2026届高三生物二轮专题复习课件第1部分专题9生物技术与工程专题练兵检验复习成果（含答案）

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专题九　生物技术与工程3
专题练兵　检验复习成果
基础达标测试一、选择题1．(2025·邯郸模拟)下列关于腐乳制作原理的叙述，不正确的是(　　)A．腐乳制作实质就是利用发酵技术，将大分子有机物分解为小分子有机物的过程B．腐乳制作中，起作用的微生物多为异养型真菌C．传统发酵利用的是天然存在的菌种，所生产食品安全性更高D．家庭自制腐乳时，一般不需单独接种菌种
【答案】　C【解析】　传统发酵利用的是天然存在的菌种，没有经过严格的灭菌，所生产食品安全性较低，C错误。
2．(2025·广州模拟)关于发酵及发酵工程的叙述，正确的是(　　)A．进行果酒或泡菜发酵时，发酵装置均要留出1/3空间，防止发酵菌种无氧呼吸产生CO2引起发酵液溢出B．传统发酵利用的菌种是天然的混合菌种，发酵工程利用的则是经基因工程或诱变育种后选育的单一菌种C．利用发酵工程生产啤酒时，需对培养基和发酵设备进行灭菌，且发酵过程要严格检测和控制发酵条件D．发酵工程的产品主要包括微生物的代谢物，不包括酶及菌体本身
【答案】　C【解析】　制作泡菜是乳酸菌发酵不产生二氧化碳，A错误；传统发酵技术所利用的菌种是原料自带菌株，多是混合菌种发酵，发酵工程选育的性状优良的菌种可以从自然界中筛选出来，也可以通过诱变育种或基因工程育种获得，一般为单一菌种，B错误；利用发酵工程生产啤酒时，为避免杂菌污染，发酵的设备和培养基都需经过严格的灭菌，为保证发酵过程的顺利正常进行，要严格控制温度、pH、溶解氧等发酵条件，C正确；发酵工程的产品主要包括微生物的代谢物、酶及菌体本身，产品不同，分离的方法也不同，D错误。故选C。
3．(2025·漯河模拟)采用干热灭菌、灼烧灭菌、高压蒸汽灭菌、紫外线照射等几种方法，可分别杀死哪些部位的杂菌(　　)A．接种环、吸管、培养基、接种室B．吸管、接种环、培养基、接种箱C．培养基、吸管、接种环、接种箱D．培养皿、吸管、培养基、双手【答案】　B
【解析】　干热灭菌是将灭菌物品放入密闭容器如干热灭菌箱，在160～170 ℃的热空气中维持1～2 h可以达到灭菌的目的。适用于耐高温和需要保持干燥的物品，如玻璃器皿(如吸管、培养皿等)、金属用具等；灼烧灭菌是利用酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，如接种针、接种环等；高压蒸汽灭菌用高压蒸汽灭菌锅，一般在压力为100 kPa、温度为121 ℃的条件下，维持15～30 min，主要用于培养基灭菌；紫外线照射适用于物体表面消毒和空气消毒，如接种室、接种箱、超净工作台等，在使用前用紫外线照射30 min。
4．(2025·临沂模拟)在离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织的过程中，下列哪一项条件是不需要的(　　)A．消毒、灭菌　　　　　　B．适宜的温度C．充足的光照 D．适宜的养料和激素【答案】　C【解析】　形成愈伤组织需要在消毒、灭菌条件下进行，因为只有在消毒、灭菌条件下，才能保证培养出的组织、细胞避免感染，否则培养基内将长出许多微生物，与离体细胞争夺营养与生存空间，使其不能形成愈伤组织。由于此阶段形成的是愈伤组织，并没有形成具有根、茎、叶的植物体，因此不需要光照。
5．(2025·廊坊模拟)为培育富含β－胡萝卜素的“黄金大米”，科研人员提出了利用植物体细胞杂交技术，将玉米细胞和水稻细胞融合为杂种细胞，其方案如下图所示。下列叙述错误的是(　　)A．步骤①需要使用纤维素酶和果胶酶处理以获得原生质体B．通过步骤②处理后得到的两两融合原生质体类型可能有3种C．细胞再生细胞壁后转移到悬浮液中培养获得愈伤组织D．诱导愈伤组织一般不需要光照，而幼苗的培育过程需要光照
【答案】　C【解析】　步骤①是获得植物细胞的原生质体，需要用纤维素酶和果胶酶将细胞壁分解，A正确；步骤②中常用PEG诱导原生质体融合，若只考虑两两融合的情况，则步骤②处理后得到的融合原生质体类型可能有3种，B正确；细胞再生细胞壁后转移到固体培养基中培养获得愈伤组织，C错误；诱导愈伤组织一般不需要光照，而幼苗的培育过程需要光照，因为叶绿素的合成需要光照，D正确。
6．(2025·襄阳模拟)研究发现，经水浴处理后再通过组织培养获得的草莓幼苗脱毒效果更好。下列叙述错误的是(　　)A．病毒在植物体内的分布是不均匀的B．40 ℃水浴可能有利于延缓病毒增殖扩散速度C．剥取的茎尖需要进行消毒处理D．脱毒苗具有病毒抗性，不会再感染病毒【答案】　D
【解析】　病毒在植物体内的分布是不均匀的，很少在茎尖分布，A正确；40 ℃水浴可能不利于病毒繁殖，有利于延缓病毒增殖扩散速度，B正确；剥取的茎尖需要进行消毒处理，以免培养过程中被污染，C正确；脱毒苗不具有病毒抗性，仍会感染病毒，D错误。
7．(2025·北京卷)动物细胞培养基一般呈淡红色。某次实验时，调控pH的CO2耗尽，培养基转为黄色。由此推断使培养基呈淡红色的是(　　)A．必需氨基酸 B．抗生素C．酸碱指示剂 D．血清【答案】　C【解析】　必需氨基酸是细胞生长的营养成分，不参与指示pH变化，A错误；抗生素用于抑制微生物污染，与培养基颜色无关，B错误；酸碱指示剂(如酚红)在培养基中用于显示pH变化，中性/弱碱性时呈淡红色，酸性时变黄，C正确；血清提供生长因子，不直接导致颜色变化，D错误。
8．(2025·广州模拟)科研人员将人体细胞的细胞核植入兔的去核卵母细胞中，融合形成杂种细胞后，培养至囊胚期，从中分离出的胚胎干细胞能长期增殖并保持不分化的状态。下列叙述错误的是(　　)A．进行上述操作通常选择MⅡ期的卵母细胞并去掉其核膜包被的细胞核B．可通过电融合法形成杂种细胞，再用电刺激、乙醇处理等方法激活使细胞分裂C．从囊胚的内细胞团中分离出的胚胎干细胞比原肠胚细胞全能性高D．体外培养胚胎干细胞需加入血清等天然成分，并需要提供无菌、无毒的条件
