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【生物】湖北省孝感市2018-2019学年高二下学期期中考试试题（A） （解析版）
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湖北省孝感市2018-2019学年高二下学期期中考试试题（A）
一、选择题
1.下列关于基因工程的叙述中错误的是（ ）
A. 基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建
B. 将目的基因导入大肠杆菌细胞常用Ca2+处理法
C. 基因工程技术可以定向改造生物的性状，培育新的生物品种
D. 基因工程技术是唯一能打破远缘杂交不亲和障碍培育生物新品种的方法
【答案】D
【解析】
【分析】
基因工程又叫DNA重组技术，是指按照人们的意愿，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品；基因工程的基本操作步骤主要包括四步：①目的基因的获取，②基因表达载体的构建，③将目的基因导入受体细胞，④目的基因的检测与鉴定。
【详解】A. 基因工程的步骤为：获取目的基因、构建基因表达载体、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定，其中基因表达载体的构建是基因工程的核心步骤，A正确；
B. 以大肠杆菌为受体细胞时，先要用Ca2+处理细胞以使其处于感受态，以便目的基因的导入，B正确；
C. 基因工程可以按照人们的意愿，克服不同物种之间的生殖隔离，实现生物的定向变异，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品，培育新的生物品种，C正确；
D. 基因工程技术和细胞工程技术都能打破远缘杂交不亲和障碍，培育生物新品种，D错误。
2.下列哪项不是DNA重组技术的基本操作所用到的工具酶（ ）
A. 限制酶 B. E.coli DNA连接酶
C. T2 DNA连接酶 D. T4 DNA连接酶
【答案】C
【解析】
基因工程中常用的工具酶有DNA连接酶、限制性核酸内切酶，其中常用的DNA连接酶包括Ecoli DNA连接酶和T4 DNA连接酶，故选C。
3.下列关于几种酶的叙述，错误的是（ ）
A. E.coli DNA连接酶只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来
B. 限制酶将一个DNA分子片段切成两个片段需消耗两个水分子
C. 构建cDNA文库至少要使用两种酶
D. 限制酶能使DNA的氢键断裂
【答案】D
【解析】
【分析】
限制酶和DNA连接酶的作用部位均为磷酸二酯键，只是限制酶是切割磷酸二酯键，DNA连接酶是连接磷酸二酯键，在磷酸二酯键形成和断裂过程中，伴随了水的生成和消耗；cDNA 文库是指某生物某发育时期所转录的全部 mRNA 经反转录形成的 cDNA 片段与某种载体连接而形成的克隆的集合。
【详解】A. E.coli DNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来，A正确；
B. 限制性核酸内切酶将一个DNA分子片段切成两个片段，即断裂两个磷酸二酯键，因此需消耗两个水分子，B正确；
C. 构建cDNA文库时至少用到逆转录酶与DNA连接酶，C正确；
D. 限制酶能使DNA的磷酸二酯键断裂，D错误。
4.下列关于质粒的叙述，正确的是
A. 质粒是广泛存在于细菌细胞中的一种细胞器
B. 质粒是独立于细菌拟核之外，能自主复制的小型环状DNA分子
C. 细菌质粒作为运载体常用抗生素合成基因作为标记基因
D. 细菌质粒的复制过程一定是在受体细胞外独立进行的
【答案】B
【解析】
【分析】
1、常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒。（质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。）
2、作为运载体必须具备的条件：①要具有限制酶的切割位点； ②要有标记基因（如抗性基因），以便于重组后重组DNA的筛选；③能在宿主细胞中稳定存在并复制；④是安全的，对受体细胞无害，而且要易从供体细胞分离出来。
3、天然的质粒不能直接作为载体，基因工程中用到的质粒都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。
【详解】质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外并具有自我复制能力的小型双链环状DNA分子，不是细胞器，A错误，B正确；细菌质粒作为运载体常用抗生素抗性基因作为标记基因，C错误；细菌质粒的复制过程可在宿主细胞内独立进行，D错误。
故选B。
【点睛】本题考查基因工程的相关知识，重点考查质粒的相关内容，要求考生识记质粒的存在细胞、质粒的化学本质、质粒作为运载体的条件，能结合所学的知识准确判断各选项。
5. 关于cDNA文库和基因组文库的比较不正确的是（ ）
A. cDNA文库小
B. cDNA文库无启动子
C. cDNA文库有内含子
D. cDNA文库含有某种生物的部分基因
【答案】C
【解析】
【分析】
本题考查基因工程，考查对目的基因获取方法的理解。理解基因组文库和cDNA文库的获取方法是解答本题的关键。
【详解】基因组文库含有某种生物的全部基因，cDNA文库是从某时期的细胞中提取mRNA，利用反转录法获取的，只含有该生物的部分基因，因此cDNA文库比较小，且无启动子和内含子，A项、B项、D项正确，C项错误。
6.受体细胞不同，将目的基因导入受体细胞的方法也不相同，下列受体细胞与导入方法匹配错误的一项是（ ）
选项
受体细胞
导入方法
A
棉花细胞
花粉管通道法
B
大肠杆菌
农杆菌转化法
C
羊受精卵
显微注射技术
玉米细胞
基因枪法
A. A B. B C. C D. D
【答案】B
【解析】
【分析】
将目的基因导入受体细胞（转化）是基因工程的第三步，根据受体细胞种类不同，可分三种情况：1.受体细胞是植物细胞，有三种方法：农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法；2.受体细胞是动物细胞，常用显微注射法；3.受体细胞是微生物细胞，方法是用Ca2+处理。
【详解】A. 棉花细胞是植物细胞，可采用花粉管通道法，A正确；
B. Ca2+处理法能使大肠杆菌细胞的生理状态发生改变，使之成为易于吸收周围环境中DNA分子的感受态，所以将目的基因导入微生物细胞，常采用感受态细胞法，农杆菌转化法常用于植物，B错误；
C. 动物受精卵为受体细胞时，常用显微注射法，C正确；
D. 在自然条件下，农杆菌感染双子叶植物和裸子植物，因此农杆菌转化法是将目的基因导入植物细胞最常用的方法，对于某些单子叶植物细胞如玉米细胞，可以用基因枪法，D正确。
7.限制酶是一种核酸切割酶，可辨识并切割 DNA 分子上特定的核苷酸碱基序列。下图依次为四种限制酶BamHⅠ，EcoRⅠ，HindⅢ以及BglⅡ的辨识序列，箭头表示每一种限制酶的特定切割部位，其中哪两种限制酶所切割出来的 DNA 片段末端可以互补黏合（ ）
A. BamHI和EcoRI B. BamHI和HindⅢ
C. EcoRI和HindⅢ D. BamHI和BglII
【答案】D
【解析】
【分析】
限制性核酸内切酶能够识别双链DNA分子的特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端，两个黏性末端只要一样就可以进行碱基互补配对，再通过DNA连接酶连接起来。BamH I 切割后露出的黏性末端是-CTAG，EcoR I切割后露出的黏性末端是-TTAA，HindⅢ切割后露出的黏性末端是-TCGA，Bgl II切割后露出的黏性末端是-CTAG。
【详解】限制酶所识别的是特定的碱基序列，并在特定部位进行切割，只要切下的游离碱基互补即可互补黏合，由图示可知，BamH I和Bgl II切割产生的黏性末端相同，可通过DNA连接酶连接，D正确。
8.下列关于蛋白质工程实施的叙述，不正确的是（ ）
A. 可以根据人类的需要，设计并制造出自然界不存在的全新蛋白质
B. 可以根据功能的需要替代蛋白质中的某一个肽段或一个特定的结构区域
C. 可以通过基因工程间接地改造蛋白质中特定的一个或几个氨基酸
D. 可以通过人工化学合成的方法直接对蛋白质的氨基酸进行改造
【答案】D
【解析】
【分析】
蛋白质工程是以蛋白质的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行基因改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需要。蛋白质工程是在基因工程的基础上，延伸出来的第二代基因工程。
【详解】A. 蛋白质工程是在原有蛋白质的基础上，根据人们的需求对蛋白质分子作出的定向的改造，可以设计并制造出自然界不存在的全新蛋白质，A正确；
B. 蛋白质工程可以根据功能的需要替代蛋白质中的某一个肽段或一个特定的结构区域，B正确；
C. 蛋白质工程较小的改造是改造蛋白质分子中某些活性部位的1个或几个氨基酸残基通过定点诱变技术，以获得人类所需要的目的蛋白质，C正确；
D. 蛋白质工程不能通过人工化学合成的方法直接对蛋白质的氨基酸进行改造，D错误。
9.蛋白质工程的基本操作程序正确的是（ ）
①设计预期的蛋白质结构
②找到相对应的脱氧核苷酸的序列
③推测应有的氨基酸的序列
④蛋白质的预期功能
A. ①→②→③→④ B. ④→③→②→①
C. ④→①→③→② D. ②→③→①→④
【答案】C
【解析】
蛋白质工程的基本途径：从预期的蛋白质功能出发，设计预期的蛋白质结构，推测应有的氨基酸序列，找到相对应的脱氧核苷酸序列（基因），最后按照基因工程的一般步骤进行。因此，蛋白质工程的基本操作程序正确的是④→①→③→②。
故选：C。
【点睛】本考查蛋白质工程的相关知识，要求学生识记蛋白质工程的概念及基本途径，再选出正确的答案即可，属于考纲识记层次的考查。
