人教版 (2019)选择性必修3第2章 细胞工程第2节 动物细胞工程二 动物细胞融合技术与单克隆抗体背景图ppt课件
展开指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术
1、什么是病毒的灭活?
灭活是指用物理或化学手段使病毒失去感染能力,但是并不破坏病毒的抗原结构。
病毒表面的糖蛋白和一些酶与细胞膜上的糖蛋白发生作用,使细胞互相凝聚,细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布,细胞膜打开,细胞发生融合。
2、灭活病毒诱导细胞融合的原理
用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程:灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面↓细胞膜被病毒颗粒穿通↓细胞膜连接↓细胞核融合,形成杂交细胞
正在融合的淋巴细胞与骨髓瘤细胞
正在融合的鸡血细胞
动物细胞融合技术全过程:
植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较
克服远源杂交的障碍,获得杂种植株
细胞膜的流动性植物细胞的全能性
去除细胞壁后诱导原生质体融合
使细胞分散后诱导细胞融合
物理(离心、振荡、电激)化学( PEG )
物理、化学方法( PEG ) 灭活的病毒
突破了有性杂交方法的局限,使远缘杂交(种间、属间、科间、动植物之间)成为可能。
成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体。
物理法;化学法和生物法
动物细胞融合技术是指使 两个或多个动物细胞结合成一个细胞的技术。
形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的细胞
2003年爆发SARS期间及2020年爆发的COVID-19期间,医生通过临床输注康复者或恢复期的患者血浆制成的免疫球蛋白预防病毒的入侵。
传统抗体制备方法及缺陷
缺陷: 产量低、纯度低, 且抗体的特异性差、灵敏度低。
1)体内产生的特异性抗体种类多达百万种以上2)每个B淋巴细胞只分泌一种特异性的抗体
如何获得大量、单一的抗体?
体外培养时,一个B淋巴细胞不能无限增殖
一个极富创造力的方案:
既能迅速大量增殖,又能产生专一抗体
骨髓瘤细胞(癌细胞)能无限增殖
一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体
由单一B淋巴细胞克隆产生的特异性强的抗体。
从脾脏中获取B淋巴细胞
目的是获得产生特定抗体的B淋巴细胞
骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合
筛选抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞
抗体检测的方法——抗原-抗体杂交法
在单克隆抗体制备过程中,两次筛选的目的和方法是不相同的。
将杂交瘤细胞群稀释,约每孔1个细胞进行培养 (克隆化培养)
上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔
诱导其融合的方法有哪些?
注射抗原的目的是什么?
大量增殖杂交瘤细胞获得单抗的方法
获得能产生相应抗体的B淋巴细胞
物理:离心、振动、电激化学:聚乙二醇 生物:灭活的病毒
第1次筛选得到杂交瘤细胞(多种)。第2次筛选得到能产生所需抗体的杂交瘤细胞。
体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖。
既可以产生特异性抗体,又可以大量增殖
单克隆抗体制备中包括几个阶段?
动物细胞融合、动物细胞培养
细胞膜的流动性、细胞增殖
特异性强,灵敏度高,可大量制备。
分泌特异抗体的杂交瘤细胞
既能大量繁殖又能产生专一抗体
特异性强灵敏度高可大量制备
克隆化培养,专一抗体检验
(1)作为诊断试剂——最广泛应用
同位素标记的单克隆抗体,在特定组织中成像,定位诊断相关疾病。
准确、高效、简易、快速
⑵用于治疗疾病和运载药物 ①特异性强、灵敏度高 生物导弹——单克隆抗体+抗癌药物 ②疗效高、毒副作用小
单克隆抗体制备过程中使用的骨髓瘤细胞是一种缺陷型细胞,在含有次黄嘌呤、氨基嘌呤和胸腺嘧啶的培养基(HAT)中无法生长;而小鼠B淋巴细胞是正常细胞,在HAT培养基上可正常存活。用聚乙二醇诱导细胞融合后,经过数代培养,最终可在HAT培养基上存活的细胞是 ( )A. 骨髓瘤细胞之间形成的融合细胞B. B淋巴细胞之间形成的融合细胞C. 骨髓瘤细胞与B淋巴细胞之间形成的融合细胞D. B淋巴细胞
科学家将经过羊红细胞免疫过的小鼠B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,产生杂交瘤细胞,并能分泌单克隆抗体。羊红细胞和B淋巴细胞在该实验中分别属于 ( )A.癌细胞和记忆淋巴细胞 B.抗原物和浆细胞C.特定抗体物和记忆淋巴细胞 D.癌细胞和浆细胞
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