2025-2026学年青海省黄南藏族自治州高三一诊考试生物试卷含解析

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1． 答题前，考生先将自己的姓名、准考证号填写清楚，将条形码准确粘贴在考生信息条形码粘贴区。
2．选择题必须使用2B铅笔填涂；非选择题必须使用0．5毫米黑色字迹的签字笔书写，字体工整、笔迹清楚。
3．请按照题号顺序在各题目的答题区域内作答，超出答题区域书写的答案无效；在草稿纸、试题卷上答题无效。
4．保持卡面清洁，不要折叠，不要弄破、弄皱，不准使用涂改液、修正带、刮纸刀。
一、选择题(本大题共7小题,每小题6分,共42分。)
1．下列关于内环境与稳态的叙述，正确的是（ ）
A．血浆蛋白含量的变化不会影响组织液的渗透压
B．内环境的变化会引起机体自动调节器官、系统的活动
C．细胞的生命活动依赖于内环境，但细胞不参与内环境的形成和维持
D．血糖浓度、尿液浓度、细胞外液渗透压的相对稳定都属于内环境稳态
2．欧洲兔曾被无意携入澳洲大草原，对袋鼠等本地生物造成极大威胁，人类采用过引入狐狸和黏液瘤病毒等手段进行防治，结果如图所示。下列推断不正确的是
A．a年之前欧洲兔种群数量迅速增长的原因是缺少天敌
B．狐狸防治兔子效果不好的原因是狐狸可能喜欢捕食袋鼠
C．粘液瘤病毒使欧洲兔致命，对袋鼠影响不大的原因是病毒的专性寄生
D．病毒诱导欧洲兔发生抗性变异使c年后其种群数量回升
3．人群中A遗传病和B遗传病均为单基因遗传病（已知A、B遗传病致病基因均不在Y染色体上）。一对表现型正常的夫妇生了一个只患A遗传病的女儿和一个只患B遗传病的儿子，已知此家庭中丈夫体内不含B遗传病致病基因。在不考虑突变的情况下，下列叙述错误的是（ ）
A．控制A遗传病和B遗传病的基因遵循自由组合定律
B．A遗传病在人群中男性和女性患病的概率基本相等
C．该对夫妇再生育一个儿子既患A遗传病又患B遗传病的概率为1/16
D．患B遗传病儿子的致病基因来自其外祖母或外祖父
4．下图为某核苷酸链的局部结构图，下列叙述中正确的是
A．图中a或b能构成一个完整的核苷酸
B．各核苷酸之间是通过化学键①连接起来的
C．该链可能是组成T2噬菌体遗传物质的一部分
D．该核苷酸链中五碳糖上连接的磷酸可以是1个或2个
5．如图表示神经调节和体液调节关系的部分示意图。下列分析的相关叙述，错误的是（ ）
A．神经调节与激素调节都存在分级调节现象
B．生长激素和甲状腺激素均可促进生长发育
C．激素X的受体基因可在下丘脑细胞中表达
D．促甲状腺激素释放激素与甲状腺激素可相互拮抗
6．下图为反射弧局部结构示意图，下列相关叙述错误的是（ ）
A．结构①为过程③及其释放的递质移动到④供能
B．神经递质存在于②内，可避免被细胞内其他酶系破坏
C．结构④膜电位的变化与其选择透过性密切相关
D．兴奋传导到⑤，使膜对Na+的通透性增强，电位变为外负内正
7．下图甲、乙是探究发酵的装置示意图。下列相关叙述正确的是
A．甲用于探究果醋果酒发酵时，打开阀a，转动搅拌器有利于提高产量
B．打开阀b，经管口3取样检测酒精和二氧化碳的产生情况
C．甲可用于探究果酒果醋发酵，发酵前要对整个装置进行气密性检查
D．乙用于腐乳制作，应控制好温度，加盐腌制后接种毛霉菌种
8．（10分）根据细胞DNA含量不同，将某种连续增殖的细胞株细胞分为三组，每组的细胞数如图。下列叙述错误的是（ ）
A．对该细胞株进行营养限制性培养，甲组细胞比例增大
B．在培养液中加入DNA合成抑制剂，丙组细胞数目减少
C．抑制该细胞株细胞的核糖体形成，乙组细胞数目不变
D．抑制该细胞株细胞的纺锤体形成，丙组细胞比例增大
二、非选择题
9．（10分）回答下列问题。
（1）雄鼠精细胞经过变形，_________发育形成精子的顶体，顶体内含有的__________能溶解卵丘细胞之间的物质，协助精子穿过卵母细胞的放射冠和透明带。
（2）雌鼠排卵时，减数第一次分裂尚未完成，此时卵子处于___________卵母细胞阶段，当该细胞发育至减数第二次分裂___________期时，才具备受精能力。