【答案】　A【解析】　进行动物体细胞核移植时，通常选择MII期的卵母细胞并去掉其纺锤体—染色体复合物，A错误；可通过电融合法使移植的供体细胞与卵母细胞融合形成杂种细胞，再用物理(电刺激)或化学方法(乙醇处理)激活使细胞分裂，B正确；从囊胚的内细胞团中分离出的胚胎干细胞比原肠胚细胞全能性高，C正确；体外培养胚胎干细胞需加入血清等天然成分，以保证细胞的正常生长，此外需要无菌、无毒的条件，D正确。故选A。
9．(2025·淄博模拟)下图表示牛胚胎移植的流程，其中①～④表示相应的操作过程。下列相关叙述错误的是(　　)
A．过程①注射相关激素，使供、受体同期发情B．过程②注射促性腺激素，以达到超数排卵的目的C．过程③中为获得早期胚胎只能进行人工授精D．过程④的主要目的是选择适合移植的胚胎【答案】　C
【解析】　图示为牛胚胎移植的流程，其中过程①表示同期发情处理；过程②表示超数排卵；过程③表示发情配种或人工授精；过程④表示胚胎的收集、检查、培养。图中过程①表示注射相关激素，使供、受体同期发情，A正确；过程②是注射促性腺激素，以达到超数排卵的目的，B正确；过程③主要涉及体内受精，可以进行发情配种或人工授精，C错误；过程④的主要目的是选择适合移植的胚胎，D正确。
10．(2025·佛山模拟)第三代试管婴儿技术(PGD/PGS)是对早期胚胎细胞进行基因诊断和染色体检测后再进行胚胎移植，流程如图所示。图中检测包括PGD、PGS(PGD是指胚胎植入前的基因诊断，PGS是指胚胎植入前的染色体数目和结构检测)。下列叙述正确的是(　　)
A．采集的卵子需培养至MⅡ期才能与获能的精子进行受精B．PGD和PGS技术可分别用于筛选唐氏综合征和红绿色盲C．进行胚胎移植前需要对夫妻双方进行免疫检查D．“理想胚胎”需培养至原肠胚期才能植入子宫【答案】　A
【解析】　体外受精时，需要将所采集到的卵母细胞在体外培养至MⅡ期，才可以与获能的精子完成受精作用，A正确；PGD是指胚胎植入前的基因诊断，PGD可用于筛选红绿色盲；PGS是指胚胎植入前的染色体数目和结构检测，PGS可用于筛选唐氏综合征，B错误；受体子宫对外来胚胎几乎不发生免疫反应，因此进行胚胎移植前不需要对夫妻双方进行免疫检查，C错误；“理想胚胎”需培养至桑葚胚或囊胚才能植入子宫，D错误。
10．(多选)(2025·佛山模拟)如图所示，科研人员利用诱变方式选育可高产β－胡萝卜素的三孢布拉霉负菌。未突变菌不能在含有β－紫罗酮的培养基上生长。随β－胡萝卜素含量增加，菌体颜色从黄色加深至橙红色。图甲为选育菌种及获得β－胡萝卜素的流程。下列说法正确的是(　　)
A．要得到图乙所示的菌落，可用稀释涂布平板法进行②过程，然后培养B．经①过程紫外线照射的三孢布拉霉负菌有的不能在含β－紫罗酮培养基上生长C．进行③过程时，应选择较小的橙红色菌落中的菌株继续接种培养D．能在添加β－紫罗酮的乙上长成菌落的细菌，其遗传物质不一定发生改变【答案】　AB
【解析】　图乙中的菌落均匀分布于平板，说明接种方法是稀释涂布平板法，A正确；①过程紫外线照射的作用是利用物理因素诱导发生基因突变，由于突变具有不定向性，因此被照射的三孢布拉霉负菌不可能都能在含β－紫罗酮的培养基上生长，B正确；橙红色的菌体为高产菌，进行③过程时，应选择较大的橙红色菌落中的菌株继续接种培养，C错误；能在添加了β－紫罗酮的乙上长成菌落的细菌是经过紫外线照射后的高产菌，其遗传物质都发生了改变，D错误。
11．(2024·广安模拟)某一质粒载体如图甲所示，Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因。有人将此质粒载体用BamHⅠ酶切后，与用BamHⅠ酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化后，得到多种大肠杆菌，并利用培养基乙和丙筛选出导入重组质粒的大肠杆菌。下列叙述错误的是(　　)
A．图甲所示的质粒中还应含有复制原点以便在受体细胞中复制B．将经处理后的大肠杆菌菌液接种至培养基乙使用的是稀释涂布平板法C．配制培养基乙时应加入氨苄青霉素D．培养基丙中生长的菌落即为导入重组质粒的大肠杆菌【答案】　D
【解析】　质粒能够在受体细胞中复制应含有复制原点，A正确；据题图分析可知，培养基乙上菌落分布分散，是用稀释涂布平板法接种的，B正确；配制培养基乙时应加入氨苄青霉素，以筛选出含有质粒载体的大肠杆菌，C正确；培养基乙中生长的菌落为转化质粒载体或者含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌；培养基丙中生长的菌落为导入质粒载体的大肠杆菌，故不能在培养基丙中生长，但能在培养基乙中生长的菌落即为导入重组质粒的大肠杆菌，D错误。
12．(2025·锦州模拟)草甘膦是一种可以杀灭多种植物(包括农作物)的除草剂。其杀灭植物的原理是能够破坏植物叶绿体中的TIFPS合成酶。通过转基因的方法，让农作物产生更多的TIFPS合成酶，就能抵抗草甘膦，从而让农作物不被草甘膦杀死。下列有关抗草甘膦转基因大豆的分析错误的是(　　)A．可通过喷洒草甘膦来检验转基因大豆是否培育成功B．可以用质粒将TIFPS合成酶基因送入受体细胞C．可以用大豆的受精卵或体细胞作为受体细胞D．抗草甘膦转基因大豆食品都是不安全的
【答案】　D【解析】　从个体水平上鉴定转基因大豆是否培育成功时，可通过喷洒草甘膦后观察转基因大豆的存活情况来检测，A正确；将外源基因送入受体细胞需要载体，目前常用的载体有质粒、噬菌体和动植物病毒等，B正确；可以用大豆的受精卵作为受体细胞，也可以用大豆的体细胞作为受体细胞，再采用植物组织培养技术将受体细胞培育成转基因植株，C正确；转基因食品上市前要通过严格的安全评价和审批程序，不能认为抗草甘膦转基因大豆食品都是不安全的，D错误。
12．(多选)(2025·山东卷)酿造某大曲白酒的过程中，微生物的主要来源有大曲和窖泥。大曲主要提供白酒酿造过程中糖化所需的微生物，制曲过程需经堆积培养，培养时温度可达60 ℃左右；将大曲和酿酒原料混合，初步发酵后放入窖池；窖池发酵是白酒酿造过程中微生物发酵的最后阶段。下列说法正确的是(　　)A．堆积培养过程中的高温有利于筛选酿酒酵母B．大曲中存在能分泌淀粉酶的微生物C．窖池发酵过程中，酵母菌以无氧呼吸为主D．窖池密封不严使酒变酸是因为乳酸含量增加