10.北极比目鱼中有抗冻基因，其编码的抗冻蛋白具有11个氨基酸的重复序列，该序列重复次数越多，抗冻能力越强，下图是获取转基因抗冻番茄植株的过程示意图，有关叙述正确的是
A. 过程①获取的目的基因，与比目鱼染色体中的抗冻基因序列完全相同
B. 对抗冻基因进行基因修饰，能够得到抗冻性增强的抗冻蛋白
C. 过程②构成的重组质粒缺乏标记基因，需要转入农杆菌才能进行筛选
D. 应用DNA探针技术，可以检测转基因抗冻番茄植株中目的基因的存在及其完全表达
【答案】B
【解析】
【分析】
本题以获取转基因抗冻番茄植株为素材，结合流程图，考查基因工程的相关知识，意在考查学生的识图能力和理解所学知识要点的能力；能运用所学知识与观点，通过比较、分析与综合等方法对某些生物学问题进行解释、推理，做出合理的判断或得出正确的结论。
【详解】图中①是通过逆转录法获取目的基因的过程，该方法获取的目的基因中无内含子等结构，故与比目鱼染色体中的抗冻基因序列不完全相同，A错误；由题干信息“编码的抗冻蛋白具有11个氨基酸的重复序列，该序列重复次数越多，抗冻能力越强”可知，对抗冻基因进行基因修饰，得到抗冻性增强的抗冻蛋白，B正确；导入农杆菌是为了扩增和更易导入番茄细胞，C错误；DNA探针技术可检测目的基因的存在，但不能检测其是否完全表达，后者利用抗原-抗体杂交技术检测目的基因是否表达出来， D错误。
【点睛】目的基因的检测和表达
（1）首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因：DNA分子杂交技术；
（2）其次还要检测目的基因是否转录出mRNA，方法是用标记的目的基因作探针与mRNA杂交；
（3）最后检测目的基因是否翻译成蛋白质，方法是从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原--抗体杂交；
（4）有时还需进行个体生物学水平的鉴定。如转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。
11. 下列有关愈伤组织的叙述错误的是
A. 是植物细胞脱分化后形成的
B. 愈伤组织的代谢类型是异养需氧型
C. 每个细胞仍然具有全能性
D. 由于脱分化导致遗传物质发生了改变
【答案】D
【解析】
愈伤组织是植物细胞脱分化后形成的，代谢类型是异养需氧型，每个细胞仍然具有全能性，细胞分裂方式是有丝分裂，导致遗传物质没有改变；选D。
12.下图是通过植物细胞工程技术获得紫杉醇的途径，下列叙述不正确的是（ ）
A. 该途径依据的原理是植物细胞具有全能性
B. 过程①需控制好培养基中植物激素的比例
C. 经过程①细胞的形态和结构发生了变化
D. 过程③需使用液体培养基，有利于细胞增殖
【答案】A
【解析】
【分析】
图示是通过植物细胞工程技术获得紫杉醇的途径，①表示脱分化过程，②表示将愈伤组织分散成单个细胞的过程，③表示细胞增殖过程
【详解】该途径获得细胞群和细胞产物（紫杉醇），没有体现细胞的全能性，A错误；过程①表示脱分化，需在培养基中加入适当比例的生长素和细胞分裂素，B正确；外植体在植物激素的刺激下发生脱分化形成由相对没有分化的薄壁细胞组成的愈伤组织，因此经过过程①，细胞的形态和结构发生了变化，C正确；过程③表示细胞大量增殖的过程，需使用液体培养基，D正确。故选A。
【点睛】识记植物组织培养的原理、过程、条件及产物等，准确判断图中各序号代表的过程是解答本题的关键。
13.下列有关植物细胞工程应用的叙述，错误的是
A. 用人工薄膜将愈伤组织包裹可形成人工种子
B. 在紫草素的细胞产物工厂化生产的过程中使用的是液体培养基
C. 对愈伤组织进行诱变处理，从分化的植株中可筛选出新品种
D. 利用植物组织培养技术培育的脱毒苗具有不含或很少含病毒的特点
【答案】A
【解析】
【分析】
人工种子是以植物组织培养获得的胚状体、不定芽、顶芽和腋芽等为材料，经过人工薄膜包装得到的种子。细胞产物的工业化生产使用的是液体培养基。对植物的愈伤组织进行化学或物理的诱变处理，促使其发生突变，再通过诱导分化形成植株，从这些植株中筛选出高抗、高产、优质的突变体，从而培育成新品种。进行组织培养时，一般选取植物茎尖作材料，其依据是茎尖不含病毒（或含病毒极少）。
【详解】A、用人工薄膜将胚状体包装后可制成人工种子，错误；
B、细胞产物的工厂化生产是从人工培养的愈伤组织细胞中提取某种成分，如紫草素等，使用的液体培养基，正确；
C、在育种中，可以对植物的愈伤组织进行化学或物理的诱变处理，促使其发生突变，再通过诱导分化形成植株。从这些植株中筛选出高抗、高产、优质的突变体，从而培育成新品种，正确；
D、利用组织培养技术培育脱毒草莓幼苗的原理是细胞的全能性，培育时，一般选取植物茎尖作材料，其依据是茎尖不含病毒（或含病毒极少），正确。
故选Ａ。
【点睛】植物细胞工程育种的原理是植物细胞的全能性；方法：去细胞壁→细胞融合→组织培养；优点：克服远缘杂交的不亲和性，有目的地培育优良品种；缺点：技术复杂，难度大。
14. 人工种子是指植物离体培养中产生的胚状体，包裹在含有养分和具有保护功能的物质中，并在适宜条件下能够萌发成幼苗。下列与人工种子形成过程无关的是
A. 细胞的脱分化和再分化 B. 细胞全能性
C. 细胞有丝分裂 D. 细胞减数分裂
【答案】D
【解析】
【分析】
人工种子：通过组织培养技术，可把植物组织的细胞培养成在形态及生理上与天然种子胚相似的胚状体，科学家把胚状体包埋在人工种皮内形成球状结构，使其具备种子机能，所以，人工种子是一种人工制造的代替天然种子的颗粒体，可以直接播种于田间。
特点：周期短，易储存和运输，完全保持优良品种的遗传特性，不受气候和地域的限制。
【详解】植物组织培养的过程是外植体脱分化→愈伤组织再分化→胚状体→试管苗，人工种子的形成需要脱分化和再分化，A项不符合题意。植物组织培养依据的原理是细胞的全能性，B项不符合题意。
C、人工种子形成过程离不开细胞的有丝分裂和细胞分化，C项不符合题意。减数分裂的结果是产生精子或卵细胞等有性生殖细胞，用于繁衍后代，人工种子形成过程不存在减数分裂，D项符合题意，故选D。
【点睛】本题考查植物组织培养的相关知识，解题的关键是要识记植物组织培养技术的原理、过程及条件，掌握植物组织培养技术的相关应用，能结合所学的知识准确判断各选项。
15.下图表示利用棉花叶肉细胞原生质体培养进行遗传改良的过程，据图分析错误的是（ ）
A. ①过程需在适宜条件下用纤维素酶和果胶酶的混合物处理
B. ②过程能定向诱导原生质体产生优良性状的突变
C. ③过程中叶肉细胞失去了其特有的结构和功能
D. ④过程需用适宜配比的生长素和细胞分裂素处理
【答案】B
【解析】
【分析】由图示信息可知：该题综合考查学生对植物体细胞杂交技术、植物组织培养技术及其突变体的利用的相关知识的识记和理解能力。
【详解】①过程是去除细胞壁获得原生质体，需在适宜条件下用纤维素酶和果胶酶处理，A正确；②过程是对原生质体进行诱变处理，促使其发生基因突变，由此产生的变异是不定向的，需要经过筛选才可能获得优良性状的突变，B错误；③过程是脱分化，就是让已经分化的细胞，经过诱导后，失去其特有的结构和功能而转变成未分化的细胞的过程，C正确；④过程是再分化，需用适宜浓度的生长素和细胞分裂素处理，D正确。
【点睛】解题的关键是梳理植物体细胞杂交技术和植物组织培养技术的过程，明辨图中数字所示的生理过程，并与突变体的利用建立联系。
16.利用植物体细胞杂交技术将白菜和甘蓝(均为二倍体)培育成“白菜—甘蓝”杂种植株(如图所示)，下列说法正确的是( )
A. 图示“白菜—甘蓝”植株不能结子
B. 植物体细胞杂交技术的目的是获得杂种细胞
C. 上述过程中包含着有丝分裂、细胞分化和减数分裂等过程
D. “白菜—甘蓝”杂种植株所具有的性状是基因选择性表达的结果
【答案】D
【解析】
“白菜-甘蓝”杂种植株具有2个亲本的遗传物质，含有同源染色体，能正常结籽，A错误；获得融合细胞后需利用植物的组织培养技术将细胞培育成植株，故植物体细胞杂交技术的最终目的是培育具有优良性状的植物新品种，B错误；上述过程中包含着有丝分裂、细胞分化，没有发生减数分裂，C错误； “白菜-甘蓝”杂种植株的形成是白菜-甘蓝”杂种细胞进行植物组织培养的结果，是基因选择性表达的结果，D正确。
17.下列关于细胞工程的叙述，错误的是（ ）
A. 利用植物体细胞杂交技术获得“萝卜—甘蓝”，克服不同生物远缘杂交不亲和的障碍
B. 切取一定大小的马铃薯茎尖进行组织培养，可获得脱毒苗
C. 常用的诱导动物细胞融合的因素有：聚乙二醇、灭活的病毒、电激等
D. 细胞培养应在含5%CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是刺激细胞呼吸
【答案】D
【解析】
【分析】
植物体细胞杂交技术可将不同植物的细胞融合，并培养成生物体，优点是可克服远缘杂交不亲和障碍；一定大小的茎尖病毒极少，甚至无病毒，进行组织培养，可获得无病毒幼苗；诱导植物细胞融合的方法有：物理法如离心、振动、电激，化学法如乙二醇（PEG），生物法如灭活的仙台病毒等；动物细胞培养的气体环境需要95%空气（细胞代谢必需的）和5%的CO2（维持培养液的pH）。
【详解】A. 萝卜和甘蓝不属于同一物种，它们之间存在生殖隔离，因此利用植物体细胞杂交技术培育的“萝卜一甘蓝”，能够克服不同生物远缘杂交不亲和的障碍，A正确；
B. 因为分生组织的病毒极少，甚至没有病毒，所以将马铃薯茎尖进行离体培养能获得脱毒植株，B正确；
C. 常用于诱导动物细胞融合手段有：化学法（聚乙二醇）、生物法（灭活的病毒）、物理法（如电激等），C正确；
D. 细胞培养应在含5%CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是维持培养液的pH，D错误。
18. 以下有关动物细胞工程的叙述，错误的是（ ）
A. 动物细胞培养中分散细胞的处理方法是酶解法
B. 核移植是动物克隆得以实现的技术中最基础的技术
C. 动物细胞融合中，常用灭活的病毒处理
D. 单克隆抗体最广泛的用途是做体外诊断试剂
【答案】B
【解析】
动物细胞培养中分散细胞的方法是用胰蛋白酶处理，A正确。动物细胞培养是动物克隆得以实现的技术中最基础的技术，B错误。动物细胞融合中，常用灭活的病毒处理，C正确。单克隆抗体最广泛的用途是做体外诊断试剂，D正确。
