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新高考生物二轮复习易错题精选练习易错点27 细胞工程与胚胎工程（含解析）
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这是一份新高考生物二轮复习易错题精选练习易错点27 细胞工程与胚胎工程（含解析），共23页。试卷主要包含了有关“植物细胞培养”，有关“原代培养和传代培养”，有关“细胞贴壁和接触抑制”，有关“单克隆抗体”，对核移植与克隆的理解，1mL 稀释液，75×104，5×104等内容，欢迎下载使用。
易错点27 细胞工程与胚胎工程
1.有关“植物细胞培养”
①由愈伤组织进行细胞分化时，一般要先诱导其生芽，然后诱导其生根，可通过控制培养基中生长素和细胞分裂素的比例来实现。
②光照：在愈伤组织诱导阶段，对有些植物来说，避光培养有利于细胞脱分化形成愈伤组织。当愈伤组织再分化出芽和叶时，一定要有光照，有利于叶片内叶绿素的合成。
③体内细胞未表现全能性的原因：基因的表达具有选择性。
④细胞的全能性指的是细胞的一种潜在能力，这种潜在能力只有在特定的环境中才能表现出来，而不是指细胞在任何条件下都能发育成完整的生物体。
⑤植物组织培养中所需的碳源一般为蔗糖，少数为葡萄糖和果糖，原因是蔗糖既可提供充足的碳源，又可维持相对适中的渗透压，而葡萄糖和果糖在与蔗糖提供相同数量碳源的前提下，其造成的渗透压可能过高。
2.有关“原代培养和传代培养”
（1）区分原代培养和传代培养的关键是看用胰蛋白酶处理的对象和是否分瓶。
①分瓶前，第一次用胰蛋白酶对动物组织进行处理后的培养是原代培养。
②第二次用胰蛋白酶处理，使细胞从瓶壁上脱离下来，分瓶后的细胞培养为传代培养。
3.有关“细胞贴壁和接触抑制”
悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。细胞数目不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。
4.有关“单克隆抗体”
①用特定抗原对小鼠进行免疫的原因：
B淋巴细胞要经过免疫过程，即接触抗原，增殖分化为有特异性免疫功能的B淋巴细胞，才能产生相应的抗体，所以，与骨髓瘤细胞融合的B淋巴细胞实际上是浆细胞。
②获取小鼠已经免疫的B淋巴细胞的部位：脾。
③诱导融合的方法：
动物细胞融合特有的诱导方法为用灭活的病毒处理，其他物理、化学诱导融合的方法与植物体细胞杂交过程中诱导原生质体融合的方法基本相同。
④杂交细胞：
在诱导因素的作用下进行细胞的诱导融合，形成的杂交细胞有多种，若仅考虑两两融合的情况，形成的杂交细胞有三种，AA型、BB型、AB型。只有AB型才是我们所需要的杂交细胞，所以需要用选择培养基进行筛选。
⑤两次筛选的目的：
第一次是在诱导融合之后，利用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞。第二次是对上述杂交瘤细胞进行筛选，利用96孔板培养，采用专一抗体检测的方法筛选出能产生所需特定抗体的杂交瘤细胞。
1．如图表示畜牧业生产上培育某种优良种牛的两种方法，有关分析正确的是（ ）
A．应用1中的卵母细胞常取自卵巢，并可直接用于融合
B．应用2常用雌性激素处理供体1，目的是使其超数排卵
C．应用3一般选择桑葚胚或囊胚进行分割
D．应用4体现了动物细胞的全能性
【答案】C
【分析】1、应用1用到了核移植技术和胚胎移植技术，应用2用到了体外受精技术和胚胎移植技术，应用3用到了胚胎分割技术和胚胎移植技术，应用4用到了胚胎干细胞培养技术。
2、细胞的性是指经分裂和分化后，仍具有产生完整有机体或分化成其他各种细胞的潜能和特性。
【详解】A、应用1用到了核移植技术和胚胎移植技术，用到的卵母细胞常取自卵巢，但是需要在体外培养到MⅡ中期，A错误；
B、应用2用到了体外受精技术和胚胎移植技术，常用外源促性腺激素处理供体1，目的是目的是使其超数排卵，B错误；
C、应用3用到了胚胎分割技术和胚胎移植技术，一般选择发育良好、形态正常的桑葚胚或囊胚进行分割，C正确；
D、应用4用到了胚胎干细胞培养技术，因为培养的目的是需要的组织和器官，而不是个体或其他各种细胞，所以不能体现动物细胞的全能性，D错误。
故选C。
2．下图是利用体细胞核移植技术克隆高产奶牛的流程图，①～⑤表示相应操作。
下列关于早期胚胎形成过程的叙述，正确的是（ ）
A．过程①常对雌牛甲进行超数排卵处理
B．过程②获取的体细胞可以是成熟的红细胞
C．过程③获得的重组细胞中含有4个染色体组
D．过程④需要构建抑制细胞分化的培养体系
【答案】A
【分析】动物细胞核移植技术指的是将动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体；用核移植的方法得到的动物称为克隆动物，原理是动物细胞核的全能性；动物细胞核移植可分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植。
【详解】A、为提高良种奶牛的繁殖能力，在获取卵母细胞之前过程①需用促性腺激素对奶牛进行超数排卵处理，A正确；
B、哺乳动物成熟的红细胞没有细胞核，但是也没有其他的各种细胞器，所以过程②获取的体细胞不能用成熟的红细胞，B错误；
C、由于获得的体细胞需要进行去核处理，所以过程③获得的重组细胞中含有2个染色体组，C错误；
D、过程④需要构建促进细胞分化的培养体系，培养早期胚胎，D错误。
故选A。
3．下图是通过基因工程培养的转基因生物或产品的过程，结合相关知识回答下列问题：
(1)基因工程技术中最关键的步骤是______。让转基因牛的乳汁中含有药用蛋白的流程是：通过①构建药用蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，需要用到______酶，通过②______方法导入受精卵，选取合适的受精卵进行③培养，③运用的技术手段有______技术，培育出“批量生产药物的工厂”转基因牛。
(2)选用农杆菌的Ti质粒与目的基因构建重组Ti质粒，把重组Ti质粒导入玉米体细胞中的方法是______。
【答案】(1) 基因表达载体的构建 限制酶和连接酶 显微注射 胚胎培养、细胞培养、胚胎移植
(2)农杆菌转化法
【分析】1、基因工程的工具：（1）限制酶：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。（2）DNA连接酶：连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键。（3）运载体：常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒。
2、基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子、复制原点和标记基因等。
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA-分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质一抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
【详解】（1）基因表达载体的构建是基因工程技术中最关键的步骤。在构建基因表达载体时需要用限制酶切割目的基因和运载体，然后用连接酶将目的基因和运载体链接起来。将重组质粒导入动物受精卵细胞需要用②显微注射法。从受精卵培育转基因牛过程即发生了胚胎的发育过程，需要将受精卵培养到桑葚胚期或囊胚期才能进行胚胎移植，所以此过程运用的技术手段有早期胚胎培养和胚胎移植技术。
（2）农杆菌的Ti质粒上的T-DNA （可转移的DNA）可转移到受体细胞，并且能将目的基因整合到受体细胞的染色体DNA上。根据农杆菌的这种特点，将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上，把重组Ti质粒导入玉米体细胞中完成转化的方法是农杆菌转化法。
1．植物组织培养的具体操作——胡萝卜的组织培养
(1)操作步骤
取材
①胡萝卜洗净、削皮、切段(约10 cm)；酒精棉球擦手消毒；
②胡萝卜段消毒：用酒精溶液消毒30 s后，立即用无菌水清洗2～3次，再用次氯酸钠溶液处理30 min后，立即用无菌水清洗2～3次；
③将胡萝卜段切成1 cm厚的横切片，再选取有形成层的部位，切取1 cm3左右的小块
接种
避光条件下培养，诱导其脱分化，长出愈伤组织
转接
将生长良好的愈伤组织转接到分化培养基上，诱导其再分化生成试管苗进而发育成完整小植株
移栽
移栽到大田，培养成正常植株
(2)注意事项
①选用形成层进行培养的原因是形成层细胞分裂旺盛，全能性较高，易于脱分化。选用其他部位也可以(理论上具有全能性的细胞均可)。
②光照的控制：在愈伤组织的诱导阶段往往要避光培养，有利于细胞脱分化产生愈伤组织。当愈伤组织分化出芽和叶时，一定要有光照，以利于叶片内叶绿素的合成。
2．植物激素对植物组织培养的影响
(1)按照不同的顺序使用这两类激素，会得到不同的实验结果
使用顺序
实验结果
先使用生长素，后使用细胞分裂素
有利于细胞分裂，但细胞不分化
先使用细胞分裂素，后使用生长素
细胞既分裂也分化
同时使用
分化频率提高
简记：先“生”分裂不分化，后“生”分裂又分化，同“使”分化频率高
(2)当同时使用这两类激素时，两者用量的比例影响植物细胞的发育方向
生长素/细胞分裂素
植物细胞的发育方向
比值高
有利于根的分化、抑制芽的形成
比值低
有利于芽的分化、抑制根的形成
比值适中
促进愈伤组织的形成
简记：“高”根，“低”芽，“中”愈伤
3.植物体细胞杂交与植物有性杂交中遗传物质的变化
设白菜细胞含2x条染色体，2个染色体组；甘蓝细胞含2y条染色体，2个染色体组。
项目
不同物种体细胞杂交
不同物种有性杂交
同一物种杂交
过程
子代染色体数目
2x＋2y
x＋y
2x(白菜)或2y(甘蓝)
子代染色体组数
4
2
2
子代是几倍体
异源四倍体
异源二倍体
同源二倍体
子代是否可育
可育
不可育
可育
繁殖方式
无性繁殖
有性繁殖
有性繁殖
变异类型
染色体变异
染色体变异
—
4．辨析动物细胞培养相关的两组概念
(1)细胞贴壁与接触抑制：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为接触抑制。
(2)原代培养与传代培养
①原代培养：动物组织消化后的初次培养称为原代培养。原代培养的细胞核型正常。
②传代培养：贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖。这样的培养过程通常被称为传代培养。一般情况下，细胞在传至10～50代左右时，增殖会逐渐缓慢，以至于完全停止，这时部分细胞的细胞核型可能会发生变化。
5．植物组织培养与动物细胞培养的比较
比较项目
