2026年天水市高三最后一模生物试题含解析

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2．答题前，请务必将自己的姓名、准考证号用0．5毫米黑色墨水的签字笔填写在试卷及答题卡的规定位置．
3．请认真核对监考员在答题卡上所粘贴的条形码上的姓名、准考证号与本人是否相符．
4．作答选择题，必须用2B铅笔将答题卡上对应选项的方框涂满、涂黑；如需改动，请用橡皮擦干净后，再选涂其他答案．作答非选择题，必须用05毫米黑色墨水的签字笔在答题卡上的指定位置作答，在其他位置作答一律无效．
5．如需作图，须用2B铅笔绘、写清楚，线条、符号等须加黑、加粗．
一、选择题(本大题共7小题,每小题6分,共42分。)
1．生长素对植物生长的调节作用具有两重性。如图所示，P点表示对植物生长既不促进也不抑制的生长素浓度。该图可表示
A．去掉顶芽后侧芽生长素浓度的变化
B．胚芽鞘尖端向光侧生长素浓度的变化
C．水平放置后根近地侧生长素浓度的变化
D．水平放置后茎远地侧生长素浓度的变化
2．大麦种子富含淀粉，利用酵母菌酿造啤酒时，发现必须用发芽的大麦种子才能发酵成功，而不能用未发芽的大麦种子来代替。下列推断合理的是（ ）
A．酵母菌是在有氧条件下产生酒精
B．大麦发芽过程中淀粉含量会增加
C．未发芽的大麦种子淀粉酶活性高
D．酵母菌不能直接利用淀粉来发酵
3．下列关于高尔基体的叙述，错误的是（ ）
A．是真核细胞内的物质转运系统
B．由单位膜构成的扁平小囊和小泡组成
C．仅存在于动物细胞和低等植物细胞中
D．可将分拣后的蛋白质分送到细胞内或细胞外的目的地
4．若玫瑰的花色受常染色体上一对等位基因控制，红色玫瑰与白色玫瑰交配，F1均为淡红色玫瑰，F1随机授粉，F2中红色玫瑰：淡红色玫瑰：白色玫瑰=1：2：1。下列叙述正确的是（ ）
A．玫瑰花色性状中，红色对白色为完全显性
B．F2中出现红色、淡红色、白色是基因重组的结果
C．F2中相同花色的玫瑰自交，其子代中红色玫瑰所占的比例为3/16
D．F2中淡红色玫瑰与红色玫瑰杂交，其子代基因型的比例与表现型的比例相同
5．由于人为或自然因素使东北虎种群的自然栖息地被分割成很多片段，导致其种群密度下降甚至走向灭绝。栖息地片段化将会
A．有利于东北虎个体的迁入、迁出及个体间的交流
B．使东北虎的捕食更方便，利于其生存与繁衍
C．使东北虎种群活动空间变小，种内斗争加剧
D．使东北虎繁殖加快，进而增加种群的遗传多样性
6．基因I和基因Ⅱ在某动物染色体DNA上的相对位置如图所示，下列说法错误的是
A．基因I和基因Ⅱ可能决定动物的同一性状
B．基因I的表达产物可能影响基因II的表达
C．基因I和基因Ⅱ可能在多种细胞中都表达
D．基因I和基因Ⅱ在转录时不存在A和T配对
7．下列有关人体内环境稳态及其调节的叙述，正确的是（ ）
A．癌胚抗原和甲胎蛋白会出现在正常人的内环境中
B．人手和脚上出现的“水泡”中的液体主要是细胞内液
C．人体的脑组织细胞内液中O2与与CO2的比值大于组织液中的
D．人体的血浆中不可能出现淀粉、蔗糖及果糖等物质
8．（10分）红树林生长于陆地与海洋交界带的浅滩，是生产力（有机物积累量）最高的生态系统类型之一。红树、桐花树、海桑等是红树林的主要植物，腹足动物、蟹类、双壳类等底栖生物多样性高，生物量极其丰富。相手蟹栖息于红树林冠层，主要以新鲜树叶为食。下列分析正确的是（ ）
A．红树等植物和底栖动物构成群落，具有明显的分层现象
B．光照、水和温度等因素与红树林高生产力特性密切相关