【考点定位】动物细胞工程
【名师点睛】学生易对动物细胞培养过程、动物细胞融合过程理解不清
1、动物细胞的培养过程
2、动物细胞融合
(1)原理：细胞膜的流动性。
(2)融合方法：聚乙二醇(PEG)、灭活的病毒、电激等。
(3)意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能，也为制造单克隆抗体开辟了新途径。
19.动物细胞培养是动物细胞工程的基础，其培养过程的顺序是（ ）
①胰蛋白酶处理动物组织，形成分散的悬浮细胞 ②传代培养③定期用胰蛋白酶处理培养细胞，配制成细胞悬浮液 ④原代培养
A. ①②③④ B. ①③④②
C. ①④②③ D. ①④③②
【答案】D
【解析】
【分析】
动物细胞工程常用的技术手段有：动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体等．其中动物细胞培养技术是其他动物工程技术的基础．
【详解】动物细胞培养技术是其他动物工程技术的基础．其培养过程为：取动物组织块--剪碎组织--用胰蛋白酶处理分散成单个细胞--制成细胞悬液--转入培养液中（原代培养）--放入二氧化碳培养箱培养--贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液--转入培养液（传代培养）--放入二氧化碳培养箱培养．由以上分析可知，动物细胞培养的顺序为①④③②。
故选D。
20.下列对动物细胞核移植技术的描述，不正确的是
A. 动物体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞
B. 体细胞核移植的过程中可通过显微操作去除卵母细胞中的核
C. 体细胞核移植过程中通常采用MⅡ期卵母细胞作为受体细胞
D. 通过体细胞核移植方法生产的克隆动物是对供体100%的复制
【答案】D
【解析】
试题分析：哺乳动物核移植包括胚胎细胞核移植和体细胞核移植，胚胎核移植容易进行，A正确；卵母细胞的核需出去，B正确；卵母细胞需培养到MⅡ中期，C正确；体细胞核移植中，细胞质基因是来自卵母细胞，而非供核细胞，D错误。
考点：本题主要考查核移植的相关知识，意在考查考生对所学知识的理解，把握知识间内在联系的能力。
21.一般来说，动物细胞体外培养需要满足以下条件（ ）
①无毒的环境 ②无菌的环境 ③固体培养基 ④温度与动物体温相近 ⑤需要O2，不需要CO2 ⑥CO2能调节培养液pH
A. ①②④⑤ B. ①②③④
C. ①③⑤⑥ D. ①②④⑥
【答案】D
【解析】
【分析】
动物细胞培养的条件：（1）无菌、无毒的环境：①消毒、灭菌；②添加一定量的抗生素；③定期更换培养液，以清除代谢废物；（2）营养物质：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质；（3）温度和pH；（4）气体环境：95%空气（细胞代谢必需的）和5%的CO2（维持培养液的pH）。
【详解】①动物细胞培养需要无毒环境，①正确；
②动物细胞培养需要无菌环境，②正确；
③用于动物细胞培养的合成培养基是液体培养基，需加入糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质，③错误；
④动物细胞培养需要适宜的温度和pH，其中温度要与动物体温相近，④正确；
⑤动物细胞培养需要一定的气体环境，95%空气和5%的CO2，⑤错误；
⑥5%的CO2能调节培养液的pH，⑥正确；故正确的有①②④⑥，D正确。
22.下列有关利用动物细胞工程生产单克隆抗体的叙述，错误的是( )
A. 单克隆抗体制备使用的主要生物材料是骨髓瘤细胞和浆细胞
B. 单克隆抗体制备的原理之一是一个浆细胞可以产生多种特异性抗体
C. 筛选能分泌所需抗体的杂交瘤细胞运用了抗原一抗体特异性反应原理
D. 单克隆抗体具有纯度高、产量大、灵敏度高等优点
【答案】B
【解析】
单克隆抗体制备使用的主要生物材料是骨髓瘤细胞（能在体外培养条件下无限增殖）和浆细胞（能产生抗体），A项正确；一个浆细胞只能产生一种特异性抗体，B项错误；抗体的本质是免疫球蛋白，抗体可以和抗原进行特异性结合，所以筛选抗体时可以运用抗原一抗体特异性反应原理，C项正确；单克隆抗体的特点是：特异性强、灵敏度高，可以大量制备，D项正确。
【点睛】
本题考查制备单克隆抗体的相关知识，解题的关键是需要考生识记单克隆抗体合成的原理、过程，掌握单克隆抗体的特点及其应用，能结合所学的知识准确判断各选项。
23.甲、乙是染色体数目相同的两种二倍体药用植物，甲含有效成分A，乙含有效成分B。某研究小组拟培育同时含有A和B的新型药用植物。下列错误的是（ ）
A. 为了培育该新型药用植物，取甲和乙的叶片，先用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁
B. 用化学诱导剂PEG诱导二者融合
C. 形成的融合细胞进一步培养形成愈伤组织，之后形成整个植株，这一过程中进行了植物组织培养
D. 上述杂种植株属于二倍体
【答案】D
【解析】
【分析】
根据题意，该新型药用植物可通过植物体细胞杂交技术获得，首先，用纤维素酶和果胶酶去掉植物的细胞壁，获得有活力的原生质体，再用PEG化学诱导剂（物理方法：离心、振动等）诱导二者的原生质体整合，然后采用植物组织培养技术获得杂种植株，植物组织培养的主要过程是：先脱分化形成愈伤组织，然后再分化形成植物体，利用的原理是植物细胞的全能性；植物体细胞杂交技术育种的优点是能克服远源杂交不亲和的障碍。
【详解】A. 细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，根据酶的专一性原理，利用纤维素酶和果胶酶可以除去细胞壁，获得具有活力的原生质体，A正确；
B. 诱导原生质体融合可用化学诱导剂PEG，B正确；
C. 形成的融合细胞经植物组织培养，脱分化形成愈伤组织，之后形成植株，C正确；
D. 甲、乙都是二倍体，体细胞杂交得到的是四倍体，D错误。
24.核移植的受体细胞是MII期卵母细胞,下列有关说法错误的是（ ）
A. MII期卵母细胞质中含有促进细胞核全能性表达的物质
B. MII期卵母细胞体积比较大,操作起来相对容易
C. 可以把供体细胞直接注入去核的卵母细胞中
D. MII期卵母细胞对克隆动物的遗传特性没有任何影响
【答案】D
【解析】
【分析】
细胞核移植过程中的几点注意：
①细胞核移植技术中注入去核卵母细胞中的不是供体细胞核，而是整个细胞，伴随着两细胞融合，体现细胞膜的结构特点：具有一定的流动性。
②受体细胞为减数第二次分裂中期的次级卵母细胞，此时在透明带内包含着第一极体，在去核的同时连同第一极体一并去掉。
③该技术形成重组细胞发育成一个新个体，体现了细胞核的全能性而非动物细胞的全能性。
④用卵母细胞做受体细胞的原因：a．卵母细胞体积大，便于操作；b．含有促使细胞核表达全能性的物质；c．营养物质丰富。
⑤克隆属于无性繁殖，产生新个体的性别、绝大多数性状与供核亲本一致。
【详解】通常用处于MII中期去核的卵母细胞作为受体细胞的原因除了它体积大、易操作、营养物质丰富外，还因为它的细胞质中含有促进细胞核全能性表达的物质，A正确；MII期卵母细胞体积比较大，操作起来相对容易，B正确；根据分析可知，可以把供体细胞直接注入去核的卵母细胞中，C正确；生物的性状是由细胞核和细胞质共同决定的，克隆动物的细胞核中遗传物质来自于供体核，细胞质中的遗传物质来自于MII期卵母细胞，D错误。
故选D。
25.下列关于细胞工程的叙述中，正确的是（ ）
A. 动物细胞培养可用于检测有毒物质，茎尖组织培养可获得脱毒苗
B. 动物细胞融合与植物体细胞杂交都能形成杂种个体
C. 动物细胞培养和植物组织培养中所用培养基的营养成分完全相同
D. 动物细胞培养中只进行过一次用胰蛋白酶进行处理
【答案】A
【解析】
【分析】
动物细胞培养技术的用途有：①生产有价值的生物制品，如病毒疫苗、干扰素等；②生产基因工程技术中所用的受体细胞；③可以用于检测有毒物质；④培养的各种细胞可直接用于生理、病理、药理等方面的研究等。分生组织的病毒极少，甚至没有病毒，所以将分生组织（如根尖、茎尖）进行离体培养能获得脱毒植株；动物细胞融合是指两个或两个以上的细胞融合成为一个细胞的过程，植物的体细胞杂交是将不同植物的细胞通过细胞融合技术形成杂种细胞，进而利用植物的组织培养，将杂种细胞培育成杂种植株；动物细胞培养利用的是液体培养基，植物组织培养利用的是固体培养基，且两者的成分也有区别，植物组织培养的培养基成分含营养物质（蔗糖）、植物激素等，动物细胞培养的培养基成分含营养物质（葡萄糖）、动物血清等；动物细胞培养过程：取动物组织块→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中（原代培养）→放入二氧化碳培养箱培养→贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液→转入培养液（传代培养）→放入二氧化碳培养箱培养；据此分析。
【详解】A. 动物细胞培养可用于检测有毒物质，通过观察细胞的畸变率来确定物质毒性的大小，茎尖分生组织的病毒极少，甚至没有病毒，培养可获得脱毒苗，A正确；
B. 动物细胞融合不能形成杂种个体，而植物体细胞杂交能形成杂种个体，但两者都能形成杂种细胞，B错误；
C. 动物细胞培养和植物组织培养所用培养基物理性质不同、成分也不同，前者含有葡萄糖和动物血清，后者含有蔗糖和植物激素，C错误；
D. 在动物细胞培养过程中，先后两次用胰蛋白酶处理，第一次是使动物组织中的细胞分散开，第二次是细胞贴壁生长后，用胰蛋白质酶将细胞从瓶壁上处理下来，D错误。
二、非选择题
26.根据基因工程的有关知识。回答下列问题。
（1）大肠杆菌质粒常作为基因工程目的基因的载体，另外，__________和动植物病毒也可作为载体，若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，而常用Ca2+处理大肠杆菌，其目的是___________________。