植物组织培养
动物细胞培养
理论基础
植物细胞的全能性
细胞增殖
培养基
类型
固体或半固体培养基
液体培养基
成分
水、矿质元素、维生素、蔗糖、氨基酸、琼脂、植物激素等
糖、氨基酸、无机盐、维生素、促生长因子、动物血清等
取材
植物较幼嫩部分或花药等
动物胚胎或幼龄动物的器官或组织
关键环节
细胞的脱分化和再分化
细胞增殖和癌变
结果
形成新的组织或植物个体，可以体现细胞的全能性
形成细胞群，不形成个体，不体现细胞的全能性
应用
①植株快速繁殖；
②脱毒植株的培育；
③制备人工种子；
④生产药物、杀虫剂等；
⑤转基因植物的培育
①蛋白质生物制品的生产；
②皮肤移植材料的培育；
③检测有毒物质；
④生理、病理、药理学研究
相同点
①两种技术手段培养过程中细胞都进行有丝分裂，都是无性繁殖，都可称为克隆，都不涉及减数分裂；
②均为无菌操作，需要适宜的温度、pH等条件
6.对核移植与克隆的理解
(1)克隆是指遗传组成完全相同的分子、细胞或个体，即克隆应包含三个层次的内容：①分子水平：如DNA复制；②细胞水平：如动物细胞培养；③个体水平：如克隆动物。
(2)核移植技术中选用的核供体应为具有优良性状的个体，提供卵细胞的受体和代孕个体只需为同一物种的健康雌性个体即可。
(3)核移植技术中去核是通过显微操作完成的，用微型吸管将处于MⅡ中期的卵母细胞的细胞核与靠近核的第一极体一并吸出。
(4)动物细胞核移植可以有两种操作方式：一是把供体细胞导入去核的卵母细胞，这是现在常用的方法；二是将供体动物的一个细胞核直接导入去核的卵母细胞，该过程需要用电刺激的方法促进融合。
(5)融合后的细胞称为重组细胞(注意区分于杂交细胞)，需用物理或化学方法激活，使其完成细胞分裂和发育进程，形成重组胚胎才能进行胚胎移植。
(6)体细胞核移植体现了动物细胞细胞核的全能性，而非动物细胞的全能性。
7．植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较
比较项目
植物体细胞杂交
动物细胞融合
原理
细胞膜的流动性、细胞的全能性
细胞膜的流动性
融合前处理
除去细胞壁
使细胞分散开
相关酶
纤维素酶和果胶酶
胰蛋白酶或胶原蛋白酶
诱导方法
物理法：离心、振动、电激等；
化学法：聚乙二醇(PEG)等诱导
除物理法和化学法，还可用灭活的病毒诱导
结果
杂种植株
杂交细胞
应用
培育植物新品种
主要用于制备单克隆抗体
意义
克服不同生物远缘杂交不亲和的障碍，打破了生殖隔离，扩展了杂交的亲本组合
8．细胞融合与单克隆抗体的制备
项目
步骤
技术方法
原理
取材
从已免疫的小鼠的脾脏中获取B淋巴细胞，体外培养骨髓瘤细胞
动物细胞培养
细胞增殖
融合
通过灭活病毒诱导B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合
动物细胞融合
细胞膜的流动性
选择
第一次要从融合形成的杂交细胞中筛选出杂交瘤细胞
选择培养基
—
第二次要从杂交瘤细胞中获得能产生专一抗体的杂交瘤细胞
专一抗体检测、克隆化培养
免疫学原理(抗原—抗体特异性结合)
培养
在小鼠腹腔内进行体内培养，或在装有细胞培养液的培养基中进行体外培养
动物细胞培养
细胞增殖
1．请回答细胞工程的有关问题：
紫花苜蓿是全世界栽培历史最悠久、利用最广泛的豆科牧草，但易造成家畜鼓胀病。百脉根富含单宁，单宁可与植物蛋白质结合，不引起家畜采食后鼓胀。为培育抗鼓胀病的苜蓿新品种，科研人员利用野生型清水紫花苜蓿和里奥百脉根为材料进行了实践研究。研究主要流程如下图：（注：IOA可抑制植物细胞呼吸第一阶段，R-6G可阻止线粒体的呼吸作用，二者有效抑制不同植物细胞正常代谢的临界浓度不同）
(1)据图可知，本研究主要利用的生物技术的原理是______。
(2)在实验前需通过预实验来研究R-6G或IOA使原生质体失去再生愈伤组织能力的临界浓度，实验的设计思路是：将获取的原生质体分别放置在不同浓度的______溶液中，培养一段时间后，观察原生质体再生情况。
(3)步骤②到步骤③需要更换新的培养基，其原因是经过______过程诱导形成愈伤组织和诱导愈伤组织分化形成试管苗所需激素______的比例不同。
(4)若利用此技术获得单宁，可培养到______阶段即可。
【答案】(1)细胞膜的流动性和植物细胞的全能性
(2)R－6G或IOA
(3) 脱分化 激素和营养条件等
(4)愈伤组织
【分析】分析题图：图中①表示原生质体融合形成杂种细胞以及杂种细胞的增殖，②表示脱分化过程，③表示再分化过程。
【详解】（1）由图可知，本研究主要利用植物体细胞杂交技术，植物体细胞杂交技术的原理是细胞膜的流动性和植物细胞的全能性。
（2）要研究R-6G或IOA使原生质体失去再生愈伤组织能力的临界浓度，则实验的自变量是R-6G或IOA溶液的浓度，因变量是原生质体的再生情况，实验设计应遵循对照与单一变量原则，故该实验的设计思路是：将获取的原生质体分别放置在不同浓度的R-6G或IOA溶液中，培养一段时间后，观察原生质体再生情况。
（3）愈伤组织是经脱分化形成的；由于脱分化形成愈伤组织和诱导愈伤组织分化形成试管苗所需的激素和营养条件等不同，因此由步骤②到步骤③需要更换新的培养基。
（4）单宁是细胞代谢的次生产物，因此若上述技术进行工厂化生产获得单宁，可培养到愈伤组织阶段即可。
2．“繁殖与呼吸综合征”是一种由 PRRSV 病毒引发的传染病。科学家制备出 PRRSV-GP3 蛋白的单克隆抗体，可对该病进行诊断和治疗，制备过程如图所示。回答下列问题：
(1)图中涉及到的生物工程技术有_______，将 GP3 蛋白注射小鼠的目的是____________。
(2)培养细胞乙、丙、丁过程中均表现有____________现象，第 1 次筛选是用特定的选择性培养基筛选，在该培养基上，______________________都会死亡，第 2 次筛选的目的是________________。
(3)图中扩大培养通常采用的方法有________________。
(4)单克隆抗体在诊断的应用上具有准确、高效、简易和快速的优点，原因是__________。
【答案】(1) 动物细胞融合和动物细胞培养 获得抗GP3蛋白抗体的B细胞
(2) 贴壁生长和接触抑制 未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞 筛选出能产生抗GP3蛋白抗体的杂交瘤细胞群
(3)将细胞丁注射到小鼠腹腔内或在体外大规模培养
(4)单克隆抗体纯度高、特异性强，能准确识别各种抗原物质的细微差异，并跟一定的抗原发生特异性结合
【分析】单克隆抗体是细胞工程中动物细胞融合的重要应用，与传统血清抗体相比，单克隆抗体的纯度高，特异性强；其基本步骤：对小鼠进行免疫→提取B淋巴细胞→将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合→通过筛选、克隆化培养和扩大化培养、最终注入小鼠体内→从腹腔腹水中提取单克隆抗体。
【详解】（1）图示为制备单克隆抗体的过程，涉及到的动物细胞工程的技术有动物细胞融合和动物细胞培养；图中将 GP3 蛋白注射小鼠的目的是为了获得能够产生相应抗体（抗GP3蛋白抗体）的B细胞。
（2）细胞乙、丙、丁都具有癌细胞的特点，因此在培养过程中都会出现贴壁生长和接触抑制现象；第 1 次筛选是用特定的选择性培养基筛选，获得杂交瘤细胞，则未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡；第 2 次筛选的目的是筛选出能产生抗GP3蛋白抗体的杂交瘤细胞群。
（3）在单克隆抗体制备过程中，筛选出来的能产生抗GP3蛋白抗体的杂交瘤细胞（细胞丁）可以注射到小鼠腹腔内或在体外大规模培养。
（4）单克隆抗体纯度高、特异性强，能准确识别各种抗原物质的细微差异，并跟一定的抗原发生特异性结合，因此单克隆抗体在诊断的应用上具有准确、高效、简易和快速的优点。
3．组织培养某植物中发现，有一个MS培养基中没有加入杠杆激素（生长素和细胞分裂素）的培养瓶中也长出了与加有杠杆激素的培养瓶中一样的愈伤组织，瓶中还长出了一些某种真菌的菌落。
(1)回顾操作过程，操作环境的消毒过程、培养基和器具的灭菌过程应该没有问题，可能是对外植体的_________处理和接种外植体环节没有________________________进行严格的无菌操作。
(2)研究人员没有放弃这难得的机遇，初步做出一个假设，继续进行实验：
他们就地取材，在_________培养基上采用_________________法纯化培养该真菌。再增设一组实验，具体做法是，在MS培养基中加入经高压蒸汽灭菌处理的该种真菌或经高压蒸汽灭菌处理过的______________________的培养基，再接种外植体，其他环境条件与正常组织培养相同，观察能否培养出正常的愈伤组织。预测结果：如果产生了正常的愈伤组织，支持该假设。如果没有产生愈伤组织，不支持假设。他们做的假设是：_____________________。
(3)去该植物生长地考察发现，根系发达的植物土壤中该真菌的密度很大。据此推测该植物和该真菌的关系很可能是_______________。设想将它们融合培育成一种新的植物。先在一定浓度的蔗糖溶液中加入某些酶处理植物，制备出所需的______________，真菌也做类似的处理。再经过_________（化学法）诱导融合，利用______________技术，最终长成新的植物体。所用的一定浓度的蔗糖溶液的主要作用是______________________。
【答案】(1) 消毒 在酒精灯火焰旁
(2) MS 平板划线 （纯化）培养过该菌 该种菌产生了有杠杆激素作用的物质（且不被高温高压破坏）（该种菌产生了杠杆激素）
(3) 原始合作/互利共生 原生质体 聚乙二醇（PEG）法/高Ca2＋—高pH融合法 组织培养 维持渗透压，使原生质体的形态不被破坏
【分析】1、在离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织的过程中，需要的条件：（1）消毒灭菌；（2）一定浓度的植物激素；（3）适宜的温度；（4）充足的养料。2、植物体细胞杂交技术：就是将不同种的植物体细胞原生质体在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成完整植物体的技术。
【详解】（1）植物组织培养过程中，为避免杂菌污染，需要对培养基和器具的灭菌，对外植体进行消毒，接种应该在酒精灯火焰附近，如果操作环境的消毒过程、培养基和器具的灭菌过程应该没有问题，可能是对外植体的消毒和接种外植体环节没有在酒精灯火焰旁进行严格的无菌操作。
（2）根据后面的信息“在MS培养基中”，所以应该选择MS培养基，纯化的方法是平板划线法；根据题干信息“在组织培养某植物中发现，有一个MS培养基中没有加入杠杆激素的培养瓶中也长出了与加有杠杆激素的培养瓶中一样的愈伤组织，瓶中还长出了一些某种真菌的菌落”，出现该现象的原因作出的假设是“该种菌产生了有杠杆激素作用的物质”；所以可以增设一组实验，在MS培养基中加入经高压蒸汽灭菌处理的该种真菌或经高压蒸汽灭菌处理过的培养过该菌的培养基；如果产生了正常的愈伤组织，支持该假设。
