生物微生物的培养技术及应用课前预习课件ppt

这是一份生物微生物的培养技术及应用课前预习课件ppt，共76页。PPT课件主要包含了学习目标，培养基的类型及用途，比较消毒与灭菌，课堂小结，微生物群，单个细胞，单菌落，概念检测，练习与应用等内容，欢迎下载使用。
第2节 微生物的培养技术及应用
通过对培养皿和培养基进行灭菌，了解消毒和灭菌的原理及方法。（科学思维）
掌握通过配制培养基，了解配制培养基的基本步骤，以及培养基中各类营养物质的配比。（生命观念）
通过对酵母菌进行纯培养，理解并掌握微生物接种、分离和培养的基本原理和过程。（科学探究）
微生物:个体无法用肉眼观察的微小生物。
真菌：酵母菌、毛霉等；原生生物：草履虫、变形虫等
病毒：SARS病毒、新冠病毒等RAN病毒；噬菌体等DNA病毒
细菌:蓝细菌、大肠杆菌、乳酸菌等；放线菌:链霉菌等
问题3：研究和应用微生物的前提是什么呢？
本章提及的微生物主要指用于发酵的细菌和真菌。
防止杂菌污染，获得纯净的微生物培养物
1）提供微生物生长繁殖所需营养和环境条件
2）确保其它微生物无法混入
3）将需要的微生物分离出来
微生物在其表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。
问题4：如何培养微生物呢？其生长繁殖所需的条件是什么呢？
培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。
有无 凝固剂琼脂
微生物的分离、鉴定、活菌计数
(1)琼脂仅作为凝固剂，不能 为微生物生长提供能量和碳源。(2)病毒为非细胞结构生物， 不能 利用人工培养基来培养。
问题3：结合教材P10中“表1-1 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成”，分析培养微生物的培养基必备营养成分有哪些？
注：含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源
一般情况下，不添加氮源培养基可用来培养固氮微生物
微生物生长繁殖的特殊需求
满足微生物对 、 、 的需求。
①培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加 ；
②培养霉菌时，需要将培养基调至 ；
③培养细菌时，需要将培养基调至 ；
④培养厌氧微生物时，需要提供 的条件。
3.几种代表型微生物的营养和能量来源
【对点训练1】(1)是碳源的物质不可能同时是氮源 。( × ) (2)培养霉菌时一般需将培养基调至碱性。( × )(3)培养厌氧型微生物时，除需要提供无机碳源之外，还需要提供无氧的条件。( × )(4)凡碳源都提供能量。（ × ）(5)除水以外的无机物只提供无机盐。（ × ） (6)培养基只能用于培养微生物。（ × ）
【当堂训练】1.下列关于培养基的说法,正确的是(　　)A.为微生物的生长繁殖提供营养基质的是固体培养基B.培养基只有两类:液体培养基和固体培养基C.固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基D.有的培养基还需要满足微生物生长对pH、氧气以及特殊营养物质的需求
2.硝化细菌广泛存在于通气性较好的土壤中,其部分代谢反应如图所示,下列关于硝化细菌的培养条件的描述正确的是(　　)A.碳源为葡萄糖 B.培养时需隔绝空气C.氮源是氮气D.培养时需适宜的温度
问题：获得纯净的微生物培养物的关键是什么？获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染。问题：防止杂菌污染的方法有哪些呢？无菌技术主要包括消毒和灭菌。
1．消毒概念：是指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。适用对象：操作的 空间 、操作者的 衣着 和手等。
有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。
芽孢壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。
细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖作用的无性生殖细胞。能直接发育成新个体。
2．灭菌概念：是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。适用对象：用于微生物培养的 器皿 、 接种 用具和 培养基 等。
利用沸水、流通蒸汽或高压蒸汽进行灭菌的方法。
实验室常用高压蒸汽灭菌锅，在压力100kPa、温度121 ℃条件下，维持15-30min
高温蒸汽破坏蛋白质、核酸等结构使其变性
操作简便，效果可靠，可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体。基本保持培养基的营养成分不被破坏。
干热灭菌箱内，在160-170 ℃的热空气中维持下2-3h达到灭菌目的
使微生物细胞膜破坏、蛋白质变性和原生质干燥等
耐高温，需保持干燥的物品
