第十单元　第50课时　微生物的培养技术与应用-2027年高考生物一轮复习课件（含讲义及答案）

这是一份第十单元　第50课时　微生物的培养技术与应用-2027年高考生物一轮复习课件（含讲义及答案），共9页。PPT课件主要包含了微生物的基本培养技术，ONE，TWO，THREE，课时精练等内容，欢迎下载使用。
1.通过配制培养基、灭菌、接种和培养等实验操作获得纯化的酵母菌菌落。2.分离土壤中分解尿素的细菌，并进行计数。
考点一　微生物的基本培养技术
考点二　微生物的选择培养和计数
1.培养基的配制(1)培养基的概念、用途和类型①概念：人们按照微生物对 的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。②用途：用以 微生物或积累其代谢物。
培养、分离、鉴定、保存
③培养基的种类(按物理性质分)
(2)培养基的配方①主要营养物质：水、 、氮源、 。②其他条件：pH、特殊营养物质和氧气。如表：
2.无菌技术(1)目的：获得 的微生物培养物。(2)关键：防止 污染。(3)常用方法：灭菌和消毒。
(4)无菌技术的主要方法及适用对象
(5)注意事项①实验操作时，应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触。②为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在超净工作台上并在 附近进行。
选择无菌技术的原则：一要考虑无菌技术的效果，灭菌的效果比消毒要好；二要考虑操作对象的承受能力，活体生物材料、操作者的手等只能采用消毒，而不能用灭菌。
3.微生物的纯培养概念辨析
4.纯培养的过程(以酵母菌为例)
(1)不含氮源的平板不能用于微生物培养(2023·山东，15)
提示　不含氮源的平板可用于固氮菌的培养。
(2)可用湿热灭菌法对实验中所使用的微量离心管、细胞培养瓶等进行灭菌(2022·湖北，4)(3)接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃(2023·山东，15)
提示　使用后的培养基即使未长出菌落也要在丢弃前进行灭菌处理，不能直接丢弃，以免污染环境。
分析微生物平板划线和培养的具体操作微生物平板划线和培养的具体操作如图所示，据图回答下列问题：
(1)图中①～⑧不正确的操作及其原因分别是什么？
提示　②拔出棉塞后完全握住棉塞会造成杂菌污染，应握住棉塞上部；⑥划线时不能将培养皿完全打开，应在火焰附近将培养皿打开一条缝隙，用接种环在培养基表面迅速划三至五条平行线，盖上皿盖；⑦划线时第5次的划线不能与第1次的划线相连；⑧平板应倒置培养。
(2)在第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？
提示　划线后，线条末端菌种的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使菌种的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个微生物繁殖而来的菌落。
(3)在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？
提示　需要；划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免污染环境和感染操作者。
平板划线法操作中几次灼烧接种环的目的
考向一　微生物的基本培养技术1.(2025·江苏，11)从种植草莓的土壤中分离致病菌，简易流程如下：制备土壤悬液、分离、纯化、鉴定。下列叙述正确的是A.制备的培养基可用紫外线照射进行灭菌B.将土样加入无菌水混匀，梯度稀释后取悬液加入平板并涂布C.连续划线时，接上次划线的起始端开始划线D.鉴定后的致病菌可接种在斜面培养基上，并在室温下长期保存
2.为纯化菌种，在鉴别培养基上划线接种纤维素降解细菌，培养结果如图所示。下列叙述正确的是A.倒平板后需间歇晃动，以保证表面平整