（3）进行小鼠胚胎工程操作时，首先在光控周期下（光照14h,黑暗10h）饲养成年雌鼠，并注射促性腺激素，目的是________________。然后从雌鼠的_____________中取出卵子，在一定条件下培养成熟；并从雄鼠附睾中取出精子，在一定条件下培养一段时间，目的是____________。再在37℃、5%CO2条件下，精卵共同作用4h，冲洗后继续培养。定时在显微镜下观察胚胎的变化，第5天可以看到胚胎发生收缩，细胞间隙扩大，接着胚胎内部开始出现裂隙，这是胚胎_______________期开始的标志。
（4）如果体外受精后，在精核和卵核融合之前，用微型吸管吸除雄核，再用细胞松弛素B（能抑制纺锤体的形成）处理，处理后的受精卵可发育成小鼠。这种育种方法叫______育种,在动物新品种选育中的显著优点是__________________________________________。
（5）如果将小鼠甲的体细胞核移入小鼠乙的去核卵细胞中，由重组细胞发育成小鼠丙，则小鼠丙的基因来源于___________________________________。
（6）如果将外源基因导入小鼠受精卵，则外源基因可能随机插入到小鼠受精卵DNA中。这种受精卵有的可发育成转基因小鼠，有的却死亡。请分析因外源基因插入导致受精卵死亡的最可能的原因___________________________________________ 。
10．（14分）果蝇的长翅对残翅为显性，长腿对短腿为显性。下图为某长腿长翅果蝇体细胞的染色体示意图，其中X、Y染色体存在同源区段和非同源区段，D、d分别表示控制长翅和残翅的基因，控制腿长短的基因（用A和a表示）在染色体上的位置未知。请回答下列问题：
（1）仅考虑翅形，该雄果蝇与某长翅雌果蝇杂交，后代的表现型及比例是_________________________。
（2）若一个果蝇种群中，纯合长翅果蝇占20%，杂合长翅果蝇占60%，在不考虑迁移、突变、自然选择等情况下，该果蝇种群随机交配产生的子一代中，残翅果蝇所占的比例为__________。
（3）若基因A和a能被荧光标记为绿色，用荧光显微镜观察该雄果蝇处于有丝分裂中期的细胞有4个荧光点，则推测控制腿长短的基因可能位于常染色体上，也可能位于__________________上。
（4）若控制腿长短的基因位于X染色体上，让该雄果蝇与某长腿长翅雌果蝇杂交，F1中出现短腿残翅雄果蝇，则F1中出现长腿长翅雌果蝇的概率为__________。
（5）现有各种基因型的纯合子可供选择，请设计实验确定控制腿长短的基因是否位于Ⅱ号染色体上，简要写出实验思路并预测实验结果及结论。____________
11．（14分）萝卜的蛋白A具有广泛的抗植物病菌作用，而且对人体没有影响。我国科学家欲获得高效表达蛋白A的转基因大肠杆菌作为微生物农药，做了相关研究。
（1）研究者用相同的_________酶处理蛋白A基因和pET质粒，得到重组质粒，再将重组质粒置于经_________处理的大肠杆菌细胞悬液中，获得转基因大肠杆菌。
（2）检测发现，转入的蛋白A基因在大肠杆菌细胞中表达效率很低，研究者推测不同生物对密码子具有不同的偏好，因而设计了与蛋白A基因结合的两对引物（引物B和C中都替换了一个碱基），并按图2方式依次进行4次PCR扩增，以得到新的蛋白A基因。
①这是一种定点的_________技术。
②图2所示的4次PCR应该分别如何选择图1中所示的引物？请填写以下表格（若选用该引物划“√”，若不选用该引物则划“×”）。_____
（3）研究者进一步将含有新蛋白A基因的重组质粒和_________分别导入大肠杆菌，提取培养液中的蛋白质，用_________方法检测并比较三组受体菌蛋白A的表达产物，判断新蛋白A基因表达效率是否提高。为检测表达产物的生物活性，研究者将上述各组表达产物加入到长满了植物病菌的培养基上，培养一段时间后，比较_________的大小，以确定表达产物的生物活性大小。
（4）作为微生物农药，使用时常喷洒蛋白A基因的发酵产物而不是转蛋白A基因的大肠杆菌，其优点是_________。
12．目的基因的分离、克隆以及目的基因的结构与功能研究，一般位于整个基因工程的上游。将含有某种生物不同基因的许多DNA片段导入受体菌的群体中储存，可获得该种生物的基因文库。请回答下列问题：
（1）目的基因可以在构成基因文库的受体菌中____________________。从基因多少的角度分析，cDNA文库含有某种生物的__________。
