考点47 微生物的培养和应用-备战2021年高考生物一轮复习考点一遍过 学案

考点47 微生物的培养和应用
高考频度：★★★☆☆ 难易程度：★★★☆☆

1．培养基
（1）概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
（2）营养组成：一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。此外，还需要满足微生物生长对pH、氧气以及特殊营养物质的要求。
（3）种类：按照物理性质可分为液体培养基和固体培养基。
2．无菌技术
（1）含义：指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。
（2）关键：防止外来杂菌的入侵。
（3）不同对象的无菌操作方法(连线)

3．大肠杆菌的纯化培养
（1）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
①操作步骤
→→→→
②倒平板的方法及注意事项

a．请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：丙→乙→甲→丁。
b．甲、乙、丙中的灭菌方法是灼烧灭菌。
c．丁中的操作需要等待平板冷却凝固才能进行。
（2）纯化大肠杆菌的方法
①纯化培养原理：想方设法在培养基上得到由一个细菌繁殖而来的肉眼可见的菌落，即可获得较纯的菌种。
②纯化大肠杆菌的关键步骤是接种。
③常用的微生物接种方法有两种
a．平板划线法：是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
b．稀释涂布平板法：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。
系列稀释操作(如图所示)：

涂布平板操作(如图所示)：

（3）菌种的保存方法
①对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。
②对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。
4．土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
（1）分离原理：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到催化作用。
（2）统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用稀释涂布平板法。
（3）实验流程：土壤取样→样品的稀释→微生物的培养与观察→细菌的计数。
5．分解纤维素的微生物的分离
（1）纤维素酶
①组成：纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。
②作用
纤维素纤维二糖葡萄糖
（2）纤维素分解菌的筛选
①原理

②筛选方法：刚果红染色法，即通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。
③培养基：以纤维素为唯一碳源的选择培养基。
④实验流程


考向一 培养基及其制备方法分析

1．下表为某培养基的配方，下列叙述正确的是
成分
蛋白胨
葡萄糖
K2HPO4
伊红
美蓝
蒸馏水
含量
10 g
10 g
2 g
0.4 g
0.065 g
1 000 mL
A．从物理性质看该培养基属于液体培养基，从用途看该培养基属于选择培养基
B．该培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白胨
C．该培养基缺少提供生长因子的物质
D．该培养基调节合适的pH后就可以接种使用
【答案】B
【解析】分析表中成分可知，该培养基中没有凝固剂，为液体培养基，该培养基的营养成分齐全，但存在伊红、美蓝等鉴别物质，属于鉴别培养基，A项错误；该培养基中的蛋白胨既是唯一的氮源，也是碳源，而葡萄糖是绝大多数生物最常利用的碳源，B项正确；该培养基中存在的无机盐和蛋白胨中的某些物质可以看作是生长因子，C项错误；培养基调节完pH还要进行灭菌等操作后，才能使用，D项错误。
解题必备
1．培养基的配制原则
（1）目的要明确：配制时应根据微生物的种类、培养目的等确定配制的培养基种类。
（2）营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。
（3）pH要适宜：细菌为6.5～7.5，放线菌为7.5～8.5，真菌为5.0～6.0，培养不同微生物所需pH不同。
2．微生物对主要营养物质的需求特点
不同种类的微生物代谢特点不同，因此对培养基中营养物质的需求也不同。
（1）自养型微生物所需的主要营养物质是无机盐，碳源可来自大气中的CO2，氮源可由含氮无机盐提供。
（2）异养型微生物所需的营养物质主要是有机物，即碳源必须由含碳有机物提供，氮源也主要是由有机物提供，部分异养型微生物也可以利用无机氮源。

2．如下表所示为培养某种微生物的培养基的配方，请回答：
成分
NaNO3
K2HPO4
MgSO4·7H2O
FeSO4
(CH2O)
琼脂
H2O
含量
3 g
1.5 g
0.5 g
0.01 g
30 g
10 g
1 000 mL
（1）依物理性质，该培养基属于__________培养基。
（2）根据培养基原料，所培养微生物的同化作用类型是_________。
（3）该培养基中的碳源是__________。
（4）不论何种培养基，在配好之后倒平板之前都要先进行的_________；倒平板时，一般需冷却至________左右，并在___________________操作。
（5）若用该培养基培养分解尿素的细菌，应除去物质____________，并加入物质________
【答案】（1）固体 （2）异养型 （3）(CH2O)（4）灭菌 50 ℃ 酒精灯附近
（5）NaNO3 尿素
【解析】（1）该培养基的配制使用了凝固剂琼脂，依物理性质属于固体培养基。（2）根据题目所给的培养基配方，所培养微生物生长所需的碳源是有机碳源(CH2O)可推知，其同化作用类型是异养型。（3）根据培养基的配方，该培养基中的碳源是(CH2O)。（4）培养基在配好之后倒平板之前，都要先灭菌，防止杂菌污染；倒平板时温度以触摸装有培养基的锥形瓶刚刚不烫手为宜，即需冷却至50 ℃左右；为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。（5）若用该培养基培养分解尿素的细菌，应以尿素为唯一氮源，故除去物质NaNO3，并加入物质尿素。

考向二 无菌技术的操作

3．无菌技术包括以下几个方面的叙述，其中正确的是
A．紫外线照射前，适量喷洒石碳酸等消毒液，可以加强消毒效果
B．高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖
C．为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落
D．在微生物接种的实验中，用95%酒精对实验者的双手和超净工作台进行消毒
【答案】A
【解析】用紫外线照射30 min，可以杀死物体表面或空气中的微生物，在照射前，适量喷洒石碳酸等消毒液，可以加强消毒效果，A正确；高压灭菌加热结束时，待压力表指针回到零后，才能开启锅盖，不能打开放气阀使压力表指针回到零，B错误；为了防止污染，接种环经火焰灭菌、冷却后才可以快速挑取菌落，C错误；在微生物接种的实验中，一般用75%酒精对实验者的双手进行消毒，用紫外线照射30 min对超净工作台进行灭菌，D错误。
解题技巧
消毒和灭菌的辨析
项目
条件
结果
常用方法
应用范围
消毒
较为温和的物理或化学方法
仅杀死物体表面或内部的部分对人体有害的微生物
煮沸消毒法
日常用品
巴氏消毒法
不耐高温的液体
化学药剂消毒法
用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源
灭菌
强烈的理化因素
杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子
灼烧灭菌法
接种工具
干热灭菌法
玻璃器皿、金属工具
高压蒸汽灭菌法
培养基及容器的灭菌