B.图中Ⅰ、Ⅱ区的细菌数量均太多，应从Ⅲ区挑取单菌落C.该实验结果因单菌落太多，不能达到菌种纯化的目的D.菌落周围的纤维素被降解后，可被刚果红染成红色
微生物的选择培养和计数
1.区分选择培养基与鉴别培养基
常见选择培养基举例：(1)缺少氮源的培养基可以筛选能利用大气中N2的微生物。(2)含青霉素的培养基可淘汰细菌，筛选出真菌。(3)无有机碳源的培养基可筛选出自养微生物。
2.微生物的选择培养和数量测定(1)稀释涂布平板法步骤①系列稀释操作：该操作常用在将细胞接种到培养基之前，通过液体稀释的方法分散细胞，随着稀释程度的增大，单位体积中的微生物细胞数量减少，细胞得以分散。操作步骤：
(2)微生物的数量测定方法①显微镜直接计数法
显微镜直接计数法本身不能区分细菌的死活，但是通过一定的辅助处理，可以实现活菌计数，如在计数前用台盼蓝染液进行染色，可以通过统计无色细胞的个数来对活菌进行计数。
当两个或多个细胞连在一起
时，平板上观察到的只是一个菌落
3.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的实验操作(1)实验原理
(3)实验结果分析与评价
选择性必修3 P19“探究·实践”：本活动初步筛选了能分解尿素的细菌，请进一步借助于生物化学的方法来鉴定所分离的菌种：分解尿素的细菌合成的脲酶可以将尿素分解成氨，氨会使培养基的 性增强，在培养基中加入 指示剂培养细菌，若指示剂 ，可确定该细菌能够分解尿素。
(1)平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒(2023·山东，15)
提示　平板涂布时涂布器使用前必须先浸在酒精中，然后在火焰上灼烧，这种操作属于灭菌。
(2)利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物(2023·山东，15)
(3)稀释涂布平板法和平板划线法均能得到单菌落，都可用于细菌计数(2021·浙江6月选考，17)
提示　平板划线法只能用于细菌分离，不能用于细菌计数。
(4)血细胞计数板既可用于酵母菌的数量测定，也可用于细菌的数量测定(2023·江苏，7)
提示　血细胞计数板常用于相对较大细胞(如酵母菌细胞)的计数，不能直接用于细菌计数，用细菌计数板可对细菌等较小的细胞进行观察和计数。
理解微生物的选择培养和计数的原理某兴趣小组从富含纤维素的土壤中取样，加入选择培养基中进行振荡培养，之后接种于鉴别培养基上进行培养，筛选出能够高效分解纤维素的微生物。请回答下列相关问题：1.从富含纤维素的土壤中取样的原因是什么？
提示　纤维素分解菌大多分布在富含纤维素的环境中。
2.分离出分解纤维素的微生物，应该配制以 为唯一碳源的培养基，目的是 。
促进纤维素分解菌生长，抑制其他微生物的生长
3.已知刚果红与纤维素能形成红色复合物，当纤维素被分解后，复合物无法形成，平板上会出现以菌落为中心的透明圈(如图)，几号真菌降解纤维素的能力最强，理由是什么？
提示　④；④形成的透明圈与菌落直径的比值最大。
4.三位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中细菌数量，在对应稀释倍数为106的稀释液中各取0.1 mL涂平板，得到以下统计结果：甲同学涂布了两个平板，统计的菌落数是236和260，取平均值248；乙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是209、240和250，取平均值233；丙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是21、212和256，取平均值163；在三位同学的统计中， 同学的统计是正确的，据此计算，每克土壤样品中含细菌 个。
考向二　目标微生物的筛选与鉴定3.(2025·山东，15)深海淤泥中含有某种能降解纤维素的细菌。探究不同压强下，该细菌在以纤维素或淀粉为唯一碳源的培养基上的生长情况。其他条件相同且适宜，实验处理及结果如表所示。下列叙述正确的是