玻璃器皿 （如试管、培养皿、吸管、注射器）
金属器具 （如针头、 镊子、剪刀等）
将微生物的接种工具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌。
效果：最彻底原理：使微生物燃烧对象：接种工具如接种环、接种针，以及接种过程中的试管口或瓶口等易被污染部位
煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法
湿热灭菌、干热灭菌灼烧灭菌
防止杂菌污染的措施：
P10旁栏思考2：无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？
有效避免操作者自身被微生物感染。
实验前：对操作空间、操作人员消毒对所用器皿、接种用具和培养基灭菌操作时：在超净工作台上并在酒精灯火焰附近无菌区操作避免已灭菌处理材料再次污染
【对点训练2】(1)获得纯净的微生物培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。( √ )(2)灭菌相比消毒对微生物的杀灭更彻底。( √ )(3)无菌操作的对象只要是没有生物活性的材料(如培养基、接种环等)都可采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。( × )提示：培养基通常采用高压蒸汽灭菌，而接种环则采用灼烧灭菌。(4)培养基最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌。( √ )(5)接种环、接种针等金属用具，直接在酒精灯火焰的内焰部位灼烧灭菌。 （ × ）
3.无菌技术是在操作过程中,保持无菌物品与无菌区域不被微生物污染的技术,主要包括消毒和灭菌。下列相关叙述正确的是(　　)A.100 ℃煮沸消毒5~6 min,可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢B.巴氏消毒法在杀死牛奶中所有微生物的同时并基本不破坏牛奶的营养成分C.进行动物细胞的传代培养前,需用紫外线对超净工作台进行灭菌处理D.高压蒸汽灭菌是湿热灭菌法中效果最好的,可用于培养皿的灭菌处理4.无菌操作技术在生产生活中应用广泛。下列相关叙述错误的是(　　)A.实验者双手用肥皂洗手后还需用酒精棉球擦拭B.对培养基、接种环等可放入干热灭菌箱中灭菌C.使用后的培养基需经过彻底灭菌处理后方可丢弃D.喷洒石炭酸配合紫外线照射可提高消毒效果
基本成分：碳源、氮源、水、无机盐
特殊需求：维生素（如乳酸杆菌）
培养物、纯培养物、纯培养概念辨析：
在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体。
由单一个体繁殖所获得的微生物群体。
获得纯培养物的过程就是纯培养。
(1)菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落。(2)单菌落：一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。(3)获得单菌落的方法：稀释涂布平板法、平板划线法
在相同培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征
2.目的要求 (1)学会配制培养酵母菌的培养基并倒平板。 (2)学会进行无菌操作。 (3)尝试通过平板划线操作来获得纯化的酵母菌菌落。 3.材料用具 酵母菌培养液、马铃薯、葡萄糖(或蔗糖)、琼脂、蒸馏水、天平、小刀、纱布、烧杯、锥形瓶、棉塞、牛皮纸(或报纸)、皮筋、培养皿、接种环、酒精灯、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、干热灭菌箱和恒温培养箱等。
称取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000ml，加热煮沸至马铃薯软烂，用纱布过滤。向滤液中加入20g葡萄糖（也可用蔗糖代替）、15~20g琼脂，用蒸馏水定容至1000ml。
将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧，再放入高压蒸汽灭菌锅中，在压力为100kPa、温度为121℃的条件下，灭菌15~30min。将5～8套培养皿包成一包，用几层牛皮纸包紧，放入干热灭菌箱内，在160～170℃灭菌2h。
待培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。
1.拔出锥形瓶的棉塞。
2.将瓶口迅速通过火焰。
3.用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基（10 〜 20 mL）倒入培养皿，立即盖上皿盖。
4.等待培养基冷却凝固后，将培养皿倒过来放置。
可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。
