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山东省实验中学2023-2024学年高二下学期4月月考生物试卷（Word版附解析）
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这是一份山东省实验中学2023-2024学年高二下学期4月月考生物试卷（Word版附解析），共41页。试卷主要包含了单选题，不定项选择题，简答题等内容，欢迎下载使用。
一、单选题（每个2分，共40分）
1. 从开始制作到泡菜品质最佳这段时间内，泡菜逐渐变酸，乳酸菌与杂菌数目也发生变化，下列有关分析不正确的是（ ）
A. 泡菜制作初期就有乳酸菌的存在
B. 密闭的发酵环境使乳酸菌在种间竞争中占据一定优势
C. 在发酵过程中，乳酸含量逐渐增多，可以抑制其他微生物的生长
D. 发酵过程中，杂菌数目的减少使乳酸菌与杂菌的种间竞争减弱，因此乳酸菌数目一直增多
2. 我国酿酒技术历史悠久，古人在实际生产中积累了很多经验。《齐民要术》记载：将蒸熟的米和酒曲混合前需“浸曲发，如鱼眼汤，净淘米八斗，炊作饭，舒令极冷”。意思是将酒曲浸到活化，冒出鱼眼大小的气泡，把八斗米淘净，蒸熟，摊开冷透。下列说法错误的是（ ）
A. “浸曲发” 过程中酒曲中的微生物代谢加快
B. “鱼眼汤” 现象是微生物呼吸作用产生的CO2释放形成的
C. “净淘米”" 是为消除杂菌对酿酒过程的影响而采取的主要措施
D. “舒令极冷”目的是防止蒸熟的米温度过高导致酒曲中的微生物死亡
3. 培养基是指由不同营养物质组合配制而成的，供微生物、植物细胞或动物细胞生长繁殖的营养基质。下列关于培养基的叙述：错误的是（ ）
A. 微生物在培养前要先对培养基进行灭菌处理再接种
B. 体外培养杂交瘤细胞时，培养基加入血清后需湿热灭菌以确保无菌
C. 配制植物组培的培养基时，用等量葡萄糖代替蔗糖会影响细胞的分裂分化
D. 分离并纯化硝化细菌时，培养基中无需添加碳源，但需添加氮源
4. 养殖池中存在的有毒物质主要是氨及亚硝酸，这两种物质可由硝化细菌吸收利用。在“养殖池底泥中硝化细菌的分离和计数”实验中，下列说法正确的是（ ）
A. 需要配制添加一定浓度氨盐的牛肉膏蛋白胨培养基，以筛选硝化细菌
B. 应对采集底泥使用的工具进行灭菌，全部接种过程均需在酒精灯火焰旁进行
C. 采用平板划线法进行分离和计数时，还需与未接种的空白培养基同时培养
D. 若空白对照组上长出了菌落，需要在实验组数据的基础上减去空白对照组的菌落数
5. 生物指示剂常用于对医疗器械高压蒸汽灭菌的质量监测。将某批次的多支生物指示剂（如图）与医疗器械一并放入压力锅中，待灭菌完成后，挤破安瓿瓶，让含芽孢的菌片（嗜热脂肪芽孢杆菌）与培养液接触，培养并检测结果。下列说法错误的是（ ）
A. 安瓿瓶内培养液的成分应适于嗜热脂肪芽孢杆菌的生长
B. 制备生物指示剂时，安瓿瓶内的培养液需要进行灭菌处理
C. 嗜热脂肪芽孢杆菌的热耐受性大于已知污染菌的热耐受性
D. 当压力锅中的生物指示剂培养结果为阴性时说明医疗器械灭菌合格
6. 利用微生物分解纤维素对废弃物污染的减轻和作物秸秆再利用具有重要意义。某兴趣小组从富含纤维素的土壤中取样，加入选择培养基中进行振荡培养，之后接种于鉴别培养基上进行培养，筛选出能够分解纤维素的微生物。下列叙述错误的是（ ）
A. 选择培养的目的是促进纤维素分解菌生长，抑制其他微生物的生长
B. 振荡培养可以增加溶解氧量，促进微生物对营养物质的充分接触和利用
C. 鉴别培养基上涂布接种时，将1mL菌液滴到培养基表面再用涂布器涂布均匀
D. 加入刚果红的培养基上所出现的有透明圈的菌落，可能是细菌或真菌繁殖而成
7. 图中的已驯化菌群是从某肉制品加工厂污水处理池中初步筛选的可水解油脂并利用的菌群，为进一步筛选高效水解油脂的菌群进行了如图所示的操作。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 培养基中除了油脂提供的成分还需加入氮源和碳源
B. 随着培养基中油脂浓度变大导致菌群朝着高效水解油脂的变异方向发展
C. 在菌种分解油脂的过程中培养基的pH会呈现先下降再上升的变化趋势
D. 若要研究优秀菌的生长规律，可在液体培养的不同时间段采用稀释涂布平板法短时间内测定其数量
8. 厌氧氨氧化菌是一种化能自养型细菌，以二氧化碳作为唯一碳源，利用亚硝酸氧化成硝酸释放的能量来合成有机物。厌氧氨氧化菌进行分解代谢的主要场所是一种被称为厌氧氨氧化体的具膜结构。下列推测合理的是（ ）
A. 该细菌生命活动所需能量的直接来源是其化能合成的有机物
B. 该细菌与化能合成有关的酶主要分布在其厌氧氨氧化体膜上
C. 该细菌厌氧氨氧化体膜上的蛋白质是由其自身核糖体合成的
D. 该细菌中部分与呼吸有关的酶可能是由线粒体基因控制合成
9. 某兴趣小组的同学们按如图所示的过程对某人喝剩的5mL酸奶进行细菌检测，若3个计数的培养基中的菌落数目分别为210个、160个、230个。下列说法错误的是（ ）
A. 为了使1号试管稀释倍数为100倍，锥形瓶中应加入45mL无菌水
B. 除了培养涂布的3个培养皿外，还需要培养未涂布菌落的培养基作为对照
C. 为了计数准确需要用接种环连续划线，并且每次划线前需要灼烧灭菌
D. 已知1号试管稀释倍数为100倍，利用该方法可估算酸奶中细菌含量为2.0×108个·mL-1，此值比实际活菌数少
10. 组氨酸缺陷型沙门氏菌是由野生菌种突变形成的，自身不能合成生命活动必需的组氨酸。将其接种在缺乏组氨酸的平板培养基上进行培养，有极少量菌落形成。2-氨基芴是一种致突变剂，将沾有2-氨基芴的滤纸片放到上述平板培养基中，再接种组氨酸缺陷型沙门氏菌进行培养，会有较多菌落出现。以下叙述正确的有几项（ ）
①在接种前，2-氨基芴和滤纸片需进行灭菌处理
②菌落的形成可能与致突变剂有关
③这种沙门氏菌不宜用于检测环境中的化学致突变剂
④实验所用培养基为固体培养基
⑤经化学诱变剂处理的缺陷型细菌可能变为野生型
⑥缺陷型细菌均是通过基因重组具备了合成组氨酸的能力
A. 3项B. 4项C. 5项D. 6项
11. 菊花的组织培养需要进行严格的无菌操作，下列说法不正确的是（ ）
A. 培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌
B. 幼苗要先移植到消过毒的蛭石或者珍珠岩等环境下生活一段时间
C. 菊花茎段在洗涤灵稀释液浸泡2min，用流水冲洗干净后，在95%酒精中消毒30s，再用流水冲洗后置于10%次氯酸钠溶液中消毒10min，然后用蒸馏水多次冲洗。
D. 接种时用镊子夹取菊花茎段，注意茎段的形态学上下端，再插入培养基
12. 紫花苜蓿（2n=32）是应用较为广泛的豆科牧草，但易造成家畜鼓胀病。百脉根（2n=12）富含单宁，单宁可与植物蛋白质结合，不会引起家畜采食后鼓胀。科研人员利用野生型清水紫花苜蓿和里奥百脉根为材料培育抗鼓胀病苜蓿新品种。研究流程如图（注：IOA可抑制植物细胞呼吸第一阶段，R-6G可阻止线粒体的呼吸作用），下列说法错误的是（ ）
A. 将两种细胞分别置于略高渗透压环境下，有利于去除细胞壁获得两种植物原生质体
B. ②过程需要利用选择培养基筛选出杂种愈伤组织
C. ③过程需要在有光照、植物激素的作用才能化形成完整植株
D. ②过程的细胞中染色体数目最多有88条，③过程产生的再生植株是可育的多倍体
13. 科学家用紫外线照射板蓝根原生质体，使其部分染色体丢失，将处理后的板蓝根原生质体与油菜原生质体融合，培育出了只含一条板蓝根染色体和油菜全部染色体的非对称杂种植株，该过程运用了非对称细胞融合技术。下列说法正确的是（ ）
A. 原生质体由细胞膜、液泡膜及两者之间的细胞质组成
B. 融合原生质体需放在无菌水中培养，以防杂菌污染
C. 非对称细胞融合技术降低了不同物种间基因表达的干扰程度
D. 非对称细胞融合技术提高了植物细胞的全能性，属于细胞工程
14. 研究发现，小鼠四倍体胚胎具有发育缺陷，只能发育成胎盘等胚胎以外的结构。ES细胞能够诱导分化形成所有的细胞类型，但很难分化形成胎盘。四倍体胚胎与ES细胞的嵌合体则会使二者的发育潜能相互补偿，可得到ES小鼠，其中的四倍体胚胎只能发育成胚外组织。下列叙述正确的是（ ）
A. 将2细胞期胚胎用灭活病毒诱导法使2细胞融合，可得到一个含四个染色体组的细胞
B. 嵌合体中的ES具有自我更新能力并只能分化为胎盘等胚外组织
C. 嵌合体胚胎发育至原肠胚时需移植入与之生理状态相同的小鼠子宫内才可以进一步发育
D. 嵌合体发育形成的ES小鼠基因型与供体ES细胞的基因型不同
15. 如图表示研究人员利用胚胎工程技术繁育优质高产奶羊的过程，下列说法错误的是（ ）
A. 通过①~⑤繁育高产奶羊的原理与克隆羊的繁育原理不同
B. 过程⑤能否成功与供体和受体生理状态的一致性密切相关
C. 进行胚胎性别鉴定时，要选择囊胚的内细胞团细胞进行DNA分析
D. 不同生物进行过程⑤的时期不同，但移植的胚胎一般不能晚于囊胚期
16. 为获得导入 R 基因的转基因小鼠，科研人员进行了如下图所示的操作过程。相关叙述错误的是（ ）
A. 过程①需用促性腺激素处理以获得更多的卵母细胞
B. 过程②操作中通常需多个表达载体和多个受精卵
C. 过程③需使用药物抑制雌鼠b对植入胚胎免疫排斥
D. 过程④处理的目的是使多只雌鼠b处于受孕准备状态
17. 下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述，错误的是（ ）
A. 可选用在液体培养基中培养的大肠杆菌作为实验材料
B. 向含DNA的滤液中加入2ml/L的NaCl溶液，有利于去除杂质
C. 将过滤液放入4℃冰箱或加入预冷的酒精都可抑制DNA酶的活性
D. 鉴定DNA时，将二苯胺试剂加入到含DNA的溶液中即可出现蓝色
18. 基因工程是一项过程复杂方法多样的系统工程，“筛选”是基因工程中常用的技术手段。下列说法错误的是（ ）
A. pmi基因编码的蛋白质可使细胞在特殊培养基上生长，可用于目的基因的筛选
B. 构建乳腺生物反应器需先将目的基因与乳腺中特异性表达的基因启动子连接到质粒上
C. 对转基因抗虫棉进行个体水平的鉴定筛选时，需用PCR技术或抗原-抗体杂交的方法
D. 基因工程转化后，利用标记基因可以将含有目的基因的受体细胞筛选出来
19. 下图分别表示某种质粒和含目的基因的DNA片段，利用相关工具酶将二者构建成基因表达载体并导入受体菌。几种可供使用的限制酶识别序列及其切割位点为EcRⅠ：-G↓AATTC-；BamHⅠ：-G↓GATCC-；BclⅠ：-T↓GATCA-；Sau3AⅠ：-↓GATC-；SmaⅠ：-CCC↓GGG-。
注：TetR表示四环素抗性基因；AmpR表示氨苄青霉素抗性基因。
下列关于构建基因表达载体时限制酶选择及其相关叙述，错误的是（ ）
A. 若单独使用SmaI，则目的基因表达的产物可能不相同
B. 若单独使用SmaⅠ，则含有目的基因的受体菌不能在氨苄青霉素培养基中生长
C. 若选择BamHⅠ和SmaI，能在四环素培养基中生长的受体菌一定含有目的基因
D. 若用EcRI和BclⅠ切割质粒，则需用EcRⅠ和Sau3AⅠ切割含目的基因的DNA
20. CRISPR/Cas9系统主要由向导RNA（SgRNA）和Cas9蛋白两部分组成，SgRNA可引导Cas9蛋白到特定基因位点进行切割，其机制如图所示。下列说法正确的是（ ）
A. Cas9蛋白相当于限制酶，切割特定基因位点的脱氧核糖和碱基之间的化学键
B. 向导RNA可以在逆转录酶的催化下合成，合成的原料包括四种核糖核苷酸
C. CRISPR/Cas9技术编辑基因有时会因SgRNA错误结合而出现“脱靶”现象，一般SgRNA序列越短，脱靶率越低
D. 对不同目标DNA进行编辑时，使用Cas9蛋白和不同的sgRNA进行基因编辑
二、不定项选择题（每个3分，选不全1分，错选0分，共15分）
21. 下列关于传统发酵食品生产过程或特点的叙述错误的是（ ）
A. 制作泡菜时将新鲜蔬菜洗净,切成块状或条状,混合均匀,晾干后与蒜瓣、生姜等香辛料混合装满泡菜坛
B. 酿制果酒时,取新鲜葡萄,去除枝梗和腐烂的籽粒,再用清水冲洗１-２次,沥干然后榨汁装入发酵瓶中
C. 制作果醋时,可以先在碗中倒入少量醋,一段时间后用其表面产生的一层薄膜进行接种可以明显缩短制作果醋的时间
D. 传统发酵食品生产利用了天然存在的菌种,品质稳定,风味独特,是我国传统饮食文化的重要组成部分
22. 某种物质X（一种含有C、H、O、N的有机物）难以降解，会对环境造成污染，只有某些细菌能降解X。研究人员按照如图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解X的细菌菌株。实验过程中需要甲、乙两种培养基，甲的组分为无机盐、水和X，乙的组分为无机盐、水、X和Y。下列相关叙述中错误的是（ ）
A. 甲、乙培养基均属于选择培养基，乙培养基组分中的Y物质是琼脂
B. 步骤⑤的筛选过程中，各培养瓶中的X溶液要有一定的浓度梯度
C. 若要筛选高效降解X的细菌菌株，甲、乙培养基中X是唯一的碳源
D. 步骤⑤的筛选过程中，若培养基中的X浓度过高，某菌株对X的降解量可能下降
23. 含硫蛋白质在某些微生物的作用下产生硫化氢导致生活污水发臭。硫化氢可以与硫酸亚铁铵结合形成黑色沉淀。为探究发臭水体中甲、乙菌是否产生硫化氢及两种菌的运动能力，用穿刺接种的方法，分别将两种菌接种在含有硫酸亚铁铵的培养基上进行培养，如图所示。若两种菌繁殖速度相等，下列说法正确的是（ ）
A. 乙菌的运动能力比甲菌强
B. 为不影响菌的运动需选用液体培养基
C. 该实验能比较出两种菌产生硫化氢的量
D. 穿刺接种等接种技术的核心是防止杂菌的污染
24. 双层平板法是一种利用底层和上层均为牛肉膏蛋白胨培养基对噬菌体进行检测的常用方法。具体操作如下：先在无菌培养皿中倒入琼脂含量是2%的培养基凝固成底层平板后，将琼脂含量是1% 的培养基熔化并冷却至45~48℃，然后加入宿主细菌和待测噬菌体稀释悬液的混合液，充分混匀后立即倒入底层平板上形成双层平板。培养一段时间后，在上层平板上看见由于噬菌体侵染周围细菌而使宿主细胞裂解死亡形成的空斑即噬菌斑。通常一个噬菌斑来自原液中的一个噬菌体，根据噬菌斑的数目计算原液中噬菌体的数量，如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A. 牛肉膏蛋白胨培养基可作为选择培养基选择出噬菌体的宿主细胞
B. 加入混合液后，使用灭菌后的涂布器将混合液均匀地涂布在培养基表面
C. 上层培养基中琼脂浓度较低，因此形成的噬菌斑较大，更有利于计数
D. 双层平板法获得的噬菌斑不易发生上下重叠现象
25. 胚胎工程的发展，实现了优良家畜的大量繁殖。下列有关叙述错误的是（ ）
A. 试管牛、试管羊的产生属于无性繁殖
B. 利用胚胎分割技术可获得多个基因型相同的胚胎
C. 饲喂促性腺激素有助于供体母牛排出比自然情况下更多的次级卵母细胞
D. 用Ca2+载体法可以促进皮肤细胞与去核卵母细胞融合
三、简答题（4个大题，共45分）
26. 吃腐烂的水果可能会出现头晕、恶心、呕吐或者更严重的症状，这和微生物产生的毒素有关。某学习小组为了寻找腐烂的苹果中可安全食用的区域，特开展以下实验。用苹果的腐烂部位、距离腐烂部位1 cm和2 cm的组织做实验材料，检测不同区域中微生物的种类和数量。已知苹果的pH在3.5～4之间，下面是操作流程：
（1）步骤②是____，根据题意，本实验选用的接种方法是____。
（2）步骤③中，为了防止出现微生物之间抑制生长的现象，学习小组配制了不同的细菌和真菌的培养基。这些培养基是____（填“选择培养基”或“鉴定培养基”），它们虽然配方不同，但是一般都含有水、碳源、____。
（3）在步骤③中，可根据____对不同菌种进行初步鉴定。每隔24 h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时记录作为实验结果，这是为了防止____。统计腐烂部位的菌落数目发现，青霉菌、曲霉菌等真菌的数量较多，细菌数目很少。细菌数目很少可能的原因是____（答2点）。
（4）分析数据发现，距离腐烂部位越远，微生物的数量越少；距离腐烂部位2 cm的样品中微生物数量极少。有人认为，不能仅凭这个实验就得出距离腐烂部位2 cm的部分可安全食用的结论，还需要补充实验操作____。
27. I.供体细胞的分化状态和表观遗传修饰模式是影响体细胞核移植胚胎发育的重要因素。为研究供体细胞RNAmA修饰（即RNA某位点的甲基化）水平对猪核移植胚胎发育的影响，研究者进行系列实验。
（1）核移植的受体是____________________细胞，核移植后的重构胚发育至____________________阶段可利用____________________技术转移到代孕母体子宫内以获得子代个体，从早期胚胎中分离获得的具有自我更新和分化潜能的____________________可用于医学研究。
（2）RNAm6A修饰可通过提高mRNA结构稳定性来影响早期胚胎发育。猪骨髓间充质干细胞（甲组）属于多能干细胞，猪胎儿成纤维细胞（乙组）则是处于分化终端的体细胞。研究者比较了两细胞内RNAm6A修饰水平及其作为核供体时重构胚的发育效率，结果如图1、2。结果表明，核供体细胞的分化程度越高，___________________越低。
II.兰花人工种子由人工种皮、原球茎和人工胚乳构成。原球茎是由胚性细胞组成、形态类似球茎的结构，可发育成完整植株，人工胚乳可调控原球茎的休眠，并为原球茎的发育提供营养成分和激素。回答下列问题：
（3）从盆兰花获取茎尖，对其进行____________________处理后接种于培养基，茎尖通过_____________________后生长为原球茎。原球茎在发芽培养基上可很快长出幼叶，然后在生根培养基中形成完整植株。
（4）将原球茎切成小块，转入增殖培养基进行继续培养，可以得到大量原球茎，实现兰花的快速繁殖。在增殖培养基中添加椰子水，原球茎会长得更饱满。不同成熟度椰子的椰子水对原球茎生长的促进效果不同，推测原因是不同成熟度椰子的椰子水中____________________和____________________的含量存在差异。
（5）某实验研究发现，与添加用过滤除菌法处理的椰子水（A组）相比，人工胚乳中添加用湿热灭菌法处理的椰子水（B组）使原球茎的休眠时间变短。研究人员推测B组原球茎休眠时间短的原因是脱落酸被破坏。作出上述推测的依据是：椰子水中有脱落酸；____________________;脱落酸不耐高温。为了验证上述推测，可增加一组实验（C组），C组的处理是：____________________。
28. 癌症的免疫疗法通过重新激活抗肿瘤的免疫细胞，克服肿瘤的免疫逃逸，在癌症治疗方法中取得越来越突出地位，科研人员在不断研究中发现多种免疫治疗方法的结合是提高治疗效果的途径之一。
（1）某些种类癌细胞表面高表达膜蛋白PSMA和PD-L1,如图1。PD-L1能抑制T细胞的活化，使癌细胞发生免疫逃逸。单克隆抗体最主要的优点在于____________________。临床上可利用PD-1的单克隆抗体进行癌症治疗。将等量的纯化PD-1蛋白分别注射到5只小鼠体内，经过二次免疫后测定小鼠抗PD-1抗体的免疫效果，取其中免疫效果最好的1号小鼠用于后面的融合实验。在融合前三天，对1号小鼠加强免疫一次，目的是____________________。然后取小鼠的脾脏细胞用____________________试剂诱导与骨髓瘤细胞融合，用选择培养基进行筛选得到杂交瘤细胞。
