安徽省宿州市皖北十三校2025-2026学年高二下学期7月期末考试生物试题（Word版附解析）

这是一份安徽省宿州市皖北十三校2025-2026学年高二下学期7月期末考试生物试题（Word版附解析）试卷主要包含了选择题，填空题等内容，欢迎下载使用。
（试卷满分：100分；考试用时：75分钟）
一、选择题：本题共15小题，每小题3分，共45分。在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的。
1. 中国的许多传统美食制作过程蕴含了生物发酵技术。下列叙述正确的是（ ）
A. 泡菜制作过程中，密封处理有利于醋酸菌的代谢、繁殖
B. 馒头蒸制过程中，酵母菌一直进行细胞呼吸产生CO2使馒头蓬松
C. 果酒和果醋的发酵过程中，葡萄汁可以作为酵母菌和醋酸菌生长的培养基
D. 制作腐乳时，豆腐为青霉等微生物的生长提供了水、无机盐、碳源和氮源
【答案】C
【解析】
【详解】A、泡菜制作依赖乳酸菌的无氧发酵，醋酸菌是好氧菌，密封的无氧环境会抑制醋酸菌的代谢和繁殖，A错误；
B、馒头蒸制过程中高温会使酵母菌失活，无法继续进行细胞呼吸，馒头蓬松是酵母菌发酵阶段产生的CO2受热膨胀导致的，B错误；
C、葡萄汁含有水、糖类、无机盐、氮源等营养物质，既可以为酵母菌的果酒发酵提供营养，也可以为醋酸菌的果醋发酵提供营养，可作为二者生长的培养基，C正确；
D、制作腐乳的主要发酵微生物是毛霉，不是青霉，D错误。
2. 农田中化肥残留过多会影响土壤的理化性质。利用微生物分解残留化肥的效果较好，为了筛选并保存高效分解尿素的微生物，研究人员配制了两份培养基如下表所示。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 筛选尿素分解的微生物可以选择甲培养基
B. 乙培养基缺乏氮源不能用来培养分解尿素的微生物
C. 平板划线法时，灼烧后的接种环需每次在上次划线的末端划线
D. 采用平板划线法并选择菌落数在30～300之间的平板进行分解尿素的细菌计数
【答案】A
【解析】
【详解】A、甲培养基以尿素为唯一氮源，只有能合成脲酶分解尿素的微生物可利用尿素作为氮源生长，因此可用于筛选尿素分解菌，A正确；
B、乙培养基中的牛肉膏、蛋白胨都含有氮元素，可提供氮源，能够培养分解尿素的微生物，B错误；
C、平板划线法操作中，灼烧后的接种环需要冷却后才能在上次划线的末端划线，避免高温杀死待接种的菌种，选项未提及冷却步骤，操作描述错误，C错误；
D、平板划线法只能用于分离纯化单菌落，无法对微生物进行计数，计数应采用稀释涂布平板法，选择菌落数在30~300之间的平板统计，D错误。
3. 聚羟基脂肪酸酯（PHA）是由嗜盐细菌合成的一种胞内聚酯，它具有类似于合成塑料的理化特性，废弃后易被生物降解，可用于制造无污染的“绿色塑料”。科学家从某咸水湖中寻找生产PHA的菌种，流程图如下。下列叙述正确的是（ ）
A. 步骤②可用稀释涂布平板法接种到含合成塑料的选择培养基上
B. 挑取菌落时，应取多个菌落并分别测定嗜盐菌的PHA含量
C. 步骤③所用的培养基中营养物质浓度越高，对嗜盐菌的生长越有利
D. 将扩大培养所用的固体培养基放置在摇床上培养，以便于挑取菌落获得纯化菌株
【答案】B
【解析】
【详解】A、实验目的是筛选能合成PHA的嗜盐细菌，步骤②的选择培养基应为高盐培养基，用于筛选嗜盐菌，不需要添加合成塑料，A错误；
B、不同单菌落的嗜盐菌合成PHA的能力可能存在差异，挑取菌落时需取多个菌落分别测定PHA含量，才能筛选出PHA高产的目标菌株，B正确；
C、若培养基营养物质浓度过高，会导致培养基渗透压过高，嗜盐细菌会渗透失水，反而抑制菌体生长，并非营养浓度越高越有利，C错误；
D、扩大培养需使用液体培养基，将液体培养基放置在摇床上培养可增加溶氧量，利于菌体增殖，固体培养基不适用于摇床培养，D错误。
4. 木聚糖酶可以将木聚糖（植物细胞壁的成分之一）降解为木糖，在日常工业生产中，木聚糖酶可以用黑曲霉发酵生产。有关叙述正确的是（ ）
A. 在发酵生产中选育出的优良菌种可以直接接种
B. 接种后的液体培养基需要进行严格的灭菌处理
C. 发酵结束后，经过滤、沉淀即可获得所需产品
D. 调节通气量和搅拌速度可以改变培养液中溶氧量
【答案】D
【解析】
【详解】A、工业发酵生产时，选育出的优良菌种需要先进行扩大培养，积累足够数量的菌种后才能接种，不能直接接种，A错误；