【答案】　BC【解析】　酵母菌最适宜生长繁殖的温度范围是18～30 ℃，堆积培养过程中温度可以达到60 ℃左右，高温不利于筛选酿酒酵母，A错误；大曲主要提供白酒酿造过程中糖化所需的微生物，糖化是将淀粉水解形成糖浆的过程，故大曲中应存在能分泌淀粉酶的微生物，B正确；窖池发酵开始会有氧气进行有氧呼吸，但后期进行无氧呼吸产生酒精，C正确；窖池密封不严使酒变酸是因为乙醇被氧化为醋酸，D错误。
二、非选择题13．(2023·全国乙卷)某研究小组设计了一个利用作物秸秆生产燃料乙醇的小型实验。其主要步骤是：先将粉碎的作物秸秆堆放在底部有小孔的托盘中，喷水浸润、接种菌T，培养一段时间后，再用清水淋洗秸秆堆(清水淋洗时菌T不会流失)，在装有淋洗液的瓶中接种酵母菌，进行乙醇发酵(酒精发酵)。实验流程如图所示。
回答下列问题：(1)在粉碎的秸秆中接种菌T，培养一段时间后发现菌T能够将秸秆中的纤维素大量分解，其原因是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(2)采用液体培养基培养酵母菌，可以用淋洗液为原料制备培养基，培养基中还需要加入氮源等营养成分，氮源的主要作用是__________________________________________________________(答出1点即可)。
(3)将酵母菌接种到灭菌后的培养基中，拧紧瓶盖，置于适宜温度下培养、发酵。拧紧瓶盖的主要目的是____________________。但是在酵母菌发酵过程中，还需适时拧松瓶盖，原因是____________________。发酵液中的乙醇可用____________________溶液检测。(4)本实验收集的淋洗液中的__________可以作为酵母菌生产乙醇的原料。与以粮食为原料发酵生产乙醇相比，本实验中乙醇生产方式的优点是_______________________________________________________________________________________________。
【答案】　(1)菌T能够分泌纤维素酶(2)为合成微生物细胞结构提供原料(3)制造无氧环境　排出二氧化碳　酸性的重铬酸钾(4)葡萄糖　节约粮食、废物利用、清洁环保、不污染环境、生产成本低、原料来源广
【解析】　(1)菌T能够分泌纤维素酶，纤维素酶能将纤维素最终分解为葡萄糖，因此在粉碎的秸秆中接种菌T，培养一段时间后发现菌T能够将秸秆中的纤维素大量分解。(2)培养基的主要成分：水、碳源、氮源、无机盐，其中氮源主要为合成微生物的细胞结构提供原料。(3)果酒的制作原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精，将酵母菌接种到灭菌后的培养基中进行酒精发酵，此时拧紧瓶盖的主要目的是制造无氧环境。酵母菌进行无氧呼吸产生酒精和二氧化碳，在发酵过程中密闭，所以需要根据发酵进程适时拧松瓶盖放出二氧化碳。酒精可用酸性重铬酸钾溶液来检测，该物质与酒精反应呈现灰绿色。(4)与以粮食为原料发酵生产乙醇相比，利用作物秸秆为原料生产乙醇具有节约粮食、废物利用、清洁环保、不污染环境、生产成本低、原料来源广等优点。
14．(2025·日照模拟)下图表示克隆短尾猴的流程。我国科学家通过调控组蛋白的甲基化和乙酰化修饰，调节重构胚相关基因的表达，解决了体细胞克隆猴胚胎的发育率和妊娠率低这一技术难点。回答下列问题：
(1)采集的卵母细胞要在体外培养到________期，普遍使用____________法去核。(2)除病毒诱导外，还可以采用________法诱导成纤维细胞与去核卵母细胞融合。(3)图中的化学方法包括用曲古抑菌素A处理和注入Kdm4d的mRNA，结果极大地提高了胚胎的发育率和妊娠率。已知曲古抑菌素A是组蛋白去乙酰化酶抑制剂，Kdm4d是去甲基化酶，能去除组蛋白甲基化位点H3K9me3中的甲基。据此分析，图中的化学方法能提高胚胎发育率和妊娠率的机制分别是_________________________________________________________________________________________________。
(4)胚胎移植前，需要对代孕母猴进行__________处理，为即将移入的胚胎提供合适的生理环境。克隆猴的成功培育，说明重构胚具有_________________的能力；克隆小猴的性别与图中________的相同。【答案】　(1)MⅡ　显微操作(2)电融合(3)曲古抑菌素A通过提高组蛋白的乙酰化水平，调节重构胚相关基因的表达，Kdm4d的mRNA表达Kdm4d，降低组蛋白的甲基化水平，调节重构胚相关基因的表达，进而提高胚胎发育率和妊娠率(4)同期发情　发育成完整个体　胎儿猴
【解析】　(1)从母猴卵巢采集的卵母细胞需在体外培养至MⅡ期再进行去核操作，目前动物细胞核移植技术普遍使用的去核方法是显微操作法。(2)诱导成纤维细胞与去核卵母细胞融合的方法有病毒诱导和电融合法等。(3)分析题意，曲古抑菌素A是组蛋白去乙酰化酶抑制剂，Kdm4d是去甲基化酶，能去除组蛋白甲基化位点H3K9me3中的甲基，结合题图可知，图中的化学方法能提高胚胎发育率和妊娠率的机制分别是：曲古抑菌素A通过提高组蛋白的乙酰化水平，调节重构胚相关基因的表达，Kdm4d的mRNA表达Kdm4d，降低组蛋白的甲基化水平，调节重构胚相关基因的表达，进而提高胚胎发育率和妊娠率。(4)胚胎移植前，为即将移入的胚胎提供合适的生理环境，需要对代孕母猴进行同期发情处理；克隆猴的成功培育，说明重构胚具有发育成完整个体的能力；克隆小猴的性别与提供细胞核的个体性别相同，即与图中的胎儿猴相同。
15．(2025·湖南卷)非洲猪瘟病毒是一种双链DNA病毒，可引起急性猪传染病。基因A编码该病毒的主要结构蛋白A，其在病毒侵入宿主细胞和诱导机体免疫应答过程中发挥重要作用。回答下列问题：(1)制备特定抗原①获取基因A，构建重组质粒(该质粒的部分结构如图所示)。重组质粒的必备元件包括目的基因、限制酶切割位点、标记基因、启动子和________________等；为确定基因A已连接到质粒中且插入方向正确，应选用图中的一对引物________对待测质粒进行PCR扩增，预期扩增产物的片段大小为________bp。
