【备考2026】高考生物一轮复习资源：第10单元 第50课时 微生物的培养技术与应用（课件）

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1.通过配制培养基、灭菌、接种和培养等实验操作获得纯化的酵母菌菌落。2.分离土壤中分解尿素的细菌，并进行计数。
考点一　微生物的基本培养技术
考点二　微生物的选择培养和计数
1.培养基的配制(1)培养基的概念、用途和类型①概念：人们按照微生物对 的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。②用途：用以 微生物或积累其代谢物。
培养、分离、鉴定、保存
③培养基的种类(按物理性质分)
(2)培养基的配方①主要营养物质：水、 、氮源、 。②其他条件：pH、特殊营养物质和氧气。如表：
2.无菌技术(1)目的：获得 的微生物培养物。(2)关键：防止 污染。(3)常用方法：灭菌和消毒。
(4)注意事项①实验操作时，应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触。②为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在超净工作台上并在 附近进行。
选择无菌技术的原则：一要考虑无菌技术的效果，灭菌的效果比消毒要好；二要考虑操作对象的承受能力，活体生物材料、操作者的手等只能采用消毒，而不能用灭菌。
3.微生物的纯培养概念辨析
4.纯培养的过程(以酵母菌为例)
(1)不含氮源的平板不能用于微生物培养(2023·山东，15A)(　　)
提示　不含氮源的平板可用于固氮菌的培养。
(2)可用湿热灭菌法对实验中所使用的微量离心管、细胞培养瓶等进行灭菌(2022·湖北，4D)(　　)(3)接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃(2023·山东，15C)(　　)
提示　使用后的培养基即使未长出菌落也要在丢弃前进行灭菌处理，不能直接丢弃，以免污染环境。
分析微生物平板划线和培养的具体操作微生物平板划线和培养的具体操作如图所示，据图回答下列问题：
(1)图示①～⑧中不正确的操作及其原因分别是什么？
提示　②拔出棉塞后完全握住棉塞会造成杂菌污染，应握住棉塞上部；⑥划线时不能将培养皿完全打开，应在火焰附近将培养皿打开一条缝隙，用接种环在培养基表面迅速划三至五条平行线，盖上皿盖；⑦划线时第5次的划线不能与第1次的划线相连；⑧平板应倒置培养。
(2)在第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？
提示　划线后，线条末端菌种的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使菌种的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个微生物繁殖而来的菌落。
(3)在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？
提示　需要；划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免污染环境和感染操作者。
平板划线法操作中几次灼烧接种环的目的
考向一　微生物的基本培养技术1.(经典高考题)为纯化菌种，在鉴别培养基上划线接种纤维素降解细菌，培养结果如图所示。下列叙述正确的是A.倒平板后需间歇晃动，以保证表面平整B.图中Ⅰ、Ⅱ区的细菌数量均太多，应从Ⅲ区挑取 单菌落C.该实验结果因单菌落太多，不能达到菌种纯化的目的D.菌落周围的纤维素被降解后，可被刚果红染成红色
2.(2024·深圳联考)某同学将5个手指尖在贴有“洗手前”标签的固体培养基上轻轻按一下，然后用肥皂将该手洗干净，再将这5个手指尖在贴有“洗手后”标签的同种培养基上轻轻按一下。将这两个培养皿放入37 ℃恒温培养箱中培养24 h后，发现贴有“洗手后”标签的培养皿中菌落较少。下列相关叙述错误的是A.这个实验中需要进行灭菌处理的材料用具有培养皿和培养基等B.“将手指尖在培养基上轻轻按一下”相当于微生物培养中的接种C.从实验结果来看，洗手后的操作不会污染培养基D.培养基中的氮元素是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的