B、培养基的灭菌处理需要在接种前完成，接种后灭菌会杀死目的菌种，导致发酵失败，B错误；
C、木聚糖酶是黑曲霉分泌到发酵液中的胞外酶，过滤、沉淀仅能去除菌体等杂质，还需要进一步的分离纯化才能得到符合要求的木聚糖酶产品，C错误；
D、增大通气量可以直接增加进入培养液的氧气量，搅拌可以促进空气与培养液充分混合，提升氧气溶解效率，因此调节二者可以改变培养液的溶氧量，D正确。
5. 下图是利用番茄植株的茎尖培养脱毒植株的过程示意图，下列叙述正确的是（ ）
A. ①～③过程中使用的培养基在成分上保持不变
B. ①阶段茎尖组织在离体的情况下通过再分化形成愈伤组织
C. 为了提供营养和调节渗透压，培养基中应添加适量蔗糖
D. 进行病原体接种实验，可筛选出具有高抗性的脱毒植株
【答案】C
【解析】
【详解】A、①为脱分化过程，②为再分化过程，两个过程需要的生长素和细胞分裂素的比例不同，因此培养基成分存在差异，A错误；
B、①阶段离体的茎尖组织是通过脱分化形成愈伤组织，而非再分化，B错误；
C、蔗糖可为培养的植物组织提供碳源等营养，同时可以调节培养基的渗透压，维持细胞的正常形态，C正确；
D、脱毒植株是利用病毒极少甚至无病毒的茎尖培养得到的不含病毒的植株，其遗传物质未发生改变，不具备抗病毒的抗性，无法通过病原体接种实验筛选高抗性脱毒植株，D错误。
6. 将单克隆抗体与前体药物的专一性活化酶偶联（简称抗体导向酶偶联）是特异性治疗肿瘤并减少对正常细胞伤害的最新研究方向。碱性磷酸酶是抗肿瘤药物多柔比星前体的专一性活化酶，医学研究中利用抗体导向酶偶联机理将碱性磷酸酶与单克隆抗体制成“生物导弹”，通过活化多柔比星使其对肿瘤细胞的DNA造成损伤，进而抑制以DNA为模板进行的生理活动，达到治疗肿瘤的目的。下列说法正确的是（ ）
A. 制备单克隆抗体的过程中至少要经过两次筛选，其原理和目的均不同
B. 具有专一性的多柔比星催化肿瘤细胞的DNA降解，从而阻止翻译过程
C. 生物导弹综合利用碱性磷酸酶的定向制导作用和单克隆抗体的特异性杀伤能力
D. 为获得单克隆抗体应给小鼠注射肿瘤细胞表面抗原，得到能产生特定抗体的T细胞
【答案】A
【解析】
【详解】A、制备单克隆抗体过程中，第一次筛选是利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，原理是只有杂交瘤细胞可在选择培养基中存活增殖，目的是获取杂交瘤细胞；第二次筛选通过抗原-抗体特异性杂交，筛选出能产生所需特异性抗体的杂交瘤细胞，两次筛选的原理和目的均不同，A正确；
B、多柔比星是抗肿瘤药物，无催化功能，且翻译的模板是mRNA，多柔比星损伤DNA会抑制DNA复制和转录过程，不能阻止翻译，B错误；
C、“生物导弹”是单克隆抗体发挥定向制导作用，特异性识别肿瘤细胞，碱性磷酸酶的功能是活化多柔比星前体，单克隆抗体本身不具备杀伤能力，C错误；
D、只有浆细胞（效应B细胞）能产生抗体，T细胞不能产生抗体，D错误。
7. 第三次全国大熊猫野外种群调查显示，全国野生大熊猫不足1600只，为保护和繁殖大熊猫，科研人员进行了如图实验，相关叙述正确的是（ ）
A. 熊猫乙和熊猫丙的获得采用胚胎分割技术时应注意将囊胚均等分割
B. 激素处理可使供体超数排卵，而代孕受体在移植前不需要进行任何处理
C. 为保持精子与卵母细胞活性，采集到卵母细胞与精子后应马上进行体外受精
D. 克隆熊猫培育成功的部分原因是卵母细胞的细胞质具有调控细胞核发育的作用
【答案】D
【解析】
【详解】A、熊猫乙和熊猫丙通过胚胎分割技术获得，若对囊胚阶段的胚胎进行分割，必须将囊胚的内细胞团均等分割，避免影响分割后胚胎的恢复和发育，而非对囊胚均等分割，A错误；
B、胚胎移植前需要对代孕受体进行同期发情处理，使受体和供体生殖器官的生理状态一致，保证胚胎可以正常着床，B错误；
C、采集的卵母细胞需要培养至减数第二次分裂中期，精子需要经过获能处理后才具备受精能力，不能采集后立即进行体外受精，C错误；
D、克隆熊猫通过体细胞核移植技术培育，卵母细胞的细胞质中含有调控细胞核全能性表达的物质，能够调控细胞核发育，是克隆培育成功的原因之一，D正确。
8. BamHI、MbI、SmaI三种限制酶的识别序列和切割位点依次为5'-G↓GATCC-3'、5'-↓GATC-3'、5'-CCC↓GGG-3'。如图表示某DNA片段的部分碱基序列，已知其余序列不含这三种限制酶的识别序列。下列叙述正确的是（ ）
A. 若用SmaI完全切割该DNA，则其产物的长度为634bp、896bp、758bp