平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高；将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
1.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？
最好不要用这个平板培养微生物。 防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。
将所倒平板放入37℃的恒温箱中培养12h～24h，观察是否有菌落存在以确定是否被污染或灭菌是否彻底。
2.怎么确定所倒平板未被杂菌污染或灭菌彻底？
（2）接种和分离酵母菌
通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。经过数次划线后培养可以分离得到单菌落。
玻璃涂布器 （ 涂布平板用）
接种针 （ 穿刺接种用 ）
接种环 （ 划线接种用 ）
①灼烧接种环，直至接种环金属丝烧红
②在火焰旁冷却接种环，拔出酵母菌培养液试管的棉塞
④在火焰附近用接种环蘸取一环菌液
⑤试管口通过火焰，并塞上棉塞
⑥将皿盖打开一条缝隙，用接种环在培养基表面迅速划三至五条平行线，盖上皿盖
⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线
①接种环只蘸一次菌液，但要在培养基不同位置连续划线多次；
③每次划线前灼烧接种环进行灭菌；
④划线操作结束后，仍需灼烧接种环，培养皿倒置培养。
【平板划线法注意事项】
Ⅰ．每次灼烧接种环的时间和目的
Ⅱ．在第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线的原因是：划线后，线条末端酵母菌的数目比线条起始处要 少 ，每次从上一次划线的末端开始，能使酵母菌的数目随着划线次数的增加而逐步 减少，最终能得到由 单 个细胞繁殖而来的菌落。Ⅲ．最后一次划线与第一次的划线 不能相连。因为最后一次划线已经将细菌稀释成单个的细胞，如果与第一次划线相连则 增加了细菌的数目，得不到纯化的效果。
可观察到独立的菌落，这些菌落在颜色、形状和大小上相似 ，酵母菌菌落一般表面光滑，多呈乳白色。若在培养基中观察到不同形态 的菌落，原因可能是菌液不纯，混入其他杂菌，或在实验操作过程中被杂菌污染。
（3）培养酵母菌完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28℃左右的恒温培养箱中培养24～48 h。
1.在未接种的培养基表面是否有菌落生长？如果有，说明了什么？
2.在接种酵母菌的培养基上，你是否观察到了单菌落？这些菌落的颜色、大小是否一致？如果你观察到了不同形态的菌落，你能分析出可能是由哪些原因引起的吗？
培养未接种的培养基的目的是检测 培养基是否被杂菌污染 (或检查培养基制备是否合格)。未接种的培养基表面若有菌落生长，则说明培养基被污染，应该重新制备；若无菌落生长，则说明未被污染 。
平板划线法接种菌种时，可防止杂菌污染的操作(1)接种前将接种环放在 酒精灯火焰上灼烧 。 (2)划线操作在 酒精灯火焰 旁进行。(3)接种环蘸取菌液前后，要将试管口通过 火焰 。(4)划线时将培养皿的皿盖打开一条 缝隙 ，用接种环在培养基表面 迅速 划线，划线后及时盖上皿盖 。
【对点训练3】(1)平板划线操作中，划完一个区域后要将接种环灼烧，再划下一个区域。(√)(2)平板划线法接种时，每一次划线前都要蘸取菌种。( × )(3)倒平板时将培养皿的皿盖拿开，以便于将锥形瓶中的培养基倒入培养皿。 （ × ）
5.如图为实验室培养和纯化酵母菌过程中的部分操作步骤,下列说法不正确的是(　　)
A.①步骤使用的培养基是已经调节pH并灭菌的培养基B.①②③步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行C.③到④的过程中,接种环共灼烧了5次D.④步骤操作时,不可将第1次和第5次的划线相连
6.菜籽粕含有35%~45%的蛋白质,是畜禽饲料的重要原料,但其中的单宁等抗营养因子限制了菜籽粕的应用。研究者将不同菌种接种到菜籽粕与麸皮制成的固体培养基中发酵48 h,测定菜籽粕中单宁的含量,结果如图。下列相关叙述错误的是(　　)A.菜籽粕与麸皮为微生物提供碳源和氮源B.接种后需对培养基进行高压蒸汽灭菌C.黑曲霉菌对单宁的去除效果最为理想D.对照组为不接种微生物的固体培养基
7.回答下列与细菌培养相关的问题。(1)在细菌培养时，培养基中能同时提供碳源、氮源的成分是________(填“蛋白胨”“葡萄糖”或“NaNO3”)。通常，制备培养基时要根据所培养细菌的不同来调节培养基的pH，其原因是________。硝化细菌在没有碳源的培养基上__________(填“能够”或“不能”)生长，原因是________________。(2)用平板培养细菌时一般需要将平板___ (填“倒置”或“正置”)。(3)单个细菌在平板上会形成菌落，研究人员通常可根据菌落的形状、大小、颜色等特征来初步区分不同种的微生物，原因是____________。(4)有些使用后的培养基在丢弃前需要经过________处理，这种处理可以杀死丢弃物中所有的微生物。
