安徽省淮南市2026年高考全国统考预测密卷生物试卷含解析

这是一份安徽省淮南市2026年高考全国统考预测密卷生物试卷含解析，共3页。试卷主要包含了考生必须保证答题卡的整洁等内容，欢迎下载使用。
1．答题前请将考场、试室号、座位号、考生号、姓名写在试卷密封线内，不得在试卷上作任何标记。
2．第一部分选择题每小题选出答案后，需将答案写在试卷指定的括号内，第二部分非选择题答案写在试卷题目指定的位置上。
3．考生必须保证答题卡的整洁。考试结束后，请将本试卷和答题卡一并交回。
一、选择题(本大题共7小题,每小题6分,共42分。)
1．杂合体雌果蝇在形成配子时，同源染色体的非姐妹染色单体间的相应片段发生对等交换，导致新的配子类型出现，其原因是在配子形成过程中发生了（ ）
A．基因重组B．染色体重复C．染色体易位D．染色体倒位
2．酶联免疫是临床上广泛使用的免疫学检测方法，其原理是酶与抗体结合（结合不改变抗体的免疫特性．也不影响酶的活性）；使用酶标记抗体与吸附在载体上的抗原特异性结合后，底物可在酶作用下发生变化出现颜色反应，通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应，进而做出诊断。下列相关叙述正确的是（ ）
A．颜色反应的深浅与待测标本中相应抗原的量呈正比
B．颜色反应的出现是由于酶标记抗体和相应抗原发生特异性结合导致的
C．一种酶标记抗体可以检测多种抗原
D．该检测方法简单、稳定、有效，因此可以不用注意环境因素的影响
3．下列有关细胞结构及其功能的叙述，错误的是（ ）
A．细胞膜、线粒体膜上均有运输葡萄糖的载体
B．主动运输可使细胞内外离子浓度差异加大
C．叶肉细胞吸收Mg2+所需的ATP不会来自光反应
D．控制细菌性状的基因主要位于拟核DNA上
4．下列关于细胞结构和功能的叙述，错误的是（ ）
A．核膜上的核孔复合体不是遗传物质选择性进出的通道
B．胰岛细胞合成和分泌胰岛素的过程会使高尔基体膜成分得到更新
C．能识别细胞外化学信号的是受体蛋白，能运输细胞内氨基酸的是载体蛋白
D．线粒体的外膜和内膜上都没有转运葡萄糖的载体蛋白
5．下列关于种群特征的叙述，正确的是（ ）
A．种群性比例变大，则出生率变大
B．“J”型增长曲线中也存在死亡的个体
C．人为淘汰某种群生殖后期的个体，可提高种群的出生率
D．年龄结构通常分为生殖前期、生殖期和生殖后期
6．2019年诺贝尔生理学或医学奖获得者发现了一种蛋白质——缺氧诱导因子（HIF）在细胞感知和适应氧气供应中的作用。当体内氧含量正常时，细胞中几乎不含HIF；当氧含量减少时，HIF的含量增多。HIF能促进肾脏细胞中促红细胞生成素基因的表达，从而促进红细胞的生成。下列关于细胞感知和适应氧气含量变化机制的叙述错误的是（ ）
A．从进化的角度看是长期自然选择的结果
B．从基因表达来看是氧气含量变化调控基因选择性表达，导致细胞中HIF的含量变化
C．从细胞内信息传递来看是一系列信号分子进行信号转导调节细胞生理生化的过程
D．从组织器官或个体水平来看使人体不仅能适应剧烈运动、胎儿生长发育、癌变组织等代谢旺盛需氧多的情况，还能适应高海拔地区活动、慢性肾衰竭引起的贫血等缺氧情况
7．鼠妇是一种性别决定为ZW型的喜潮湿、阴暗环境的小动物。上世纪80年代发现，沃尔巴克氏体（一种细菌）偏爱雌性鼠妇，能使雌性的W染色体消失，只要是雌虫受感染，其产生的下一代必将带有沃尔巴克氏体，并能使雄性胚胎肽性反转成雌性。近期对雌性鼠妇基因组测序发现，未感染沃尔巴克氏体雌性鼠妇的染色体上有含沃尔巴克氏体部分DNA，类似最初丢失的W染色体控制鼠妇的性别。下列休息正确的是
A．上世纪80年代发现的雌性鼠妇的性染色体组成都是ZW
B．沃尔巴克氏体与鼠妇是寄生关系，诱捕鼠妇需要用到热光灯
C．携带沃尔巴克氏体的鼠妇可以通过显微镜观察染色体的形态确定其性别
D．所有携带沃尔巴克氏体DNA的鼠妇都是雌性，这种变异属于基因重组
8．（10分）下列关于tRNA的叙述，正确的是（ ）
A．tRNA的组成单位是核糖核苷酸，含有C、H、O、N四种元素
B．通常情况下，在翻译过程中，一个tRNA只能使用一次
