山东省济宁市曲阜市2023-2024学年高二下学期期中考试生物（解析版）

这是一份山东省济宁市曲阜市2023-2024学年高二下学期期中考试生物（解析版），共9页。试卷主要包含了本试卷分选择题和非选择题两部分等内容，欢迎下载使用。
1.本试卷分选择题和非选择题两部分。满分100分，考试时间90分钟。
2.答题前，考生务必将姓名、考生号等个人信息填写在答题卡指定位置。
3.考生作答时，请将答案答在答题卡上。选择题每小题选出答案后，用2B铅笔把答题卡上对应题目的答案标号涂黑；非选择题请用直径0.5毫米黑色墨水签字笔在答题卡上各题的答题区域内作答。超出答题区域书写的答案无效，在试题卷、草稿纸上作答无效。
一、选择题（本题共15小题，每小题2分，共30分。每小题给出的四个选项中，只有一个选项最符合题目要求）
1.《本草纲目》中记载了酿制烧酒的过程：以糯米或粳米等蒸熟，“酿瓮中七日……入甑蒸令汽上，用器承取滴露”，“凡酸坏之酒，皆可蒸烧”。下列说法正确的是（ ）
A.为使酵母菌进行酒精发酵，酿制时“瓮”应装满后密封
B.“糯米或粳米”中所含物质只能为微生物提供碳源和氮源
C.在利用酵母菌发酵的“七日”中，水和酒精是同时产生的
D.发酵过程中密封不严，醋酸菌将酒精转化为乙酸使酒“酸坏”
【答案】D
【分析】参与酒的制作的微生物主要是酵母菌，其新陈代谢的类型为异养兼性厌氧型，较适宜的发酵温度为18~30℃。有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸大量繁殖，此时糖类被分解为二氧化碳和水，在无氧的环境中酵母菌把糖类分解为酒精和二氧化碳。
【详解】A、酒精发酵时，一般将容器内2/3的空间装满糯米或粳米，剩下的1/3空间留有空气，利于酵母菌有氧呼吸，进行繁殖，A错误；
B、糯米和粳米作为培养酵母菌的基质，可以为酵母菌提供碳源、氮源、水、无机盐、生长因子等，B错误；
C、酵母菌发酵的“七日”中，前期主要是有氧呼吸，该过程产生水，后期才开始无氧呼吸产生酒精，因此水和酒精不是同时产生的，C错误；
D、醋酸菌为需氧菌，若密封不严，会导致醋酸菌繁殖，将酒精变为乙醛进而生成乙酸（即醋酸），使酒酸坏，D正确。
故选D。
2.目前市场上的果蔬汁发酵产品所利用的菌种主要为乳酸菌，而利用酵母菌、醋酸菌、乳酸菌等多种益生菌混合发酵果蔬汁风味更协调、营养更丰富。相关叙述正确的是（ ）
A.乳酸菌、醋酸菌和酵母菌均属于原核生物
B.果蔬汁中的糖类物质可为益生菌提供碳源和氮源
C.果蔬汁发酵过程中需要防止杂菌污染
D.混菌发酵是把所有益生菌混合并在相同条件下发酵
【答案】C
【分析】原核生物没有以核膜为界限的细胞核，只有拟核；原核生物除了支原体都具有细胞壁，成分主要是肽聚糖；原核生物具有细胞膜、细胞质和核糖体；原核生物遗传物质是DNA，DNA为环状裸露的，不构成染色体。
【详解】A、酵母菌属于真核生物，A错误；
B、糖类不含氮元素，果蔬汁中的糖类物质可为益生菌提供碳源，B错误；
C、果蔬汁发酵过程中需要防止杂菌污染，杂菌污染不但影响口味，还可能产生有害物质，C正确；
D、发酵需要根据不同菌种的适宜生活条件调节发酵条件，D错误。
故选C。
3.我国科学家从北极分离、鉴定出了一种耐冷细菌，过程如下：①接种在人造海水中，15℃条件下振荡培养3h；②梯度稀释后将样品涂布在TYS培养基中，15℃条件下培养7d；③挑取生长菌落，进行划线，15℃条件下培养；④选择不同形态的菌落进行培养、鉴定和保藏。下列叙述错误的是（ ）
A.过程①中的振荡培养可以提高培养液中的溶氧量
B.过程②中的TYS培养基灭菌前需将pH调至酸性
C.过程②③使用的接种器具均需灼烧并冷却后接种
D.涂布后再次划线培养的目的是进一步纯化所得菌种
【答案】B
【分析】培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质；根据物理性质分为固体培养基和液体培养基，培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐；在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质和氧气的要求。
【详解】A、过程①中的振荡培养，能使人造海水与氧气充分接触，提高溶解氧的供应量，A正确；
B、过程②中的TYS培养基灭菌前需将pH调至酸性，会破坏该细菌的细胞结构，应将pH调至中性或弱碱性，B错误；
C、过程②③使用的接种器具均需灼烧，是防止杂菌污染，冷却后操作是避免接种器具因温度太高杀死菌种，C正确；
D、涂布平板法获得单菌落，但为避免杂菌污染，保证培养物的纯度，会在涂布后再次划线培养，以保证可以进一步得到纯化的菌种，D正确。
故选B。
4.用“麦汁酸化”法酿造的酸啤酒既有麦芽清香，又酸甜适口。它是通过微生物发酵将麦汁中的麦芽糖和其他糖类转化为醋酸和乳酸，再结合酒精发酵制作而成。下列说法错误的是（ ）
A.前期利用醋酸菌和乳酸菌在同一容器中同时进行醋酸和乳酸发酵
B.达到一定酸度的麦汁需经熬煮、冷却后才可接种抗酸性高的酵母菌
C.后期发酵产生酒精时，应将发酵温度控制在18～30℃范围内
D.酒精发酵时发酵罐内液面不再有气泡产生，说明发酵基本完毕
【答案】A
【分析】果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。故果酒的制作原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精，酵母菌最适宜生长繁殖的温度范围是18～30℃。培养乳酸菌时，所用培养基还需要额外添加维生素。
【详解】A、醋酸菌是好氧菌，在无氧条件下不能存活，而乳酸菌是厌氧菌，在有氧条件下不能存活，所以醋酸菌与乳酸菌在同一容器中发酵时，不能同时产生醋酸和乳酸，A错误；