（2）一段时间后，将（1）所得细胞接种到多孔培养板上，进行抗体阳性检测，检测原理如上图。
①在检测时需要将PD-1蛋白固定于周相载体表面制成____________________,并加入多孔板培养槽中的_________________（细胞、上清液），即待测样木。
②加入酶标抗体后一段时间，需要用洗涤剂将未与____________________结合的酶标抗体洗去。
③加入相应酶促反应底物显色后，颜色的深浅可代表____________________。
（3）CD28是T细胞表面受体，T细胞的有效激活依赖于CD28在癌细胞与T细胞结合部位的聚集。因此，科研人员尝试构建既能结合PSMA,还能结合CD28的双特异性抗体PSMAXCD28,诱导T细胞定向杀伤癌细胞，如图2。制备过程为：先将_____________________分别注射到小鼠体内，分离出B淋巴细胞，诱导其与小鼠的骨髓瘤细胞融合，筛选得到两种杂交瘤细胞，再诱导两种细胞融合。成功融合的细胞会表达两种L链和两种H链，由于L链和H链的随机组合会____________________。因此还需进行筛选才能获得所需的双特异性抗体PSMA×CD28。
（4）在肿瘤患者的治疗中，被动免疫治疗是指被动地将具有抗肿瘤活性的免疫制剂或细胞回输给肿瘤患者机体进行治疗，该治疗方案适用于肿瘤晚期患者，除了单克隆抗体治疗外，还可以进行过继性细胞治疗，过继性细胞治疗相关过程如图所示过继性细胞治疗中，从肿瘤患者体内获取的免疫细胞置于适宜环境下培养，培养过程中会出现分裂受阻，其原因主要有____________________（答出2点），培养过程中出现接触抑制现象时，可用____________________酶处理贴壁细胞使之分散成单个细胞进行传代培养。
29. 工程菌是指用基因工程的方法，使外源基因得到高效表达的菌类细胞株系。下图是利用大肠杆菌生产人胰岛素过程中使用的质粒及目的基因的部分结构。
（1）启动子是____的识别和结合部位。图中胰岛素基因以____链作为模板进行转录。构建基因表达载体时一般至少需要两种限制酶，以防止____和____。
（2）为使胰岛素基因能够在大肠杆菌中表达出正确的蛋白质，获取目的基因时通常先____，然后再通过逆转录得到胰岛素基因。
（3）PCR扩增胰岛素基因的前提是____，以用于特异性制备PCR扩增需要的引物。PCR扩增过程中，经过4轮循环后，得到的产物中只含一种引物的DNA分子占比为____。为了使目的基因与载体能正确连接，需要在引物的____端添加限制酶____的识别序列；n次循环后，至少消耗引物____个。
（4）β—半乳糖苷酶可以分解无色的X-gal产生蓝色物质使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。将转化后的大肠杆菌接种到添加了____的培养基上，若出现____（白色/蓝色）菌落，则该菌落即为含有重组质粒的大肠杆菌菌落。山东省实验中学高二下学期第一次学情检测
生物试题
2024.3
一、单选题（每个2分，共40分）
1. 从开始制作到泡菜品质最佳这段时间内，泡菜逐渐变酸，乳酸菌与杂菌数目也发生变化，下列有关分析不正确的是（ ）
A. 泡菜制作初期就有乳酸菌的存在
B. 密闭的发酵环境使乳酸菌在种间竞争中占据一定优势
C. 在发酵过程中，乳酸含量逐渐增多，可以抑制其他微生物的生长
D. 发酵过程中，杂菌数目的减少使乳酸菌与杂菌的种间竞争减弱，因此乳酸菌数目一直增多
【答案】D
【解析】
【分析】泡菜在腌制过程中，乳酸菌、乳酸和亚硝酸盐的变化：①发酵初期：以不抗酸的大肠杆菌和酵母菌的活动为主，同时还有一部分硝酸盐还原菌活动。该时期利用了氧气，产生了厌氧环境，乳酸菌才开始活动。此时乳酸菌和乳酸的量都比较少，而由于硝酸盐还原菌的活动，亚硝酸盐含量有所增加。②发酵中期：由于乳酸菌产生了大量乳酸，其他细菌活动受到抑制，只有乳酸菌活动增强。此时期乳酸菌数量达到最高峰，乳酸的量继续积累。由于硝酸盐还原菌受抑制，同时形成的亚硝酸盐又被分解，因而亚硝酸盐含量下降。所以在整个发酵过程中，亚硝酸盐的含量表现为先增加后下降的趋势。③发酵后期：由于乳酸的积累，酸度继续增长，乳酸菌活动也受到抑制。乳酸菌数量下降，而硝酸盐还原菌完全被抑制。
【详解】A、泡菜制作初期多种微生物并存，也存在乳酸菌，才可制作到泡菜，A正确；
B、乳酸菌是厌氧细菌，密闭发酵产生了厌氧环境，有些菌是好氧的，于是乳酸菌在种间竞争中占据一定优势，B正确；
C、发酵过程中，乳酸含量不断增多，酸度不断增长，氧气含量不断减少，直至全部消耗，可以抑制其他微生物的生长，C正确；
D、发酵后期，由于乳酸的积累，酸度继续增长，乳酸菌活动也受到抑制，因此乳酸菌数目不会一直增多，D错误。
故选D。
2. 我国的酿酒技术历史悠久，古人在实际生产中积累了很多经验。《齐民要术》记载：将蒸熟的米和酒曲混合前需“浸曲发，如鱼眼汤，净淘米八斗，炊作饭，舒令极冷”。意思是将酒曲浸到活化，冒出鱼眼大小的气泡，把八斗米淘净，蒸熟，摊开冷透。下列说法错误的是（ ）
A. “浸曲发” 过程中酒曲中的微生物代谢加快
B. “鱼眼汤” 现象是微生物呼吸作用产生的CO2释放形成的
C. “净淘米”" 是为消除杂菌对酿酒过程的影响而采取的主要措施
D. “舒令极冷”的目的是防止蒸熟的米温度过高导致酒曲中的微生物死亡
【答案】C
【解析】
【分析】参与酒精的制作的微生物是酵母菌，酵母菌是兼性厌氧型微生物，在有氧条件下进行有氧呼吸将葡萄糖分解为二氧化碳和水，在无氧条件下生成酒精和二氧化碳。
【详解】A、“浸曲发”是将酵母菌活化，可以使微生物代谢加快，A正确；
B、“鱼眼汤”是指酵母菌在呼吸过程中产生CO2，使溶液中出现气泡，B正确；
C、在做酒过程中，为消除杂菌的影响主要靠“炊作饭”，即蒸熟，C错误；
D、“舒令极冷”是将米饭摊开冷透，防止温度过高导致微生物（酵母菌死亡），D正确。
故选C。
【点睛】本题需要考生结合酵母菌的代谢类型进行分析，理解题干中的相关术语是解答本题的关键。
3. 培养基是指由不同营养物质组合配制而成的，供微生物、植物细胞或动物细胞生长繁殖的营养基质。下列关于培养基的叙述：错误的是（ ）
A. 微生物在培养前要先对培养基进行灭菌处理再接种
B. 体外培养杂交瘤细胞时，培养基加入血清后需湿热灭菌以确保无菌
C. 配制植物组培的培养基时，用等量葡萄糖代替蔗糖会影响细胞的分裂分化
D. 分离并纯化硝化细菌时，培养基中无需添加碳源，但需添加氮源
【答案】B
【解析】
【分析】硝化细菌可进行化能合成作用，利用空气中的二氧化碳作为碳源，培养硝化细菌不需要在培养基中加入碳源。
【详解】A、微生物培养前应对培养基先灭菌再接种，以防止杂菌污染，A正确；
B、血清经过湿热灭菌后活性成分失活，血清可进行射线除菌或过滤除菌，B错误；
C、配制植物组织培养的培养基时，配制相同质量分数的培养基，蔗糖形成的渗透压要明显低于葡萄糖，同时，植物细胞吸收蔗糖的速率要明显慢于吸收葡萄糖的速率，因此，若用等量葡萄糖代替蔗糖，易使植物细胞脱水而影响细胞的分裂分化，C正确；
D、硝化细菌属于自养型微生物，能够以CO2为碳源，故培养硝化细菌可以不加有机碳，但需添加氮源，D正确。
故选B。
4. 养殖池中存在的有毒物质主要是氨及亚硝酸，这两种物质可由硝化细菌吸收利用。在“养殖池底泥中硝化细菌的分离和计数”实验中，下列说法正确的是（ ）
A. 需要配制添加一定浓度氨盐的牛肉膏蛋白胨培养基，以筛选硝化细菌
B. 应对采集底泥使用的工具进行灭菌，全部接种过程均需在酒精灯火焰旁进行
C. 采用平板划线法进行分离和计数时，还需与未接种的空白培养基同时培养
D. 若空白对照组上长出了菌落，需要在实验组数据的基础上减去空白对照组的菌落数
【答案】B
【解析】
【分析】1、微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落；②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
2、培养过程应该先将空白培养基培养观察是否长出菌落，若可以长出菌落，则培养基被污染，该培养基不能使用。
【详解】A、要分离硝化细菌，应该用以铵盐为唯一氮源的培养基，培养基中不能加入牛肉膏蛋白胨，A错误；
B、获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌污染，因此，应对采集底泥使用的工具进行灭菌，全部接种过程均需在火焰旁进行，B正确；
C、对微生物进行计数时应该采用的接种方法是稀释涂布平板法，C错误；
D、若空白对照组长出了菌落，说明培养基受到污染，该培养基不能再使用，所得数据也应舍弃，D错误。
故选B。
5. 生物指示剂常用于对医疗器械高压蒸汽灭菌的质量监测。将某批次的多支生物指示剂（如图）与医疗器械一并放入压力锅中，待灭菌完成后，挤破安瓿瓶，让含芽孢的菌片（嗜热脂肪芽孢杆菌）与培养液接触，培养并检测结果。下列说法错误的是（ ）
A. 安瓿瓶内培养液的成分应适于嗜热脂肪芽孢杆菌的生长
B. 制备生物指示剂时，安瓿瓶内的培养液需要进行灭菌处理
C. 嗜热脂肪芽孢杆菌的热耐受性大于已知污染菌的热耐受性
D. 当压力锅中的生物指示剂培养结果为阴性时说明医疗器械灭菌合格
【答案】D
【解析】
【分析】灭菌是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
【详解】A、生物指示剂待灭菌完成后，挤破安瓿瓶，让嗜热脂肪芽孢杆菌与培养液接触，培养并检测结果，则安瓿瓶内培养液的成分应适于嗜热脂肪芽孢杆菌的生长，A正确；
B、制备生物指示剂时，为了防止污染，安瓿瓶内的培养液需要进行灭菌处理，B正确；
C、芽孢是细菌的休眠体，芽孢壁厚，含水量极低，代谢缓慢，抗逆性强，能经受高温紫外线，电离辐射以及多种化学物质灭杀。可以帮助细菌度过不良环境。因此菌片中芽孢的耐热性大于器械上的可能污染菌，C正确；
D、若灭菌与未灭菌的生物指示剂均不出现阳性变化，则说明灭菌则说明灭菌前无有活性芽孢，也就无法说明灭菌效果，D错误。
故选D。
6. 利用微生物分解纤维素对废弃物污染的减轻和作物秸秆再利用具有重要意义。某兴趣小组从富含纤维素的土壤中取样，加入选择培养基中进行振荡培养，之后接种于鉴别培养基上进行培养，筛选出能够分解纤维素的微生物。下列叙述错误的是（ ）
A. 选择培养的目的是促进纤维素分解菌生长，抑制其他微生物的生长
B. 振荡培养可以增加溶解氧量，促进微生物对营养物质的充分接触和利用
C. 鉴别培养基上涂布接种时，将1mL菌液滴到培养基表面再用涂布器涂布均匀
D. 加入刚果红的培养基上所出现的有透明圈的菌落，可能是细菌或真菌繁殖而成
【答案】C
【解析】
【分析】从土壤中分离纤维素分解菌的一般步骤是：土壤取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株；筛选纤维素分解菌需要用以纤维素为唯一碳源的选择培养基，纤维素分解菌可以用刚果红染液进行鉴别，在培养基中加入刚果红染液，在其菌落周围会出现透明圈。
【详解】A、选择培养的原理是人为提供有利于目的菌生长的条件，同时抑制或阻止其他微生物的生长，因此选择培养的目的是促进纤维素分解菌生长，抑制其他微生物的生长，A正确；
B、振荡培养可以增加溶解氧量，促进微生物对营养物质和氧气的充分接触和利用，B正确；
C、鉴别培养基上涂布接种时，将0.1mL菌液滴到培养基表面再用涂布器涂布均匀，C错误；
D、加入刚果红的培养基上所出现的透明圈的菌落是能够分解纤维素的微生物，能够分解纤维素的微生物既有真菌也有细菌，D正确。
故选C。
7. 图中的已驯化菌群是从某肉制品加工厂污水处理池中初步筛选的可水解油脂并利用的菌群，为进一步筛选高效水解油脂的菌群进行了如图所示的操作。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 培养基中除了油脂提供的成分还需加入氮源和碳源
B. 随着培养基中油脂浓度变大导致菌群朝着高效水解油脂的变异方向发展
C. 在菌种分解油脂的过程中培养基的pH会呈现先下降再上升的变化趋势
D. 若要研究优秀菌的生长规律，可在液体培养的不同时间段采用稀释涂布平板法短时间内测定其数量
【答案】C
【解析】
【分析】1、培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质;根据物理性质分为固体培养基和液体培养基，培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐。在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质和氧气的要求。2、平板划线法:将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。
【详解】A、油脂可作为微生物提供碳源，除此之外还需要提供水、无机盐和氮源，A错误;
B、变异是不定向的，自然选择是定向的，油脂浓度起到了选择作用，B错误;
C、在菌种分解油脂的过程中，由于分解油脂会产生脂肪酸，从而导致培养基的pH先下降，随着微生物的利用，脂肪酸被消耗，pH会再上升，C正确；
D、计数需在每天相同时间段完成，稀释涂布平板法不能短时间内测定数量，若需要短时间应选用直接计数法，D错误。
故选C。
8. 厌氧氨氧化菌是一种化能自养型细菌，以二氧化碳作为唯一碳源，利用亚硝酸氧化成硝酸释放的能量来合成有机物。厌氧氨氧化菌进行分解代谢的主要场所是一种被称为厌氧氨氧化体的具膜结构。下列推测合理的是（ ）
A. 该细菌生命活动所需能量的直接来源是其化能合成的有机物
B. 该细菌与化能合成有关的酶主要分布在其厌氧氨氧化体膜上
C. 该细菌厌氧氨氧化体膜上的蛋白质是由其自身核糖体合成的
D. 该细菌中部分与呼吸有关酶可能是由线粒体基因控制合成
【答案】C
【解析】
【分析】厌氧氨氧化菌是一种化能自养型细菌，为原核生物，没有成形的细胞核，含有核糖体，该细菌可以利用化能合成作用释放的能量合成有机物。
【详解】A、细菌生命活动所需能量的直接来源是ATP，A错误；
B、由题可知厌氧氨氧化菌进行分解代谢的主要场所是一种被称为厌氧氨氧化体的具膜结构，并不能说明该细菌与化能合成有关的酶主要分布在其厌氧氨氧化体膜上，B错误；
C、原核生物有核糖体，核糖体是合成蛋白质的场所，该细菌厌氧氨氧化体膜上的蛋白质是由其自身核糖体合成的，C正确；
D、该细菌为原核生物，没有线粒体结构，与呼吸有关的酶可能是由拟核基因编码，D错误。
故选C。
9. 某兴趣小组的同学们按如图所示的过程对某人喝剩的5mL酸奶进行细菌检测，若3个计数的培养基中的菌落数目分别为210个、160个、230个。下列说法错误的是（ ）
A. 为了使1号试管稀释倍数为100倍，锥形瓶中应加入45mL无菌水
B. 除了培养涂布的3个培养皿外，还需要培养未涂布菌落的培养基作为对照
C. 为了计数准确需要用接种环连续划线，并且每次划线前需要灼烧灭菌
D. 已知1号试管稀释倍数为100倍，利用该方法可估算酸奶中细菌含量为2.0×108个·mL-1，此值比实际活菌数少
【答案】C
【解析】
【分析】1、获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染。通常采用各种无菌技术防止杂菌污染，无菌技术主要包括消毒和灭菌。 消毒是指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。灭菌则是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
2、培养纯净物时通常接种单一菌种，常用的接种方法是稀释涂布平板法和平板划线法。
【详解】A、锥形瓶5mL酸奶加入45mL无菌水中，稀释倍数为5/（5+45）=1/10，酸奶被稀释10倍。再从锥形瓶中取1mL菌液至9mL无菌水中，稀释倍数为：1/（1+9）=1/10，又稀释了10倍，共稀释100倍，A正确；
B、在进行微生物培养时，通常要同时培养未涂布菌落的培养基作为对照，以便监测培养过程中是否出现污染，B正确；
C、如果要对培养的微生物进行计数，接种方法要用稀释涂布平板法，不能用平板划线法，C错误；
D、1号试管稀释了100倍，后面的试管再稀释了103倍，共稀释了105倍。3个计数的培养基中的菌落数目分别为210个、160个、230个，平均值为200个，则酸奶中细菌含量为200×105×10=2.0×108·mL-1个，此值比实际活菌数少，D正确。
故选C。
10. 组氨酸缺陷型沙门氏菌是由野生菌种突变形成的，自身不能合成生命活动必需的组氨酸。将其接种在缺乏组氨酸的平板培养基上进行培养，有极少量菌落形成。2-氨基芴是一种致突变剂，将沾有2-氨基芴的滤纸片放到上述平板培养基中，再接种组氨酸缺陷型沙门氏菌进行培养，会有较多菌落出现。以下叙述正确的有几项（ ）
①在接种前，2-氨基芴和滤纸片需进行灭菌处理
②菌落的形成可能与致突变剂有关
③这种沙门氏菌不宜用于检测环境中的化学致突变剂
④实验所用培养基为固体培养基
⑤经化学诱变剂处理的缺陷型细菌可能变为野生型
⑥缺陷型细菌均是通过基因重组具备了合成组氨酸的能力
A. 3项B. 4项C. 5项D. 6项
【答案】C
【解析】
【分析】1、消毒是指使用较为温和的物理、化学 或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。灭菌则是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
2、人们按照微生物对营养物质不同需求，配制出供 其生长繁殖的营养基质—培养基，用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。其中，不含凝固剂（如琼脂）、呈液体状态的培养基为液体培养基，呈固体状态的培养基为固体培养基。在液体培养基中加入琼脂后制成的琼 脂固体培养基，是实验室中最常用的培养基之一。微生物在琼脂固体培养基表面或内部生长，可以形成肉眼可见的菌落。
【详解】①在微生物培养过程中，培养基、实验材料、实验用具等在使用前都要进行灭菌处理，①正确；
②2-氨基芴的作用是诱导沙门氏菌产生基因突变，菌落的形成可能与该诱变剂有关，②正确；
③可以诱发基因突变的还有物理因素，且基因突变具有随机性和不定向性，该种沙门氏菌不宜用来检测环境中的化学致突变剂，③正确；
④由题干信息可知，该培养基为平板培养基，属于固体培养基，④正确；
⑤组氨酸缺陷型沙门氏菌是由野生菌种突变形成的，由于基因突变存在可逆性，经化学诱变剂处理的缺陷型细菌可能变为野生型，⑤正确；
⑥自然条件下，基因重组一般发生在进行有性生殖的真核生物中，缺陷型细菌中很可能发生了基因突变，⑥错误。
综上所述，①②③④⑤正确，⑥错误。
故选C。
11. 菊花的组织培养需要进行严格的无菌操作，下列说法不正确的是（ ）
A. 培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌
B. 幼苗要先移植到消过毒的蛭石或者珍珠岩等环境下生活一段时间
C. 菊花茎段在洗涤灵稀释液浸泡2min，用流水冲洗干净后，在95%酒精中消毒30s，再用流水冲洗后置于10%次氯酸钠溶液中消毒10min，然后用蒸馏水多次冲洗。
D. 接种时用镊子夹取菊花茎段，注意茎段的形态学上下端，再插入培养基
【答案】C
【解析】
【分析】植物组织培养是一种将植物体的部分细胞或组织与母体分离，在适当的条件下加以培养，使它们能够生长、发育、分化与增殖的技术。
