安徽宿州市皖北十三校2025-2026学年高二下学期5月期中考试生物试卷（Word版附解析）

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（本卷满分100分，考试时间75分钟）
一、选择题：本题共15小题，每小题只有一个选项符合题目要求，每小题3分，共45分。
1. 下列关于传统发酵技术的叙述，错误的是（ ）
A. 醋酸菌在无氧条件下利用乙醇产生醋酸B. 酵母菌在无氧条件下利用葡萄汁产生酒精
C. 泡菜腌制利用的乳酸菌是异养厌氧型生物D. 腐乳制作利用了毛霉等微生物将蛋白质分解
【答案】A
【解析】
【详解】A、醋酸菌是严格好氧型细菌，发酵全程需要有氧环境，无氧条件下醋酸菌代谢受抑制甚至死亡，无法利用乙醇产生醋酸，A错误；
B、酵母菌是兼性厌氧型微生物，无氧条件下可通过无氧呼吸将葡萄汁中的葡萄糖分解为酒精和二氧化碳，B正确；
C、泡菜腌制的主要菌种是乳酸菌，乳酸菌为异养厌氧型生物，在无氧环境下可将有机物分解为乳酸，C正确；
D、腐乳制作的主要微生物是毛霉，毛霉等微生物可分泌蛋白酶，将豆腐中的蛋白质分解为小分子肽和氨基酸，D正确。
2. 微生物培养时常利用无菌技术避免杂菌的污染。下列相关叙述错误的是（ ）
A. 紫外线进行消毒前可以适量喷洒苯酚或煤酚皂溶液
B. 实验中应避免已灭菌的材料或用具与周围物品接触
C. 配制好的培养基应放入干热灭菌箱中进行干热灭菌
D. 接种前后，接种环都需要在酒精灯火焰上进行灼烧
【答案】C
【解析】
【详解】A、用紫外线进行消毒时，适量喷洒苯酚或煤酚皂溶液可以增强杀菌效果，A正确；
B、已灭菌的材料或用具接触周围未灭菌的物品会被杂菌污染，因此实验中要避免该操作，B正确；
C、培养基含有水分和营养物质，若使用干热灭菌会导致水分蒸发、营养成分被破坏，培养基应采用高压蒸汽灭菌法灭菌，干热灭菌法仅适用于耐高温、需保持干燥的玻璃器皿、金属用具等的灭菌，C错误；
D、接种前灼烧接种环可杀死表面杂菌，避免污染菌种；接种后灼烧可杀死残留的菌种，避免污染环境、感染操作者，因此接种前后接种环都需在酒精灯火焰上灼烧，D正确。
3. 为纯化菌种，在鉴别培养基上划线接种纤维素降解细菌，培养结果如图所示。刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物。下列叙述正确的是（ ）

A. 倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上
B. 图中Ⅰ、Ⅱ区的细菌数量均太多，应从Ⅲ区挑取单菌落
C. 该实验结果因单菌落太多，不能达到菌种纯化的目的
D. 菌落周围的纤维素被降解后，可被刚果红染成红色
【答案】B
【解析】
【分析】分析平板结果可知，采用的接种方法为平板划线法，且划线顺序是Ⅰ区、Ⅱ区、Ⅲ区，可以看到Ⅲ区中出现了单菌落。
【详解】A、倒平板过程中不能打开培养皿的皿盖，A错误；
B、Ⅰ区、Ⅱ区没有出现单菌落，说明细菌数量太多，故应从Ⅲ区挑取单菌落，B正确；
C、出现单菌落即达到了菌种纯化的目的，C错误；
D、刚果红是一种染料，它可以与纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应，D错误。
故选B。
4. 某公司推出一款新型免洗洗手凝胶，为衡量该凝胶的清洁效果，研究人员检测了凝胶洗手前后，手部细菌的含量，检测流程如图。下列叙述正确的是（ ）
A. 除图中操作外，还需设置一组未接种的空白培养基作为对照
B. 统计手部细菌的含量时，选择使用的接种方法是平板划线法
C. 培养基上的一个菌落只可能来源于样品稀释液中的一个活菌
D. 初步判断培养基上菌种的类型，必须用显微镜观察菌体形状
【答案】A
【解析】