B. 若虚线方框内的碱基对被T—A替换，则用SmaI完全切割该DNA可产生3种片段
C. 若用MbI和BamHI切割该DNA，可形成相同的黏性末端
D. 用SmaI切割该DNA产生的片段，用E.cliDNA连接酶重新将其连接效率较高
【答案】C
【解析】
【详解】A、限制酶SmaI的酶切位点是5′-CCC↓GGG-3'，在图1中有两个限制酶SmaI的酶切位点，DNA将被切割成三个片段，结合图解，三个片段的长度分别是637bp、890bp、761bp，A错误；
B、发生碱基对替换后，基因中只有一个限制酶SmaI酶切位点，用SmaI完全切割后出现长度分别是634+896-3=1527bp、758+3=1761bp的两种片段，B错误；
C、由题可知，MbI和BamHI识别序列的中间序列相同，因此若用MbI和BamHI切割DNA，可形成相同的黏性末端，C正确；
D、用SmaI切割DNA产生的片段产生的是平末端，E.cliDNA连接酶连接具有平末端的DNA片段的效率要远远低于T4DNA连接酶，D错误。
9. 地中海贫血症属于常染色体遗传病。一对夫妇生有一位重型β地中海贫血症患儿，分析发现，患儿血红蛋白β链第39位氨基酸的编码序列发生了突变（C→T）。用PCR扩增包含该位点的一段DNA片段1，突变序列的扩增片段可用一种限制酶酶切为大小不同的两个片段m和s；但正常序列的扩增片段不能被该酶酶切，如图甲。目前患儿母亲再次怀孕，并接受了产前基因诊断。家庭成员及胎儿的PCR扩增产物酶切电泳带型示意图见图乙（终止密码子为UAA、UAG、UGA）。下列相关的叙述，正确的是（ ）
A. PCR扩增时需要通过解旋酶断开氢键形成能与引物结合的模板
B. 患儿患病可能的原因是父亲的原始生殖细胞在减数分裂产生配子时，发生了基因突变
C. 从基因表达水平分析，其患病是由于突变后终止密码子提前出现，导致翻译提前终止
D. 若不发生变异等异常情况，该夫妇将来再生一个和胎儿的基因型相同的概率为1/4
【答案】C
【解析】
【详解】A、PCR扩增中，是通过高温加热使氢键断裂解开DNA双链，不需要额外加入解旋酶，A错误；
B、若相关的基因用A、a表示，图（a）显示：正常基因A只有1条l带，突变基因a有s带和m带，没有1带，据图（b）电泳图谱的信息可知，母亲只有1条1带，说明基因型是AA，没有突变位点，不被限制酶切割，父亲除了有1条1带外，还有1条s带和m带，说明基因型为Aa，患儿只有s带和m带，没有1带，说明基因型为aa，患儿的两个基因a分别来自于双亲，而母亲的基因型是AA，因此患儿发病的可能原因是母亲的卵原细胞在减数分裂过程中发生了基因突变，B错误；
C、由图（a）可知，其突变是由于模板链的GTC突变成ATC，使得转录形成的mRNA上相应的碱基由CAG变成UAG，因此终止密码子提前出现，使翻译提前终止，导致合成的血红蛋白异常，C正确；
D、该夫妇基因型为母亲AA、父亲Aa，据图（b）电泳图谱的信息可知，胎儿除了有1条1带外，还各有1条s带和m带，说明基因型为Aa，不发生变异的情况下，再生一个基因型为Aa孩子的概率为1/2，不是1/4，D错误。
10. 科学家通过一定技术使T4溶菌酶的第3位异亮氨酸变为半胱氨酸，于是在该半胱氨酸与第97位的半胱氨酸之间形成一个二硫键，从而使T4溶菌酶的耐热性得到了提高。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 改造后的T4溶菌酶肽键数发生改变造成空间结构发生改变
B. 参与新的T4溶菌酶合成的mRNA的部分碱基序列发生了改变
C. T4溶菌酶耐热性改造设计思路与天然蛋白质的合成方向相同
D. 对T4溶菌酶的改造过程通过直接诱变T4溶菌酶的相关基因实现
【答案】B
【解析】
【详解】A、改造过程仅将第3位异亮氨酸替换为半胱氨酸，氨基酸总数、肽链数均未发生变化，肽键数（肽键数=氨基酸数-肽链数）不变，空间结构改变是氨基酸种类替换、新增二硫键共同导致的，A错误；
B、氨基酸种类发生改变，说明翻译时对应的密码子发生变化，因此转录得到的mRNA的部分碱基序列发生改变，B正确；
C、该改造属于蛋白质工程，思路是从预期蛋白质功能出发，逆向推导、改造对应基因序列，与天然蛋白质遵循的DNA→mRNA→蛋白质的合成方向相反，C错误；
D、该改造是定向改变蛋白质结构，需要对相关基因进行定向修饰，而直接诱变的突变具有不定向性，无法实现精准的定点改造，D错误。