（2）利用转基因技术实现胰岛素的批量生产是目前治疗糖尿病的新思路，该过程中的关键操作环节是____________________________。
（3）对于胰岛素基因的获取，途径之一是通过提取_____________细胞中的胰岛素mRNA，经过反转录过程合成目的基因，之后通过_____________技术大量扩增。
【答案】 (1). λ噬菌体的衍生物 (2). 提高受体细胞的转化率（或使之成为感受态细胞，有利于其吸收重组DNA分子） (3). 基因表达载体的构建 (4). 胰岛B (5). PCR
【解析】
【分析】
基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成；（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等；（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样，将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法；（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测是否插入目的基因可用DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA可用分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质可用抗原-抗体杂交技术；个体水平上的鉴定有：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等；据此分析。
【详解】（1）基因工程常用的运载体除了大肠杆菌质粒、动植物病毒外，还有λ噬菌体的衍生物等；未处理的大肠杆菌吸收质粒(外源DNA）的能力极弱，因此常用Ca2+处理大肠杆菌，使之成为感受态细胞，有利于其吸收重组DNA分子。
（2）基因工程的核心步骤是构建基因表达载体。
（3） 胰岛素基因只能在胰岛B细胞中选择性表达，因此应该从胰岛B细胞提取胰岛素mRNA，经过逆转录形成胰岛素基因，再通过PCR技术大量扩增目的基因。
【点睛】本题考查基因工程的原理及技术、基因工程的应用，意在考查学生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识的网络结构的能力。
27.草鱼生长激素基因可促进鲤鱼生长，利用精子载体法（将构建好的表达载体与精子混合培养，使外源基因进入精子内），可将草鱼生长激素基因导入鲤鱼受精卵细胞，培育转基因鲤鱼。请回答。
（1）基因工程中，一个基因表达载体的组成，除了目的基因以外，还必须有____________、以及____________、____________。
（2）作为载体的精子取自____鱼。
（3）可通过检测鲤鱼体内激素增加量或____________来检测目的基因是否成功表达。
【答案】 (1). 启动子 (2). 终止子 (3). 标记基因 (4). 鲤 (5). 测量并统计个体的体长或体重的增加量
【解析】
【分析】
基因表达载体的组成包括：复制原点、启动子、终止子、标记基因和目的基因，根据题意，实验中目的基因是草鱼生长激素基因，据此分析。
【详解】（1）基因工程中，一个基因表达载体的组成，除了目的基因以外，还必须有启动子、以及终止子、标记基因。
（2）利用精子载体法培育转基因鲤鱼时，将构建好的表达载体与精子混合培养，使外源基因进入精子内，作为载体的精子取自鲤鱼，因为自然情况只有同种生物的精子和卵细胞才能相互识别。
（3）根据题干可知，本题的目的基因是草鱼生长激素基因，可促进鲤鱼生长，故可通过检测鲤鱼体内激素增加量或测量并统计个体的体长或体重的增加量来检测目的基因是否成功表达。
【点睛】本题考查基因工程的相关知识，要求学生识记基因工程的原理及操作步骤，掌握目的基因及其对应的性状，识记基因表达载体的构建原理和过程，能结合所学的知识准确答题。
28.美国化学家从红豆杉树皮中分离出高抗癌活性的紫杉醇，从此，国家重点保护珍稀植物——红豆杉遭受了掠夺式的砍伐。为拯救红豆杉，同时获得紫杉醇，科研小组设计了如下图所示的实验流程。请回答下列问题：
（1）选用茎尖分生组织进行组织培养可以获得脱毒苗，原因是茎尖分生组织细胞________；诱导茎尖分生组织形成愈伤组织的过程叫_______________。利用愈伤组织诱导形成的胚状体经人工薄膜包装后就可得到___________________。
（2）茎尖分生组织细胞具有全能性的原因是__________________________________。
（3）紫杉醇作为常见的细胞产物，抗癌效果显著，通常取自愈伤组织的__________（细胞器）。
【答案】 (1). 病毒极少，甚至无病毒 (2). 脱分化 (3). 人工种子 (4). 茎尖分生组织细胞含有该种生物的全部遗传信息 (5). 液泡
【解析】
【分析】
据图分析，红豆杉茎尖分生组织通过脱分化过程形成愈伤组织，一方面愈伤组织通过再分化形成胚状体，进而培养成红豆杉植株；另一方面，愈伤组织培养增殖产生更多的愈伤组织细胞，从愈伤组织细胞中可分离提取得到紫杉醇。
【详解】（1）茎尖分生组织含有的病毒极少，甚至无病毒，进行组织培养可以获得脱毒苗；分生组织经过脱分化过程可以形成愈伤组织；利用愈伤组织诱导形成的胚状体经人工薄膜包装后可得到人工种子。
（2）茎尖分生组织细胞含有该种生物的全部遗传信息，因此具有发育的全能性。。
（3）紫杉醇作为常见的细胞产物，抗癌效果显著，通常取自愈伤组织的液泡中。
【点睛】本题以图文结合的形式，考查学生对植物组织培养技术及其应用、植物体细胞杂交技术等相关知识的识记和理解能力，难度适中。
29.回答下列有关动物细胞培养的问题：
（1）在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长到细胞表面________时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的________。
（2）随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞会分裂缓慢甚至完全停止，但极少数细胞可以连续增殖，这些细胞已经发生突变正朝着等同于________细胞的方向发展。
（3）检查某种毒物是否能改变细胞染色体的数目，最好选用细胞有丝分裂________期的细胞用显微镜进行观察。
（4）在细胞培养过程中，通常在________条件下保存细胞。
【答案】 (1). 相互接触 (2). 接触抑制 (3). 癌 (4). 中 (5). 冷冻
【解析】
【分析】
在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长到细胞表面相互接触时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制，人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养；原代培养细胞传至10代左右就不容易传下去，细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞能存活传到40～50代，这部分细胞称为细胞株；细胞株传到50左右不能再继续传代，部分细胞遗传物质改变，具有癌变细胞的特点，可以在培养条件下无限制的传代下去，这部分细胞称为细胞系。
【详解】（1）在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长到细胞表面相互接触时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。
（2）随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞会分裂缓慢甚至完全停止，但极少数细胞可以连续增殖，这些细胞已经发生突变正朝着等同于癌细胞的方向发展。
（3）检查某种毒物是否能改变细胞染色体的数目，最好选用细胞有丝分裂中期的细胞用显微镜进行观察。
（4）在细胞培养过程中，通常在冷冻或液氮条件下保存细胞。
【点睛】本题综合考查动物细胞培养、细胞有丝分裂不同时期的特征，重点考查动物细胞培养的相关内容，要求学生识记动物细胞培养的过程、条件和应等知识，能灵活的运用所学的知识解答问题。
30.下图表示单克隆抗体的制备过程。请回答下列问题：
（1）过程①注射特定的抗原的目的是________________________________________。
（2）过程②诱导融合运用的原理是__________________，该过程中区别于植物原生质体融合的方法是用____________处理。
（3）过程③是杂交瘤细胞的培养，在体外培养时培养基中需要提供一定浓度的CO2，目的是___________________________。杂交瘤细胞需要经过两次筛选，第二次筛选的目的是________________________________________。
【答案】 (1). 使小鼠产生能分泌特定抗体的浆细胞（B淋巴细胞） (2). 细胞膜的流动性 (3). 灭活的病毒 (4). 维持培养液的pH (5). 获得能产生特定抗体的杂交瘤细胞
【解析】
【分析】
单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养，最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。
【详解】（1）过程①表示给小鼠注射特定抗原，其目的是使小鼠产生能分泌特定抗体的浆细胞（B淋巴细胞）。
（2）过程②诱导融合运用的原理是细胞膜的流动性，诱导动物细胞融合区别于植物原生质体融合的方法是用灭活的病毒处理。
（3）动物细胞培养时需要提供一定浓度的CO2，其目的是维持培养液的pH。杂交瘤细胞两次筛选的目的不同，第一次筛选的目的是获得杂交瘤细胞，第二次筛选的目的是获得能产生特定抗体的杂交瘤细胞。