微生物的选择培养和计数
1.区分选择培养基与鉴别培养基
常见选择培养基举例：(1)缺少氮源的培养基可以筛选能利用大气中N2的微生物。(2)含青霉素的培养基可淘汰细菌，筛选出真菌。(3)无有机碳源的培养基可筛选出自养微生物。
2.微生物的选择培养和数量测定(1)稀释涂布平板法步骤①系列稀释操作：该操作常用在将细胞接种到培养基之前，通过液体稀释的方法分散细胞，随着稀释程度的增大，单位体积中的微生物细胞数量减少，细胞得以分散。操作步骤：
(2)微生物的数量测定方法①显微镜直接计数法
显微镜直接计数法本身不能区分细菌的死活，但是通过一定的辅助处理，可以实现活菌计数，如在计数前用台盼蓝染液进行染色，可以通过统计无色细胞的个数来对活菌进行计数。
当两个或多个细胞连在一
起时，平板上观察到的只是一个菌落
3.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的实验操作(1)实验原理
(3)实验结果分析与评价
选择性必修3 P19“探究·实践”：本活动初步筛选了能分解尿素的细菌，请进一步借助于生物化学的方法来鉴定所分离的菌种：分解尿素的细菌合成的脲酶可以将尿素分解成氨，氨会使培养基的 性增强，在培养基中加入 指示剂培养细菌，若指示剂 ，可确定该细菌能够分解尿素。
(1)平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒(2023·山东，15B)(　　)
提示　平板涂布时涂布器使用前必须先浸在酒精中，然后在火焰上灼烧，这种操作属于灭菌。
(2)利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物(2023·山东，15D)(　　)(3)稀释涂布平板法和平板划线法均能得到单菌落，都可用于细菌计数(2021·浙江6月选考，17C)(　　)
提示　平板划线法只能用于细菌分离，不能用于细菌计数。
(4)血细胞计数板既可用于酵母菌的数量测定，也可用于细菌的数量测定(2023·江苏，7D)(　　)
提示　血细胞计数板不适用于微小的细菌计数。
理解微生物的选择培养和计数的原理某兴趣小组从富含纤维素的土壤中取样，加入选择培养基中进行振荡培养，之后接种于鉴别培养基上进行培养，筛选出能够高效分解纤维素的微生物。请回答下列相关问题：1.从富含纤维素的土壤中取样的原因是什么？
提示　纤维素分解菌大多分布在富含纤维素的环境中。
2.分离出分解纤维素的微生物，应该配制以 为唯一碳源的培养基，目的是 。
提示　④；④形成的透明圈与菌落直径的比值最大。
3.已知刚果红与纤维素能形成红色复合物，当纤维素被分解后，复合物无法形成，平板上会出现以菌落为中心的透明圈(如图)，几号真菌降解纤维素的能力最强，理由是什么？
促进纤维素分解菌生长，抑制其他微生物的生长
4.三位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中细菌数量，在对应稀释倍数为106的稀释液中各取0.1 mL涂平板，得到以下统计结果：甲同学涂布了两个平板，统计的菌落数是236和260，取平均值248；乙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是209、240和250，取平均值233；丙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是21、212和256，取平均值163；在三位同学的统计中， 同学的统计是正确的，据此计算，每克土壤样品中含细菌 个。
考向二　目标微生物的筛选与鉴定3.(2023·广东，10)研究者拟从堆肥中取样并筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌。根据堆肥温度变化曲线(如图)和选择培养基筛选原理来判断，下列最可能筛选到目标菌的条件组合是A.a点时取样、尿素氮源培养基B.b点时取样、角蛋白氮源培养基C.b点时取样、蛋白胨氮源培养基D.c点时取样、角蛋白氮源培养基
4.(2022·江苏，3)下列是某同学分离高产脲酶菌的实验设计，不合理的是A.选择农田或公园土壤作为样品分离目的菌株B.在选择培养基中需添加尿素作为唯一氮源C.适当稀释样品是为了在平板上形成单菌落D.可分解酚红指示剂使其褪色的菌株是产脲酶菌