B、抗酸性高的酵母菌适应于酸性环境，所以达到一定酸度的麦汁需经熬煮、冷却后才可接种，B正确；
C、酒精发酵需要酵母菌，酵母菌最适宜生长繁殖的温度范围是18～30℃，所以后期发酵产生酒精时，应将发酵温度控制在18～30℃范围内，C正确；
D、发酵一定时间后，观察到发酵罐内液面不再有气泡产生，说明酒精发酵停止，即发酵基本完毕，D正确。
故选A。
5.海洋杜氏藻是一种单细胞绿藻，具有耐盐特性；紫球藻是一种单细胞红藻，是制备重要医药原料花生四烯酸的良好材料，且对青霉素有抗性。通过植物细胞工程技术，培育出了能在高盐海水中养殖且高产花生四烯酸的杂种藻类。下列说法错误的是（ ）
A.需将杂种细胞在黑暗的条件下诱导形成愈伤组织后大量养殖
B.用聚乙二醇处理可诱导两种原生质体融合
C.用酶解法获取原生质体的过程需在等渗或高渗溶液中进行
D.在高盐培养基中添加青霉素可选择出所需的杂种细胞
【答案】A
【分析】植物体细胞杂交技术：就是将不同种的植物体细胞原生质体在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成完整植物体的技术。
【详解】A、诱导细胞融合不需要在黑暗条件下，由于海洋杜氏藻和紫球藻都是单细胞藻类，所以不需将杂种细胞诱导形成愈伤组织，A错误；
B、聚乙二醇是化学诱导剂，用聚乙二醇处理可诱导两种原生质体融合，B正确；
C、用酶解法去除细胞壁时，为防止形成的原生质体吸水涨破，应在等渗或高渗溶液中进行，C正确；
D、海洋杜氏藻具有耐盐特性，紫球藻对青霉素有抗性，所以在高盐培养基中添加青霉素可选择出所需的杂种细胞，D正确。
故选A。
6.紫罗兰和油菜均为二倍体植物，紫罗兰具有改变油菜花色，提高油菜抗虫性，改善油菜品质等优良基因资源。实验小组利用紫罗兰和油菜通过体细胞杂交技术培育新品种，下图表示不同浓度PEG作用下原生质体两两融合和多（三个或三个以上）原生质体融合的比率。下列说法中错误的是（ ）
A.图中诱导原生质体两两融合的最佳PEG浓度为40％左右
B.两两融合的细胞有三种类型，均含有四个染色体组
C.不同原生质体细胞膜完全融合是植物杂种细胞形成的标志
D.植物体细胞杂交技术的突出优点是可克服远缘杂交不亲和的障碍
【答案】C
【分析】分析题图，PEG浓度为40%时，两两融合率高，PEG浓度为50%时，多原生质体融合率最高。
【详解】A、从图上看，图中诱导原生质体两两融合的最佳PEG浓度为40％左右，融合率达到18%，A正确；
B、两两融合的细胞有三种类型：紫罗兰-紫罗兰型，油菜-油菜型，紫罗兰-油菜型，由于紫罗兰和油菜均为二倍体植物，所以两两融合后的原生质体均含有四个染色体组，B正确；
C、原生质体再生出新的细胞壁是植物杂种细胞形成的标志，C错误；
D、植物体细胞杂交技术的突出优点是克服远缘杂交不亲和的障碍，D正确。
故选C。
7.目前精子载体法逐渐成为最具诱惑力的制备转基因动物方法之一，该方法以精子作为外源基因的载体，使精子携带外源基因进入卵细胞受精。下图表示利用该方法制备转基因鼠的基本流程。下列说法错误的是（ ）
A.①过程需将成熟的精子放入ATP溶液中进行获能处理
B.将外源基因整合到精子的染色体上，可保证外源基因稳定遗传
C.②采用体外受精技术，受精完成的标志是雌雄原核融合
D.精子载体法与显微注射法相比，对受精卵中核的影响更小
【答案】A
【分析】分析题图：图示表示培育转基因鼠的基本流程，其中①是筛选获得导入外源基因的精子的过程，②是体外受精过程，③是早期胚胎培养过程，④是胚胎移植过程。
【详解】A、①过程需将成熟的精子放在一定浓度的肝素或钙离子载体溶液中，用化学药物诱导精子获能，A错误；
B、受精卵中几乎不含精子的细胞质，将外源基因整合到精子的染色体上，是保证外源基因稳定遗传的关键，B正确；
C、②采用体外受精技术，受精完成的标志是雌雄原核融合，C正确；
D、与显微注射法相比，精子载体法对受精卵中核的影响会更小，理由是不需要穿过核膜，雌雄原核自动融合（通过受精作用完成整合），D正确。
故选A。
8.某研究小组为测定药物对体外培养细胞毒性的大小，准备对某种动物的肝肿瘤细胞（甲）和正常肝细胞（乙）进行动物细胞培养。下列说法正确的是（ ）
A.制备肝细胞悬液时，可用胃蛋白酶代替胰蛋白酶处理肝组织
B.CO2培养箱中CO2浓度维持在5%左右，以促进细胞呼吸
C.本实验应设置对照实验，以检测药物对甲、乙的毒性大小
D.为防止细胞培养过程中细菌的污染，需要对培养液和所有培养用具进行消毒处理以及在无菌环境下进行操作
【答案】C
【分析】一、动物细胞培养的过程：取动物组织块、剪碎组织、用胰蛋白酶处理分散成单个细胞一制成细胞悬液、转入培养液中进行原代培养、放入二氧化碳培养箱培养、贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液进行传代培养、放入二氧化碳培养箱培养。
二、培养条件：无菌、无毒的环境、添加一定量的抗生素、定期更换培养液、营养物质：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、还需加入血清、血浆等天然物质、温度和pH、气体环境：95%空气(细胞代谢必需的)和5%的CO2（维持培养液的pH）。
【详解】A、在利用肝组织块制备肝细胞悬液时，常用胰蛋白酶，不能使用胃蛋白酶，因为胃蛋白酶需要在强酸环境下才能起作用，但这样的环境不适于细胞生存，A错误；
B、细胞培养应在含CO2恒温培养箱中进行，CO2浓度维持在5%左右，CO2的作用是维持培养液的pH，B错误；
C、本实验应设置对照实验，用添加甲药物、乙药物的培养液分别培养细胞，根据变异细胞占培养细胞的比例，以检测药物对甲、乙的毒性大小，C正确；