【点睛】本题以图文结合的形式，综合考查学生对制备单克隆抗体等相关知识的识记和理解能力，解答本题需熟记并理解动物细胞培养、生产单克隆抗体的原理及过程等相关知识，并形成清晰的知识网络，在此基础上，结合问题情境解答。
一、选择题
1.下列关于基因工程的叙述中错误的是（ ）
A. 基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建
B. 将目的基因导入大肠杆菌细胞常用Ca2+处理法
C. 基因工程技术可以定向改造生物的性状，培育新的生物品种
D. 基因工程技术是唯一能打破远缘杂交不亲和障碍培育生物新品种的方法
【答案】D
【解析】
【分析】
基因工程又叫DNA重组技术，是指按照人们的意愿，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品；基因工程的基本操作步骤主要包括四步：①目的基因的获取，②基因表达载体的构建，③将目的基因导入受体细胞，④目的基因的检测与鉴定。
【详解】A. 基因工程的步骤为：获取目的基因、构建基因表达载体、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定，其中基因表达载体的构建是基因工程的核心步骤，A正确；
B. 以大肠杆菌为受体细胞时，先要用Ca2+处理细胞以使其处于感受态，以便目的基因的导入，B正确；
C. 基因工程可以按照人们的意愿，克服不同物种之间的生殖隔离，实现生物的定向变异，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品，培育新的生物品种，C正确；
D. 基因工程技术和细胞工程技术都能打破远缘杂交不亲和障碍，培育生物新品种，D错误。
2.下列哪项不是DNA重组技术的基本操作所用到的工具酶（ ）
A. 限制酶 B. E.coli DNA连接酶
C. T2 DNA连接酶 D. T4 DNA连接酶
【答案】C
【解析】
基因工程中常用的工具酶有DNA连接酶、限制性核酸内切酶，其中常用的DNA连接酶包括Ecoli DNA连接酶和T4 DNA连接酶，故选C。
3.下列关于几种酶的叙述，错误的是（ ）
A. E.coli DNA连接酶只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来
B. 限制酶将一个DNA分子片段切成两个片段需消耗两个水分子
C. 构建cDNA文库至少要使用两种酶
D. 限制酶能使DNA的氢键断裂
【答案】D
【解析】
【分析】
限制酶和DNA连接酶的作用部位均为磷酸二酯键，只是限制酶是切割磷酸二酯键，DNA连接酶是连接磷酸二酯键，在磷酸二酯键形成和断裂过程中，伴随了水的生成和消耗；cDNA 文库是指某生物某发育时期所转录的全部 mRNA 经反转录形成的 cDNA 片段与某种载体连接而形成的克隆的集合。
【详解】A. E.coli DNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来，A正确；
B. 限制性核酸内切酶将一个DNA分子片段切成两个片段，即断裂两个磷酸二酯键，因此需消耗两个水分子，B正确；
C. 构建cDNA文库时至少用到逆转录酶与DNA连接酶，C正确；
D. 限制酶能使DNA的磷酸二酯键断裂，D错误。
4.下列关于质粒的叙述，正确的是
A. 质粒是广泛存在于细菌细胞中的一种细胞器
B. 质粒是独立于细菌拟核之外，能自主复制的小型环状DNA分子
C. 细菌质粒作为运载体常用抗生素合成基因作为标记基因
D. 细菌质粒的复制过程一定是在受体细胞外独立进行的
【答案】B
【解析】
【分析】
1、常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒。（质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。）
2、作为运载体必须具备的条件：①要具有限制酶的切割位点； ②要有标记基因（如抗性基因），以便于重组后重组DNA的筛选；③能在宿主细胞中稳定存在并复制；④是安全的，对受体细胞无害，而且要易从供体细胞分离出来。
3、天然的质粒不能直接作为载体，基因工程中用到的质粒都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。
【详解】质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外并具有自我复制能力的小型双链环状DNA分子，不是细胞器，A错误，B正确；细菌质粒作为运载体常用抗生素抗性基因作为标记基因，C错误；细菌质粒的复制过程可在宿主细胞内独立进行，D错误。
故选B。
【点睛】本题考查基因工程的相关知识，重点考查质粒的相关内容，要求考生识记质粒的存在细胞、质粒的化学本质、质粒作为运载体的条件，能结合所学的知识准确判断各选项。
5. 关于cDNA文库和基因组文库的比较不正确的是（ ）
A. cDNA文库小
B. cDNA文库无启动子
C. cDNA文库有内含子
D. cDNA文库含有某种生物的部分基因
【答案】C
【解析】
【分析】
本题考查基因工程，考查对目的基因获取方法的理解。理解基因组文库和cDNA文库的获取方法是解答本题的关键。
【详解】基因组文库含有某种生物的全部基因，cDNA文库是从某时期的细胞中提取mRNA，利用反转录法获取的，只含有该生物的部分基因，因此cDNA文库比较小，且无启动子和内含子，A项、B项、D项正确，C项错误。
6.受体细胞不同，将目的基因导入受体细胞的方法也不相同，下列受体细胞与导入方法匹配错误的一项是（ ）
选项
受体细胞
导入方法
A
棉花细胞
花粉管通道法
B
大肠杆菌
农杆菌转化法
C
羊受精卵
显微注射技术
玉米细胞
基因枪法
A. A B. B C. C D. D
【答案】B
【解析】
【分析】
将目的基因导入受体细胞（转化）是基因工程的第三步，根据受体细胞种类不同，可分三种情况：1.受体细胞是植物细胞，有三种方法：农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法；2.受体细胞是动物细胞，常用显微注射法；3.受体细胞是微生物细胞，方法是用Ca2+处理。
【详解】A. 棉花细胞是植物细胞，可采用花粉管通道法，A正确；
B. Ca2+处理法能使大肠杆菌细胞的生理状态发生改变，使之成为易于吸收周围环境中DNA分子的感受态，所以将目的基因导入微生物细胞，常采用感受态细胞法，农杆菌转化法常用于植物，B错误；
C. 动物受精卵为受体细胞时，常用显微注射法，C正确；
D. 在自然条件下，农杆菌感染双子叶植物和裸子植物，因此农杆菌转化法是将目的基因导入植物细胞最常用的方法，对于某些单子叶植物细胞如玉米细胞，可以用基因枪法，D正确。
7.限制酶是一种核酸切割酶，可辨识并切割 DNA 分子上特定的核苷酸碱基序列。下图依次为四种限制酶BamHⅠ，EcoRⅠ，HindⅢ以及BglⅡ的辨识序列，箭头表示每一种限制酶的特定切割部位，其中哪两种限制酶所切割出来的 DNA 片段末端可以互补黏合（ ）
A. BamHI和EcoRI B. BamHI和HindⅢ
C. EcoRI和HindⅢ D. BamHI和BglII
【答案】D
【解析】
【分析】
限制性核酸内切酶能够识别双链DNA分子的特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端，两个黏性末端只要一样就可以进行碱基互补配对，再通过DNA连接酶连接起来。BamH I 切割后露出的黏性末端是-CTAG，EcoR I切割后露出的黏性末端是-TTAA，HindⅢ切割后露出的黏性末端是-TCGA，Bgl II切割后露出的黏性末端是-CTAG。
【详解】限制酶所识别的是特定的碱基序列，并在特定部位进行切割，只要切下的游离碱基互补即可互补黏合，由图示可知，BamH I和Bgl II切割产生的黏性末端相同，可通过DNA连接酶连接，D正确。
8.下列关于蛋白质工程实施的叙述，不正确的是（ ）
A. 可以根据人类的需要，设计并制造出自然界不存在的全新蛋白质
B. 可以根据功能的需要替代蛋白质中的某一个肽段或一个特定的结构区域
C. 可以通过基因工程间接地改造蛋白质中特定的一个或几个氨基酸
D. 可以通过人工化学合成的方法直接对蛋白质的氨基酸进行改造
【答案】D
【解析】
【分析】
蛋白质工程是以蛋白质的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行基因改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需要。蛋白质工程是在基因工程的基础上，延伸出来的第二代基因工程。
【详解】A. 蛋白质工程是在原有蛋白质的基础上，根据人们的需求对蛋白质分子作出的定向的改造，可以设计并制造出自然界不存在的全新蛋白质，A正确；
B. 蛋白质工程可以根据功能的需要替代蛋白质中的某一个肽段或一个特定的结构区域，B正确；
C. 蛋白质工程较小的改造是改造蛋白质分子中某些活性部位的1个或几个氨基酸残基通过定点诱变技术，以获得人类所需要的目的蛋白质，C正确；
D. 蛋白质工程不能通过人工化学合成的方法直接对蛋白质的氨基酸进行改造，D错误。
9.蛋白质工程的基本操作程序正确的是（ ）
①设计预期的蛋白质结构
②找到相对应的脱氧核苷酸的序列
③推测应有的氨基酸的序列
④蛋白质的预期功能
A. ①→②→③→④ B. ④→③→②→①
C. ④→①→③→② D. ②→③→①→④
【答案】C
【解析】
蛋白质工程的基本途径：从预期的蛋白质功能出发，设计预期的蛋白质结构，推测应有的氨基酸序列，找到相对应的脱氧核苷酸序列（基因），最后按照基因工程的一般步骤进行。因此，蛋白质工程的基本操作程序正确的是④→①→③→②。
故选：C。
【点睛】本考查蛋白质工程的相关知识，要求学生识记蛋白质工程的概念及基本途径，再选出正确的答案即可，属于考纲识记层次的考查。
10.北极比目鱼中有抗冻基因，其编码的抗冻蛋白具有11个氨基酸的重复序列，该序列重复次数越多，抗冻能力越强，下图是获取转基因抗冻番茄植株的过程示意图，有关叙述正确的是
A. 过程①获取的目的基因，与比目鱼染色体中的抗冻基因序列完全相同