（3）根系发达的植物土壤中该真菌的密度很大，说明该菌对植物有利，所以可以推测该菌和植物是互利共生的关系；将植物细胞和真菌细胞融合形成新的植物，需要在一定浓度的蔗糖溶液中加入某些酶处理植物，制备出所需的原生质体；聚乙二醇（PEG）法/高Ca2＋—高pH融合法可以用于原生质体的融合；将细胞培养成植株的过程称为植物组织培养技术；在获得原生质体的过程中，加入蔗糖溶液可以维持渗透压，使原生质体的形态不被破坏。
1．下列关于哺乳动物胚胎工程的叙述，错误的是（ ）
A．哺乳动物的胚胎培养液不属于合成培养基
B．胚胎工程操作的主要对象是生殖细胞、受精卵和早期的胚胎细胞
C．哺乳动物移植的胚胎可以来自体内受精、体外受精、核移植和胚胎分割等
D．囊胚经切割刀和酶处理产生的细胞，经培养和移植发育成新个体
【答案】A
【分析】胎移植胚胎移植是指将通过体外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的雌性动物体内，使之继续发育为新个体的技术。其中提供胚胎的个体称为“供体”，接受胚胎的个体叫“受体”。通过任何一项技术（如转基因、核移植和体外受精等）获得的胚胎，都必须移植给受体才能获得后代。
【详解】A、哺乳动物的胚胎培养液属于合成培养基，包括氨基酸、核苷酸、激素等，A错误；
B、胚胎工程是指对生殖细胞、受精卵或早期胚胎细胞进行多种显微操作和处理，然后将获得的胚胎移植到雌性动物体内生产后代，以满足人类的各种需求，B正确；
C、哺乳动物移植的胚胎可以来自体内受精、体外受精、核移植和胚胎分割，也可以来自于转基因技术等，C正确；
D、囊胚的细胞属于未分化的细胞，经切割刀和酶处理产生的细胞，经培养和移植发育成新个体，D正确。
故选A。
2．已知某二倍体农作物的抗虫与不抗虫、抗倒伏与不抗倒伏分别由独立遗传的等位基因A/a、B/b控制，如图表示利用多种育种方法（①~⑤）培育抗虫抗倒伏新品种的示意图。下列相关叙述错误的是（ ）
A．方法①的原理是基因重组，F2的抗虫抗倒伏个体中有1/3可稳定遗传
B．方法②进行筛选前，获得的二倍体植株中符合育种要求的占1/4
C．方法③获得的四倍体植株产生的配子中，基因组成为AaBb的配子占9/16
D．方法④⑤获得的种子播种后，可能得到具有其他一些优良性状的植株
【答案】C
【分析】杂交育种原理：基因重组（通过基因分离、自由组合或连锁交换，分离出优良性状或使各种优良性状集中在一起）。
诱变育种原理：基因突变，方法：用物理因素（如X射线、γ射线、紫外线、激光等）或化学因素（如亚硝酸、硫酸二乙脂等）来处理生物，使其在细胞分裂间期DNA复制时发生差错，从而引起基因突变，举例：太空育种、青霉素高产菌株的获得。
单倍体育种原理：染色体变异，方法与优点：花药离体培养获得单倍体植株，再人工诱导染色体数目加倍，优点 明显缩短育种年限，原因是纯合体自交后代不发生性状分离。
多倍体育种原理：染色体变异，方法：最常用的是利用秋水仙素处理萌发的种子或幼苗。秋水仙素能抑制有丝分裂时纺缍丝的形成，染色体不能移动，使得已经加倍的染色体无法平均分配，细胞也无法分裂。当秋水仙素的作用解除后，细胞又恢复正常的生长，然后再复制分裂，就能得到染色体数目加倍的细胞。如八倍体小黑麦的获得和无籽西瓜的培育成功都是多倍体育种取得的成就。
【详解】A、方法①为杂交育种的过程，其原理是基因重组，F2的抗虫抗倒伏（A_bb）个体占比为3/16，其中b有1/3可稳定遗传（AAbb），A正确；
B、方法②为单倍体育种过程，其原理是染色体数目变异，经过该过程后，获得的二倍体植株（1AABB、1aabb、1aaBB、1AAbb）中符合育种要求的占1/4，B正确；
C、方法③为多倍体育种，原理是染色体数目变异，该过程获得的四倍体植株的基因型为AAaaBBbb，可先考虑AAaa产生的配子类型，由于减数分裂过程中四条同源染色体随机两两组合后分开，因而产生的配子类型为AA∶Aa∶aa=1∶4∶1，可见该个体产生的配子中，基因组成为AaBb的配子占2/3×2/3=4/9，C错误；
D、方法④⑤为诱变育种，其原理是基因突变，该育种方法的优点是能大幅度改良生物的性状，由于基因突变具有不定向性，因此，该过程获得的种子播种后，可能得到具有其他一些优良性状的植株，D正确。
故选C。
3．研究发现肿瘤细胞快速增殖时需要更多的铁元素，肿瘤细胞表面的转铁蛋白受体TR增多。研究人员设想通过制备TR抗体来有效抑制肿瘤细胞增殖。下列相关分析错误的是（ ）
A．对小鼠进行多次注射TR免疫后，方可获得大量产生TR抗体的B淋巴细胞
B．从免疫小鼠脾脏获取的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞经融合即为所需的杂交瘤细胞
C．将得到的产生TR抗体的杂交瘤细胞在小鼠腹腔中培养，可从腹水中提取TR抗体
D．TR抗体能与肿瘤细胞膜上的相关蛋白质结合，从而抑制肿瘤细胞的快速增殖
【答案】B
【分析】单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原的抗体。通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的效应B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为杂交瘤细胞，杂交瘤细胞既能产生抗体，又能无限增殖。用具备这种特性的单个杂交瘤细胞培养成细胞群，可制备针对一种抗原的特异性抗体即单克隆抗体。
【详解】A、在制备单克隆抗体时需先用TR对小鼠进行免疫，方可获得产生TR抗体的B淋巴细胞，为获得杂交瘤细胞做准备，A正确；
B、从免疫小鼠脾脏获取的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合后，能得到多种杂交瘤细胞，须经过专一抗体检测后才能得到产生TfR抗体的杂交瘤细胞，B错误；
C、产生TR抗体的杂交瘤细胞，经克隆化抗体检测后转移到小鼠腹腔中培养，从小鼠腹水中提取TR抗体，C正确；
D、TR抗体与肿瘤细胞膜上的相关蛋白质特异性结合，降低肿瘤细胞对铁的转运，从而抑制肿瘤细胞的快速增殖，起到抑制肿瘤发生的作用，D正确。
故选B。
4．利用胚胎工程技术，可获得具有高产奶性状的优良个体。下列有关胚胎移植过程的叙述，错误的是（ ）
A．为保证供、受体生殖器官的生理变化相同，常用激素进行同期发情处理
B．胚胎移植的优势是可以充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力
C．为了获得产奶量高的奶牛，需取囊胚期的滋养层细胞做性别鉴定
D．胚胎分割可以看做动物有性生殖的方法之一
【答案】D
【分析】胚胎移植的基本程序主要包括：①对供、受体的选择和处理（用激素进行同期发情处理，用促性腺激素对供体母牛做超数排卵处理）；②配种或人工授精；③对胚胎的收集、检查、培养或保存（对胚胎进行质量检查，此时的胚胎应发育到桑椹或胚囊胚阶段）；④对胚胎进行移植；⑤移植后的检查。
【详解】A、胚胎移植时，需对供体和受体使用激素进行同期发情处理，以保证胚胎移植入相同的生理环境，A正确；
B、胚胎移植技术和传统育种技术相比其最大的优势在于发挥了雌性优良个体的繁殖潜力，B正确；
C、滋养层将来发育为胎儿的胎膜和胎盘，为了获得产奶量高的奶牛，需取囊胚期滋养层细胞做性别鉴定，C正确；
D、胚胎分割可以看做动物无性生殖或克隆的方法之一，D错误。
故选D。
5．下图表示通过相关技术获得某种克隆哺乳动物(二倍体)的流程，下列叙述正确的是（ ）
A．A表示细胞核，其供体应选用XX性染色体的个体
B．过程①表示去除细胞核，去核时常采用化学处理法
C．进行过程②前必须对受体动物注射适量免疫抑制剂
D．胚胎发育卵裂阶段细胞数目增加，胚胎总体积不变
【答案】D
【分析】题图分析：①表示去除细胞核，②代表的过程胚胎移植，概念为动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物。
【详解】A、A为供体体细胞的细胞核，性染色体的组成可为XX或XY，A错误；
B、过程①表示去除细胞核，该过程需要将卵母细胞培养至适当时期再进行，常采用显微操作去核，B错误；
C、②过程是胚胎移植，胚胎移植时，受体对植入胚胎不会产生排斥反应，因此不需要注射免疫抑制剂，C错误；
D、胚胎发育卵裂期胚胎中细胞进行有丝分裂，数目不断增加，但胚胎的总体积并不增加或略有缩小，D正确。
故选D。
6．细胞工程技术在医疗、育种等领域有着广泛的应用。相关叙述错误的是（ ）
A．茎尖组织培养技术脱毒培育的马铃薯比未脱毒的马铃薯抗病毒能力强
B．植物体细胞杂交技术培育的“白菜－甘蓝”具有耐热性强、易贮藏等优点
C．用核移植胚胎干细胞分化而来的胰岛B细胞进行移植， 可避免免疫排斥
D．杂交瘤细胞技术生产的“抗癌单克隆抗体”可制成“生物导弹”治疗癌症
【答案】A
【分析】1、植物的体细胞杂交是将不同植物的细胞通过细胞融合技术形成杂种细胞，进而利用植物的组织培养将杂种细胞培育成多倍体的杂种植株。植物体细胞杂交依据的原理是细胞膜的流动性和植物细胞的全能性。
2、单克降抗体的两次筛选：①筛选得到杂交瘤细胞(去掉未杂交的细胞以及自身融合的细胞)；②筛选出能够产生特异性抗体的细胞群。两次抗体检测：专一抗体检验阳性。单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优势在于特异性强，灵敏度高，可大量制备。
【详解】A、茎尖组织培养技术培育的马铃薯为脱毒马铃薯，但其对病毒的抗性并未增强，A错误；
B、由于体细胞杂交过程中染色体来自两个物种，由于基因间的相互作用，“白菜－甘蓝”具有耐热性强、易贮藏等优点，B正确；
C、免疫排斥主要是细胞免疫，由T细胞引起的，而胚胎干细胞简称ES或EK细胞，来源于早期胚胎或原始性腺，利用自体细胞诱导干细胞技术培育造血干细胞，可避免免疫排斥，C正确；
D、应用杂交瘤细胞技术能为人类提供单克隆抗体，与常规的抗体相比，单克隆抗体具有的显著特点是特异性强、灵敏度高，并可能大量制备，单克隆抗体通常与抗癌药物结合在一起构成生物导弹，用于癌症的治疗，D正确。
故选A。
7．下列关于细胞工程和胚胎工程的说法，正确的是（ ）
A．细胞贴壁生长和接触抑制是动物细胞培养过程中一定会出现的现象
B．胚胎干细胞可分化为成年动物体内任何一种类型的细胞，为开发新药提供标本
C．体外受精与体内受精不同的是体外受精前精子需要获能
D．进行胚胎移植前需要对供体和受体进行免疫检查
【答案】B
【分析】由于正常的动物细胞存在接触抑制，因此动物细胞培养过程中会出现细胞贴壁生长、单层生长和分裂次数有限的现象。但癌细胞能无限增殖，不会出现接触抑制，能出现多层生长。
【详解】A、动物癌细胞培养过程中一般没有接触抑制现象，A错误；
