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高中人教版 (新课标)课题1 DNA的粗提取与鉴定公开课课件ppt
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这是一份高中人教版 (新课标)课题1 DNA的粗提取与鉴定公开课课件ppt，共21页。PPT课件主要包含了基础知识，一DNA的溶解性，三DNA的鉴定，二苯胺，沸水浴，甲基绿绿色，一实验材料的选取，实验设计，合适的材料，动物细胞等内容，欢迎下载使用。
§5.1 DNA的粗提取与鉴定
DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。将DNA与蛋白质进一步分离。
（二）、 DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性
① 蛋白酶——水解蛋白质， 对DNA没有影响
② 高 温——大多数蛋白质不能忍受60～80℃ 而DNA在80℃以上才会变性
③ 洗涤剂——溶解细胞膜，去除脂质和蛋白质 但对DNA没有影响
沸水浴条件下， DNA遇二苯胺被染成蓝色
想一想 必修1还有什么可鉴定DNA？
（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液
（三）除去滤液中的杂质(纯化)
（四） DNA的析出与鉴定
1、材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。（从中选取2～3种实验材料）
2、原则：选用DNA含量相对较高、容易提取的生物组织。
鸡血细胞溶液：加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌， 过滤后收集滤液
想一想：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？
蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分大量进入血细胞，使血细胞胀裂；加上搅拌作用，加速鸡血细胞细胞膜、核膜破裂， 从而释放出DNA
① 加入一定的洗涤剂和食盐
② 充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液
想一想：洗涤剂和食盐的作用分别是什么？
洗涤剂——离子去污剂，能溶解细胞膜，利于DNA释放食 盐——NaCl，利于DNA的溶解于研磨液中
经研磨可破碎细胞壁，使细胞核内的DNA释放。若研磨不充分，会使提取的DNA量变少，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。
为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理
讨论：滤液/研磨液中可能含有哪些成分？
答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质
想一想：研磨的目的是什么，如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？
（三）除去滤液中的杂质
方案一、在滤液中加入NaCl，使NaCl溶液浓度为2ml/L，过滤除去不溶的杂质，再加入蒸馏水，调节NaCl溶液浓度为0.14ml/L，析出DNA，过滤除去溶液中的杂质，在用2ml/L的NaCl溶液溶解DNA。
为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质
答：用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐溶液中不能溶解的杂质；用低盐溶液使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质
讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？
方案二：利用蛋白酶分解杂质蛋白，使提取的DNA与蛋白质分开； 方案三：利用DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，使蛋白质变性，与DNA分离
方案二、直接在滤液中加入嫩肉粉，反应10～15分钟。 方案三、将滤液放在60～750C的恒温水浴箱中保温10～15分钟。
2、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性
与滤液体积相等的冷却的酒精溶液(体积分数95％)，静置2－3min，溶液中会出现白色丝状物 ——粗提取DNA 用璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水
⑴ 向两支试管中分别加入 2ml/L NaCl 溶液5ml⑵ 其中一支试管中加入DNA丝状物⑶ 各加入二苯胺试剂4ml⑷ 混匀后，置于沸水浴中加热5min⑸ 待冷却后，比较两只试管中溶液的颜色变化 观察现象：
溶解丝状物的溶液变为蓝色
实验操作小结：制备鸡血细胞液…………加柠檬酸钠，静置或离心↓破碎细胞，释放DNA… 加蒸馏水，同一方向快速 搅拌↓→过滤，除去细胞壁、细胞膜等。溶解核内DNA………… 加入NaCl至2ml/L，同一方向缓慢搅拌↓
DNA析出……………… 加蒸馏水至0.14ml/L，过滤，再溶解到2ml/L溶液中↓→除去细胞质中的大部分物质。DNA初步纯化………… 与等体积95％冷却酒精混合，析出白色丝状物↓→除去核蛋白、RNA、多糖等。DNA鉴定……………… 二苯胺，沸水浴，呈现蓝色
观察你提取的DNA颜色，如果不是白色丝状物，说明DNA中的杂质较多；二苯胺鉴定出现蓝色说明实验基本成功，如果不呈现蓝色，可能所提取的DNA含量低，或是实验操作中出现错误，需要重新制备
（一）是否提取出了DNA
1、在制备鸡血细胞液的过程中，加入柠檬酸钠的目的是（ ）A .防止凝血 B. 加快DNA析出C .加快DNA溶解 D.加速凝血
2、DNA的溶解度最低时，NaCl的物质的量浓度为（ ）A 2ml/l B 0.1ml/l C 0.14ml/l D 0.015ml/l3、在向溶解DNA的NaCl溶液中，不断加入蒸馏水的目的是（ ）A 加快DNA溶解的速度B 加快溶解杂质的速度C 减小DNA的溶解度，加快DNA析出D减小杂质的溶解度，加快杂质的析出