【详解】A、高压蒸汽灭菌法常用于培养基及其他器械的灭菌，A正确；
B、幼苗要先移植到消过毒的蛭石或者珍珠岩等环境下生活一段时间，以逐步适应外界的环境，B正确；
C、菊花茎段在洗涤灵稀释液浸泡2min，用流水冲洗干净后，在70%酒精中消毒30s，再用流水冲洗后置于10%次氯酸钠溶液中消毒10min，然后用无菌水多次冲洗，C错误；
D、由于生长素的极性运输，接种时用镊子夹取菊花茎段，注意茎段的形态学上下端，再插入培养基，不能倒插，D正确。
故选C。
12. 紫花苜蓿（2n=32）是应用较为广泛豆科牧草，但易造成家畜鼓胀病。百脉根（2n=12）富含单宁，单宁可与植物蛋白质结合，不会引起家畜采食后鼓胀。科研人员利用野生型清水紫花苜蓿和里奥百脉根为材料培育抗鼓胀病苜蓿新品种。研究流程如图（注：IOA可抑制植物细胞呼吸第一阶段，R-6G可阻止线粒体的呼吸作用），下列说法错误的是（ ）
A. 将两种细胞分别置于略高渗透压环境下，有利于去除细胞壁获得两种植物的原生质体
B. ②过程需要利用选择培养基筛选出杂种愈伤组织
C. ③过程需要在有光照、植物激素的作用才能化形成完整植株
D. ②过程的细胞中染色体数目最多有88条，③过程产生的再生植株是可育的多倍体
【答案】B
【解析】
【分析】植物体细胞杂交技术：将不同种的植物体细胞原生质体在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成完整植物体的技术。
【详解】A、在制备两种植物原生质体时，需用酶解法去除植物细胞的细胞壁，去壁后的原生质体在较高渗透压环境下处于较稳定状态，不易破裂，从而有利于获得两种植物的原生质体，A正确；
B、由题意可知，使用IOA和R-6G处理后，原生质体和同源融合体不能再生愈伤组织，故②过程不需要使用选择培养基筛选杂种愈伤组织，B错误；
C、③过程分别表示再分化，脱分化所需的生长素/细胞分裂素比值为1，再分化时，提高该比值有利于根的分化，降低该比值有利于芽的分化，再分化过程需要光照，C正确；
D、紫花苜蓿染色体数目为32条，百脉染色体数目为12条，融合之后细胞内染色体数目为32+12=44条，②过程表示脱分化，进行的是有丝分裂，此时染色体数目最多有44×2=88条（有丝分裂后期），紫花苜蓿是二倍体，百脉是二倍体，③过程产生的再生植株是可育的多倍体（四倍体），D正确。
故选B。
13. 科学家用紫外线照射板蓝根原生质体，使其部分染色体丢失，将处理后的板蓝根原生质体与油菜原生质体融合，培育出了只含一条板蓝根染色体和油菜全部染色体的非对称杂种植株，该过程运用了非对称细胞融合技术。下列说法正确的是（ ）
A. 原生质体由细胞膜、液泡膜及两者之间的细胞质组成
B. 融合原生质体需放在无菌水中培养，以防杂菌污染
C. 非对称细胞融合技术降低了不同物种间基因表达的干扰程度
D. 非对称细胞融合技术提高了植物细胞的全能性，属于细胞工程
【答案】C
【解析】
【分析】1、植物体细胞杂交是指将不同来源的植物体细胞，在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成新植物体的技术。在进行体细胞杂交之前，必须先利用纤维素酶和果胶酶去除这层细胞壁，获得原生质体；人工诱导原生质体融合的方法基本可以分为两大类—物理法和化学法：物理法包括电融合法、离心法等；化学法包括聚乙二醇（PEG）融合法等。
2、非对称细胞融合技术常指利用某种外界因素（如射线）辐照某一细胞原生质体，选择性地破坏其细胞核，使其染色体片段化并丧失再生能力，再进行与另一原生质体融合，紫外线作用于根细胞原生质体，使染色体片段化，发生了染色体变异，说明非对称细胞融合技术的原理之一是染色体变异（染色体数目变异和染色体结构变异）。
【详解】A、原生质体是用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁后的植物细胞，而由细胞膜、液泡膜及两者之间的细胞质组成的结构称为原生质层，A错误；
B、原生质体放在无菌水中会吸水涨破，应放到等渗的溶液中，保持原生质体的完整性，B错误；
C、非对称融合过程中部分染色体丢失，从而降低了不同物种间基因表达的干扰程度，C正确；
D、非对称融合过程中部分染色体丢失（断裂），所以会降低植物细胞的全能性，D错误。
故选C。
14. 研究发现，小鼠四倍体胚胎具有发育缺陷，只能发育成胎盘等胚胎以外的结构。ES细胞能够诱导分化形成所有的细胞类型，但很难分化形成胎盘。四倍体胚胎与ES细胞的嵌合体则会使二者的发育潜能相互补偿，可得到ES小鼠，其中的四倍体胚胎只能发育成胚外组织。下列叙述正确的是（ ）
A. 将2细胞期胚胎用灭活病毒诱导法使2细胞融合，可得到一个含四个染色体组的细胞
B. 嵌合体中的ES具有自我更新能力并只能分化为胎盘等胚外组织
C. 嵌合体胚胎发育至原肠胚时需移植入与之生理状态相同的小鼠子宫内才可以进一步发育
D. 嵌合体发育形成的ES小鼠基因型与供体ES细胞的基因型不同
【答案】A
【解析】
【分析】胚胎工程是指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术。包括体外受精、胚胎移植、胚胎分割移植、胚胎干细胞培养等技术。胚胎工程的许多技术，实际是在体外条件下，对动物自然受精和早期胚胎发育条件进行的模拟操作。嵌合体-遗传学上用以指不同遗传性状嵌合或混杂表现的个体。
【详解】A、正常小鼠是二倍体，所以两个2细胞期胚胎用灭活病毒等诱导法使细胞融合，可得到一个含四个染色体组的细胞，再经胚胎的早期培养可得到四倍体胚胎，A正确；
B、嵌合体中的ES具有自我更新能力，很难分化形成胎盘，可分化为处胎盘以外的所有细胞类型，B错误；
C、嵌合体胚胎发育至桑椹（桑葚）胚或囊胚期再移植入与之生理状态相同的小鼠子宫内才可以进一步发育，C错误；
D、四倍体胚胎与ES细胞的嵌合体则会使二者的发育潜能相互补偿，可得到ES小鼠，其中的四倍体胚胎只能发育成胚外组织，所以嵌合体发育形成的ES小鼠基因型与供体ES细胞的基因型相同，D错误。
故选A。
15. 如图表示研究人员利用胚胎工程技术繁育优质高产奶羊的过程，下列说法错误的是（ ）
A. 通过①~⑤繁育高产奶羊的原理与克隆羊的繁育原理不同
B. 过程⑤能否成功与供体和受体生理状态的一致性密切相关
C. 进行胚胎性别鉴定时，要选择囊胚的内细胞团细胞进行DNA分析
D. 不同生物进行过程⑤的时期不同，但移植的胚胎一般不能晚于囊胚期
【答案】C
【解析】
【分析】①表示受精作用，②表示胚胎培养，③表示胚胎分割，④表示胚胎培养，⑤表示胚胎移植
【详解】A、图示高产奶羊是由体外受精得到的受精卵发育而来的个体，而克隆羊是由细胞核移植得到的重组细胞发育而来的个体，两者繁育原理不同，A正确；
B、供体和受体生理状态相同是胚胎移植成功的基础，B正确；
C、进行胚胎性别鉴定时，要选择囊胚的滋养层细胞进行DNA分析，C错误；
D、不同生物进行过程⑤的时期不同，但移植的胚胎一般不能晚于囊胚期，一般用桑葚胚或囊胚期进行胚胎移植，D正确。
故选C。
16. 为获得导入 R 基因的转基因小鼠，科研人员进行了如下图所示的操作过程。相关叙述错误的是（ ）
A. 过程①需用促性腺激素处理以获得更多的卵母细胞
B. 过程②操作中通常需多个表达载体和多个受精卵
C. 过程③需使用药物抑制雌鼠b对植入胚胎的免疫排斥
D. 过程④处理的目的是使多只雌鼠b处于受孕准备状态
【答案】C
【解析】
【分析】1、动物发情排卵后，同种动物的供、受体生殖器官的生理变化是相同的。这就为供体的胚胎移入受体提供了相同的生理环境。
2、受体对移入子宫的外来胚胎不发生免疫排斥反应。这为胚胎在受体的存活提供了可能。
【详解】A、为了胚胎移植成功往往需要更多的卵母细胞，所以过程①用促性腺激素对供体进行超数排卵处理，A正确；
B、将目的基因导入受体细胞用多个表达载体和多个受精卵可以提高成功率，所以过程②操作中通常需多个表达载体和多个受精卵，B正确；
C、受体对移入子宫的外来胚胎不发生免疫排斥反应，故过程③不需要抑制雌鼠b对植入胚胎的免疫排斥，C错误；
D、胚胎移植成功需要受体和供体达到相同的生理状态，所以过程④处理的目的是使多只雌鼠b处于受孕准备状态，D正确；
故选C。
17. 下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述，错误的是（ ）
A. 可选用在液体培养基中培养的大肠杆菌作为实验材料
B. 向含DNA的滤液中加入2ml/L的NaCl溶液，有利于去除杂质
C. 将过滤液放入4℃冰箱或加入预冷的酒精都可抑制DNA酶的活性
D. 鉴定DNA时，将二苯胺试剂加入到含DNA的溶液中即可出现蓝色
【答案】D
【解析】
【分析】DNA的粗提取与鉴定的实验原理是：①DNA的溶解性，DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的氯化钠溶液中的溶解度不同，利用这一特点可以选择适当浓度的盐溶液可以将DNA溶解或析出，从而达到分离的目的；②DNA不溶于酒精溶液，细胞中的某些蛋白质可以溶解于酒精，利用这一原理可以将蛋白质和DNA进一步分离。
【详解】A、大肠杆菌是细菌，含有拟核和质粒，DNA含量也较多，适合提取DNA，故可选用在液体培养基中培养的大肠杆菌作为实验材料，A正确；
B、DNA在2ml/L的NaCl溶液中DNA的溶解度较高，搅拌过滤后，DNA存在于滤液中，有利于去除杂质，B正确；
C、酶活性的发挥需要适宜的温度等条件，将过滤液放入4℃冰箱或加入预冷的酒精的目的是抑制DNA酶的活性，避免DNA被水解，C正确；
D、向DNA溶液中加入二苯胺试剂后还需要沸水浴加热才可出现蓝色，D错误。
故选D。
18. 基因工程是一项过程复杂方法多样的系统工程，“筛选”是基因工程中常用的技术手段。下列说法错误的是（ ）
A. pmi基因编码的蛋白质可使细胞在特殊培养基上生长，可用于目的基因的筛选
B. 构建乳腺生物反应器需先将目的基因与乳腺中特异性表达的基因启动子连接到质粒上
C. 对转基因抗虫棉进行个体水平的鉴定筛选时，需用PCR技术或抗原-抗体杂交的方法
D. 基因工程转化后，利用标记基因可以将含有目的基因的受体细胞筛选出来
【答案】C
【解析】
【分析】培育转基因抗虫棉主要需要四个步骤：目的基因的筛选与获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。
【详解】A、pmi基因编码的蛋白质可使细胞在特殊培养基上生长，说明pmi基因是标记基因，可用于目的基因的筛选，A正确；
B、构建乳腺生物反应器需先将目的基因与乳腺中特异性表达的基因启动子连接到质粒上，通过显微注射的方法导入哺乳动物的受精卵中，由这个受精卵发育成的转基因动物在进入泌乳期后，可以通过分泌乳汁来生产所需要的药物，B正确；
C、对转基因抗虫棉进行个体水平的鉴定筛选时，通过采摘抗虫棉的叶片饲喂棉铃虫来确定Bt基因是否赋予了棉花抗虫特性以及抗性的程度，C错误；
D、基因工程转化后，说明重组质粒导入到受体细胞中，可以利用标记基因可以将含有目的基因的受体细胞筛选出来，D正确。
故选C。
19. 下图分别表示某种质粒和含目的基因的DNA片段，利用相关工具酶将二者构建成基因表达载体并导入受体菌。几种可供使用的限制酶识别序列及其切割位点为EcRⅠ：-G↓AATTC-；BamHⅠ：-G↓GATCC-；BclⅠ：-T↓GATCA-；Sau3AⅠ：-↓GATC-；SmaⅠ：-CCC↓GGG-。
注：TetR表示四环素抗性基因；AmpR表示氨苄青霉素抗性基因。
下列关于构建基因表达载体时限制酶的选择及其相关叙述，错误的是（ ）
A. 若单独使用SmaI，则目的基因表达的产物可能不相同
B. 若单独使用SmaⅠ，则含有目的基因的受体菌不能在氨苄青霉素培养基中生长
C. 若选择BamHⅠ和SmaI，能在四环素培养基中生长的受体菌一定含有目的基因
D. 若用EcRI和BclⅠ切割质粒，则需用EcRⅠ和Sau3AⅠ切割含目的基因的DNA
【答案】C
【解析】
【分析】限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂，形成黏性末端或平末端。
【详解】A、用同一种限制酶切割质粒和含目的基因的DNA片段后，目的基因可能会反向连接到质粒上，因此目的基因表达的产物可能不相同，A正确；
B、若单独使用SmaⅠ切割质粒和含目的基因的DNA片段，会破坏质粒上的氨苄青霉素抗性基因，使含有目的基因的受体菌不能在氨苄青霉素培养基中生长，B正确；
C、若选择BamHⅠ和SmaⅠ切割质粒和含目的基因的DNA片段，重组质粒上含有正常的四环素抗性基因：能在四环素培养基中生长的受体菌有可能获得了重组质粒，也有可能获得的是普通质粒，C错误；
D、含目的基因的DNA片段上没有BclⅠ的识别序列，不能使用BclⅠ切割含目的基因的DNA片段，但Sau3AⅠ切割DNA后产生的黏性末端与BclⅠ相同，故若用EcRⅠ和BclⅠ切割质粒，则需用EcRⅠ和Sau3AI切割含目的基因的DNA片段，D正确。
故选C。
20. CRISPR/Cas9系统主要由向导RNA（SgRNA）和Cas9蛋白两部分组成，SgRNA可引导Cas9蛋白到特定基因位点进行切割，其机制如图所示。下列说法正确的是（ ）
A. Cas9蛋白相当于限制酶，切割特定基因位点的脱氧核糖和碱基之间的化学键
B. 向导RNA可以在逆转录酶的催化下合成，合成的原料包括四种核糖核苷酸
C. CRISPR/Cas9技术编辑基因有时会因SgRNA错误结合而出现“脱靶”现象，一般SgRNA序列越短，脱靶率越低
D. 对不同目标DNA进行编辑时，使用Cas9蛋白和不同的sgRNA进行基因编辑
【答案】D
【解析】
【分析】限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。
【详解】A、Cas9蛋白切割特定基因位点，相当于限制酶，作用于脱氧核糖和磷酸之间的磷酸二酯键，A错误；
B、向导RNA是以DNA的一条链为模板通过转录形成的，可以在RNA聚合酶的催化下合成，合成的原料包括四种核糖核苷酸，B错误；
C、CRISPR/Cas9技术编辑基因有时会因SgRNA错误结合而出现“脱靶”现象，SgRNA的序列越短，可识别的DNA上的特定碱基序列越短，越容易发生脱靶现象，即脱靶率越高，C错误；
D、在对不同目标DNA进行编辑时，应使用Cas9蛋白和“不同”的sgRNA结合进而实现对不同基因的编辑，D正确。
故选D。
二、不定项选择题（每个3分，选不全1分，错选0分，共15分）
21. 下列关于传统发酵食品生产过程或特点的叙述错误的是（ ）
A. 制作泡菜时将新鲜蔬菜洗净,切成块状或条状,混合均匀,晾干后与蒜瓣、生姜等香辛料混合装满泡菜坛
B. 酿制果酒时,取新鲜葡萄,去除枝梗和腐烂的籽粒,再用清水冲洗１-２次,沥干然后榨汁装入发酵瓶中
C. 制作果醋时,可以先在碗中倒入少量醋,一段时间后用其表面产生的一层薄膜进行接种可以明显缩短制作果醋的时间
D. 传统发酵食品生产利用了天然存在的菌种,品质稳定,风味独特,是我国传统饮食文化的重要组成部分
【答案】ABD
【解析】
【分析】1、果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。
2、泡菜的制作原理：泡菜的制作离不开乳酸菌。在无氧条件下，乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸。
【详解】A、制作泡菜时将经过预处理的新鲜蔬菜混合均匀，装入泡莱坛内，装至半坛时，放入蒜瓣、生姜及其他香辛料，继续装至八成满，再徐徐注入配制好的盐水，使盐水没过全部菜料，盖好坛盖，A错误；
B、制作果酒时，为避免杂菌污染，挑选新鲜葡萄，先进行冲洗，再除去枝梗，B错误；
C、醋中含有醋酸菌，所以在制作果醋时，可以先在碗中倒入少量醋，一段时间后用其表面产生的一层薄膜（含有醋酸菌）进行接种可以明显缩短制作果醋的时间，C正确；
D、传统的发酵没有进行严格的灭菌，生产的食品安全性较低，品质也不够稳定，D错误。
故选ABD。
22. 某种物质X（一种含有C、H、O、N的有机物）难以降解，会对环境造成污染，只有某些细菌能降解X。研究人员按照如图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解X的细菌菌株。实验过程中需要甲、乙两种培养基，甲的组分为无机盐、水和X，乙的组分为无机盐、水、X和Y。下列相关叙述中错误的是（ ）
A. 甲、乙培养基均属于选择培养基，乙培养基组分中的Y物质是琼脂
B. 步骤⑤的筛选过程中，各培养瓶中的X溶液要有一定的浓度梯度
C. 若要筛选高效降解X的细菌菌株，甲、乙培养基中X是唯一的碳源
D. 步骤⑤的筛选过程中，若培养基中的X浓度过高，某菌株对X的降解量可能下降
【答案】B
【解析】
【分析】在分离和纯化分解X细菌的过程中，通过①过程获得菌悬液，此过程中的淤泥不需要灭菌操作，②过程可以使分解X的细菌大量繁殖（选择培养），③通过稀释涂布获得分解X物质的单菌落，④过程再次对各种单菌落进行筛选，经过⑤多次筛选后获得高效降解X的菌体。
【详解】A、甲、乙培养基均只含有机物X，属于选择培养基，乙培养基组分中除了X外，还加入了Y物质琼脂，从而获得固体培养基，A正确；
B、步骤⑤中自变量是挑取的不同的菌落，各培养瓶中的X溶液的浓度应该是一致的，B错误；
C、若要筛选高效降解X的细菌菌株，需要甲、乙培养基中的X是唯一提供碳源的有机物，C正确；
D、步骤⑤的筛选过程中，若培养基中的X浓度过高，则会导致菌体失水影响菌体的正常生长，因此某菌株对X的降解量可能下降，D正确。
故选B。
23. 含硫蛋白质在某些微生物的作用下产生硫化氢导致生活污水发臭。硫化氢可以与硫酸亚铁铵结合形成黑色沉淀。为探究发臭水体中甲、乙菌是否产生硫化氢及两种菌的运动能力，用穿刺接种的方法，分别将两种菌接种在含有硫酸亚铁铵的培养基上进行培养，如图所示。若两种菌繁殖速度相等，下列说法正确的是（ ）
A. 乙菌的运动能力比甲菌强
B. 为不影响菌的运动需选用液体培养基
C. 该实验能比较出两种菌产生硫化氢的量
D. 穿刺接种等接种技术的核心是防止杂菌的污染
【答案】AD
【解析】
【分析】图中是穿刺接种的方法，根据题干中的信息“硫化氢可以与硫酸亚铁铵结合形成黑色沉淀”，所以根据黑色沉淀的多少，比较两种菌产生硫化氢的能力。
【详解】A、从图中可以看出甲菌在试管中分布范围小于乙菌，说明了乙菌的运动能力比甲菌强，A正确；
B、观察两种菌的运动能力需选用半固体培养基，B错误；
C、根据题意，黑色区域的面积大小反映两种菌运动能力的大小，而不能表示二者产生硫化氢的能力大小，C错误；
D、微生物接种技术的核心是防止杂菌的污染，D正确。
故选AD。
24. 双层平板法是一种利用底层和上层均为牛肉膏蛋白胨培养基对噬菌体进行检测的常用方法。具体操作如下：先在无菌培养皿中倒入琼脂含量是2%的培养基凝固成底层平板后，将琼脂含量是1% 的培养基熔化并冷却至45~48℃，然后加入宿主细菌和待测噬菌体稀释悬液的混合液，充分混匀后立即倒入底层平板上形成双层平板。培养一段时间后，在上层平板上看见由于噬菌体侵染周围细菌而使宿主细胞裂解死亡形成的空斑即噬菌斑。通常一个噬菌斑来自原液中的一个噬菌体，根据噬菌斑的数目计算原液中噬菌体的数量，如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A. 牛肉膏蛋白胨培养基可作为选择培养基选择出噬菌体的宿主细胞