考向三　微生物的分离与计数5.(2024·武汉调研)研究者从温泉中筛选出能高效产生耐高温淀粉酶的嗜热细菌的过程如图1所示。将得到的嗜热细菌悬液转接到特定固体培养基上培养，得到若干菌落后用碘液作显色处理，结果如图2所示。下列说法错误的是A.过程①②一般都取 1 mL菌液转移B.试管甲、乙都通过无菌水稀释C.图2中周围不显蓝色的菌落含有所需菌种D.过程①②属于稀释涂布平板法，能对分离得到的微生物进行计数
6.(经典高考题)产脂肪酶酵母可用于含油废水处理。为筛选产脂肪酶酵母菌株，科研人员开展了相关研究。请回答下列问题：(1)常规微生物实验中，下列物品及其灭菌方法错误的是______(填编号)。
(2)称取1.0 g某土壤样品，转入99 mL无菌水中，制备成菌悬液，经__________后，获得细胞密度不同的菌悬液。分别取0.1 mL菌悬液涂布在固体培养基上，其中10倍稀释的菌悬液培养后平均长出了46个酵母菌落，则该样本中每克土壤约含酵母菌__________________个。
4.6×105(或460 000)
(3)为了进一步提高酵母菌产酶能力，对分离所得的菌株，采用射线辐照进行______育种。将辐照处理后的酵母菌涂布在以______为唯一碳源的固体培养基上，培养一段时间后，按照菌落直径大小进行初筛，选择直径______的菌落，纯化后获得A、B两突变菌株。
_____________________________________________。
(4)在处理含油废水的同时，可获得单细胞蛋白，实现污染物资源化。为评价A、B两菌株的相关性能，进行了培养研究，结果如图。据图分析，应选择菌株_____进行后续相关研究，理由是_____________________
单细胞蛋白产量高；降解脂肪能力强，净化效果好
一、过教材1.下列有关微生物培养基的成分与配制过程的相关说法，正确的是A.培养基中添加的牛肉膏可为微生物提供碳源、氮源和维生素等B.与液体培养基相比，固体培养基含有琼脂成分C.培养硝化细菌时，培养基中需要加氮源，不需要加入碳源D.为防止杂菌污染，灭菌后的培养基应立即倒入培养皿中并盖上皿盖， 待冷却后倒置E.在培养细菌时，需要将培养基调至中性或弱酸性F.配制培养基过程中应先调pH再进行高压蒸汽灭菌
2.获得纯净微生物培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。下列关于无菌操作的叙述，错误的是A.牛奶可使用巴氏消毒法，其优点是能够杀死全部微生物，保留牛奶风味B.在接种箱或超净工作台的使用过程中，可用紫外线照射30 min来进行消毒C.灼烧灭菌的对象可以是金属用具和玻璃器皿，在酒精灯火焰充分燃烧层进行D.高压蒸汽灭菌时的灭菌条件通常是100 kPa 121 ℃，15～30 minE.若培养皿盖和培养皿底之间溅有培养基，则不宜用此培养皿培养大肠杆菌F.倒平板时应该把培养皿盖完全打开，以免培养基溅到培养皿盖上G.倒平板后，对空白培养基进行培养，可检测培养基是否被污染H.接种前后接种环都必须灼烧灭菌I.倒平板和接种操作都需要在酒精灯的火焰附近进行
3.下列有关微生物分离、纯化、计数及培养的叙述，错误的是A.平板划线法接种时不能划破培养基，第3次划线应从第2次划线的末端 开始B.平板划线法接种时，若在平板上划线4个区，则需灼烧接种环5次C.用涂布器蘸取少量菌液滴加在培养基表面，涂布时可转动培养皿，使 菌液分布均匀D.在筛选产纤维素酶的微生物时，含纤维素和刚果红的固体培养基既是 选择培养基也是鉴别培养基E.接种后需立即倒置培养以避免皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染
F.对培养皿进行编号或对菌种进行标注时，应使用记号笔在皿底标记G.菌落的大小、颜色、隆起程度等特征都可作为菌种鉴定的依据H.同一稀释度下应至少对3个平板进行重复计数，然后求平均值I.利用显微镜直接计数，统计的结果一般是活菌数和死菌数的总和J.用平板划线法和稀释涂布平板法进行微生物计数时，所得数据往往比 实际数据偏小