A.可用平板划线法对该菌计数B.制备培养基的过程中，应先倒平板再进行高压蒸汽灭菌C.由②④组可知，在以纤维素为唯一碳源的培养基上，该菌可在常压下 生长D.由③④组可知，高压下该菌不能在以淀粉为唯一碳源的培养基上生长
4.(2025·黑吉辽蒙，4)科研人员通过稀释涂布平板法筛选出高耐受且降解金霉素(C22H23ClN2O8)能力强的菌株，旨在解决金霉素过量使用所导致的环境污染问题。下列叙述错误的是A.以金霉素为唯一碳源可制备选择培养基B.逐步提高培养基中金霉素的浓度有助于获得高耐受的菌株C.配制选择培养基时，需确保pH满足实验要求D.用接种环将菌液均匀地涂布在培养基表面
考向三　微生物的分离与计数5.(2025·湖南，5)采集果园土壤进行微生物分离或计数。下列叙述正确的是A.稀释涂布平板法和平板划线法都能用于尿素分解菌的分离和计数B.完成平板划线后，培养时需增加一个未接种的平板作为对照C.土壤中分离得到的醋酸菌能在无氧条件下将葡萄糖分解成乙酸D.用于筛选尿素分解菌的培养基含有蛋白胨、尿素和无机盐等营养物质
6.产脂肪酶酵母可用于含油废水处理。为筛选产脂肪酶酵母菌株，科研人员开展了相关研究。请回答下列问题：(1)常规微生物实验中，下列物品及其灭菌方法错误的是_____(填编号)。
(2)称取1.0 g某土壤样品，转入99 mL无菌水中，制备成菌悬液，经__________后，获得细胞密度不同的菌悬液。分别取0.1 mL菌悬液涂布在固体培养基上，其中10倍稀释的菌悬液培养后平均长出了46个酵母菌落，则该样本中每克土壤约含酵母菌__________________个。
4.6×105(或460 000)
(3)为了进一步提高酵母菌产酶能力，对分离所得的菌株，采用射线辐照进行_____育种。将辐照处理后的酵母菌涂布在以_____为唯一碳源的固体培养基上，培养一段时间后，按照菌落直径大小进行初筛，选择直径_____的菌落，纯化后获得A、B两突变菌株。
(4)在处理含油废水的同时，可获得单细胞蛋白，实现污染物资源化。为评价A、B两菌株的相关性能，进行了培养研究，结果如图。据图分析，应选择菌株____进行后续相关研究，理由是__________________________________________________________________。
细胞蛋白产量高；降解脂肪能力强，净化效果好
一、基础排查1.判断下列有关微生物培养基的成分与配制过程的叙述(1)培养基中添加的牛肉膏可为微生物提供碳源、氮源和维生素等(　　)(2)与液体培养基相比，固体培养基含有琼脂成分(　　)(3)培养硝化细菌时，培养基中需要加氮源，不需要加入碳源(　　)(4)为防止杂菌污染，灭菌后的培养基应立即倒入培养皿中并盖上皿盖，待冷却后倒置(　　)
提示　刚灭菌的培养基需冷却到50 ℃左右才能倒平板。
(5)在培养细菌时，需要将培养基调至中性或弱酸性(　　)
提示　在培养细菌时，一般需要将培养基调至中性或弱碱性。
(6)配制培养基过程中应先调pH再进行高压蒸汽灭菌(　　)
2.获得纯净微生物培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。判断下列有关无菌操作的叙述(1)牛奶可使用巴氏消毒法，其优点是能够杀死全部微生物，保留牛奶风味(　　)
提示　牛奶可使用巴氏消毒法，其优点是能够杀死牛奶中的绝大多数微生物，并且基本不破坏牛奶的营养成分。
(2)在接种箱或超净工作台的使用过程中，可用紫外线照射30 min来进行消毒(　　)
提示　在接种箱或超净工作台使用之前，可用紫外线照射30 min来进行消毒。
(3)灼烧灭菌的对象可以是金属用具和某些玻璃器皿，在酒精灯火焰充分燃烧层进行(　　)(4)高压蒸汽灭菌时的灭菌条件通常是100 kPa、121 ℃，15～30 min(　　)(5)若培养皿盖和培养皿底之间溅有培养基，则不宜用此培养皿培养大肠杆菌(　　)
(6)倒平板时应该把培养皿盖完全打开，以免培养基溅到培养皿盖上(　　)
提示　为防止空气中的杂菌落入培养皿中，倒平板时不能把培养皿盖完全打开，正确的操作是将培养皿打开一条稍大于锥形瓶瓶口的缝隙。