B. 加入混合液后，使用灭菌后的涂布器将混合液均匀地涂布在培养基表面
C. 上层培养基中琼脂浓度较低，因此形成的噬菌斑较大，更有利于计数
D. 双层平板法获得的噬菌斑不易发生上下重叠现象
【答案】AB
【解析】
【分析】双层平板法，先在培养皿中倒入底层固体培养基，凝固后再倒入含有宿主细菌和一定稀释度噬菌体的半固体培养基。培养一段时间后，计算噬菌斑的数量。双层平板法的优点：①加了底层培养基后，可使原来底面不平的玻璃皿的缺陷得到了弥补；②所形成全部噬菌体斑都接近处于同一平面上，因此不仅每一-噬菌斑的大小接近、边缘清晰，而且不致发生上下噬菌斑的重叠现象；③因上层培养基中琼脂较稀，故形成的噬菌斑较大，更有利于计数。
【详解】A、选择培养基就是在牛肉膏蛋白胨培养基的基础上加上一定的限制条件，所以会把那些不能在选择培养基上的细菌淘汰掉，剩下的就是符合条件的，牛肉膏蛋白胨培养基不是选择培养基，A错误；
B、据题意可知，将琼脂含量是1%的培养基融化并冷却至45～48℃，然后加入宿主细菌和待测噬菌体稀释悬液的混合液，充分混匀后立即倒入底层平板上形成双层平板，是培养基和混合液一起倒平板，不是混合液涂布在培养基表面，B错误；
C、双层平板法因上层培养基中琼脂较稀，故形成的噬菌斑较大，更有利于计数，C正确；
D、双层平板法所形成全部噬菌体斑都接近处于同一平面上，因此不仅每一噬菌斑的大小接近、边缘清晰，而且不致发生上下噬菌斑的重叠现象，D正确。
故选AB。
25. 胚胎工程的发展，实现了优良家畜的大量繁殖。下列有关叙述错误的是（ ）
A. 试管牛、试管羊的产生属于无性繁殖
B. 利用胚胎分割技术可获得多个基因型相同的胚胎
C. 饲喂促性腺激素有助于供体母牛排出比自然情况下更多的次级卵母细胞
D. 用Ca2+载体法可以促进皮肤细胞与去核卵母细胞融合
【答案】ACD
【解析】
【分析】胚胎移植的基本程序主要包括：①对供、受体的选择和处理(选择遗传特性和生产性能优秀的供体，有健康的体质和正常繁殖能力的受体。用激素进行同期发情处理，用促性腺激素对供体母牛做超数排卵处理）；②配种或人工授精；③对胚胎的收集、检查、培养或保存（对胚胎进行质量检查，此时的胚胎应发育到桑椹或胚囊胚阶段）；④对胚胎进行移植；⑤移植后的检查。
【详解】A、试管牛、试管羊的产生过程经过了两性生殖细胞的融合，因而属于有性繁殖，A错误；
B、利用胚胎分割技术可获得多个基因型相同的胚胎，这些胚胎获得属于无性繁殖，B正确；
C、注射促性腺激素有助于供体母牛排出比自然情况下更多的次级卵母细胞，该操作为超数排卵技术，促性腺激素的化学本质是蛋白质，不能饲喂，否则被消化导致无效，C错误；
D、用Ca2+载体法可以激活皮肤细胞与去核卵母细胞融合形成的重构胚，促使其完成细胞分裂和发育的进程，D错误。
故选ACD。
三、简答题（4个大题，共45分）
26. 吃腐烂的水果可能会出现头晕、恶心、呕吐或者更严重的症状，这和微生物产生的毒素有关。某学习小组为了寻找腐烂的苹果中可安全食用的区域，特开展以下实验。用苹果的腐烂部位、距离腐烂部位1 cm和2 cm的组织做实验材料，检测不同区域中微生物的种类和数量。已知苹果的pH在3.5～4之间，下面是操作流程：
（1）步骤②是____，根据题意，本实验选用的接种方法是____。
（2）步骤③中，为了防止出现微生物之间抑制生长的现象，学习小组配制了不同的细菌和真菌的培养基。这些培养基是____（填“选择培养基”或“鉴定培养基”），它们虽然配方不同，但是一般都含有水、碳源、____。
（3）在步骤③中，可根据____对不同菌种进行初步鉴定。每隔24 h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时记录作为实验结果，这是为了防止____。统计腐烂部位的菌落数目发现，青霉菌、曲霉菌等真菌的数量较多，细菌数目很少。细菌数目很少可能的原因是____（答2点）。
（4）分析数据发现，距离腐烂部位越远，微生物的数量越少；距离腐烂部位2 cm的样品中微生物数量极少。有人认为，不能仅凭这个实验就得出距离腐烂部位2 cm的部分可安全食用的结论，还需要补充实验操作____。
【答案】（1） ①. 梯度稀释（等比稀释） ②. 稀释涂布平板法
（2） ①. 选择培养基 ②. 氮源、无机盐
（3） ①. 菌落特征（或者写成菌落的颜色、大小、形状等） ②. 因培养时间不足遗漏菌落数目；细菌适宜在中性或弱碱性的环境中生长，苹果呈酸性，不适合细菌生长 ③. 青霉菌产生的青霉素等抗生素抑制细菌的生长
（4）检测上述区域中微生物产生的毒素含量
【解析】
【分析】在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。样品的稀释度将直接影响平板上的菌落数目，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数为30~300、适于计数的平板，在同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值。
【小问1详解】
常见的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，题图可知，本实验选用的是稀释涂布平板法，步骤②是梯度稀释（等比稀释）。
【小问2详解】
在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。步骤③中，为了防止出现微生物之间抑制生长的现象，学习小组配制了不同的细菌和真菌的培养基。这些培养基是选择培养基，它们虽然配方不同，但是一般都含有水、碳源、氮源、无机盐。
【小问3详解】
不同菌种形成的菌落特征存在差异，在步骤③中，可根据菌落特征（或者写成菌落的颜色、大小、形状等）对不同菌种进行初步鉴定。每隔24 h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时记录作为实验结果，这是为了防止因培养时间不足遗漏菌落数目；细菌适宜在中性或弱碱性的环境中生长，苹果呈酸性，不适合细菌生长。由于青霉菌产生的青霉素等抗生素抑制细菌的生长，故青霉菌、曲霉菌等真菌的数量较多，细菌数目很少。
【小问4详解】
分析数据发现，距离腐烂部位越远，微生物的数量越少；距离腐烂部位2 cm的样品中微生物数量极少。有人认为，不能仅凭这个实验就得出距离腐烂部位2 cm的部分可安全食用的结论，为了安全起见，还需要检测上述区域中微生物产生的毒素含量。
27. I.供体细胞的分化状态和表观遗传修饰模式是影响体细胞核移植胚胎发育的重要因素。为研究供体细胞RNAmA修饰（即RNA某位点的甲基化）水平对猪核移植胚胎发育的影响，研究者进行系列实验。
（1）核移植的受体是____________________细胞，核移植后的重构胚发育至____________________阶段可利用____________________技术转移到代孕母体子宫内以获得子代个体，从早期胚胎中分离获得的具有自我更新和分化潜能的____________________可用于医学研究。
（2）RNAm6A修饰可通过提高mRNA结构稳定性来影响早期胚胎发育。猪骨髓间充质干细胞（甲组）属于多能干细胞，猪胎儿成纤维细胞（乙组）则是处于分化终端的体细胞。研究者比较了两细胞内RNAm6A修饰水平及其作为核供体时重构胚的发育效率，结果如图1、2。结果表明，核供体细胞的分化程度越高，___________________越低。
II.兰花人工种子由人工种皮、原球茎和人工胚乳构成。原球茎是由胚性细胞组成、形态类似球茎的结构，可发育成完整植株，人工胚乳可调控原球茎的休眠，并为原球茎的发育提供营养成分和激素。回答下列问题：
（3）从盆兰花获取茎尖，对其进行____________________处理后接种于培养基，茎尖通过_____________________后生长为原球茎。原球茎在发芽培养基上可很快长出幼叶，然后在生根培养基中形成完整植株。
（4）将原球茎切成小块，转入增殖培养基进行继续培养，可以得到大量原球茎，实现兰花的快速繁殖。在增殖培养基中添加椰子水，原球茎会长得更饱满。不同成熟度椰子的椰子水对原球茎生长的促进效果不同，推测原因是不同成熟度椰子的椰子水中____________________和____________________的含量存在差异。
（5）某实验研究发现，与添加用过滤除菌法处理的椰子水（A组）相比，人工胚乳中添加用湿热灭菌法处理的椰子水（B组）使原球茎的休眠时间变短。研究人员推测B组原球茎休眠时间短的原因是脱落酸被破坏。作出上述推测的依据是：椰子水中有脱落酸；____________________;脱落酸不耐高温。为了验证上述推测，可增加一组实验（C组），C组的处理是：____________________。
【答案】（1） ①. 去核的卵母 ②. 桑葚胚或囊胚 ③. 胚胎移植 ④. 胚胎干细胞
（2）RNA修饰水平和核移植重构胚的发育效率
（3） ①. 消毒 ②. 脱分化
（4） ①. 营养物质 ②. 激素
（5） ①. 脱落酸促进休眠 ②. 人工胚乳中先添加用高压蒸汽灭菌法处理的椰子水后加脱落酸
【解析】
【分析】 植物组织培养：
（1）幼嫩的组织脱分化较为容易，如茎尖、根尖、形成层细胞易脱分化，而植物的茎、叶和成熟的组织则较难。
（2）对外植体要进行消毒处理，而对各种器械要彻底灭菌。
（3）植物组织培养中用到的有机碳源一般为蔗糖，用葡萄糖也可以，但后者的成本高。
（4）诱导愈伤组织再分化形成胚状体或丛芽及生根的过程中，要进行换瓶处理，以改变培养基中的激素配比及浓度。
【小问1详解】
核移植的受体一般是去核的卵母细胞，当胚胎发育到桑葚胚或囊胚时，可以进行胚胎移植。另外，从早期胚胎中分离获得的胚胎干细胞，由于具有自我更新和分化潜能，可用于医学研究。
【小问2详解】
猪骨髓间充质干细胞（甲组）属于多能干细胞，猪胎儿成纤维细胞（乙组）则是处于分化终端的体细胞，前者分化程度比后者低，由图1和图2分析可知，核供体细胞的分化程度越高，RNA修饰水平和核移植重构胚的发育效率越低。
【小问3详解】
进行植物组织培养时，需要进行无菌操作，即对外植体进行消毒，对培养基及其他器械进行灭菌等；将消毒后的外植体接种在培养基上，通过控制培养基中各种激素的比例来控制细胞的分裂分化，先诱导茎尖脱分化形成原球茎，再转移至发芽培养基上诱导其发芽，然后转移至生根培养基上诱导其生根。
【小问4详解】
由于椰子水中含有营养物质和激素，故增殖培养基中添加椰子水，原球茎会长得更饱满，但由于不同成熟度椰子的椰子水中营养物质和激素的含量存在差异，故对原球茎生长的促进效果不同。
【小问5详解】
脱落酸主要由根冠和萎蔫的叶片合成，作用是抑制细胞分裂、促进气孔关闭、促进叶和果实衰老和脱落、维持种子休眠。高压蒸汽灭菌法处理的椰子水（B 组）使原球茎的休眠时间短于过滤除菌法处理的椰子水（A），由于椰子水中有脱落酸、脱落酸促进休眠、 脱落酸不耐高温，可推测B 组原球茎休眠时间短的原因是脱落酸被破坏。可增加一组实验：人工胚乳中先添加用高压蒸汽灭菌法处理的椰子水后加脱落酸，若原球茎的休眠时间比B组长，即可验证推测。
28. 癌症的免疫疗法通过重新激活抗肿瘤的免疫细胞，克服肿瘤的免疫逃逸，在癌症治疗方法中取得越来越突出地位，科研人员在不断研究中发现多种免疫治疗方法的结合是提高治疗效果的途径之一。
（1）某些种类癌细胞表面高表达膜蛋白PSMA和PD-L1,如图1。PD-L1能抑制T细胞的活化，使癌细胞发生免疫逃逸。单克隆抗体最主要的优点在于____________________。临床上可利用PD-1的单克隆抗体进行癌症治疗。将等量的纯化PD-1蛋白分别注射到5只小鼠体内，经过二次免疫后测定小鼠抗PD-1抗体的免疫效果，取其中免疫效果最好的1号小鼠用于后面的融合实验。在融合前三天，对1号小鼠加强免疫一次，目的是____________________。然后取小鼠的脾脏细胞用____________________试剂诱导与骨髓瘤细胞融合，用选择培养基进行筛选得到杂交瘤细胞。
（2）一段时间后，将（1）所得细胞接种到多孔培养板上，进行抗体阳性检测，检测原理如上图。
①在检测时需要将PD-1蛋白固定于周相载体表面制成____________________,并加入多孔板培养槽中的_________________（细胞、上清液），即待测样木。
②加入酶标抗体后一段时间，需要用洗涤剂将未与____________________结合的酶标抗体洗去。
③加入相应酶促反应底物显色后，颜色的深浅可代表____________________。
（3）CD28是T细胞表面受体，T细胞的有效激活依赖于CD28在癌细胞与T细胞结合部位的聚集。因此，科研人员尝试构建既能结合PSMA,还能结合CD28的双特异性抗体PSMAXCD28,诱导T细胞定向杀伤癌细胞，如图2。制备过程为：先将_____________________分别注射到小鼠体内，分离出B淋巴细胞，诱导其与小鼠的骨髓瘤细胞融合，筛选得到两种杂交瘤细胞，再诱导两种细胞融合。成功融合的细胞会表达两种L链和两种H链，由于L链和H链的随机组合会____________________。因此还需进行筛选才能获得所需的双特异性抗体PSMA×CD28。
（4）在肿瘤患者的治疗中，被动免疫治疗是指被动地将具有抗肿瘤活性的免疫制剂或细胞回输给肿瘤患者机体进行治疗，该治疗方案适用于肿瘤晚期患者，除了单克隆抗体治疗外，还可以进行过继性细胞治疗，过继性细胞治疗相关过程如图所示过继性细胞治疗中，从肿瘤患者体内获取的免疫细胞置于适宜环境下培养，培养过程中会出现分裂受阻，其原因主要有____________________（答出2点），培养过程中出现接触抑制现象时，可用____________________酶处理贴壁细胞使之分散成单个细胞进行传代培养。
【答案】（1） ①. 特异性强、灵敏度高、可大量制备 ②. 刺激机体产生更多的浆细胞 ③. PEG
（2） ①. 固相抗原 ②. 上清液 ③. 抗PD-1抗体 ④. 抗PD-1抗体的量
（3） ①. PSMA、CD28 ②. 产生多种抗体
（4） ①. 细胞密度大、有害代谢物积累、培养液中营养物质缺乏 ②. 胰蛋白酶、胶原蛋白
【解析】
【分析】单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。
【小问1详解】
单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高、可大量制备的优点。加强免疫可刺激机体产生更多的浆细胞，产生更多的抗体。可用PEG试剂诱导小鼠的脾脏细胞和骨髓瘤细胞融合，用选择培养基进行筛选得到杂交瘤细胞。
【小问2详解】
①在检测时需要将PD-1蛋白固定于周相载体表面制成固相抗原。单克隆抗体是分泌蛋白，分布在上清液中，所以在固定抗原上加入多孔板培养槽中的上清液，即待测样本。
②加入酶标抗体后一段时间，为了排除干扰，则需要用洗涤剂将未与抗PD-1抗体结合的酶标抗体洗去。
③PD-1蛋白与抗PD-1抗体的结合量越多颜色越深，所以加入相应酶促反应底物显色后，颜色的深浅可代表与抗PD-1抗体的量。
【小问3详解】
抗体具有特异性，所以为了获取既能结合PSMA，还能结合CD28的双特异性抗体PSMAXCD28，则需要先将PSMA、CD28分别注射到小鼠体内，分离出B淋巴细胞，诱导其与小鼠的骨髓瘤细胞融合，筛选得到两种杂交瘤细胞，再诱导两种细胞融合。成功融合的细胞会表达两种L链和两种H链，由于L链和H链的随机组合会产生多种抗体，但所需的双特异性抗体PSMA×CD28是特定的L链和H链结合，因此还需进行筛选才能获得所需的双特异性抗体PSMA×CD28。
【小问4详解】
在动物细胞的培养时，由于细胞密度大、有害代谢物积累、培养液中营养物质缺乏,则培养过程中出现接触抑制现象时，可用胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理贴壁细胞，使之分散成单个细胞进行传代培养。
29. 工程菌是指用基因工程的方法，使外源基因得到高效表达的菌类细胞株系。下图是利用大肠杆菌生产人胰岛素过程中使用的质粒及目的基因的部分结构。
（1）启动子是____的识别和结合部位。图中胰岛素基因以____链作为模板进行转录。构建基因表达载体时一般至少需要两种限制酶，以防止____和____。
（2）为使胰岛素基因能够在大肠杆菌中表达出正确的蛋白质，获取目的基因时通常先____，然后再通过逆转录得到胰岛素基因。
（3）PCR扩增胰岛素基因的前提是____，以用于特异性制备PCR扩增需要的引物。PCR扩增过程中，经过4轮循环后，得到的产物中只含一种引物的DNA分子占比为____。为了使目的基因与载体能正确连接，需要在引物的____端添加限制酶____的识别序列；n次循环后，至少消耗引物____个。
（4）β—半乳糖苷酶可以分解无色的X-gal产生蓝色物质使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。将转化后的大肠杆菌接种到添加了____的培养基上，若出现____（白色/蓝色）菌落，则该菌落即为含有重组质粒的大肠杆菌菌落。
【答案】（1） ①. RNA 聚合酶 ②. A ③. 质粒或目的基因自身环化 ④. 目的基因与质粒反向连接
（2）提取胰岛B细胞中的mRNA
（3） ①. 获得一段已知目的基因的序列 ②. 1/8##12.5% ③. 5' ④. EcRI和XhI ⑤. 2（n+1）-2
（4） ①. X-gal、氨苄青霉素 ②. 白色
【解析】
【分析】基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。（4）目的基因的检测与鉴定。
【小问1详解】
启动子位于DNA上，是RNA聚合酶的识别和结合部位。题图可知，转录的方向为从左到右，且是从RNA的5’→3’，DNA链的-OH端为3’端，故胰岛素基因以A链作为模板进行转录。构建基因表达载体时一般至少需要两种限制酶，以防止质粒或目的基因自身环化及目的基因与质粒反向连接。
【小问2详解】
逆转录是以mRNA为模板，合成DNA的过程；故为使胰岛素基因能够在大肠杆菌中表达出正确的蛋白质，获取目的基因时通常先提取胰岛B细胞中的mRNA，然后再通过逆转录得到胰岛素基因。
【小问3详解】
PCR扩增胰岛素基因的前提是获得一段已知目的基因的序列，以用于特异性制备PCR扩增需要的引物。DNA的复制方式是半保留复制，PCR扩增过程中，经过4轮循环后得到24个DNA，其中只有含有两条母链的两个DNA只含有一种引物，故得到的产物中只含一种引物的DNA分子占比为2/16=1/8。目的基因与质粒连接时，需要将目的基因连接到质粒的启动子和终止子之间，它们之间含有XhI、Mun I、Sal I、Nhe I、EcR I识别序列，但Sal I、Nhe I、在目的基因中也含有识别序列，若用它们切割，会破坏目的基因，若选择Mun I则会破坏质粒上的标记基因，所以为使PCR产物与质粒正确连接，设计引物时可将限制酶EcR I和Xh I的识别序列添加在对应引物的5'端。每合成一条新链会消耗一个引物，n次循环后一共有2（n+1）条链，其中有两条母链不需要消耗引物，故n次循环后，至少消耗引物2(n+1)-2。
【小问4详解】
β-半乳糖苷酶可以分解X-gal产生蓝色物质使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色，将胰岛素基因与质粒连接后，重组质粒的lacZ（β-半乳糖苷酶基因）基因被破坏，氨苄青霉素抗性基因没有被破坏，不能合成β-半乳糖苷酶，不能催化底物（X-gal）水解产生蓝色物质，故呈菌落白色，因此将大肠杆菌接种到添加了氨青霉素和X-gal的培养基上筛选出白色的菌落即为工程菌种。