B、胚胎干细胞具有发育全能性，能发育为成年动物体内任何一种类型的细胞，为开发新药提供标本，B正确；
C、无论体内受精还是体外受精，精子均需要获能后才能完成受精，只不过体内受精过程中精子的获能是在体内完成的，C错误；
D、受体不会对移植的胚胎产生免疫排斥反应，故而进行胚胎移植前，不需要对供体和受体进行免疫检查来防止免疫排斥反应的发生，D错误。
故选B。
8． 将基因型为AaBb的水稻（具有24条染色体）的叶肉细胞通过无菌操作接入含有营养成分全面的培养基的试管中，在一定条件下培养形成试管幼苗，其过程如图所示：
(1)图中水稻的叶肉细胞要经过消毒处理后才能进行培养。其中［1］过程中，细胞的分化程度会______填“升高”“降低”或“不变”）。愈伤组织经过［2］过程重新分化成根和芽的过程叫_______________。常用的培养基有脱分化培养基、生根培养基和生芽培养基，这三种培养基的主要差异是_____________________________。
(2)在形成愈伤组织的过程中，细胞必须不断地从培养基中获得_______________和小分子有机物等营养物质。
(3)如果［4］是脱毒植株，则“水稻的某种细胞”应选用___________________细胞，这种繁殖方式实际上是______________，培养成的植株的基因型为______________。
(4)如果“某种细胞”选用的是花粉细胞，则［4］称为_________________植株，该植株的特点是___________，需用____________________处理，使其恢复正常体细胞染色体数。
【答案】(1) 降低 再分化 生长素/细胞分裂素的比例不同
(2)水分、无机盐
(3) 根尖或茎尖 无性繁殖 AaBb
(4) 单倍体 高度不育 秋水仙素
【分析】愈伤组织是指原植物体的局部受到创伤刺激后，在伤口表面新生的组织。它由活的薄壁细胞组成，可起源于植物体任何器官内各种组织的活细胞。
【详解】（1）［1］过程为脱分化处理，高度分化的植物细胞形成愈伤组织，细胞的分化程度降低；［2］过程为愈伤组织的再分化过程；植物在不同阶段需要的营养不同，脱分化培养基、生根培养基和生芽培养基目的不同，因此生长素/细胞分裂素的比例不同。
（2）愈伤组织不能进行光合作用，在形成愈伤组织的过程中，细胞需要从外界获得水分、无机盐和小分子有机物如氨基酸、葡萄糖等营养物质。
（3）根尖或茎尖处细胞分裂旺盛、感染病毒的概率小，常作为脱毒苗的首选；这种繁殖方式不经过两性细胞的结合，为无性繁殖；培养成的植株的基因型与原植株相同，为AaBb。
（4）花粉为雄配子，配子发育来的为单倍体；水稻具有2个染色体组，该植株只有1个染色体组，无同源染色体，减数分裂异常，因此高度不育；秋水仙素抑制纺锤体的形成，会使染色体数目加倍，因此可使单倍体恢复为正常体细胞染色体数。
9．（一）请分析回答下列有关微生物培养的问题：
(1)将马铃薯去皮切块，加水煮沸一定时间，过滤得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液中加入一定量蔗糖和琼脂，用水定容后灭菌，得到M 培养基。使用高压蒸汽灭菌锅对培养基进行灭菌时，压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是_________。马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质，营养物质类型除氮源碳源外还有_________。氮源进入细胞后，可参与合成的生物大分子有_________。若在M 培养基中用淀粉取代蔗糖，接种土壤滤液并培养，平板上长出菌落后可通过加入碘液作为_________筛选出能产淀粉酶的微生物。该方法能筛选出产淀粉酶微生物的原理是_________。
(2)某同学在为了调查某河流的水质状况，某研究小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。将1mL 水样稀释100 倍，在3 个平板上用涂布法分别接种入0.1mL 稀释液。经适当培养后，3 个平板上的菌落数分别为39、38 和37。据此可得出每升水样中的活菌数为_________。
(3)实验室中微生物的分离、纯化和培养试验结束后，为了防止病原微生物污染环境或感染科研工作者，应采取的防护措施有_________。（答出一点即可）
（二）新冠肺炎是由新冠病毒感染引起的呼吸道传染病。请回答下列问题：
(4)为及时确诊，科学家研制了基因检测试剂盒，其机理为：分离待测个体细胞的总RNA，在_________酶的作用下得到相应的DNA，再利用_________技术扩增，将样本中微量的病毒信息放大，最后以荧光的方式读取信号。这种方法也会出现假阴性现象，请分析其中的原因_________（答出一点即可）。
(5)预防新冠肺炎的有效措施是接种疫苗，核酸疫苗已成为疫苗研发的新领域。与DNA 疫苗（通过抗原蛋白基因在动物细胞中表达引起机体免疫应答）相比，mRNA 疫苗的安全性更有优势。这是因为mRNA 不需要进入细胞核，无_________的风险，且易被_________水解，不会遗传给子细胞。
(6)单克隆抗体在新冠肺炎的预防和治疗中具有光明的前景，相较于从动物血清中分离所需抗体， 单克隆抗体具有_________等特点。生产抗新冠病毒单克隆抗体的过程，需要用到动物细胞工程中的_________技术和动物细胞融合技术。杂交瘤细胞在体外大规模培养时，为防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害，应采取的措施是_________。
【答案】(1) 未将锅内冷空气排尽
水和无机盐 蛋白质和核酸 显色剂 淀粉遇碘液呈蓝色，产淀粉酶的微生物能分解淀粉，在菌落周国会形成透明圈
(2)3.8×107
(3)①对操作台，试验用品进行清洁，无菌处理;②对丢弃物进行无菌处理;③对防护服进行无菌处理：⑨)用肥皂洗手后再用清水冲洗
(4) 逆转录 PCR 扩增后的DNA含量较低、试剂盒灵敏度不够高
(5) 整合到宿主细胞染色体基因组中 RNA酶
(6) 特异性强、灵敏度高，可大量制备 动物细胞培养 进行传代培养
【分析】单克隆抗体的制备过程是：对小动物注射抗原，从该动物的脾脏中获取效应B细胞，将效应B细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选出能产生单一抗体的杂交瘤细胞，克隆化培养杂交瘤细胞（体内培养和体外培养），最后获取单克隆抗体。该过程需要涉及动物细胞培养技术和动物细胞融合技术。单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优势在于特异性强，灵敏度高，可大量制备。
【详解】（1）采用高压蒸汽灭菌时，若没有排尽高压蒸汽灭菌锅内的冷空气，很可能导致压力达到设定要求，而温度未达到相应要求；微生物生长繁殖所必需的营养物质主要包括碳源、氮源、水和无机盐等；氮源进入细胞后，可参与合成含氮化合物，其中的生物大分子有蛋白质和核酸；淀粉与碘液可以发生显色反应（碘液作为显色剂），使培养基呈蓝色，产生淀粉酶的微生物能分解周围的淀粉，蓝色消失后会出现以菌落为中心的透明圈。
（2）平均每个平板上的菌落数为38，稀释了100倍，取样0.1ml，则每毫升水中的活菌数为38×100÷0.1=38000个，则每升水中的活菌数为38000×1000=3.8×107个。
（3）为了防止病原微生物污染环境或感染科研工作者，应采取的防护措施有：①对操作台和试验用品进行清洁，无菌处理；②对丢弃物进行 无菌处理；③对防护服进行无菌处理；④用肥皂洗手后再用清水冲洗等。
（4）在逆转录酶的作用下，RNA可逆转录得到相应的 DNA；PCR是体外扩增DNA的技术，可以得到大量的DNA；使用基因检测试剂盒时，由于扩增后的DNA含量较低、试剂盒灵敏度不够高等原因可能会出现假阴性现象。
（5）与 DNA 疫苗相比，mRNA 疫苗的安全性更有优势。这是因为 mRNA 不需要进入细胞核，无整合到宿主细胞染色体基因组中的风险，且易被RNA酶水解，不会遗传给子细胞。
（6） 单克隆抗体与常规的血清抗体相比最大的优点是特异性强、灵敏度高、可大量制备；生产抗新冠病毒单克隆抗体的过程，需要用到动物细胞工程中的动物细胞培养技术和动物细胞融合（B细胞+骨髓瘤细胞）技术；杂交瘤细胞在体外大规模培养时，应及时进行传代培养，以减少细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害，同时也为细胞生长提供更充足的营养物质。
10．为了研究不同“层次”血清对细胞增殖的影响，科研人员做了以下实验：将分离出的牛血清装入专用血清瓶后放入冰箱中直立静置一段时间。取三根刻度吸管，将血清从上到下轻轻吸成均等的三份，分别装入消毒后的瓶中，标记为上、中、下，再分别从三个瓶中吸取等量的血清置于另一小瓶中，混合均匀备用。分别取等量的不同“层次”的血清和混合血清加入到新配制的动物细胞培养液中，再接种小鼠上皮细胞（接种细胞密度为5×104个/mL），在适宜条件下培养72h后，进行计数，结果如下表。请回答：
组别
上
中
下
混
72h细胞数/个▪mL－1
9.75×104
1.04×105
7.5×104
1.85×105
(1)细胞培养过程中，CO2的主要作用是_____________，每天更换培养液的目的是__________。
(2)培养液中加入动物血清的作用是____________，还加入一定量抗生素的目的是_______。
(3)如果用血细胞计数板计数细胞时进行如图所示的操作，统计出来的数据比实际值偏高。正确的操作方法应该是_____________。
(4)从表中结果可以看出，不同“层次”的血清对细胞增殖的影响不同。造成这种结果的主要原因是不同“层次”血清中_____________。
(5)根据实验结果，在动物细胞培养过程中，正确使用血清的方法是_____。
【答案】(1) 维持培养液的pH 补充营养物质，去除代谢废物，利于细胞增殖
(2) 补充细胞生长所需的未知物质 防止杂菌污染
(3)先盖上盖玻片，后滴细胞悬液
(4)成分不同
(5)将血清充分混匀后加入到培养液中
【分析】分析表格：表中为上、中、下三层血清及混合血清中细胞增殖情况，不同“层次”的血清对细胞增殖的影响不同，且均比混合血清中自爆增殖速度慢，因此在动物细胞培养过程中，正确使用血清的方法是将血清充分混匀后再加入到培养液中。
【详解】（1）动物细胞培养需要一定的气体环境，即95%空气+5%二氧化碳，其中二氧化碳的主要作用是维持培养液的pH；每天更换培养基可以补充营养物质，并能去除代谢废物，这样有利于细胞增殖。
（2）动物血清营养丰富，培养液中加入动物血清的作用是补充细胞生长所需的未知物质，还加入一定量抗生素的目的是防止杂菌污染。
（3）如果用血细胞计数板计数细胞时，应该先盖上盖玻片，后滴加细胞悬液，若先滴加细胞悬液，后盖上盖玻片，则统计出来的数据比实际值偏大。
