人教版 (2019)选择性必修3微生物的选择培养和计数课前预习课件ppt

这是一份人教版 (2019)选择性必修3微生物的选择培养和计数课前预习课件ppt，共104页。PPT课件主要包含了微生物，制作工具和原料灭菌，接种纯的菌种，人教版选择性必修3，第1章第2节，培养基，营养物质，生长繁殖，固体培养基，液体培养基等内容，欢迎下载使用。
Q1、失败的原因是什么？
主要原因是在制作过程中有杂菌混入，大量繁殖
难以用肉眼观察的微小生物的统称。
控制发酵条件避免杂菌进入
Q2、怎么才能保证无处不在的杂菌不混入发酵物中呢？
实验室培养微生物的要求：
防止杂菌污染，获得纯净的微生物培养物是研究和应用微生物的前提，也是发酵工程的重要基础。
①提供微生物生长繁殖所需营养和环境条件
②确保其他微生物无法混入
③并将需要的微生物分离出来
培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物
琼脂易溶于沸水，在98 ℃以上熔化，在44 ℃以下凝固，在常规培养条件下呈现固态。
固体培养基中的琼脂仅作为凝固剂，不能为微生物生长提供能量和碳源。
菌落:是指由单个微生物细胞在适宜固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度，形成以母细胞为中心的一团肉眼可见的、有一定形态、构造等特征的子细胞群体。
不同菌落的菌落特征，如形状、大小、颜色等不同。
问：一个菌落是一个种群还是一个群落？
加入能与目的菌的代谢产物发生显色反应的指示剂。用于鉴别不同类型的微生物。
根据某种微生物的特殊营养要求配置。允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。
分离酵母菌、霉菌等真菌
含有化学成分还不清楚或化学成分不明确的天然物质。
配制实验室常用培养基和工业生产
用于实验室中进行的营养、代谢、遗传、鉴定和生物测定等定量要求较高的研究
（1）基本成分：碳源、氮源、水、无机盐
功能：构成细胞物质和一些代谢产物；有机碳既是碳源又是能源。
功能：主要用于合成蛋白质、核酸及含氮代谢产物等。
来源于动物原料，含有糖、维生素和有机氮等营养物质。
Ca、K 、Mg为大量元素Zn、Cu、Mn、C、M等微量元素
注：含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源
功能：提供无机营养、调剂PH、 维持渗透压
功能：①良好的溶剂；②维持生物大分子结构的稳定等
3.含有C、H、O、N的有机物可作为 微生物的碳源、氮源、能源；
蛋白质、NH4＋、NO3-等
1.自养型微生物与异养型微生物培养基的主要差别在于 ；2.无机氮源不但能给有些自养型微生物提供 ，也能作为 ，
NH3：既是硝化细菌的氮源，又是它的能源物质
4.同一种物质不能既做碳源又做氮源（ ）
牛肉膏或蛋白胨，可为异养微生物提供碳源和氮源
pH、特殊营养物质（如维生素,氨基酸和碱基)，O2等
维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等
① 含有C、H、O、N的有机物可作为异养型微生物的碳源、氮源、能源。② 自养型微生物与异养型微生物培养基的主要差别在于碳源。 因此可以根据培养基中营养物质判断微生物的代谢类型。③无机氮源不但能给自养型微生物提供氮源，也能作为能源物质， 如NH3既作为硝化细菌的氮源，也作为能源（NH3氧化释放的化学能）。④微生物常用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；常用的无机氮源是铵盐、 硝酸盐
⑤病毒为非细胞结构生物，只能在活细胞中营寄生生活，目前不能利用 人工培养基来培养
1．微生物的培养需要配制培养基，以下叙述合理的是( )A.培养基中都含有碳源、氮源、水、无机盐B.因成分不同，培养基可分为固体培养基和液体培养基C.培养基中的氮源能提供氮元素，但不能作为能源物质D.筛选自养型微生物时，培养基中不需要加碳源
2.下表是某种微生物培养基的成分。以下说法错误的是（    ）
A．此培养基可用来培养自养型微生物B．此表中的营养成分共有三类，即水、无机盐、氮源C．若除去①，此培养基可培养固氮菌D．培养基中若加入氨基酸，则它可充当碳源、氮源
3.分析基础培养基实例——牛肉膏蛋白胨培养基，回答问题：
（1）分析该培养基的营养构成，上述实例属于固体/液体培养基？为什么？
（2）为什么培养基需要氮源？（P10旁栏思考）
培养基中的氮元素是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的。
（3）所有微生物是否都可以用培养基进行培养？
否。病毒是没有细胞结构微生物,必须在活细胞内寄生。
使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。