7. (1)蛋白胨　不同细菌生长繁殖所需的最适pH不同　能够　硝化细菌可以利用空气中的CO2作为碳源　(2)倒置　(3)在一定的培养条件下，不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征　(4)灭菌
8. (1)氮源　牛肉膏　灭菌　(2)温度　酸碱度　(3)灭菌　消毒　变性　(4)平板划线法　稀释涂布平板法　(5)将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生
8．下表是培养某微生物的培养基的配方，请回答下列问题：(1)培养基的类型很多，但培养基中一般都含有水、碳源、____和无机盐。上述培养基配方中能充当碳源的成分是________。培养基配制完成以后，一般还要调节pH并对培养基进行_____处理。(2)在配制培养基时，除考虑营养条件外，还要考虑____、___和渗透压等条件。(3)在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养器皿进行_______(填“消毒”或“灭菌”)；操作者的双手需进行清洗和____；空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质________，还能损伤DNA的结构。(4)分离纯化微生物最常使用的接种方法是_______和_______。(5)在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是________。
1.微生物的纯培养既需要适宜的培养基，又要防止杂菌污染。判断下列相关表述是否正确。 （1）培养基中的营养物质浓度越高，对微生物的生长越有利。（ ） （2）消毒和灭菌的杀菌程度存在差异。 （ ） （3）微生物的纯培养物就是不含有代谢废物的微生物培养物。（ ）
2.日常生活中保存食品的方法有哪些？这些方法是如何阻止或抑制微生物生长的？
提示：日常生活中保存食品的方法有干制、腌制、低温储存等。干制可以降低食品的水分含量；腌制可以通过食盐、糖等制造高渗环境，从而抑制微生物的生长和繁殖；低温则是通过降低微生物的代谢速率来抑制微生物的生长和繁殖。
1.某同学将5个手指尖在贴有“洗手前”标签的培养基上轻轻按一下。然后用肥皂将该手洗干净，再将5个指尖在贴有“洗手后”标签的同种培养基上轻轻按一下。将这两个培养皿放入37℃恒温培养箱中培养24h后，发现贴有“洗手后”标签的培养皿中菌落较少。请分析回答下列问题。 （1）这个实验中需要进行灭菌处理的材料用具有 （2）“将指尖在培养基上轻轻按一下”相当于微生物培养中的哪一步操作？ （3）从实验结果来看,洗手后我们就能进行无菌操作了吗？操作时，我们可以采用什么方法来避免手上微生物的污染？
（1） 培养皿和培养基 （2）接种。（3）通过实验结果可以看到，洗手后手上还有一些微生物，不能直接进行无菌操作。可以通过用酒精棉球擦拭双手，或戴消过毒的手套等方法来避免手上微生物的污染。
2.某生物兴趣小组将从葡萄皮上成功分离来的野生酵母菌分别接种于3个盛有等量同种液体培养基的锥形瓶中，并放置在摇床上培养，摇床转速分别为 210 r/min， 230 r/min和250 r/min。培养时间与酵母菌种群密度的关系如下图所示。请分析回答下列问题。
（1）摇床转速不同,意味着培养条件有什么不同？
提示：意味着培养液中02含量不同。
（2）从图中数据你可以得出什么结论?其原因是什么?
培养液中02含量越高,酵母菌种群密度越大。
（3）为什么培养8h后，其中2个锥形瓶中酵母菌的种群密度基本达到稳定?
提示：这时候已经达到了环境容纳量。
①配制培养基（马铃薯、葡萄糖、琼脂、水）
③倒平板（在酒精灯火焰附近操作）
培养基：湿热灭菌（高压蒸汽灭菌锅）
培养皿：干热灭菌（干热灭菌锅）
用接种环在固体培养基上用平板划线法接种
平板倒置，放入28℃左右的恒温培养箱培养
第2节 微生物的培养技术及应用
二 微生物的选择培养和计数
通过对土壤中分解尿素的细菌进行分离和计数，理解并掌握微生物计数的方法。（科学探究）
通过实例，理解各类微生物都能适应其生活环境。（生命观念）
根据微生物的代谢类型，配制选择培养基，总结分离微生物的过程和测定微生物数量的常用方法。（科学思维）
自然界中微生物数量繁多，种类庞杂，要想从中分离出需要的特定微生物并不容易，尤其当要分离的微生物在混合的菌群中不是优势种群时，仅通过一般的平板划线法或稀释涂布平板法很难实现。该怎么办呢？
寻找耐高温的DNA聚合酶
PCR是一种在体外DNA复制的技术，此项技术要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。
水生栖热菌能在70-80℃高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下不能生存。
高温环境（热泉、火山口）
寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应环境中去寻找。
问题：这对在实验室中选择培养特定的微生物有什么启示?