（2）区别于基因组文库，在构建cDNA文库时需要用到__________酶，从cDNA文库中获得的目的基因__________（填“不含有”或“含有”）启动子。
（3）从基因文库中提取目的基因比较复杂，下图为一种思路：
该过程中需将纤维素膜上的细菌裂解，其目的是____________，再用32P标记的____________作为探针进行杂交。依据杂交结果，进一步操作为__________________________，才能获得含有目的基因的受体菌。
参考答案
一、选择题(本大题共7小题,每小题6分,共42分。)
1、B
【解析】
关于“内环境稳态的调节”应掌握以下几点：
（1）实质：体内渗透压、温度、pH等理化特性和化学成分呈现动态平衡的过程；
（2）定义：在神经系统和体液的调节下，通过各个器官、系统的协调活动，共同维持内环境相对稳定的状态；
（3）调节机制：神经-体液-免疫调节网络；
（4）层面：水、无机盐、血糖、体温等的平衡与调节；
（5）意义：机体进行正常生命活动的必要条件。
【详解】
A、血浆渗透压的大小主要与无机盐和蛋白质含量有关，而组织液和血浆可以相互渗透，所以血浆蛋白含量的变化会影响组织液的渗透压，A错误；
B、内环境的稳态是各个器官、系统的协调活动，共同作用的结果，内环境的变化会引起机体自动调节器官、系统的活动，B正确；
C、细胞的生命活动不仅依赖于内环境，同时细胞产生的代谢产物（如水、二氧化碳等）是内环境不可缺少的成分，C错误；
D、尿液不属于内环境，故尿液浓度的相对稳定不属于内环境稳态，D错误。
故选B。
本题考查内环境的组成、理化性质、稳态的相关知识，意在考查识记能力和理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力；能运用所学知识与观点，通过比较、分析与综合等方法对某些生物学问题进行解释、推理，做出合理的判断或得出正确的结论。
2、D
【解析】
据图分析，欧洲免急剧增加，呈现J型曲线，而袋鼠减少，引入狐狸后欧洲免数量小幅度减少，而袋鼠仍然减少，说明狐狸和袋鼠的种间关系为捕食；引入黏液瘤病毒后，欧洲免的数量减少，而袋鼠的数量恢复。
【详解】
A、a年之前欧洲兔种群数量迅速增长的原因是缺少天敌，A项正确；
B、狐狸防治兔子效果不好的原因是狐理可能喜欢捕食袋鼠，B项正确；
C、病毒对寄主有选择性，所以黏液瘤病毒使欧洲兔致命，对袋鼠影响不大，C项正确；
D、c年后欧洲免种群数量回升的原因是欧洲免由于变异的原因存在抗性差异，病毒的存在只是起了选择作用，D项错误。
故选D。
3、C
【解析】
判断遗传病类型的口诀为“无中生有为隐性，隐性遗传看女病，女病父正非伴性”，所以可判断A病为常染色体隐性遗传。若为隐性遗传，且亲本只有一方携带致病基因，可判断该病为伴X隐性遗传病。
【详解】
A、因为该对夫妇都正常，但生有一个只患A遗传病的女儿和一个只患B遗传病的儿子，所以这两种遗传病都是隐性遗传病，又因为患A遗传病女儿的父亲正常，所以该遗传病不可能是伴X隐性遗传病，属于常染色体隐性遗传病；又因为该家庭中丈夫不含B遗传病的致病基因，所以B遗传病为伴X隐性遗传病，所以控制两种遗传病的基因不在同一对同源染色体上，遵循基因的自由组合定律，A正确；
B、由于A遗传病属于常染色体隐性遗传病，所以该遗传病在人群中男性和女性患病的概率基本相等，B正确；
C、该对夫妇是A遗传病的携带者，所以它们再生育孩子患A遗传病的概率为1/4；该对夫妇的妻子是B遗传病的携带者，丈夫无致病基因，所以再生育一个儿子患B遗传病的概率是1/2，故这对夫妇生育一个儿子既患A遗传病又患B遗传病的概率为1/4×1/2=1/8，C错误；
D、该家庭中患B遗传病的儿子的致病基因来自其母亲，而他母亲的致病基因来自其外祖父或外祖母，D正确。
故选C。
本题考查伴性遗传和自由组合定律应用的相关知识，要求考生识记伴性遗传的特点；能根据题干信息绘制遗传系谱图并能据此推断出相应个体的基因型，再进行相关概率的计算，属于考纲理解和应用层次的考查。
4、D
【解析】一个完整的核苷酸由一分子磷酸、一分子五碳糖和一分子含氮碱基组成，而且磷酸基团连接在五碳糖的5＇端。图中a是一个完整的核苷酸，而b不是，A项错误；各核苷酸之间是通过化学键——磷酸二酯键③连接起来的，B项错误；T2噬菌体的遗传物质是DNA，DNA含有T而不含有U，图示碱基含有U，因此该链不可能是组成T2噬菌体遗传物质的一部分，C项错误；由图可知，末端五碳糖连接的磷酸是1个，中间的五碳糖连接的磷酸是2个，D项正确。