11. 细胞是生命活动的基本单位，下列相关叙述正确的是（ ）
A. 大肠杆菌和酵母菌都能利用细胞中的核糖体、内质网等合成分泌蛋白
B. 硝化细菌体内没有叶绿体，但是可以将二氧化碳合成为有机物
C. 蓝细菌和支原体都有细胞壁、细胞膜、细胞质和无核膜的细胞核
D. 新细胞都是由老细胞通过有丝分裂或减数分裂的方式产生的
【答案】B
【解析】
【详解】A、大肠杆菌是原核生物，细胞内仅含有核糖体一种细胞器，不存在内质网，无法利用内质网合成分泌蛋白，A错误；
B、硝化细菌属于化能自养型生物，虽然没有叶绿体，但可以通过化能合成作用，利用氨氧化释放的化学能将二氧化碳合成为有机物，B正确；
C、支原体是特殊的原核生物，不具有细胞壁，且原核生物没有成形的细胞核，仅具有拟核结构，C错误；
D、新细胞的产生方式还包括无丝分裂、原核生物的二分裂等，并非只有有丝分裂和减数分裂两种方式，D错误。
12. 2024年清华大学王一国副教授团队首次发现并命名一种人体肠道激素——肠抑脂素（蛋白质类），该激素可抑制肝脏胆固醇的合成。下列有关说法正确的（ ）
A. 肠抑脂素分子中的N元素主要存在于氨基中
B. 口服肠抑脂素可有效治疗胆固醇血症和动脉粥样硬化
C. 理论上肠抑脂素经加热变性后仍能与双缩脲试剂发生颜色反应
D. 可用3H标记氨基酸的羧基来研究肠抑脂素的合成过程
【答案】C
【解析】
【详解】A、肠抑脂素为蛋白质，其氮元素主要存在于形成肽键的部位，还有一些氮元素存在于 R 基和氨基中， A 错误；
B、肠抑脂素属于蛋白质类激素，口服后在消化道中会被蛋白酶分解而失去活性， 因此口服无效， B 错误；
C、加热变性仅破坏蛋白质的空间结构，肽键并未断裂，因此仍能与双缩脲试剂发 生紫色反应， C 正确；
D、在研究蛋白质合成过程时，若用 3H 标记氨基酸的羧基，在脱水缩合过程中大部 分羧基会参与形成水，导致标记丢失，无法有效追踪蛋白质合成，因此通常不标记羧基， D 错误。
故选C。
13. 科研人员测定了小麦种子成熟过程中主要物质的含量变化，结果如图。分别将10天（A组）、20天（B组）、30天（C组）的小麦种子制成组织样液进行实验。下列叙述正确的是（ ）
A. 分别加入等量碘液后三组溶液均会变蓝，且C组颜色最深
B. 分别加入等量双缩脲试剂后三组试管均将出现明显的砖红色沉淀
C. 20到30天小麦种子中的蛋白质和淀粉之间的相互转化保持动态平衡
D. 小麦种子成熟过程中，还原糖和蔗糖在淀粉酶的作用下可能会转化为淀粉
【答案】A
【解析】
【详解】A、碘液遇淀粉会变蓝色，三组小麦种子均含有淀粉，且30天（C组）小麦种子的淀粉含量最高，因此加入等量碘液后三组溶液均变蓝，且C组颜色最深，A正确；
B、双缩脲试剂用于检测蛋白质，反应后呈现紫色；砖红色沉淀是斐林试剂与还原糖在水浴加热条件下的反应现象，B错误；
C、20到30天小麦种子中淀粉含量明显上升，蛋白质含量基本保持稳定，不存在二者相互转化的动态平衡，C错误；
D、淀粉酶的功能是催化淀粉水解，不能催化还原糖、蔗糖转化为淀粉，D错误。
14. 下列关于细胞的相关结构和功能的叙述，正确的是（ ）
A. 不同细胞的细胞膜在结构上的差异决定了其功能的不同
B. 正常生理状态下，溶酶体不会分解细胞内损伤的细胞器
C. 线粒体内膜凹陷折叠成嵴，有利于分解葡萄糖的酶附着
D. 核糖体与mRNA结合后发生的生理过程中不涉及水的产生
【答案】A
【解析】
【详解】A、细胞膜的功能与膜上蛋白质的种类和数量密切相关，不同细胞的细胞膜在蛋白质种类、数量等结构层面存在差异，结构决定功能，因此结构差异决定了其功能的不同，A正确；
B、正常生理状态下，溶酶体的功能包括分解细胞内衰老、损伤的细胞器，以及吞噬杀灭侵入细胞的病原体，B错误；
C、葡萄糖的分解发生在细胞质基质，线粒体中不存在分解葡萄糖的酶，线粒体内膜凹陷成嵴是为了附着与有氧呼吸第三阶段相关的酶，C错误；
D、核糖体与mRNA结合后进行翻译过程，该过程中氨基酸通过脱水缩合形成肽链，会产生水，D错误。
15. 核小体是组成染色质的基本单位，由DNA缠绕在组蛋白外形成。组蛋白乙酰化后，与DNA的结合会变松散。下列说法正确的是（ ）
A. 核小体存在于真核生物的细胞核、线粒体和叶绿体中
B. 组蛋白乙酰化有利于RNA聚合酶与基因的启动子结合
C. 核小体在相关酶的催化下可以水解为氨基酸和核糖核苷酸
D. 组蛋白在细胞核内合成后参与核小体的组装
【答案】B
【解析】