②将DNA测序正确的重组质粒转入大肠杆菌构建重组菌。培养重组菌，诱导蛋白A合成。收集重组菌发酵液进行离心，发现上清液中无蛋白A，可能的原因是________________________________________________________________________________________________________________________________________________(答出两点即可)。
(2)制备抗蛋白A单克隆抗体用蛋白A对小鼠进行免疫后，将免疫小鼠B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，诱导融合的常用方法有______________________________________________(答出一种即可)。选择培养时，对杂交瘤细胞进行克隆化培养和________，多次筛选获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。体外培养或利用小鼠大量生产的抗蛋白A单克隆抗体，可用于非洲猪瘟的早期诊断。
【答案】　(1) 终止子、复制原点　P1和P3　782　重组菌没有裂解或没有将蛋白A释放到细胞外、转速过高使蛋白A发生沉淀、蛋白A亲水性较差发生沉淀、蛋白A被大肠杆菌的蛋白酶降解 (2) 聚乙二醇(PEG)融合法(或灭活病毒诱导法、电融合法)　抗体检测
【解析】　(1)重组质粒的必备元件包括目的基因、限制酶切割位点、标记基因、启动子和终止子、复制原点等，终止子能终止转录过程。 要确定基因A已连接到质粒中且插入方向正确，应选用引物P1和P3。因为P1与基因A下游的非编码区互补配对，P3与基因 A 上游且靠近启动子的区域互补配对，这样扩增的片段大小为200＋582＝782 bp。将DNA测序正确的重组质粒转入大肠杆菌构建重组菌，培养后上清液中无蛋白A，可能的原因有：重组菌没有裂解或没有将蛋白A释放到细胞外，转速过高使蛋白A发生沉淀，蛋白A亲水性较差发生沉淀，蛋白A被大肠杆菌的蛋白酶降解。(2)①诱导动物细胞融合的常用方法有聚乙二醇(PEG)融合法、灭活病毒诱导法、电融合法等，这里答出其中一种即可，比如聚乙二醇(PEG)融合法。 ②选择培养时，对杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，多次筛选获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。
能力达标测试一、选择题1．(2025·重庆卷)豆瓣酱是我国地方特色调味品，生产豆瓣酱时要将蚕豆瓣制作成豆瓣曲，再添加调料进一步发酵，下列说法错误的是(　　)A．沸水浸泡能杀死蚕豆细胞，减少有机物消耗B．面粉可为菌种的快速繁殖和生长提供营养C．菌种中含有产蛋白酶和淀粉酶的微生物D．豆瓣酱的制备主要是利用厌氧微生物发酵
【答案】　D【解析】　沸水浸泡能使蚕豆细胞死亡，从而减少细胞呼吸等对有机物的消耗，A正确；面粉中含有淀粉等营养物质，可为菌种的快速繁殖和生长提供营养，B正确；在发酵过程中需要将蛋白质和淀粉等分解，所以菌种中含有产蛋白酶和淀粉酶的微生物，C正确；从图中可以看出，在制作豆瓣曲过程中有翻拌操作，且整个过程不是完全密封的，说明主要利用的是好氧微生物发酵，而不是厌氧微生物发酵，D错误。
2．(2025·临沧模拟)生长图形法是一种测定微生物营养需求的简便方法。为探究某嗜热菌所需生长因子的种类，研究小组把该菌的悬浮液与不含任何生长因子但含有其他必需营养物质的培养基混合后倒入平板，然后在平板上划分数区，将甲、乙、丙三种生长因子分别添加到不同区域，培养结果如图所示。下列说法错误的是(　　)A．倒入平板后直接培养可判断培养基有无污染B．倒入平板后培养基需要进行灭菌处理C．图示结果表明该菌需要生长因子乙和丙D．生长图形法还可用于某些菌种的筛选
【答案】　B【解析】　平板上不含任何生长因子，若倒入平板后直接培养，出现菌落说明培养基已被杂菌感染，因为该嗜热菌不能在缺乏生长因子的培养基中生长，A正确；制备培养基时，先灭菌再倒平板，B错误；题干图中菌落生活在乙、丙区域之间，说明同时需要乙和丙，C正确；不同菌种所需生长因子不同，可利用生长图形法筛选菌种，D正确。
3．(2025·洛阳模拟)马铃薯抗病(A)对易感病(a)为显性，块茎大(B)对块茎小(b)为显性。现利用品系甲(Aabb)和品系乙(aaBb)培育抗病块茎大的新品种。科学家利用了以下两种途径进行培育。下列有关叙述错误的是(　　)
A．目标品系M和目标品系N的染色体组数相同B．目标品系M和目标品系N体细胞内的核DNA数相同C．目标品系M和目标品系N的相关基因组成相同D．目标品系M和目标品系N的表型不一定相同【答案】　C【解析】　目标品系M和目标品系N都为四倍体，染色体组数相同，A正确；目标品系M和目标品系N都为四倍体，二者的体细胞内的核DNA数相同，B正确；根据题意分析，目标品系M有纯合子也有杂合子，而目标品系N是杂合子，二者相关基因组成不一定相同，二者的表型也不一定相同，C错误，D正确。
4．(2025·菏泽模拟)《本草纲目》记载，樱桃具有利脾、止泻的功效。樱桃中的槲皮素等酚类化合物具有抗氧化活性。我国已经利用组织培养技术繁育樱桃优良品种，满足人们食用和药用需要。下列叙述错误的是(　　)A．应用微型繁殖技术可获得大量樱桃脱毒苗B．可以选用樱桃幼嫩的芽原基和叶原基作为外植体C．富含色氨酸的培养基有利于樱桃幼嫩的芽合成生长素D．应用樱桃细胞培养可工厂化生产初生代谢物槲皮素【答案】　D
【解析】　应用微型繁殖技术采用茎尖作为外植体可获得大量樱桃脱毒苗，A正确；由于芽原基和叶原基分裂能力旺盛，因而可以选用樱桃幼嫩的芽原基和叶原基作为外植体，B正确；生长素是由色氨酸经过一系列转变产生的，因此，用富含色氨酸的培养基有利于樱桃幼嫩的芽合成生长素，C正确；应用樱桃细胞培养可工厂化生产次生代谢物槲皮素，D错误。
5．(2025·甘肃卷)肿瘤坏死因子α(TNF-α)是一种细胞因子，高浓度时可以引发疾病。研究者利用细胞工程技术制备了TNF-α的单克隆抗体，用于治疗由TNF-α引发的疾病，制备流程如下图。下列叙述正确的是(　　)