4．细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌
A．接种环、手、培养基 B．高压锅、手、接种环
C．培养基、手、接种环 D．接种环、手、高压锅
【答案】C
【解析】灭菌是指彻底杀灭微生物使其永远丧失生长繁殖的能力，对于培养基、操作器皿和接种环等都需要灭菌。消毒仅指杀死物体表面或内部一部分对人体有害的病原菌而对被消毒的物体基本无害，如操作者的手和衣着需要消毒处理。高压蒸汽通常用于培养基的灭菌。用酒精擦拭双手是消毒的一种方法。火焰灼烧可以迅速彻底地灭菌，适用于微生物的接种工具，如接种环。

考向三 大肠杆菌的纯化方法及过程分析

5．下图中甲是稀释涂布平板法中的部分操作，乙是平板划线法的操作结果。


下列叙述中错误的是
A．甲中涂布前要将涂布器灼烧，冷却后才能取菌液
B．对于浓度较高的菌液，如甲中的稀释倍数仅为102，则所得的菌落不一定是由单一的细胞或孢子繁殖而成
C．乙培养皿中所得的菌落都符合要求
D．乙中的连续划线的起点是上一次划线的末端
【答案】C
【解析】灼烧后的涂布器如果没有冷却就接触菌种，会将菌体杀死，A正确。稀释倍数过低会导致多个菌体聚集在一起繁殖成菌落，B正确。平板划线法中最后一次划线的末端处形成的菌落才是由单一的细胞或孢子繁殖而成，这种菌落才符合要求，C错误。连续划线中，除了第一次划线外，每一次划线的起点是上一次划线的末端，目的是使得菌体密度越来越小，保证最后划线末端处的菌落是由单一的细胞或孢子繁殖而成，D正确。
归纳整合
两种纯化细菌方法的比较
项目
优点
缺点
适用范围
平板划线法
可以观察菌落特征，对混合菌进行分离
不能计数
适用于好氧菌
稀释涂布平板法
可以计数，可以观察菌落特征
吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延
适用于厌氧菌和兼性厌氧菌

6．下图甲、乙是微生物接种常用的两种方法，请回答相关问题。

（1）图甲是利用________法进行微生物接种，图乙是利用__________________法进行微生物接种。这两种方法所用的接种工具分别是________和________；对这两种接种工具进行灭菌和消毒的方法依次是________和酒精消毒。
（2）接种操作为什么一定要在火焰附近进行？________________________________________________。
（3）接种后，在固体培养基上培养细菌时为什么进行倒置培养？________________________________。
（4）如图是采用上述接种方法接种后培养的效果图解，其接种方法是________(填“图甲”或“图乙”)。

【答案】（1）平板划线　 稀释涂布平板　 接种环　 涂布器　 灼烧灭菌（2）火焰附近存在着无菌区域
（3）避免培养过程产生的水分影响微生物的生长 （4）图乙
【解析】（1）图甲和图乙分别是平板划线法和稀释涂布平板法，这两种方法所用的接种工具分别是接种环和涂布器。对这两种接种工具进行灭菌和消毒的方法依次是灼烧灭菌和酒精消毒。（2）由于在酒精灯火焰附近存在着无菌区域，因此接种常在火焰附近进行。（3）在微生物培养过程中会产生水，对微生物的生长造成影响，故需要倒置培养。（4）由图可知，图示接种方法是稀释涂布平板法。

考向四 选择培养基成分及配制方法的分析

7．选择培养基是根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理、化学抗性而设计的培养基。利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。为选择酵母菌和硝化细菌，应选用的培养基分别为
A．伊红美蓝培养基、含青霉素培养基 B．含青霉素培养基、含氨的无机培养基
C．含氨的无机培养基、含青霉素培养基 D．含青霉素培养基、伊红美蓝培养基
【答案】B
【解析】酵母菌是真菌，通常可以用含青霉素的培养基进行选择培养，因为青霉素抑制细菌生长，但不能抑制真菌生长。硝化细菌为自养型生物，能够利用氨转变为亚硝酸和硝酸所释放的能量，把无机物转变为有机物以维持自身生命活动，利用含氨的无机培养基可进行选择培养。
技法提炼
选择培养基的制作方法
（1）在培养基全部营养成分具备的前提下，加入物质：依据某些微生物对某些物质的抗性，在培养基中加入某些物质，以抑制不需要的微生物，促进所需要的微生物生长，如培养基中加入高浓度食盐时可抑制多种细菌的生长，但不影响金黄色葡萄球菌的生长，从而可将该菌分离出来；而在培养基中加入青霉素时可抑制细菌、放线菌的生长，从而分离得到酵母菌和霉菌。
（2）通过改变培养基的营养成分达到分离微生物的目的：培养基中缺乏氮源时，可分离自生固氮微生物，非自生固氮微生物因缺乏氮源而无法生存；培养基中若缺乏有机碳源则异养微生物无法生存，而自养微生物可利用空气中的CO2制造有机物生存。
（3）利用培养基的特定化学成分分离特定微生物：如当石油是唯一碳源时，可抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，从而分离出能消除石油污染的微生物。
（4）通过某些特殊环境分离微生物：如在高盐环境中可分离耐盐菌，其他菌在盐浓度高时易失水而不能生存；在高温环境中可分离得到耐高温的微生物，其他微生物在高温环境中因酶失活而无法生存。