5、C
【解析】
1、寒冷时，下丘脑分泌促甲状腺激素释放激素促进垂体分泌促甲状腺激素，促进甲状腺分泌甲状腺激素，促进代谢增加产热，当甲状腺激素含量过多时，会反过来抑制下丘脑和垂体的分泌活动，这叫做负反馈调节。
2、当机体失水过多、饮水不足、食物过咸时，细胞外液渗透压升高，下丘脑渗透压感受器受到的刺激增强，致使抗利尿激素分泌量增加，肾小管和集合管对水的重吸收作用增强，当机体饮水过多时，细胞外液渗透压降低，下丘脑渗透压感受器受到的刺激减弱，致使抗利尿激素分泌量减少，肾小管和集合管对水的重吸收作用减弱。
【详解】
A、神经调节和体液调节都存在分级调节，A正确；
B、生长激素和甲状腺激素均可促进生长发育，二者有协同作用，B正确；
C、激素X是抗利尿激素，其受体在肾小管和集合管细胞中表达，不会在下丘脑细胞中表达，C错误；
D、促甲状腺激素释放激素促进甲状腺激素的分泌，而甲状腺激素增多通过反馈抑制作用抑制甲状腺激素的分泌，降低甲状腺激素的含量，所以二者可相互拮抗，D正确。
故选C。
本题考生需要理解图中调节过程，结合甲状腺激素的分级调节和水盐调节过程进行解答。
6、A
【解析】
分析题图：该图为突触结构图，其中①为线粒体、②为突触小泡（内含神经递质）、③为突触前膜、④为突触后膜、⑤为神经递质，因为神经递质只能由突触前膜释放，作用于突触后膜，故兴奋只能从突触前膜传向突触后膜。
【详解】
A、过程③神经递质的释放方式为胞吐，结构①线粒体为神经递质的释放提供能量，但是神经递质扩散到④突触后膜并与受体结合，不需要线粒体提供能量，A错误；
B、神经递质存在于②突触小泡内，可避免被细胞内其他酶系破坏，B正确；
C、结构④突触后膜膜电位的变化是钠离子通道打开，钠离子大量内流，形成内正外负的动作电位，说明与其选择透过性密切相关，C正确；
D、兴奋传导到⑤神经递质，使膜对Na+通透性增强，引起Na+内流，膜电位变为外负内正，D正确。
故选A。
7、C
【解析】
据图分析：阀a是控制充气口充气的，制备果酒，应该关闭充气口，醋酸发酵时连接充气泵充入无菌空气；阀b是控制发酵液的取样的，管口2连接的是排气口，酒精发酵时用来排出二氧化碳。腐乳制作过程中，加盐的作用是析出豆腐中的水分，使豆腐块变硬和抑制微生物的生长，避免豆腐块腐败变质。
【详解】
酒精发酵需要无氧环境，故当甲用于探究果酒发酵时，打开阀a，转动搅拌器的条件下，由于溶氧量增加，不利于酒精发酵，A错误；打开阀b，可经管口3取样检测酒精的产生情况，而产生的二氧化碳从管口2排出，B错误；甲可用于探究果酒果醋发酵，发酵前要对整个装置进行气密性检查，C正确；腐乳制作时应先接种毛霉菌种，后加盐腌制，D错误。
故选C。
8、C
【解析】
根据题意和柱形图分析可知，该细胞株能够连续增值，说明其进行的是有丝分裂；甲组细胞中的DNA含量为2C，包括G1期和末期的细胞；乙组细胞中的DNA含量为2C～4C，均为S期细胞；丙组细胞中的DNA含量为4C，包括G2期、前期、中期和后期的细胞。
【详解】
A、据图分析可知，甲组细胞的数量最多，说明其在细胞周期中所占时间最长，因此对该细胞株进行营养限制性培养，甲组细胞比例将增大，A正确；
B、在培养液中加入DNA合成抑制剂，DNA复制将受到抑制，导致乙组的细胞不能进入丙组，因此丙组细胞数目将减少，B正确；
C、核糖体是蛋白质合成的场所，而蛋白质主要在G1期和G2期合成，即将影响甲组和丙组细胞中蛋白质的合成，因此将会导致乙组细胞数目减少，C错误；
D、细胞周期中纺锤体形成于前期，若抑制该细胞株细胞的纺锤体形成，丙组细胞比例将增大，D正确。
故选C。
二、非选择题
9、高尔基体 顶体酶 初级 中 促进排卵（或超数排卵） 输卵管（或卵巢） 使精子获能 囊胚 单倍体 明显缩短育种年限（时间） 小鼠甲（体细胞）核基因和小鼠乙（卵细胞）的细胞质基因 外源基因的插入使受精卵内生命活动必需的某些基因不能正常表达
【解析】
受精是精子和卵细胞结合形成合子的过程，包括受精前的准备阶段和受精阶段，在自然条件下，受精是在雌性的输卵管内完成的，在准备阶段精子获能，卵子在输卵管内进一步成熟，当达到减数第二次分裂的中期时，才具备与精子受精的能力，受精阶段获能后的精子和卵子相时，发生顶体反应，释放顶体酶，溶解卵丘细胞之间的物质，形成精子穿越放射冠的通路。