C．tRNA是单链结构，但结构中存在碱基互补配对
D．tRNA上的密码子可用于识别氨基酸
二、非选择题
9．（10分）如图是胰腺组织局部结构模式图，请据图回答有关问题：
（1）A、B、C三者共同构成了细胞生活的液体环境，这个液体环境称为_____。
（2）维持内环境渗透压的Na+和Cl﹣以及葡萄糖、氨基酸等物质进入内环境要经过_____、_____系统。
（3）饭后半小时，图示血管中（从左到右）血液里_____（激素）含量会增多；该胰腺组织能产生胰蛋白酶和胰高血糖素；这两种物质哪种不可以进入血液_____。
（4）在一些病理条件下，血浆、组织液和淋巴三者的量都可能发生变化。请举出由于病理引起A液增多，其结果是将会引起_____；由于病理引起A液增多的实例_____、_____。（不得少于2种）
（5）某人喝入大量的食醋后不会引起内环境pH明显下降，原因是图中_____（填字母）内存在着_____物质。
10．（14分）现代生物科技可广泛应用于动植物新品种的培育、生物制药及环境保护等领域，与此同时，由于科技水平及认知水平有限，可能会给人类带来意想不到的负面影响。回答下列有关生态工程的问题：
（1）生态工程的主要目的是____________________。生态经济主要是通过实行____________________的原则实现废弃物的资源化。
（2）北京郊区窦店村将种植业、养殖业、屠宰场、沼气池、食用菌养殖基地等整合在一起，创造了更多的就业机会，大大增加了农民收入。该案例主要运用了哪些生态工程的基本原理？___________________________（至少说出3项）。
（3）我国科技人员创造了浮床生态工艺法来净化富营养化水体，说出浮床上的植物通过_______________、____________________，抑制了水体中浮游植物的生长。
（4）2019年是我国在垃圾处理方面改革力度最大的一年，上海成为我国第一个垃圾分类试点城市，试说出垃圾分类的意义_______________________（至少说出2项）。
11．（14分）测定水样是否符合饮用水卫生标准，常用滤膜法测定大肠杆菌的数目。滤膜法的大致流程：用滤膜过滤待测水样→水样中的细菌留在滤膜上→将滤膜转移到含有伊红美蓝的培养基（EMB培养基）上培养→统计菌落数目，流程示意图如下图所示。其中，指示剂伊红美蓝可使大肠杆菌菌落呈现紫黑色。请据图回答问题：

（1）过滤待测水样需要用到滤杯、滤膜和滤瓶，其中需要进行灭菌处理的是_______________，与过滤有关的操作都要在______________旁进行。
（2）将完成过滤之后的滤膜紧贴在EMB培养基上，这属于微生物培养中的________操作。从物理状态角度分析，EMB培养基属于________培养基，从功能上分属于_______培养基。
（3）某生物兴趣小组的同学尝试按照上述方法进行测定，无菌操作下将10mL待测水样加入到90mL无菌水中，稀释后的菌液通过滤膜法测得EMB培养基上的菌落数平均为124，紫黑色菌落数平均为31，则推测1L待测水样中的大肠杆菌数目为________。
（4）大肠杆菌进行扩大培养时，用摇床振荡培养的目的是__________________________。
（5）不同微生物培养的温度和时间往往不同，在培养箱中培养时，细菌培养温度________（填“高于”“低于”或“等于”）霉菌培养温度，培养时间则_________（填“长于”或“短于”）霉菌培养时间。
12．萝卜的蛋白A具有广泛的抗植物病菌作用，而且对人体没有影响。我国科学家欲获得高效表达蛋白A的转基因大肠杆菌作为微生物农药，做了相关研究。
（1）研究者用相同的_________酶处理蛋白A基因和pET质粒，得到重组质粒，再将重组质粒置于经_________处理的大肠杆菌细胞悬液中，获得转基因大肠杆菌。
（2）检测发现，转入的蛋白A基因在大肠杆菌细胞中表达效率很低，研究者推测不同生物对密码子具有不同的偏好，因而设计了与蛋白A基因结合的两对引物（引物B和C中都替换了一个碱基），并按图2方式依次进行4次PCR扩增，以得到新的蛋白A基因。
