人教版 (2019)选择性必修3微生物的选择培养和计数试讲课教学课件ppt

这是一份人教版 (2019)选择性必修3微生物的选择培养和计数试讲课教学课件ppt，共26页。PPT课件主要包含了选择培养基，美国黄石公园的热泉，筛选原则，温度和pH等，分离固氮菌，分离自养型微生物，④加高浓度食盐，金黄色葡萄球菌，⑤金黄色葡萄球菌，①加入青霉素的培养基等内容，欢迎下载使用。
1.科学实例：寻找耐高温的DNA聚合酶
聚合酶链式反应（PCR）是一种在体外扩增DNA片段的技术，此项技术要求使用耐高温的DNA聚合酶。1973年，布鲁克在美国黄石国家公园的一个热泉中发现了耐热的水生栖热菌，并从这种菌种提取出耐高温的DNA聚合酶。筛选原因：水生栖热菌能在70-80℃高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下不能生存。
根据微生物对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找
那么，如何从众多的微生物中筛选出单一菌种？
根据微生物对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。
有利于目的菌生长的条件有哪些？
分离酵母菌、霉菌等真菌
3.选择培养基：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，叫做选择培养基。
能消除石油污染的微生物
③不加含碳有机物的无碳培养基
②不加氮源的无氮培养基
稀释涂布平板法：必须要对土样充分稀释后，然后将菌液涂布到制备好的选择培养基上。
2.微生物选择培养获取纯培养物的方法
分离并计数某种微生物的数量（例如，能分解尿素的细菌）。
①铲取土样，将样品装入纸袋中
②将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀，制成菌液。
稀释涂布平板法的操作过程
②取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。
3.稀释涂布平板法的操作过程
③取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。
④将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。
⑤将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。
⑥用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。
待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，培养
①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过计数平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
选择30-300个菌落的平板进行计数；每个稀释度至少取3个平板取其平均值；统计的菌落往往比活菌的实际数目低；统计的结果一般用菌落数而不是活菌数；恰当的稀释度、涂布是否均匀是成功统计菌落数目的关键。
因为当两个或多个细胞连在一起时，繁殖后形成的还是一个菌落
1.间接计数法 — 稀释涂布平板法
C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数；
V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)
③计算公式：每g样品中的菌落数＝(C÷V)×M
例题1：某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每g样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL) ( )A. 2.34×108 B. 2.34×109C. 234 D. 23.4
不能区分死菌与活菌；个体小的细菌在显微镜下难以观察；
2.直接计数 —计数板计数法
①原理：利用细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。
四、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
①原理：绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以尿素作唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。
常见的分解尿素的微生物：芽孢杆菌、小球菌、棒状杆菌等细菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。
KH2PO4和Na2HPO4的作用是：①提供无机盐；②调节pH。
细菌宜在酸碱度接近中性的潮湿土壤中生长，绝大部分分布在距地表3-8cm的土壤层。铲去表层土3cm左右，取样，将样品装入事先准备好的信封中。
不同微生物在土壤中含量不同，分离不同的微生物采用不同的稀释度，以保证获得菌落数在30～300之间，适于计数的平板。
测细菌数：一般用104、105、106稀释液测放线菌：一般用103、104、105稀释液测真菌数：一般用102、103、104稀释液
选择一个比较宽的范围，将1×103～1×107倍稀释的稀释液分别涂布到平板上培养，以保证能从中选择出菌落数在30～300的平板进行计数
思考：在初次实验中，对于稀释的范围没有把握，怎样做才能保证从中选择出菌落数在30～300的平板进行计数？
（3）稀释涂布平板法接种
①不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。细菌一般在30-37℃的温度下培养1-2d。
③一般来说，在相同的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征，如形状、大小和颜色等。
②每隔24h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
（4）微生物的培养与观察
①实验组：3组接种的选择培养基➯用以分离并计数能分解尿素的细菌 第4组接种的牛肉膏蛋白胨培养基➯用以判断选择培养基是否具 有选择作用
②对照组：第5组不涂布稀释液的选择培养基➯用以验证培养基中是否含有杂菌 第6组牛肉膏蛋白胨培养基➯用以验证培养基中是否含有杂菌
③实验结果：前3组实验组分离得到单菌落； 第4组得到多种菌落； 第5,6组正常情况下无菌落。
本实验使用的平板和试管较多，为了避免混淆，最好在使用前做好标记。
本实验耗时较长，需要事先规划时间，以便提高实验效率，在操作时有条不紊。
1、取土用的小铁铲的盛土样的信封在使用前都需要灭菌。2、应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。3、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作。
思考2：在以尿素作为唯一氮源的培养基中分离出的微生物都是能分解尿素的吗？
思考1：样品的稀释操作是否成功？
如果得到了2个或2个以上菌落数目在30～300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数。
不一定。因为有些微生物可以利用其他微生物的代谢产物进行生长繁殖。
pH升高，酚红指示剂变红
土壤中分解尿素的细菌的鉴定
在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果pH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。
微生物选择培养获取纯培养物的方法-稀释涂布平板法
微生物的选择培养和计数
选择培养基的概念及举例
间接计数法 — 稀释涂布平板法
直接计数 —计数板计数法
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
Ⅰ.系列稀释操作a.编号为101～106试管中分别盛有 水。b.用移液管吸取 培养的菌液，注入101倍稀释的试管中，得到稀释菌液。c.从101倍稀释的试管中吸取1 mL稀释液，注入102倍稀释的试管中。依次类推，完成菌液的稀释。注意：移液管要经过灭菌，并且操作应在酒精灯火焰附近完成。
取菌液：取少量菌液（0.1mL)滴加到 表面 涂布器消毒：将涂布器浸在盛有 的烧杯中 涂布器灭菌：将沾有少量酒精的涂布器在火焰上灼烧，待酒 精燃尽后， 8～10 s涂布平板：用涂布器将 均匀涂布在培养基表面，涂布 时可转动培养皿，使菌液分布均匀
例题2.甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中微生物的数量，在同一稀释倍数下得到以下结果：甲同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是110、140和149，取平均值133；乙同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是27、169和176，取平均值124。有人认为这两位同学的结果中，乙同学的结果可信度低，其原因是____________________________________________________________ 。
乙同学的结果中，1个平板的计数结果与另2个相差悬殊，结果重复性差
抑制其他微生物生长，促进目的微生物的生长
用尿素作唯一氮源的培养基来筛选尿素分解菌
伊红—美蓝培养基鉴定大肠杆菌
选择培养基和鉴别培养基