（4）不同“层次”血清中营养成分不同，因此不同“层次”的血清对细胞增殖的影响不同，且均比混合血清中增殖速度慢。
（5）由表可知混合血清中细胞增殖速率最快，因此在动物细胞培养过程中，正确使用血清的方法是将血清充分混匀后再加入到培养液中。
易错点27 细胞工程与胚胎工程
1.有关“植物细胞培养”
①由愈伤组织进行细胞分化时，一般要先诱导其生芽，然后诱导其生根，可通过控制培养基中生长素和细胞分裂素的比例来实现。
②光照：在愈伤组织诱导阶段，对有些植物来说，避光培养有利于细胞脱分化形成愈伤组织。当愈伤组织再分化出芽和叶时，一定要有光照，有利于叶片内叶绿素的合成。
③体内细胞未表现全能性的原因：基因的表达具有选择性。
④细胞的全能性指的是细胞的一种潜在能力，这种潜在能力只有在特定的环境中才能表现出来，而不是指细胞在任何条件下都能发育成完整的生物体。
⑤植物组织培养中所需的碳源一般为蔗糖，少数为葡萄糖和果糖，原因是蔗糖既可提供充足的碳源，又可维持相对适中的渗透压，而葡萄糖和果糖在与蔗糖提供相同数量碳源的前提下，其造成的渗透压可能过高。
2.有关“原代培养和传代培养”
（1）区分原代培养和传代培养的关键是看用胰蛋白酶处理的对象和是否分瓶。
①分瓶前，第一次用胰蛋白酶对动物组织进行处理后的培养是原代培养。
②第二次用胰蛋白酶处理，使细胞从瓶壁上脱离下来，分瓶后的细胞培养为传代培养。
3.有关“细胞贴壁和接触抑制”
悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。细胞数目不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。
4.有关“单克隆抗体”
①用特定抗原对小鼠进行免疫的原因：
B淋巴细胞要经过免疫过程，即接触抗原，增殖分化为有特异性免疫功能的B淋巴细胞，才能产生相应的抗体，所以，与骨髓瘤细胞融合的B淋巴细胞实际上是浆细胞。
②获取小鼠已经免疫的B淋巴细胞的部位：脾。
③诱导融合的方法：
动物细胞融合特有的诱导方法为用灭活的病毒处理，其他物理、化学诱导融合的方法与植物体细胞杂交过程中诱导原生质体融合的方法基本相同。
④杂交细胞：
在诱导因素的作用下进行细胞的诱导融合，形成的杂交细胞有多种，若仅考虑两两融合的情况，形成的杂交细胞有三种，AA型、BB型、AB型。只有AB型才是我们所需要的杂交细胞，所以需要用选择培养基进行筛选。
⑤两次筛选的目的：
第一次是在诱导融合之后，利用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞。第二次是对上述杂交瘤细胞进行筛选，利用96孔板培养，采用专一抗体检测的方法筛选出能产生所需特定抗体的杂交瘤细胞。
1．如图表示畜牧业生产上培育某种优良种牛的两种方法，有关分析正确的是（ ）
A．应用1中的卵母细胞常取自卵巢，并可直接用于融合
B．应用2常用雌性激素处理供体1，目的是使其超数排卵
C．应用3一般选择桑葚胚或囊胚进行分割
D．应用4体现了动物细胞的全能性
【答案】C
【分析】1、应用1用到了核移植技术和胚胎移植技术，应用2用到了体外受精技术和胚胎移植技术，应用3用到了胚胎分割技术和胚胎移植技术，应用4用到了胚胎干细胞培养技术。
2、细胞的性是指经分裂和分化后，仍具有产生完整有机体或分化成其他各种细胞的潜能和特性。
【详解】A、应用1用到了核移植技术和胚胎移植技术，用到的卵母细胞常取自卵巢，但是需要在体外培养到MⅡ中期，A错误；
B、应用2用到了体外受精技术和胚胎移植技术，常用外源促性腺激素处理供体1，目的是目的是使其超数排卵，B错误；
C、应用3用到了胚胎分割技术和胚胎移植技术，一般选择发育良好、形态正常的桑葚胚或囊胚进行分割，C正确；
D、应用4用到了胚胎干细胞培养技术，因为培养的目的是需要的组织和器官，而不是个体或其他各种细胞，所以不能体现动物细胞的全能性，D错误。
故选C。
2．下图是利用体细胞核移植技术克隆高产奶牛的流程图，①～⑤表示相应操作。
下列关于早期胚胎形成过程的叙述，正确的是（ ）
A．过程①常对雌牛甲进行超数排卵处理
B．过程②获取的体细胞可以是成熟的红细胞
C．过程③获得的重组细胞中含有4个染色体组
D．过程④需要构建抑制细胞分化的培养体系
【答案】A
【分析】动物细胞核移植技术指的是将动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体；用核移植的方法得到的动物称为克隆动物，原理是动物细胞核的全能性；动物细胞核移植可分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植。
【详解】A、为提高良种奶牛的繁殖能力，在获取卵母细胞之前过程①需用促性腺激素对奶牛进行超数排卵处理，A正确；
B、哺乳动物成熟的红细胞没有细胞核，但是也没有其他的各种细胞器，所以过程②获取的体细胞不能用成熟的红细胞，B错误；
C、由于获得的体细胞需要进行去核处理，所以过程③获得的重组细胞中含有2个染色体组，C错误；
D、过程④需要构建促进细胞分化的培养体系，培养早期胚胎，D错误。
故选A。
3．下图是通过基因工程培养的转基因生物或产品的过程，结合相关知识回答下列问题：
(1)基因工程技术中最关键的步骤是______。让转基因牛的乳汁中含有药用蛋白的流程是：通过①构建药用蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，需要用到______酶，通过②______方法导入受精卵，选取合适的受精卵进行③培养，③运用的技术手段有______技术，培育出“批量生产药物的工厂”转基因牛。
(2)选用农杆菌的Ti质粒与目的基因构建重组Ti质粒，把重组Ti质粒导入玉米体细胞中的方法是______。
【答案】(1) 基因表达载体的构建 限制酶和连接酶 显微注射 胚胎培养、细胞培养、胚胎移植
(2)农杆菌转化法
【分析】1、基因工程的工具：（1）限制酶：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。（2）DNA连接酶：连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键。（3）运载体：常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒。
2、基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子、复制原点和标记基因等。
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA-分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质一抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
【详解】（1）基因表达载体的构建是基因工程技术中最关键的步骤。在构建基因表达载体时需要用限制酶切割目的基因和运载体，然后用连接酶将目的基因和运载体链接起来。将重组质粒导入动物受精卵细胞需要用②显微注射法。从受精卵培育转基因牛过程即发生了胚胎的发育过程，需要将受精卵培养到桑葚胚期或囊胚期才能进行胚胎移植，所以此过程运用的技术手段有早期胚胎培养和胚胎移植技术。
（2）农杆菌的Ti质粒上的T-DNA （可转移的DNA）可转移到受体细胞，并且能将目的基因整合到受体细胞的染色体DNA上。根据农杆菌的这种特点，将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上，把重组Ti质粒导入玉米体细胞中完成转化的方法是农杆菌转化法。
1．植物组织培养的具体操作——胡萝卜的组织培养
(1)操作步骤
取材
①胡萝卜洗净、削皮、切段(约10 cm)；酒精棉球擦手消毒；
②胡萝卜段消毒：用酒精溶液消毒30 s后，立即用无菌水清洗2～3次，再用次氯酸钠溶液处理30 min后，立即用无菌水清洗2～3次；
③将胡萝卜段切成1 cm厚的横切片，再选取有形成层的部位，切取1 cm3左右的小块
接种
避光条件下培养，诱导其脱分化，长出愈伤组织
转接
将生长良好的愈伤组织转接到分化培养基上，诱导其再分化生成试管苗进而发育成完整小植株
移栽
移栽到大田，培养成正常植株
(2)注意事项
①选用形成层进行培养的原因是形成层细胞分裂旺盛，全能性较高，易于脱分化。选用其他部位也可以(理论上具有全能性的细胞均可)。
②光照的控制：在愈伤组织的诱导阶段往往要避光培养，有利于细胞脱分化产生愈伤组织。当愈伤组织分化出芽和叶时，一定要有光照，以利于叶片内叶绿素的合成。
2．植物激素对植物组织培养的影响
(1)按照不同的顺序使用这两类激素，会得到不同的实验结果
使用顺序
实验结果
先使用生长素，后使用细胞分裂素
有利于细胞分裂，但细胞不分化
先使用细胞分裂素，后使用生长素
细胞既分裂也分化
同时使用
分化频率提高
简记：先“生”分裂不分化，后“生”分裂又分化，同“使”分化频率高
(2)当同时使用这两类激素时，两者用量的比例影响植物细胞的发育方向
生长素/细胞分裂素
植物细胞的发育方向
比值高
有利于根的分化、抑制芽的形成
比值低
有利于芽的分化、抑制根的形成
比值适中
促进愈伤组织的形成
简记：“高”根，“低”芽，“中”愈伤
3.植物体细胞杂交与植物有性杂交中遗传物质的变化
设白菜细胞含2x条染色体，2个染色体组；甘蓝细胞含2y条染色体，2个染色体组。
项目
不同物种体细胞杂交
不同物种有性杂交
同一物种杂交
过程
子代染色体数目
2x＋2y
x＋y
2x(白菜)或2y(甘蓝)
子代染色体组数
4
2
2
子代是几倍体
异源四倍体
异源二倍体
同源二倍体
子代是否可育
可育
不可育
可育
繁殖方式
无性繁殖
有性繁殖
有性繁殖
变异类型
染色体变异
染色体变异
—
4．辨析动物细胞培养相关的两组概念
(1)细胞贴壁与接触抑制：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为接触抑制。
(2)原代培养与传代培养
①原代培养：动物组织消化后的初次培养称为原代培养。原代培养的细胞核型正常。
②传代培养：贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖。这样的培养过程通常被称为传代培养。一般情况下，细胞在传至10～50代左右时，增殖会逐渐缓慢，以至于完全停止，这时部分细胞的细胞核型可能会发生变化。
5．植物组织培养与动物细胞培养的比较
比较项目
植物组织培养
动物细胞培养
理论基础
植物细胞的全能性
细胞增殖
培养基
类型
固体或半固体培养基
液体培养基
成分
水、矿质元素、维生素、蔗糖、氨基酸、琼脂、植物激素等
糖、氨基酸、无机盐、维生素、促生长因子、动物血清等
取材
植物较幼嫩部分或花药等
动物胚胎或幼龄动物的器官或组织
关键环节
细胞的脱分化和再分化
细胞增殖和癌变
结果