D、为防止细胞培养过程中细菌的污染，需在培养液中适量添加抗生素，D错误。
故选C。
9.体外受精和胚胎移植都是在医学和农牧业生产中应用较多的胚胎工程技术。下列有关说法正确的是（ ）
A.采集的卵母细胞和精子可以直接置于培养液中共同培养以完成受精
B.胚胎移植前，需要选取遗传性状优良、生产能力强的母牛作为受体
C.胚胎移植前，需对供体和受体进行免疫检查，避免发生免疫排斥反应
D.胚胎分割移植以后，经受体孕育的多个后代的遗传特性均一致
【答案】D
【分析】胚胎移植的生理学基础：
①动物发情排卵后，同种动物的供、受体生殖器官的生理变化是相同的。这就为供体的胚胎移入受体提供了相同的生理环境。
②早期胚胎在一定时间内处于游离状态。这就为胚胎的收集提供了可能。
③受体对移入子宫的外来胚胎不发生免疫排斥反应。这为胚胎在受体的存活提供了可能。
④供体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组织联系，但供体胚胎的遗传特性在孕育过程中不受影响。
【详解】A、刚采集的卵母细胞和精子均不成熟，进行受精前卵母细胞需在体外培养至MⅡ期，精子需要进行获能处理，A错误；
B、应选取遗传性状优良、生产能力强的母牛作为供体，B错误；
C、受体对来自世体的胚胎不会发生免疫排斥反应，移植前不需要对供体和受体进行免疫检查，C错误；
D、胚胎分割移植以后，来自同一胚胎的后代具有相同的遗传物质，其遗传特性均一致，D正确。
故选D。
10.有性生殖过程中，一个卵细胞与一个精子成功融合后，通常不再与其他精子融合。我国科学家最新研究发现，当卵细胞与精子融合后，卵细胞会特异性表达和分泌BF1和BF2这两种蛋白质，这两种蛋白质能避免受精卵再度与精子融合。下列叙述正确的是（ ）
A.精子与卵细胞的识别和融合，与细胞膜的选择透过性有关
B.受精过程中，精子和卵细胞的随机结合会导致基因重组
C.多精入卵会导致产生双胞胎甚至多胞胎
D.BF1和BF2有利于维持受精卵中染色体数目的稳定
【答案】D
【分析】细胞膜上有特异性受体，与细胞的识别和信息交流有关；减数分裂和受精作用有利于维持受精卵中染色体数目的稳定。
【详解】A、细胞膜上有特异性受体，精卵结合与细胞膜的信息交流功能有关，A错误；
B、受精过程中精子和卵细胞的随机结合不是基因重组，基因重组发生在减数分裂过程中，B错误；
C、多精入卵会导致子代有来自卵细胞和多个精细胞的染色体，破坏亲子代之间遗传信息的稳定性，因此一个卵细胞与一个精子成功融合后通常不再与其他精子融合，C错误；
D、BF1和BF2能避免受精卵再度与精子融合，有利于维持受精卵中染色体数目稳定，D正确。
故选D。
11.下表为常用的限制性核酸内切酶（限制酶）及其识别序列和切割位点，由此推断以下说法中，错误的是（ ）
（注：Y=C或T，R=A或G）
A.HindⅡ、SmaⅠ两种限制酶切割后形成平末端
B.Sau3AⅠ限制酶的切割位点在识别序列的外部
C.BamHⅠ和Sau3AⅠ两种限制酶切割后形成相同的黏性末端
D.一种限制酶一定只能识别一种核苷酸序列
【答案】D
【分析】限制酶主要从原核生物中分离纯化出来。特异性：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂，形成黏性末端和平末端两种。
【详解】A、HindⅡ、SmaⅠ两种限制酶沿着中轴线切口切开，切割后形成平末端，A正确；
B、Sau3AⅠ限制酶识别GATC序列，切割位点在识别序列的外部，B正确；
C、BamHⅠ限制酶识别GGATCC序列，Sau3AⅠ限制酶识别GATC序列，切割后形成相同的黏性末端GATC，C正确；
D、一种限制酶可以识别两种核苷酸序列，如Sau3AⅠ能识别GATC，也能识别GGATCC，D错误。
故选D。
12.实时荧光RT—PCR可用于RNA病毒的核酸检测，其原理是：在PCR复性过程中探针和引物一起与模板结合，探针两侧分别带有荧光基团和抑制荧光发出的淬灭基团，新链延伸过程中，DNA聚合酶会破坏探针，导致荧光基团与淬灭基团分离而发出荧光。利用RT=PCR进行核酸检测的相关过程如图所示。下列说法错误的是（ ）

A.做RT—PCR之前，需要先根据cDNA的核苷酸序列合成引物和探针
B.RNA不能作为PCR扩增的模板，故需要将样本中的RNA逆转录为DNA后再进行扩增
C.若有强烈荧光信号发出，说明被检测者没有感染病毒
D.病毒的检测还可以检测病毒的蛋白类物质或病毒引发产生的抗体，其原理都是抗原—抗体杂交
【答案】C
【分析】根据题意，通过病毒的RNA进行逆转录产生cDNA，cDNA在PCR过程中解旋后可以和引物一起与模板结合，探针两侧有荧光基团和抑制荧光发出的淬灭基团，延伸过程DNA聚合酶破坏了探针使淬灭基团分离后发出荧光而检测到是否有cDNA来判断是否有病毒。
【详解】A、PCR需要根据cDNA的核苷酸序列合成引物，同时RT-PCR还需要探针与待测样本DNA混合，故需要根据cDNA的核苷酸序列合成探针，A正确；
B、PCR扩增必须以DNA为模板，RNA不能作为PCR扩增的模板，所以需要将样本中的RNA反转录为DNA后再进行扩增，B正确；
C、据图可知，探针两侧分别带有荧光基团和抑制荧光发出的淬灭基团，新链延伸过程中，DNA聚合酶会破坏探针，导致荧光基团与淬灭基团分离而发出荧光。若检测结果有强烈荧光信号发出，说明被检测者极有可能感染了病毒，C错误；
D、RNA病毒的检测方法有：①RNA检测，即检测病毒的遗传物质RNA；②特异性抗原蛋白检测，即检测病毒表面的一种糖蛋白；③特异性抗体检测，即检测感染者体内通过免疫反应所产生的某种抗体。后两种方法的原理是抗原-抗体杂交，D正确。
故选C。
