析版）

这是一份高考生物二轮复习考点重难点训练重难点17 微生物的培养与计数（2份，原卷版+解析版），文件包含20252026学年度六年级第一学期数学科北师大版第一单元测试卷B卷docx、参考答案与详情解析docx等2份试卷配套教学资源，其中试卷共11页， 欢迎下载使用。
知识点一： 选择培养基与鉴别培养基的比较
知识点二：消毒和灭菌的辨析
知识点三：两种纯化方法的比较
知识点四：两种微生物计数方法的比较
注：细菌的数目还可以通过滤膜法来测定。
知识点五：微生物的筛选与鉴别方法
(1)微生物的筛选方法
(2)微生物的鉴别方法
知识点六：微生物的分离与计数实验中对照组和重复组的设置及作用
(1)两种对照组的设置及作用
①判断培养基中“是否有杂菌污染”，需将未接种的培养基同时进行培养。
②判断选择培养基“是否具有筛选作用”，需设置牛肉膏蛋白胨培养基进行接种后培养，观察两种培养基上菌落数目，进行对比得出结论。
(2)重复组的设置及作用：为排除偶然因素对实验结果的干扰，在每一稀释度下宜设置至少3个平板作重复组，选择菌落数均在30～300且数目相差不大的三个平板，用“平均值”代入计数公式予以计算菌落数。
以微生物为背景，主要考查微生物的分离筛选、灭菌和计数等知识，微生物的分离与纯化过程以及相关注意点，掌握微生物纯化的方法，需要学生加强理解，同时熟悉课本。微生物这章节会有一定的计算量，对学生的理解能力要求较高。
（建议用时：30分钟）
一、单选题
1．某兴趣小组对培养液中酵母菌种群数量变化进行研究，结果如下图。有关叙述错误的是（ ）
A．实验需要对实验器皿、培养液进行灭菌处理，并在酒精灯火焰附近接种
B．该实验中摇床的转速、温度、培养液的体积是无关变量，时间是唯一的自变量
C．该实验需每隔2小时记数一次或每隔2小时接种一支试管最后一起计数
D．用台盼蓝染色后对酵母菌计数，只计呈无色的个体，超过母体一半大的芽体也计数
2．下列有关实验的叙述，错误的是（ ）
A．用花生子叶通过切片法做脂肪的鉴定，需用显微镜才能看到红色的脂肪滴
B．用萃取法提取胡萝卜素时，应该避免明火加热，采用水浴加热
C．将正常奶粉样液2mL注入试管，再加入一定量的蛋白酶，再加入双缩脲试剂，不会产生紫色反应
D．平板划线操作中，灼烧接种环的次数多于在培养基上划线区域数
3、已知固体培养基会因碳酸钙的存在而呈乳白色，且乳酸能分解培养基中碳酸钙。某同学用新鲜的泡菜滤液为材料进行了分离纯化乳酸菌的实验，下列叙述错误的是（ ）
A．分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用是鉴别乳酸菌
B．分离纯化所用的培养基加入锥形瓶后一般还要进行灭菌处理
C．分离纯化乳酸菌时，需要用无菌水对泡菜滤液进行梯度稀释
D．分离纯化乳酸菌时，应挑选出不具有透明圈的菌落作为候选菌
4、野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长，氨基酸营养缺陷型突变株无法合成某种氨基酸，只能在完全培养基上生长，下图为纯化某氨基酸营养缺陷型突变株的部分流程图，①②③④代表培养基，A、B、C表示操作步骤，D、E为菌落。下列叙述错误的是（ ）
A．图中①②④为完全培养基，③为基本培养基
B．A操作的目的是提高突变率，增加突变株的数量
C．B的正确操作是用涂布器蘸取菌液后均匀地涂布在②表面
D．经C过程原位影印及培养后，可从④中挑取D进行纯化培养
5、为高效降解农业秸秆废弃物，研究人员利用从土壤中筛选获得的3株纤维素分解菌，在37℃条件下进行玉米秸秆降解实验，结果如下表所示。下列分析正确的是（ ）
A．从土壤中筛选纤维素分解菌的培养基中的唯一氮源是纤维素
B．如果将上述实验中的温度条件调整至25℃，效果会更明显
C．实验中需要设置一个不接种纤维素分解菌的空白对照实验
D．纤维素酶活力最高的是菌株C，需用选择培养基扩大培养
6、为纯化菌种，在鉴别培养基上划线接种纤维素降解细菌，培养结果如图所示。下列叙述正确的是（ ）
A．倒平板后需间歇晃动，以保证表面平整
B．图中Ⅰ、Ⅱ区的细菌数量均太多，应从Ⅲ区挑取单菌落
C．该实验结果因单菌落太多，不能达到菌种纯化的目的
D．每次划线前都需要蘸取菌液
7、下列关于筛选分解尿素的微生物的培养基的叙述，错误的是（ ）
A．可以将尿素作为培养基的唯一氮源
B．脲酶可以将尿素分解为NH3，然后直接被植物吸收利用
C．培养基中含有水、碳源、氮源和无机盐等营养物质
D．用酚红鉴定尿素分解菌的原理是pH升高酚红试剂会变红