(7)倒平板后，对空白培养基进行培养，可检测培养基是否被污染(　　)(8)接种前后接种环都必须灼烧灭菌(　　)(9)倒平板和接种操作都需要在酒精灯的火焰附近进行(　　)
3.判断下列有关微生物分离、纯化、计数及培养的叙述(1)平板划线法接种时不能划破培养基，第3次划线应从第2次划线的末端开始(　　)(2)平板划线法接种时，若在平板上划线4个区，则需灼烧接种环5次(　　)(3)用涂布器蘸取少量菌液滴加在培养基表面，涂布时可转动培养皿，使菌液分布均匀(　　)
提示　涂布时，用移液器取0.1 mL菌液滴加到培养基表面，而后用涂布器进行涂布，涂布时涂布器可以不动，可转动培养皿，使涂布均匀。
(4)在筛选产纤维素酶的微生物时，含纤维素和刚果红的固体培养基既是选择培养基也是鉴别培养基(　　)(5)接种后需立即倒置培养以避免皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染(　　)
提示　接种后需等到菌液被培养基吸收后倒置平板，目的是防止培养皿盖上的冷凝水滴落，造成污染，同时也能避免培养基中的水分蒸发过快。
(6)对培养皿进行编号或对菌种进行标注时，应使用记号笔在皿底标记(　　)(7)菌落的大小、颜色、隆起程度等特征都可作为菌种鉴定的依据(　　)(8)同一稀释度下应至少对3个平板进行重复计数，然后求平均值(　　)
(9)利用显微镜直接计数，统计的结果一般是活菌数和死菌数的总和(　　)(10)用平板划线法和稀释涂布平板法进行微生物计数时，所得数据往往比实际数据偏小(　　)
提示　因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，故用稀释涂布平板法进行微生物计数时，所得数据往往比实际数据偏小，但用平板划线法不能对微生物计数。
二、要语必背1.(选择性必修3 P10)培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源等。2.(选择性必修3 P10)获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染，无菌技术除用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还能有效避免操作者自身被微生物感染。3.(选择性必修3 P12)菌落是指分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体。采用平板划线法和稀释涂布平板法能将单个微生物分散在固体培养基上，之后经培养得到的单菌落一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。4.(选择性必修3 P16)选择培养基是指在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。
5.(选择性必修3 P12)平板冷凝后，要将平板倒置的原因是平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以减少培养基中的水分过快地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。6.(选择性必修3 P13)操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。
7.(选择性必修3 P13)在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线的原因是避免接种环温度太高，杀死菌种。8.(选择性必修3 P18)血细胞计数板比细菌计数板厚，常用于相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数。用细菌计数板可对细菌等较小的细胞进行观察和计数。9.(选择性必修3 P18)当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，统计的菌落数往往比活菌的实际数目少。10.(选择性必修3 P19)检测培养物中是否有杂菌污染的方法是同时培养灭菌后的未接种的培养基，观察是否有菌落产生。判断选择培养基是否起到筛选作用的方法是配制牛肉膏蛋白胨培养基作为对照，观察选择培养基上的菌落数是否远少于牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目。