【详解】A、除图中操作外，还需要设置一组未接种的空白培养基进行培养，以验证培养基是否被杂菌污染，A正确；
B、平板划线无法得知稀释倍数，不能用于活菌计数，故统计洗手前手部细菌的数量，选择的接种方法是稀释涂布平板法，B错误；
C、当两个或多个细胞连在一起时，平板上显示的只是一个菌落，故培养基上的一个菌落可能来源于样品稀释液中的一个或几个活菌，C错误；
D、由于菌落肉眼可见，故初步判断培养基上菌种的类型，可用肉眼观察菌落的形态、大小、颜色等特征，D错误。
5. 近年来，在农牧业生产上，微生物肥料、微生物农药和微生物饲料得到广泛应用。下列相关叙述错误的是（ ）
A. 微生物肥料利用代谢产生的有机酸、生物活性物质等发挥作用
B. 微生物农药是利用微生物或其代谢物来防治病虫害的
C. 微生物农药防治病虫害是一种重要的生物防治手段
D. 从微生物细胞中提取的单细胞蛋白，可制成微生物饲料
【答案】D
【解析】
【详解】A、微生物肥料可通过微生物代谢产生的有机酸溶解土壤中难溶性矿质元素，同时代谢产生的生物活性物质（如生长素、细胞分裂素类似物）可促进作物生长，A正确；
B、微生物农药的防治原理是利用致病微生物本身，或微生物产生的杀虫、抑菌代谢产物来消灭病虫害，B正确；
C、生物防治是利用生物种间关系防控有害生物的手段，微生物农药防治病虫害属于典型的生物防治，可减少化学农药污染，C正确；
D、单细胞蛋白指的是通过发酵获得的微生物菌体本身，并非从微生物细胞中提取的成分，可直接制成微生物饲料，D错误。
6. 科研人员欲将百脉根（2n=12，可合成单宁）和紫花苜蓿（2n=32）进行体细胞融合培养，以获得可合成单宁的紫花苜蓿新品种。若只考虑两两融合的杂种细胞，下列说法正确的是（ ）
A. 可以在无菌水中诱导两种细胞的原生质体融合
B. 杂种细胞在细胞分裂过程中最多可以含有88条染色体
C. 该过程在有光照的条件下进行，培养基中不需要添加有机物成分
D. 紫花苜蓿新品种可合成单宁，说明百脉根和紫花苜蓿不存在生殖隔离
【答案】B
【解析】
【详解】A、原生质体无细胞壁保护，在无菌水中会吸水涨破，且原生质体融合需在等渗溶液中用PEG、电刺激等方法诱导，A错误；
B、两两融合的杂种细胞染色体数目为两种体细胞染色体数之和，即12+32=44条，有丝分裂后期着丝粒分裂，染色体数目加倍，最多可含有88条染色体，B正确；
C、杂种细胞经脱分化形成愈伤组织的阶段（一般不能见光）无叶绿体，无法进行光合作用合成有机物，培养基中必须添加蔗糖等有机物成分，C错误；
D、生殖隔离指自然状态下物种间不能交配，或交配后不能产生可育后代，体细胞杂交是人为的细胞融合技术，不能说明两个物种不存在生殖隔离，D错误。
7. 植物组织培养过程中，需要用到①诱导愈伤组织培养基、②诱导生根培养基和③诱导生芽培养基。下列有关这三种培养基以及菊花组织培养的叙述，正确的是（ ）
A. 菊花的幼茎茎段在离体培养过程中，最后用到的培养基是③
B. 若接种的外植体是花药，则离体培养得到的植株都是单倍体
C. 培养基中含有营养物，诱导愈伤组织、生根、生芽期间都不需要光照
D. 单倍体育种、脱毒苗的培育、植物体细胞杂交都离不开植物组织培养
【答案】D
【解析】
【详解】A、植物组织培养的顺序为：先使用①诱导愈伤组织培养基获得愈伤组织，再用③诱导生芽培养基诱导生芽，最后用②诱导生根培养基诱导生根，因此最后用到的是②，A错误；
B、花药包含花药壁体细胞和花粉（生殖细胞），若花药壁体细胞发育为植株，其染色体数目与母本体细胞一致，不属于单倍体，B错误；
C、诱导愈伤组织阶段需要避光，避免愈伤组织提前分化，但诱导生芽后需要光照，用于叶绿素合成和光合作用，C错误；
D、单倍体育种需经过花药离体培养（植物组织培养技术）获得单倍体植株；脱毒苗是取茎尖分生组织经植物组织培养获得；植物体细胞杂交得到的杂种细胞需经植物组织培养发育为杂种植株，三者都离不开植物组织培养，D正确。
