高中生物人教版 (2019)选择性必修3第1章 发酵工程第2节 微生物的培养技术及应用一 微生物的基本培养技术精品课件ppt

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一、微生物的基本培养技术
高中生物 / 人教版 / 选择性必修三/第一章第二节 第1课时
微生物的培养技术及应用
实验室培养微生物条件：
1）提供微生物生长繁殖所需营养和环境条件
2）确保其他微生物无法混入
微生物结构简单、形体微小，眼睛看不到，若想得到纯净的微生物，就必须对其进行培养和分离。
人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。
4.培养基的营养构成:
水、碳源、氮源、无机盐。
NH4＋、NO3-、NH3等。
牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等。
CO2、CO32-、HCO3-。
葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等。
Zn、Cu、Mn、C、M等
为什么培养基需要氮源？
是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的。
满足微生物对 ___________________ ___的需求
④培养厌氧微生物时，需要提供_____的条件。
①培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加_______；
②培养霉菌时，需要将培养基调至_____；
③培养细菌时，需要将培养基调至____ _______；
pH、特殊营养物质、氧气
如何获得纯净的微生物培养物？
避免杂菌污染——无菌技术（前提，基本保障）
用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物
使用强烈理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子，而达到完全无菌之过程
煮沸消毒法巴氏消毒法化学药剂消毒法
灼烧灭菌法高压蒸汽灭菌法干热灭菌法
100℃煮沸5-6min，杀死微生物的营养细胞和一部分孢子。
对于不耐高温的液体，62-65℃下煮30min或80-90℃下煮30s-1min。
用70%酒精擦拭双手；氯气消毒水源。
用紫外灯照射接种室、接种箱、超净工作台
指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子。
有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。
细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖作用的无性生殖细胞。能直接发育成新个体。
灼烧灭菌法、高压蒸汽灭菌法、干热灭菌法
原理：高温蒸汽破坏蛋白质、核酸等结构使其变性优点：操作简便，效果可靠。对象：培养基、容器等
①湿热灭菌：高压蒸汽灭菌锅内100kPa、121℃下维持15-30min
原理：使微生物细胞膜破坏、蛋白质变性和原生质干燥等对象：耐高温，需保持干燥的物品，适用于 玻璃器皿 (如试管、培养皿、吸管、注射器) 金属器具 (如针头、 镊子、剪刀等)的灭菌
②干热灭菌：干热灭菌箱内160-170 ℃下加热2-3h
③灼烧灭菌：酒精灯火焰灼烧
原理：使微生物燃烧对象：接种工具如接种环、接种针，以及接种过 程中的试管口或瓶口等易被污染部位
将接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体称为培养物。
获得纯培养物的过程就是纯培养。
分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落。
采用平板划线法和稀释涂布平板法将单个微生物分散在固体培养基上，之后得到的单菌落一般是由单个微生物形成的纯培养物。
待培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。
倒平板注意事项：①温度：50℃左右②操作：在酒精灯火焰附近③冷凝后平板倒置
任务：观看视频1.归纳对接种环灭菌的注意事项。（1）方法（2）灭菌的时间点2.归纳划线的注意事项，并说明原因。
1.将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红。
2.在火焰旁冷却接种环，并拔出装有酵母菌的棉塞。
3.将试管口通过火焰。
4.将已冷却的接种环伸入菌液中，蘸取一环菌液 。
5.将试管口通过火焰，并塞上棉塞。
6.左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基！
7.灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连。
1、为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗？为什么？
杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者
杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线的菌种直接来源上次划线的末端，从而使每次划线时菌种数目逐渐减少，直至得到单个细胞
杀死接种环上原有微生物
2、在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？
3、在做第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？
答：以免接种环温度太高，杀死菌种。
答：线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的单菌落。
4、若完成图示操作，共做了五次划线，接种环灼烧灭菌了几次？
共需灼烧接种环六次
完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28℃左右的恒温培养箱中培养24-28h。
1.未接种的培养基表面是否有菌落生长，如果有，说明了什么？
2.在接种酵母菌的培养基上，你是否观察到了菌落？这些菌落的颜色、形状、大小是否一致，如果你观察到了不同形态的菌落，你能分析可能是哪些原因引起的吗？
微生物生长繁殖产生的菌落
练习1、根据倒平板的方法及注意事项回答下列问题：
（1）培养基灭菌后，需要冷却到________左右时，才能用来倒平板。（2）请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：_______________。（3）甲、乙、丙中的灭菌方法是__________。（4）丁中的操作需要等待_______________才能进行。为什么要将平板倒置？（5）整个过程为何要在酒精灯旁进行？（6）如何检测培养基制备是否成功？
37℃倒置培养24～48h，观察是否有微生物生长
防止皿盖上水珠落入培养基造成污染,倒置培养使琼脂里水分不易蒸发出去。
酒精灯旁空气中杂菌少
练习2.下列为几位同学描述的平板划线接种法的划线方式，其中正确的是（ 　　）