精练高频考点提升关键能力
(1)活性黑5　选择　允许特定种类的微生物生长(或允许能分解活性黑5的假单胞杆菌生长)，同时抑制或阻止其他种类微生物生长　平板划线　通过接种环在固体培养基表面连续划线，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面，经培养得到单菌落　(2)细胞质基质　假单胞杆菌是原核生物，没有溶酶体　(3)BVU5蛋白的含量、BVU5蛋白的活性、BVU5蛋白的空间结构
(1)标记基因、目的基因、终止子、复制原点　(2)稀释涂布平板法　抑制工程菌IR3C的生长增殖或诱导其凋亡　约15 h　培养15 h后，IR3C活菌数量开始下降，而MCS活菌数量仍在上升　(3)高于　基因ccdB编码的蛋白质抑制了工程菌IR3C的生长增殖或诱导其凋亡，减少了其对山梨糖的竞争性消耗，更多的山梨糖用于合成2-酮-L-古龙酸
一、选择题1.(2025·淮阴中学调研)下列关于灭菌、消毒、无菌操作的叙述，正确的是A.配制培养基、倒平板、接种均需要在酒精灯火焰旁进行B.可用高压蒸汽灭菌法对实验中所使用的微量离心管、细胞培养瓶等进 行灭菌C.为防止杂菌污染，应将配制好的选择培养基分装到培养皿中进行高压 蒸汽灭菌D.为防止蛋白质变性，不能使用高压蒸汽灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基 进行灭菌
2.(2025·湖北七市州二模)细菌培养常用牛肉膏蛋白胨培养基，酵母菌培养常用马铃薯琼脂培养基。下列有关细菌和酵母菌纯培养实验的叙述，正确的是A.接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃B.酵母菌培养基通常比细菌培养基有更高的碳氮比C.制备培养基的步骤为配制培养基→倒平板→灭菌D.可用血细胞计数板测定酵母菌和细菌的种群数量
3.(2025·信阳高级中学月考)某研究团队用化合物A、磷酸盐、镁盐和微量元素等配制了培养基，成功筛选出能高效降解化合物A的目的菌。下列叙述正确的是①筛选目的菌的培养基属于选择培养基，可用湿热灭菌法灭菌②可以用液体培养基进行扩大培养，以增加目的菌的数量③可以用平板划线法对目的菌进行筛选和活菌计数④以菌落数为30～300的平板进行计数，通常统计的菌落数比实际活菌数多⑤可以通过改造细菌的基因来获得能够降解化合物A的目的菌A.①③④ B.②④⑤C.②③⑤ D.①②⑤
4.(2025·郑州二模)土壤中的解磷细菌能够分泌磷酸酶溶解磷酸盐固体，提高土壤的肥力。科研工作者通过分离、培养解磷细菌制备菌肥，应用到农业生产中。下列关于解磷细菌的分离和培养的叙述，正确的是A.解磷细菌合成和分泌磷酸酶时需要核糖体、内质网、高尔基体等细胞 器的参与B.分离解磷细菌时，需取少量土壤，在以磷酸盐固体为唯一磷源的培养 基中培养C.筛选解磷能力强的菌株时需在特定固体培养基上挑选降解圈最大的菌落D.测定解磷菌肥活菌的数目时宜用平板划线法而不宜用显微镜直接计数法
5.(2025·河北，18改编)隐甲藻是一种好氧的异养真核微藻。多在海水中腐烂的植物叶片上生长繁殖，是工业生产DHA(一种功能性脂肪酸)的藻类之一，从海洋中筛选获得的高产油脂隐甲藻，可用于DHA的发酵生产。下列叙述错误的是A.隐甲藻可从腐烂的叶片获得生长必需的碳源B.采集海水中腐烂的叶片，湿热灭菌后接种到固体培养基，以获得隐甲藻C.选择培养基中可加入抑制细菌生长的抗生素，以减少杂菌生长D.适当提高发酵时的通气量和搅拌速率均可增加溶氧量，以提高DHA产量
6.(2023·广东，10)研究者拟从堆肥中取样并筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌。根据堆肥温度变化曲线(如图)和选择培养基筛选原理来判断，下列最可能筛选到目标菌的条件组合是A.a点时取样、尿素氮源培养基B.b点时取样、角蛋白氮源培养基C.b点时取样、蛋白胨氮源培养基D.c点时取样、角蛋白氮源培养基