①这是一种定点的_________技术。
②图2所示的4次PCR应该分别如何选择图1中所示的引物？请填写以下表格（若选用该引物划“√”，若不选用该引物则划“×”）。_____
（3）研究者进一步将含有新蛋白A基因的重组质粒和_________分别导入大肠杆菌，提取培养液中的蛋白质，用_________方法检测并比较三组受体菌蛋白A的表达产物，判断新蛋白A基因表达效率是否提高。为检测表达产物的生物活性，研究者将上述各组表达产物加入到长满了植物病菌的培养基上，培养一段时间后，比较_________的大小，以确定表达产物的生物活性大小。
（4）作为微生物农药，使用时常喷洒蛋白A基因的发酵产物而不是转蛋白A基因的大肠杆菌，其优点是_________。
参考答案
一、选择题(本大题共7小题,每小题6分,共42分。)
1、A
【解析】
本题考查基因重组的相关知识，要求考生识记基因重组的概念、类型及意义，尤其是基因重组的类型，再结合题干信息做出准确的判断即可。基因重组的两种类型：（1）自由组合型：减数第一次分裂后期，随着非同源染色体自由组合，非同源染色体上的非等位基因也自由组合；（2）交叉互换型：减数第一次分裂前期（四分体），基因随着同源染色体的非等位基因的交叉互换而发生重组。
【详解】
根据题干信息“同源染色体的非姐妹染色单体间的相应片段发生对等交换”可知，在配子形成过程中发生了交叉互换型的基因重组，进而导致配子具有多样性。 A正确，B、C、D错误，故选A。
要注意区分基因重组和染色体易位，前者是同源染色体的非姐妹染色单体间的相应片段发生交叉交换，后者是非同源染色体之间交换片段。
2、A
【解析】
1、抗原是指能引起机体产生特异性免疫反应的物质．抗原的特点：（1）异物性，但也有例外：如癌细胞、损伤或衰老的细胞；（2）大分子性：抗原多数是蛋白质，其结构较复杂，分子量较大；（3）特异性：抗原决定簇（病毒的衣壳）。
2、抗体指机体的免疫系统在抗原刺激下，由B淋巴细胞或记忆细胞增殖分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白．主要分布在血清中，也分布于组织液及外分泌液中。
【详解】
A、根据题干信息“酶标记抗体与吸附在载体上的抗原特异性结合后，底物可在酶作用下发生变化出现颜色反应”所以抗原的数目越多，与抗体结合的数目越多，酶催化的反应越多，颜色越深，A正确；
B、颜色反应的出现的直接原因是底物可在酶作用下发生变化出现颜色反应，B错误；
C、抗体和抗原的结合有特异性，所以一种酶标记抗体可以检测一种抗原，C错误；
D、在使用该方法时，需要考虑对环境的影响，D错误。
故选A。
本题关键是根据题干的信息分析出酶联免疫方法的基本使用原理。
3、A
【解析】
葡萄糖的氧化分解发生在细胞质基质中，故细胞膜上有它的载体而线粒体上没有其载体等。主动运输能逆浓度梯度运输离子，使得细胞内外存在浓度差。
【详解】
A、葡萄糖不能进入线粒体，因此线粒体膜上没有运输葡萄糖的载体，A错误；
B、主动运输保证细胞按照生命活动的需要主动地选择吸收营养物质，可逆浓度梯度进行运输，使细胞内外离子浓度差异加大，B正确；
C. 真核细胞叶绿体光反应中产生的ATP只能用于暗反应，植物叶肉细胞吸收Mg2+所需的能量可由线粒体合成的ATP提供，叶肉细胞吸收Mg2+所需的ATP不会来自光反应，C正确；
D、细菌是原核生物，无染色体，控制细菌性状的基因主要位于拟核DNA上，D正确。
故选A。
4、C
【解析】
核孔复合体是蛋白质、RNA等大分子出入的通道。机体中有一类在细胞内产生，分泌到胞外发挥作用的蛋白质，称为分泌蛋白。分泌蛋白的合成和分泌是在多种细胞结构的参与下进行的，首先，氨基酸在核糖体中形成多肽之后，通过内质网的加工和运输，随囊泡转移至高尔基体，随后，高尔基体形成的囊泡包裹着蛋白质向细胞膜移动，将蛋白质分泌到胞外。
【详解】
A、细胞的遗传物质为DNA，主要在细胞核中，DNA不会出细胞核，因此核膜上的核孔复合体不是遗传物质选择性进出的通道，A正确；
B、高尔基体会对分泌蛋白进行加工和运输，胰岛细胞合成和分泌胰岛素的过程会使高尔基体膜成分得到更新，B正确；