8．杀虫脒，又名氯苯脒，是一种有机氮农药，具有高效广谱杀虫杀螨的作用，但长期使用容易导致土壤污染，为探究能降解杀虫脒的细菌进行了以下实验。

（1）微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、________、水、无机盐四类，该实验所用的培养基只能以杀虫脒作为唯一氮源，其原因是________________，从功能上讲，该培养基属于_______培养基。
（2）微生物接种的方法很多，最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，这两种方法在功能上的区别是_______________，此外，_____________也是测定微生物数量的常用方法。
（3）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力_______。
（4）通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和________。培养基一般不使用干热灭菌的原因是____________________。
【答案】（1）氮源 只有能利用杀虫脒的微生物才能正常生长和繁殖 选择
（2）稀释涂布平板法可以用于统计样品中活菌数目 显微镜直接计数 （3）强
（4）高压蒸汽灭菌 湿度低会破坏培养基中的营养成分
【解析】（1）微生物培养基一般都含有碳源、氮源、水、无机盐；因本题要探究能降解杀虫脒的细菌，
该实验所用的培养基只能以杀虫脒作为唯一氮源，因为只有能利用杀虫脒的微生物才能正常生长和繁
殖，从功能上讲，该培养基属于选择培养基。（2）平板划线法和稀释涂布平板法都可以接种，但是稀
释涂布平板法除了接种，还能用于统计样品中活菌数目；此外，显微镜直接计数也是测定微生物数量的
常用方法。（3）分解圈大说明该菌株的降解能力强，是需要的高效菌株。（4）通常情况下，在微生物
培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌法，培养基含有水，采用干热
灭菌会将水蒸干，干热温度为170 ℃会将培养基中的营养物质改变，如糖糊化发黑生成有毒的物质，导
致无法培养微生物，因此不适合对培养基进行灭菌。

考向五 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

9．下列有关“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验”的叙述，不正确的是
A．用尿素为唯一氮源、加有酚红指示剂的培养基培养尿素分解菌，指示剂不变红
B．分解尿素的细菌能产生脲酶，将尿素分解产生氨和二氧化碳
C．统计尿素分解菌的数目时，以菌落数在30~300的平板进行计数
D．将实验组和对照组平板倒置，30~35 ℃恒温培养24~48小时
【答案】A
【解析】用尿素为唯一氮源、加有酚红指示剂的培养基培养尿素分解菌，尿素分解菌将尿素分解为氨和二氧化碳，氨使培养基碱性增强，指示剂变红，A项错误，B项正确。统计尿素分解菌的数目时，以菌落数在30~300的平板进行计数，小于30说明稀释倍数太大，菌液浓度分布不均，各平板之间菌落数差异会很大，造成误差；大于300菌落的生长受到抑制，并且难以区分各个菌落，造成误差，C项正确。为排除培养基制备过程中可能造成的污染，应设置不接种菌液的对照组平板，将实验组和对照组平板倒置，目的是防止皿盖上的冷凝水珠滴落在培养基上，细菌的培养一般需要30~35 ℃恒温培养24~48小时，D项正确。
易错警示
稀释涂布平板法计数微生物的注意问题
用稀释涂布平板法计数微生物时，要求选择菌落数在30～300的平板进行计数。解题时易出现以下误解：
（1）只得到1个菌落数在30～300的平板是错误的。错误的原因是不符合实验的重复原则，易受到偶发因素的影响。
（2）得到3个或3个以上菌落数在30～300的平板，也不一定正确，这可能有两种情况：
①不同平板间差异较大，如得到3个平板，菌落数分别为230、34、240，虽然菌落数均在“30～300”之间，这也是不正确的，因为“34”与“230”“240”差异太大，应重新实验找出原因。
②不同平板之间差异不大，是符合要求的，用其平均值作为估算的最终结果。
可见，并不是只要得到3个“菌落数在30～300的平板”即可，而应该是涂布的同一稀释度的平板均符合“菌落数在30～300的平板”且无较大差异，说明实验操作合格，才能按照计算公式进行计算。

10．下表是某同学列出的分离土壤中微生物培养基的配方，据此回答下列问题：
培养基配方
KH2PO4
1.4 g
Na2HPO4
2.1 g
MgSO4·7H2O
0.2 g
葡萄糖
10.0 g
尿素
1.0 g
琼脂
15.0 g
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL
（1）从作用上看，该培养基属于________培养基，提供氮源的物质是________，细菌能利用该氮源是由于体内能合成________酶。
（2）在对分离的能分解尿素的细菌进行鉴定时，还需在培养基中加入________指示剂，若指示剂变________，说明有目的菌株存在。
（3）为了测定微生物的数量，接种时应采用__________________法，某同学在4个培养基上分别接种稀释倍数为106的土壤样液0.1 mL，培养后菌落数分别为180、155、176、129个，则每毫升原土壤样液中上述微生物的数量为________，测定的活菌数比实际活菌数________(填“低”“高”或“基本一致”)。
【答案】（1）选择　 尿素　 脲(催化尿素分解的) （2）酚红　红（3）稀释涂布平板　 1.6×109　 低
【解析】（1）题干指出表中是分离土壤中微生物的培养基配方，其中尿素是唯一氮源，能生长的菌落
说明能利用尿素中的氮源，所以甲从用途上属于选择培养基。以尿素为唯一氮源的培养基可以选择尿
素分解菌。（2）在对分离的能分解尿素的细菌进行鉴定时，还需在培养基中加入酚红指示剂，若指示
剂变红，说明有目的菌株存在。（3）纯化微生物可以用稀释涂布平板法和平板划线法，其中稀释涂布
平板法能用于微生物的计数。1 mL原土壤样液中上述微生物数量＝(180＋155＋176＋129)÷4×106×10＝1.6×109个；用稀释涂布平板法进行微生物的计数，但统计的数量比实际数量会偏少，原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。