指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子。
芽孢是某些细菌（芽孢杆菌属、梭状芽孢杆菌属、芽孢乳酸菌属等）在营养条件缺乏时，在菌体内形成的一个圆形或椭圆形、含水量低、抗逆性强的休眠体；孢子是脱离亲本后能直接或间接发育成新个体的生殖细胞，它是有丝分裂或减数分裂的产物。
芽孢和孢子具有高度的耐热性，可抗化学药物和抗辐射。
获得纯净微生物培养物的关键是：
100℃煮5～6min。可杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢。
62～65℃煮30min或80～90℃下处理0.5～1min。可杀死绝大部分微生物，不破坏食物的营养成分。
用75%酒精擦拭双手、用氯气消毒水源等。
对接种室、接种箱或超净工作台用紫外线照射30min，以杀死物体表面或空气中的微生物。
效果最好：高压蒸汽灭菌
培养基、无菌水等（需要保持一定的水分）
操作简便，效果可靠，可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体。基本保持培养基的营养成分不破坏。
高温蒸汽破坏蛋白质、核酸等结构使其变性
①使用前必须先将锅内冷空气排尽，才能达到预设的压力和温度。②灭菌完成时，待锅内压力自然降到０时，再打开气阀。
耐高温和需要保持干燥的物品，如玻璃器皿、金属用具。
使微生物细胞膜破坏、蛋白质变性和原生质干燥等
实验前：对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行 。对将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行 。操作时：避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品接触。实验操作在超净工作台上并在酒精灯火焰附近进行。实验后：培养基需灭菌之后再丢弃，避免污染环境或感染操作者。
无菌技术除用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么作用？
无菌技术还能有效避免操作者被微生物感染。
注意：①实验室中，切不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，以防止被微生物感染。②使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境。
1.下列有关无菌技术的说法，正确的是( ) A.无菌技术的关键是杀灭实验室中的所有的微生物 B.培养微生物的试剂和器具都要进行湿热灭菌 C.经巴氏消毒法处理的食品因微生物未被彻底消灭，不能在常温下长期保存 D.无菌技术中，若处理对象为液体，则只能消毒，不能灭菌
2.关于消毒、灭菌的方法，下列描述错误的是( )A.接种用的无菌操作台要进行灭菌处理B.用巴氏消毒法处理牛奶是因为高温易破坏牛奶的营养成分C.煮沸半小时后的凉开水中可能仍含有部分芽孢和孢子D.先喷洒消毒液，再用紫外线照射可增强消毒效果
3.在微生物培养过程中，关于灭菌和消毒的理解错误的是（     ）A．消毒是指杀死物体表面或内部部分微生物B．灭菌是杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子C．实验中使用后的培养基丢弃前一定要进行消毒处理，以免污染环境D．吸管和培养皿可以采用干热灭菌法
不耐高温的液体（牛奶）：
培养皿、吸管等玻璃器皿：
家庭餐具等生活用品消毒：
4.以下器具、物品或对象与所采用的消毒或灭菌方法分别是什么？
（一）培养物、纯培养物、纯培养概念辨析：
在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含有特定种类微生物的群体。
由单一个体繁殖所获得的微生物群体。
(1)菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落
菌落的大小、形状、颜色、透明度、光泽度等是鉴定菌种的重要依据。
(2)单菌落：将单个微生物分散在固体培养基上，得到由单个微生物繁殖形成的纯培养物。
① 学会配制培养酵母菌的培养基并倒平板
③ 尝试通过平板划线操作来获得纯化的酵母菌菌落
天平，小刀，纱布，烧杯，锥形瓶，棉塞、牛皮纸（或报纸）；
皮筋，培养皿，接种环，酒精灯，超净工作台；
高压蒸汽灭菌锅，干热灭菌箱和恒温培养箱等；
配制培养基 → 灭菌 → 倒平板
牛皮纸：在灭菌时能避免水蒸汽凝结时浸湿棉塞；在取出培养基锥形瓶时也起到隔绝空气中杂菌污染的作用。
思考：如果要调节培养基的pH，应该在灭菌前还是灭菌后？
取5-8套培养皿包成一包用几层牛皮纸包紧
待培养基冷却到50℃左右，在酒精灯火焰附近倒平板。