C、受体是一种能识别和选择性结合某种信号分子的大分子，绝大多数的受体都是蛋白质且多为糖蛋白，少数受体是糖脂，有的受体是糖蛋白和糖脂组成的复合物（如促甲状腺激素受体），C错误；
D、线粒体的外膜和内膜上都没有转运葡萄糖的载体蛋白，葡萄糖不能进入线粒体，D正确。
故选C。
5、B
【解析】
种群的特征：
（1）数量特征（核心问题）：
①种群密度：种群最基本的数量特征；
②出生率和死亡率、迁入率和迁出率：决定种群数量变化的主要因素；
③年龄结构和性别比例：预测种群数量变化的主要依据（一般根据年龄结构）
（2）空间特征：指组成种群的个体，在其生活空间中的位置状态或布局。
（3）遗传特征：遗传的单位，繁殖的单位
【详解】
A、种群性比率变大，则出生率变小，种群密度相应变小，A错误；
B、“J”型曲线存在与理想条件下，但生物的寿命是有限的，故其增长曲线中也存在死亡的个体，B正确；
C、通过淘汰某种群生殖后期的个体，可改变种群的年龄组成，使其成为增长型，但短期内种群的出生率不一定提高，C错误；
D、年龄结构通常分为增长型、稳定型、衰退型三种类型，D错误。
故选B。
本题考查种群的特征和种群数量变化的相关知识，意在考查考生的识记能力和理解所学知识要点，把握知识间内在联系，形成知识网络结构的能力；能运用所学知识，准确判断问题的能力，属于考纲识记和理解层次的考查。
6、D
【解析】
根据题干信息，当氧含量减少时，HIF的含量增多，HIF能促进肾脏细胞中促红细胞生成素基因的表达，从而促进造血干细胞形成红细胞，缓解缺氧症状。
【详解】
A、根据题干信息，当体内氧含量正常时，细胞中几乎不含HIF；当氧含量减少时，HIF的含量增多，HIF能促进肾脏细胞中促红细胞生成素基因的表达，从而促进造血干细胞形成红细胞，缓解缺氧症状，这体现了生物对环境的适应性，是长期自然选择的结果，A正确；
B、根据题干信息“当体内氧含量正常时，细胞中几乎不含HIF；当氧含量减少时，HIF的含量增多”，说明体内氧含量的变化是影响缺氧诱导因子基因表达的关键因素，B正确；
C、根据题干信息，“当体内氧含量正常时，细胞中几乎不含HIF；当氧含量减少时，HIF的含量增多，HIF能促进肾脏细胞中促红细胞生成素基因的表达，从而促进造血干细胞形成红细胞，缓解缺氧症状。” 从细胞内信息传递来看是一系列信号分子进行信号转导调节细胞生理生化的过程，C正确；
D、根据题干信息，HIF能促进肾脏细胞中促红细胞生成素基因的表达，从而促进红细胞的生成，缓解缺氧症状。因此对于慢性肾衰竭引起的贫血缺氧情况无缓解效果，D错误。
故选D。
7、B
【解析】根据题干信息分析，上世纪80年代很多雌性鼠妇的性染色体中W染色体由于沃尔巴克氏体的感染而消失，只留下了Z染色体，A错误；沃尔巴克氏体是一种细菌，寄生与鼠妇体内，诱捕鼠妇需要用到热光灯，B正确；携带沃尔巴克氏体的鼠妇只有Z一条性染色体，可以通过显微镜观察染色体的数量确定其性别，C错误；沃尔巴克氏体（一种细菌）偏爱雌性鼠妇，能使雌性的W染色体消失，只要是雌虫受感染，其产生的下一代必将带有沃尔巴克氏体，并能使雄性胚胎肽性反转成雌性，所以所有携带沃尔巴克氏体DNA的鼠妇都是雌性，这种变异属于染色体数目的变异，D错误。
8、C
【解析】
RNA分为mRNA、tRNA和rRNA，其中mRNA是翻译的模板，tRNA能识别密码子并转运相应的氨基酸，rRNA是组成核糖体的成分。此外，还有少数RNA具有催化功能。
【详解】
A、tRNA的组成单位是核糖核苷酸，含有C、H、O、N、P五种元素，A错误；
B、通常情况下，在翻译过程中，tRNA可以反复使用，B错误；
C、tRNA是单链结构，但形成的三叶草结构中存在碱基互补配对，C正确；
D、密码子存在于mRNA上，tRNA上的是反密码子，D错误。
故选C。
二、非选择题
9、内环境 消化系统 循环 胰岛素 胰蛋白酶 组织水肿 过敏反应、 长期营养不良、毛细淋巴管堵塞、肾炎 B 缓冲
【解析】
1、体液是由细胞内液和细胞外液组成，细胞内液是指细胞内的液体，而细胞外液即细胞的生存环境，它包括血浆、组织液、淋巴等，也称为内环境。