考向六 分解纤维素的微生物的分离

11．分离纤维素分解菌的实验过程中操作有误的是
A．经选择培养后即可将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上
B．选择培养这一步可省略，但纤维素分解菌少
C．经稀释培养后，用刚果红染色
D．此实验中需设置对照组
【答案】A
【解析】经选择培养后，再经稀释，才能将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上；富集培养可省略；经稀释培养后，用刚果红染色；设置对照能证明经富集培养得到了欲分离的微生物。
解题技巧
两种微生物筛选方法的比较
项目
土壤中分解尿素的细菌的分离
分解纤维素的微生物的分离
方法
使用以尿素为唯一氮源的选择培养基进行培养
利用富含纤维素的选择培养基进行培养
原理
土壤中不能分解尿素的微生物因缺乏脲酶而不能正常生长，能够分解尿素的微生物能利用尿素为氮源正常生长，从而起到选择作用
因为培养基中含有丰富的纤维素，因此能够分解纤维素的微生物具有更多的生存机会而大量繁殖
特有
代表
过程
CO(NH2)2＋H2OCO2＋2NH3
纤维素
纤维二糖葡萄糖

12．植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。回答下列相关问题：
（1）分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由3种组分形成的复合酶，其中的葡萄糖苷酶可将______________分解成______________。
（2）在含纤维素的培养基中加入刚果红(CR)染料时，CR可与纤维素形成________色复合物。用含有CR的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的________。
（3）为从富含纤维素分解菌的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落并加以鉴定，某同学设计了甲、乙两种培养基：

酵母膏
无机盐
淀粉
纤维素粉
琼脂
CR溶液
水
培养基甲
＋
＋
－
＋
－
＋
＋
培养基乙
＋
＋
＋
－
＋
＋
＋
注：“＋”表示“有”，“－”表示“无”。
据表判断，培养基甲________(填“能”或“不能”)用于分离纤维素分解菌，原因是__________________________________________；培养基乙________(填“能”或“不能”)用于鉴定纤维素分解菌，原因是__________________________________________。
【答案】（1）纤维二糖　 葡萄糖 （2）红　 透明圈
（3）不能　 液体培养基不能分离单菌落　 不能　 培养基中没有纤维素(不能形成CR－纤维素红色复合物)
【解析】（1）葡萄糖苷酶可将纤维二糖分解成葡萄糖。（2）刚果红与纤维素形成红色复合物，当纤
维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，可以通过是否
产生透明圈来筛选纤维素分解菌。（3）纤维素分解菌分离和鉴别培养基属于固体培养基，而培养基甲
中没有琼脂，是液体培养基，要分离和鉴别纤维素分解菌，需要以纤维素为唯一碳源的培养基，培养
基乙没有纤维素，不能形成CR－纤维素红色复合物，无法鉴定纤维素分解菌。

1．下列有关微生物培养的叙述，错误的是
A．获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染
B．平板划线法和稀释涂布平板法都可对微生物进行计数
C．培养基常用高压蒸汽灭菌法灭菌
D．倒置平板可防止培养皿盖上的冷凝水滴落，造成污染
2．用平板划线法或稀涂布平板法都可以纯化大肠杆菌，二者的共同点是
A．都可以用固体培养基或液体培养基
B．都需要使用接种环进行接种
C．接种时都需要在酒精灯的火焰旁进行
D．都可以用来统计样品中的活菌数
3．在微生物培养的过程中，需要通过选择培养或鉴别培养的方法来筛选出目标菌种，下列与之相关的叙述中不正确的是
A．纤维素分解菌能够分解刚果红染料，从而使菌落周围出现透明圈
B．尿素分解菌能够将尿素分解为氨，从而使酚红指示剂变红
C．在培养基中加入抗生素能够筛选出具有相应抗性的菌株
D．在含有碳酸钙的培养基上生长的乳酸菌菌落周围会出现“溶钙圈”
4．某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是
A．培养基分装到培养皿后进行高压蒸汽灭菌
B．转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线
C．接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养
D．培养过程中每隔一周观察三次菌落生长
5．幽门螺杆菌（能分解对热不稳定的尿素）是急慢性胃炎和消化道溃疡的主要致病因素。为从带菌者胃粘膜样本中分离出该细菌，相关实验步骤和方法不合理的是
A．配制培养基并灭菌后，需要加入无菌尿素
B．应设置未接种的培养基，做为实验的对照
C．统计样本中活菌数量时，可用划线法接种
D．可利用酚红指示剂对培养的菌落进行鉴定
6．如图为分离和纯化分解甲醛细菌的实验过程，其中LB培养基能使菌种成倍扩增，以下说法正确的是

A．需要对活性污泥作灭菌处理
B．②中LB培养基应以甲醛为唯一碳源
C．目的菌种异化作用类型为厌氧型
D．经⑤处理后，应选择瓶中甲醛浓度最低的一组进一步纯化培养
7．如图所示，自来水经滤膜过滤后，转移到牛肉膏蛋白胨培养基上，适宜条件下培养48 h，染色后统计变色菌落数目为165个。下列说法正确的是

A．若培养基含伊红—美蓝，大肠杆菌菌落呈蓝绿色
B．自来水中大肠杆菌浓度是33个·L-1，比真实值偏大
C．为了提高准确度，需设重复实验，但不用空白对照
D．若培养基菌落数目大于300，可适当减少自来水量
8．下图是研究人员从红棕壤中筛选高效分解尿素细菌的示意图，有关叙述错误的是