B. 对抗冻基因进行基因修饰，能够得到抗冻性增强的抗冻蛋白
C. 过程②构成的重组质粒缺乏标记基因，需要转入农杆菌才能进行筛选
D. 应用DNA探针技术，可以检测转基因抗冻番茄植株中目的基因的存在及其完全表达
【答案】B
【解析】
【分析】
本题以获取转基因抗冻番茄植株为素材，结合流程图，考查基因工程的相关知识，意在考查学生的识图能力和理解所学知识要点的能力；能运用所学知识与观点，通过比较、分析与综合等方法对某些生物学问题进行解释、推理，做出合理的判断或得出正确的结论。
【详解】图中①是通过逆转录法获取目的基因的过程，该方法获取的目的基因中无内含子等结构，故与比目鱼染色体中的抗冻基因序列不完全相同，A错误；由题干信息“编码的抗冻蛋白具有11个氨基酸的重复序列，该序列重复次数越多，抗冻能力越强”可知，对抗冻基因进行基因修饰，得到抗冻性增强的抗冻蛋白，B正确；导入农杆菌是为了扩增和更易导入番茄细胞，C错误；DNA探针技术可检测目的基因的存在，但不能检测其是否完全表达，后者利用抗原-抗体杂交技术检测目的基因是否表达出来， D错误。
【点睛】目的基因的检测和表达
（1）首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因：DNA分子杂交技术；
（2）其次还要检测目的基因是否转录出mRNA，方法是用标记的目的基因作探针与mRNA杂交；
（3）最后检测目的基因是否翻译成蛋白质，方法是从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原--抗体杂交；
（4）有时还需进行个体生物学水平的鉴定。如转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。
11. 下列有关愈伤组织的叙述错误的是
A. 是植物细胞脱分化后形成的
B. 愈伤组织的代谢类型是异养需氧型
C. 每个细胞仍然具有全能性
D. 由于脱分化导致遗传物质发生了改变
【答案】D
【解析】
愈伤组织是植物细胞脱分化后形成的，代谢类型是异养需氧型，每个细胞仍然具有全能性，细胞分裂方式是有丝分裂，导致遗传物质没有改变；选D。
12.下图是通过植物细胞工程技术获得紫杉醇的途径，下列叙述不正确的是（ ）
A. 该途径依据的原理是植物细胞具有全能性
B. 过程①需控制好培养基中植物激素的比例
C. 经过程①细胞的形态和结构发生了变化
D. 过程③需使用液体培养基，有利于细胞增殖
【答案】A
【解析】
【分析】
图示是通过植物细胞工程技术获得紫杉醇的途径，①表示脱分化过程，②表示将愈伤组织分散成单个细胞的过程，③表示细胞增殖过程
【详解】该途径获得细胞群和细胞产物（紫杉醇），没有体现细胞的全能性，A错误；过程①表示脱分化，需在培养基中加入适当比例的生长素和细胞分裂素，B正确；外植体在植物激素的刺激下发生脱分化形成由相对没有分化的薄壁细胞组成的愈伤组织，因此经过过程①，细胞的形态和结构发生了变化，C正确；过程③表示细胞大量增殖的过程，需使用液体培养基，D正确。故选A。
【点睛】识记植物组织培养的原理、过程、条件及产物等，准确判断图中各序号代表的过程是解答本题的关键。
13.下列有关植物细胞工程应用的叙述，错误的是
A. 用人工薄膜将愈伤组织包裹可形成人工种子
B. 在紫草素的细胞产物工厂化生产的过程中使用的是液体培养基
C. 对愈伤组织进行诱变处理，从分化的植株中可筛选出新品种
D. 利用植物组织培养技术培育的脱毒苗具有不含或很少含病毒的特点
【答案】A
【解析】
【分析】
人工种子是以植物组织培养获得的胚状体、不定芽、顶芽和腋芽等为材料，经过人工薄膜包装得到的种子。细胞产物的工业化生产使用的是液体培养基。对植物的愈伤组织进行化学或物理的诱变处理，促使其发生突变，再通过诱导分化形成植株，从这些植株中筛选出高抗、高产、优质的突变体，从而培育成新品种。进行组织培养时，一般选取植物茎尖作材料，其依据是茎尖不含病毒（或含病毒极少）。
【详解】A、用人工薄膜将胚状体包装后可制成人工种子，错误；
B、细胞产物的工厂化生产是从人工培养的愈伤组织细胞中提取某种成分，如紫草素等，使用的液体培养基，正确；
C、在育种中，可以对植物的愈伤组织进行化学或物理的诱变处理，促使其发生突变，再通过诱导分化形成植株。从这些植株中筛选出高抗、高产、优质的突变体，从而培育成新品种，正确；
D、利用组织培养技术培育脱毒草莓幼苗的原理是细胞的全能性，培育时，一般选取植物茎尖作材料，其依据是茎尖不含病毒（或含病毒极少），正确。
故选Ａ。
【点睛】植物细胞工程育种的原理是植物细胞的全能性；方法：去细胞壁→细胞融合→组织培养；优点：克服远缘杂交的不亲和性，有目的地培育优良品种；缺点：技术复杂，难度大。
14. 人工种子是指植物离体培养中产生的胚状体，包裹在含有养分和具有保护功能的物质中，并在适宜条件下能够萌发成幼苗。下列与人工种子形成过程无关的是
A. 细胞的脱分化和再分化 B. 细胞全能性
C. 细胞有丝分裂 D. 细胞减数分裂
【答案】D
【解析】
【分析】
人工种子：通过组织培养技术，可把植物组织的细胞培养成在形态及生理上与天然种子胚相似的胚状体，科学家把胚状体包埋在人工种皮内形成球状结构，使其具备种子机能，所以，人工种子是一种人工制造的代替天然种子的颗粒体，可以直接播种于田间。
特点：周期短，易储存和运输，完全保持优良品种的遗传特性，不受气候和地域的限制。
【详解】植物组织培养的过程是外植体脱分化→愈伤组织再分化→胚状体→试管苗，人工种子的形成需要脱分化和再分化，A项不符合题意。植物组织培养依据的原理是细胞的全能性，B项不符合题意。
C、人工种子形成过程离不开细胞的有丝分裂和细胞分化，C项不符合题意。减数分裂的结果是产生精子或卵细胞等有性生殖细胞，用于繁衍后代，人工种子形成过程不存在减数分裂，D项符合题意，故选D。
【点睛】本题考查植物组织培养的相关知识，解题的关键是要识记植物组织培养技术的原理、过程及条件，掌握植物组织培养技术的相关应用，能结合所学的知识准确判断各选项。
15.下图表示利用棉花叶肉细胞原生质体培养进行遗传改良的过程，据图分析错误的是（ ）
A. ①过程需在适宜条件下用纤维素酶和果胶酶的混合物处理
B. ②过程能定向诱导原生质体产生优良性状的突变
C. ③过程中叶肉细胞失去了其特有的结构和功能
D. ④过程需用适宜配比的生长素和细胞分裂素处理
【答案】B
【解析】
【分析】由图示信息可知：该题综合考查学生对植物体细胞杂交技术、植物组织培养技术及其突变体的利用的相关知识的识记和理解能力。
【详解】①过程是去除细胞壁获得原生质体，需在适宜条件下用纤维素酶和果胶酶处理，A正确；②过程是对原生质体进行诱变处理，促使其发生基因突变，由此产生的变异是不定向的，需要经过筛选才可能获得优良性状的突变，B错误；③过程是脱分化，就是让已经分化的细胞，经过诱导后，失去其特有的结构和功能而转变成未分化的细胞的过程，C正确；④过程是再分化，需用适宜浓度的生长素和细胞分裂素处理，D正确。
【点睛】解题的关键是梳理植物体细胞杂交技术和植物组织培养技术的过程，明辨图中数字所示的生理过程，并与突变体的利用建立联系。
16.利用植物体细胞杂交技术将白菜和甘蓝(均为二倍体)培育成“白菜—甘蓝”杂种植株(如图所示)，下列说法正确的是( )
A. 图示“白菜—甘蓝”植株不能结子
B. 植物体细胞杂交技术的目的是获得杂种细胞
C. 上述过程中包含着有丝分裂、细胞分化和减数分裂等过程
D. “白菜—甘蓝”杂种植株所具有的性状是基因选择性表达的结果
【答案】D
【解析】
“白菜-甘蓝”杂种植株具有2个亲本的遗传物质，含有同源染色体，能正常结籽，A错误；获得融合细胞后需利用植物的组织培养技术将细胞培育成植株，故植物体细胞杂交技术的最终目的是培育具有优良性状的植物新品种，B错误；上述过程中包含着有丝分裂、细胞分化，没有发生减数分裂，C错误； “白菜-甘蓝”杂种植株的形成是白菜-甘蓝”杂种细胞进行植物组织培养的结果，是基因选择性表达的结果，D正确。
17.下列关于细胞工程的叙述，错误的是（ ）
A. 利用植物体细胞杂交技术获得“萝卜—甘蓝”，克服不同生物远缘杂交不亲和的障碍
B. 切取一定大小的马铃薯茎尖进行组织培养，可获得脱毒苗
C. 常用的诱导动物细胞融合的因素有：聚乙二醇、灭活的病毒、电激等
D. 细胞培养应在含5%CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是刺激细胞呼吸
【答案】D
【解析】
【分析】
植物体细胞杂交技术可将不同植物的细胞融合，并培养成生物体，优点是可克服远缘杂交不亲和障碍；一定大小的茎尖病毒极少，甚至无病毒，进行组织培养，可获得无病毒幼苗；诱导植物细胞融合的方法有：物理法如离心、振动、电激，化学法如乙二醇（PEG），生物法如灭活的仙台病毒等；动物细胞培养的气体环境需要95%空气（细胞代谢必需的）和5%的CO2（维持培养液的pH）。
【详解】A. 萝卜和甘蓝不属于同一物种，它们之间存在生殖隔离，因此利用植物体细胞杂交技术培育的“萝卜一甘蓝”，能够克服不同生物远缘杂交不亲和的障碍，A正确；
B. 因为分生组织的病毒极少，甚至没有病毒，所以将马铃薯茎尖进行离体培养能获得脱毒植株，B正确；
C. 常用于诱导动物细胞融合手段有：化学法（聚乙二醇）、生物法（灭活的病毒）、物理法（如电激等），C正确；
D. 细胞培养应在含5%CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是维持培养液的pH，D错误。
18. 以下有关动物细胞工程的叙述，错误的是（ ）
A. 动物细胞培养中分散细胞的处理方法是酶解法
B. 核移植是动物克隆得以实现的技术中最基础的技术
C. 动物细胞融合中，常用灭活的病毒处理
D. 单克隆抗体最广泛的用途是做体外诊断试剂
【答案】B
【解析】
动物细胞培养中分散细胞的方法是用胰蛋白酶处理，A正确。动物细胞培养是动物克隆得以实现的技术中最基础的技术，B错误。动物细胞融合中，常用灭活的病毒处理，C正确。单克隆抗体最广泛的用途是做体外诊断试剂，D正确。
【考点定位】动物细胞工程
【名师点睛】学生易对动物细胞培养过程、动物细胞融合过程理解不清
1、动物细胞的培养过程
2、动物细胞融合
(1)原理：细胞膜的流动性。