一、单选题（每个2分，共40分）
1. 从开始制作到泡菜品质最佳这段时间内，泡菜逐渐变酸，乳酸菌与杂菌数目也发生变化，下列有关分析不正确的是（ ）
A. 泡菜制作初期就有乳酸菌的存在
B. 密闭的发酵环境使乳酸菌在种间竞争中占据一定优势
C. 在发酵过程中，乳酸含量逐渐增多，可以抑制其他微生物的生长
D. 发酵过程中，杂菌数目的减少使乳酸菌与杂菌的种间竞争减弱，因此乳酸菌数目一直增多
2. 我国酿酒技术历史悠久，古人在实际生产中积累了很多经验。《齐民要术》记载：将蒸熟的米和酒曲混合前需“浸曲发，如鱼眼汤，净淘米八斗，炊作饭，舒令极冷”。意思是将酒曲浸到活化，冒出鱼眼大小的气泡，把八斗米淘净，蒸熟，摊开冷透。下列说法错误的是（ ）
A. “浸曲发” 过程中酒曲中的微生物代谢加快
B. “鱼眼汤” 现象是微生物呼吸作用产生的CO2释放形成的
C. “净淘米”" 是为消除杂菌对酿酒过程的影响而采取的主要措施
D. “舒令极冷”目的是防止蒸熟的米温度过高导致酒曲中的微生物死亡
3. 培养基是指由不同营养物质组合配制而成的，供微生物、植物细胞或动物细胞生长繁殖的营养基质。下列关于培养基的叙述：错误的是（ ）
A. 微生物在培养前要先对培养基进行灭菌处理再接种
B. 体外培养杂交瘤细胞时，培养基加入血清后需湿热灭菌以确保无菌
C. 配制植物组培的培养基时，用等量葡萄糖代替蔗糖会影响细胞的分裂分化
D. 分离并纯化硝化细菌时，培养基中无需添加碳源，但需添加氮源
4. 养殖池中存在的有毒物质主要是氨及亚硝酸，这两种物质可由硝化细菌吸收利用。在“养殖池底泥中硝化细菌的分离和计数”实验中，下列说法正确的是（ ）
A. 需要配制添加一定浓度氨盐的牛肉膏蛋白胨培养基，以筛选硝化细菌
B. 应对采集底泥使用的工具进行灭菌，全部接种过程均需在酒精灯火焰旁进行
C. 采用平板划线法进行分离和计数时，还需与未接种的空白培养基同时培养
D. 若空白对照组上长出了菌落，需要在实验组数据的基础上减去空白对照组的菌落数
5. 生物指示剂常用于对医疗器械高压蒸汽灭菌的质量监测。将某批次的多支生物指示剂（如图）与医疗器械一并放入压力锅中，待灭菌完成后，挤破安瓿瓶，让含芽孢的菌片（嗜热脂肪芽孢杆菌）与培养液接触，培养并检测结果。下列说法错误的是（ ）
A. 安瓿瓶内培养液的成分应适于嗜热脂肪芽孢杆菌的生长
B. 制备生物指示剂时，安瓿瓶内的培养液需要进行灭菌处理
C. 嗜热脂肪芽孢杆菌的热耐受性大于已知污染菌的热耐受性
D. 当压力锅中的生物指示剂培养结果为阴性时说明医疗器械灭菌合格
6. 利用微生物分解纤维素对废弃物污染的减轻和作物秸秆再利用具有重要意义。某兴趣小组从富含纤维素的土壤中取样，加入选择培养基中进行振荡培养，之后接种于鉴别培养基上进行培养，筛选出能够分解纤维素的微生物。下列叙述错误的是（ ）
A. 选择培养的目的是促进纤维素分解菌生长，抑制其他微生物的生长
B. 振荡培养可以增加溶解氧量，促进微生物对营养物质的充分接触和利用
C. 鉴别培养基上涂布接种时，将1mL菌液滴到培养基表面再用涂布器涂布均匀
D. 加入刚果红的培养基上所出现的有透明圈的菌落，可能是细菌或真菌繁殖而成
7. 图中的已驯化菌群是从某肉制品加工厂污水处理池中初步筛选的可水解油脂并利用的菌群，为进一步筛选高效水解油脂的菌群进行了如图所示的操作。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 培养基中除了油脂提供的成分还需加入氮源和碳源
B. 随着培养基中油脂浓度变大导致菌群朝着高效水解油脂的变异方向发展
C. 在菌种分解油脂的过程中培养基的pH会呈现先下降再上升的变化趋势
D. 若要研究优秀菌的生长规律，可在液体培养的不同时间段采用稀释涂布平板法短时间内测定其数量
8. 厌氧氨氧化菌是一种化能自养型细菌，以二氧化碳作为唯一碳源，利用亚硝酸氧化成硝酸释放的能量来合成有机物。厌氧氨氧化菌进行分解代谢的主要场所是一种被称为厌氧氨氧化体的具膜结构。下列推测合理的是（ ）
A. 该细菌生命活动所需能量的直接来源是其化能合成的有机物
B. 该细菌与化能合成有关的酶主要分布在其厌氧氨氧化体膜上
C. 该细菌厌氧氨氧化体膜上的蛋白质是由其自身核糖体合成的
D. 该细菌中部分与呼吸有关的酶可能是由线粒体基因控制合成
9. 某兴趣小组的同学们按如图所示的过程对某人喝剩的5mL酸奶进行细菌检测，若3个计数的培养基中的菌落数目分别为210个、160个、230个。下列说法错误的是（ ）
A. 为了使1号试管稀释倍数为100倍，锥形瓶中应加入45mL无菌水
B. 除了培养涂布的3个培养皿外，还需要培养未涂布菌落的培养基作为对照
C. 为了计数准确需要用接种环连续划线，并且每次划线前需要灼烧灭菌
D. 已知1号试管稀释倍数为100倍，利用该方法可估算酸奶中细菌含量为2.0×108个·mL-1，此值比实际活菌数少
10. 组氨酸缺陷型沙门氏菌是由野生菌种突变形成的，自身不能合成生命活动必需的组氨酸。将其接种在缺乏组氨酸的平板培养基上进行培养，有极少量菌落形成。2-氨基芴是一种致突变剂，将沾有2-氨基芴的滤纸片放到上述平板培养基中，再接种组氨酸缺陷型沙门氏菌进行培养，会有较多菌落出现。以下叙述正确的有几项（ ）
①在接种前，2-氨基芴和滤纸片需进行灭菌处理
②菌落的形成可能与致突变剂有关
③这种沙门氏菌不宜用于检测环境中的化学致突变剂
④实验所用培养基为固体培养基
⑤经化学诱变剂处理的缺陷型细菌可能变为野生型
⑥缺陷型细菌均是通过基因重组具备了合成组氨酸的能力
A. 3项B. 4项C. 5项D. 6项
11. 菊花的组织培养需要进行严格的无菌操作，下列说法不正确的是（ ）
A. 培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌
B. 幼苗要先移植到消过毒的蛭石或者珍珠岩等环境下生活一段时间
C. 菊花茎段在洗涤灵稀释液浸泡2min，用流水冲洗干净后，在95%酒精中消毒30s，再用流水冲洗后置于10%次氯酸钠溶液中消毒10min，然后用蒸馏水多次冲洗。
D. 接种时用镊子夹取菊花茎段，注意茎段的形态学上下端，再插入培养基
12. 紫花苜蓿（2n=32）是应用较为广泛的豆科牧草，但易造成家畜鼓胀病。百脉根（2n=12）富含单宁，单宁可与植物蛋白质结合，不会引起家畜采食后鼓胀。科研人员利用野生型清水紫花苜蓿和里奥百脉根为材料培育抗鼓胀病苜蓿新品种。研究流程如图（注：IOA可抑制植物细胞呼吸第一阶段，R-6G可阻止线粒体的呼吸作用），下列说法错误的是（ ）
A. 将两种细胞分别置于略高渗透压环境下，有利于去除细胞壁获得两种植物原生质体
B. ②过程需要利用选择培养基筛选出杂种愈伤组织
C. ③过程需要在有光照、植物激素的作用才能化形成完整植株
D. ②过程的细胞中染色体数目最多有88条，③过程产生的再生植株是可育的多倍体
13. 科学家用紫外线照射板蓝根原生质体，使其部分染色体丢失，将处理后的板蓝根原生质体与油菜原生质体融合，培育出了只含一条板蓝根染色体和油菜全部染色体的非对称杂种植株，该过程运用了非对称细胞融合技术。下列说法正确的是（ ）
A. 原生质体由细胞膜、液泡膜及两者之间的细胞质组成
B. 融合原生质体需放在无菌水中培养，以防杂菌污染
C. 非对称细胞融合技术降低了不同物种间基因表达的干扰程度
D. 非对称细胞融合技术提高了植物细胞的全能性，属于细胞工程
14. 研究发现，小鼠四倍体胚胎具有发育缺陷，只能发育成胎盘等胚胎以外的结构。ES细胞能够诱导分化形成所有的细胞类型，但很难分化形成胎盘。四倍体胚胎与ES细胞的嵌合体则会使二者的发育潜能相互补偿，可得到ES小鼠，其中的四倍体胚胎只能发育成胚外组织。下列叙述正确的是（ ）
A. 将2细胞期胚胎用灭活病毒诱导法使2细胞融合，可得到一个含四个染色体组的细胞
B. 嵌合体中的ES具有自我更新能力并只能分化为胎盘等胚外组织
C. 嵌合体胚胎发育至原肠胚时需移植入与之生理状态相同的小鼠子宫内才可以进一步发育
D. 嵌合体发育形成的ES小鼠基因型与供体ES细胞的基因型不同
15. 如图表示研究人员利用胚胎工程技术繁育优质高产奶羊的过程，下列说法错误的是（ ）
A. 通过①~⑤繁育高产奶羊的原理与克隆羊的繁育原理不同
B. 过程⑤能否成功与供体和受体生理状态的一致性密切相关
C. 进行胚胎性别鉴定时，要选择囊胚的内细胞团细胞进行DNA分析
D. 不同生物进行过程⑤的时期不同，但移植的胚胎一般不能晚于囊胚期
16. 为获得导入 R 基因的转基因小鼠，科研人员进行了如下图所示的操作过程。相关叙述错误的是（ ）
A. 过程①需用促性腺激素处理以获得更多的卵母细胞
B. 过程②操作中通常需多个表达载体和多个受精卵
C. 过程③需使用药物抑制雌鼠b对植入胚胎免疫排斥
D. 过程④处理的目的是使多只雌鼠b处于受孕准备状态
17. 下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述，错误的是（ ）
A. 可选用在液体培养基中培养的大肠杆菌作为实验材料
B. 向含DNA的滤液中加入2ml/L的NaCl溶液，有利于去除杂质
C. 将过滤液放入4℃冰箱或加入预冷的酒精都可抑制DNA酶的活性
D. 鉴定DNA时，将二苯胺试剂加入到含DNA的溶液中即可出现蓝色
18. 基因工程是一项过程复杂方法多样的系统工程，“筛选”是基因工程中常用的技术手段。下列说法错误的是（ ）
A. pmi基因编码的蛋白质可使细胞在特殊培养基上生长，可用于目的基因的筛选
B. 构建乳腺生物反应器需先将目的基因与乳腺中特异性表达的基因启动子连接到质粒上
C. 对转基因抗虫棉进行个体水平的鉴定筛选时，需用PCR技术或抗原-抗体杂交的方法
D. 基因工程转化后，利用标记基因可以将含有目的基因的受体细胞筛选出来
19. 下图分别表示某种质粒和含目的基因的DNA片段，利用相关工具酶将二者构建成基因表达载体并导入受体菌。几种可供使用的限制酶识别序列及其切割位点为EcRⅠ：-G↓AATTC-；BamHⅠ：-G↓GATCC-；BclⅠ：-T↓GATCA-；Sau3AⅠ：-↓GATC-；SmaⅠ：-CCC↓GGG-。
注：TetR表示四环素抗性基因；AmpR表示氨苄青霉素抗性基因。
下列关于构建基因表达载体时限制酶选择及其相关叙述，错误的是（ ）
A. 若单独使用SmaI，则目的基因表达的产物可能不相同
B. 若单独使用SmaⅠ，则含有目的基因的受体菌不能在氨苄青霉素培养基中生长
C. 若选择BamHⅠ和SmaI，能在四环素培养基中生长的受体菌一定含有目的基因
D. 若用EcRI和BclⅠ切割质粒，则需用EcRⅠ和Sau3AⅠ切割含目的基因的DNA
20. CRISPR/Cas9系统主要由向导RNA（SgRNA）和Cas9蛋白两部分组成，SgRNA可引导Cas9蛋白到特定基因位点进行切割，其机制如图所示。下列说法正确的是（ ）
A. Cas9蛋白相当于限制酶，切割特定基因位点的脱氧核糖和碱基之间的化学键
B. 向导RNA可以在逆转录酶的催化下合成，合成的原料包括四种核糖核苷酸
C. CRISPR/Cas9技术编辑基因有时会因SgRNA错误结合而出现“脱靶”现象，一般SgRNA序列越短，脱靶率越低
D. 对不同目标DNA进行编辑时，使用Cas9蛋白和不同的sgRNA进行基因编辑
二、不定项选择题（每个3分，选不全1分，错选0分，共15分）
21. 下列关于传统发酵食品生产过程或特点的叙述错误的是（ ）
A. 制作泡菜时将新鲜蔬菜洗净,切成块状或条状,混合均匀,晾干后与蒜瓣、生姜等香辛料混合装满泡菜坛
B. 酿制果酒时,取新鲜葡萄,去除枝梗和腐烂的籽粒,再用清水冲洗１-２次,沥干然后榨汁装入发酵瓶中
C. 制作果醋时,可以先在碗中倒入少量醋,一段时间后用其表面产生的一层薄膜进行接种可以明显缩短制作果醋的时间
D. 传统发酵食品生产利用了天然存在的菌种,品质稳定,风味独特,是我国传统饮食文化的重要组成部分
22. 某种物质X（一种含有C、H、O、N的有机物）难以降解，会对环境造成污染，只有某些细菌能降解X。研究人员按照如图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解X的细菌菌株。实验过程中需要甲、乙两种培养基，甲的组分为无机盐、水和X，乙的组分为无机盐、水、X和Y。下列相关叙述中错误的是（ ）
A. 甲、乙培养基均属于选择培养基，乙培养基组分中的Y物质是琼脂
B. 步骤⑤的筛选过程中，各培养瓶中的X溶液要有一定的浓度梯度
C. 若要筛选高效降解X的细菌菌株，甲、乙培养基中X是唯一的碳源
D. 步骤⑤的筛选过程中，若培养基中的X浓度过高，某菌株对X的降解量可能下降
23. 含硫蛋白质在某些微生物的作用下产生硫化氢导致生活污水发臭。硫化氢可以与硫酸亚铁铵结合形成黑色沉淀。为探究发臭水体中甲、乙菌是否产生硫化氢及两种菌的运动能力，用穿刺接种的方法，分别将两种菌接种在含有硫酸亚铁铵的培养基上进行培养，如图所示。若两种菌繁殖速度相等，下列说法正确的是（ ）
A. 乙菌的运动能力比甲菌强
B. 为不影响菌的运动需选用液体培养基
C. 该实验能比较出两种菌产生硫化氢的量
D. 穿刺接种等接种技术的核心是防止杂菌的污染
24. 双层平板法是一种利用底层和上层均为牛肉膏蛋白胨培养基对噬菌体进行检测的常用方法。具体操作如下：先在无菌培养皿中倒入琼脂含量是2%的培养基凝固成底层平板后，将琼脂含量是1% 的培养基熔化并冷却至45~48℃，然后加入宿主细菌和待测噬菌体稀释悬液的混合液，充分混匀后立即倒入底层平板上形成双层平板。培养一段时间后，在上层平板上看见由于噬菌体侵染周围细菌而使宿主细胞裂解死亡形成的空斑即噬菌斑。通常一个噬菌斑来自原液中的一个噬菌体，根据噬菌斑的数目计算原液中噬菌体的数量，如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A. 牛肉膏蛋白胨培养基可作为选择培养基选择出噬菌体的宿主细胞
B. 加入混合液后，使用灭菌后的涂布器将混合液均匀地涂布在培养基表面
C. 上层培养基中琼脂浓度较低，因此形成的噬菌斑较大，更有利于计数
D. 双层平板法获得的噬菌斑不易发生上下重叠现象
25. 胚胎工程的发展，实现了优良家畜的大量繁殖。下列有关叙述错误的是（ ）
A. 试管牛、试管羊的产生属于无性繁殖
B. 利用胚胎分割技术可获得多个基因型相同的胚胎
C. 饲喂促性腺激素有助于供体母牛排出比自然情况下更多的次级卵母细胞
D. 用Ca2+载体法可以促进皮肤细胞与去核卵母细胞融合
三、简答题（4个大题，共45分）
26. 吃腐烂的水果可能会出现头晕、恶心、呕吐或者更严重的症状，这和微生物产生的毒素有关。某学习小组为了寻找腐烂的苹果中可安全食用的区域，特开展以下实验。用苹果的腐烂部位、距离腐烂部位1 cm和2 cm的组织做实验材料，检测不同区域中微生物的种类和数量。已知苹果的pH在3.5～4之间，下面是操作流程：
（1）步骤②是____，根据题意，本实验选用的接种方法是____。
（2）步骤③中，为了防止出现微生物之间抑制生长的现象，学习小组配制了不同的细菌和真菌的培养基。这些培养基是____（填“选择培养基”或“鉴定培养基”），它们虽然配方不同，但是一般都含有水、碳源、____。
（3）在步骤③中，可根据____对不同菌种进行初步鉴定。每隔24 h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时记录作为实验结果，这是为了防止____。统计腐烂部位的菌落数目发现，青霉菌、曲霉菌等真菌的数量较多，细菌数目很少。细菌数目很少可能的原因是____（答2点）。
（4）分析数据发现，距离腐烂部位越远，微生物的数量越少；距离腐烂部位2 cm的样品中微生物数量极少。有人认为，不能仅凭这个实验就得出距离腐烂部位2 cm的部分可安全食用的结论，还需要补充实验操作____。
27. I.供体细胞的分化状态和表观遗传修饰模式是影响体细胞核移植胚胎发育的重要因素。为研究供体细胞RNAmA修饰（即RNA某位点的甲基化）水平对猪核移植胚胎发育的影响，研究者进行系列实验。
（1）核移植的受体是____________________细胞，核移植后的重构胚发育至____________________阶段可利用____________________技术转移到代孕母体子宫内以获得子代个体，从早期胚胎中分离获得的具有自我更新和分化潜能的____________________可用于医学研究。
（2）RNAm6A修饰可通过提高mRNA结构稳定性来影响早期胚胎发育。猪骨髓间充质干细胞（甲组）属于多能干细胞，猪胎儿成纤维细胞（乙组）则是处于分化终端的体细胞。研究者比较了两细胞内RNAm6A修饰水平及其作为核供体时重构胚的发育效率，结果如图1、2。结果表明，核供体细胞的分化程度越高，___________________越低。
II.兰花人工种子由人工种皮、原球茎和人工胚乳构成。原球茎是由胚性细胞组成、形态类似球茎的结构，可发育成完整植株，人工胚乳可调控原球茎的休眠，并为原球茎的发育提供营养成分和激素。回答下列问题：
（3）从盆兰花获取茎尖，对其进行____________________处理后接种于培养基，茎尖通过_____________________后生长为原球茎。原球茎在发芽培养基上可很快长出幼叶，然后在生根培养基中形成完整植株。
（4）将原球茎切成小块，转入增殖培养基进行继续培养，可以得到大量原球茎，实现兰花的快速繁殖。在增殖培养基中添加椰子水，原球茎会长得更饱满。不同成熟度椰子的椰子水对原球茎生长的促进效果不同，推测原因是不同成熟度椰子的椰子水中____________________和____________________的含量存在差异。
（5）某实验研究发现，与添加用过滤除菌法处理的椰子水（A组）相比，人工胚乳中添加用湿热灭菌法处理的椰子水（B组）使原球茎的休眠时间变短。研究人员推测B组原球茎休眠时间短的原因是脱落酸被破坏。作出上述推测的依据是：椰子水中有脱落酸；____________________;脱落酸不耐高温。为了验证上述推测，可增加一组实验（C组），C组的处理是：____________________。
28. 癌症的免疫疗法通过重新激活抗肿瘤的免疫细胞，克服肿瘤的免疫逃逸，在癌症治疗方法中取得越来越突出地位，科研人员在不断研究中发现多种免疫治疗方法的结合是提高治疗效果的途径之一。
（1）某些种类癌细胞表面高表达膜蛋白PSMA和PD-L1,如图1。PD-L1能抑制T细胞的活化，使癌细胞发生免疫逃逸。单克隆抗体最主要的优点在于____________________。临床上可利用PD-1的单克隆抗体进行癌症治疗。将等量的纯化PD-1蛋白分别注射到5只小鼠体内，经过二次免疫后测定小鼠抗PD-1抗体的免疫效果，取其中免疫效果最好的1号小鼠用于后面的融合实验。在融合前三天，对1号小鼠加强免疫一次，目的是____________________。然后取小鼠的脾脏细胞用____________________试剂诱导与骨髓瘤细胞融合，用选择培养基进行筛选得到杂交瘤细胞。
（2）一段时间后，将（1）所得细胞接种到多孔培养板上，进行抗体阳性检测，检测原理如上图。
①在检测时需要将PD-1蛋白固定于周相载体表面制成____________________,并加入多孔板培养槽中的_________________（细胞、上清液），即待测样木。