【详解】A、核小体是染色质的基本单位，染色质仅存在于真核生物的细胞核中，线粒体和叶绿体中的DNA为裸露状态，不与组蛋白结合形成核小体，A错误；
B、组蛋白乙酰化后与DNA的结合变松散，使DNA上的启动子区域更容易暴露，有利于RNA聚合酶与基因的启动子结合启动转录过程，B正确；
C、核小体由组蛋白（蛋白质）和DNA组成，水解后产物为氨基酸和脱氧核糖核苷酸，核糖核苷酸是RNA的基本组成单位，不属于核小体的水解产物，C错误；
D、组蛋白属于蛋白质，蛋白质的合成场所为细胞质中的核糖体，合成后通过核孔进入细胞核参与核小体组装，并非在细胞核内合成，D错误。
二、填空题：本题共5小题，共55分。
16. 肺炎的种类有支原体性肺炎、细菌性肺炎和病毒性肺炎等。甲、乙、丙分别为引发三类不同肺炎的某些病原体的结构示意图。
（1）图甲与动物细胞在结构上的主要区别是__________。乙的遗传物质是__________，主要位于__________中。
（2）培养丙是否可直接在培养基上培养______（填“能”或“不能”），原因是__________。丙中核衣壳蛋白的合成场所是________________。
（3）肺炎治疗的药物包含以下三种，作用机制如下表所示。使用表中__________对支原体引发的肺炎治疗效果更理想。
（4）选取上表中最适药物治疗后，部分人群使用后会出现一些副作用，如呕吐、腹泻等胃肠道反应，导致机体中部分无机盐离子含量不足。人体缺乏__________会引起神经、肌肉细胞的兴奋性降低，最终引发肌肉酸痛、无力等。此时患者需要及时补充生理盐水，这说明无机盐具有__________功能。对于Ca2+的不足，在补钙的同时还可以配合补充__________，有利于人体肠道对Ca2+的吸收。
【答案】（1） ①. 甲无以核膜为界限的细胞核 ②. DNA ③. 拟核
（2） ①. 不能 ②. 病毒的生命活动离不开活细胞 ③. 宿主细胞的核糖体
（3）阿奇霉素 （4） ①. Na+ ②. 维持细胞和生物体的生命活动 ③. 维生素D
【解析】
【小问1详解】
甲是原核生物，与动物细胞在结构上的主要区别是甲无以核膜为界限的细胞核。乙作为原核生物，遗传物质是DNA，遗传物质主要分布在拟核中。
【小问2详解】
丙是病毒，没有细胞结构，其生命活动离不开活细胞，因此不能直接在普通培养基上培养；病毒自身没有核糖体，其核衣壳蛋白是在宿主细胞的核糖体上合成的。
【小问3详解】
支原体是原核生物，且没有细胞壁，玛巴洛沙韦只针对病毒起作用，头孢影响细胞壁合成对支原体无效，阿奇霉素可抑制原核细胞的蛋白质合成，因此对支原体肺炎治疗效果最理想。
【小问4详解】
人体缺乏Na+会导致神经、肌肉细胞兴奋性降低，引发肌肉酸痛无力；无机盐含量失衡会引发病症，补充无机盐可缓解症状，说明无机盐具有维持细胞和生物体的生命活动；维生素D可以促进人体肠道对钙的吸收，因此补钙时需配合补充维生素D。
17. MIC是指药敏试验中某种抗生素对测试菌的最低抑制浓度。某研究小组将含有相同浓度不同抗生素Ⅰ～Ⅳ的四个大小相同的纸片分别贴在长满测试菌的琼脂平板上，进行药敏试验以了解病原微生物对四种抗生素的敏感程度。图1为实验结果，图2为实验器材。回答下列问题：
（1）培养细菌时，需将培养基的pH调至__________。培养基中的凝固剂琼脂，无法被待测菌株分解利用，因此琼脂__________（填“能”或“不能”）为菌株生长提供能量。
（2）科研人员采用图1所示方式完成待测菌的接种培养，该接种方法为__________。整个接种操作需选用图2中的实验器材有__________（填写对应字母）。
（3）结合图1实验结果判断，四种抗生素的MIC数值由大到小的排序为__________。在抗生素Ⅳ形成的抑菌圈中出现了少量菌落，研究人员依据菌落的__________等外观特征（写2点），初步鉴定该菌株为金黄色葡萄球菌。
（4）金黄色葡萄球菌属于原核生物，其可诱发机体产生多种感染性病症，由于抗生素的使用，该细菌具有一定的耐药性，其产生耐药性的根本原因是__________，抗生素对细菌的耐药变异类型起__________作用，不会诱导细菌产生变异。
（5）为探究金黄色葡萄球菌的耐药性与抗生素Ⅳ浓度的关联，现利用给定实验材料开展梯度探究实验。
实验材料：含有等量活化金黄色葡萄球菌的菌液、浓度依次递增的a、b、c三种抗生素Ⅳ溶液、统一规格的无菌圆形滤纸片、固体琼脂培养平板、全套无菌接种器具。