【详解】
（1）精细胞经变形后，高尔基体发育形成精子的顶体，精子与卵细胞相遇，发生顶体反应，使得顶体内的顶体酶释放出来，溶解放射冠，接着穿过透明带。
（2）雌鼠排卵时，减数第一次分裂尚未完成，此时卵子处于初级卵母细胞阶段，当卵母细胞在输卵管内发育至减数第二次分裂中期时，才具备受精能力。
（3）对雌鼠进行光控周期饲养并注射促进性腺激素，其目的是促进排卵； 然后从雌鼠输卵管中取出卵子；在一定条件下培养成熟；从雄鼠附睾中取出精子，在一定条件下培养一段时间，目的是使精子获能，因为受精作用进行时，精子要消耗大量能量；卵裂开始后胚胎内部出现裂隙，这是胚胎囊胚期开始的标志。
（4）处理后的受精卵由于只有雌核，而细胞松弛素B处理作用能抑制纺锤体的形成，所以处理后的受精卵染色体数目将加倍，这种育种方法叫单倍体育种，在动物新品种选育中的显著优点是容易获得纯合子并明显缩短育种时间。
（5）将小鼠甲的体细胞核移入小鼠乙的去核卵细胞中，由重组细胞发育成小鼠丙，则小鼠丙的基因来源于小鼠甲（体细胞）的核基因和小鼠乙（卵细胞）的细胞质基因。
（6）若外源基因的插入使受精卵内生命活动必需的某些基因不能正常表达，则插入外源基因的这种受精卵可能会死亡，不会发育成转基因小鼠。
本题考查核移植和胚胎工程的相关知识，意在考查考生的识记能力、理解能力和迁移应用能力，属于中等难度题。
10、全部为长翅或长翅∶残翅=3∶1 25% X与Y染色体的同源区段 3/8 实验思路：让长腿长翅纯合雌（或雄）果蝇与短腿残翅纯合雄（或雌）果蝇杂交得F1，再让F1雌雄个体相互杂交，统计其后代的表现型及比例。
预测实验结果及结论：若子代的表现型及比例为长腿长翅∶短腿残翅=3∶1，则说明A和a这对基因位于Ⅱ号染色体上；若子代的表现型及比例为其他情况，则说明A和a这对基因不位于Ⅱ号染色体上
【解析】
图示中常染色体上含有D、d基因，表现为长翅，所以长翅为显性性状。两对基因若位于一对同源染色体上，则遵循分离定律，若两对基因位于两对同源染色体上，则遵循自由组合定律。
【详解】
（1）由于控制翅形的基因D、d位于常染色体上，根据分析可知，长翅为显性性状，所以仅考虑翅形，该雄果蝇（Dd）与某长翅雌果蝇（DD或Dd）杂交，后代全部为长翅或长翅∶残翅=3∶1。
（2）若一个果蝇种群中，纯合长翅（DD）果蝇占20%，杂合长翅（Dd）果蝇占60%，在不考虑迁移、突变、自然选择等情况下，该果蝇种群中产生的雌雄配子均为D=20%+60%×1/2=50%，d=1-50%=50%，随机交配产生的子一代中，残翅果蝇所占的比例为50%×50%=25%。
（3）若基因A和a能被荧光标记为绿色，用荧光显微镜观察该雄果蝇处于有丝分裂中期的细胞有4个荧光点，说明在雄果蝇中控制该性状的基因成对存在，则推测控制腿长短的基因可能位于常染色体上，也可能位于X与Y染色体的同源区段上。
（4）若控制腿长短的基因位于X染色体上，让该雄果蝇与某长腿长翅雌果蝇杂交，F1中出现短腿残翅雄果蝇，说明短腿为隐性性状，该雄果蝇表现为长腿长翅，基因型为DdXAY，后代出现了短腿残翅雄果蝇，所以长腿长翅雌果蝇基因型为DdXAXa，则F1中出现长腿长翅雌果蝇的概率为3/4×1/2=3/8。
（5）要确定控制腿长短的基因是否也位于Ⅱ号染色体上，可让长腿长翅纯合雌（或雄）果蝇与短腿残翅纯合雄（或雌）果蝇杂交得F1，再让F1雌雄个体相互杂交，统计其后代的表现型及比例。若子代的表现型及比例为长腿长翅∶短腿残翅=3∶1，则说明A和a这对基因位于Ⅱ号染色体上；若子代的表现型及比例为其他情况，则说明A和a这对基因不位于Ⅱ号染色体上。
本题考查伴性遗传的特点和基因自由组合定律的实质，意在考查考生应用所学知识解决问题的能力。
11、限制酶和DNA连接 CaCl2 基因突变
含有蛋白A基因的重组质粒、空质粒（pET质粒） 抗原-抗体杂交 抑菌圈 对人、畜、农作物和自然环境安全；不会造成基因污染；有效成分纯度较高
【解析】
（一）基因工程的基本工具
1、“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）
（1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。