A．①是从小鼠的血液中获得的骨髓瘤细胞B．②含未融合细胞、同种核及异种核融合细胞C．③需用特定培养基筛选得到大量的杂交瘤细胞D．④需在体外或小鼠腹腔进行克隆化培养和抗体检测【答案】　B【解析】　骨髓瘤细胞应该从骨髓中获取，A错误；B细胞和骨髓瘤细胞的融合是随机的，可能有些细胞不发生融合，有些两两融合，有些多个融合，有同种核融合细胞，也有异种核融合细胞，B正确；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，但不能得到大量的，C错误；进行克隆化培养和抗体检测是在体外96孔板中进行的，D错误。
6．(2024·辽宁卷)迷迭香酸具有多种药理活性。进行工厂化生产时，先诱导外植体形成愈伤组织，再进行细胞悬浮培养获得迷迭香酸，加入诱导剂茉莉酸甲酯可大幅提高产量。下列叙述错误的是(　　)A．迷迭香顶端幼嫩的茎段适合用作外植体B．诱导愈伤组织时需加入NAA和脱落酸C．悬浮培养时需将愈伤组织打散成单个细胞或较小的细胞团D．茉莉酸甲酯改变了迷迭香次生代谢产物的合成速率【答案】　B
【解析】　迷迭香顶端幼嫩的茎段适合用作外植体，生长旺盛，分裂能力较强，A正确；诱导愈伤组织时需加入NAA和细胞分裂素，B错误；悬浮培养时需将愈伤组织打散成单个细胞或较小的细胞团，获得更多的营养物质和氧气，使得其可以进一步分裂，C正确；加入诱导剂茉莉酸甲酯可大幅提高产量，推测茉莉酸甲酯改变了迷迭香次生代谢产物(不是植物生长所必需的)的合成速率，D正确。故选B。
7．(2025·杭州模拟)利用逆转录病毒将4个关键基因导入已分化的体细胞中并表达，可使这个细胞成为类似胚胎干细胞的诱导多能干细胞(iPS细胞)。下图为该技术在人体细胞中的实验示意图。下列相关叙述错误的是(　　)
A．由iPS细胞产生其他种类细胞的过程为细胞分化B．利用患者的iPS细胞对其自身受损器官进行修复，与传统器官移植相比成功率更高C．目前iPS细胞在实际应用中还存在许多问题，例如，有研究发现iPS细胞的增殖难以控制，即iPS细胞具有衰老细胞的特征D．结合以上信息分析，iPS细胞可能容易分散【答案】　C
【解析】　由iPS细胞产生其他种类细胞的过程为细胞分化，图中①②③表示细胞分化，其实质是基因的选择性表达，A正确；iPS细胞来源于供体细胞，用其得到的新生器官替换供体病变器官，从理论上可以避免免疫排斥反应，大大提高器官移植成功率，B正确；iPS细胞是类似胚胎干细胞的一种细胞，说明其具有与胚胎干细胞相似的分化潜力，细胞分化程度低，不易衰老，iPS细胞增殖难以控制，说明其具有癌细胞特征，C错误；根据图示分析，iPS细胞可能容易分散，分化成不同的组织、器官，D正确。
8．(2025·泰安模拟)有研究表明渐冻症是由于突变的基因导致神经元合成了某种毒蛋白，从而阻碍了轴突内营养物质的流动。研究发现，利用诱导多能干细胞(iPS细胞)制作前驱细胞，然后移植给渐冻症实验鼠，能延长其寿命。下列有关叙述错误的是(　　)A．诱导iPS细胞分化成的多种细胞中核酸相同，蛋白质却不完全相同B．诱导iPS细胞分化的实质是基因的选择性表达，细胞的形态功能发生变化C．将控制合成破坏运动神经元的毒蛋白基因替换，可能会起到一定的治疗作用D．植入神经干细胞，使受损的运动功能得到恢复，可以一定程度改善渐冻症
【答案】　A【解析】　诱导iPS细胞分化成多种细胞是基因选择性表达的结果，细胞核中遗传物质DNA不变，但mRNA有所差异，使翻译形成的蛋白质也不完全相同，A错误；诱导iPS细胞分化的实质是基因的选择性表达，细胞的形态功能发生变化，B正确；将控制合成破坏运动神经元的毒蛋白基因替换，细胞内表达的毒蛋白减少，对渐冻症可能会起到一定的治疗作用，C正确；由题干信息“研究发现，利用诱导多能干细胞(iPS细胞)制作前驱细胞，然后移植给渐冻症实验鼠，能延长其寿命”可知，植入神经干细胞，能使受损的运动功能得到恢复，可以一定程度改善渐冻症，D正确。
9．(2024·辽宁卷)从小鼠胚胎中分离获取胚胎成纤维细胞进行贴壁培养，在传代后的不同时间点检测细胞数目，结果如图。下列叙述正确的是(　　)
A．传代培养时，培养皿需密封防止污染B．选取①的细胞进行传代培养比②更合理C．直接用离心法收集细胞进行传代培养D．细胞增长进入平台期可能与细胞密度过大有关【答案】　D【解析】　传代培养时需要营造无菌、无毒以及95%空气＋5%CO2的气体环境，而非密封，A错误；①的细胞更接近延迟期(调整期)，②时细胞增长开始变得缓慢，B错误；对于贴壁生长的细胞进行传代培养时，需要先用胰蛋白酶等处理，使之分散为单个细胞，然后再用离心法收集，C错误；细胞增长进入平台期可能与细胞密度过大、细胞间产生接触抑制、细胞代谢产物积累有关，D正确。故选D。
10．(2025·通化模拟)如图是受精过程部分图解，据图分析下列叙述错误的是(　　)
A．精子和卵子发生的场所分别是睾丸和卵巢，受精作用的场所是子宫B．当精子③与3接触的瞬间，精子①就不能进入2C．当精子②入卵后，精子③就不能进入卵内D．在2中观察到两个极体的现象可作为受精的标志【答案】　A
【解析】　精子和卵子发生的场所分别是睾丸和卵巢，受精作用的场所是输卵管，A错误；当精子③与3(卵细胞膜)接触的瞬间，卵细胞膜外的透明带会迅速发生生理反应，阻止后来的精子(如精子①)进入2(透明带)，B正确；当精子②入卵后，卵细胞膜会立即发生生理反应，拒绝其他精子(如精子③)进入卵内，C正确；当精子进入卵细胞膜后，卵细胞完成减数分裂Ⅱ，排出第二极体后，形成雌原核，在透明带和卵细胞膜之间观察到两个极体的现象可作为受精的标志，D正确。
10．(多选)(2025·通化模拟)如图是受精过程部分图解，据图分析下列叙述正确的是(　　)
A．精子和卵子发生的场所分别是睾丸和卵巢，受精作用的场所是子宫B．当精子③与3接触的瞬间，精子①就不能进入2C．当精子②入卵后，精子③就不能进入卵内D．在2中观察到两个极体的现象可作为受精的标志【答案】　BCD
11．(2025·安徽卷)质粒K中含有β－半乳糖苷酶基因，将该质粒导入大肠杆菌细胞后，其编码的酶可分解X－gal，产生蓝色物质，进而形成蓝色菌落，如图所示。科研小组以该质粒作为载体，采用基因工程技术实现人源干扰素基因在大肠杆菌中的高效表达。下列叙述错误的是(　　)