8. 紫草宁是从紫草愈伤组织细胞中提取的一种药物和色素，具有抗菌、消炎和抗肿瘤等活性。利用植物细胞培养生产的紫草宁是世界上首例药用植物细胞工程产品。下列关于植物细胞工程的说法，正确的是（ ）
A. 植物细胞培养的目的主要是获得植物生长和生存所必需的次生代谢产物
B. 植物组织培养时，应对外植体进行灭菌处理以防止培养基及愈伤组织污染
C. 在培养愈伤组织时加入细胞融合的诱导剂，可直接获得染色体加倍的细胞
D. 叶肉细胞往往带病毒且细胞的全能性较低，故培育脱毒植物适宜选茎尖而不选叶片
【答案】D
【解析】
【分析】1.植物组织培养就是在无菌和人工控制的条件下，将离体的植物器官、组织、细胞，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。
2.植物组织培养的条件：①细胞离体和适宜的外界条件（如适宜温度、适时的光照、pH和无菌环境等）；②一定的营养（无机、有机成分）和植物激素（生长素和细胞分裂素）。
【详解】A、植物细胞培养的主要目的是通过大规模的细胞培养，以获得人类所需的细胞次生代谢产物，细胞次级代谢产物不是植物细胞生长所必须得，A错误；
B、植物组织培养时，应对外植体进行消毒处理，培养基需要进行灭菌处理，这样可以防止杂菌污染，B错误；
C、在培养愈伤组织时加入细胞融合的诱导剂，不能直接获得染色体加倍的细胞，因为植物细胞具有细胞壁，阻止了原生质体的融合，C错误；
D、叶肉细胞往往带病毒且细胞的全能性较低，而茎尖不仅不带毒，而且全能性较高，故培育脱毒植物适宜选茎尖而不选叶片，D正确。
故选D。
9. 新开发药物X具有抗癌效果好、副作用小等优点，某小组拟通过培养小鼠肝癌细胞（甲）和正常肝细胞（乙）对其抗癌效果进行验证。下列说法正确的是（ ）
A. 培养甲和乙时均会出现明显的接触抑制现象
B. 在进行细胞培养时，应拧紧培养瓶盖进行培养
C. 需另设一种抗癌药物进行实验才能达到实验目的
D. 是否定期更换培养液对实验结果没有任何影响
【答案】C
【解析】
【详解】A、甲是肝癌细胞，癌细胞细胞膜上糖蛋白减少，细胞黏着性下降，丧失接触抑制特性，只有正常肝细胞乙会出现接触抑制现象，A错误；
B、动物细胞培养需要95%空气（为细胞代谢提供O₂）和5%CO₂（维持培养液pH）的气体环境，需松盖培养保证气体交换，拧紧瓶盖会阻断气体交换，导致细胞无法正常代谢甚至死亡，B错误；
C、本实验需验证药物X“抗癌效果好、副作用小”的特点，除设置不加药物的空白对照组外，还需设置添加已知抗癌药物的阳性对照组，通过对比才能证明X的抗癌效果更优、副作用更小，因此需另设一种抗癌药物组才能达到实验目的，C正确；
D、定期更换培养液可补充营养物质、清除细胞代谢产生的有毒废物，若不更换培养液会导致细胞营养不足、被代谢废物毒害，对实验结果有显著影响，D错误。
10. 体细胞核移植技术在畜牧业、医药卫生、拯救濒危动物等方面有着广泛的应用前景。下列关于动物细胞核移植技术的叙述，错误的是（ ）
A. 哺乳动物体细胞核移植技术的难度明显高于胚胎细胞核移植技术
B. 克隆动物与核供体动物的遗传性状完全相同，原因是遗传物质主要分布在细胞核中
C. 利用体细胞核移植技术培育的转基因克隆动物，可以作为生物反应器生产医用蛋白
D. 转基因克隆动物的细胞、组织或器官可用于异体移植从而达到治疗人类疾病的目的
【答案】B
【解析】
【详解】A、哺乳动物体细胞分化程度高，全能性难以恢复，胚胎细胞分化程度低，全能性更容易表达，因此体细胞核移植技术的难度明显高于胚胎细胞核移植技术，A正确；
B、克隆动物的细胞核遗传物质来自核供体，但细胞质遗传物质来自提供去核卵母细胞的个体，同时生物性状还会受环境因素影响，因此克隆动物与核供体动物的遗传性状不会完全相同，B错误；