（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。
（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。
2、“分子缝合针”——DNA连接酶
（1）两种DNA连接酶（E•cliDNA连接酶和T4DNA连接酶）的比较：
①相同点：都缝合磷酸二酯键。
②区别：E•cliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶来源于T4噬菌体，可用于连接粘性末端和平末端，但连接效率较低。
（2）与DNA聚合酶作用的异同：DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键．DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。
3、“分子运输车”——载体
（1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。
②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。
③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。
（2）最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。
（3）其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒。
（二）基因工程的基本操作程序
第一步：目的基因的获取
1、目的基因是指：编码蛋白质的结构基因。
2、原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成．人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。
3、PCR技术扩增目的基因
（1）原理：DNA双链复制
（2）过程：第一步：加热至90～95℃DNA解链；第二步：冷却到55～60℃，引物结合到互补DNA链；第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。
第二步：基因表达载体的构建
1、目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。
2、组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因
（1）启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。
（2）终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端。
（3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来．常用的标记基因是抗生素抗性基因。
第三步：将目的基因导入受体细胞
1、转化的概念：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。
2、常用的转化方法：
将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是 农杆菌转化法，其次还有基因枪法和 花粉管通道法等。
将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是 显微注射技术．此方法的受体细胞多是受精卵。
将目的基因导入微生物细胞：原核生物作为受体细胞的原因是 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少，最常用的原核细胞是 大肠杆菌，其转化方法是：先用Ca2+处理细胞，使其成为感受态细胞，再将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程。
3、重组细胞导入受体细胞后，筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。
第四步：目的基因的检测和表达