避免周围环境中微生物的污染
目的：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基
不能完全打开皿盖，避免杂菌污染培养基
目的：避免培养基表面的水分过快地挥发；防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
（1）培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？
用手触摸，刚刚不烫手即可。
将所倒空白平板放入恒温箱中培养12h～24h，观察是否有菌落。
（3）怎么确定所倒平板未被杂菌污染？
（2）平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
（4）在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？
不能。防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。
通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。经过数次划线后培养，可以分离到单菌落。
(2)接种和分离酵母菌
→避免接种环温度过高而杀死菌种。
→注：不要将最后一次的划线与第一次的划线相连。
接种环只蘸一次菌液，但要在培养基不同位置连续划线多次；
每次划线前后灼烧接种环进行灭菌；
划线操作结束后，仍需灼烧接种环。
划线后，培养皿倒置培养。
思考：完成图示操作，共做了五次划线，接种环灼烧灭菌了几次？
(1)在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？
划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
(2)平板划线时最后一次划线为何不能与第一次划线相连？
最后一次划线已经将酵母菌稀释成单个细胞，如果与第一次划线相连，则增加了酵母菌数目，得不到纯化的效果。
(3)用平板划线法接种酵母菌的过程中，牵涉到好几次灼烧接种环，每次灼烧的目的分别是什么？
杀死接种环上原有的微生物，避免污染培养物
杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端，使每次划线菌种数目减少
杀死接种环上残存的菌种，避免微生物污染环境和感染操作者
(5)平板划线时不能划破培养基的原因？
①一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；
②存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。
(4)在观察时发现第一区有菌落生长，而第二区域无菌落生长，可能是哪个操作失误造成的？
①接种环灼烧后未冷却直接进行划线；②划线未从第一区域的划线末端开始。
完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板 (一般做三组，重复实验)和一个未接种的平板倒置，放入28℃左右（培养温度因酵母菌种类的不同而稍有差异）的恒温培养箱中培养24~48h。
作空白对照，该培养皿无菌落说明培养基没有污染。
（1）在未接种的培养基表面是否有菌落生长？如果有，说明了什么？
在未接种的培养基表面应该没有菌落生长，如果有，说明培养基被杂菌污染了。
（2）在接种酵母菌的培养基上，你是否观察到了单菌落？这些菌落的颜色、形状和大小是否一致？如果你观察到了不同形态的菌落，你能分析出可能是由哪些原因引起的吗？
可观察到单菌落。如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合酵母菌菌落的特点，则说明纯化酵母菌的操作成功；如果观察到了不同形态的菌落，可能是接种的菌种不纯或者无菌操作不规范等原因引起的。
（3）你是如何记录实验结果的? 请与其他同学交流、互评。
可以在培养12h和24h后，分别观察菌落的大小、形状、颜色。培养24h后，观察菌落的大小、形状是否发生变化，菌落颜色是否加深，光泽度是否增加，等等
（一般培养时间越长，菌落越大、颜色越深）
1．(2024·湖南高考)微生物平板划线和培养的具体操作如图所示，下列操作正确的是（　　）
A．①②⑤⑥ B．③④⑥⑦ C．①②⑦⑧ D．①③④⑤
2、(2023·安徽卷)下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方，请根据表格和所学知识回答下列相关问题。(1)从生态系统的成分上看，大肠杆菌属于____________。(2)若根据用途划分，该培养基属于________(填“选择”或“鉴别”)培养基。若要用上述培养基来筛选出土壤中的尿素分解菌，培养基的营养成分必需怎样更改？________________________________。(3)在微生物培养的过程中，为防止杂菌污染，需要对培养基进行_________________________。