二、过高考1.(2021·广东，21节选)基于菌株H嗜盐、酸碱耐受能力强等特性，研究人员设计了一种不需要灭菌的发酵系统，其培养基盐浓度设为60 g/L，pH为10，菌株H可正常持续发酵60 d以上。该系统不需要灭菌的原因是________________________________________________________________________________________________________(答出两点即可)。2.(2023·全国乙，37节选)在粉碎的秸秆中接种菌T，培养一段时间后发现菌T能够将秸秆中的纤维素大量分解，其原因是 。
度为60 g/L的条件下，其他杂菌因失水过多而死亡；pH为10的条件下，其他杂菌的酶变性失活，生长繁殖受抑制
3.(2022·河北，23节选)枯草芽孢杆菌为好氧微生物，液体培养时应采用 (填“静置”或“摇床震荡”)培养。培养过程中抽样检测活菌数量时，应采用 (填“稀释涂布平板法”或“显微镜直接计数法”)，其原因是__________________________________________________________________________________________________________________。4.(2022·全国乙，37节选)用菌株C可产生S，若以制糖废液作为碳源，为进一步确定生产S的最适碳源浓度，某同学进行了相关实验。请简要写出实验思路：____________________________________________________________________________________________________________________。
用稀释涂布平板法在培养基上看到的每一个菌落都来自一个活细胞，而显微镜直接计数法会将死亡的枯草芽孢杆菌也计算在内
设计一系列不同浓度的制糖废液分别培养菌株C，测定不同浓度制糖废液中S产量，寻找S产量最大的碳源浓度，确定最适碳源浓度
(1)氮源、无机盐　聚苯乙烯　湿热灭菌(高压蒸汽灭菌)(2)抑制其他微生物生长的同时保证目的微生物的生长，增加目的微生物的浓度　稀释涂布平板法　(3)①YT1、YT2、C1均可降解聚苯乙烯，YT1的降解能力最强，YT2的降解能力最弱　②基因重组
(1)高压蒸汽灭菌　在压力为100 kPa、温度为 121 ℃的条件下，维持15～30 min　(2)摇床振荡　当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌　(3)对含菌株A的发酵液进行离心　上清液和无菌水　接种上清液出现抑菌圈，接种无菌水无抑菌圈，则证明菌株A通过分泌某种化学物质来抑制金黄色葡萄球菌的生长繁殖
(1)抗生素会抑制细菌的生长繁殖　(2)OFL　维生素　(3)稀释涂布平板法　菌落数目稳定　1.54×1011(4)等量的菌株X，检测OFL的降解程度
一、选择题1.(2024·随州一模)从海水样本中分离粘质沙雷氏菌时，所用的海生菌肉汤培养基的成分如表所示。下列叙述错误的是
A.蛋白胨只为粘质沙雷氏菌提供碳源，该菌生长需要多种微量元素B.若从牛肉膏、硫酸铵、硝酸钾中筛选优质氮源，每次应只添加其中一种C.该培养基应在灭菌前调节pH，其不能用于分离粘质沙雷氏菌获得单菌落D.该培养基添加了NaCl，具有抑制某些微生物生长的作用，属于选择培养基
2.(2024·重庆联考)熔喷布的主要成分是聚丙烯，会对环境造成污染。某科研小组从土壤中分离到一种能分解聚丙烯的细菌。下列说法正确的是A.配制固体培养基时，需要在无菌的环境中进行B.制备培养基时需要先将培养基的pH调节至中性或弱碱性C.从土壤中分离能分解聚丙烯的细菌，可采用平板划线法进行分离与计数D.纯化培养时，在培养皿皿盖做标记后倒置在恒温培养箱中静置培养
3.纤维素、半纤维素、木质素参与构成植物细胞壁。可从白蚁的肠道中分离木质素分解菌来降解利用木质素，已知木质素降解过程使苯胺蓝培养基脱色。以下说法错误的是A.以木质素为唯一碳源，用稀释涂布平板法分离木质素分解菌B.脱色圈直径与菌落直径比值越小，木质素分解菌分解效果越好C.在选择培养基上挑选出菌落后，再通过平板划线法进一步纯化D.除了白蚁肠道，还可从腐烂的树皮表面分离出木质素分解菌
4.(2024·黄冈一模)某实验小组通过控制苯浓度，对从污泥处理厂的活性污泥中筛选获得的苯降解菌进行驯化培养，挑选出合适的培养条件，同时驯化培养出较好的苯降解菌，培养的实验结果如表所示。下列有关叙述错误的是