1、首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是采用 DNA分子杂交技术。
2、其次还要检测目的基因是否转录出了mRNA，方法是采用用标记的目的基因作探针与 mRNA杂交。
3、最后检测目的基因是否翻译成蛋白质，方法是从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原——抗体杂交。
4、有时还需进行个体生物学水平的鉴定，如转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。
【详解】
（1）在基因工程中，利用相同的限制酶和DNA连接酶处理蛋白A基因和pET质粒，得到重组质粒；大肠杆菌作为受体细胞，需要用氯化钙处理，以便重组质粒的导入。
（2）①根据题意和图示分析，经过4次PCR技术后获得了新的基因，这是一种定点的基因突变技术。
②与研究者推测不同生物对密码子具有不同的偏好，因而设计了与蛋白A基因结合的两对引物（引物B和C中都替换了一个碱基），因此4次PCR应该分别选择如图所示的引物如下表所示：
（3）根据实验中的对照原则，若要比较新蛋白A的表达效率是否提高，则需设置三组实验实验变量的处理分别为：仅含新蛋白质A的重组质粒，仅含蛋白A的重组质粒和空白对照（仅含空质粒，以排除空质粒可能产生的影响）。因此，将含有新蛋白A基因的重组质粒和含有蛋白A基因的重组质粒、空质粒（pET质粒）分别导入大肠杆菌，提取培养液中的蛋白质，用抗原——抗体杂交方法检测并比较三组受体菌蛋白A的表达产物，判断新蛋白A基因表达效率是否提高。由于蛋白A（或新蛋白A）具有抗菌作用，所以为检测表达产物的生物活性，研究者将上述各组表达产物加入到长满了植物病菌的培养基上，培养一段时间后，比较抑菌圈的大小，以确定表达产物的生物活性大小。
（4）作为微生物农药，使用时常喷洒蛋白A基因的发酵产物而不是转蛋白A基因的大肠杆菌，是因为蛋白A基因的发酵产物对人、畜、农作物和自然环境安全；不会造成基因污染；有效成分纯度较高。
本题主要考查基因工程、PCR技术等相关知识，考生需要理解和记忆相关知识，并学会应用所学知识正确答题。
12、稳定存在并遗传 部分基因 逆转录 不含有 释放出DNA 目的基因 选取培养基上的a菌落继续培养
【解析】
1、基因文库包括基因组文库和部分基因文库。其中基因组文库包含某种生物所有的基因，而部分基因文库只包含某种生物的部分基因，如：cDNA文库。
2、以mRNA为模板，经反转录酶催化，在体外反转录成cDNA，与适当的载体（常用噬菌体或质粒载体）连接后转化受体菌，则每个细菌含有一段cDNA，并能繁殖扩增，这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。
3、基因组文库与cDNA文库比较：
【详解】
（1）目的基因可以在构成基因文库的受体菌中稳定存在并遗传。基因组文库包含某种生物所有的基因，而部分基因文库只包含某种生物的部分基因，如cDNA文库。
（2）区别于基因组文库，在构建cDNA文库时需要用到逆转录酶，由于cDNA文库中的目的基因是mRNA逆转录形成的，故不含有启动子。
（3）由于目的基因存在于菌体中，所以上述过程需将纤维素膜上的细菌裂解，其目的是释放出DNA，再用32P标记的目的基因作为探针进行杂交。依据杂交结果，a菌落的细菌DNA中出现了杂交带，说明a菌体中含有目的基因，可选取培养基上的a菌落继续培养，才能获得含有目的基因的受体菌。
本题考查基因组文库和基因文库的区别，要求考生识记基因文库的概念及种类，掌握基因组文库和部分基因文库的区别，再结合所学的知识准确判断各选项。
引物A
引物B
引物C
引物D
PCR1
PCR2
PCR3
PCR4
引物A
引物B
引物C
引物D
PCR1
√
√
×
×
PCR2
×
×
√
√
PCR3
×
×
×
×
PCR4
√
×
×
√
引物A
引物B
引物C
引物D
PCR1
√
√
×
×
PCR2
×
×
√
√
PCR3
×
×
×
×
PCR4
√
×
×
√
文库类型
cDNA
基因组文库
文库大小
小
大
基因中启动子
无
有
基因中内含子
无
有
基因多少
某种生物的部分基因
某种生物的全部基因
物种间的基因交流
可以
部分基因可以