8、下图为利用玉米秸秆制备绿色能源——乙醇的工艺流程图，相关叙述错误的是（ ）
A．对玉米秸秆进行预处理的酶也可从腐木上的霉菌中提取
B．图中培养产酶微生物的培养基中的碳源一般为葡萄糖
C．在糖液发酵过程中，发酵装置一般应严格密封处理
D．发酵产生的酒精可与酸性重铬酸钾溶液反应变成灰绿色
9、下列关于探究抗生素对细菌选择作用的相关描述，正确的是（ ）
A．平板培养基划了4个区域，1个区域为对照组，另外3个均为实验组
B．对照组不放置无菌纸片，实验组放置含抗生素的无菌纸片
C．接种涂布后的培养皿正向放置于37℃的恒温箱中培养12~16h
D．抑菌圈越大细菌耐药性越强，应从远离抑菌圈的菌落挑取细菌继续培养
10、下图表示研究人员在实验室中使用的分批培养细菌的方法，下列叙述错误的是（ ）
A．尿素分解菌可利用培养基中的尿素是因为能合成脲酶
B．短期保存的菌种，可将菌液加入甘油后放在冷冻箱中冷藏
C．液体选择培养基通常可用于选择培养，增加目标菌种的浓度
D．将三角瓶放在摇床上振荡培养能提高溶氧量和养料的利用率
11、大肠杆菌的体积大小通常在0.5~3 μm，下图为分离培养获得大肠杆菌噬菌体的实验操作过程。相关叙述正确的是（ ）
A．使用污水是因为其中含有大量大肠杆菌，能很容易地分离到大肠杆菌噬菌体
B．步骤A的目的是让大肠杆菌噬菌体利用培养基中的蛋白质等成分迅速增殖
C．步骤B的目的是促进噬菌体与大肠杆菌分离，从而获得更纯的大肠杆菌
D．检测滤液中是否有大肠杆菌噬菌体，应该用含有大肠杆菌的液体培养基
12、酵母中的蛋白含量高，可用作饲料蛋白，且有些酵母能利用工业废甲醇作为碳源进行繁殖。研究人员拟从土壤中分离该类酵母并大量培养，操作流程如下图。下列相关叙述正确的是（ ）
A．土样、培养基、培养器皿和接种工具等都必须严格灭菌
B．只有③过程中使用的培养基需以甲醇作为唯一的碳源
C．⑤过程扩大培养时需要保证充足的营养并营造无氧环境
D．通过逐步提高培养基中甲醇的浓度可获得甲醇高耐受菌株
二、非选择题
13． 产脂肪酶酵母可用于含油废水处理。为筛选产脂肪酶酵母菌株，科研人员开展了相关研究。请回答下列问题：
(1)常规微生物实验中，下列物品及其灭菌方法错误的是___________________（填编号）。
(2)称取1．0g某土壤样品，转入99mL无菌水中，制备成菌悬液，经梯度稀释后，获得细胞密度不同的菌悬液。分别取0．1mL菌悬液涂布在固体培养基上，其中10倍稀释的菌悬液培养后平均长出了46个酵母菌落，则该样本中每克土壤约含酵母菌___________________个。
(3)为了进一步提高酵母菌产酶能力，对分离所得的菌株，采用射线辐照进行___________________育种。将辐照处理后的酵母菌涂布在以___________________为唯一碳源的固体培养基上，培养一段时间后，按照菌落直径大小进行初筛，选择直径___________________的菌落，纯化后获得A、B两突变菌株。
(4)在处理含油废水的同时，可获得单细胞蛋白，实现污染物资源化。为评价A、B两菌株的相关性能，进行了培养研究，结果如图。据图分析，应选择菌株___________________进行后续相关研究，理由是_________________________________________________________。
14、解磷菌是一种能将土壤中植物不能利用的磷转化为植物可以利用磷的功能微生物（主要为细菌），在提高土壤中有效磷含量、促进磷循环方面发挥着重要作用。解磷菌能分解含磷化合物使得菌落周围会出现透明圈。如图为从某植物根际土壤中筛选出高效解磷菌的部分流程示意图，据图回答下列问题。
(1)为筛选解磷菌，A培养基的碳源最合适的是_______。
A．葡萄糖B．难溶性磷酸盐C．二氧化碳D．碳酸盐
(2)为避免杂菌影响，需要对操作Ⅱ所需仪器进行灭菌的是_______。
A．B培养基B．滴管C．接种环D．玻璃刮铲
(3)若筛选更高效解磷菌，应挑选C中________（①/②/③/④）号菌落。
分离出的解磷菌，需通过分子鉴定以确定种属关系。常用的方法是对细菌的核糖体RNA（16S-rRNA）所对应的16SrDNA进行序列分析。
(4)根据16S-rRNA合成16SrDNA的过程，所需要的条件或物质有_______。
①DNA ②脱氧核苷酸 ③逆转录酶 ④核糖核苷酸 ⑤蛋白质
(5)判断解磷菌的种属，可以通过16SrDNA序列分析和菌落的特性两种方法进行，比较这两种方法的优劣___________________。项目