2、内环境稳态是指内环境的理化性质和化学成分保持相对稳定的状态，内环境稳态是机体进行正常生命活动的必要条件；目前普遍认为，神经-体液-免疫调节网络是机体维持稳态的主要调节机制。
3、分析题图：题图是胰腺组织局部结构模式图，其中A液为组织液，是组织细胞直接生存的环境；B液为血浆，是血细胞直接生存的环境；C液为淋巴，是淋巴细胞和吞噬细胞直接生存的环境。
【详解】
（1）A、B、C三者共同构成了细胞生活的液体环境，这个液体环境称为内环境即细胞外液。
（2）维持内环境渗透压的Na+和C1-以及葡萄糖、氨基酸等物质进入内环境要经过消化系统、循环系统。
（3）饭后半小时，血糖浓度升高，图示血管中血液里胰岛素含量会增多，该胰腺组织能产生胰蛋白酶和胰高血糖素，由于胰蛋白酶属于消化酶，分泌后进入消化道，不进入血液。
（4）在一些病理条件下，血浆、组织液和淋巴三者的量都可能发生变化。由于过敏反应、长期营养不良、毛细淋巴管堵塞、肾炎等病理引起组织液增多，其结果是将会引起组织水肿。
（5）由于血浆中（图中B）存在着缓冲物质，因此某人喝入大量的食醋后不会引起内环境pH明显下降。
本题结合胰腺组织局部结构模式图，考查内环境的知识，考生识记内环境的组成，明确血浆、组织液、淋巴之间的关系，掌握内环境稳态的调节机制是解题的关键。
10、对遭到破坏的生态环境进行修复和重建（或对造成环境污染和破坏的传统生产方式进行改善） 循环经济 物质循环再生原理、整体性原理、物种多样性原理、系统的结构决定功能原理（或系统学和工程学原理） 吸收水体中的矿质元素 阻挡射入水体的光照 减少垃圾处理量从而降低处理成本、减少土地资源的占用和消耗、有用物质回收（变废为宝或废物资源化）、减少环境污染等。
【解析】
生态工程的主要目的是：对遭到破坏的生态环境进行修复和重建（或对造成环境污染和破坏的传统生产方式进行改善）生态经济主要是通过实行循环经济的原则实现废弃物的资源化。浮床上的植物由于吸收水体中的矿质元素、阻挡射入水体的光照，进而起到抑制水体中浮游植物的生物的作用。垃圾分类的意义在于：减少垃圾处理量从而降低处理成本、减少土地资源的占用和消耗、有用物质回收（变废为宝或废物资源化）、减少环境污染等。
【详解】
（1）生态工程的主要目的是：对遭到破坏的生态环境进行修复和重建（或对造成环境污染和破坏的传统生产方式进行改善）生态经济主要是通过实行循环经济的原则实现废弃物的资源化。
（2）北京郊区窦店村将种植业、养殖业、屠宰场、沼气池、食用菌养殖基地等整合在一起，该生态工程的涉及的基本原理是：物质循环再生原理、整体性原理、物种多样性原理、系统的结构决定功能原理（或系统学和工程学原理）
（3）浮床上的植物由于吸收水体中的矿质元素、阻挡射入水体的光照，进而起到抑制水体中浮游植物的生物的作用。
（4）垃圾分类的意义在于：减少垃圾处理量从而降低处理成本、减少土地资源的占用和消耗、有用物质回收（变废为宝或废物资源化）、减少环境污染等。
识记生态工程的基本原理及区别、生态工程的实例和发展前景基本知识，结合题目信息准确做答，注意知识之间的内在联系。
11、滤杯、滤膜和滤瓶 酒精灯火焰 接种 固体 鉴别 3100 提供氧气，使大肠杆菌与营养物质充分接触 高于 短于
【解析】
滤膜法是检测水样中大肠细菌数量的方法，将一定量水样注入已灭菌的微孔薄膜的滤器中，经过抽滤，细菌被截留在滤膜上，将滤膜贴于伊红美蓝培养基上，经培养后计数和鉴定滤膜上生长的大肠菌的菌落即可推测计算出水样中的大肠杆菌数；大肠杆菌在伊红-美蓝培养基上培养后菌落呈深紫色，并有金属光泽。
【详解】
（1）过滤待测水样需要用到滤杯、滤膜和滤瓶，其中需要进行灭菌处理的有滤杯、滤膜和滤瓶，与过滤有关的操作都要在酒精灯火焰旁进行，防止杂菌的污染。
（2）将完成过滤之后的滤膜紧贴在EMB培养基上，可将滤膜上的菌体“复印”在培养基上，使其在培养基上生长，这属于微生物培养中的接种操作。从物理状态分析，EMB培养基属于固体培养基，从功能上分析，由于培养基上加有伊红美蓝，所以属于鉴别培养基。