形成新的组织或植物个体，可以体现细胞的全能性
形成细胞群，不形成个体，不体现细胞的全能性
应用
①植株快速繁殖；
②脱毒植株的培育；
③制备人工种子；
④生产药物、杀虫剂等；
⑤转基因植物的培育
①蛋白质生物制品的生产；
②皮肤移植材料的培育；
③检测有毒物质；
④生理、病理、药理学研究
相同点
①两种技术手段培养过程中细胞都进行有丝分裂，都是无性繁殖，都可称为克隆，都不涉及减数分裂；
②均为无菌操作，需要适宜的温度、pH等条件
6.对核移植与克隆的理解
(1)克隆是指遗传组成完全相同的分子、细胞或个体，即克隆应包含三个层次的内容：①分子水平：如DNA复制；②细胞水平：如动物细胞培养；③个体水平：如克隆动物。
(2)核移植技术中选用的核供体应为具有优良性状的个体，提供卵细胞的受体和代孕个体只需为同一物种的健康雌性个体即可。
(3)核移植技术中去核是通过显微操作完成的，用微型吸管将处于MⅡ中期的卵母细胞的细胞核与靠近核的第一极体一并吸出。
(4)动物细胞核移植可以有两种操作方式：一是把供体细胞导入去核的卵母细胞，这是现在常用的方法；二是将供体动物的一个细胞核直接导入去核的卵母细胞，该过程需要用电刺激的方法促进融合。
(5)融合后的细胞称为重组细胞(注意区分于杂交细胞)，需用物理或化学方法激活，使其完成细胞分裂和发育进程，形成重组胚胎才能进行胚胎移植。
(6)体细胞核移植体现了动物细胞细胞核的全能性，而非动物细胞的全能性。
7．植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较
比较项目
植物体细胞杂交
动物细胞融合
原理
细胞膜的流动性、细胞的全能性
细胞膜的流动性
融合前处理
除去细胞壁
使细胞分散开
相关酶
纤维素酶和果胶酶
胰蛋白酶或胶原蛋白酶
诱导方法
物理法：离心、振动、电激等；
化学法：聚乙二醇(PEG)等诱导
除物理法和化学法，还可用灭活的病毒诱导
结果
杂种植株
杂交细胞
应用
培育植物新品种
主要用于制备单克隆抗体
意义
克服不同生物远缘杂交不亲和的障碍，打破了生殖隔离，扩展了杂交的亲本组合
8．细胞融合与单克隆抗体的制备
项目
步骤
技术方法
原理
取材
从已免疫的小鼠的脾脏中获取B淋巴细胞，体外培养骨髓瘤细胞
动物细胞培养
细胞增殖
融合
通过灭活病毒诱导B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合
动物细胞融合
细胞膜的流动性
选择
第一次要从融合形成的杂交细胞中筛选出杂交瘤细胞
选择培养基
—
第二次要从杂交瘤细胞中获得能产生专一抗体的杂交瘤细胞
专一抗体检测、克隆化培养
免疫学原理(抗原—抗体特异性结合)
培养
在小鼠腹腔内进行体内培养，或在装有细胞培养液的培养基中进行体外培养
动物细胞培养
细胞增殖
1．请回答细胞工程的有关问题：
紫花苜蓿是全世界栽培历史最悠久、利用最广泛的豆科牧草，但易造成家畜鼓胀病。百脉根富含单宁，单宁可与植物蛋白质结合，不引起家畜采食后鼓胀。为培育抗鼓胀病的苜蓿新品种，科研人员利用野生型清水紫花苜蓿和里奥百脉根为材料进行了实践研究。研究主要流程如下图：（注：IOA可抑制植物细胞呼吸第一阶段，R-6G可阻止线粒体的呼吸作用，二者有效抑制不同植物细胞正常代谢的临界浓度不同）
(1)据图可知，本研究主要利用的生物技术的原理是______。
(2)在实验前需通过预实验来研究R-6G或IOA使原生质体失去再生愈伤组织能力的临界浓度，实验的设计思路是：将获取的原生质体分别放置在不同浓度的______溶液中，培养一段时间后，观察原生质体再生情况。
(3)步骤②到步骤③需要更换新的培养基，其原因是经过______过程诱导形成愈伤组织和诱导愈伤组织分化形成试管苗所需激素______的比例不同。
(4)若利用此技术获得单宁，可培养到______阶段即可。
【答案】(1)细胞膜的流动性和植物细胞的全能性
(2)R－6G或IOA
(3) 脱分化 激素和营养条件等
(4)愈伤组织
【分析】分析题图：图中①表示原生质体融合形成杂种细胞以及杂种细胞的增殖，②表示脱分化过程，③表示再分化过程。
【详解】（1）由图可知，本研究主要利用植物体细胞杂交技术，植物体细胞杂交技术的原理是细胞膜的流动性和植物细胞的全能性。
（2）要研究R-6G或IOA使原生质体失去再生愈伤组织能力的临界浓度，则实验的自变量是R-6G或IOA溶液的浓度，因变量是原生质体的再生情况，实验设计应遵循对照与单一变量原则，故该实验的设计思路是：将获取的原生质体分别放置在不同浓度的R-6G或IOA溶液中，培养一段时间后，观察原生质体再生情况。
（3）愈伤组织是经脱分化形成的；由于脱分化形成愈伤组织和诱导愈伤组织分化形成试管苗所需的激素和营养条件等不同，因此由步骤②到步骤③需要更换新的培养基。
（4）单宁是细胞代谢的次生产物，因此若上述技术进行工厂化生产获得单宁，可培养到愈伤组织阶段即可。
2．“繁殖与呼吸综合征”是一种由 PRRSV 病毒引发的传染病。科学家制备出 PRRSV-GP3 蛋白的单克隆抗体，可对该病进行诊断和治疗，制备过程如图所示。回答下列问题：
(1)图中涉及到的生物工程技术有_______，将 GP3 蛋白注射小鼠的目的是____________。
(2)培养细胞乙、丙、丁过程中均表现有____________现象，第 1 次筛选是用特定的选择性培养基筛选，在该培养基上，______________________都会死亡，第 2 次筛选的目的是________________。
(3)图中扩大培养通常采用的方法有________________。
(4)单克隆抗体在诊断的应用上具有准确、高效、简易和快速的优点，原因是__________。
【答案】(1) 动物细胞融合和动物细胞培养 获得抗GP3蛋白抗体的B细胞
(2) 贴壁生长和接触抑制 未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞 筛选出能产生抗GP3蛋白抗体的杂交瘤细胞群
(3)将细胞丁注射到小鼠腹腔内或在体外大规模培养
(4)单克隆抗体纯度高、特异性强，能准确识别各种抗原物质的细微差异，并跟一定的抗原发生特异性结合
【分析】单克隆抗体是细胞工程中动物细胞融合的重要应用，与传统血清抗体相比，单克隆抗体的纯度高，特异性强；其基本步骤：对小鼠进行免疫→提取B淋巴细胞→将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合→通过筛选、克隆化培养和扩大化培养、最终注入小鼠体内→从腹腔腹水中提取单克隆抗体。
【详解】（1）图示为制备单克隆抗体的过程，涉及到的动物细胞工程的技术有动物细胞融合和动物细胞培养；图中将 GP3 蛋白注射小鼠的目的是为了获得能够产生相应抗体（抗GP3蛋白抗体）的B细胞。
（2）细胞乙、丙、丁都具有癌细胞的特点，因此在培养过程中都会出现贴壁生长和接触抑制现象；第 1 次筛选是用特定的选择性培养基筛选，获得杂交瘤细胞，则未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡；第 2 次筛选的目的是筛选出能产生抗GP3蛋白抗体的杂交瘤细胞群。
（3）在单克隆抗体制备过程中，筛选出来的能产生抗GP3蛋白抗体的杂交瘤细胞（细胞丁）可以注射到小鼠腹腔内或在体外大规模培养。
（4）单克隆抗体纯度高、特异性强，能准确识别各种抗原物质的细微差异，并跟一定的抗原发生特异性结合，因此单克隆抗体在诊断的应用上具有准确、高效、简易和快速的优点。
3．组织培养某植物中发现，有一个MS培养基中没有加入杠杆激素（生长素和细胞分裂素）的培养瓶中也长出了与加有杠杆激素的培养瓶中一样的愈伤组织，瓶中还长出了一些某种真菌的菌落。
(1)回顾操作过程，操作环境的消毒过程、培养基和器具的灭菌过程应该没有问题，可能是对外植体的_________处理和接种外植体环节没有________________________进行严格的无菌操作。
(2)研究人员没有放弃这难得的机遇，初步做出一个假设，继续进行实验：
他们就地取材，在_________培养基上采用_________________法纯化培养该真菌。再增设一组实验，具体做法是，在MS培养基中加入经高压蒸汽灭菌处理的该种真菌或经高压蒸汽灭菌处理过的______________________的培养基，再接种外植体，其他环境条件与正常组织培养相同，观察能否培养出正常的愈伤组织。预测结果：如果产生了正常的愈伤组织，支持该假设。如果没有产生愈伤组织，不支持假设。他们做的假设是：_____________________。
(3)去该植物生长地考察发现，根系发达的植物土壤中该真菌的密度很大。据此推测该植物和该真菌的关系很可能是_______________。设想将它们融合培育成一种新的植物。先在一定浓度的蔗糖溶液中加入某些酶处理植物，制备出所需的______________，真菌也做类似的处理。再经过_________（化学法）诱导融合，利用______________技术，最终长成新的植物体。所用的一定浓度的蔗糖溶液的主要作用是______________________。
【答案】(1) 消毒 在酒精灯火焰旁
(2) MS 平板划线 （纯化）培养过该菌 该种菌产生了有杠杆激素作用的物质（且不被高温高压破坏）（该种菌产生了杠杆激素）
(3) 原始合作/互利共生 原生质体 聚乙二醇（PEG）法/高Ca2＋—高pH融合法 组织培养 维持渗透压，使原生质体的形态不被破坏
【分析】1、在离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织的过程中，需要的条件：（1）消毒灭菌；（2）一定浓度的植物激素；（3）适宜的温度；（4）充足的养料。2、植物体细胞杂交技术：就是将不同种的植物体细胞原生质体在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成完整植物体的技术。
【详解】（1）植物组织培养过程中，为避免杂菌污染，需要对培养基和器具的灭菌，对外植体进行消毒，接种应该在酒精灯火焰附近，如果操作环境的消毒过程、培养基和器具的灭菌过程应该没有问题，可能是对外植体的消毒和接种外植体环节没有在酒精灯火焰旁进行严格的无菌操作。
（2）根据后面的信息“在MS培养基中”，所以应该选择MS培养基，纯化的方法是平板划线法；根据题干信息“在组织培养某植物中发现，有一个MS培养基中没有加入杠杆激素的培养瓶中也长出了与加有杠杆激素的培养瓶中一样的愈伤组织，瓶中还长出了一些某种真菌的菌落”，出现该现象的原因作出的假设是“该种菌产生了有杠杆激素作用的物质”；所以可以增设一组实验，在MS培养基中加入经高压蒸汽灭菌处理的该种真菌或经高压蒸汽灭菌处理过的培养过该菌的培养基；如果产生了正常的愈伤组织，支持该假设。