②加入酶标抗体后一段时间，需要用洗涤剂将未与____________________结合的酶标抗体洗去。
③加入相应酶促反应底物显色后，颜色的深浅可代表____________________。
（3）CD28是T细胞表面受体，T细胞的有效激活依赖于CD28在癌细胞与T细胞结合部位的聚集。因此，科研人员尝试构建既能结合PSMA,还能结合CD28的双特异性抗体PSMAXCD28,诱导T细胞定向杀伤癌细胞，如图2。制备过程为：先将_____________________分别注射到小鼠体内，分离出B淋巴细胞，诱导其与小鼠的骨髓瘤细胞融合，筛选得到两种杂交瘤细胞，再诱导两种细胞融合。成功融合的细胞会表达两种L链和两种H链，由于L链和H链的随机组合会____________________。因此还需进行筛选才能获得所需的双特异性抗体PSMA×CD28。
（4）在肿瘤患者的治疗中，被动免疫治疗是指被动地将具有抗肿瘤活性的免疫制剂或细胞回输给肿瘤患者机体进行治疗，该治疗方案适用于肿瘤晚期患者，除了单克隆抗体治疗外，还可以进行过继性细胞治疗，过继性细胞治疗相关过程如图所示过继性细胞治疗中，从肿瘤患者体内获取的免疫细胞置于适宜环境下培养，培养过程中会出现分裂受阻，其原因主要有____________________（答出2点），培养过程中出现接触抑制现象时，可用____________________酶处理贴壁细胞使之分散成单个细胞进行传代培养。
29. 工程菌是指用基因工程的方法，使外源基因得到高效表达的菌类细胞株系。下图是利用大肠杆菌生产人胰岛素过程中使用的质粒及目的基因的部分结构。
（1）启动子是____的识别和结合部位。图中胰岛素基因以____链作为模板进行转录。构建基因表达载体时一般至少需要两种限制酶，以防止____和____。
（2）为使胰岛素基因能够在大肠杆菌中表达出正确的蛋白质，获取目的基因时通常先____，然后再通过逆转录得到胰岛素基因。
（3）PCR扩增胰岛素基因的前提是____，以用于特异性制备PCR扩增需要的引物。PCR扩增过程中，经过4轮循环后，得到的产物中只含一种引物的DNA分子占比为____。为了使目的基因与载体能正确连接，需要在引物的____端添加限制酶____的识别序列；n次循环后，至少消耗引物____个。
（4）β—半乳糖苷酶可以分解无色的X-gal产生蓝色物质使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。将转化后的大肠杆菌接种到添加了____的培养基上，若出现____（白色/蓝色）菌落，则该菌落即为含有重组质粒的大肠杆菌菌落。山东省实验中学高二下学期第一次学情检测
生物试题
2024.3
一、单选题（每个2分，共40分）
1. 从开始制作到泡菜品质最佳这段时间内，泡菜逐渐变酸，乳酸菌与杂菌数目也发生变化，下列有关分析不正确的是（ ）
A. 泡菜制作初期就有乳酸菌的存在
B. 密闭的发酵环境使乳酸菌在种间竞争中占据一定优势
C. 在发酵过程中，乳酸含量逐渐增多，可以抑制其他微生物的生长
D. 发酵过程中，杂菌数目的减少使乳酸菌与杂菌的种间竞争减弱，因此乳酸菌数目一直增多
【答案】D
【解析】
【分析】泡菜在腌制过程中，乳酸菌、乳酸和亚硝酸盐的变化：①发酵初期：以不抗酸的大肠杆菌和酵母菌的活动为主，同时还有一部分硝酸盐还原菌活动。该时期利用了氧气，产生了厌氧环境，乳酸菌才开始活动。此时乳酸菌和乳酸的量都比较少，而由于硝酸盐还原菌的活动，亚硝酸盐含量有所增加。②发酵中期：由于乳酸菌产生了大量乳酸，其他细菌活动受到抑制，只有乳酸菌活动增强。此时期乳酸菌数量达到最高峰，乳酸的量继续积累。由于硝酸盐还原菌受抑制，同时形成的亚硝酸盐又被分解，因而亚硝酸盐含量下降。所以在整个发酵过程中，亚硝酸盐的含量表现为先增加后下降的趋势。③发酵后期：由于乳酸的积累，酸度继续增长，乳酸菌活动也受到抑制。乳酸菌数量下降，而硝酸盐还原菌完全被抑制。
【详解】A、泡菜制作初期多种微生物并存，也存在乳酸菌，才可制作到泡菜，A正确；
B、乳酸菌是厌氧细菌，密闭发酵产生了厌氧环境，有些菌是好氧的，于是乳酸菌在种间竞争中占据一定优势，B正确；
C、发酵过程中，乳酸含量不断增多，酸度不断增长，氧气含量不断减少，直至全部消耗，可以抑制其他微生物的生长，C正确；
D、发酵后期，由于乳酸的积累，酸度继续增长，乳酸菌活动也受到抑制，因此乳酸菌数目不会一直增多，D错误。
故选D。
2. 我国的酿酒技术历史悠久，古人在实际生产中积累了很多经验。《齐民要术》记载：将蒸熟的米和酒曲混合前需“浸曲发，如鱼眼汤，净淘米八斗，炊作饭，舒令极冷”。意思是将酒曲浸到活化，冒出鱼眼大小的气泡，把八斗米淘净，蒸熟，摊开冷透。下列说法错误的是（ ）
A. “浸曲发” 过程中酒曲中的微生物代谢加快
B. “鱼眼汤” 现象是微生物呼吸作用产生的CO2释放形成的
C. “净淘米”" 是为消除杂菌对酿酒过程的影响而采取的主要措施
D. “舒令极冷”的目的是防止蒸熟的米温度过高导致酒曲中的微生物死亡
【答案】C
【解析】
【分析】参与酒精的制作的微生物是酵母菌，酵母菌是兼性厌氧型微生物，在有氧条件下进行有氧呼吸将葡萄糖分解为二氧化碳和水，在无氧条件下生成酒精和二氧化碳。
【详解】A、“浸曲发”是将酵母菌活化，可以使微生物代谢加快，A正确；
B、“鱼眼汤”是指酵母菌在呼吸过程中产生CO2，使溶液中出现气泡，B正确；
C、在做酒过程中，为消除杂菌的影响主要靠“炊作饭”，即蒸熟，C错误；
D、“舒令极冷”是将米饭摊开冷透，防止温度过高导致微生物（酵母菌死亡），D正确。
故选C。
【点睛】本题需要考生结合酵母菌的代谢类型进行分析，理解题干中的相关术语是解答本题的关键。
3. 培养基是指由不同营养物质组合配制而成的，供微生物、植物细胞或动物细胞生长繁殖的营养基质。下列关于培养基的叙述：错误的是（ ）
A. 微生物在培养前要先对培养基进行灭菌处理再接种
B. 体外培养杂交瘤细胞时，培养基加入血清后需湿热灭菌以确保无菌
C. 配制植物组培的培养基时，用等量葡萄糖代替蔗糖会影响细胞的分裂分化
D. 分离并纯化硝化细菌时，培养基中无需添加碳源，但需添加氮源
【答案】B
【解析】
【分析】硝化细菌可进行化能合成作用，利用空气中的二氧化碳作为碳源，培养硝化细菌不需要在培养基中加入碳源。
【详解】A、微生物培养前应对培养基先灭菌再接种，以防止杂菌污染，A正确；
B、血清经过湿热灭菌后活性成分失活，血清可进行射线除菌或过滤除菌，B错误；
C、配制植物组织培养的培养基时，配制相同质量分数的培养基，蔗糖形成的渗透压要明显低于葡萄糖，同时，植物细胞吸收蔗糖的速率要明显慢于吸收葡萄糖的速率，因此，若用等量葡萄糖代替蔗糖，易使植物细胞脱水而影响细胞的分裂分化，C正确；
D、硝化细菌属于自养型微生物，能够以CO2为碳源，故培养硝化细菌可以不加有机碳，但需添加氮源，D正确。
故选B。
4. 养殖池中存在的有毒物质主要是氨及亚硝酸，这两种物质可由硝化细菌吸收利用。在“养殖池底泥中硝化细菌的分离和计数”实验中，下列说法正确的是（ ）
A. 需要配制添加一定浓度氨盐的牛肉膏蛋白胨培养基，以筛选硝化细菌
B. 应对采集底泥使用的工具进行灭菌，全部接种过程均需在酒精灯火焰旁进行
C. 采用平板划线法进行分离和计数时，还需与未接种的空白培养基同时培养
D. 若空白对照组上长出了菌落，需要在实验组数据的基础上减去空白对照组的菌落数
【答案】B
【解析】
【分析】1、微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落；②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
2、培养过程应该先将空白培养基培养观察是否长出菌落，若可以长出菌落，则培养基被污染，该培养基不能使用。
【详解】A、要分离硝化细菌，应该用以铵盐为唯一氮源的培养基，培养基中不能加入牛肉膏蛋白胨，A错误；
B、获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌污染，因此，应对采集底泥使用的工具进行灭菌，全部接种过程均需在火焰旁进行，B正确；
C、对微生物进行计数时应该采用的接种方法是稀释涂布平板法，C错误；
D、若空白对照组长出了菌落，说明培养基受到污染，该培养基不能再使用，所得数据也应舍弃，D错误。
故选B。
5. 生物指示剂常用于对医疗器械高压蒸汽灭菌的质量监测。将某批次的多支生物指示剂（如图）与医疗器械一并放入压力锅中，待灭菌完成后，挤破安瓿瓶，让含芽孢的菌片（嗜热脂肪芽孢杆菌）与培养液接触，培养并检测结果。下列说法错误的是（ ）
A. 安瓿瓶内培养液的成分应适于嗜热脂肪芽孢杆菌的生长
B. 制备生物指示剂时，安瓿瓶内的培养液需要进行灭菌处理
C. 嗜热脂肪芽孢杆菌的热耐受性大于已知污染菌的热耐受性
D. 当压力锅中的生物指示剂培养结果为阴性时说明医疗器械灭菌合格
【答案】D
【解析】
【分析】灭菌是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
【详解】A、生物指示剂待灭菌完成后，挤破安瓿瓶，让嗜热脂肪芽孢杆菌与培养液接触，培养并检测结果，则安瓿瓶内培养液的成分应适于嗜热脂肪芽孢杆菌的生长，A正确；
B、制备生物指示剂时，为了防止污染，安瓿瓶内的培养液需要进行灭菌处理，B正确；
C、芽孢是细菌的休眠体，芽孢壁厚，含水量极低，代谢缓慢，抗逆性强，能经受高温紫外线，电离辐射以及多种化学物质灭杀。可以帮助细菌度过不良环境。因此菌片中芽孢的耐热性大于器械上的可能污染菌，C正确；
D、若灭菌与未灭菌的生物指示剂均不出现阳性变化，则说明灭菌则说明灭菌前无有活性芽孢，也就无法说明灭菌效果，D错误。
故选D。
6. 利用微生物分解纤维素对废弃物污染的减轻和作物秸秆再利用具有重要意义。某兴趣小组从富含纤维素的土壤中取样，加入选择培养基中进行振荡培养，之后接种于鉴别培养基上进行培养，筛选出能够分解纤维素的微生物。下列叙述错误的是（ ）
A. 选择培养的目的是促进纤维素分解菌生长，抑制其他微生物的生长
B. 振荡培养可以增加溶解氧量，促进微生物对营养物质的充分接触和利用
C. 鉴别培养基上涂布接种时，将1mL菌液滴到培养基表面再用涂布器涂布均匀
D. 加入刚果红的培养基上所出现的有透明圈的菌落，可能是细菌或真菌繁殖而成
【答案】C
【解析】
【分析】从土壤中分离纤维素分解菌的一般步骤是：土壤取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株；筛选纤维素分解菌需要用以纤维素为唯一碳源的选择培养基，纤维素分解菌可以用刚果红染液进行鉴别，在培养基中加入刚果红染液，在其菌落周围会出现透明圈。
【详解】A、选择培养的原理是人为提供有利于目的菌生长的条件，同时抑制或阻止其他微生物的生长，因此选择培养的目的是促进纤维素分解菌生长，抑制其他微生物的生长，A正确；
B、振荡培养可以增加溶解氧量，促进微生物对营养物质和氧气的充分接触和利用，B正确；
C、鉴别培养基上涂布接种时，将0.1mL菌液滴到培养基表面再用涂布器涂布均匀，C错误；
D、加入刚果红的培养基上所出现的透明圈的菌落是能够分解纤维素的微生物，能够分解纤维素的微生物既有真菌也有细菌，D正确。
故选C。
7. 图中的已驯化菌群是从某肉制品加工厂污水处理池中初步筛选的可水解油脂并利用的菌群，为进一步筛选高效水解油脂的菌群进行了如图所示的操作。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 培养基中除了油脂提供的成分还需加入氮源和碳源
B. 随着培养基中油脂浓度变大导致菌群朝着高效水解油脂的变异方向发展
C. 在菌种分解油脂的过程中培养基的pH会呈现先下降再上升的变化趋势
D. 若要研究优秀菌的生长规律，可在液体培养的不同时间段采用稀释涂布平板法短时间内测定其数量
【答案】C
【解析】
【分析】1、培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质;根据物理性质分为固体培养基和液体培养基，培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐。在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质和氧气的要求。2、平板划线法:将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。
【详解】A、油脂可作为微生物提供碳源，除此之外还需要提供水、无机盐和氮源，A错误;
B、变异是不定向的，自然选择是定向的，油脂浓度起到了选择作用，B错误;
C、在菌种分解油脂的过程中，由于分解油脂会产生脂肪酸，从而导致培养基的pH先下降，随着微生物的利用，脂肪酸被消耗，pH会再上升，C正确；
D、计数需在每天相同时间段完成，稀释涂布平板法不能短时间内测定数量，若需要短时间应选用直接计数法，D错误。
故选C。
8. 厌氧氨氧化菌是一种化能自养型细菌，以二氧化碳作为唯一碳源，利用亚硝酸氧化成硝酸释放的能量来合成有机物。厌氧氨氧化菌进行分解代谢的主要场所是一种被称为厌氧氨氧化体的具膜结构。下列推测合理的是（ ）
A. 该细菌生命活动所需能量的直接来源是其化能合成的有机物
B. 该细菌与化能合成有关的酶主要分布在其厌氧氨氧化体膜上
C. 该细菌厌氧氨氧化体膜上的蛋白质是由其自身核糖体合成的
D. 该细菌中部分与呼吸有关酶可能是由线粒体基因控制合成
【答案】C
【解析】
【分析】厌氧氨氧化菌是一种化能自养型细菌，为原核生物，没有成形的细胞核，含有核糖体，该细菌可以利用化能合成作用释放的能量合成有机物。
【详解】A、细菌生命活动所需能量的直接来源是ATP，A错误；
B、由题可知厌氧氨氧化菌进行分解代谢的主要场所是一种被称为厌氧氨氧化体的具膜结构，并不能说明该细菌与化能合成有关的酶主要分布在其厌氧氨氧化体膜上，B错误；
C、原核生物有核糖体，核糖体是合成蛋白质的场所，该细菌厌氧氨氧化体膜上的蛋白质是由其自身核糖体合成的，C正确；
D、该细菌为原核生物，没有线粒体结构，与呼吸有关的酶可能是由拟核基因编码，D错误。
故选C。
9. 某兴趣小组的同学们按如图所示的过程对某人喝剩的5mL酸奶进行细菌检测，若3个计数的培养基中的菌落数目分别为210个、160个、230个。下列说法错误的是（ ）
A. 为了使1号试管稀释倍数为100倍，锥形瓶中应加入45mL无菌水
B. 除了培养涂布的3个培养皿外，还需要培养未涂布菌落的培养基作为对照
C. 为了计数准确需要用接种环连续划线，并且每次划线前需要灼烧灭菌
D. 已知1号试管稀释倍数为100倍，利用该方法可估算酸奶中细菌含量为2.0×108个·mL-1，此值比实际活菌数少
【答案】C
【解析】
【分析】1、获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染。通常采用各种无菌技术防止杂菌污染，无菌技术主要包括消毒和灭菌。 消毒是指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。灭菌则是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
2、培养纯净物时通常接种单一菌种，常用的接种方法是稀释涂布平板法和平板划线法。
【详解】A、锥形瓶5mL酸奶加入45mL无菌水中，稀释倍数为5/（5+45）=1/10，酸奶被稀释10倍。再从锥形瓶中取1mL菌液至9mL无菌水中，稀释倍数为：1/（1+9）=1/10，又稀释了10倍，共稀释100倍，A正确；
B、在进行微生物培养时，通常要同时培养未涂布菌落的培养基作为对照，以便监测培养过程中是否出现污染，B正确；
C、如果要对培养的微生物进行计数，接种方法要用稀释涂布平板法，不能用平板划线法，C错误；
D、1号试管稀释了100倍，后面的试管再稀释了103倍，共稀释了105倍。3个计数的培养基中的菌落数目分别为210个、160个、230个，平均值为200个，则酸奶中细菌含量为200×105×10=2.0×108·mL-1个，此值比实际活菌数少，D正确。
故选C。
10. 组氨酸缺陷型沙门氏菌是由野生菌种突变形成的，自身不能合成生命活动必需的组氨酸。将其接种在缺乏组氨酸的平板培养基上进行培养，有极少量菌落形成。2-氨基芴是一种致突变剂，将沾有2-氨基芴的滤纸片放到上述平板培养基中，再接种组氨酸缺陷型沙门氏菌进行培养，会有较多菌落出现。以下叙述正确的有几项（ ）
①在接种前，2-氨基芴和滤纸片需进行灭菌处理
②菌落的形成可能与致突变剂有关
③这种沙门氏菌不宜用于检测环境中的化学致突变剂
④实验所用培养基为固体培养基
⑤经化学诱变剂处理的缺陷型细菌可能变为野生型
⑥缺陷型细菌均是通过基因重组具备了合成组氨酸的能力
A. 3项B. 4项C. 5项D. 6项
【答案】C
【解析】
【分析】1、消毒是指使用较为温和的物理、化学 或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。灭菌则是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
2、人们按照微生物对营养物质不同需求，配制出供 其生长繁殖的营养基质—培养基，用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。其中，不含凝固剂（如琼脂）、呈液体状态的培养基为液体培养基，呈固体状态的培养基为固体培养基。在液体培养基中加入琼脂后制成的琼 脂固体培养基，是实验室中最常用的培养基之一。微生物在琼脂固体培养基表面或内部生长，可以形成肉眼可见的菌落。
【详解】①在微生物培养过程中，培养基、实验材料、实验用具等在使用前都要进行灭菌处理，①正确；
②2-氨基芴的作用是诱导沙门氏菌产生基因突变，菌落的形成可能与该诱变剂有关，②正确；
③可以诱发基因突变的还有物理因素，且基因突变具有随机性和不定向性，该种沙门氏菌不宜用来检测环境中的化学致突变剂，③正确；
④由题干信息可知，该培养基为平板培养基，属于固体培养基，④正确；
⑤组氨酸缺陷型沙门氏菌是由野生菌种突变形成的，由于基因突变存在可逆性，经化学诱变剂处理的缺陷型细菌可能变为野生型，⑤正确；
⑥自然条件下，基因重组一般发生在进行有性生殖的真核生物中，缺陷型细菌中很可能发生了基因突变，⑥错误。
综上所述，①②③④⑤正确，⑥错误。
故选C。
11. 菊花的组织培养需要进行严格的无菌操作，下列说法不正确的是（ ）
A. 培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌
B. 幼苗要先移植到消过毒的蛭石或者珍珠岩等环境下生活一段时间
C. 菊花茎段在洗涤灵稀释液浸泡2min，用流水冲洗干净后，在95%酒精中消毒30s，再用流水冲洗后置于10%次氯酸钠溶液中消毒10min，然后用蒸馏水多次冲洗。
D. 接种时用镊子夹取菊花茎段，注意茎段的形态学上下端，再插入培养基
【答案】C
【解析】
【分析】植物组织培养是一种将植物体的部分细胞或组织与母体分离，在适当的条件下加以培养，使它们能够生长、发育、分化与增殖的技术。
【详解】A、高压蒸汽灭菌法常用于培养基及其他器械的灭菌，A正确；
B、幼苗要先移植到消过毒的蛭石或者珍珠岩等环境下生活一段时间，以逐步适应外界的环境，B正确；
C、菊花茎段在洗涤灵稀释液浸泡2min，用流水冲洗干净后，在70%酒精中消毒30s，再用流水冲洗后置于10%次氯酸钠溶液中消毒10min，然后用无菌水多次冲洗，C错误；