微生物的选择培养、分离与计数
人为提供有利于目的菌生长，同时抑制或阻止其他微生物生长的条件（包括营养、温度和PH等），进行实验室微生物的筛选。
在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基称为选择培养基。
尿素［CO(NH2)2］含氮量高，化学性质稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素施入土壤后，会被土壤中的某些细菌分解成NH3，再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。而这些细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶。
在选择培养基中，以尿素作为唯一氮源，只有能合成脲酶的细菌才能生长发育繁殖。
问题：如何筛选出尿素分解菌呢？
除以尿素作为唯一氮源外，其他营养成分与普通培养基基本相同。
当样品的稀释度足够高时，通过统计平板上的菌落数，能推测出样品中的活菌数目。
不同微生物在土壤中含量不同，分离不同的微生物采用不同的稀释度，以保证获得菌落数在30～300之间，适于计数的平板。
选择一个比较宽的范围，将1×103～1×107倍稀释的稀释液分别涂布到平板上培养，以保证能从中选择出菌落数在30～300的平板进行计数
在初次实验中，对于稀释的范围没有把握，怎样做才能保证从中选择出菌落数在30～300的平板进行计数？
在同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值。适当的稀释度、涂布是否均匀是成功统计菌落数目的关键。
分析实验结果时，要考虑重复组结果是否接近，如果相差太大，意味着操作有误，需重新实验。
绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以尿素作为唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。
如何证明一个选择培养基具有选择性呢？
应该设置基础培养基（如牛肉膏蛋白胨培养基）或完全培养基作为对照，若基础培养基或完全培养基中生长的菌落数菌多于该选择培养基，则该选择培养基具有选择性。
能分解尿素的细菌不能分解尿素的细菌都能存活
能分解尿素的细菌可存活
问：培养基配制好后要进行什么操作？
问：土壤微生物存在土壤中，怎么选择合适的土壤？
细菌适宜在酸碱度接近中性的潮湿土壤中生长，绝大多数分布在距地表3〜8 cm的土壤层。因此，取样时一般要铲去表层土。
问：土壤收集后能不能直接倒入平板内培养？应该怎么操作？
问：平板准备好的同时，还需要准备什么？
2.样品的稀释（梯度稀释菌液）
②将10 g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀，制成菌液。取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。
3. 稀释涂布平板法接种
①取0.1mL 菌液滴加到培养基表面
②将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中
③将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布
④用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀
注意：各梯度分别涂布3个平板（重复实验）1个不涂布作空白对照。
培养条件：不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。细菌一般在30～37℃的温度下培养1～2d。
防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
观察：每隔24h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果。
一般来说，在相同的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征，如形状、大小和颜色等。
①统计的菌落数往往比活菌的实际数目少；②统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。
原因：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。
每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M
C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数；M代表稀释倍数。V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)；
可以用来测定土壤、水、食品等样品中的细菌、酵母菌、芽孢和孢子等的数量，但不适于测定样品中的放线菌、丝状真菌等丝状体微生物的数量。
实例分析1：甲同学做此实验在稀释倍数105获得3个平板，菌落数分别是80、90、100，涂布平板时均使用0.1ml菌液，试计算每克土壤中可以分离尿素的细菌数目？
问题1:结合对照组，分析培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出一些菌落。
如果没有接种的培养基上没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。如果接种后的完全培养基上的菌落数明显多于选择培养基上的菌落数，说明选择培养基筛选出了一些尿素分解菌。