A．在配制步骤②、③的培养基时，应先调pH值后高压蒸汽灭菌
B．步骤③采用涂布平板法接种，并需向牛肉膏蛋白胨培养基中加入尿素
C．步骤④挑取③中不同种的菌落分别接种，比较细菌分解尿素的能力
D．步骤③纯化分解尿素的原理是将聚集的细菌分散，可以获得单细胞菌落
9．分离筛选降解纤维素能力强的微生物，对于解决秸秆等废弃物资源的再利用和环境污染问题具有重要意义。研究人员用化合物A、硝酸盐、磷酸盐、硫酸盐、KCl、酵母膏以及水解酪素配制的培养基，成功地筛选到能产生纤维素酶的微生物。请回答下列问题：
（1）培养基中加入的化合物A是_____。本实验将样品稀释涂布到鉴别培养基之前要进行选择培养，目的是_________。
（2）为了筛选出能产生纤维素酶的微生物，向培养基中加入______溶液，等培养基上长出菌落后，能产生纤维素酶的菌落周围会出现_____。
（3）为在培养基表面形成单个菌落，若以接种环为工具，则用______进行接种。若用稀释涂布平板法进行接种，在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多的原因是_________________。
（4）用三种菌株对秸秆进行处理，并在第5天和第10天对秸秆和秸秆中含有的纤维素、半纤维素以及木质素等组分的降解情况进行了测定（结果如图）。

据图分析可知，三种菌株对_____的降解作用最强。与第5天结果相比，第10天秸秆各组分中_____的降解率变化最大。
10．聚对苯二甲酸乙二酯(PET)是塑料类水瓶的重要原料，科学家发现了以PET为碳源和能量来源的细菌，该发现对PET类材料的回收利用、环境治理意义重大。请回答下列问题：
（1）实验小组欲从土壤中获取PET降解菌，需将土壤样品置于________为唯一碳源的培养基中进行选择培养，其目的是______________。
（2）该实验小组选取PET浓度为800 mg·L-1的富集液进行系列稀释，分别取10-3、10-4和10-5倍数的稀释液0.1 mL涂布于培养基上，每个稀释倍数涂布三个平板，各平板的菌落数分别为（286、298、297)，(35、32、31)，(36、7、2)，不适合用于计数的为________倍数的稀释液，用另外两组稀释倍数的稀释液进行计数得到的细菌数不一致的原因可能是__________________________。
（3）倒平板时应使锥形瓶的瓶口通过火焰，目的是________。在倒平板的过程中，如果培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，则这个平板不能用来培养大肠杆菌，原因是____________。用平板划线法纯化PET降解菌的过程中，在第二次及其后的划线操作时，须从上一次划线的末端开始划线，原因是__________。
（4）在保藏PET降解菌菌种时，可采取____________的方法进行长期保存。

11．（2020年山东省高考生物试卷（新高考)·20）野生型大肠杆菌可以在基本培养基上生长，发生基因突变产生的氨基酸依赖型菌株需要在基本培养基上补充相应氨基酸才能生长。将甲硫氨酸依赖型菌株M和苏氨酸依赖型菌株N单独接种在基本培养基上时，均不会产生菌落。某同学实验过程中发现，将M、N菌株混合培养一段时间，充分稀释后再涂布到基本培养基上，培养后出现许多由单个细菌形成的菌落，将这些菌落分别接种到基本培养基上，培养后均有菌落出现。该同学对这些菌落出现原因的分析，不合理的是（ ）
A．操作过程中出现杂菌污染
B．M、N菌株互为对方提供所缺失的氨基酸
C．混合培养过程中，菌株获得了对方的遗传物质
D．混合培养过程中，菌株中已突变的基因再次发生突变
12．（2020年浙江省高考生物试卷（7月选考)·19）下列关于微生物培养及利用的叙述，错误的是（ ）
A．利用尿素固体培养基可迅速杀死其他微生物，而保留利用尿素的微生物
B．配制培养基时应根据微生物的种类调整培养基的pH
C．酵母菌不能直接利用糯米淀粉发酵得到糯米酒
D．适宜浓度的酒精可使醋化醋杆菌活化
13．（2020年江苏省高考生物试卷·19）为纯化菌种，在鉴别培养基上划线接种纤维素降解细菌，培养结果如图所示。下列叙述正确的是（ ）

A．倒平板后需间歇晃动，以保证表面平整
B．图中Ⅰ、Ⅱ区的细菌数量均太多，应从Ⅲ区挑取单菌落
C．该实验结果因单菌落太多，不能达到菌种纯化的目的
D．菌落周围的纤维素被降解后，可被刚果红染成红色
14．（2020年全国统一高考生物试卷（新课标Ⅰ)·37）某种物质S（一种含有C、H、N的有机物）难以降解，会对环境造成污染，只有某些细菌能降解S。研究人员按照下图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解S的细菌菌株。实验过程中需要甲、乙两种培养基，甲的组分为无机盐、水和S，乙的组分为无机盐、水、S和Y。

回答下列问题：
（1）实验时，盛有水或培养基的摇瓶通常采用_______________的方法进行灭菌。乙培养基中的Y物质是_______________。甲、乙培养基均属于______________培养基。
（2）实验中初步估测摇瓶M中细菌细胞数为2×107 个/mL，若要在每个平板上涂布100μL稀释后的菌液，且保证每个平板上长出的菌落数不超过200个，则至少应将摇瓶M中的菌液稀释________________倍。
（3）在步骤⑤的筛选过程中，发现当培养基中的S超过某一浓度时，某菌株对S的降解量反而下降，其原因可能是________________（答出1点即可）。
（4）若要测定淤泥中能降解S的细菌细胞数，请写出主要实验步骤________________。
（5）上述实验中，甲、乙两种培养基所含有的组分虽然不同，但都能为细菌的生长提供4类营养物质，即________________。
15．（2020年江苏省高考生物试卷·31）产脂肪酶酵母可用于含油废水处理。为筛选产脂肪酶酵母菌株，科研人员开展了相关研究。请回答下列问题：
（1）常规微生物实验中，下列物品及其灭菌方法错误的是__________（填编号）。
编号
①
②
③
④
物品
培养基
接种环
培养皿
涂布器
灭菌方法
高压蒸汽
火焰灼烧
干热
臭氧
（2）称取1．0g某土壤样品，转入99mL无菌水中，制备成菌悬液，经__________后，获得细胞密度不同的菌悬液。分别取0．1mL菌悬液涂布在固体培养基上，其中10倍稀释的菌悬液培养后平均长出了46个酵母菌落，则该样本中每克土壤约含酵母菌__________个。
（3）为了进一步提高酵母菌产酶能力，对分离所得的菌株，采用射线辐照进行__________育种。将辐照处理后的酵母菌涂布在以__________为唯一碳源的固体培养基上，培养一段时间后，按照菌落直径大小进行初筛，选择直径__________的菌落，纯化后获得A、B两突变菌株。
（4）在处理含油废水的同时，可获得单细胞蛋白，实现污染物资源化。为评价A、B两菌株的相关性能，进行了培养研究，结果如图。据图分析，应选择菌株__________进行后续相关研究，理由是__________。