(4)图1和图2是培养某细菌的结果图，其对应的接种方法分别是：_________________和____________________。 (5)以下过程中所利用的主要微生物的细胞结构与大肠杆菌较相似的有_______。A．制作果酒　　 B．由果酒制作果醋 C．制作泡菜 D．制作腐乳
紫外线消毒化学药物消毒巴氏消毒煮沸消毒
湿热灭菌干热灭菌灼烧灭菌
基本成分：碳源、氮源、水、无机盐
特殊需求：维生素（如乳酸杆菌）等
配制培养基➡灭菌➡倒平板
如何从自然界中分离出需要的特定微生物？
自然界中微生物数量繁多，种类庞杂，要想从中分离出需要的特定微生物并不容易，尤其当要分离的微生物在混合的菌群中不是优势种群时，仅通过一般的平板划线法很难实现。该怎么办？
聚合酶链式反应（PCR）是一种在体外扩增DNA片段的技术，此项技术要求使用耐高温的DNA聚合酶。如果请你来找这种耐高温的酶，你会去哪里找？
美国黄石国家公园的热泉中有一种水生栖热菌，能在70～80℃的高温条件下生存。
从热泉中筛选出的水生栖热菌中提取出来。
思路：耐高温的酶←耐高温生物体←高温环境；
寻找目的菌种时要根据它对___________的要求，到相应的环境中去寻找。
实验室中微生物筛选原理:
人为提供有利于__________的条件（包括_____、_____和_____等），同时____________其他微生物的生长。
——微生物的选择培养和计数
在微生物学中，将允许 生长，同时 或 其他种类微生物生长的培养基称为选择培养基。
能消除石油污染的微生物
怎么证明一个选择培养基具有选择性呢？
应该设置基础培养基（如牛肉膏蛋白胨培养基）或完全培养基作为对照，若基础培养基或完全培养基中生长的菌落数菌多于该选择培养基，则该选择培养基具有选择性。
那么如果让你分离土壤中分解尿素的细菌，你应该怎么设计呢？
【思考·讨论】选择培养基配方的设计
【资料】尿素[CO(NH2)2]含氮量高，化学性质稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素施入土壤后，被某些细菌分解成NH3，NH3再转化成NO3－、NH4＋等才能被植物吸收。而这些细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，脲酶催化尿素分解产生NH3，NH3可作为细菌生长的氮源。
1、如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？
在选择培养基中，以尿素作为唯一氮源，只有能合成脲酶的细菌才能生长发育繁殖。
2.该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？
除以尿素作为唯一氮源外，该培养基的其他营养成分与普通培养基基本相同。
3.通过选择培养基可以知道1g土壤中有多少能分解尿素的细菌吗？
获得分解尿素的细菌的纯培养物
测定分解尿素的细菌的数量
①平板划线法最开始的划线细菌可能会长成一片，导致无法计数。②灼烧接种环的时候也会杀死一部分细菌，导致计数偏小。
将菌液进行一系列________，然后将不同稀释度的菌液分别_______到固体培养基的表面，进行培养。
当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
3.稀释涂布平板法具体操作过程
①取菌液：取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。
②涂布器消毒：将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。
④涂布平板：用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。
③涂布器灭菌：将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。
1.稀释涂布平板法
当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过计数平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
选择30-300个菌落的平板进行计数；每个稀释度至少取3个平板取其平均值；分析实验结果时，要考虑重复组结果是否接近，如果相差太大，意味着操作有误，需重新实验。
【思考】：通过此方法统计的细菌的数目与它的实际数目相同吗 ？
统计的菌落数往往比活菌的实际数目______。
当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。