C、将药用蛋白基因导入受体细胞后，通过体细胞核移植技术培育得到的转基因克隆动物可作为生物反应器，生产所需的医用蛋白，C正确；
D、对转基因克隆动物进行基因改造后，其细胞、组织或器官用于异体移植时可降低免疫排斥反应，可用于治疗人类相关疾病，D正确。
11. 科学家发现了一种特定功能的人体蛋白X，并制备了一种膀胱生物反应器来生产蛋白X，下图是生产的基本流程。据图分析下列叙述正确的是（ ）
A. 步骤①进行前需要给精子提供足够的能量
B. 步骤②常采用农杆菌转化法将重组载体注入受精卵
C. 步骤③需配制一系列含有不同成分的培养液，培养不同时期的胚胎
D. 步骤④需要用到胚胎移植技术，且需对代孕母牛注射免疫抑制剂
【答案】C
【解析】
【详解】A、步骤①是体外受精，在体外受精前需要对精子进行获能处理，而不是提供足够能量，获能处理是使精子获得受精能力，A错误；
B、步骤②是将重组载体注入到动物的受精卵中，常采用的方法是显微注射法，B错误；
C、从受精卵到早期胚胎需要进行体外培养，不同发育阶段的胚胎的营养需求不同，因此需要配制一系列含有不同成分的培养液，C正确；
D、步骤④是胚胎移植，受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应，所以不需要对代孕母牛注射免疫抑制剂，D错误。
12. 克隆技术可用于生殖性克隆和治疗性克隆，下列相关叙述错误的是（ ）
A. 步骤①通常选用培养至减数分裂Ⅱ时期的次级卵母细胞
B. 步骤②一般需要向发育培养液中加入抗生素和动物血清
C. 步骤③胚胎发育期间囊胚会进一步扩大导致滋养层破裂
D. 生殖性克隆需将胚胎移入同期发情处理的受体牛子宫内
【答案】C
【解析】
【详解】A、体细胞核移植时，步骤①通常选用培养至减数分裂Ⅱ中期（MⅡ期）的次级卵母细胞，这个时期的卵母细胞具备受精能力，是核移植的常用材料，A正确；
B、步骤②是核移植后的细胞培养，动物细胞培养的培养液中需要加入抗生素（防止污染）和动物血清（提供天然营养成分），B正确；
C、步骤③是胚胎发育，囊胚进一步扩大导致的是透明带破裂（孵化），C错误；
D、生殖性克隆需要将早期胚胎移入同期发情处理的受体牛子宫内，保证胚胎的着床和发育，D正确。
13. 在以洋葱为材料进行“DNA的粗提取与鉴定” 实验中，下列有关说法正确的是（ ）
A. 在切碎的洋葱中加入一定量的研磨液，充分研磨，过滤后弃去滤液
B. 实验中加入预冷的酒精，静置后出现的白色丝状物即是粗提取的DNA
C. 实验过程中可在2ml/L的NaCl溶液中观察到析出的DNA分子
D. 鉴定DNA时，加入二苯胺试剂后振荡摇匀即可观察颜色变化
【答案】B
【解析】
【详解】A、洋葱研磨后DNA溶解在研磨液的滤液中，过滤后应收集滤液、弃去滤渣，A错误；
B、DNA不溶于预冷的酒精，而细胞中多数蛋白质等杂质可溶于酒精，静置后析出的白色丝状物即为粗提取的DNA，B正确；
C、DNA在2ml/L的NaCl溶液中溶解度较高，不会析出，DNA仅在0.14ml/L的NaCl溶液中溶解度最低、大量析出，C错误；
D、二苯胺鉴定DNA时，加入试剂摇匀后需要沸水浴加热，才能观察到蓝色反应，仅振荡无法出现颜色变化，D错误。
14. 将目的基因导入受体细胞是基因工程的重要操作，下列方法的选择中正确的是（ ）
A. 常用Ca2+处理小鼠受精卵使其易吸收周围环境中的DNA分子
B. 可用花粉管通道法将目的基因导入玉米的茎尖分生区细胞中
C. 常用显微注射法将目的基因导入大肠杆菌细胞中
D. 农杆菌转化法需先将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA中
【答案】D
【解析】
【详解】A、Ca2+处理法仅适用于原核细胞制备感受态细胞，使其易于吸收外源DNA；小鼠受精卵为动物细胞，常用显微注射法导入目的基因，A错误；