A.该实验中驯化苯降解菌的培养基中应该加入适量的琼脂B.第①组几乎没有菌落的原因可能是苯浓度过高对细菌产生了毒性C.第④组菌落数目少的原因可能是培养基中的碳源的含量不足D.由该实验可知，20 g·L－1的苯浓度是培养苯降解菌的最适浓度
5.(2025·马鞍山模拟)为检验某品牌冰激凌中大肠杆菌含量是否超标，研究小组利用配制的伊红－亚甲蓝琼脂培养基进行检测。下列有关叙述正确的是A.检测中用到的接种方法为平板划线法B.配制培养基，高压蒸汽灭菌后，调节pHC.检测中应设一个不接种的平板作为阴性对照和一个接种大肠杆菌的平 板作为阳性对照D.检测的培养基为固体培养基，大肠杆菌在该培养基上会形成红色且有 金属光泽的菌落
余垃圾迅速分解为水和二氧化碳。为制备分解有机厨余垃圾的微生物菌剂，某科研小组对两种菌种进行了最佳接种比例的探究实验，得出如图实验结果。下列说法错误的是
6.(2024·三明一模)圆褐固氮菌可独立固定空气中的氮气，且能够分泌生长素。巨大芽孢杆菌可将有机磷降解为可溶性磷。二者组合可将有机厨
C.处理有机厨余垃圾，两 种菌种的最佳接种比例 为1∶2D.两种菌种的组合菌剂还 可制成微生物肥料施用 到土壤中，提高农作物 的产量
A.圆褐固氮菌和巨大芽孢杆菌在生长过程中都需要氮源B.统计活菌数量可采用稀释涂布平板法
7.(2025·四川部分学校联考)工业生产中常用谷氨酸棒状杆菌的高丝氨酸营养缺陷型菌作为赖氨酸的发酵菌株。科研人员将紫外线照射处理过的野生谷氨酸棒状杆菌菌液(原菌液)，经过程①(稀释10倍)接种在培养基甲上培养，菌落数目不再增加时如图中甲平板。过程②表示向培养基甲中添加某种物质，继续培养。下列叙述正确的是
A.菌落A是诱变产生的高丝氨酸营养缺陷型菌种B.培养基甲是一种选择培养基，过程②向甲中添加赖氨酸C.经过程①取0.2 mL菌液涂布得到甲平板所示结果，则原菌液未突变菌 株数量约为450个/mLD.发酵结束后，将过滤得到的固体物质进行干燥即可获得赖氨酸产品
8.(2024·重庆，13)养殖场粪便是农家肥的重要来源，其中某些微生物可使氨氮化合物转化为尿素进而产生NH3，影响畜禽健康。为筛选粪便中能利用氨氮化合物且减少NH3产生的微生物。兴趣小组按图示进行实验获得目的菌株，下列叙述正确的是
A.①通常在等比稀释后用平板 划线法获取单个菌落B.②挑取在2种培养基上均能 生长的用于后续的实验C.③可通过添加脲酶并检测活 性，筛选得到甲、乙D.粪便中添加菌株甲比乙更有 利于NH3的减少
导致代谢过程中某些合成反应不能进行的菌株。如图是科研人员利用影印法(用无菌绒布轻盖在已长好菌落的原培养基上，然后不转动任何角度，“复印”至新的培养基上)初检某种氨基酸缺陷型菌株的过程。下列相关说法错误的是
9.(2024·湖北宜荆荆恩四市联考)营养缺陷型菌株是突变后某些酶被破坏，
B.进行②过程的顺序是先将丝绒布 “复印”至完全培养基上，再 “复印”至基本培养基上C.氨基酸缺陷型菌株应从基本培养 基上没有、完全培养基上对应位 置有的菌落中挑选D.统计菌落种类和数量时要每隔一 定时间观察统计一次，直到各类 菌落数目稳定为止
A.①过程接种方法为稀释涂布平板法，接种后的培养皿不能立即进行倒置培养
二、非选择题10.(2024·西安一模)聚苯乙烯是一种无色透明的热塑性塑料，常被用来制作承受开水温度的一次性容器等。但聚苯乙烯对人体具有一定的致癌性，且聚苯乙烯在自然状态下很难被分解，采用填埋的方法对其进行处理会对土壤环境造成很大的污染。科研人员从黄粉虫肠道中发现一些能够降解聚苯乙烯的微生物，并将之分离出来，相关过程如图所示。回答下列问题：
(1)为了获取能够降解聚苯乙烯的微生物，培养基中需要加入水、碳源、______________(填2种)等基本成分，其中碳源是__________。配制好的培养基常采用______________________法进行灭菌。
湿热灭菌(高压蒸汽灭菌)
(2)通过选择培养可以_____________________________________________________________________，从而能够确保从样品中分离到能够降解聚苯乙烯的微生物。将选择培养获取的微生物接种在固体培养基上，据图分析，图中的接种方法是_______________。