D、由于生长素的极性运输，接种时用镊子夹取菊花茎段，注意茎段的形态学上下端，再插入培养基，不能倒插，D正确。
故选C。
12. 紫花苜蓿（2n=32）是应用较为广泛豆科牧草，但易造成家畜鼓胀病。百脉根（2n=12）富含单宁，单宁可与植物蛋白质结合，不会引起家畜采食后鼓胀。科研人员利用野生型清水紫花苜蓿和里奥百脉根为材料培育抗鼓胀病苜蓿新品种。研究流程如图（注：IOA可抑制植物细胞呼吸第一阶段，R-6G可阻止线粒体的呼吸作用），下列说法错误的是（ ）
A. 将两种细胞分别置于略高渗透压环境下，有利于去除细胞壁获得两种植物的原生质体
B. ②过程需要利用选择培养基筛选出杂种愈伤组织
C. ③过程需要在有光照、植物激素的作用才能化形成完整植株
D. ②过程的细胞中染色体数目最多有88条，③过程产生的再生植株是可育的多倍体
【答案】B
【解析】
【分析】植物体细胞杂交技术：将不同种的植物体细胞原生质体在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成完整植物体的技术。
【详解】A、在制备两种植物原生质体时，需用酶解法去除植物细胞的细胞壁，去壁后的原生质体在较高渗透压环境下处于较稳定状态，不易破裂，从而有利于获得两种植物的原生质体，A正确；
B、由题意可知，使用IOA和R-6G处理后，原生质体和同源融合体不能再生愈伤组织，故②过程不需要使用选择培养基筛选杂种愈伤组织，B错误；
C、③过程分别表示再分化，脱分化所需的生长素/细胞分裂素比值为1，再分化时，提高该比值有利于根的分化，降低该比值有利于芽的分化，再分化过程需要光照，C正确；
D、紫花苜蓿染色体数目为32条，百脉染色体数目为12条，融合之后细胞内染色体数目为32+12=44条，②过程表示脱分化，进行的是有丝分裂，此时染色体数目最多有44×2=88条（有丝分裂后期），紫花苜蓿是二倍体，百脉是二倍体，③过程产生的再生植株是可育的多倍体（四倍体），D正确。
故选B。
13. 科学家用紫外线照射板蓝根原生质体，使其部分染色体丢失，将处理后的板蓝根原生质体与油菜原生质体融合，培育出了只含一条板蓝根染色体和油菜全部染色体的非对称杂种植株，该过程运用了非对称细胞融合技术。下列说法正确的是（ ）
A. 原生质体由细胞膜、液泡膜及两者之间的细胞质组成
B. 融合原生质体需放在无菌水中培养，以防杂菌污染
C. 非对称细胞融合技术降低了不同物种间基因表达的干扰程度
D. 非对称细胞融合技术提高了植物细胞的全能性，属于细胞工程
【答案】C
【解析】
【分析】1、植物体细胞杂交是指将不同来源的植物体细胞，在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成新植物体的技术。在进行体细胞杂交之前，必须先利用纤维素酶和果胶酶去除这层细胞壁，获得原生质体；人工诱导原生质体融合的方法基本可以分为两大类—物理法和化学法：物理法包括电融合法、离心法等；化学法包括聚乙二醇（PEG）融合法等。
2、非对称细胞融合技术常指利用某种外界因素（如射线）辐照某一细胞原生质体，选择性地破坏其细胞核，使其染色体片段化并丧失再生能力，再进行与另一原生质体融合，紫外线作用于根细胞原生质体，使染色体片段化，发生了染色体变异，说明非对称细胞融合技术的原理之一是染色体变异（染色体数目变异和染色体结构变异）。
【详解】A、原生质体是用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁后的植物细胞，而由细胞膜、液泡膜及两者之间的细胞质组成的结构称为原生质层，A错误；
B、原生质体放在无菌水中会吸水涨破，应放到等渗的溶液中，保持原生质体的完整性，B错误；
C、非对称融合过程中部分染色体丢失，从而降低了不同物种间基因表达的干扰程度，C正确；
D、非对称融合过程中部分染色体丢失（断裂），所以会降低植物细胞的全能性，D错误。
故选C。
14. 研究发现，小鼠四倍体胚胎具有发育缺陷，只能发育成胎盘等胚胎以外的结构。ES细胞能够诱导分化形成所有的细胞类型，但很难分化形成胎盘。四倍体胚胎与ES细胞的嵌合体则会使二者的发育潜能相互补偿，可得到ES小鼠，其中的四倍体胚胎只能发育成胚外组织。下列叙述正确的是（ ）
A. 将2细胞期胚胎用灭活病毒诱导法使2细胞融合，可得到一个含四个染色体组的细胞
B. 嵌合体中的ES具有自我更新能力并只能分化为胎盘等胚外组织
C. 嵌合体胚胎发育至原肠胚时需移植入与之生理状态相同的小鼠子宫内才可以进一步发育
D. 嵌合体发育形成的ES小鼠基因型与供体ES细胞的基因型不同
【答案】A
【解析】
【分析】胚胎工程是指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术。包括体外受精、胚胎移植、胚胎分割移植、胚胎干细胞培养等技术。胚胎工程的许多技术，实际是在体外条件下，对动物自然受精和早期胚胎发育条件进行的模拟操作。嵌合体-遗传学上用以指不同遗传性状嵌合或混杂表现的个体。
【详解】A、正常小鼠是二倍体，所以两个2细胞期胚胎用灭活病毒等诱导法使细胞融合，可得到一个含四个染色体组的细胞，再经胚胎的早期培养可得到四倍体胚胎，A正确；
B、嵌合体中的ES具有自我更新能力，很难分化形成胎盘，可分化为处胎盘以外的所有细胞类型，B错误；
C、嵌合体胚胎发育至桑椹（桑葚）胚或囊胚期再移植入与之生理状态相同的小鼠子宫内才可以进一步发育，C错误；
D、四倍体胚胎与ES细胞的嵌合体则会使二者的发育潜能相互补偿，可得到ES小鼠，其中的四倍体胚胎只能发育成胚外组织，所以嵌合体发育形成的ES小鼠基因型与供体ES细胞的基因型相同，D错误。
故选A。
15. 如图表示研究人员利用胚胎工程技术繁育优质高产奶羊的过程，下列说法错误的是（ ）
A. 通过①~⑤繁育高产奶羊的原理与克隆羊的繁育原理不同
B. 过程⑤能否成功与供体和受体生理状态的一致性密切相关
C. 进行胚胎性别鉴定时，要选择囊胚的内细胞团细胞进行DNA分析
D. 不同生物进行过程⑤的时期不同，但移植的胚胎一般不能晚于囊胚期
【答案】C
【解析】
【分析】①表示受精作用，②表示胚胎培养，③表示胚胎分割，④表示胚胎培养，⑤表示胚胎移植
【详解】A、图示高产奶羊是由体外受精得到的受精卵发育而来的个体，而克隆羊是由细胞核移植得到的重组细胞发育而来的个体，两者繁育原理不同，A正确；
B、供体和受体生理状态相同是胚胎移植成功的基础，B正确；
C、进行胚胎性别鉴定时，要选择囊胚的滋养层细胞进行DNA分析，C错误；
D、不同生物进行过程⑤的时期不同，但移植的胚胎一般不能晚于囊胚期，一般用桑葚胚或囊胚期进行胚胎移植，D正确。
故选C。
16. 为获得导入 R 基因的转基因小鼠，科研人员进行了如下图所示的操作过程。相关叙述错误的是（ ）
A. 过程①需用促性腺激素处理以获得更多的卵母细胞
B. 过程②操作中通常需多个表达载体和多个受精卵
C. 过程③需使用药物抑制雌鼠b对植入胚胎的免疫排斥
D. 过程④处理的目的是使多只雌鼠b处于受孕准备状态
【答案】C
【解析】
【分析】1、动物发情排卵后，同种动物的供、受体生殖器官的生理变化是相同的。这就为供体的胚胎移入受体提供了相同的生理环境。
2、受体对移入子宫的外来胚胎不发生免疫排斥反应。这为胚胎在受体的存活提供了可能。
【详解】A、为了胚胎移植成功往往需要更多的卵母细胞，所以过程①用促性腺激素对供体进行超数排卵处理，A正确；
B、将目的基因导入受体细胞用多个表达载体和多个受精卵可以提高成功率，所以过程②操作中通常需多个表达载体和多个受精卵，B正确；
C、受体对移入子宫的外来胚胎不发生免疫排斥反应，故过程③不需要抑制雌鼠b对植入胚胎的免疫排斥，C错误；
D、胚胎移植成功需要受体和供体达到相同的生理状态，所以过程④处理的目的是使多只雌鼠b处于受孕准备状态，D正确；
故选C。
17. 下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述，错误的是（ ）
A. 可选用在液体培养基中培养的大肠杆菌作为实验材料
B. 向含DNA的滤液中加入2ml/L的NaCl溶液，有利于去除杂质
C. 将过滤液放入4℃冰箱或加入预冷的酒精都可抑制DNA酶的活性
D. 鉴定DNA时，将二苯胺试剂加入到含DNA的溶液中即可出现蓝色
【答案】D
【解析】
【分析】DNA的粗提取与鉴定的实验原理是：①DNA的溶解性，DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的氯化钠溶液中的溶解度不同，利用这一特点可以选择适当浓度的盐溶液可以将DNA溶解或析出，从而达到分离的目的；②DNA不溶于酒精溶液，细胞中的某些蛋白质可以溶解于酒精，利用这一原理可以将蛋白质和DNA进一步分离。
【详解】A、大肠杆菌是细菌，含有拟核和质粒，DNA含量也较多，适合提取DNA，故可选用在液体培养基中培养的大肠杆菌作为实验材料，A正确；
B、DNA在2ml/L的NaCl溶液中DNA的溶解度较高，搅拌过滤后，DNA存在于滤液中，有利于去除杂质，B正确；
C、酶活性的发挥需要适宜的温度等条件，将过滤液放入4℃冰箱或加入预冷的酒精的目的是抑制DNA酶的活性，避免DNA被水解，C正确；
D、向DNA溶液中加入二苯胺试剂后还需要沸水浴加热才可出现蓝色，D错误。
故选D。
18. 基因工程是一项过程复杂方法多样的系统工程，“筛选”是基因工程中常用的技术手段。下列说法错误的是（ ）
A. pmi基因编码的蛋白质可使细胞在特殊培养基上生长，可用于目的基因的筛选
B. 构建乳腺生物反应器需先将目的基因与乳腺中特异性表达的基因启动子连接到质粒上
C. 对转基因抗虫棉进行个体水平的鉴定筛选时，需用PCR技术或抗原-抗体杂交的方法
D. 基因工程转化后，利用标记基因可以将含有目的基因的受体细胞筛选出来
【答案】C
【解析】
【分析】培育转基因抗虫棉主要需要四个步骤：目的基因的筛选与获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。
【详解】A、pmi基因编码的蛋白质可使细胞在特殊培养基上生长，说明pmi基因是标记基因，可用于目的基因的筛选，A正确；
B、构建乳腺生物反应器需先将目的基因与乳腺中特异性表达的基因启动子连接到质粒上，通过显微注射的方法导入哺乳动物的受精卵中，由这个受精卵发育成的转基因动物在进入泌乳期后，可以通过分泌乳汁来生产所需要的药物，B正确；
C、对转基因抗虫棉进行个体水平的鉴定筛选时，通过采摘抗虫棉的叶片饲喂棉铃虫来确定Bt基因是否赋予了棉花抗虫特性以及抗性的程度，C错误；
D、基因工程转化后，说明重组质粒导入到受体细胞中，可以利用标记基因可以将含有目的基因的受体细胞筛选出来，D正确。
故选C。
19. 下图分别表示某种质粒和含目的基因的DNA片段，利用相关工具酶将二者构建成基因表达载体并导入受体菌。几种可供使用的限制酶识别序列及其切割位点为EcRⅠ：-G↓AATTC-；BamHⅠ：-G↓GATCC-；BclⅠ：-T↓GATCA-；Sau3AⅠ：-↓GATC-；SmaⅠ：-CCC↓GGG-。
注：TetR表示四环素抗性基因；AmpR表示氨苄青霉素抗性基因。
下列关于构建基因表达载体时限制酶的选择及其相关叙述，错误的是（ ）
A. 若单独使用SmaI，则目的基因表达的产物可能不相同
B. 若单独使用SmaⅠ，则含有目的基因的受体菌不能在氨苄青霉素培养基中生长
C. 若选择BamHⅠ和SmaI，能在四环素培养基中生长的受体菌一定含有目的基因
D. 若用EcRI和BclⅠ切割质粒，则需用EcRⅠ和Sau3AⅠ切割含目的基因的DNA
【答案】C
【解析】
【分析】限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂，形成黏性末端或平末端。
【详解】A、用同一种限制酶切割质粒和含目的基因的DNA片段后，目的基因可能会反向连接到质粒上，因此目的基因表达的产物可能不相同，A正确；
B、若单独使用SmaⅠ切割质粒和含目的基因的DNA片段，会破坏质粒上的氨苄青霉素抗性基因，使含有目的基因的受体菌不能在氨苄青霉素培养基中生长，B正确；
C、若选择BamHⅠ和SmaⅠ切割质粒和含目的基因的DNA片段，重组质粒上含有正常的四环素抗性基因：能在四环素培养基中生长的受体菌有可能获得了重组质粒，也有可能获得的是普通质粒，C错误；
D、含目的基因的DNA片段上没有BclⅠ的识别序列，不能使用BclⅠ切割含目的基因的DNA片段，但Sau3AⅠ切割DNA后产生的黏性末端与BclⅠ相同，故若用EcRⅠ和BclⅠ切割质粒，则需用EcRⅠ和Sau3AI切割含目的基因的DNA片段，D正确。
故选C。
20. CRISPR/Cas9系统主要由向导RNA（SgRNA）和Cas9蛋白两部分组成，SgRNA可引导Cas9蛋白到特定基因位点进行切割，其机制如图所示。下列说法正确的是（ ）
A. Cas9蛋白相当于限制酶，切割特定基因位点的脱氧核糖和碱基之间的化学键
B. 向导RNA可以在逆转录酶的催化下合成，合成的原料包括四种核糖核苷酸
C. CRISPR/Cas9技术编辑基因有时会因SgRNA错误结合而出现“脱靶”现象，一般SgRNA序列越短，脱靶率越低
D. 对不同目标DNA进行编辑时，使用Cas9蛋白和不同的sgRNA进行基因编辑
【答案】D
【解析】
【分析】限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。
【详解】A、Cas9蛋白切割特定基因位点，相当于限制酶，作用于脱氧核糖和磷酸之间的磷酸二酯键，A错误；
B、向导RNA是以DNA的一条链为模板通过转录形成的，可以在RNA聚合酶的催化下合成，合成的原料包括四种核糖核苷酸，B错误；
C、CRISPR/Cas9技术编辑基因有时会因SgRNA错误结合而出现“脱靶”现象，SgRNA的序列越短，可识别的DNA上的特定碱基序列越短，越容易发生脱靶现象，即脱靶率越高，C错误；
D、在对不同目标DNA进行编辑时，应使用Cas9蛋白和“不同”的sgRNA结合进而实现对不同基因的编辑，D正确。
故选D。
二、不定项选择题（每个3分，选不全1分，错选0分，共15分）
21. 下列关于传统发酵食品生产过程或特点的叙述错误的是（ ）
A. 制作泡菜时将新鲜蔬菜洗净,切成块状或条状,混合均匀,晾干后与蒜瓣、生姜等香辛料混合装满泡菜坛
B. 酿制果酒时,取新鲜葡萄,去除枝梗和腐烂的籽粒,再用清水冲洗１-２次,沥干然后榨汁装入发酵瓶中
C. 制作果醋时,可以先在碗中倒入少量醋,一段时间后用其表面产生的一层薄膜进行接种可以明显缩短制作果醋的时间
D. 传统发酵食品生产利用了天然存在的菌种,品质稳定,风味独特,是我国传统饮食文化的重要组成部分
【答案】ABD
【解析】
【分析】1、果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。
2、泡菜的制作原理：泡菜的制作离不开乳酸菌。在无氧条件下，乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸。
【详解】A、制作泡菜时将经过预处理的新鲜蔬菜混合均匀，装入泡莱坛内，装至半坛时，放入蒜瓣、生姜及其他香辛料，继续装至八成满，再徐徐注入配制好的盐水，使盐水没过全部菜料，盖好坛盖，A错误；
B、制作果酒时，为避免杂菌污染，挑选新鲜葡萄，先进行冲洗，再除去枝梗，B错误；
C、醋中含有醋酸菌，所以在制作果醋时，可以先在碗中倒入少量醋，一段时间后用其表面产生的一层薄膜（含有醋酸菌）进行接种可以明显缩短制作果醋的时间，C正确；
D、传统的发酵没有进行严格的灭菌，生产的食品安全性较低，品质也不够稳定，D错误。
故选ABD。
22. 某种物质X（一种含有C、H、O、N的有机物）难以降解，会对环境造成污染，只有某些细菌能降解X。研究人员按照如图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解X的细菌菌株。实验过程中需要甲、乙两种培养基，甲的组分为无机盐、水和X，乙的组分为无机盐、水、X和Y。下列相关叙述中错误的是（ ）
A. 甲、乙培养基均属于选择培养基，乙培养基组分中的Y物质是琼脂
B. 步骤⑤的筛选过程中，各培养瓶中的X溶液要有一定的浓度梯度
C. 若要筛选高效降解X的细菌菌株，甲、乙培养基中X是唯一的碳源
D. 步骤⑤的筛选过程中，若培养基中的X浓度过高，某菌株对X的降解量可能下降
【答案】B
【解析】
【分析】在分离和纯化分解X细菌的过程中，通过①过程获得菌悬液，此过程中的淤泥不需要灭菌操作，②过程可以使分解X的细菌大量繁殖（选择培养），③通过稀释涂布获得分解X物质的单菌落，④过程再次对各种单菌落进行筛选，经过⑤多次筛选后获得高效降解X的菌体。
【详解】A、甲、乙培养基均只含有机物X，属于选择培养基，乙培养基组分中除了X外，还加入了Y物质琼脂，从而获得固体培养基，A正确；
B、步骤⑤中自变量是挑取的不同的菌落，各培养瓶中的X溶液的浓度应该是一致的，B错误；
C、若要筛选高效降解X的细菌菌株，需要甲、乙培养基中的X是唯一提供碳源的有机物，C正确；
D、步骤⑤的筛选过程中，若培养基中的X浓度过高，则会导致菌体失水影响菌体的正常生长，因此某菌株对X的降解量可能下降，D正确。
故选B。
23. 含硫蛋白质在某些微生物的作用下产生硫化氢导致生活污水发臭。硫化氢可以与硫酸亚铁铵结合形成黑色沉淀。为探究发臭水体中甲、乙菌是否产生硫化氢及两种菌的运动能力，用穿刺接种的方法，分别将两种菌接种在含有硫酸亚铁铵的培养基上进行培养，如图所示。若两种菌繁殖速度相等，下列说法正确的是（ ）
A. 乙菌的运动能力比甲菌强
B. 为不影响菌的运动需选用液体培养基
C. 该实验能比较出两种菌产生硫化氢的量
D. 穿刺接种等接种技术的核心是防止杂菌的污染
【答案】AD
【解析】
【分析】图中是穿刺接种的方法，根据题干中的信息“硫化氢可以与硫酸亚铁铵结合形成黑色沉淀”，所以根据黑色沉淀的多少，比较两种菌产生硫化氢的能力。
【详解】A、从图中可以看出甲菌在试管中分布范围小于乙菌，说明了乙菌的运动能力比甲菌强，A正确；
B、观察两种菌的运动能力需选用半固体培养基，B错误；
C、根据题意，黑色区域的面积大小反映两种菌运动能力的大小，而不能表示二者产生硫化氢的能力大小，C错误；
D、微生物接种技术的核心是防止杂菌的污染，D正确。
故选AD。
24. 双层平板法是一种利用底层和上层均为牛肉膏蛋白胨培养基对噬菌体进行检测的常用方法。具体操作如下：先在无菌培养皿中倒入琼脂含量是2%的培养基凝固成底层平板后，将琼脂含量是1% 的培养基熔化并冷却至45~48℃，然后加入宿主细菌和待测噬菌体稀释悬液的混合液，充分混匀后立即倒入底层平板上形成双层平板。培养一段时间后，在上层平板上看见由于噬菌体侵染周围细菌而使宿主细胞裂解死亡形成的空斑即噬菌斑。通常一个噬菌斑来自原液中的一个噬菌体，根据噬菌斑的数目计算原液中噬菌体的数量，如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A. 牛肉膏蛋白胨培养基可作为选择培养基选择出噬菌体的宿主细胞
B. 加入混合液后，使用灭菌后的涂布器将混合液均匀地涂布在培养基表面
C. 上层培养基中琼脂浓度较低，因此形成的噬菌斑较大，更有利于计数
D. 双层平板法获得的噬菌斑不易发生上下重叠现象
【答案】AB
【解析】