（3）根系发达的植物土壤中该真菌的密度很大，说明该菌对植物有利，所以可以推测该菌和植物是互利共生的关系；将植物细胞和真菌细胞融合形成新的植物，需要在一定浓度的蔗糖溶液中加入某些酶处理植物，制备出所需的原生质体；聚乙二醇（PEG）法/高Ca2＋—高pH融合法可以用于原生质体的融合；将细胞培养成植株的过程称为植物组织培养技术；在获得原生质体的过程中，加入蔗糖溶液可以维持渗透压，使原生质体的形态不被破坏。
1．下列关于哺乳动物胚胎工程的叙述，错误的是（ ）
A．哺乳动物的胚胎培养液不属于合成培养基
B．胚胎工程操作的主要对象是生殖细胞、受精卵和早期的胚胎细胞
C．哺乳动物移植的胚胎可以来自体内受精、体外受精、核移植和胚胎分割等
D．囊胚经切割刀和酶处理产生的细胞，经培养和移植发育成新个体
【答案】A
【分析】胎移植胚胎移植是指将通过体外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的雌性动物体内，使之继续发育为新个体的技术。其中提供胚胎的个体称为“供体”，接受胚胎的个体叫“受体”。通过任何一项技术（如转基因、核移植和体外受精等）获得的胚胎，都必须移植给受体才能获得后代。
【详解】A、哺乳动物的胚胎培养液属于合成培养基，包括氨基酸、核苷酸、激素等，A错误；
B、胚胎工程是指对生殖细胞、受精卵或早期胚胎细胞进行多种显微操作和处理，然后将获得的胚胎移植到雌性动物体内生产后代，以满足人类的各种需求，B正确；
C、哺乳动物移植的胚胎可以来自体内受精、体外受精、核移植和胚胎分割，也可以来自于转基因技术等，C正确；
D、囊胚的细胞属于未分化的细胞，经切割刀和酶处理产生的细胞，经培养和移植发育成新个体，D正确。
故选A。
2．已知某二倍体农作物的抗虫与不抗虫、抗倒伏与不抗倒伏分别由独立遗传的等位基因A/a、B/b控制，如图表示利用多种育种方法（①~⑤）培育抗虫抗倒伏新品种的示意图。下列相关叙述错误的是（ ）
A．方法①的原理是基因重组，F2的抗虫抗倒伏个体中有1/3可稳定遗传
B．方法②进行筛选前，获得的二倍体植株中符合育种要求的占1/4
C．方法③获得的四倍体植株产生的配子中，基因组成为AaBb的配子占9/16
D．方法④⑤获得的种子播种后，可能得到具有其他一些优良性状的植株
【答案】C
【分析】杂交育种原理：基因重组（通过基因分离、自由组合或连锁交换，分离出优良性状或使各种优良性状集中在一起）。
诱变育种原理：基因突变，方法：用物理因素（如X射线、γ射线、紫外线、激光等）或化学因素（如亚硝酸、硫酸二乙脂等）来处理生物，使其在细胞分裂间期DNA复制时发生差错，从而引起基因突变，举例：太空育种、青霉素高产菌株的获得。
单倍体育种原理：染色体变异，方法与优点：花药离体培养获得单倍体植株，再人工诱导染色体数目加倍，优点 明显缩短育种年限，原因是纯合体自交后代不发生性状分离。
多倍体育种原理：染色体变异，方法：最常用的是利用秋水仙素处理萌发的种子或幼苗。秋水仙素能抑制有丝分裂时纺缍丝的形成，染色体不能移动，使得已经加倍的染色体无法平均分配，细胞也无法分裂。当秋水仙素的作用解除后，细胞又恢复正常的生长，然后再复制分裂，就能得到染色体数目加倍的细胞。如八倍体小黑麦的获得和无籽西瓜的培育成功都是多倍体育种取得的成就。
【详解】A、方法①为杂交育种的过程，其原理是基因重组，F2的抗虫抗倒伏（A_bb）个体占比为3/16，其中b有1/3可稳定遗传（AAbb），A正确；
B、方法②为单倍体育种过程，其原理是染色体数目变异，经过该过程后，获得的二倍体植株（1AABB、1aabb、1aaBB、1AAbb）中符合育种要求的占1/4，B正确；
C、方法③为多倍体育种，原理是染色体数目变异，该过程获得的四倍体植株的基因型为AAaaBBbb，可先考虑AAaa产生的配子类型，由于减数分裂过程中四条同源染色体随机两两组合后分开，因而产生的配子类型为AA∶Aa∶aa=1∶4∶1，可见该个体产生的配子中，基因组成为AaBb的配子占2/3×2/3=4/9，C错误；
D、方法④⑤为诱变育种，其原理是基因突变，该育种方法的优点是能大幅度改良生物的性状，由于基因突变具有不定向性，因此，该过程获得的种子播种后，可能得到具有其他一些优良性状的植株，D正确。
故选C。
3．研究发现肿瘤细胞快速增殖时需要更多的铁元素，肿瘤细胞表面的转铁蛋白受体TR增多。研究人员设想通过制备TR抗体来有效抑制肿瘤细胞增殖。下列相关分析错误的是（ ）
A．对小鼠进行多次注射TR免疫后，方可获得大量产生TR抗体的B淋巴细胞
B．从免疫小鼠脾脏获取的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞经融合即为所需的杂交瘤细胞
C．将得到的产生TR抗体的杂交瘤细胞在小鼠腹腔中培养，可从腹水中提取TR抗体
D．TR抗体能与肿瘤细胞膜上的相关蛋白质结合，从而抑制肿瘤细胞的快速增殖
【答案】B
【分析】单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原的抗体。通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的效应B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为杂交瘤细胞，杂交瘤细胞既能产生抗体，又能无限增殖。用具备这种特性的单个杂交瘤细胞培养成细胞群，可制备针对一种抗原的特异性抗体即单克隆抗体。
【详解】A、在制备单克隆抗体时需先用TR对小鼠进行免疫，方可获得产生TR抗体的B淋巴细胞，为获得杂交瘤细胞做准备，A正确；
B、从免疫小鼠脾脏获取的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合后，能得到多种杂交瘤细胞，须经过专一抗体检测后才能得到产生TfR抗体的杂交瘤细胞，B错误；
C、产生TR抗体的杂交瘤细胞，经克隆化抗体检测后转移到小鼠腹腔中培养，从小鼠腹水中提取TR抗体，C正确；
D、TR抗体与肿瘤细胞膜上的相关蛋白质特异性结合，降低肿瘤细胞对铁的转运，从而抑制肿瘤细胞的快速增殖，起到抑制肿瘤发生的作用，D正确。
故选B。
4．利用胚胎工程技术，可获得具有高产奶性状的优良个体。下列有关胚胎移植过程的叙述，错误的是（ ）
A．为保证供、受体生殖器官的生理变化相同，常用激素进行同期发情处理
B．胚胎移植的优势是可以充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力
C．为了获得产奶量高的奶牛，需取囊胚期的滋养层细胞做性别鉴定
D．胚胎分割可以看做动物有性生殖的方法之一
【答案】D
【分析】胚胎移植的基本程序主要包括：①对供、受体的选择和处理（用激素进行同期发情处理，用促性腺激素对供体母牛做超数排卵处理）；②配种或人工授精；③对胚胎的收集、检查、培养或保存（对胚胎进行质量检查，此时的胚胎应发育到桑椹或胚囊胚阶段）；④对胚胎进行移植；⑤移植后的检查。
【详解】A、胚胎移植时，需对供体和受体使用激素进行同期发情处理，以保证胚胎移植入相同的生理环境，A正确；
B、胚胎移植技术和传统育种技术相比其最大的优势在于发挥了雌性优良个体的繁殖潜力，B正确；
C、滋养层将来发育为胎儿的胎膜和胎盘，为了获得产奶量高的奶牛，需取囊胚期滋养层细胞做性别鉴定，C正确；
D、胚胎分割可以看做动物无性生殖或克隆的方法之一，D错误。
故选D。
5．下图表示通过相关技术获得某种克隆哺乳动物(二倍体)的流程，下列叙述正确的是（ ）
A．A表示细胞核，其供体应选用XX性染色体的个体
B．过程①表示去除细胞核，去核时常采用化学处理法
C．进行过程②前必须对受体动物注射适量免疫抑制剂
D．胚胎发育卵裂阶段细胞数目增加，胚胎总体积不变
【答案】D
【分析】题图分析：①表示去除细胞核，②代表的过程胚胎移植，概念为动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物。
【详解】A、A为供体体细胞的细胞核，性染色体的组成可为XX或XY，A错误；
B、过程①表示去除细胞核，该过程需要将卵母细胞培养至适当时期再进行，常采用显微操作去核，B错误；
C、②过程是胚胎移植，胚胎移植时，受体对植入胚胎不会产生排斥反应，因此不需要注射免疫抑制剂，C错误；
D、胚胎发育卵裂期胚胎中细胞进行有丝分裂，数目不断增加，但胚胎的总体积并不增加或略有缩小，D正确。
故选D。
6．细胞工程技术在医疗、育种等领域有着广泛的应用。相关叙述错误的是（ ）
A．茎尖组织培养技术脱毒培育的马铃薯比未脱毒的马铃薯抗病毒能力强
B．植物体细胞杂交技术培育的“白菜－甘蓝”具有耐热性强、易贮藏等优点
C．用核移植胚胎干细胞分化而来的胰岛B细胞进行移植， 可避免免疫排斥
D．杂交瘤细胞技术生产的“抗癌单克隆抗体”可制成“生物导弹”治疗癌症
【答案】A
【分析】1、植物的体细胞杂交是将不同植物的细胞通过细胞融合技术形成杂种细胞，进而利用植物的组织培养将杂种细胞培育成多倍体的杂种植株。植物体细胞杂交依据的原理是细胞膜的流动性和植物细胞的全能性。
2、单克降抗体的两次筛选：①筛选得到杂交瘤细胞(去掉未杂交的细胞以及自身融合的细胞)；②筛选出能够产生特异性抗体的细胞群。两次抗体检测：专一抗体检验阳性。单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优势在于特异性强，灵敏度高，可大量制备。
【详解】A、茎尖组织培养技术培育的马铃薯为脱毒马铃薯，但其对病毒的抗性并未增强，A错误；
B、由于体细胞杂交过程中染色体来自两个物种，由于基因间的相互作用，“白菜－甘蓝”具有耐热性强、易贮藏等优点，B正确；
C、免疫排斥主要是细胞免疫，由T细胞引起的，而胚胎干细胞简称ES或EK细胞，来源于早期胚胎或原始性腺，利用自体细胞诱导干细胞技术培育造血干细胞，可避免免疫排斥，C正确；
D、应用杂交瘤细胞技术能为人类提供单克隆抗体，与常规的抗体相比，单克隆抗体具有的显著特点是特异性强、灵敏度高，并可能大量制备，单克隆抗体通常与抗癌药物结合在一起构成生物导弹，用于癌症的治疗，D正确。
故选A。
7．下列关于细胞工程和胚胎工程的说法，正确的是（ ）
A．细胞贴壁生长和接触抑制是动物细胞培养过程中一定会出现的现象
B．胚胎干细胞可分化为成年动物体内任何一种类型的细胞，为开发新药提供标本
C．体外受精与体内受精不同的是体外受精前精子需要获能
D．进行胚胎移植前需要对供体和受体进行免疫检查
【答案】B
【分析】由于正常的动物细胞存在接触抑制，因此动物细胞培养过程中会出现细胞贴壁生长、单层生长和分裂次数有限的现象。但癌细胞能无限增殖，不会出现接触抑制，能出现多层生长。
【详解】A、动物癌细胞培养过程中一般没有接触抑制现象，A错误；
B、胚胎干细胞具有发育全能性，能发育为成年动物体内任何一种类型的细胞，为开发新药提供标本，B正确；
C、无论体内受精还是体外受精，精子均需要获能后才能完成受精，只不过体内受精过程中精子的获能是在体内完成的，C错误；
D、受体不会对移植的胚胎产生免疫排斥反应，故而进行胚胎移植前，不需要对供体和受体进行免疫检查来防止免疫排斥反应的发生，D错误。
故选B。