A．使用氯化钙处理大肠杆菌以提高转化效率，可增加筛选平板上白色和蓝色菌落数B．如果筛选平板中仅含卡那霉素，生长出的白色菌落不可判定为含目的基因的菌株C．因质粒K中含两个标记基因，筛选平板中长出的白色菌落即为表达目标蛋白的菌株D．若筛选平板中蓝色菌落偏多，原因可能是质粒K经酶切后自身环化并导入了大肠杆菌【答案】　C
【解析】　使用氯化钙处理大肠杆菌，可使其处于感受态，提高转化效率，即更多的大肠杆菌能吸收质粒，无论吸收的是含目的基因的重组质粒(可能形成白色菌落)还是未重组的质粒K(形成蓝色菌落)，都可增加筛选平板上白色和蓝色菌落数，A正确；如果筛选平板中仅含卡那霉素，能生长出的菌落都具有卡那霉素抗性，白色菌落可能是导入了重组质粒(含目的基因)，也可能是其他情况导致β－半乳糖苷酶基因不能正常表达而呈现白色，所以不可判定为含目的基因的菌株，B正确；筛选平板中长出的白色菌落，可能是导入了重组质粒(含目的基因)，但也可能是虽然导入了质粒但目的基因没有成功表达目标蛋白，不能仅仅因为是白色菌落就判定为表达目标蛋白的菌株，C错误；若筛选平板中蓝色菌落偏多，原因可能是质粒K经酶切后自身环化并导入了大肠杆菌，因为自身环化的质粒K中β－半乳糖苷酶基因完整，能表达活性β－半乳糖苷酶，分解X－gal形成蓝色菌落，D正确。
A．基因A突变为a是一种碱基增添的突变B．用两种限制酶分别酶切A基因后，形成的末端类型不同C．用两种限制酶分别酶切a基因后，产生的片段大小一致D．产前诊断时，该致病基因可选用HindⅢ限制酶开展酶切鉴定【答案】　BD
【解析】　对比A基因和a基因的序列，A基因中 “AAGCTT” 变为 a 基因中 “AAGCTG” ，是碱基替换(T→G)，并非碱基增添，A 错误；HindⅢ切割产生黏性末端，AluⅠ切割后产生的是平末端，二者末端类型不相同，B正确；观察图中a基因，HindⅢ有2个切割位点，切割后会产生1个片段，AluⅠ有3个切割位点，切割后会产生2个片段，一个片段长度是200 bp左右，另一个是400 bp 左右，用两种限制酶分别酶切a基因后，产生的片段大小不一致，C 错误；因为正常基因 A 和致病基因 a 的HindⅢ切割位点不同，所以产前诊断时，该致病基因可选用HindⅢ 限制酶开展酶切鉴定，D 正确。
12．(2025·信阳模拟)亚洲棉的突变型光籽和野生型毛籽是一对相对性状。研究发现，亚洲棉某突变体的光籽表型与8号染色体的～880 kb至～903 kb区间相关，研究人员根据野生型毛籽棉的该区间设计连续的重叠引物进行PCR，产物扩增结果如图所示。下列说法错误的是(　　)
A．应提取该突变体和野生型亚洲棉的全部染色体DNA进行PCRB．上图中PCR产物的鉴定是通过琼脂糖凝胶电泳来进行的C．据图分析可知，分子量较大的扩增产物与点样处的距离较小D．该突变体出现的根本原因是第6对引物对应区间发生了基因突变【答案】　A
【解析】　由于8号染色体的～880 kb至～903 kb区间与突变体的光籽表型相关，故应提取突变体和野生型的8号染色体上的DNA进行扩增，A错误；图中PCR产物的鉴定是通过琼脂糖凝胶电泳来进行的，主要依据分子量不同，采用外加电场使其分开，B正确；由图可知，分子量较大的扩增产物迁移速率慢，与点样处的距离较小，C正确；根据野生型和突变体经引物6扩增的产物不同可知，8号染色体上的第6对引物对应的区间发生基因突变是光籽性状出现的根本原因，D正确。
12．(多选)(2025·信阳模拟)亚洲棉的突变型光籽和野生型毛籽是一对相对性状。研究发现，亚洲棉某突变体的光籽表型与8号染色体的～880 kb至～903 kb区间相关，研究人员根据野生型毛籽棉的该区间设计连续的重叠引物进行PCR，产物扩增结果如图所示。下列说法错误的是(　　)
A．应提取该突变体和野生型亚洲棉的全部染色体DNA进行PCRB．上图中PCR产物的鉴定是通过琼脂糖凝胶电泳来进行的C．据图分析可知，分子量较大的扩增产物与点样处的距离较远D．该突变体出现的根本原因是第6对引物对应区间发生了基因突变【答案】　AC
【解析】　由于8号染色体的～880 kb至～903 kb区间与突变体的光籽表型相关，故应提取突变体和野生型的8号染色体上的DNA进行扩增，A错误；图中PCR产物的鉴定是通过琼脂糖凝胶电泳来进行的，主要依据分子量不同，采用外加电场使其分开，B正确；由图可知，分子量较大的扩增产物迁移速率慢，与点样处的距离较近，C错误；根据野生型和突变体经引物6扩增的产物不同可知，8号染色体上的第6对引物对应的区间发生基因突变是光籽性状出现的根本原因，D正确。
二、非选择题13．(2025·河南卷)卡拉胶是一类源于海洋红藻的大分子多糖，可被某些细菌降解为具有多种应用前景的卡拉胶寡糖。某研究小组拟筛选具有高活性卡拉胶酶(CG)的菌种用于生产卡拉胶寡糖。回答下列问题：(1)选择海藻和海泥作为样本筛选卡拉胶降解菌的原因是__________________________________________________________。将培养后的菌液混匀并充分________，再接种至微孔板中，经培养和筛选获得了CG活性最高的菌种。
(2)为构建携带cg(CG的编码基因)的大肠杆菌表达载体(图1)，对cg的PCR扩增产物和质粒进行双酶切，随后用E.cliDNA连接酶连接。为保证连接准确性和效率，cg转录模板链的5′端最好含有________酶切位点。另有两组同学选用了各不相同的双酶切组合和T4DNA连接酶重复上述实验，获得的部分重组质粒分子大小符合预期，但均无法使用各自构建表达载体的双酶切组合进行切割，其原因是______________________________________________________________________________________________________________________。
限制酶的识别序列和切割位点如下：
(3)为将构建好的表达载体转入大肠杆菌，需要先用Ca2＋处理大肠杆菌细胞，目的是___________________________________________，随后在含________和________的培养基中培养一段时间后，根据菌落周围有无水解透明圈筛选目的菌株。(4)已知空间上邻近的两个半胱氨酸易形成二硫键，从而提升蛋白质的耐热性。为提高CG的耐热性，研究人员分析了五个氨基酸位点的空间距离和保守度(保守度值越大表明该位点对酶的功能越关键)，如图2所示。根据分析结果，选择第________位的氨基酸替换成半胱氨酸最合适，原因是___________________________________。