16．（2018·全国Ⅰ卷）将马铃薯去皮切块，加水煮沸一定时间，过滤得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液中加入一定量蔗糖和琼脂，用水定容后灭菌，得到M培养基。
回答下列问题：
（1）M培养基若用于真菌的筛选，则培养基中应加入链霉素以抑制_______的生长，加入了链霉素的培养基属于____________培养基。
（2）M培养基中的马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质，营养物质类型除氮源外还有__________ （答出两点即可）。氮源进入细胞后，可参与合成的生物大分子有______（答出两点即可）。
（3）若在M培养基中用淀粉取代蔗糖，接种土壤滤液并培养，平板上长出菌落后可通过加入显色剂筛选出能产淀粉酶的微生物。加入的显色剂是____________，该方法能筛选出产淀粉酶微生物的原理是_____________。
（4）甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中微生物的数量，在同一稀释倍数下得到以下结果：
甲同学涂布了3个平板，统计的偏落数分别是110、140和149，取平均值133；
乙同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是27、169和176，取平均值124。
有人认为这两位同学的结果中，乙同学的结果可信度低，其原因是____________。
17．（2018·全国Ⅱ卷）在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。回答下列问题：
（1）在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具________（填“可以”或“不可以”）放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。
（2）牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是_____________________。
（3）密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒，其原因是紫外线能________，在照射前，适量喷洒_________，可强化消毒效果。
（4）水厂供应的自来水通常是经过________（填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”）消毒的。
（5）某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是__________________________。
18．（2018·江苏卷）酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白的来源。有些酵母可以利用工业废甲醇作为碳源进行培养，这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母，并进行大量培养。下图所示为操作流程，请回答下列问题：

（1）配制培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，调节培养基的＿＿＿＿＿，及时对培养基进行分装，并进行＿＿＿灭菌。
（2）取步骤②中不同梯度的稀释液加入标记好的无菌培养皿中，在步骤③中将温度约＿＿＿（在25 ℃、50 ℃或80 ℃中选择）的培养基倒入培养皿混匀，冷凝后倒置培养。
（3）挑取分离平板中长出的单菌落，按步骤④所示进行划线。下列叙述合理的有＿＿＿＿＿＿。
a．为保证无菌操作，接种针、接种环使用前都必须灭菌
b．划线时应避免划破培养基表面，以免不能形成正常菌落
c．挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定酵母细胞中甲醇的含量
d．可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度，获得甲醇高耐受株
（4）步骤⑤中，为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和＿＿＿＿＿＿供应。为监测酵母的活细胞密度，将发酵液稀释1 000倍后，经等体积台盼蓝染液染色，用25×16型血细胞计数板计数5个中格中的细胞数，理论上＿＿＿色细胞的个数应不少于＿＿＿＿＿＿，才能达到每毫升3×109个活细胞的预期密度。