B、花粉管通道法是利用植物授粉后形成的花粉管通道，将目的基因导入胚囊中的受精卵或早期胚细胞，无法用于导入茎尖分生区细胞，B错误；
C、大肠杆菌为原核生物，常用Ca2+处理成感受态细胞导入目的基因；显微注射法是将目的基因导入动物细胞的常用方法，C错误；
D、农杆菌的Ti质粒上的T-DNA具有可转移至受体细胞并整合到受体细胞染色体DNA上的特点，因此农杆菌转化法需先将目的基因插入Ti质粒的T-DNA中，D正确。
15. 一种天然蛋白t-PA能有效降解血栓，是心梗和脑血栓的急救药，而注射大剂量的t-PA会诱发颅内出血。研究证实，将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，能显著降低其副作用。据此，先对天然t-PA基因的碱基序列进行改造获得t-PA改良基因，再通过基因工程的方法最终获得性能优异的改良t-PA蛋白。下列说法正确的是（ ）
A. 上述对t-PA基因进行改造的过程利用了基因突变的原理
B. 构建重组质粒时需要选用限制酶Xma Ⅰ和Nhe Ⅰ切割质粒
C. 使用T4DNA连接酶不能将t-PA改良基因与质粒pCLY11连接
D. 含重组质粒的受体细胞在含新霉素的培养基上能存活且呈蓝色
【答案】A
【解析】
【详解】A、蛋白质工程中，我们通过人工定点突变（比如 PCR 定点诱变）对天然基因的碱基序列进行改造，这本质上是定向的基因突变，因此该过程利用了基因突变的原理，A正确；
B、根据碱基互补配对原则，t-PA基因的左端黏性末端为CCGG-，为XmaⅠ酶切得到，t-PA基因的右端黏性末端为GATC-，为BglⅡ酶切得到，质粒需要用相同的酶进行酶切以得到与目的基因相同的黏性末端，因此质粒需选用限制酶XmaⅠ和BglⅡ切割质粒pCLY11，B错误；
C、T4DNA连接酶能连接黏性末端，还可以连接平末端，使用T4DNA连接酶能将t-PA改良基因与质粒pCLY11连接，C错误；
D、t-PA能高效降解因血浆纤维蛋白凝聚而成的血栓，成功转入重组质粒的受体细胞在培养基上会出现具有抗性的白色菌落，D错误。
二、非选择题：本题共5小题，共55分。
16. 合理使用消毒液有助于减少传染病的传播。某同学比较了3款消毒液A、B、C杀灭细菌的效果，结果如图所示。回答下列问题。
（1）该同学采用菌落计数法测定细菌数量时，统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，原因是_____。
（2）该同学从100 mL细菌原液中取1 mL加入无菌水，得到10 mL稀释菌液，再从稀释菌液中取200 μL涂布平板，菌落计数的结果为100，据此推算细菌原液中细菌浓度为_____个/mL，上述方法称为_____。
（3）菌落计数过程中，涂布器应先在酒精灯上灼烧，冷却后再涂布。灼烧的目的是_____，冷却的目的是_____。
（4）据图可知杀菌效果最好的消毒液是A，判断依据是_____（答出2点即可）。
【答案】（1）当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落
（2） ①. 5000##5×103 ②. 稀释涂布平板法
（3） ①. 杀灭涂布器上杂菌，防止杂菌污染 ②. 防止涂布器温度过高杀死平板上的菌种
（4）相同处理时间内，活菌减少量最多；活菌减少量相同时，处理时间最短
【解析】
【小问1详解】
当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，所以用菌落计数法测定细菌数量时，统计的菌落数往往比活菌的实际数目少。
【小问2详解】