【答案】　(1)在富含卡拉胶的环境中，存在能够分解卡拉胶的微生物的可能性较大　稀释 (2)BamHⅠ　重组质粒连接处的序列不再是原来的限制酶识别序列 (3)使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态　卡拉胶　四环素 (4)44　该位点的氨基酸空间上离半胱氨酸更近，容易形成二硫键，而且保守度低，替换后对酶功能的影响较小
【解析】　(1)卡拉胶是一类源于海洋红藻的大分子多糖，可被某些细菌降解为具有多种应用前景的卡拉胶寡糖。由于在富含卡拉胶的环境中，存在能够分解卡拉胶的微生物的可能性较大，因此可选择海藻和海泥作为样本筛选卡拉胶降解菌。将培养后的菌液混匀并充分稀释，再接种至微孔板中，经培养和筛选获得了CG活性最高的菌种。(2)E.cliDNA连接酶只能连接具有黏性末端的片段，因此切割质粒和目的基因时不能选择切成平末端的限制酶，即不能选择EcRⅤ酶和SmaⅠ酶，而SpeⅠ酶与XbaⅠ酶切割后的黏性末端相同，若选择SpeⅠ酶与XbaⅠ酶切割，
会出现质粒和目的基因的自连、甚至目的基因倒接，因此切割质粒时SpeⅠ酶与XbaⅠ酶中只能选择一个，而另一个限制酶需要选择BamHⅠ酶，又由于转录的方向是由启动子→终止子，且mRNA形成的方向是5′→3′，且mRNA与DNA的模板链方向相反，因此基因模板链的3′应靠近启动子，故为保证连接准确性和效率，cg转录模板链的5′端最好含有BamHⅠ酶切位点。T4DNA连接酶既可以连接平末端，也可连接黏性末端，不同的平末端均可由T4DNA连接酶连接，由于限制酶的识别序列具有专一性，若连接后的序列不存在最初限制酶的识别序列，则可能导致重组质粒无法使用各自构建表达载体的双酶切组合进行切割。
故另有两组同学选用了各不相同的双酶切组合和T4DNA连接酶重复上述实验，获得的部分重组质粒分子大小符合预期，但均无法使用各自构建表达载体的双酶切组合进行切割，其原因是重组质粒连接处的序列不再是原来的限制酶识别序列。(3)为将构建好的表达载体转入大肠杆菌，需要先用Ca2＋处理大肠杆菌细胞，目的是使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，便于重组DNA进入受体细胞。由于具有高活性卡拉胶酶(CG)的菌种可分解卡拉胶，使其菌落周围形成透明圈，且重组质粒上含有四环素抗性基因，因此导入目的基因的大肠杆菌可接种在含卡拉胶和四环素的培养基中培养一段时间后，根据菌落周围有无水解透明圈筛选目的菌株。(4)据图可知，虚线长度代表氨基酸间的空间距离，由于第44位点的氨基酸空间上离半胱氨酸更近，容易形成二硫键，而且保守度低，替换后对酶功能的影响较小，因此选择第44位的氨基酸替换成半胱氨酸最合适。
14．(2025·合肥模拟)人绒毛膜促性腺激素(HCG)是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，人工制备的抗HCG单克隆抗体可用于早孕的诊断。请回答下列问题。(1)在制备单克隆抗体的过程中，若细胞融合出现多种不同的杂交细胞，就需要在特定的________________上进行筛选，从而得到________细胞；给小鼠注射的HCG相当于________，能使小鼠产生能分泌相应抗体的B淋巴细胞。(2)利用杂交瘤细胞生产的单克隆抗体可以与________________________________特异性结合，从而诊断早孕。
(3)利用抗癌的单克隆抗体等制成的“生物导弹”能在病灶杀死癌细胞的原因是________________________________________________________________________________________________________________________________________。(4)单克隆抗体与传统方法获得的抗体相比有________________________________________的特点，因此被广泛用于疾病的诊断与治疗等方面。
【答案】　(1)选择培养基　杂交瘤　抗原(2)人绒毛膜促性腺激素(或HCG)(3)借助单克隆抗体的导向作用，能将药物定向带到癌细胞所在的位置(4)特异性强、灵敏度高、可大量制备
【解析】　(1)在制备单克隆抗体的过程中，杂交瘤细胞的筛选需用特定的选择培养基；给小鼠注射的HCG相当于抗原，使小鼠产生能分泌相应抗体的B淋巴细胞。(2)利用杂交瘤细胞生产的单克隆抗体可以与人绒毛膜促性腺激素(或HCG)特异性结合，从而诊断早孕。(3)单克隆抗体具有特异性，借助单克隆抗体的导向作用，能将药物定向带到癌细胞所在的位置，所以利用抗癌的单克隆抗体等制成的“生物导弹”能在病灶杀死癌细胞。(4)与传统方法获得的抗体相比，单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高、可大量制备的特点。
15．(2025·广东卷)大肠杆菌是重要工业菌株之一，其培养过程可分为快速生长期和生长稳定期两个阶段。为了通过调节蛋白质合成与降解速率来动态调控代谢途径关键酶的蛋白量，使细胞适配不同阶段的生产需求，研究者设计了两种质粒，并以稳定性好的红色荧光蛋白mKate2为模式蛋白。测试质粒功能。回答下列问题：(1)研究者首先构建质粒①(图a)用于在细胞内表达C－末端带SsrA短肽的mKate2，将质粒导入感受态细胞后，在添加抗生素的选择培养基上培养。根据培养基上菌落的生长状况，结合PCR及________________检测，筛选获得重组菌株W1。
(2)将W1在适宜条件下进行摇瓶培养，定时取样检测培养液中细胞密度，方法有______________________(答一种)。接种前需检测液体培养基的荧光强度，其作用是__________________________________________________。培养结果(图b)表明，进入生长稳定期后荧光强度快速下降，原因是_____________________________________________。