8． 将基因型为AaBb的水稻（具有24条染色体）的叶肉细胞通过无菌操作接入含有营养成分全面的培养基的试管中，在一定条件下培养形成试管幼苗，其过程如图所示：
(1)图中水稻的叶肉细胞要经过消毒处理后才能进行培养。其中［1］过程中，细胞的分化程度会______填“升高”“降低”或“不变”）。愈伤组织经过［2］过程重新分化成根和芽的过程叫_______________。常用的培养基有脱分化培养基、生根培养基和生芽培养基，这三种培养基的主要差异是_____________________________。
(2)在形成愈伤组织的过程中，细胞必须不断地从培养基中获得_______________和小分子有机物等营养物质。
(3)如果［4］是脱毒植株，则“水稻的某种细胞”应选用___________________细胞，这种繁殖方式实际上是______________，培养成的植株的基因型为______________。
(4)如果“某种细胞”选用的是花粉细胞，则［4］称为_________________植株，该植株的特点是___________，需用____________________处理，使其恢复正常体细胞染色体数。
【答案】(1) 降低 再分化 生长素/细胞分裂素的比例不同
(2)水分、无机盐
(3) 根尖或茎尖 无性繁殖 AaBb
(4) 单倍体 高度不育 秋水仙素
【分析】愈伤组织是指原植物体的局部受到创伤刺激后，在伤口表面新生的组织。它由活的薄壁细胞组成，可起源于植物体任何器官内各种组织的活细胞。
【详解】（1）［1］过程为脱分化处理，高度分化的植物细胞形成愈伤组织，细胞的分化程度降低；［2］过程为愈伤组织的再分化过程；植物在不同阶段需要的营养不同，脱分化培养基、生根培养基和生芽培养基目的不同，因此生长素/细胞分裂素的比例不同。
（2）愈伤组织不能进行光合作用，在形成愈伤组织的过程中，细胞需要从外界获得水分、无机盐和小分子有机物如氨基酸、葡萄糖等营养物质。
（3）根尖或茎尖处细胞分裂旺盛、感染病毒的概率小，常作为脱毒苗的首选；这种繁殖方式不经过两性细胞的结合，为无性繁殖；培养成的植株的基因型与原植株相同，为AaBb。
（4）花粉为雄配子，配子发育来的为单倍体；水稻具有2个染色体组，该植株只有1个染色体组，无同源染色体，减数分裂异常，因此高度不育；秋水仙素抑制纺锤体的形成，会使染色体数目加倍，因此可使单倍体恢复为正常体细胞染色体数。
9．（一）请分析回答下列有关微生物培养的问题：
(1)将马铃薯去皮切块，加水煮沸一定时间，过滤得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液中加入一定量蔗糖和琼脂，用水定容后灭菌，得到M 培养基。使用高压蒸汽灭菌锅对培养基进行灭菌时，压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是_________。马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质，营养物质类型除氮源碳源外还有_________。氮源进入细胞后，可参与合成的生物大分子有_________。若在M 培养基中用淀粉取代蔗糖，接种土壤滤液并培养，平板上长出菌落后可通过加入碘液作为_________筛选出能产淀粉酶的微生物。该方法能筛选出产淀粉酶微生物的原理是_________。
(2)某同学在为了调查某河流的水质状况，某研究小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。将1mL 水样稀释100 倍，在3 个平板上用涂布法分别接种入0.1mL 稀释液。经适当培养后，3 个平板上的菌落数分别为39、38 和37。据此可得出每升水样中的活菌数为_________。
(3)实验室中微生物的分离、纯化和培养试验结束后，为了防止病原微生物污染环境或感染科研工作者，应采取的防护措施有_________。（答出一点即可）
（二）新冠肺炎是由新冠病毒感染引起的呼吸道传染病。请回答下列问题：
(4)为及时确诊，科学家研制了基因检测试剂盒，其机理为：分离待测个体细胞的总RNA，在_________酶的作用下得到相应的DNA，再利用_________技术扩增，将样本中微量的病毒信息放大，最后以荧光的方式读取信号。这种方法也会出现假阴性现象，请分析其中的原因_________（答出一点即可）。
(5)预防新冠肺炎的有效措施是接种疫苗，核酸疫苗已成为疫苗研发的新领域。与DNA 疫苗（通过抗原蛋白基因在动物细胞中表达引起机体免疫应答）相比，mRNA 疫苗的安全性更有优势。这是因为mRNA 不需要进入细胞核，无_________的风险，且易被_________水解，不会遗传给子细胞。
(6)单克隆抗体在新冠肺炎的预防和治疗中具有光明的前景，相较于从动物血清中分离所需抗体， 单克隆抗体具有_________等特点。生产抗新冠病毒单克隆抗体的过程，需要用到动物细胞工程中的_________技术和动物细胞融合技术。杂交瘤细胞在体外大规模培养时，为防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害，应采取的措施是_________。
【答案】(1) 未将锅内冷空气排尽
水和无机盐 蛋白质和核酸 显色剂 淀粉遇碘液呈蓝色，产淀粉酶的微生物能分解淀粉，在菌落周国会形成透明圈
(2)3.8×107
(3)①对操作台，试验用品进行清洁，无菌处理;②对丢弃物进行无菌处理;③对防护服进行无菌处理：⑨)用肥皂洗手后再用清水冲洗
(4) 逆转录 PCR 扩增后的DNA含量较低、试剂盒灵敏度不够高
(5) 整合到宿主细胞染色体基因组中 RNA酶
(6) 特异性强、灵敏度高，可大量制备 动物细胞培养 进行传代培养
【分析】单克隆抗体的制备过程是：对小动物注射抗原，从该动物的脾脏中获取效应B细胞，将效应B细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选出能产生单一抗体的杂交瘤细胞，克隆化培养杂交瘤细胞（体内培养和体外培养），最后获取单克隆抗体。该过程需要涉及动物细胞培养技术和动物细胞融合技术。单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优势在于特异性强，灵敏度高，可大量制备。
【详解】（1）采用高压蒸汽灭菌时，若没有排尽高压蒸汽灭菌锅内的冷空气，很可能导致压力达到设定要求，而温度未达到相应要求；微生物生长繁殖所必需的营养物质主要包括碳源、氮源、水和无机盐等；氮源进入细胞后，可参与合成含氮化合物，其中的生物大分子有蛋白质和核酸；淀粉与碘液可以发生显色反应（碘液作为显色剂），使培养基呈蓝色，产生淀粉酶的微生物能分解周围的淀粉，蓝色消失后会出现以菌落为中心的透明圈。
（2）平均每个平板上的菌落数为38，稀释了100倍，取样0.1ml，则每毫升水中的活菌数为38×100÷0.1=38000个，则每升水中的活菌数为38000×1000=3.8×107个。
（3）为了防止病原微生物污染环境或感染科研工作者，应采取的防护措施有：①对操作台和试验用品进行清洁，无菌处理；②对丢弃物进行 无菌处理；③对防护服进行无菌处理；④用肥皂洗手后再用清水冲洗等。
（4）在逆转录酶的作用下，RNA可逆转录得到相应的 DNA；PCR是体外扩增DNA的技术，可以得到大量的DNA；使用基因检测试剂盒时，由于扩增后的DNA含量较低、试剂盒灵敏度不够高等原因可能会出现假阴性现象。
（5）与 DNA 疫苗相比，mRNA 疫苗的安全性更有优势。这是因为 mRNA 不需要进入细胞核，无整合到宿主细胞染色体基因组中的风险，且易被RNA酶水解，不会遗传给子细胞。
（6） 单克隆抗体与常规的血清抗体相比最大的优点是特异性强、灵敏度高、可大量制备；生产抗新冠病毒单克隆抗体的过程，需要用到动物细胞工程中的动物细胞培养技术和动物细胞融合（B细胞+骨髓瘤细胞）技术；杂交瘤细胞在体外大规模培养时，应及时进行传代培养，以减少细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害，同时也为细胞生长提供更充足的营养物质。
10．为了研究不同“层次”血清对细胞增殖的影响，科研人员做了以下实验：将分离出的牛血清装入专用血清瓶后放入冰箱中直立静置一段时间。取三根刻度吸管，将血清从上到下轻轻吸成均等的三份，分别装入消毒后的瓶中，标记为上、中、下，再分别从三个瓶中吸取等量的血清置于另一小瓶中，混合均匀备用。分别取等量的不同“层次”的血清和混合血清加入到新配制的动物细胞培养液中，再接种小鼠上皮细胞（接种细胞密度为5×104个/mL），在适宜条件下培养72h后，进行计数，结果如下表。请回答：
组别
上
中
下
混
72h细胞数/个▪mL－1
9.75×104
1.04×105
7.5×104
1.85×105
(1)细胞培养过程中，CO2的主要作用是_____________，每天更换培养液的目的是__________。
(2)培养液中加入动物血清的作用是____________，还加入一定量抗生素的目的是_______。
(3)如果用血细胞计数板计数细胞时进行如图所示的操作，统计出来的数据比实际值偏高。正确的操作方法应该是_____________。
(4)从表中结果可以看出，不同“层次”的血清对细胞增殖的影响不同。造成这种结果的主要原因是不同“层次”血清中_____________。
(5)根据实验结果，在动物细胞培养过程中，正确使用血清的方法是_____。
【答案】(1) 维持培养液的pH 补充营养物质，去除代谢废物，利于细胞增殖
(2) 补充细胞生长所需的未知物质 防止杂菌污染
(3)先盖上盖玻片，后滴细胞悬液
(4)成分不同
(5)将血清充分混匀后加入到培养液中
【分析】分析表格：表中为上、中、下三层血清及混合血清中细胞增殖情况，不同“层次”的血清对细胞增殖的影响不同，且均比混合血清中自爆增殖速度慢，因此在动物细胞培养过程中，正确使用血清的方法是将血清充分混匀后再加入到培养液中。
【详解】（1）动物细胞培养需要一定的气体环境，即95%空气+5%二氧化碳，其中二氧化碳的主要作用是维持培养液的pH；每天更换培养基可以补充营养物质，并能去除代谢废物，这样有利于细胞增殖。
（2）动物血清营养丰富，培养液中加入动物血清的作用是补充细胞生长所需的未知物质，还加入一定量抗生素的目的是防止杂菌污染。
（3）如果用血细胞计数板计数细胞时，应该先盖上盖玻片，后滴加细胞悬液，若先滴加细胞悬液，后盖上盖玻片，则统计出来的数据比实际值偏大。
（4）不同“层次”血清中营养成分不同，因此不同“层次”的血清对细胞增殖的影响不同，且均比混合血清中增殖速度慢。
（5）由表可知混合血清中细胞增殖速率最快，因此在动物细胞培养过程中，正确使用血清的方法是将血清充分混匀后再加入到培养液中。
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