请写出完整实验思路：____________________________________________________________。
【答案】（1） ①. 中性或弱碱性 ②. 不能
（2） ①. 稀释涂布平板法 ②. BCD
（3） ①. Ⅱ、Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ ②. 形状，大小，隆起程度，颜色，边缘形态（任选其2）
（4） ①. 基因突变 ②. 定向选择
（5）将若干大小相同的圆形纸片均分为4组，分别浸泡在无菌水和浓度为a、b、c的抗生素Ⅳ溶液中，浸泡相同的时间后取出，分别放置在接种有相同浓度金黄色葡萄球菌琼脂平板的相同位置上，在无菌且适宜的条件下培养一段时间后，统计4组平板上抑菌圈中金黄色葡萄球菌菌落的数目
【解析】
【小问1详解】
培养细菌时，需将培养基的pH调至中性或弱碱性，琼脂是一种多糖，绝大多数微生物无法合成分解琼脂的酶，因此它不能被微生物利用，无法提供能源物质。
【小问2详解】
图1中整个平板长满了测试菌，且抑菌圈均匀分布，这种 “先涂布菌液，再贴药敏纸片” 的操作，是稀释涂布平板法的典型应用。图2中的器材有：A（接种环）：用于平板划线法，不适合本实验； B（涂布器）：稀释涂布平板法的核心器材，用来把菌液均匀涂开； C（移液枪 / 注射器）：用来定量吸取稀释后的菌液，滴加到平板上； D（酒精灯）：提供无菌环境，接种全程需在火焰旁操作，同时用来灼烧灭菌涂布器。 因此需要用到的器材是：B、C、D。
【小问3详解】
MIC是 “某种抗生素对测试菌的最低抑制浓度”，结合本实验分析： 纸片上的抗生素浓度相同，扩散到平板后，抑菌圈越大，说明抗生素对细菌的抑制能力越强，细菌对该抗生素越敏感； 反之，抑菌圈越小，说明抗生素的抑制能力越弱，细菌对它的敏感性越低，能抑制细菌的最低浓度（MIC）就越高。 结合图 1： 抑菌圈大小排序：Ⅳ>Ⅲ>Ⅰ>Ⅱ，因此MIC（最低抑菌浓度）从大到小为：Ⅱ、Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ（抑菌圈越小，MIC越大）。不同细菌形成的菌落有不同的形态特征，是初步鉴定细菌的重要依据，包括： 颜色（如金黄色葡萄球菌的菌落呈金黄色）、 形状（圆形 / 不规则形）、 大小、隆起程度（扁平 / 凸起）、透明度（透明 / 半透明 / 不透明） 。
【小问4详解】
金黄色葡萄球菌是原核生物，主要通过基因突变产生耐药性基因。抗生素对细菌的耐药变异类型起定向选择作用，不会诱导细菌产生变异。
【小问5详解】
实验目的： 探究金黄色葡萄球菌的耐药性与抗生素Ⅳ浓度的关系，即不同浓度的抗生素对细菌的抑制效果。 实验原理： 抗生素浓度越高，抑菌圈越大；若抑菌圈中出现菌落，说明该浓度下仍有细菌存活，可通过菌落数反映细菌的耐药性强弱。
实验思路：将若干大小相同的圆形纸片均分为4组，分别浸泡在无菌水和浓度为a、b、c的抗生素Ⅳ溶液中，浸泡相同的时间后取出，分别放置在接种有相同浓度金黄色葡萄球菌琼脂平板的相同位置上，在无菌且适宜的条件下培养一段时间后，统计4组平板上抑菌圈中金黄色葡萄球菌菌落的数目。
18. 铁皮石斛是我国传统名贵中药材，被誉为“中华九大仙草之首”，其核心药用成分石斛活性多糖具有免疫调节、抗氧化、抗肿瘤、降血糖、保湿等作用。因野生资源匮乏、市场缺口扩大，植物组织培养工厂化培育已成为铁皮石斛的主要生产方式。某科研团队在培育铁皮石斛新品种并提取石斛多糖时，采用了以下方法（①～⑤为相关过程，A、B为相关细胞或结构），回答下列问题：
（1）图中在过程③～⑤中，获得最终目标产物依赖植物细胞全能性的过程有____（填序号）。
（2）石斛多糖属于植物细胞的__________代谢产物，相比从植株中直接提取，利用该方法获取石斛多糖的优点有______________（写出1点即可）。
（3）A为__________，常选其作为诱变育种原材料的主要原因是__________。
（4）植物体细胞杂交技术最大的优点是________________。有同学认为植株丁可能无法同时具有植株甲和植株乙的优良特性，你认为他作出该判断的理由是_______________________________。
【答案】（1）④⑤ （2） ①. 次生 ②. 不占用耕地；几乎不受季节、地域、天气等的限制；可大规模工厂化生产；产物提取更简便（写1点即可）
（3） ①. 愈伤组织 ②. 愈伤组织具有较强分裂能力，细胞分裂过程中DNA复制时易发生基因突变