从100mL细菌原液中取1mL加入无菌水中得到10mL稀释菌液，即稀释了10倍，1mL细菌原液中细菌浓度=（菌落数÷菌液体积）×稀释倍数=（100÷0.2）×10=5×103个/mL，这种通过统计平板上的菌落数来推测样品中活菌数的方法称为稀释涂布平板法。
【小问3详解】
菌落计数过程中，涂布器应先在酒精灯上灼烧，冷却后再涂布，灼烧的目的是杀灭涂布器上杂菌，防止杂菌污染，冷却的目的是防止涂布器温度过高杀死平板上的菌种。
【小问4详解】
坐标为活细胞减少量，数值越大说明被杀死的细菌越多、杀菌效果越好，由图可知，A消毒液在相同处理时间内，活菌减少量最多；活菌减少量相同时，处理时间最短，因此A消毒液杀菌效果最好。
17. 辣椒素是辣椒中的主要活性成分，具有止痛、抗炎等功效，被广泛用于食品保健、医药工业等领域。辣椒素的获得途径如图所示，请回答下列问题。
（1）图中①和②分别表示对辣椒进行植物组织培养过程中的_____和_____过程。
（2）当培养基中的生长素和细胞分裂素用量的比值_____（填“高”或“低”）时，有利于芽的分化。对培养基彻底灭菌时，应采取的灭菌方法是_____。
（3）细胞产物的工厂化生产是植物组织培养技术的重要应用。高产细胞系须在_____（填“固体”或“液体”）培养基中培养，再从中提取辣椒素。
（4）某研究小组欲培育出同时具有辣椒和另一种植物优良特性的新型植物，通常用_____酶进行处理从而获得两种植物的原生质体，再诱导融合，进而培育作物新品种，该技术依据的生物学原理有_____。
【答案】（1） ①. 脱分化 ②. 再分化
（2） ①. 低 ②. 高压蒸汽灭菌或湿热灭菌
（3）液体 （4） ①. 纤维素酶和果胶（酶） ②. 细胞膜的流动性和（植物）细胞的全能性
【解析】
【小问1详解】
①是由外植体形成愈伤组织，是脱分化过程，②是由愈伤组织形成根、芽，是再分化过程。
【小问2详解】
植物组织培养培养基：当生长素和细胞分裂素用量的比值相等时，利于愈伤组织形成，生长素和细胞分裂素用量的比值较高时，有利于生根，生长素和细胞分裂素用量的比值较低时，有利于生芽。常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、湿热灭菌（如高压蒸汽灭菌）等，对培养基彻底灭菌时，应采取的灭菌方法是高压蒸汽灭菌或湿热灭菌。
【小问3详解】
细胞产物的工厂化生产需要使用液体培养基，培养液中的营养成分和细胞充分接触，培养至愈伤组织阶段，再在培养液中提取辣椒素。
【小问4详解】
欲培育出同时具有辣椒和另一种植物优良特性的新型植物，需要进行植物体细胞杂交，植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，所以通常用纤维素酶和果胶酶进行处理从而获得两种植物的原生质体，再诱导融合，再将杂种细胞经过植物组织培养技术培养成植株。该过程的主要技术原理是细胞膜的流动性（诱导原生质体融合的原理）和（植物）细胞的全能性（植物组织培养的原理）。
18. 为降低乳腺癌药物的副作用，实现对人类乳腺癌细胞的选择性杀伤，科研人员在单克隆抗体技术的基础上，构建抗体-药物偶联物（ADC），过程如图所示，请回答下列问题。
（1）本实验中，给小鼠注射的特定抗原应取自_____细胞。对小鼠多次注射该抗原的目的是_____。
（2）步骤①常用方法中与植物不同的是_____。
（3）经过步骤②③才能得到符合要求的杂交瘤细胞，其中步骤③筛选的目的是_____。
（4）步骤④是将获得的单克隆抗体和b_____通过接头结合在一起，从而获得ADC。
（5）研究发现，ADC在患者体内的作用如下图所示。
①单克隆抗体除了运载药物外，还有_____（答出两点）等应用。
②ADC是通过_____方式进入乳腺癌细胞后，细胞中的溶酶体可将其水解进而释放出药物，使癌细胞死亡。
【答案】（1） ①. 人的乳腺癌 ②. 刺激小鼠产生更多的符合需求的B淋巴细胞