13.胰岛素可用于治疗糖尿病，但胰岛素注射后易在皮下堆积，需较长时间才能进入血液，进入血液后又易被分解，因此治疗效果受到影响。下图是新的速效胰岛素的生产过程，有关叙述错误的是（ ）
A.新的胰岛素的预期功能是构建新胰岛素模型的主要依据
B.新的胰岛素生产过程中不涉及中心法则
C.若用大肠杆菌生产新的胰岛素，常用Ca2+处理大肠杆菌
D.新的胰岛素功能的发挥必须依赖于蛋白质正确的高级结构
【答案】B
【分析】分析题图：图示是利用蛋白质工程设计速效胰岛素的生产过程。蛋白质工程的过程：预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有氨基酸序列→找到对应的脱氧核苷酸序列（基因）。蛋白质工程得到的蛋白质一般不是天然存在的蛋白质。
【详解】A、构建新的蛋白质模型是蛋白质工程的关键，因此图中合成出新的胰岛素基因最关键的一步是构建新的胰岛素模型，A正确；
B、新的胰岛素生产过程中涉及中心法则，B错误；
C、若要利用大肠杆菌生产新的胰岛素，常用感受态细胞法提高导入的成功率，常用Ca2+处理大肠杆菌，C正确；
D、根据结构与功能相适应的原理分析，新的胰岛素功能的发挥必须依赖于蛋白质正确的高级结构，D正确。
故选B。
14.海南作为中国唯一的热带岛屿省份，其种业发展在气候、资源、科技等方面均有明显优势。在海南，从常见的杂交水稻、高产玉米，到转基因抗虫棉花、耐热菊花，诸多优质新品种在这里被评议审定、种植推广。下列有关叙述错误的是（ ）
A.转基因产品需要经过一系列的安全性评价，符合相应标准后才能上市
B.我国对转基因技术的方针是研究上要大胆、推广上要慎重、管理上要严格
C.我国制定的有关法规最大程度保证了转基因技术和已上市转基因产品的安全性
D.对植物的基因改造是基因工程中研究最广泛和取得实际应用成果最多的领域
【答案】D
【分析】转基因技术是一把双刃剑，最重要的是要科学合理的利用这项技术，通过技术提高了很多农产品的收益、解决了饥饿问题和对遗传病的治疗带来新的希望；对微生物的基因改造是基因工程中研究最广泛和取得实际应用成果最多的领域。
【详解】A、转基因作为一项技术本身是中性的，由这项技术研发出来的产品需要经过一系列的安全性评价，符合相应标准后才能上市，A正确；
B、针对转基因技术的应用，各个国家都制定了符合本国利益的法规和政策。我国对转基因技术的方针是一贯的、明确的，就是研究上要大胆，坚持自主创新;推广上要慎重，做到确保安全;管理上要严格，坚持依法监管，B正确；
C、国家有关部门制定实施了《农业转基因生物安全评价管理办法》《农业转基因生物进口安全管理办法》，这些法规的制定既维护了消费者对转基因产品的知情权和选择权，又最大程度地保证了转基因技术和已经上市的转基因产品的安全性，C正确；
D、对微生物的基因改造是基因工程中研究最广泛和取得实际应用成果最多的领域，D错误。
故选D。
15.研究人员利用蛋白质工程将细菌纤维素酶的第137、179、194位相应氨基酸替换为赖氨酸后，纤维素酶热稳定性得到了提高。下列有关该技术的说法正确的是（ ）
A.对纤维素酶的改造需要以基因工程为基础
B.对纤维素酶的改造是通过直接改造mRNA实现的
C.改造后的纤维素酶和原纤维素酶是同一种酶
D.改造前后纤维素酶在细胞内合成过程中遗传信息的流向不同
【答案】A
【分析】蛋白质工程的过程：预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有氨基酸序列→找到对应的脱氧核苷酸序列（基因）．蛋白质工程是通过修改基因或创造合成新基因来改变生物的遗传和表达形状，合成新的蛋白质，蛋白质工程是对基因进行修饰改造或重新合成，然后进行表达，须构建基因表达载体；蛋白质工程获得的是自然界没有的蛋白质；蛋白质工程是在基因水平上改造基因。
【详解】A、对纤维素酶的改造属于蛋白质工程，需要以基因工程为基础，蛋白质工程是在基因水平上改造基因，A正确；
B、对纤维素酶的改造是通过直接改造纤维素酶的基因实现的，B错误；
C、改造后的纤维素酶氨基酸序列发生了改变，和原纤维素酶不是同一种酶，C错误；
D、改造前后纤维素酶在细胞内合成过程中遗传信息的流向相同，都是DNA→RNA→蛋白质，D错误。
故选A。
二、选择题（本题共5小题，每小题3分，共15分。每小题有一个或多个选项符合题目要求。全部选对的得3分，选对但不全的得1分，有选错的得0分）
16.筛选淀粉分解菌需使用以淀粉为唯一碳源的培养基。接种培养后，若细菌能分解淀粉，培养平板经稀碘液处理，会出现以菌落为中心的透明圈（如图），实验结果见下表。有关本实验的叙述，正确的是（ ）
A.培养基除淀粉外还含有氮源等其他营养物质
B.筛选分解淀粉的细菌时，菌液应稀释后涂布
C.以上两种细菌均不能将淀粉酶分泌至细胞外
D.H/C值反映了两种细菌分解淀粉能力的差异
【答案】ABD
【分析】该选择培养基上的唯一碳源是淀粉，只有能利用淀粉的微生物才能存活，微生物分解淀粉后，会产生透明圈。
【详解】A、培养基一般含有碳源、氮源、水、无机盐和生长因子等成分，A正确；
B、筛选淀粉分解菌时，需要对菌液进行一系列的梯度稀释，再将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基上进行培养，B正确；
C、由题意可知，以上两种菌均会产生透明圈，说明两种菌均可以产生淀粉酶并分泌到细胞外分解淀粉，C错误；
D、淀粉分解菌的H/C越大，说明其产生的淀粉酶分解的淀粉相对越多，可说明该淀粉分解菌分解淀粉的能力越强，D正确。
故选ABD。
17.下图为单克隆抗体制备过程的示意图。下列相关叙述正确的是（ ）
A.每个脾B淋巴细胞可产生一种抗体
B.细胞融合可使用灭活病毒，灭活病毒的抗原结构依然存在
C.细胞筛选和细胞融合时所用的培养液在成分上相同
D.克隆化培养过程中杂交瘤细胞会出现接触抑制的现象