（4） ①. 克服远缘杂交不亲和 ②. 生物体内基因的表达不是孤立的，是相互调控、相互影响的，故植株丁虽然有植株甲、乙两者的遗传物质，但这些遗传物质的表达相互干扰，使其不能再像原来一样有序表达（合理即可）
【解析】
【小问1详解】
植物细胞全能性：指已分化的植物细胞仍具有发育成完整个体的潜能。 ③过程：是从细胞培养物中提取石斛多糖，仅涉及细胞增殖，不发育成新个体，不体现全能性。 ④过程：诱变后培养获得植株丙，是从愈伤组织再分化为完整植株，体现全能性。 ⑤过程：植物体细胞杂交后培养获得植株丁，杂种细胞发育为完整植株，体现全能性。
【小问2详解】
石斛多糖是植物细胞的次生代谢产物（次生代谢产物是植物在特定条件下，通过次生代谢途径产生的非生长发育必需的有机物，如生物碱、萜类、多糖等）。该方法的优点： 不占用耕地；几乎不受季节、地域、天气等的限制；可大规模工厂化生产；产物提取更简便。
【小问3详解】
过程①是外植体脱分化形成愈伤组织，所以 A 是愈伤组织（一团未分化的薄壁细胞，分裂能力强）。诱变育种的原理是基因突变，而基因突变主要发生在 DNA 复制期（细胞分裂间期）。愈伤组织细胞分裂旺盛，DNA 复制频繁，因此更容易发生基因突变，诱变效率更高，所以常作为诱变材料。
【小问4详解】
植物体细胞杂交技术最大的优点是克服远缘杂交不亲和。生物体内基因的表达不是孤立的，是相互调控、相互影响的，故植株丁虽然有植株甲、乙两者的遗传物质，但这些遗传物质的表达相互干扰，使其不能再像原来一样有序表达，使植株丁可能无法同时具有植株甲和植株乙的优良特性。
19. 双特异性抗体是指一个抗体分子可以与两个不同抗原或同一抗原的两个不同抗原表位相结合。癌症的免疫疗法可通过使用双特异性抗体重新激活抗肿瘤的免疫细胞，进而克服肿瘤的免疫逃逸。PSMA是某些种类癌细胞表面高表达蛋白，CD28是T细胞表面受体，T细胞的有效激活依赖于CD28在癌细胞与T细胞结合部位的聚集。科研人员尝试构建双特异性抗体PSMA×CD28的生产流程，如图甲所示；双特异性抗体PSMA×CD28的结构及作用机理，如图乙所示。
（1）动物细胞培养时，培养基除了添加葡萄糖、氨基酸等明确的营养成分外，往往还需加入一定量的__________，以满足动物细胞培养的营养需要。
（2）过程④中将杂交瘤细胞进行多倍稀释，接种在多孔的细胞培养板上，使每孔细胞不超过1个，通过培养让其增殖，然后利用___________的原理检测并筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。体外培养杂交瘤细胞时，需要定期更换培养液的原因是________________。
（3）结合题干，据图乙分析，双特异性抗体PSMA×CD28协助杀伤癌细胞的机理是___________________________________________________________________________________________。
（4）利用小鼠制备的抗体是鼠源抗体，鼠源抗体具有外源性，会被人体免疫系统当作抗原而清除（称为人抗鼠抗体反应即HAMA反应）。抗体结构如下图所示，引起HAMA反应的主要是“C区”，通过制备人鼠嵌合抗体可以解决HAMA反应。现利用重组DNA技术可以制备人鼠嵌合抗体，制备人鼠嵌合抗体基因时，应先将人抗体的__________区基因与鼠抗体的__________区基因进行拼接；然后再将拼接好的人鼠嵌合抗体基因与适宜的载体结合，构建表达载体。将表达载体利用____________技术导入哺乳动物细胞，表达出嵌合抗体。
【答案】（1）动物血清
（2） ①. 抗原和抗体特异性结合 ②. 及时清除细胞代谢产生的有毒物质，同时补充营养物质，保证细胞正常生长
（3）双特异性抗体PSMA×CD28既能结合PSMA，又能结合CD28，使CD28在癌细胞与T细胞结合部位聚集，从而有效激活T细胞杀伤癌细胞（合理即可）
（4） ①. 恒定（C） ②. 可变（V） ③. 显微注射
【解析】
【小问1详解】
动物细胞培养时，人们对细胞所需的全部营养成分尚未完全明确，培养基除了添加葡萄糖、氨基酸等明确的营养成分外，往往还需加入一定量的动物血清，以满足动物细胞培养的营养需要。
【小问2详解】
筛选能分泌所需抗体的杂交瘤细胞，通常采用ELISA 法（酶联免疫吸附试验），利用抗原与抗体的特异性结合反应，检测上清液中是否存在目标抗体。体外培养杂交瘤细胞时，需要定期更换培养液的原因是及时清除细胞代谢产生的有毒物质，同时补充营养物质，保证细胞正常生长。