1．【答案】B
【解析】微生物培养中，获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染，A正确；利用稀释涂布平板法接种微生物可以形成单菌落，常用来进行微生物的计数，但利用平板划线法接种微生物不易分离出单菌落，不能对微生物进行计数，常用来筛选分离微生物，B错误；常用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌，C正确；倒平板后，需要将培养皿倒置，以防止培养基蒸发冷凝成的水滴入培养基而造成污染，D正确。
2．【答案】C
【解析】平板划线法和稀释涂布平板法都是在固体培养基上进行的，A错误；平板划线法接种用接种针，稀释涂布平板法接种要用涂布器，B错误；不论是平板划线法还是稀释涂布平板法，都需要进行无菌操作，在酒精灯火焰旁进行，C正确；平板划线法不能用于计数活菌，只能用于分离菌种，稀释涂布平板法可以用来计数活菌，D错误。
3．【答案】A
【解析】纤维素分解菌能够分解纤维素，在培养基中加入刚果红，可与培养基中的纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，红色复合物不能形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，A错误；尿素分解菌能够将尿素分解为氨，使培养基呈碱性，从而通使酚红指示剂变红，B正确；在培养基中加入抗生素能够筛选出具有相应抗性的菌株，C正确；在含有碳酸钙的培养基上生长的乳酸菌菌落周围会出现“溶钙圈”，D正确。
4．【答案】B
【解析】在配制培养基的过程中要先灭菌后倒平板，A错误；灼烧接种环可以防止残留菌种对实验的干扰，因此转换划线角度后要对接种环进行灼烧灭菌再进行划线，B正确；接种后放置在恒温培养箱中进行培养，C错误；微生物的繁殖速度快，培养过程中一般要隔天观察一次，D错误。
5．【答案】C
【解析】幽门螺杆菌能分解尿素，因此在分离培养基中加入尿素作为唯一氮源，将幽门螺杆菌跟其他微生物分离，由于尿素对热不稳定，需对培养基灭菌后再加入无菌尿素，A正确；依据实验的对照原则，应设置未接种的培养基，做为实验的对照，B正确；划线法不能用于统计活菌的数目，C错误；幽门螺杆菌菌落将尿素分解为氨，使培养基显碱性，可利用酚红指示剂进行鉴定，D正确。
6．【答案】D
【解析】该实验是从活性污泥中分离和纯化分解甲醛细菌，则活性污泥不能灭菌，A错误；LB培养基使菌种成倍扩增，应用完全培养基培养，B错误；图示分解甲醛细菌是在培养皿中进行的，属于需氧型细菌，C错误；经⑤处理后，瓶中甲醛浓度降低，甲醛浓度最低的一组中分解甲醛细菌纯度最高，可进一步纯化培养，D正确。
7．【答案】D
【解析】若培养基含伊红—美蓝，大肠杆菌菌落呈黑色或紫黑色，有金属光泽，A错误；自来水中大肠杆菌浓度是165÷5=33个/L，由于两个或多个大肠杆菌可能长成一个菌落，因此比真实值偏小，B错误；为了提高准确度，需设重复实验，同时需要设置空白对照，C错误；若培养基菌落数目大于300，说明细菌数目较多，可适当减少自来水量，D正确。
8．【答案】B
【解析】在配制步骤②、③的培养基时，应先调pH值再进行高压蒸汽灭菌，A正确；要筛选出能高效分解尿素的细菌，所选用的培养基要以尿素为唯一氮源，但牛肉膏和蛋白胨中都含有氮源，因此步骤③所用的培养基中不能含有牛肉膏蛋白胨，B错误；步骤④挑取③中不同种的菌落分别接种，形成相互对照实验，比较细菌分解尿素的能力，C正确；步骤③纯化分解尿素的原理是将聚集的细菌分散，可以获得单细胞菌落，D正确。
9．【答案】（1）纤维素 增加纤维素分解菌的浓度（2）刚果红 透明圈
（3）平板划线法 培养基表面的菌液会出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果
（4）半纤维素 纤维素
【解析】（1）为筛选能够降解纤维素的微生物，培养中应添加以纤维素作为唯一碳源的选择培养基，因此培养基中加入的化合物A是纤维素，选择培养的目的是增加纤维素分解菌的浓度。（2）纤维素分解菌的鉴定需用刚果红，等培养基上长出菌落后，能产生纤维素酶的菌落周围会出现透明圈。（3）平板划线法以接种环为接种工具，用接种环取菌后需要在平板上划线进行接种。稀释涂布平板法接种前需将待分离的菌液进行稀释，涂布时，滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多，防止培养基表面的菌液出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果。（4）据图可知，三种菌株对半纤维素的降解率最高，与第5天结果相比，第10天秸秆各组分中半纤维素和木质素降解率变化不大，纤维素的降解率变化较大。
10．【答案】（1）PET 增加PET降解菌的浓度，以确保能分离得到目的菌
（2）10-5 稀释倍数为10-3时，更多的菌落连在一起，最终形成单菌落，导致结果小于稀释倍数为10-4组的结果
（3）灭菌，防止微生物污染 空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生 使细菌数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而成的菌落
（4）甘油管藏
【解析】（1）欲从土壤中获取PET降解菌，需将土壤样品置于以PET为唯一碳源的培养基中进行选择培养，其目的是增加PET降解菌的浓度，以确保能分离得到目的菌。（2）为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数，据此结合题意可知：不适合用于计数的为10-5倍数的稀释液。用另外两组稀释倍数的稀释液进行计数，得到的细菌数不一致的原因可能是稀释倍数为10-3时，更多的菌落连在一起，最终形成单菌落，导致结果小于稀释倍数为10-4组的结果。（3）倒平板时应使锥形瓶的瓶口通过火焰，其目的是灭菌，防止微生物污染。在倒平板的过程中，如果培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此这个平板不能用来培养大肠杆菌。用平板划线法纯化PET降解菌的过程中，为使细菌数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而成的菌落，在第二次及其后的划线操作时，须从上一次划线的末端开始划线。（4）对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。
11.【答案】B
【解析】 A.操作过程当中出现杂菌污染，基本培养基上生长的为杂菌，A合理；B.若M、N菌株互为对方提供所缺失的氨基酸形成的菌落，需要MN混合在一起才能生存，而该菌落来自于单个细菌形成的菌落，单个细菌不可能混合培养的细菌。B项不合理。C.M、N菌株混合培养后在基本培养基上可以生存。推测可能是混合培养过程当中，菌株间发生了基因交流，获得了对方的遗传物质，C合理；
D.基因突变是不定向的，在混合培养过程中，菌株当中已突变的基因也可能再次发生突变得到可在基本培养基上生存的野生型大肠杆菌，D合理。
12.【答案】A