【答案】AB
【分析】单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞，诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞，进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养，最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。
【详解】A、脾B淋巴细胞只能产生针对相应抗原的抗体，每个脾B淋巴细胞只能产生一种抗体，A正确；
B、灭活病毒诱导细胞融合的原理是病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，故灭活病毒的抗原结构依然存在，B正确；
C、细胞筛选时获得杂交瘤细胞需要在选择培养基上筛选，细胞融合时所用的培养液需要再加入诱导剂，两者的成分上有差异，C错误；
D、杂交瘤细胞具有无限增殖的特点，无接触抑制现象，因此该细胞克隆化培养过程中不会出现接触抑制，D错误。
故选AB。
18.第三代试管婴儿技术(PGD/PGS)是对早期胚胎细胞进行基因诊断和染色体检测后再进行胚胎移植，流程如图所示。图中检测包括PGD、PGS(PGD是指胚胎植入前的基因诊断，PGS是指胚胎植入前的染色体数目和结构检测)。下列叙述正确的是（ ）
A.采集的卵子需培养至MII期才能与获能的精子进行受精
B.PGD和PGS技术可分别用于筛选唐氏综合征和红绿色盲
C.进行胚胎移植前需要对夫妻双方进行免疫检查
D.“理想胚胎”需培养至原肠胚期才能植入子宫
【答案】A
【分析】一、动物体细胞核移植：将动物的一个细胞的细胞核移入一个去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为克隆动物。
二、试管婴儿技术是指通过人工操作使卵子和精子在体外条件下成熟和受精，并通过培养发育为早期胚胎后，再经移植后产生后代的技术。
三、胚胎移植的基本程序主要包括：①对供、受体的选择和处理（选择遗传特性和生产性能优秀的供体，有健康的体质和正常繁殖能力的受体；用激素进行同期发情处理，用促性腺激素对供体母牛做超数排卵处理）；②配种或人工授精；③对胚胎的收集、检查、培养或保存（对胚胎进行质量检查，此时的胚胎应发育到桑椹或胚囊胚阶段）；④对胚胎进行移植；⑤移植后的检查。
【详解】A、体外受精时，需要将所采集到的卵母细胞在体外培养MII期，才可以与精子完成受精作用，A正确；
B、PGD是指胚胎植入前的基因诊断，PGD可用于筛选红绿色盲；PGS是指胚胎植入前的染色体数目和结构检测，PGS可用于筛选唐氏综合征，B错误；
C、受体子宫对外来胚胎几乎不发生免疫反应，因此进行胚胎移植前不需要对夫妻双方进行免疫检查，C错误；
D、“理想胚胎”需培养至桑椹或囊胚才能植入子宫，D错误。
故选A。
19.Cre-lxP系统能实现特定基因的敲除（如图1）。把几种荧光蛋白基因和Cre酶能识别并切割的序列（lxP1和lxP2）串在一起，构建表达载体T（如图2）。部分荧光蛋白基因会被Cre酶随机“剪掉”，且两个lxP1之间或两个lxP2之间的基因，最多会被Cre酶敲除一次，剩下的部分得以表达，随机呈现不同的颜色。下列说法错误的是（ ）

A.Cre酶切下一个待敲除基因的过程，需要破坏四个磷酸二酯键
B.若小鼠细胞含一个表达载体T（不含Cre酶），其肌肉组织细胞呈红色
C.若小鼠细胞含一个表达载体T（含Cre酶），其脑组织细胞呈红色或黄色或蓝色
D.若小鼠细胞含两个表达载体T（含Cre酶），其一个细胞内可能随机出现两种颜色
【答案】B
【分析】一、基因工程至少需要三种工具：限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶、运载体。
二、基因工程的基本操作步骤主要包括四步：①目的基因的获取；②基因表达载体的构建；③将目的基因导入受体细胞；④目的基因的检测与表达。
【详解】A、DNA单链上相邻的两个脱氧核苷酸之间通过磷酸二酯键相连，DNA由两条单链螺旋缠绕形成，Cre酶切下一个待敲除基因的过程中，需要切断基因前后两端，因此需要破坏四个磷酸二酯键，A正确；
B、据图可知，小鼠有编码红、黄、蓝荧光蛋白的基因，前端有脑组织特异性表达的启动子，肌肉细胞不会表达颜色基因，故若小鼠细胞含一个表达载体T(不含Cre酶)，其肌肉组织细胞呈无色，B错误；
C、1xP1、1xP2位置如图2黑白三角符号所示，两个lxP1和两个lxP2之间的基因最多会被Cre酶敲除一次，将含Cre酶的病毒注入小鼠体内，Cre酶表达情况不同，识别的lxP不同，则有可能未敲除荧光蛋白基因，此时为红色(同不含Cre酶时)，也有可能敲除两个lxP1之间的红色荧光蛋白基因，此时为黄色，也有可能敲除两个1xP2之间的红色和黄色荧光蛋白基因，此时为蓝色，因而不同脑细胞会差异表达红色、黄色或蓝色荧光蛋白基因，C正确；
D、小鼠脑组织细胞内有2个相同表达载体T(含Cre酶)，Cre酶对每个DNA片段随机剪切，因而细胞的颜色由细胞内两种荧光蛋白的颜色叠加而成，故其脑组织细胞可能出现两种颜色，D正确。
故选B。
20.融合PCR技术采用具有互补末端的引物，形成具有重叠链的PCR产物，通过PCR产物重叠链的延伸，从而将不同来源的任意DNA片段连接起来。其原理如图所示，据图分析正确的是（ ）
A.上述过程中使用的引物P2和P3的碱基需要完全互补配对
B.设计引物的目的是为了能够从其3'端开始连接脱氧核苷酸
C.融合PCR的第一步两条链重叠部位可互为另一条链的引物
D.若融合PCR的第二步获得128个融合基因，理论上该过程消耗了254个引物
【答案】BCD