抑制其他微生物生长的同时保证目的微生物的生长，增加目的微生物的浓度
(3)科研人员获取了三株微生物YT1、YT2、C1，将等量的三种微生物分别接种在含聚苯乙烯的液体培养基中，培养60天后检测聚苯乙烯的降解率，结果如表所示。
①据表分析，可以得出的实验结论是_____________________________________________________________________。
YT1的降解能力最强，YT2的降解能力最弱
YT1、YT2、C1均可降解聚苯乙烯，
②为了进一步培养出更高效的能够降解聚苯乙烯的微生物，研究人员将YT1和C1菌株混合培养，一段时间后，筛选出C2菌株，其降解率比上述三种菌株高，经检测发现是菌株C1的基因整合了菌株YT1的部分基因从而提高了对聚苯乙烯的降解效果，该过程发生的变异是__________。
11.(2024·内江一模)金黄色葡萄球菌是一种常见的食源性致病菌，广泛分布于自然界。某研究人员以金黄色葡萄球菌为指示菌，探究菌株A对金黄色葡萄球菌的抑菌(会出现抑菌圈)机理。回答下列问题：(1)在培养基制备过程中，对培养基进行灭菌常采用的方法是_________________；使用该方法时，为了达到良好的灭菌效果，除了先要把灭菌锅内原有的冷空气彻底排除外，还需注意的事项有_________________________________________________________。
度为 121 ℃的条件下，维持15～30 min
在压力为100 kPa、温
(2)若菌株A为好氧性微生物，为获得足够的发酵液，则需要采用________(填“静置”或“摇床振荡”)培养。培养过程中，可采用稀释涂布平板法计数活菌数量，其计数的原理是_____________________________________________________________________________________________________________________________________________。
当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌
(3)在探究菌株A对金黄色葡萄球菌的抑菌机理时，该研究人员作出了这样的假设：菌株A通过分泌某种化学物质来抑制金黄色葡萄球菌的生长繁殖。请利用以下材料设计实验证明该假设成立。实验材料设备：含菌株A的发酵液、无菌水、含金黄色葡萄球菌的指示培养基(已打有大小相同的两个孔)、离心机等。①完善实验思路：用离心机___________________________，取适量且等量的________________，分别接种到含有金黄色葡萄球菌的指示培养基的两个孔中，一段时间后，观察是否出现抑菌圈。②预期结果：_________________________________________________________________________________________________________。
接种上清液出现抑菌圈，接种无菌水无抑菌圈，则证明菌株A通过分泌某种化学物质来抑制金黄色葡萄球菌的生长繁殖
对含菌株A的发酵液进行离心
12.(2024·天津河西模拟)近年来，水环境中发现的不同程度的抗生素残留，不仅威胁水生生物的生存，还会损害微生物的生态平衡。氧氟沙星(OFL)(C18H20FN3O4)是一种人工合成的广谱抗菌的氟喹诺酮类药物，某实验小组成功地从废水环境样品中分离得到能降解OFL的菌株X。筛选分离的操作过程如图所示。回答下列问题：
(1)利用细菌处理去除废水中的抗生素，这种方法的不足之处是___________________________，因此需要筛选抗生素优势降解菌株。
(2)筛选能够降解OFL的菌株时，富集培养基中需要加入_____作为唯一碳源或氮源。用于培养菌株X的固体培养基含有水、蛋白胨、酵母提取物和琼脂等成分，其中蛋白胨主要为菌株X提供碳源、氮源和________。
(3)过程Ⅱ、Ⅲ所利用的接种方法是_______________。过程Ⅱ中的总稀释次数为8次，在过程Ⅲ中，可以每隔24 h统计一次菌落的数目，选取______________时的记录作为结果，三个培养基中长出的菌落数量分别是145、163、154，故推测A中细菌的数量为__________个·mL－1。