（3）在无菌操作下将10ml 待测水样加入到90ml无菌水中，即稀释了10倍，稀释后的菌液通过滤膜法测得EMB培养基上的菌落数平均为124，黑色菌落数平均为31，由于黑色菌落为大肠杆菌，所以可推测1升待测水样中的大肠杆菌数目为31×（1000÷10）=3100个。
（4）用摇床振荡培养，可达到供应微生物所需氧气，同时使营养物质与大肠杆菌充分接触的目的，使大肠杆菌的繁殖速度加快。
（5）不同种类的微生物，一般需要不同的培养温度和培养时间，在培养箱中培养时，细菌培养温度应高于霉菌培养温度，但培养时间短于霉菌培养时间。
本题以实验流程图为载体，考查了微生物的分离与计数的有关知识，要求考生掌握滤膜法的原理和步骤，掌握无菌技术的主要内容，识记大肠杆菌鉴定的方法等，结合题干信息准确答题。
12、限制酶和DNA连接 CaCl2 基因突变
含有蛋白A基因的重组质粒、空质粒（pET质粒） 抗原-抗体杂交 抑菌圈 对人、畜、农作物和自然环境安全；不会造成基因污染；有效成分纯度较高
【解析】
（一）基因工程的基本工具
1、“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）
（1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。
（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。
（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。
2、“分子缝合针”——DNA连接酶
（1）两种DNA连接酶（E•cliDNA连接酶和T4DNA连接酶）的比较：
①相同点：都缝合磷酸二酯键。
②区别：E•cliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶来源于T4噬菌体，可用于连接粘性末端和平末端，但连接效率较低。
（2）与DNA聚合酶作用的异同：DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键．DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。
3、“分子运输车”——载体
（1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。
②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。
③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。
（2）最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。
（3）其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒。
（二）基因工程的基本操作程序
第一步：目的基因的获取
1、目的基因是指：编码蛋白质的结构基因。
2、原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成．人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。
3、PCR技术扩增目的基因
（1）原理：DNA双链复制
（2）过程：第一步：加热至90～95℃DNA解链；第二步：冷却到55～60℃，引物结合到互补DNA链；第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。
第二步：基因表达载体的构建
1、目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。
2、组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因
（1）启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。