（2）用灭活的病毒诱导
（3）选择出能产生特定抗体的杂交瘤细胞
（4）治疗乳腺癌的药物
（5） ①. 作为诊断试剂、治疗疾病 ②. 胞吞
【解析】
【小问1详解】
本实验目的是构建治疗乳腺癌的抗体药物偶联物（ADC），为了产生能特异性识别乳腺癌细胞的抗体，应该选择人的乳腺癌细胞作为抗原对小鼠进行免疫处理。对小鼠多次注射该抗原，是为了刺激小鼠的免疫系统，使其产生更多的符合需求的B淋巴细胞。
【小问2详解】
步骤①是诱导动物细胞融合，植物原生质体融合常用物理方法（如电融合法）和化学方法（如聚乙二醇），动物细胞融合除了这些方法外，常用的与植物不同的方法是用灭活的病毒诱导。
【小问3详解】
②表示筛选杂交瘤细胞，杂交瘤细胞产生的抗体不一定是需要的，故需要进行③克隆化培养和抗体检测两个过程，其目的是选择出能产生所需特定抗体的杂交瘤细胞。
【小问4详解】
步骤④是将获得的a单克隆抗体和b治疗乳腺癌的药物这两部分，通过接头结合在一起，从而获得ADC。因为单克隆抗体具有特异性识别能力，能将药物精准带到乳腺癌细胞处。
【小问5详解】
①ADC中的单克隆抗体能精确地定位乳腺癌细胞，让药物作用于乳腺癌细胞，而不是正常的细胞，可以降低乳腺癌治疗药物的副作用，这个过程依赖于特异性的抗原与抗体反应，可以有效地治疗疾病；单克隆抗体还可以作为诊断试剂，如检测相关基因有没有表达成蛋白质，或检测抗原的有无，故单克隆抗体除了运载药物外，还有作为诊断试剂、治疗疾病等应用。
②由图2可知，ADC通过胞吞进入乳腺癌细胞，溶酶体可以将ADC水解，释放出的药物进入细胞质基质，最终作用于细胞核，引起乳腺癌细胞的凋亡。
19. 中国科学家利用人体细胞得到的ipsc（诱导多能干细胞），在猪的体内培育出了一个“人-猪嵌合中期肾”，且维持到胚胎第28天，此外，研究人员还在猪的大脑和脊髓中发现了极少数的人源神经细胞，该研究实现了世界首例人源化肾脏异种再生的壮举。下图为实验过程示意图。
（1）过程②普遍使用的去核方法是_____，选择ipsc作为肾脏供体细胞的原因是_____。
（2）过程③中获得单细胞悬液时，将猪的生物组织剪碎后需要用_____酶处理，消化后的初次培养称为_____。
（3）在早期胚胎阶段，猪胚胎的细胞尚未完全分化成各种类型的细胞和组织，导入ipsc较容易，据此判断在构建嵌合胚胎过程中，可在猪胚胎发育至_____（编号选填，不定项）期注射人源供体细胞。
①受精卵②桑椹胚③早期囊胚④原肠胚
（4）合适的培养基是提高ipsc嵌合能力的关键，科研团队选择了5种培养基分别对ipsc进行培养，下列有关叙述错误的是_____。
A. 为保证培养的动物细胞处于无菌、无毒的环境，可加入一定的抗生素
B. 动物细胞培养应在5%CO₂的恒温箱中培养，CO₂的作用是刺激细胞呼吸
C. 如果用带有荧光标记的物质对ipsc进行标记，便于筛选出嵌合胚胎
D. 细胞体外培养液的适宜温度和PH一般与动物体的内环境接近
【答案】（1） ①. 显微操作法 ②. ipsc具有与胚胎干细胞类似的分裂和分化能力，在特定条件诱导下能定向分化为特定的组织器官
（2） ①. 胰蛋白或胶原蛋白 ②. 原代培养
（3） （4）B
【解析】
【小问1详解】
过程②是对猪卵母细胞去核，动物核移植中普遍使用的去核方法是显微操作法（用显微操作仪吸出卵母细胞的细胞核）。ipsc（诱导多能干细胞）具有与胚胎干细胞类似的分裂和多向分化潜能，在特定条件诱导下，可定向分化为肾脏等特定组织器官，同时避免了胚胎干细胞的伦理争议。
【小问2详解】
将猪的生物组织剪碎后，需要用胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）处理，分解细胞间的蛋白质，使细胞分散成单个细胞。 消化后的初次培养称为原代培养，当细胞贴壁生长到相互接触后，就需要进行传代培养。