【分析】PCR是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。
【详解】A、上述过程中使用的引物P2和P3的碱基不需要完全互补配对，只需要部分碱基互补配对即可，A错误；
B、引物为一段核苷酸，引物与DNA模板链结合后，能够从其3＇端开始连接脱氧核苷酸，开始子链的合成，B正确；
C、结合图示可知，融合PCR的第一步两条链重叠部位即互补配对，可互为另一条链的引物，C正确；
D、若融合PCR的第二步获得了128个融合基因，引物数目和新合成的子链数目相同，即该过程消耗了128×2-2=254个引物，D正确。
故选BCD。
三、非选择题：本题包括5小题，共55分
21.对生活垃圾进行分类处理，是提高垃圾的资源价值和改善生活环境的重要措施。科研小组欲分离及培养若干种微生物用于处理湿垃圾，如剩菜剩饭、骨头、菜根菜叶、果皮等食品类废物。
（1）科研小组从土壤中筛选产脂肪酶的菌株时，配制的培养基需要以____________为唯一碳源。接种微生物常用的方法是______________________。
（2）获得产脂肪酶的菌株后，在处理含油垃圾的同时，可获得单细胞蛋白，实现污染物资源化。现获得可产脂肪酶的A、B两种菌株，并进行了培养研究，结果如图1所示。据图分析，应选择菌株_____进行后续相关研究，理由______________________。
（3）科研小组从土壤中筛选淀粉分解菌时，加碘液染色后，选择培养基上出现了A、B和C三种菌落（如图2所示）。若要得到淀粉酶活力最高的菌株，应选择_____菌落进一步纯化。经检测A菌落为硝化细菌，A菌落能在此培养基上生长且没有形成透明圈的原因是______________________。
【答案】（1）①.脂肪 ②.稀释涂布平板法和平板划线法
（2）①.B ②.该菌株增殖速度快，单细胞蛋白产量高，且脂肪剩余比例小，降解脂肪能力强
（3）①.B ②.硝化细菌为自养细菌，能够利用空气中的二氧化碳合成有机物，但硝化细菌不能产生淀粉酶，所以无透明圈
【分析】一、涂布平板法：将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在，再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。二、平板划线法：把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞，用接种环在平板表面上作多次由点到线的划线稀释而获得较多独立分布的单个细胞，并让其成长为单菌落的方法。
【小问1详解】筛选产脂肪酶的菌株，需要以脂肪为唯一碳源；稀释涂布平板法和平板划线法是接种微生物常用的两种方法。
【小问2详解】结合图1两种菌株的曲线比较可知，B菌株增殖速度快，单细胞蛋白产量高，且脂肪剩余比例小，降解脂肪能力强，适宜选择B菌株进行后续相关研究。
【小问3详解】淀粉被分解后，会出现透明圈，透明圈大的说明淀粉酶活力高，应选择B菌落进一步纯化；A菌落为硝化细菌，硝化细菌为自养细菌，能够利用空气中的二氧化碳合成有机物，但硝化细菌不能产生淀粉酶，所以无透明圈。
22.如图为科学家采用不同方法培育良种生的过程，请据图回答有关问题：
（1）与一般的繁育良种动物方式相比较，胚胎移植的优势是_______。为提高良种奶牛的繁殖能力，在获取卵母细胞之前需用__________对奶牛进行处理，目的是超数排卵。
（2）“转基因牛D”培育过程中，常用受精卵作为外源基因的受体细胞，主要原因是________。
（3）图中数字标号①代表的结构为______，①将来发育为_______，c→d过程需对其均等分割的原因是_________。
（4）在培育良种牛的过程中，都运用了动物细胞培养技术。在动物细胞培养过程中，需要定期更换培养液，原因是_______。
【答案】（1）①.可充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力 ②.促性腺激素
（2）受精卵的全能性易于表达
（3）①.内细胞团 ②.胎儿的各种组织 ③.有利于胚胎的恢复和进一步发育
（4）清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害
【分析】分析题图可知，该图为利用不同方法培育良种牛的过程，该过程涉及到的技术有动物细胞培养，体外受精，早期胚胎培养，胚胎移植，胚胎分割，基因工程等技术。图中①是内细胞团，②是囊胚腔，③是滋养层。
【小问1详解】与一般的繁育良种动物方式相比较，胚胎移植可充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力，大量繁殖优良品种。对良种母牛注射促性腺激素可促使其超数排卵。
【小问2详解】由于受精卵的全能性易于表达，因此良种牛培育过程中，常用受精卵作为外源基因的受体细胞。
【小问3详解】由分析可知，图中①为内细胞团，将来发育为胎儿的各种组织；c→d过程需对①内细胞团均等分割，这样有利于胚胎的恢复和进一步发育。
【小问4详解】在培育良种生的过程中，都运用了动物细胞培养技术。在动物细胞培养过程中，需要定期更换培养液，原因是清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害。
23.为降低乳腺癌治疗药物的副作用，科研人员尝试在单克隆抗体技术的基础上，构建抗体—药物偶联物（ADC），过程如图1所示。
（1）本实验中，小鼠注射的特定抗原应取自_________。