【小问3详解】
双特异性抗体PSMA×CD28既能结合PSMA，又能结合CD28，使CD28在癌细胞与T细胞结合部位聚集，从而有效激活T细胞杀伤癌细胞。
【小问4详解】
HAMA 反应主要由鼠源抗体的恒定区（C 区）引起，可变区（V 区）是识别抗原的关键区域。制备人鼠嵌合抗体时，保留鼠抗体的可变区（V 区，保证抗原结合特异性），替换为人类的恒定区（C 区，降低免疫原性，避免 HAMA 反应）。将重组表达载体导入哺乳动物细胞（如 CHO 细胞），常用的方法是显微注射技术，也可采用脂质体转染、电穿孔等方法，但显微注射是动物细胞中最常用的方法之一。
20. 双孢蘑菇中的多酚氧化酶（PPO）基因表达出的PPO能催化酚类物质氧化成醌，使双孢蘑菇在采摘后发生褐变。为了减少褐变，增加双孢蘑菇贮藏加工性能，研究人员构建了反义PPO基因表达载体（将PPO基因与表达载体反向连接），获得了抗褐变双孢蘑菇新品种。（注：图1中模板链指PPO基因的模板链，图2为农杆菌的Ti质粒）请回答下列问题：
（1）PCR反应体系应添加含__________离子的缓冲液、引物、模板、4种dNTP和__________等。
（2）基因工程的核心步骤是__________。
（3）选取图1引物__________扩增PPO基因，PPO基因需插入Ti质粒的T-DNA区域，原因是___________________。
（4）若将PPO基因反向连接整合到图2中质粒上，应使用限制酶__________切割质粒，使用限制酶__________切割含PPO基因的DNA片段，并使用DNA连接酶将二者连接以构建反义PPO基因表达载体。
（5）用__________处理农杆菌后获得感受态细胞，将其与基因表达载体混合完成转化，为筛选转化成功的农杆菌，可将导入重组质粒的农杆菌分别接种到潮霉素培养基和卡那霉素培养基中进行培养，转化成功的菌株对两种抗生素的抗性情况为__________。
【答案】（1） ①. Mg2+ ②. TaqDNA聚合酶（耐高温的DNA聚合酶）
（2）基因表达载体的构建
（3） ①. ①④ ②. Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体DNA上
（4） ①. MfeⅠ、KpnⅠ ②. EcRⅠ、KpnⅠ
（5） ①. Ca2+钙离子 ②. 抗卡那霉素但不抗潮霉素
【解析】
【小问1详解】
PCR技术的原理是DNA半保留复制，在PCR反应体系应添加含Mg2+离子（激活TaqDNA聚合酶）的缓冲液、引物、模板、4种dNTP和耐高温的DNA聚合酶等。
【小问2详解】
基因表达载体的构建是基因工程的核心步骤。
【小问3详解】
-OH端是DNA的3'端，DNA复制时子链的延伸方向是5'端向3'端，因此引物需要结合在模板链的3'端，根据图示可知，扩增PPO基因需要选择引物①④。由于Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体DNA上，使其能随着受体细胞的增殖而增殖，因此PPO基因需插入Ti质粒的T-DNA区域。
【小问4详解】
据图可知，用BamHⅠ切割质粒，会破坏启动子，用EcRⅠ切割质粒，会破坏质粒上的复制原点，并且会丢掉质粒上的终止子等结构，若构建反义PPO基因表达载体，需要将基因模板链的5'端（游离磷酸端）靠近质粒上的启动子，PPO基因的右侧含有EcRⅠ和HindⅢ的识别序列，结合不同限制酶的识别序列可知，EcRⅠ和MfeI切割的黏性末端相同，因此PPO基因的右端可用EcRⅠ切割，质粒中靠近启动子的位置用MfeI切割，PPO基因的左侧和质粒可共同用KpnI切割，这样可保证目的基因和质粒正确连接形成反义PPO基因表达载体。即使用限制酶EcRI、KpnI切割图中含PPO基因的DNA片段，用MfeⅠ和KpnⅠ切割质粒。
【小问5详解】编号
成分
甲
KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4、葡萄糖、尿素、琼脂和蒸馏水
乙
牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、蒸馏水
药物
作用机制
玛巴洛沙韦
阻止病毒RNA的结合
阿奇霉素
作用于原核细胞核糖体，阻碍蛋白质合成
头孢
可以影响细菌细胞壁的合成