4、向溶有DNA的2ml/L的NaCl溶液中不断加入蒸馏水,在这个过程中DNA的溶解度变化情况分别是A 减小;减小 B 增大;增大C 先减小后增大 D增大; 减小5、欲使溶有DNA的2ml/L的NaCl溶液中的DNA析出，最有效的办法是A 加蒸馏水 B 加矿泉水C 加清水 D 加生理盐水
§5.1 DNA的粗提取与鉴定
DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。将DNA与蛋白质进一步分离。
（二）、 DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性
① 蛋白酶——水解蛋白质， 对DNA没有影响
② 高 温——大多数蛋白质不能忍受60～80℃ 而DNA在80℃以上才会变性
③ 洗涤剂——溶解细胞膜，去除脂质和蛋白质 但对DNA没有影响
沸水浴条件下， DNA遇二苯胺被染成蓝色
想一想 必修1还有什么可鉴定DNA？
（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液
（三）除去滤液中的杂质(纯化)
（四） DNA的析出与鉴定
1、材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。（从中选取2～3种实验材料）
2、原则：选用DNA含量相对较高、容易提取的生物组织。
鸡血细胞溶液：加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌， 过滤后收集滤液
想一想：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？
蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分大量进入血细胞，使血细胞胀裂；加上搅拌作用，加速鸡血细胞细胞膜、核膜破裂， 从而释放出DNA
① 加入一定的洗涤剂和食盐
② 充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液
想一想：洗涤剂和食盐的作用分别是什么？
洗涤剂——离子去污剂，能溶解细胞膜，利于DNA释放食 盐——NaCl，利于DNA的溶解于研磨液中
经研磨可破碎细胞壁，使细胞核内的DNA释放。若研磨不充分，会使提取的DNA量变少，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。
为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理
讨论：滤液/研磨液中可能含有哪些成分？
答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质
想一想：研磨的目的是什么，如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？
（三）除去滤液中的杂质
方案一、在滤液中加入NaCl，使NaCl溶液浓度为2ml/L，过滤除去不溶的杂质，再加入蒸馏水，调节NaCl溶液浓度为0.14ml/L，析出DNA，过滤除去溶液中的杂质，在用2ml/L的NaCl溶液溶解DNA。
为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质
答：用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐溶液中不能溶解的杂质；用低盐溶液使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质
讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？
方案二：利用蛋白酶分解杂质蛋白，使提取的DNA与蛋白质分开； 方案三：利用DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，使蛋白质变性，与DNA分离
方案二、直接在滤液中加入嫩肉粉，反应10～15分钟。 方案三、将滤液放在60～750C的恒温水浴箱中保温10～15分钟。
2、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性
与滤液体积相等的冷却的酒精溶液(体积分数95％)，静置2－3min，溶液中会出现白色丝状物 ——粗提取DNA 用璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水
⑴ 向两支试管中分别加入 2ml/L NaCl 溶液5ml⑵ 其中一支试管中加入DNA丝状物⑶ 各加入二苯胺试剂4ml⑷ 混匀后，置于沸水浴中加热5min⑸ 待冷却后，比较两只试管中溶液的颜色变化 观察现象：
溶解丝状物的溶液变为蓝色
实验操作小结：制备鸡血细胞液…………加柠檬酸钠，静置或离心↓破碎细胞，释放DNA… 加蒸馏水，同一方向快速 搅拌↓→过滤，除去细胞壁、细胞膜等。溶解核内DNA………… 加入NaCl至2ml/L，同一方向缓慢搅拌↓
DNA析出……………… 加蒸馏水至0.14ml/L，过滤，再溶解到2ml/L溶液中↓→除去细胞质中的大部分物质。DNA初步纯化………… 与等体积95％冷却酒精混合，析出白色丝状物↓→除去核蛋白、RNA、多糖等。DNA鉴定……………… 二苯胺，沸水浴，呈现蓝色
观察你提取的DNA颜色，如果不是白色丝状物，说明DNA中的杂质较多；二苯胺鉴定出现蓝色说明实验基本成功，如果不呈现蓝色，可能所提取的DNA含量低，或是实验操作中出现错误，需要重新制备
（一）是否提取出了DNA
1、在制备鸡血细胞液的过程中，加入柠檬酸钠的目的是（ ）A .防止凝血 B. 加快DNA析出C .加快DNA溶解 D.加速凝血
2、DNA的溶解度最低时，NaCl的物质的量浓度为（ ）A 2ml/l B 0.1ml/l C 0.14ml/l D 0.015ml/l3、在向溶解DNA的NaCl溶液中，不断加入蒸馏水的目的是（ ）A 加快DNA溶解的速度B 加快溶解杂质的速度C 减小DNA的溶解度，加快DNA析出D减小杂质的溶解度，加快杂质的析出
4、向溶有DNA的2ml/L的NaCl溶液中不断加入蒸馏水,在这个过程中DNA的溶解度变化情况分别是A 减小;减小 B 增大;增大C 先减小后增大 D增大; 减小5、欲使溶有DNA的2ml/L的NaCl溶液中的DNA析出，最有效的办法是A 加蒸馏水 B 加矿泉水C 加清水 D 加生理盐水
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