（2）步骤①常用方法包括_________融合法、电融合法和灭活病毒诱导法等。其中灭活病毒诱导融合的原理是：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与_________发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质和脂质分子重新排布，_________，细胞发生融合。
（3）步骤②的细胞必须经过步骤③克隆化培养和_________才能筛选得到符合要求的杂交瘤细胞，符合要求的杂交瘤细胞的特点是________。杂交瘤细胞可采用注射到小鼠腹腔内培养或进行______培养的方式进行扩大培养。
（4）研究发现，ADC在患者体内的作用如图2所示。
①单克隆抗体除可以运载药物外，还有_________等作用。（答出2点即可）
②ADC进入乳腺癌细胞后，细胞中的溶酶体可将其水解，释放出的药物最终作用于细胞核，可导致_________。
（5）与直接使用抗肿瘤药物相比，构建抗体—药物偶联物（ADC），对人体副作用更小，原因是_________。
【答案】（1）人的乳腺癌细胞
（2）①.PEG ②.细胞膜上的糖蛋白 ③.细胞膜打开
（3）①.抗体检测 ②.既能大量增殖，又能产生特定抗体 ③.体外
（4）①.作为诊断试剂、治疗疾病 ②.癌细胞凋亡
（5）将药物送到肿瘤部位，对肿瘤进行特异性杀伤
【分析】由图1可知，①表示动物细胞的融合，②表示筛选杂交瘤细胞，③表示克隆化培养和专一抗体检测。由图2可知，ADC不识别正常细胞，识别并结合乳腺癌细胞。
【小问1详解】要生产乳腺癌的单克隆抗体，应该选择乳腺癌细胞作为抗原对小鼠进行免疫处理。
【小问2详解】①表示动物细胞的融合，常用化学药物PEG处理，诱导细胞融合；病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上糖蛋白发生作用，使细胞相互凝聚，细胞膜上的蛋白质和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。
【小问3详解】②表示筛选杂交瘤细胞，杂交瘤细胞产生的抗体不一定是需要的，故需要进行③克隆化培养和抗体检测；杂交瘤细胞具有无限增殖，且能产生特定抗体的特点；杂交瘤细胞可以在体外或小鼠腹腔内培养。
【小问4详解】①ADC中的单克隆抗体能精确地定位乳腺癌细胞，让药物作用于乳腺癌细胞，而不是正常的细胞，可以降低乳腺癌治疗药物的副作用，这个过程依赖于特异性的抗原与抗体反应，可以有效地治疗疾病；单克隆抗体还可以作为诊断试剂，如检测相关基因有没有表达成蛋白质，或检测抗原的有无。
②由图可知，ADC进入乳腺癌细胞，溶酶体可以将ADC水解，释放出的药物进入细胞质基质，最终作用于细胞核，引起乳腺癌细胞的凋亡。
【小问5详解】因为将药物送到肿瘤部位，对肿瘤进行特异性杀伤（靶点清楚，毒副作用小），故与直接使用抗肿瘤药物相比，构建抗体—药物偶联物（ADC），对人体的副作用更小。
24.人感染乳头瘤病毒（HPV）可诱发宫颈癌等恶性肿瘤，疫苗是预防宫颈癌的主要手段，科研人员针对HPV疫苗的研发做了如下研究。
（1）为构建重组疫苗，如图1所示，科研人员将含有HPV病毒衣壳蛋白L1基因的DNA片段用_________酶和_________酶酶切后，构建重组质粒，导入大肠杆菌。用添加_________的培养基筛选，对长出的单菌落提取质粒，利用_________技术鉴定导入的质粒是否含有L1基因。
（2）大肠杆菌表达产物衣壳蛋白L1经纯化，加佐剂SA04吸附后，二者共同被免疫系统识别加工，发挥免疫作用，吸附后制成疫苗用于预防HPV，与传统灭活疫苗相比，这样的重组疫苗更安全又有效，其主要原因是_________。
（3）为评价SA04疫苗佐剂能否提高疫苗的免疫效果，科研人员将L1及L1经SA04佐剂吸附后分别注射于小鼠体内，然后在第7、14、21、28天测定相应抗体的相对含量，结果如图2所示。
①实验结果表明_________。
②请指出本实验方案存在的缺陷并改进实验方案：_________。
【答案】（1）①.BamHI ②.HindⅢ ③.氨苄青霉素 ④.PCR
（2）衣壳蛋白L1无核酸，无侵染能力，但有抗原特性，可刺激机体产生抗体和记忆细胞
（3）①.SA04疫苗佐剂能提高抗体含量从而提高疫苗免疫效果 ②.缺少对照组；增加单独SA04佐剂处理的对照组
【分析】基因表达载体的构建：1、目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。2、组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因。（1）启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。（2）终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端。（3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来．常用的标记基因是抗生素抗性基因。
【小问1详解】L1基因能表达出HPV病毒衣壳蛋白，BclI酶会破坏质粒上的氨苄青霉素抗性基因和卡那霉素抗性基因，所以不能使用BclI酶切割目的基因，L1基因两侧和质粒上都含有BamHI酶和HindⅢ酶的切割位点，但质粒上不含有Sau3AI酶的切割位点，故为构建重组疫苗，需要用BamHI酶和HindⅢ酶同时去切割L1基因与质粒，然后将HPV病毒衣壳蛋白L1基因与质粒构建重组质粒，导入大肠杆菌。BamHI酶和HindⅢ酶会破坏质粒上的卡那霉素抗性基因，但氨苄青霉素抗性基因没有破坏，导入重组质粒的细胞具有抗氨苄青霉素的特性，可以用添加氨苄青霉素的培养基筛选含有重组质粒的大肠杆菌，对长出的单菌落提取的质粒可能含有L1基因，也可能是导入的空质粒，可以利用PCR（或核酸分子杂交或核酸分子测序）技术鉴定重组质粒是否含有L1基因。