（2）终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端。
（3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来．常用的标记基因是抗生素抗性基因。
第三步：将目的基因导入受体细胞
1、转化的概念：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。
2、常用的转化方法：
将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是 农杆菌转化法，其次还有基因枪法和 花粉管通道法等。
将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是 显微注射技术．此方法的受体细胞多是受精卵。
将目的基因导入微生物细胞：原核生物作为受体细胞的原因是 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少，最常用的原核细胞是 大肠杆菌，其转化方法是：先用Ca2+处理细胞，使其成为感受态细胞，再将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程。
3、重组细胞导入受体细胞后，筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。
第四步：目的基因的检测和表达
1、首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是采用 DNA分子杂交技术。
2、其次还要检测目的基因是否转录出了mRNA，方法是采用用标记的目的基因作探针与 mRNA杂交。
3、最后检测目的基因是否翻译成蛋白质，方法是从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原——抗体杂交。
4、有时还需进行个体生物学水平的鉴定，如转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。
【详解】
（1）在基因工程中，利用相同的限制酶和DNA连接酶处理蛋白A基因和pET质粒，得到重组质粒；大肠杆菌作为受体细胞，需要用氯化钙处理，以便重组质粒的导入。
（2）①根据题意和图示分析，经过4次PCR技术后获得了新的基因，这是一种定点的基因突变技术。
②与研究者推测不同生物对密码子具有不同的偏好，因而设计了与蛋白A基因结合的两对引物（引物B和C中都替换了一个碱基），因此4次PCR应该分别选择如图所示的引物如下表所示：
（3）根据实验中的对照原则，若要比较新蛋白A的表达效率是否提高，则需设置三组实验实验变量的处理分别为：仅含新蛋白质A的重组质粒，仅含蛋白A的重组质粒和空白对照（仅含空质粒，以排除空质粒可能产生的影响）。因此，将含有新蛋白A基因的重组质粒和含有蛋白A基因的重组质粒、空质粒（pET质粒）分别导入大肠杆菌，提取培养液中的蛋白质，用抗原——抗体杂交方法检测并比较三组受体菌蛋白A的表达产物，判断新蛋白A基因表达效率是否提高。由于蛋白A（或新蛋白A）具有抗菌作用，所以为检测表达产物的生物活性，研究者将上述各组表达产物加入到长满了植物病菌的培养基上，培养一段时间后，比较抑菌圈的大小，以确定表达产物的生物活性大小。
（4）作为微生物农药，使用时常喷洒蛋白A基因的发酵产物而不是转蛋白A基因的大肠杆菌，是因为蛋白A基因的发酵产物对人、畜、农作物和自然环境安全；不会造成基因污染；有效成分纯度较高。
本题主要考查基因工程、PCR技术等相关知识，考生需要理解和记忆相关知识，并学会应用所学知识正确答题。
引物A
引物B
引物C
引物D
PCR1
PCR2
PCR3
PCR4
引物A
引物B
引物C
引物D
PCR1
√
√
×
×
PCR2
×
×
√
√
PCR3
×
×
×
×
PCR4
√
×
×
√
引物A
引物B
引物C
引物D
PCR1
√
√
×
×
PCR2
×
×
√
√
PCR3
×
×
×
×
PCR4
√
×
×
√