选择培养基
鉴别培养基
制备方法
培养基中加入某些化学物质
培养基中加入某种指示剂或化学药品
原理
依据某些微生物对某些物质或环境条件的嗜好或抗性而设计
产生特定的颜色或其他变化
用途
从众多微生物中分离出所需的微生物
鉴别不同种类的微生物
项目
条件
结果
常用方法
应用范围
消毒
较为温和的物理或化学方法
仅杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)
煮沸消毒法
日常用品
巴氏消毒法
不耐高温的液体
化学药剂消毒法
用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源
灭菌
强烈的理化因素
杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子
灼烧灭菌法
接种工具
干热灭菌法
玻璃器皿、金属用具
高压蒸汽灭菌法
培养基及容器的灭菌
项目
平板划线法
稀释涂布平板法
分离结果


关键操作
接种环在固体培养基表面连续划线
①一系列的梯度稀释②涂布平板操作
接种用具
接种环
涂布器
注意事项
(1)接种环的灼烧：①第一次划线前，避免接种环上可能存在的微生物污染培养基；②再次划线前，杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，使每次划线的菌种直接来源于上次划线的末端；③划线结束后，杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。
(2)接种环灼烧后，要冷却后才能接触菌液，以免温度太高杀死菌种。
(3)划线时用力要大小适当，防止用力过大将培养基划破
(1)在进行稀释操作时，每支试管及其中的9 mL水、移液管均需灭菌；操作时，试管口和移液管应在离酒精灯火焰1～2 cm处。
(2)涂布平板时：①涂布器用体积分数为70%的酒精消毒，取出时要让多余酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃；②不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精；③酒精灯与培养皿距离要合适，移液管头不要接触任何其他物体
优点
可以观察菌落特征，对混合菌进行分离
可以计数，可以观察菌落特征
缺点
不能计数
操作较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延
共同点
都要用到固体培养基；都需进行无菌操作；都会在培养基表面形成单个的菌落；都可用于观察菌落特征
项目
间接计数法
(稀释涂布平板法)
直接计数法
(显微镜计数法)
原理
当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌
利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量
公式
每克样品中的菌落数＝eq \f(C,V)×M
每毫升原液所含细菌数：每小格内平均细菌数×400×104×稀释倍数
缺点
当两个或多个菌体连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落
不能区分细胞死活
结果
比实际值偏小
比实际值偏大
单菌落挑取法
利用平板划线法或稀释涂布平板法接种到固体平板培养基表面，直接根据微生物菌落的特征利用单菌落挑取的方法获得目的微生物
选择培养法
利用选择培养基对微生物进行选择培养，直接获得目的微生物
鉴定培养法
利用鉴别培养基使目的微生物菌落呈现特有的特征，然后筛选目的微生物
菌落特征鉴别法
根据微生物在固体培养基表面形成的菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等特征进行鉴别
指示剂鉴别法
如培养基中加入酚红指示剂，培养某种微生物后，培养基变红说明该种微生物能够分解尿素
染色鉴别法
如利用刚果红染色法，根据培养基中出现以纤维素分解菌为中心的透明圈来鉴别分解纤维素的微生物
菌株
秸秆总重(g)
秸秆残重(g)
秸秆失重(%)
纤维素降解率(%)
A
2．00
1．51
24．50
16．14
B
2．00
1．53
23．50
14．92
C
2．00
1．42
29．00
23．32
编号
①
②
③
④
物品
培养基
接种环
培养皿
涂布器
灭菌方法
高压蒸汽
火焰灼烧
干热
臭氧