【分析】双层平板法，先在培养皿中倒入底层固体培养基，凝固后再倒入含有宿主细菌和一定稀释度噬菌体的半固体培养基。培养一段时间后，计算噬菌斑的数量。双层平板法的优点：①加了底层培养基后，可使原来底面不平的玻璃皿的缺陷得到了弥补；②所形成全部噬菌体斑都接近处于同一平面上，因此不仅每一-噬菌斑的大小接近、边缘清晰，而且不致发生上下噬菌斑的重叠现象；③因上层培养基中琼脂较稀，故形成的噬菌斑较大，更有利于计数。
【详解】A、选择培养基就是在牛肉膏蛋白胨培养基的基础上加上一定的限制条件，所以会把那些不能在选择培养基上的细菌淘汰掉，剩下的就是符合条件的，牛肉膏蛋白胨培养基不是选择培养基，A错误；
B、据题意可知，将琼脂含量是1%的培养基融化并冷却至45～48℃，然后加入宿主细菌和待测噬菌体稀释悬液的混合液，充分混匀后立即倒入底层平板上形成双层平板，是培养基和混合液一起倒平板，不是混合液涂布在培养基表面，B错误；
C、双层平板法因上层培养基中琼脂较稀，故形成的噬菌斑较大，更有利于计数，C正确；
D、双层平板法所形成全部噬菌体斑都接近处于同一平面上，因此不仅每一噬菌斑的大小接近、边缘清晰，而且不致发生上下噬菌斑的重叠现象，D正确。
故选AB。
25. 胚胎工程的发展，实现了优良家畜的大量繁殖。下列有关叙述错误的是（ ）
A. 试管牛、试管羊的产生属于无性繁殖
B. 利用胚胎分割技术可获得多个基因型相同的胚胎
C. 饲喂促性腺激素有助于供体母牛排出比自然情况下更多的次级卵母细胞
D. 用Ca2+载体法可以促进皮肤细胞与去核卵母细胞融合
【答案】ACD
【解析】
【分析】胚胎移植的基本程序主要包括：①对供、受体的选择和处理(选择遗传特性和生产性能优秀的供体，有健康的体质和正常繁殖能力的受体。用激素进行同期发情处理，用促性腺激素对供体母牛做超数排卵处理）；②配种或人工授精；③对胚胎的收集、检查、培养或保存（对胚胎进行质量检查，此时的胚胎应发育到桑椹或胚囊胚阶段）；④对胚胎进行移植；⑤移植后的检查。
【详解】A、试管牛、试管羊的产生过程经过了两性生殖细胞的融合，因而属于有性繁殖，A错误；
B、利用胚胎分割技术可获得多个基因型相同的胚胎，这些胚胎获得属于无性繁殖，B正确；
C、注射促性腺激素有助于供体母牛排出比自然情况下更多的次级卵母细胞，该操作为超数排卵技术，促性腺激素的化学本质是蛋白质，不能饲喂，否则被消化导致无效，C错误；
D、用Ca2+载体法可以激活皮肤细胞与去核卵母细胞融合形成的重构胚，促使其完成细胞分裂和发育的进程，D错误。
故选ACD。
三、简答题（4个大题，共45分）
26. 吃腐烂的水果可能会出现头晕、恶心、呕吐或者更严重的症状，这和微生物产生的毒素有关。某学习小组为了寻找腐烂的苹果中可安全食用的区域，特开展以下实验。用苹果的腐烂部位、距离腐烂部位1 cm和2 cm的组织做实验材料，检测不同区域中微生物的种类和数量。已知苹果的pH在3.5～4之间，下面是操作流程：
（1）步骤②是____，根据题意，本实验选用的接种方法是____。
（2）步骤③中，为了防止出现微生物之间抑制生长的现象，学习小组配制了不同的细菌和真菌的培养基。这些培养基是____（填“选择培养基”或“鉴定培养基”），它们虽然配方不同，但是一般都含有水、碳源、____。
（3）在步骤③中，可根据____对不同菌种进行初步鉴定。每隔24 h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时记录作为实验结果，这是为了防止____。统计腐烂部位的菌落数目发现，青霉菌、曲霉菌等真菌的数量较多，细菌数目很少。细菌数目很少可能的原因是____（答2点）。
（4）分析数据发现，距离腐烂部位越远，微生物的数量越少；距离腐烂部位2 cm的样品中微生物数量极少。有人认为，不能仅凭这个实验就得出距离腐烂部位2 cm的部分可安全食用的结论，还需要补充实验操作____。
【答案】（1） ①. 梯度稀释（等比稀释） ②. 稀释涂布平板法
（2） ①. 选择培养基 ②. 氮源、无机盐
（3） ①. 菌落特征（或者写成菌落的颜色、大小、形状等） ②. 因培养时间不足遗漏菌落数目；细菌适宜在中性或弱碱性的环境中生长，苹果呈酸性，不适合细菌生长 ③. 青霉菌产生的青霉素等抗生素抑制细菌的生长
（4）检测上述区域中微生物产生的毒素含量
【解析】
【分析】在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。样品的稀释度将直接影响平板上的菌落数目，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数为30~300、适于计数的平板，在同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值。
【小问1详解】
常见的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，题图可知，本实验选用的是稀释涂布平板法，步骤②是梯度稀释（等比稀释）。
【小问2详解】
在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。步骤③中，为了防止出现微生物之间抑制生长的现象，学习小组配制了不同的细菌和真菌的培养基。这些培养基是选择培养基，它们虽然配方不同，但是一般都含有水、碳源、氮源、无机盐。
【小问3详解】
不同菌种形成的菌落特征存在差异，在步骤③中，可根据菌落特征（或者写成菌落的颜色、大小、形状等）对不同菌种进行初步鉴定。每隔24 h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时记录作为实验结果，这是为了防止因培养时间不足遗漏菌落数目；细菌适宜在中性或弱碱性的环境中生长，苹果呈酸性，不适合细菌生长。由于青霉菌产生的青霉素等抗生素抑制细菌的生长，故青霉菌、曲霉菌等真菌的数量较多，细菌数目很少。
【小问4详解】
分析数据发现，距离腐烂部位越远，微生物的数量越少；距离腐烂部位2 cm的样品中微生物数量极少。有人认为，不能仅凭这个实验就得出距离腐烂部位2 cm的部分可安全食用的结论，为了安全起见，还需要检测上述区域中微生物产生的毒素含量。
27. I.供体细胞的分化状态和表观遗传修饰模式是影响体细胞核移植胚胎发育的重要因素。为研究供体细胞RNAmA修饰（即RNA某位点的甲基化）水平对猪核移植胚胎发育的影响，研究者进行系列实验。
（1）核移植的受体是____________________细胞，核移植后的重构胚发育至____________________阶段可利用____________________技术转移到代孕母体子宫内以获得子代个体，从早期胚胎中分离获得的具有自我更新和分化潜能的____________________可用于医学研究。
（2）RNAm6A修饰可通过提高mRNA结构稳定性来影响早期胚胎发育。猪骨髓间充质干细胞（甲组）属于多能干细胞，猪胎儿成纤维细胞（乙组）则是处于分化终端的体细胞。研究者比较了两细胞内RNAm6A修饰水平及其作为核供体时重构胚的发育效率，结果如图1、2。结果表明，核供体细胞的分化程度越高，___________________越低。
II.兰花人工种子由人工种皮、原球茎和人工胚乳构成。原球茎是由胚性细胞组成、形态类似球茎的结构，可发育成完整植株，人工胚乳可调控原球茎的休眠，并为原球茎的发育提供营养成分和激素。回答下列问题：
（3）从盆兰花获取茎尖，对其进行____________________处理后接种于培养基，茎尖通过_____________________后生长为原球茎。原球茎在发芽培养基上可很快长出幼叶，然后在生根培养基中形成完整植株。
（4）将原球茎切成小块，转入增殖培养基进行继续培养，可以得到大量原球茎，实现兰花的快速繁殖。在增殖培养基中添加椰子水，原球茎会长得更饱满。不同成熟度椰子的椰子水对原球茎生长的促进效果不同，推测原因是不同成熟度椰子的椰子水中____________________和____________________的含量存在差异。
（5）某实验研究发现，与添加用过滤除菌法处理的椰子水（A组）相比，人工胚乳中添加用湿热灭菌法处理的椰子水（B组）使原球茎的休眠时间变短。研究人员推测B组原球茎休眠时间短的原因是脱落酸被破坏。作出上述推测的依据是：椰子水中有脱落酸；____________________;脱落酸不耐高温。为了验证上述推测，可增加一组实验（C组），C组的处理是：____________________。
【答案】（1） ①. 去核的卵母 ②. 桑葚胚或囊胚 ③. 胚胎移植 ④. 胚胎干细胞
（2）RNA修饰水平和核移植重构胚的发育效率
（3） ①. 消毒 ②. 脱分化
（4） ①. 营养物质 ②. 激素
（5） ①. 脱落酸促进休眠 ②. 人工胚乳中先添加用高压蒸汽灭菌法处理的椰子水后加脱落酸
【解析】
【分析】 植物组织培养：
（1）幼嫩的组织脱分化较为容易，如茎尖、根尖、形成层细胞易脱分化，而植物的茎、叶和成熟的组织则较难。
（2）对外植体要进行消毒处理，而对各种器械要彻底灭菌。
（3）植物组织培养中用到的有机碳源一般为蔗糖，用葡萄糖也可以，但后者的成本高。
（4）诱导愈伤组织再分化形成胚状体或丛芽及生根的过程中，要进行换瓶处理，以改变培养基中的激素配比及浓度。
【小问1详解】
核移植的受体一般是去核的卵母细胞，当胚胎发育到桑葚胚或囊胚时，可以进行胚胎移植。另外，从早期胚胎中分离获得的胚胎干细胞，由于具有自我更新和分化潜能，可用于医学研究。
【小问2详解】
猪骨髓间充质干细胞（甲组）属于多能干细胞，猪胎儿成纤维细胞（乙组）则是处于分化终端的体细胞，前者分化程度比后者低，由图1和图2分析可知，核供体细胞的分化程度越高，RNA修饰水平和核移植重构胚的发育效率越低。
【小问3详解】
进行植物组织培养时，需要进行无菌操作，即对外植体进行消毒，对培养基及其他器械进行灭菌等；将消毒后的外植体接种在培养基上，通过控制培养基中各种激素的比例来控制细胞的分裂分化，先诱导茎尖脱分化形成原球茎，再转移至发芽培养基上诱导其发芽，然后转移至生根培养基上诱导其生根。
【小问4详解】
由于椰子水中含有营养物质和激素，故增殖培养基中添加椰子水，原球茎会长得更饱满，但由于不同成熟度椰子的椰子水中营养物质和激素的含量存在差异，故对原球茎生长的促进效果不同。
【小问5详解】
脱落酸主要由根冠和萎蔫的叶片合成，作用是抑制细胞分裂、促进气孔关闭、促进叶和果实衰老和脱落、维持种子休眠。高压蒸汽灭菌法处理的椰子水（B 组）使原球茎的休眠时间短于过滤除菌法处理的椰子水（A），由于椰子水中有脱落酸、脱落酸促进休眠、 脱落酸不耐高温，可推测B 组原球茎休眠时间短的原因是脱落酸被破坏。可增加一组实验：人工胚乳中先添加用高压蒸汽灭菌法处理的椰子水后加脱落酸，若原球茎的休眠时间比B组长，即可验证推测。
28. 癌症的免疫疗法通过重新激活抗肿瘤的免疫细胞，克服肿瘤的免疫逃逸，在癌症治疗方法中取得越来越突出地位，科研人员在不断研究中发现多种免疫治疗方法的结合是提高治疗效果的途径之一。
（1）某些种类癌细胞表面高表达膜蛋白PSMA和PD-L1,如图1。PD-L1能抑制T细胞的活化，使癌细胞发生免疫逃逸。单克隆抗体最主要的优点在于____________________。临床上可利用PD-1的单克隆抗体进行癌症治疗。将等量的纯化PD-1蛋白分别注射到5只小鼠体内，经过二次免疫后测定小鼠抗PD-1抗体的免疫效果，取其中免疫效果最好的1号小鼠用于后面的融合实验。在融合前三天，对1号小鼠加强免疫一次，目的是____________________。然后取小鼠的脾脏细胞用____________________试剂诱导与骨髓瘤细胞融合，用选择培养基进行筛选得到杂交瘤细胞。
（2）一段时间后，将（1）所得细胞接种到多孔培养板上，进行抗体阳性检测，检测原理如上图。
①在检测时需要将PD-1蛋白固定于周相载体表面制成____________________,并加入多孔板培养槽中的_________________（细胞、上清液），即待测样木。
②加入酶标抗体后一段时间，需要用洗涤剂将未与____________________结合的酶标抗体洗去。
③加入相应酶促反应底物显色后，颜色的深浅可代表____________________。
（3）CD28是T细胞表面受体，T细胞的有效激活依赖于CD28在癌细胞与T细胞结合部位的聚集。因此，科研人员尝试构建既能结合PSMA,还能结合CD28的双特异性抗体PSMAXCD28,诱导T细胞定向杀伤癌细胞，如图2。制备过程为：先将_____________________分别注射到小鼠体内，分离出B淋巴细胞，诱导其与小鼠的骨髓瘤细胞融合，筛选得到两种杂交瘤细胞，再诱导两种细胞融合。成功融合的细胞会表达两种L链和两种H链，由于L链和H链的随机组合会____________________。因此还需进行筛选才能获得所需的双特异性抗体PSMA×CD28。
（4）在肿瘤患者的治疗中，被动免疫治疗是指被动地将具有抗肿瘤活性的免疫制剂或细胞回输给肿瘤患者机体进行治疗，该治疗方案适用于肿瘤晚期患者，除了单克隆抗体治疗外，还可以进行过继性细胞治疗，过继性细胞治疗相关过程如图所示过继性细胞治疗中，从肿瘤患者体内获取的免疫细胞置于适宜环境下培养，培养过程中会出现分裂受阻，其原因主要有____________________（答出2点），培养过程中出现接触抑制现象时，可用____________________酶处理贴壁细胞使之分散成单个细胞进行传代培养。
【答案】（1） ①. 特异性强、灵敏度高、可大量制备 ②. 刺激机体产生更多的浆细胞 ③. PEG
（2） ①. 固相抗原 ②. 上清液 ③. 抗PD-1抗体 ④. 抗PD-1抗体的量
（3） ①. PSMA、CD28 ②. 产生多种抗体
（4） ①. 细胞密度大、有害代谢物积累、培养液中营养物质缺乏 ②. 胰蛋白酶、胶原蛋白
【解析】
【分析】单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。
【小问1详解】
单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高、可大量制备的优点。加强免疫可刺激机体产生更多的浆细胞，产生更多的抗体。可用PEG试剂诱导小鼠的脾脏细胞和骨髓瘤细胞融合，用选择培养基进行筛选得到杂交瘤细胞。
【小问2详解】
①在检测时需要将PD-1蛋白固定于周相载体表面制成固相抗原。单克隆抗体是分泌蛋白，分布在上清液中，所以在固定抗原上加入多孔板培养槽中的上清液，即待测样本。
②加入酶标抗体后一段时间，为了排除干扰，则需要用洗涤剂将未与抗PD-1抗体结合的酶标抗体洗去。
③PD-1蛋白与抗PD-1抗体的结合量越多颜色越深，所以加入相应酶促反应底物显色后，颜色的深浅可代表与抗PD-1抗体的量。
【小问3详解】
抗体具有特异性，所以为了获取既能结合PSMA，还能结合CD28的双特异性抗体PSMAXCD28，则需要先将PSMA、CD28分别注射到小鼠体内，分离出B淋巴细胞，诱导其与小鼠的骨髓瘤细胞融合，筛选得到两种杂交瘤细胞，再诱导两种细胞融合。成功融合的细胞会表达两种L链和两种H链，由于L链和H链的随机组合会产生多种抗体，但所需的双特异性抗体PSMA×CD28是特定的L链和H链结合，因此还需进行筛选才能获得所需的双特异性抗体PSMA×CD28。
【小问4详解】
在动物细胞的培养时，由于细胞密度大、有害代谢物积累、培养液中营养物质缺乏,则培养过程中出现接触抑制现象时，可用胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理贴壁细胞，使之分散成单个细胞进行传代培养。
29. 工程菌是指用基因工程的方法，使外源基因得到高效表达的菌类细胞株系。下图是利用大肠杆菌生产人胰岛素过程中使用的质粒及目的基因的部分结构。
（1）启动子是____的识别和结合部位。图中胰岛素基因以____链作为模板进行转录。构建基因表达载体时一般至少需要两种限制酶，以防止____和____。
（2）为使胰岛素基因能够在大肠杆菌中表达出正确的蛋白质，获取目的基因时通常先____，然后再通过逆转录得到胰岛素基因。
（3）PCR扩增胰岛素基因的前提是____，以用于特异性制备PCR扩增需要的引物。PCR扩增过程中，经过4轮循环后，得到的产物中只含一种引物的DNA分子占比为____。为了使目的基因与载体能正确连接，需要在引物的____端添加限制酶____的识别序列；n次循环后，至少消耗引物____个。
（4）β—半乳糖苷酶可以分解无色的X-gal产生蓝色物质使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。将转化后的大肠杆菌接种到添加了____的培养基上，若出现____（白色/蓝色）菌落，则该菌落即为含有重组质粒的大肠杆菌菌落。
【答案】（1） ①. RNA 聚合酶 ②. A ③. 质粒或目的基因自身环化 ④. 目的基因与质粒反向连接
（2）提取胰岛B细胞中的mRNA
（3） ①. 获得一段已知目的基因的序列 ②. 1/8##12.5% ③. 5' ④. EcRI和XhI ⑤. 2（n+1）-2
（4） ①. X-gal、氨苄青霉素 ②. 白色
【解析】
【分析】基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。（4）目的基因的检测与鉴定。
【小问1详解】
启动子位于DNA上，是RNA聚合酶的识别和结合部位。题图可知，转录的方向为从左到右，且是从RNA的5’→3’，DNA链的-OH端为3’端，故胰岛素基因以A链作为模板进行转录。构建基因表达载体时一般至少需要两种限制酶，以防止质粒或目的基因自身环化及目的基因与质粒反向连接。
【小问2详解】
逆转录是以mRNA为模板，合成DNA的过程；故为使胰岛素基因能够在大肠杆菌中表达出正确的蛋白质，获取目的基因时通常先提取胰岛B细胞中的mRNA，然后再通过逆转录得到胰岛素基因。
【小问3详解】
PCR扩增胰岛素基因的前提是获得一段已知目的基因的序列，以用于特异性制备PCR扩增需要的引物。DNA的复制方式是半保留复制，PCR扩增过程中，经过4轮循环后得到24个DNA，其中只有含有两条母链的两个DNA只含有一种引物，故得到的产物中只含一种引物的DNA分子占比为2/16=1/8。目的基因与质粒连接时，需要将目的基因连接到质粒的启动子和终止子之间，它们之间含有XhI、Mun I、Sal I、Nhe I、EcR I识别序列，但Sal I、Nhe I、在目的基因中也含有识别序列，若用它们切割，会破坏目的基因，若选择Mun I则会破坏质粒上的标记基因，所以为使PCR产物与质粒正确连接，设计引物时可将限制酶EcR I和Xh I的识别序列添加在对应引物的5'端。每合成一条新链会消耗一个引物，n次循环后一共有2（n+1）条链，其中有两条母链不需要消耗引物，故n次循环后，至少消耗引物2(n+1)-2。
【小问4详解】
β-半乳糖苷酶可以分解X-gal产生蓝色物质使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色，将胰岛素基因与质粒连接后，重组质粒的lacZ（β-半乳糖苷酶基因）基因被破坏，氨苄青霉素抗性基因没有被破坏，不能合成β-半乳糖苷酶，不能催化底物（X-gal）水解产生蓝色物质，故呈菌落白色，因此将大肠杆菌接种到添加了氨青霉素和X-gal的培养基上筛选出白色的菌落即为工程菌种。
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