每g样品中的菌落数 = ( C ÷ V ) × M
C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数
V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)
【例1】某研究小组测定某地1克土壤中有多少能分解尿素的细菌。甲同学用稀释倍数105的菌液涂布了3个平板，菌落数分别是80、90、100，涂布平板时均使用0.1ml菌液，试计算每克土壤中可以分离尿素的细菌数目？
【例2】如图为“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验中样品稀释示意图。据图分析正确的是(　　)
A.3号试管中的菌液稀释倍数为103倍B.4号试管中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数理论上是5号试管的10倍C.5号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为1.7×107个D.该实验方法统计得到的结果往往会比活菌的实际数目要高
2.显微镜直接计数法
利用细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。
细菌计数板和血细胞计数板有什么区别
常用于相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数。
对细菌等较小的细胞进行观察和计数。
快速、直观、设备简单；能观察微生物的形态特征。
①不能区分死菌和活菌，统计结果会_______；②不适于对运动细菌的计数。③个体小的细菌在显微镜下难以观察。
台盼蓝染液染色，可以通过统计无色细胞的个数来对活菌进行计数。
1mL样品中酵母菌数=
A1、A2、A3、A4、A5分别为五个中方格中的酵母菌数。
A1、A2、A3、A4分别为四个中方格中的酵母菌数。
接种环在固体培养基表面连续划线
系列梯度稀释操作和涂布平板操作
稀释度合适，整个平板上都可找到单菌落
①都能分离纯化菌种，获得单菌落；②都是在固体培养基上进行的。
可以计数，但操作复杂，需涂布多个平板
不能区分死菌与活菌不适于对运动细菌的计数
当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。
每克样品中的菌株数＝(C÷V )×M
每mL含菌量＝每小格平均菌体数×400×104×稀释倍数
显微镜、细菌计数板或血细胞计数板
1.(2025·黑吉辽卷)科研人员通过稀释涂布平板法筛选出高耐受且降解金霉素(C23H23CIN208。)能力强的菌株,旨在解决金霉素过量使用所导致的环境污染问题。下列叙述错误的是:( )A.以金霉素为唯一碳源可制备选择培养基B.逐步提高培养基中金霉素的浓度有助于获得高耐受的菌株C.配制选择培养基时,需确保 pH 满足实验要求D.用接种环将菌液均匀地涂布在培养基表面
2．(2023·山东等级考)平板接种常用在微生物培养中。下列说法正确的是(　　)A．不含氮源的平板不能用于微生物培养B．平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒C．接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃D．利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物
3．如图是纯化微生物时采用的两种接种方法接种后培养的效果图，下列相关叙述正确的是(　　)A．图甲三个平板中所用培养液的稀释倍数相同B．图甲、乙均适合分离微生物，但乙不适合对微生物进行计数C．图甲、图乙所用的接种工具分别是接种环和涂布器D．图乙每次划线应从同一起点开始，以便使聚集的菌种逐步稀释获得单菌落
（1）如何分离土壤中能分解尿素的细菌？
（2）如何计算每克土壤样品中有多少分解尿素的细菌？
绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以尿素作唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。
常见的分解尿素的微生物：芽孢杆菌、小球菌、棒状杆菌等细菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。
酸碱度接近中性的潮湿土壤。细菌适宜在该环境中生长。
铲去表层土（一般3cm左右）。绝大部分细菌分布在距地表3～8cm的土壤层。
取土样时用的铁铲和取样袋在使用前都需要灭菌。操作完成后，一定要洗手。
分离不同的微生物采用不同的稀释度原因：不同微生物在土壤中含量不同目的：保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板