(2)融合方法：聚乙二醇(PEG)、灭活的病毒、电激等。
(3)意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能，也为制造单克隆抗体开辟了新途径。
19.动物细胞培养是动物细胞工程的基础，其培养过程的顺序是（ ）
①胰蛋白酶处理动物组织，形成分散的悬浮细胞 ②传代培养③定期用胰蛋白酶处理培养细胞，配制成细胞悬浮液 ④原代培养
A. ①②③④ B. ①③④②
C. ①④②③ D. ①④③②
【答案】D
【解析】
【分析】
动物细胞工程常用的技术手段有：动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体等．其中动物细胞培养技术是其他动物工程技术的基础．
【详解】动物细胞培养技术是其他动物工程技术的基础．其培养过程为：取动物组织块--剪碎组织--用胰蛋白酶处理分散成单个细胞--制成细胞悬液--转入培养液中（原代培养）--放入二氧化碳培养箱培养--贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液--转入培养液（传代培养）--放入二氧化碳培养箱培养．由以上分析可知，动物细胞培养的顺序为①④③②。
故选D。
20.下列对动物细胞核移植技术的描述，不正确的是
A. 动物体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞
B. 体细胞核移植的过程中可通过显微操作去除卵母细胞中的核
C. 体细胞核移植过程中通常采用MⅡ期卵母细胞作为受体细胞
D. 通过体细胞核移植方法生产的克隆动物是对供体100%的复制
【答案】D
【解析】
试题分析：哺乳动物核移植包括胚胎细胞核移植和体细胞核移植，胚胎核移植容易进行，A正确；卵母细胞的核需出去，B正确；卵母细胞需培养到MⅡ中期，C正确；体细胞核移植中，细胞质基因是来自卵母细胞，而非供核细胞，D错误。
考点：本题主要考查核移植的相关知识，意在考查考生对所学知识的理解，把握知识间内在联系的能力。
21.一般来说，动物细胞体外培养需要满足以下条件（ ）
①无毒的环境 ②无菌的环境 ③固体培养基 ④温度与动物体温相近 ⑤需要O2，不需要CO2 ⑥CO2能调节培养液pH
A. ①②④⑤ B. ①②③④
C. ①③⑤⑥ D. ①②④⑥
【答案】D
【解析】
【分析】
动物细胞培养的条件：（1）无菌、无毒的环境：①消毒、灭菌；②添加一定量的抗生素；③定期更换培养液，以清除代谢废物；（2）营养物质：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质；（3）温度和pH；（4）气体环境：95%空气（细胞代谢必需的）和5%的CO2（维持培养液的pH）。
【详解】①动物细胞培养需要无毒环境，①正确；
②动物细胞培养需要无菌环境，②正确；
③用于动物细胞培养的合成培养基是液体培养基，需加入糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质，③错误；
④动物细胞培养需要适宜的温度和pH，其中温度要与动物体温相近，④正确；
⑤动物细胞培养需要一定的气体环境，95%空气和5%的CO2，⑤错误；
⑥5%的CO2能调节培养液的pH，⑥正确；故正确的有①②④⑥，D正确。
22.下列有关利用动物细胞工程生产单克隆抗体的叙述，错误的是( )
A. 单克隆抗体制备使用的主要生物材料是骨髓瘤细胞和浆细胞
B. 单克隆抗体制备的原理之一是一个浆细胞可以产生多种特异性抗体
C. 筛选能分泌所需抗体的杂交瘤细胞运用了抗原一抗体特异性反应原理
D. 单克隆抗体具有纯度高、产量大、灵敏度高等优点
【答案】B
【解析】
单克隆抗体制备使用的主要生物材料是骨髓瘤细胞（能在体外培养条件下无限增殖）和浆细胞（能产生抗体），A项正确；一个浆细胞只能产生一种特异性抗体，B项错误；抗体的本质是免疫球蛋白，抗体可以和抗原进行特异性结合，所以筛选抗体时可以运用抗原一抗体特异性反应原理，C项正确；单克隆抗体的特点是：特异性强、灵敏度高，可以大量制备，D项正确。
【点睛】
本题考查制备单克隆抗体的相关知识，解题的关键是需要考生识记单克隆抗体合成的原理、过程，掌握单克隆抗体的特点及其应用，能结合所学的知识准确判断各选项。
23.甲、乙是染色体数目相同的两种二倍体药用植物，甲含有效成分A，乙含有效成分B。某研究小组拟培育同时含有A和B的新型药用植物。下列错误的是（ ）
A. 为了培育该新型药用植物，取甲和乙的叶片，先用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁
B. 用化学诱导剂PEG诱导二者融合
C. 形成的融合细胞进一步培养形成愈伤组织，之后形成整个植株，这一过程中进行了植物组织培养
D. 上述杂种植株属于二倍体
【答案】D
【解析】
【分析】
根据题意，该新型药用植物可通过植物体细胞杂交技术获得，首先，用纤维素酶和果胶酶去掉植物的细胞壁，获得有活力的原生质体，再用PEG化学诱导剂（物理方法：离心、振动等）诱导二者的原生质体整合，然后采用植物组织培养技术获得杂种植株，植物组织培养的主要过程是：先脱分化形成愈伤组织，然后再分化形成植物体，利用的原理是植物细胞的全能性；植物体细胞杂交技术育种的优点是能克服远源杂交不亲和的障碍。
【详解】A. 细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，根据酶的专一性原理，利用纤维素酶和果胶酶可以除去细胞壁，获得具有活力的原生质体，A正确；
B. 诱导原生质体融合可用化学诱导剂PEG，B正确；
C. 形成的融合细胞经植物组织培养，脱分化形成愈伤组织，之后形成植株，C正确；
D. 甲、乙都是二倍体，体细胞杂交得到的是四倍体，D错误。
24.核移植的受体细胞是MII期卵母细胞,下列有关说法错误的是（ ）
A. MII期卵母细胞质中含有促进细胞核全能性表达的物质
B. MII期卵母细胞体积比较大,操作起来相对容易
C. 可以把供体细胞直接注入去核的卵母细胞中
D. MII期卵母细胞对克隆动物的遗传特性没有任何影响
【答案】D
【解析】
【分析】
细胞核移植过程中的几点注意：
①细胞核移植技术中注入去核卵母细胞中的不是供体细胞核，而是整个细胞，伴随着两细胞融合，体现细胞膜的结构特点：具有一定的流动性。
②受体细胞为减数第二次分裂中期的次级卵母细胞，此时在透明带内包含着第一极体，在去核的同时连同第一极体一并去掉。
③该技术形成重组细胞发育成一个新个体，体现了细胞核的全能性而非动物细胞的全能性。
④用卵母细胞做受体细胞的原因：a．卵母细胞体积大，便于操作；b．含有促使细胞核表达全能性的物质；c．营养物质丰富。
⑤克隆属于无性繁殖，产生新个体的性别、绝大多数性状与供核亲本一致。
【详解】通常用处于MII中期去核的卵母细胞作为受体细胞的原因除了它体积大、易操作、营养物质丰富外，还因为它的细胞质中含有促进细胞核全能性表达的物质，A正确；MII期卵母细胞体积比较大，操作起来相对容易，B正确；根据分析可知，可以把供体细胞直接注入去核的卵母细胞中，C正确；生物的性状是由细胞核和细胞质共同决定的，克隆动物的细胞核中遗传物质来自于供体核，细胞质中的遗传物质来自于MII期卵母细胞，D错误。
故选D。
25.下列关于细胞工程的叙述中，正确的是（ ）
A. 动物细胞培养可用于检测有毒物质，茎尖组织培养可获得脱毒苗
B. 动物细胞融合与植物体细胞杂交都能形成杂种个体
C. 动物细胞培养和植物组织培养中所用培养基的营养成分完全相同
D. 动物细胞培养中只进行过一次用胰蛋白酶进行处理
【答案】A
【解析】
【分析】
动物细胞培养技术的用途有：①生产有价值的生物制品，如病毒疫苗、干扰素等；②生产基因工程技术中所用的受体细胞；③可以用于检测有毒物质；④培养的各种细胞可直接用于生理、病理、药理等方面的研究等。分生组织的病毒极少，甚至没有病毒，所以将分生组织（如根尖、茎尖）进行离体培养能获得脱毒植株；动物细胞融合是指两个或两个以上的细胞融合成为一个细胞的过程，植物的体细胞杂交是将不同植物的细胞通过细胞融合技术形成杂种细胞，进而利用植物的组织培养，将杂种细胞培育成杂种植株；动物细胞培养利用的是液体培养基，植物组织培养利用的是固体培养基，且两者的成分也有区别，植物组织培养的培养基成分含营养物质（蔗糖）、植物激素等，动物细胞培养的培养基成分含营养物质（葡萄糖）、动物血清等；动物细胞培养过程：取动物组织块→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中（原代培养）→放入二氧化碳培养箱培养→贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液→转入培养液（传代培养）→放入二氧化碳培养箱培养；据此分析。
【详解】A. 动物细胞培养可用于检测有毒物质，通过观察细胞的畸变率来确定物质毒性的大小，茎尖分生组织的病毒极少，甚至没有病毒，培养可获得脱毒苗，A正确；
B. 动物细胞融合不能形成杂种个体，而植物体细胞杂交能形成杂种个体，但两者都能形成杂种细胞，B错误；
C. 动物细胞培养和植物组织培养所用培养基物理性质不同、成分也不同，前者含有葡萄糖和动物血清，后者含有蔗糖和植物激素，C错误；
D. 在动物细胞培养过程中，先后两次用胰蛋白酶处理，第一次是使动物组织中的细胞分散开，第二次是细胞贴壁生长后，用胰蛋白质酶将细胞从瓶壁上处理下来，D错误。
二、非选择题
26.根据基因工程的有关知识。回答下列问题。
（1）大肠杆菌质粒常作为基因工程目的基因的载体，另外，__________和动植物病毒也可作为载体，若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，而常用Ca2+处理大肠杆菌，其目的是___________________。
（2）利用转基因技术实现胰岛素的批量生产是目前治疗糖尿病的新思路，该过程中的关键操作环节是____________________________。
（3）对于胰岛素基因的获取，途径之一是通过提取_____________细胞中的胰岛素mRNA，经过反转录过程合成目的基因，之后通过_____________技术大量扩增。