【解析】 A、利用尿素固体培养基，由于不能利用尿素做氮源的微生物不能生长繁殖，而保留利用尿素的微生物，并非杀死，A错误；B、不同的微生物所需的pH不同，所以配置培养基时应根据微生物的种类调整培养基的pH，B正确；C、酵母菌不能直接利用淀粉，应用酒曲中的根霉和米曲霉等微生物把淀粉糖化，再用酵母菌发酵得到糯米酒，C正确；D、醋化醋杆菌在有氧条件下利用酒精产生醋酸，D正确。
13.【答案】B
【解析】A、倒平板后无需晃动，A错误；B、Ⅰ区、Ⅱ区没有出现单菌落，说明细菌数量太多，故应从Ⅲ区挑取单菌落，B正确；C、出现单菌落即达到了菌种纯化的目的，C错误；D、刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应，D错误。
14.【答案】（1）高压蒸汽灭菌 琼脂 选择 （2）104 （3）S的浓度超过某一值时会抑制菌株的生长
（4）取淤泥加入无菌水，涂布（或稀释涂布）到乙培养基上，培养后计数 （5）水、碳源、氮源和无机盐
【解析】（1）常用高压蒸汽灭菌法处理盛有水或培养基的摇瓶，乙为固体培养基，故需要加入Y琼脂；甲和乙培养基可以用于筛选能降解S的菌株，故均属于选择培养基。（2）若要在每个平板上涂布100μL稀释液后的菌液，且每个平板上长出的菌落数不超过200个，则摇瓶M中的菌液稀释的倍数至少为2×107÷1000×100÷200=1×104倍。（3）当培养基中的S超过某一浓度后，可能会抑制菌株的生长，从而造成其对S的降解量下降。（4）要测定淤泥中能降解S的细菌的细胞数，可以取淤泥加无菌水制成菌悬液，稀释涂布到乙培养基上，培养后进行计数。（5）甲和乙培养基均含有水、无机盐、碳源、氮源。
15.【答案】（1）④ （2）梯度稀释 4.6×105（或460000） （3）诱变 脂肪（或油脂） 较大
（4）B 该菌株增殖速度快，单细胞蛋白产量高；降解脂肪能力强，净化效果好
【解析】 （1）培养基一般进行高压蒸汽灭菌，接种环可用火焰灼烧灭菌，培养皿一般通过干热灭菌，涂布器应该用酒精引燃灭菌；故①②③正确，错误的是④。
（2）稀释涂布平板法是将样品进行一系列梯度稀释后，获得细胞密度不同的菌悬液，然后涂布到平板上。根据题意，1．0g土壤样品转入99mL无菌水中，制备成菌悬液，经系列梯度稀释后，分别取0．1mL菌悬液涂布在固体培养基上，则稀释的倍数为1000倍，其中10倍稀释的菌悬液培养后长出了46个酵母菌落，则总的稀释倍数为10000倍，故每克土壤中含酵母菌数为46×10000=4．6×105个。
（3）根据题意，欲提高酵母菌产酶能力，可对分离得到的产脂肪酶酵母菌菌株进行射线辐射，该育种方式为诱变育种。为了能筛选出符合要求的产脂肪酶酵母菌突变株，可配制以脂肪为唯一碳源的培养基，将辐射处理的酵母菌涂布在该固体培养基上，形成单菌落；产脂肪酶能力越强的酵母菌，分解利用脂肪的能力越强，菌落生长越好，一段时间后，按照菌落直径大小进行初筛，选取直径较大的菌落即可。
（4）据题图分析可知，相同时间内，菌株B的细胞密度高于菌株A，而菌株B的脂肪剩余量低于菌株A的脂肪剩余量，故进行相关研究可选择菌株B，原因是菌株B增殖速度快，单细胞蛋白的产量也高，同时降解脂肪的能力强，净化效果更好。
16．【答案】（1）细菌　　选择 （2）碳源、无机盐　　蛋白质、核酸
（3）碘液　　淀粉遇碘液显蓝色，产淀粉酶的菌落周围淀粉被水解，形成透明圈
（4）乙同学的结果中，1个平板的计数结果与另2个相差悬殊，结果的重复性差
【解析】（1）M培养基若用于真菌的筛选，说明M培养基能满足真菌的生长，而能抑制其它微生物的生长，链霉素是一种抗生素，可以抑制细菌的生长。加入了链霉素的培养基能筛选出真菌，该培养基属于选择培养基。（2）微生物生长需要多种营养物质除氮源外，还需要碳源、无机盐、水以及特殊营养物质等。氮元素是蛋白质和核酸等生物大分子的组成元素，因此氮源进入细胞后,可参与合成的生物大分子有蛋白质和核酸。（3）淀粉与碘液会变成蓝色，筛选产淀粉酶的微生物，依据淀粉遇碘液显蓝色，产淀粉酶的菌落周围淀粉被水解，形成透明圈，再根据透明圈，来筛选产淀粉酶的微生物。（4）乙同学结果不合理，因为1个平板的计数结果与另2个相差悬殊，结果的重复性差，不能简单的用其平均数作为最终结果。
17．【答案】（1）可以 （2）在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少 （3）破坏DNA结构　消毒液
（4）氯气 （5）未将锅内冷空气排尽
【解析】（1）能耐高温的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等可以放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。 （2）煮沸消毒法即在100℃时煮沸5－6min可以杀死微生物细胞和一部分芽孢；巴氏消毒法即在70－75℃时煮30min或在80℃时煮15min，可以杀死微生物，并且保证营养物质不被破坏。因此，与煮沸消毒法相比，牛奶消毒常采用的巴氏消毒法或高温瞬时消毒法的优点是达到消毒目的的同时，营养物质损失较少。（3）因紫外线能破坏DNA结构，所以密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒。在照射前，适量喷洒消毒液，可强化消毒效果。（4）通常乙醇消毒是75%的酒精，有气味，影响水质，不适宜消毒自来水；高锰酸钾本身有颜色，消毒后溶液呈紫红色，无法使用；因此水厂供应的自来水通常是经过氯气消毒的。（5）采用高压蒸汽灭菌时，锅内的水加热煮沸，将其中原有的冷空气彻底排除后才能将锅密闭。如果未将锅内冷空气排尽，则会出现压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度的现象。
19．【答案】（1）pH 高压蒸汽（湿热） （2）50 ℃ （3）a、b、d （4）氧气 无 30
【解析】（1）配制培养基的操作步骤为称量→溶化→定容→调pH→培养基的分装→包扎→灭菌，因此微生物的培养基配制好后应该先调节pH，再分装。常见的灭菌方法有：干热灭菌、高压蒸汽灭菌、灼烧灭菌。培养基适宜用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。（2）在步骤③中，待培养基冷却至50℃左右时进行倒平板。（3）在划线过程中，接种针、接种环使用前都必须灭菌，以防止杂菌污染，a正确；划线时应避免划破培养基表面，否则将不能形成正常菌落，b正确；该实验的目的是获得利用工业废甲醇作为碳源的酵母菌，不需要测定酵母菌中的甲醇含量，c错误；培养基中的甲醇浓度越高，此种培养基中得以生存的酵母菌利用甲醇的能力越强，因此可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度，获得甲醇高耐受株，d正确。（4）酵母菌通过有氧呼吸大量繁殖，因此为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和氧气供应；台盼蓝是大分子物质，不能将活细胞染色，再根据25×16型的血球计数板：1毫升悬液中待测标本（菌体）总数=80小方格内菌体数/80×400×104×稀释倍数。而台盼蓝与菌液等体积加入，因此要达到每毫升3×109个活细胞的预期密度，理论上无色细胞数应该不少于（3×109）÷（1000×2×104×400÷80）=30个。