测细菌数：一般用104、105、106 稀释液测放线菌：一般用103、104、105 稀释液测真菌数：一般用102、103、104 稀释液
【思考】在初次实验中，对于稀释的范围没有把握，怎样做才能保证从中选择出菌落数在30～300的平板进行计数？
第一次做这个实验可以将稀释的范围放宽一点，如将1×103～1×107倍稀释的稀释液分别涂布到平板上培养，以保证能从中选择出菌落数在30～300的平板进行计数。
①每个浓度至少设置4个平板，1、2、3平板是选择培养基（实验组，三个重复），4为牛肉膏蛋白胨培养基
选择培养基（平行重复）
注：整个实验还要设置 个空白对照平板：未接种的_____________培养基和______培养基以判断培养基中是否含有杂菌。
放线菌：25-28℃,5-7d
霉菌：25-28℃,3-4d
细菌：30-37℃,1-2d
不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间
每隔24h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目
一般来说，在相同的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征，如形状、大小和颜色等。
4、实验结果分析与评价
对照的培养皿中无菌落生长
选择培养基中菌落数偏高
菌落形态多样，菌落数偏高
牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目大于选择培养基上的数目
选择培养基具有筛选作用
得到3个或3个以上菌落数目在30～300的平板
若选取同一种土样，统计结果应接近
【思考】在以尿素作为唯一氮源的培养基中分离出的微生物都是能分解尿素的吗？
例如：①固氮微生物利用N2也能生长；
②有些微生物可以利用尿素分解菌的代谢产物进行生长繁殖。
如何鉴定分离的细菌就是尿素分解菌？
【资料】这些细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，脲酶催化尿素分解产生NH3，NH3可以作为细菌生长的氮源。NH3呈碱性。
脲酶催化尿素分解成氨 → 培养基碱性增强 → 酚红变红 → 脲酶阳性
在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果pH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。
1.(2025·湖南·高考真题)采集果园土壤进行微生物分离或计数。下列叙述正确的是（ ）A.稀释涂布平板法和平板划线法都能用于尿素分解菌的分离和计数B.完成平板划线后，培养时需增加一个未接种的平板作为对照C.土壤中分离得到的醋酸菌能在无氧条件下将葡萄糖分离成乙酸D.用于筛选尿素分解菌的培养基含有蛋白胨、尿素和无机盐等营养物质
2.地球上的植物每年产生的纤维素超过70亿吨，其中40%-60% 能被土壤中某些微生物分解利用，这是因为它们能够产生纤维素酶。对这些微生物的研究与应用，使人们能够利用秸秆等生产酒精，用纤维素酶处理服装面料等。已知刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不与水解后的纤维二糖、葡萄糖等发生这种反应。当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红与纤维素形成红色复合物；而当纤维素被纤维素分解菌分解后，复合物就无法形成，培养基中会出现以这些菌为中心的透明圈(如下图所示)。请回答下列问题。
(1)现在要从土壤中分离纤维素分解菌，请你给出详细的实验方案。
用“纤维素为唯一碳源”的选择培养基进行培养，并在培养基加入刚果红进行鉴别。
纤维素分解菌大多分布在富含纤维素的环境中，采集土样时，可以选择纤维素丰富的环境，如树林中多年落叶形成的腐殖土等。
(2)你打算到什么环境中去寻找纤维素分解菌？为什么？
高效降解菌株的筛选：挑选透明圈直径与菌落直径比值大的菌落。
【进一步思考】根据培养结果，怎样选择出分解纤维素能力更强的纤维素分解菌？
这是人工设置适合纤维素分解菌生存的环境，腐烂的滤纸上很可能有纤维素分解菌。
(3)有同学说，可以把滤纸埋在土壤中，经过一段时间后，再从已腐烂的滤纸上筛选纤维素分解菌。请你评价这一做法。
微生物选择培养获取纯培养物的方法-稀释涂布平板法
微生物的选择培养和计数
选择培养基的概念及举例
稀释涂布平板法的操作过程
间接计数法 — 稀释涂布平板法
直接计数法 —计数板计数法
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
（3）稀释涂布平板法接种
（4）微生物的培养与观察