7.(2025·马鞍山模拟)为检验某品牌冰激凌中大肠杆菌含量是否超标，研究小组利用配制的伊红－亚甲蓝琼脂培养基进行检测。下列叙述正确的是A.检测中用到的接种方法为平板划线法B.配制培养基，高压蒸汽灭菌后，调节pHC.检测中应设一个不接种的平板作为阴性对照和一个接种大肠杆菌的平 板作为阳性对照D.检测的培养基为固体培养基，大肠杆菌在该培养基上会形成红色且有 金属光泽的菌落
8.(2025·四川部分学校联考)工业生产中常用谷氨酸棒状杆菌的高丝氨酸营养缺陷型菌作为赖氨酸的发酵菌株。科研人员将紫外线照射处理过的野生谷氨酸棒状杆菌菌液(原菌液)，经过程①(稀释10倍)接种在培养基甲上培养，菌落数目不再增加时如图中甲平板。过程②表示向培养基甲中添加某种物质，继续培养。
下列叙述正确的是A.菌落A是诱变产生的高丝氨酸营养缺陷型菌种B.培养基甲是一种选择培养基，过程②向甲中添加赖氨酸C.经过程①取0.2 mL菌液涂布得到甲平板所示结果，则原菌液未突变菌 株数量约为450个/mLD.发酵结束后，将过滤得到的固体物质进行干燥即可获得赖氨酸产品
9.科研人员先在12个固体培养基各涂上数目相等(约5×104个)的对T1噬菌体敏感的大肠杆菌，经5 h培养后，平板上长出大量的微菌落(约5 100个细胞/菌落)。取其中6个(A组)直接喷上T1噬菌体，另6个(B组)则先用灭菌后的涂布器把平板上的微菌落重新均匀涂布一遍，然后喷上等量T1噬菌体。培养后计算这两组平板上形成的抗T1噬菌体的菌落数。结果发现，A组长出28个菌落，B组长出353个菌落。下列叙述正确的是A.该实验通过等比稀释的操作对微菌落进行计数B.B组中所使用的培养基为选择培养基C.B组的涂布使单个抗T1噬菌体自发突变大肠杆菌形成一个菌落的概率增加D.该实验证明重新涂布后再喷T1噬菌体导致了抗性突变的大量发生
10.(2025·成都二模)合理使用消毒液有助于减少传染病的传播。某同学比较了3款消毒液A、B、C杀灭大肠杆菌的效果。该同学将细菌原液稀释10倍后取0.2 mL涂布平板，进行菌落计数，结果如图所示，下列叙述错误的是
A.大肠杆菌在伊红－亚甲蓝培养基上生长的菌落呈深紫色B.据该实验结果可知，三种消毒液中杀菌效果最好的是A消毒液C.若某样品菌落计数的结果是100，则对应细菌原液中大肠杆菌的浓度为5 000个/mLD.若采用显微镜直接计数法和菌落计数法分别测定同一样品，计数结果前者小 于后者
11.(2025·四川，8)微塑料由塑料废弃物风化形成，难以降解，会危害生态环境和人体健康。有人分离到X和Y两种微塑料降解菌，将总菌量相同的X、Y、X＋Y(X∶Y＝1∶1)分别接种于含有等量微塑料的蛋白胨液体培养基中，培养一段时间后测定微塑料的残留率(残留率＝剩余量/添加量×100%)，结果如图。下列叙述正确的是A.用平板划线法能测定X菌组中的活菌数B.Y菌组微塑料残留率较高，故菌浓度也高C.混合菌种对微塑料的降解能力高于单一菌种D.能在该培养基中生长繁殖的微生物都能降解微塑料
12.(2025·河南部分学校联考)安莎霉素是一类主要由海洋中的稀有放线菌产生的次生代谢物，具有较高的抗菌活性。经人工诱变后，部分放线菌由于某种酶被破坏，其细胞中某些化学反应不能正常进行，就形成了氨基酸营养缺陷型菌株(不能在基本培养基上生长，只能在完全培养基上生长)，这在工业生产上有较广阔的应用前景。利用影印法初检某种氨基酸营养缺陷型菌株的过程如图，
下列叙述错误的是A.基本培养基与完全培养基存在差异的成分是氨基酸B.进行过程①培养时，待测培养皿中是完全培养基C.进行过程②培养时，应先将丝绒布转印至基本培养基上D.应挑取菌落B进行接种培养，并进一步鉴定