【答案】 (1). λ噬菌体的衍生物 (2). 提高受体细胞的转化率（或使之成为感受态细胞，有利于其吸收重组DNA分子） (3). 基因表达载体的构建 (4). 胰岛B (5). PCR
【解析】
【分析】
基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成；（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等；（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样，将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法；（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测是否插入目的基因可用DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA可用分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质可用抗原-抗体杂交技术；个体水平上的鉴定有：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等；据此分析。
【详解】（1）基因工程常用的运载体除了大肠杆菌质粒、动植物病毒外，还有λ噬菌体的衍生物等；未处理的大肠杆菌吸收质粒(外源DNA）的能力极弱，因此常用Ca2+处理大肠杆菌，使之成为感受态细胞，有利于其吸收重组DNA分子。
（2）基因工程的核心步骤是构建基因表达载体。
（3） 胰岛素基因只能在胰岛B细胞中选择性表达，因此应该从胰岛B细胞提取胰岛素mRNA，经过逆转录形成胰岛素基因，再通过PCR技术大量扩增目的基因。
【点睛】本题考查基因工程的原理及技术、基因工程的应用，意在考查学生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识的网络结构的能力。
27.草鱼生长激素基因可促进鲤鱼生长，利用精子载体法（将构建好的表达载体与精子混合培养，使外源基因进入精子内），可将草鱼生长激素基因导入鲤鱼受精卵细胞，培育转基因鲤鱼。请回答。
（1）基因工程中，一个基因表达载体的组成，除了目的基因以外，还必须有____________、以及____________、____________。
（2）作为载体的精子取自____鱼。
（3）可通过检测鲤鱼体内激素增加量或____________来检测目的基因是否成功表达。
【答案】 (1). 启动子 (2). 终止子 (3). 标记基因 (4). 鲤 (5). 测量并统计个体的体长或体重的增加量
【解析】
【分析】
基因表达载体的组成包括：复制原点、启动子、终止子、标记基因和目的基因，根据题意，实验中目的基因是草鱼生长激素基因，据此分析。
【详解】（1）基因工程中，一个基因表达载体的组成，除了目的基因以外，还必须有启动子、以及终止子、标记基因。
（2）利用精子载体法培育转基因鲤鱼时，将构建好的表达载体与精子混合培养，使外源基因进入精子内，作为载体的精子取自鲤鱼，因为自然情况只有同种生物的精子和卵细胞才能相互识别。
（3）根据题干可知，本题的目的基因是草鱼生长激素基因，可促进鲤鱼生长，故可通过检测鲤鱼体内激素增加量或测量并统计个体的体长或体重的增加量来检测目的基因是否成功表达。
【点睛】本题考查基因工程的相关知识，要求学生识记基因工程的原理及操作步骤，掌握目的基因及其对应的性状，识记基因表达载体的构建原理和过程，能结合所学的知识准确答题。
28.美国化学家从红豆杉树皮中分离出高抗癌活性的紫杉醇，从此，国家重点保护珍稀植物——红豆杉遭受了掠夺式的砍伐。为拯救红豆杉，同时获得紫杉醇，科研小组设计了如下图所示的实验流程。请回答下列问题：
（1）选用茎尖分生组织进行组织培养可以获得脱毒苗，原因是茎尖分生组织细胞________；诱导茎尖分生组织形成愈伤组织的过程叫_______________。利用愈伤组织诱导形成的胚状体经人工薄膜包装后就可得到___________________。
（2）茎尖分生组织细胞具有全能性的原因是__________________________________。
（3）紫杉醇作为常见的细胞产物，抗癌效果显著，通常取自愈伤组织的__________（细胞器）。
【答案】 (1). 病毒极少，甚至无病毒 (2). 脱分化 (3). 人工种子 (4). 茎尖分生组织细胞含有该种生物的全部遗传信息 (5). 液泡
【解析】
【分析】
据图分析，红豆杉茎尖分生组织通过脱分化过程形成愈伤组织，一方面愈伤组织通过再分化形成胚状体，进而培养成红豆杉植株；另一方面，愈伤组织培养增殖产生更多的愈伤组织细胞，从愈伤组织细胞中可分离提取得到紫杉醇。
【详解】（1）茎尖分生组织含有的病毒极少，甚至无病毒，进行组织培养可以获得脱毒苗；分生组织经过脱分化过程可以形成愈伤组织；利用愈伤组织诱导形成的胚状体经人工薄膜包装后可得到人工种子。
（2）茎尖分生组织细胞含有该种生物的全部遗传信息，因此具有发育的全能性。。
（3）紫杉醇作为常见的细胞产物，抗癌效果显著，通常取自愈伤组织的液泡中。
【点睛】本题以图文结合的形式，考查学生对植物组织培养技术及其应用、植物体细胞杂交技术等相关知识的识记和理解能力，难度适中。
29.回答下列有关动物细胞培养的问题：
（1）在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长到细胞表面________时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的________。
（2）随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞会分裂缓慢甚至完全停止，但极少数细胞可以连续增殖，这些细胞已经发生突变正朝着等同于________细胞的方向发展。
（3）检查某种毒物是否能改变细胞染色体的数目，最好选用细胞有丝分裂________期的细胞用显微镜进行观察。
（4）在细胞培养过程中，通常在________条件下保存细胞。
【答案】 (1). 相互接触 (2). 接触抑制 (3). 癌 (4). 中 (5). 冷冻
【解析】
【分析】
在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长到细胞表面相互接触时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制，人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养；原代培养细胞传至10代左右就不容易传下去，细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞能存活传到40～50代，这部分细胞称为细胞株；细胞株传到50左右不能再继续传代，部分细胞遗传物质改变，具有癌变细胞的特点，可以在培养条件下无限制的传代下去，这部分细胞称为细胞系。
【详解】（1）在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长到细胞表面相互接触时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。
（2）随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞会分裂缓慢甚至完全停止，但极少数细胞可以连续增殖，这些细胞已经发生突变正朝着等同于癌细胞的方向发展。
（3）检查某种毒物是否能改变细胞染色体的数目，最好选用细胞有丝分裂中期的细胞用显微镜进行观察。
（4）在细胞培养过程中，通常在冷冻或液氮条件下保存细胞。
【点睛】本题综合考查动物细胞培养、细胞有丝分裂不同时期的特征，重点考查动物细胞培养的相关内容，要求学生识记动物细胞培养的过程、条件和应等知识，能灵活的运用所学的知识解答问题。
30.下图表示单克隆抗体的制备过程。请回答下列问题：
（1）过程①注射特定的抗原的目的是________________________________________。
（2）过程②诱导融合运用的原理是__________________，该过程中区别于植物原生质体融合的方法是用____________处理。
（3）过程③是杂交瘤细胞的培养，在体外培养时培养基中需要提供一定浓度的CO2，目的是___________________________。杂交瘤细胞需要经过两次筛选，第二次筛选的目的是________________________________________。
【答案】 (1). 使小鼠产生能分泌特定抗体的浆细胞（B淋巴细胞） (2). 细胞膜的流动性 (3). 灭活的病毒 (4). 维持培养液的pH (5). 获得能产生特定抗体的杂交瘤细胞
【解析】
【分析】
单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养，最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。
【详解】（1）过程①表示给小鼠注射特定抗原，其目的是使小鼠产生能分泌特定抗体的浆细胞（B淋巴细胞）。
（2）过程②诱导融合运用的原理是细胞膜的流动性，诱导动物细胞融合区别于植物原生质体融合的方法是用灭活的病毒处理。
（3）动物细胞培养时需要提供一定浓度的CO2，其目的是维持培养液的pH。杂交瘤细胞两次筛选的目的不同，第一次筛选的目的是获得杂交瘤细胞，第二次筛选的目的是获得能产生特定抗体的杂交瘤细胞。
【点睛】本题以图文结合的形式，综合考查学生对制备单克隆抗体等相关知识的识记和理解能力，解答本题需熟记并理解动物细胞培养、生产单克隆抗体的原理及过程等相关知识，并形成清晰的知识网络，在此基础上，结合问题情境解答。
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