【小问2详解】重组疫苗含有L1基因，能表达衣壳蛋白L1，加佐剂SA04吸附后，二者共同被免疫系统识别加工，发挥免疫作用，由于衣壳蛋白L1无核酸，无侵染能力，但有抗原特性，可刺激机体产生抗体和记忆细胞，因此与传统灭活疫苗相比，这样的重组疫苗更安全又有效。
【小问3详解】①由图2可知，相同时间时，相比L1组以及无L1、SA04组（空白对照组），L1+SA04组的抗体含量都更多，说明SA04疫苗佐剂能提高抗体含量从而提高疫苗免疫效果。
②由题干和图2可知，本实验只做了加L1、无L1、SA04和L1+SA04三组实验，由于L1+SA04组是两者的混合，缺少单独SA04佐剂处理的对照组，实验不严谨，故本实验需要改进的是增加单独SA04佐剂处理的对照组，然后在第7、14、21、28天测定相应抗体的相对含量。
25.人血清白蛋白（HSA）是由肝脏细胞合成的，具有重要的医用价值，原本只能从血清中提取，现利用基因工程的方法生产HSA.请结合相关知识回答下列问题。
（图甲为获取的含HSA基因的DNA片段及酶切位点；图乙是三种限制酶的识别序列；图丙为质粒结构示意图）
（1）科研人员利用人肝细胞中的_________构建出cDNA文库，通过该方法合成的DNA含量较少，可通过PCR进行扩增获取较多的DNA分子，根据该基因的序列（5'-CTAG-GTCGAAATTC…TCTCCAACGATCGG-3'），应选择_________作为PCR的引物。
A.引物I是5'-CTAGGTCGAAATTC-3'，引物Ⅱ是5'-CCGATCGTTGGAGA-3'
B.引物I是5'-CTAGGTCGAAATTC-3'，引物Ⅱ是5'-TCTCCAACGATCGG-3'
C.引物I是5'-GATCCAGCTTTAAG-3'，引物Ⅱ是5'-AGAGGTTGCTAGCC-3'
D.引物I是5'-GATCCAGCTTTAAG-3'，引物Ⅱ是5'-CCGATCGTTGGAGA-3'
为使HSA基因能与质粒正确连接，根据图甲、乙、丙，应选择限制酶_________切割目的基因。
（2）PCR扩增结束后需要对PCR产物进行检测，常采用电泳的方法。电泳一段时间后进行检测，若电泳带有_________条，且与DNA Marker对比，产物大小正确，表明PCR扩增成功。
（3）目的基因与质粒连接后可以导入到不同的受体细胞中进行表达。若导入到原核生物大肠杆菌中，可用CaCl2处理大肠杆菌，有利于重组质粒的导入。但由于原核细胞中缺少_________等细胞器，不能对表达产物进行加工，可能会影响蛋白质的功能。若将重组质粒导入到真核细胞，如小鼠细胞中，则可避免上述问题的产生。现利用小鼠乳腺作为生物反应器生产该蛋白，可将重组质粒通过_________法导入小鼠的_________细胞中，然后将转化的细胞进行培养，由于无法进行全体外胚胎培养，成为胚胎工程中获得转基因小鼠的唯一方法。利用_________技术检测小鼠乳腺分泌物，可以判断目的基因是否表达。
【答案】（1）①.mRNA ②.A ③.EcRI和BamHI
（2）1
（3）①.内质网、高尔基体 ②.显微注射 ③.受精卵 ④.抗原—抗体杂交
【分析】基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品；基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，又叫做DNA重组技术。
【小问1详解】人血清白蛋白基因（HSA）主要在肝脏中合成，为了获得HSA基因，可从人体的肝脏细胞中提取mRNA，通过反转录获得cDNA（双链），构建出cDNA文库。根据碱基互补配对原则可知，该基因的两条链序列为5'-CTAGGTCGAAATTC…TCTCCAACGATCGG-3'、5'-CCGATCGTTGGAGA…GAATTTCGACCTAG-3'，PCR过程需要两种引物，能分别与目的基因两条链的3'端通过碱基互补配对结合，故引物Ⅰ能与5′-GAATTTCGACCTAG-3'进行配对，为5′-CTAGGTCGAAATTC-3′；引物Ⅱ能与5′-TCTCCAACGATCGG-3'配对，为5′-CCGATCGTTGGAGA-3'，A正确，BCD错误。
故选A。
限制酶Sau3AⅠ切割目的基因会破坏目的基因，故不能选择限制酶Sau3AⅠ切割目的基因。为了防止目的基因与质粒间的任意连接，应该选择Sau3AⅠ、EcRⅠ切割质粒。Sau3AⅠ和BamHⅠ的黏性末端相同，故采用BamHⅠ、EcRⅠ充分切割目的基因。
【小问2详解】将装有凝胶的胶托从胶盒中取出，放入电泳槽内，加样孔一端朝向负极，向电泳槽中加入电泳缓冲液，使其没过凝胶。电泳一段时间后进行检测，记录Marker每个条带的位置和相应DNA片段长度，若电泳带有1条，且与DNAMarker对比，产物大小正确，表明PCR扩增成功。
小问3详解】用CaCl2处理大肠杆菌，使其处于易于吸收周围环境中DNA分子的感受态，即感受态细胞，有利于重组质粒的导入。大肠杆菌为原核细胞，没有内质网、高尔基体，不能蛋白质进行加工。将重组质粒导入动物细胞（受精卵），常采用显微注射技术。将早期胚胎通过胚胎移植技术导入雌性小鼠体内。为了检测小鼠乳腺分泌物中是否合成了人血清白蛋白（HSA），可采用抗原—抗体杂交的方法。
限制酶名称
识别序列和切割位点
限制酶名称
识别序列和切割位点
BamHⅠ
G↓GATCC
KpnⅠ
GGTAC↓C
EcRⅠ
C↓AATTC
Sau3AⅠ
↓GATC
HindⅡ
GTY↓RAC
SmaⅠ
CCC↓GGG
菌种
菌落直径：C（mm）
透明圈直径：H（mm）
H/C
细菌Ⅰ
5.1
11.2
2.2
细菌Ⅱ
8.1
13.0
1.6