问题2:你是否获得了某一稀释度下菌落数 为30～300的平板？在这一稀释度下，是否至少有2个平板的菌落数接近？
如果得到了两个或多个菌落数为30~300的平板，说明稀释度合适，操作比较成功，能够进行菌落的计数。
问题3:你统计的每克土样中能分解尿素的细菌的菌落数是多少？与其他同学统计的结果接近吗？如果差异很大，可能是什么原因引起的？
如果是用同一土样进行的操作，数据应该比较接近。如果差异很大，就需要从操作是否规范、培养基配制是否合理等方面查找原因。
问题4:得到的菌落一定是分解尿素的细菌吗？
不一定，还需要进一步的鉴定
本活动只是初步筛选了能分解尿素的细菌,对分离的菌种进行鉴定还需要借助生物化学的方法。你可以查阅相关资料,进一步设计实验来鉴定自己分离的菌种。
脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增强→ 酚红变红→脲酶阳性
呈碱性，遇酚红指示剂呈 色。
在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。
在培养基中加入某种指示剂或化学药品(不影响微生物正常生长)，使微生物的某种代谢产物与培养基中的特定指示剂或化学药品发生反应。从而达到鉴定的作用。
伊红和美蓝培养基鉴别大肠杆菌
选择培养基与鉴别培养基
①各操作细节要保证“无菌”。如移液管要经过灭菌，梯度稀释时，试管口和移液管在离火焰1~2cm处，涂布器要经过灼烧灭菌等。
②将涂布器浸在盛有质量分数为70%的酒精的烧杯中。取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在火焰上灼烧。
③操作中要注意防火。不要将过热的涂布器放在盛有酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精。
④涂布结束后，应将一个未接种的培养基和已接种的培养基放在一起培养，以检测培养基是否灭菌彻底。
直接计数法——显微镜直接计数（1）原理 利用特定的__________或____________在______下观察、计数，然后再计算________的样品中微生物的数量； *血细胞计数板常用对相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等； 细菌计数板可对细菌等较小的细胞进行观察和计数。（2）优点 ________（3）缺点 ①统计结果一般是_________________，不能区分死菌与活菌。 ②个体小的细菌在显微镜下难以观察。 ③不适于对运动细菌的计数。
微生物选择培养获取纯培养物的方法-稀释涂布平板法
微生物的选择培养和计数
选择培养基的概念及举例
稀释涂布平板法的操作过程
间接计数法 — 稀释涂布平板法
直接计数 —计数板计数法
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
（3）稀释涂布平板法接种
（4）微生物的培养与观察
1. 研究人员用无机盐、琼脂和石油配制的培养基从被石油污染的土壤中筛选出了一种石油降解菌。判断下列相关表述是否正确。（1）这种培养基是一种选择培养基。（ ）（2）利用这种石油降解菌可以降解石油。修复土壤。（ ）（3）相对于未被污染的土壤,从被石油污染的土壤中更容易分离到石油降解菌。（ ）
2.用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数,原因是（ ） A. 菌落中的细菌数目是固定的 B. 平板上的一个菌落就是一个细菌 C. 通过此方法统计的菌落数与活菌的实际数目相同 D. 平板上的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌
1.反刍（chú）动物，如牛和羊具有特殊的器官一瘤胃。在瘤胃中生活着多种微生物，其中许多微生物能分解尿素。请你设计一个实验从瘤胃中分离出能够分解尿素的微生物。
反刍动物的瘤胃中有大量的微生物，其中就有分解尿素的微生物。由于瘤胃中的微生物多为厌氧菌，接触空气后会死亡，因此分离其中能分解尿素的微生物除了需要准备选择培养基，还应该参照厌氧菌的培养方法进行实验设计。
2.地球上的植物每年产生的纤维素超过70亿吨，其中 40% ~ 60% 能被土壤中某些微生物分解利用，这是因为它们能够产生纤维素酶。对这些微生物的研究与应用，使人们能够利用精杆等生产酒精，用纤维索酶处理服装面料等。已知刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不与水解后的纤维二糖、葡萄糖等发生这种反应。当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红与纤维素形成红色复合物；而当纤维索被纤维素分解菌分解后，复合物就无法形成，培养基中会出现以这些菌为中心的透明圈(如下图所示)。请回答下列问题。
（1）现在要从土壤中分离纤维素分解菌，请你给出详细的实验方案。
1、筛选原理：纤维素分解菌能产生纤维素酶水解纤维素。因此，在培养基中加入纤维素作为唯一碳源，只有纤维素分解菌能利用纤维素，从而筛选出目的菌纤维素分解菌。
2、鉴定原理：刚果红染料与纤维素结合形成红色复合物，但并不与纤维素水解后的纤维二糖、葡萄糖等发生这种反应。因此，在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红与纤维素形成红色复合物；而当纤维素被纤维素分解菌分解后，复合物就无法形成，培养基中会出现以这些菌为中心的透明圈。通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。
3、分解菌分解纤维素的能力大小判断：可以根据透明圈直径与纤维素分解菌菌落直径的比值大小来判断分解菌分解纤维素能力，比值越大，分解纤维素的能力越强。