【小问3详解】
①受精卵，刚受精，还未分裂，此时导入会直接影响整个胚胎的遗传背景，不符合嵌合设计，①错误；
②桑椹胚细胞尚未分化，都是全能干细胞，此时导入ipsc，细胞更容易整合，②正确；
③囊胚期分为内细胞团和滋养层，内细胞团具有多能性，此时注射ipsc到囊胚腔中，是嵌合实验的常用时期，③正确；
④原肠胚细胞已经开始分化，形成了三个胚层，此时导入的 iPSC 很难整合到胚胎中，④错误。
【小问4详解】
A、加入抗生素可以抑制杂菌生长，保证无菌无毒环境，A正确；
B、动物细胞培养中5% CO₂的作用是维持培养液的pH，不是刺激细胞呼吸，B错误；
C、用荧光标记ipsc，可通过荧光观察筛选出嵌合成功的胚胎，C正确；
D、细胞体外培养的温度和pH要与体内环境接近，保证细胞正常代谢，D正确。
20. 图1是某基因工程中构建重组质粒的过程示意图，载体质粒P0具有四环素抗性基因（）和氨苄青霉素抗性基因（）。请回答下列问题：
（1）利用PCR扩增获得的目的基因片段，其两端各自带有一个腺嘌呤脱氧核苷酸。载体P1用酶处理，在两端各添加了一个碱基为_____的脱氧核苷酸，形成P2；P2和目的基因片段需在_____酶的作用下，形成重组质粒P3。
（2）为筛选出含有重组质粒P3的菌落，采用含有不同抗生素的平板进行筛选，得到A、B、C三类菌落，其生长情况如下表（“+”代表生长，“-”代表不生长）。根据表中结果判断，应选择的菌落是_____（填表中字母）类，另外两类菌落质粒的导入情况分别是_____、_____。
（3）为鉴定筛选出的菌落中是否含有正确插入目的基因的重组质粒，拟设计引物进行PCR鉴定。图2所示为甲、乙、丙3种引物在正确重组质粒中的相应位置，PCR鉴定时应选择的一对引物是_____。研究人员用图中另外一对引物从某一菌落的质粒中扩增出了长度为400bp的片段，原因是_____，其选择的这对引物是_____。
【答案】（1） ①. 胸腺嘧啶（或T） ②. DNA连接
（2） ①. B ②. A类菌落含有P0 ③. C类菌落未转入质粒
（3） ①. 乙和丙 ②. 目的基因反向连接 ③. 甲和乙
【解析】
【分析】基因表达载体的基本结构包括复制原点、目的基因、标记基因、启动子、终止子等。根据题干信息和图形分析，P0是载体质粒，其含有的氨苄青霉素抗性基因（ampr）和四环素抗性基因（tetr）都属于标记基因，可用于检测目的基因是否导入受体细胞；EcRV酶为限制酶，其切割质粒后会破坏四环素抗性基因（tetr）。
【小问1详解】
据图分析，目的基因两侧自带的碱基为A，根据碱基互补配对原则，则在载体P1的两端需要各加一个碱基T的载体P2，再用DNA连接酶将P2与目的基因连接起来形成重组质粒P3；
【小问2详解】
根据以上分析已知，限制酶（EcRV酶）切割后破坏了四环素抗性基因，但是没有破坏氨苄青霉素抗性基因，因此含有重组质粒P3的菌落在含有四环素的培养基中应该不能生长，而在含有氨苄青霉素的培养基中能生长，结合表格分析可知，应该选择B类菌落。根据表格分析，A类菌落在氨苄青霉素和四环素的培养基中都能够生长，说明其导入的是P0；C类菌落在任何抗生素的培养基中都不能生长，说明其没有导入任何质粒。
【小问3详解】菌落类型
平板类型
A
B
C
无抗生素
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+
+
氨苄青霉素
+
+
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四环素
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氨苄青霉素+四环素
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