(3)研究者选用启动子PX、X基因(编码阻遏蛋白X，阻遏PX开启转录)，重新构建质粒②(图a)，导入野生型大肠杆菌中获得重组菌株W2。在适宜条件下摇瓶培养，W2的生长趋势不变，培养期间荧光强度的变化趋势为________________________________________________________________________________________________________________________________________________。
(4)莽草酸是一种重要工业化学品，其胞内合成代谢途径见图c。由于野生型大肠杆菌胞内酶A活性弱，且莽草酸会被快速转化为细胞生长必需物，因此细胞中无法大量积累莽草酸。为了保证细胞正常生长，并在生长稳定期实现莽草酸的大量积累，利用上述两种质粒的调控功能，结合野生型菌株遗传物质的改造，提出重组生产菌株构建思路：________________________________________________________________________________________________________________。
【答案】　(1)荧光(2)稀释涂布平板法、显微镜直接计数法　排除培养基本身荧光对实验结果的干扰　PGr在生长稳定期停止基因转录，且带有SsrA短肽的mKate2被降解 (3)快速生长期无荧光，生长稳定期荧光逐渐增强(4)应用质粒①导入酶B，质粒②导入酶A
【解析】　(1)在此基因工程中，筛选重组菌株时，常用的检测方法除了PCR，还有检测菌株荧光情况。(2)检测培养液中细胞密度常用的方法有稀释涂布平板法(通过统计平板上的菌落数来估算细胞数量，进而得到细胞密度)、显微镜直接计数法(利用血细胞计数板在显微镜下直接对细胞进行计数)。接种前检测液体培养基的荧光强度，是为了排除培养基本身荧光对实验结果的干扰，作为空白对照。进入生长稳定期后，由于PGr在生长稳定期停止基因转录，所以不再合成带有SsrA短肽的mKate2，同时C－末端带有SsrA短肽的蛋白质可被大肠杆菌内源蛋白酶系统特异性识别并以一定速率降解，导致荧光强度快速下降。
(3)在重组菌株W2中，启动子PX被阻遏蛋白X阻遏转录。在培养初期，细胞处于快速生长阶段，随着细胞数量的增加，阻遏蛋白X的量增加，PX启动子可能不会启动，从而不能合成mKate2，使快速生长期无荧光强度；随着培养的进行，阻遏蛋白X的量逐渐下降，对PX启动子的阻遏作用减弱，转录开始增强，荧光强度逐渐增加，所以培养期间荧光强度的变化趋势为快速生长期无荧光，生长稳定期荧光逐渐增强。(4)为了保证细胞正常生长，并在生长稳定期实现莽草酸的大量积累，需满足以下条件：条件1：为了保证细胞正常生长，必须保证酶A和酶B都正常。条件2：为了在稳定期有大量莽草酸，需要使酶A增加酶B减少。条件3：质粒①生长期无明显差异稳定期下降，质粒②生长期无明显差异稳定期不变。因此，应用质粒①导入酶B，质粒②导入酶A。
16．(2024·湖南卷)百合具有观赏、食用和药用等多种价值，科研人员对其进行了多种育种技术研究。回答下列问题：
(1)体细胞杂交育种。进行不同种百合体细胞杂交前，先用________________________去除细胞壁获得原生质体，使原生质体融合，得到杂种细胞后，继续培养，常用______________________(填植物激素名称)诱导愈伤组织形成和分化，获得完整的杂种植株。(2)单倍体育种。常用________________________的方法来获得单倍体植株，鉴定百合单倍体植株的方法是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。
(3)基因工程育种。研究人员从野生百合中获得一个抵抗尖孢镰刀菌侵染的基因L，该基因及其上游的启动子pL和下游的终止子结构如图a。图b是一种Ti质粒的结构示意图，其中基因gus编码GUS酶，GUS酶活性可反映启动子活性。①研究病原微生物对L的启动子pL活性的影响。从图a所示结构中获取pL，首先选用________________________酶切，将其与相同限制酶酶切的Ti质粒连接，再导入烟草。随机选取3组转基因成功的烟草(P1、P2和P3)进行病原微生物胁迫，结果如图c。由此可知：三种病原微生物都能诱导pL的活性增强，其中________________的诱导作用最强。
②现发现栽培种百合B中也有L，但其上游的启动子与野生百合不同，且抗病性弱。若要提高该百合中L的表达量，培育具有高抗病原微生物能力的百合新品种，简要写出实验思路__________________________________________________________________________________。【答案】　(1)纤维素酶和果胶酶　生长素和细胞分裂素(2)花药离体培养　利用显微镜观察根尖有丝分裂中期细胞中染色体的数目(3)HindⅢ、BamHⅠ　交链格孢　利用转基因技术将百合B中L基因的启动子替换为野生百合中L基因的启动子pL
【解析】　(1)因植物细胞的细胞壁的成分主要是纤维素和果胶，因此获得原生质体的方法是用纤维素酶和果胶酶对植物细胞进行处理。得到原生质体后使原生质体融合，形成杂种细胞，再用生长素和细胞分裂素诱导愈伤组织形成和分化，从而获得完整的杂种植株。(2)获得单倍体植株的常用方法是花药(花粉)离体培养；鉴定百合单倍体植株的方法是利用显微镜观察根尖有丝分裂中期细胞中染色体的数目，如果染色体数目减少一半，则获得的植株即为单倍体植株。(3)根据目的片段以及质粒上限制酶的识别位点，若要获得pL并连接到质粒上，可选用限制酶HindⅢ、BamHⅠ进行酶切，以替换Ti质粒中的启动子，从而达到根据GUS酶活性反映启动子活性的目的。根据图c的结果可知，交链格孢处理的每一组转基因烟草中的GUS酶活性都最高，可确定其诱导作用最强。欲培育具有高抗病原微生物能力的百合新品种，可利用转基因技术将百合B中L基因的启动子替换为野生百合中L基因的启动子pL。