13.(2025·武汉二模)夹层培养法可用于筛选营养缺陷型细菌，具体做法如图所示：先在培养皿上倒一层M.M培养基(满足野生型菌株生长的最低营养成分)，待凝固后涂布一层经过诱变处理的某种菌液，其上再倒一层M.M。经培养后，首次出现的菌落标记为A。最后倒一层C.M培养基(满足营养缺陷型菌株生长的营养成分)，再培养，新出现的菌落标记为B。下列叙述错误的是A.菌落A是营养缺陷型，菌落B是野生型B.诱变处理是为了获得营养缺陷型细菌C.再倒一层M.M可避免菌落被C.M冲散D.菌落B的直径应小于菌落A的直径
二、非选择题14.(2025·成都一模)活性黑5是一种低毒性、难褪色的含氮染料。欲利用生物酶处理染料废水中的活性黑5，具体操作流程如图。从染料废水堆积池的污泥中获得优势菌群，采用浓度梯度驯化法，进一步培养获得具备强分解活性黑5能力的假单胞杆菌，并进行基因表达分析。据图回答下列问题：
(1)培养基Ⅰ和培养基Ⅱ均以___________为唯一氮源，从用途上来看均属于______培养基，该类培养基的特点是____________________________________________________
生长(或允许能分解活性黑5的假
________________________________________________。培养基Ⅱ是利用_________法进行接种，其分离单菌落的原理是_____________________________________________________________________________________________。
单胞杆菌生长)，同时抑制或阻止其他种类微生物生长
养基表面连续划线，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面，经培养得到单菌落
(2)假单胞杆菌中，BVU5蛋白分解活性黑5的场所最可能为____________(填“细胞质基质”或“溶酶体”)，判断依据是________________________________。
假单胞杆菌是原核生物，
(3)假单胞杆菌分解活性黑5能力的强弱可能与________________________________________________________(答出2点)因素有关。
蛋白的活性、BVU5蛋白的空间结构
BVU5蛋白的含量、BVU5
15.(2025·云南，21)我国研究人员发明了生产维生素C的两步发酵法，流程如图甲。为了减少氧化葡糖杆菌竞争性消耗山梨糖，需要进行灭菌以结束第一步发酵。
在两步发酵法的基础上，我国研究人员进一步尝试用三菌混菌体系建立一步发酵法。在氧化葡糖杆菌(原始菌MCS)中利用基因工程技术导入大肠杆菌基因ccdB，得到工程菌IR3C。MCS和IR3C单菌培养时，活菌数变化曲线如图乙，MCS、IR3C分别与普通生酮基古龙酸菌和巨大芽孢杆菌进行三菌混菌发酵时，产物含量变化曲线如图丙。
回答下列问题：(1)要使基因ccdB在IR3C中稳定遗传、表达并发挥作用，构建的基因表达载体除启动子外，还必须有_____________________________________。
标记基因、目的基因、终止子、复制原点
(2)绘制图乙需统计活菌数，常用方法是_________________。当活菌达到一定数量时，基因ccdB编码的蛋白质开始发挥作用，推测该蛋白质的作用是__________________________________________，开始发挥作用的时间是
抑制工程菌IR3C的生长增
________，判断理由是___________________________________________________________。
培养15 h后，IR3C活菌数量开始下降，而MCS活
(3)基于图丙，利用IR3C三菌混菌发酵的产量_____(填“高于”或“低于”)MCS三菌混菌发酵的产量，其原因是__________________________________________________________________________________________________________________________。
抑制了工程菌IR3C的生长增殖或诱导其凋亡，减少了其对山梨糖的竞争性消耗，更多的山梨糖用于合成2-酮-L-古龙酸
基因ccdB编码的蛋白质