C．底栖动物可加速红树凋落物的降解，促进能量循环利用
D．相手蟹属于次级消费者，不能同化摄食树叶的全部能量
二、非选择题
9．（10分）当今我国已经成为世界上遭受生物入侵比较严重的国家。鳄龟和巴西龟原产于密西西比河流域，我国多地水生生态系统中已经发现二者分布。鳄龟以肉食性为主，喜食新鲜鱼类；巴西龟以虾、虫、两栖动物、小鱼、水生植物为食。
（1）湿地生态系统是由无机环境和_________组成的___________（开放/封闭）的生命系统。
（2）鳄龟和巴西龟入侵，在缺少______________的情况下，种群数量很容易剧增，导致入侵地生物______________降低，生态系统的________________________下降。
（3）为探究本地物种鲤鱼是否能通过视觉逃避鳄龟和巴西龟的捕食，研究人员做了如下实验：用透明玻璃将不透明的玻璃缸（100 cm×60 cm×20 cm）分隔为三室，如图甲。实验一，将10条鲤鱼置于第二室中线处。实验二，在实验一基础上，于第一室中加入两只鳄龟。实验三，在实验二基础上，更换10条鲤鱼，并于第三室中加入两只巴西龟。统计实验组远离捕食者方向的鲤鱼数量，以及对照组中同侧的鲤鱼数量。实验重复30次。结果如图乙、丙。
①据图乙可知，实验一中线两侧鲤鱼数量大致相同。实验二加入鳄龟后，________________。
②综合实验结果说明________________________。
（4）由于弃养、放生、养殖逃逸等因素，巴西龟遍布我国野外。你认为放生是有利还是有害？并用已有生态学知识，做出合理解释。_____________________________________。
10．（14分）蔗糖基聚合物是以蔗糖为原料制备的一种高吸收性凝胶聚合物。该物质安全无毒，可生物降解，因此可作为植物生长调节剂应用于农业生产。研究人员用12%的蔗糖基聚合物水溶液分别在苗期（4叶期）、拔节期（9叶期）、抽穗期（104叶期）和灌浆期选择天气晴朗近中午的时段，喷施玉米叶面并于124小时后检测叶片的叶绿素含量、净光合速率、呼吸速率以及蒸腾速率。实验结果如下表所示。分析表中实验数据，回答相关问题：
（10）蔗糖基聚合物处理会使玉米叶片中叶绿素a和叶绿素b的含量___________。植物进行光合作用时，绿叶中的光合色素可以吸收、传递、转换光能，其中叶绿素a和叶绿素b主要吸收__________光。
（12）用蔗糖基聚合物处理叶片后，在玉米生长的__________期有机物积累量增加最多。从叶绿素含量和呼吸速率两个角度分析，其原因是_________________________________________。
（4）由表中实验数据可知，蔗糖基聚合物可降低叶片的呼吸速率和蒸腾速率因此常用于果蔬常温保鲜。请设计实验验证蔗糖基聚合物对芒果也具有常温保鲜的效果。__________________________________。（只需写出实验思路即可，不需要预期结果和结论）
11．（14分）有两种植物分别适于强光和荫蔽处生长，某科学工作者为探究光照强度对这两种植物光合作用强度的影响，进行了相关实验测得如下数据（其他条件适宜），请回答：
（2）该实验的自变量是_________________,写出实验中的两个无关变量____________。由表中数据可以推测，取自荫蔽处的叶片是________。
（2）在光强为22μml光子/(m2·s)时，叶肉细胞中能产生ATP的细胞器有______________。
在光强为25μml光子/(m2·s)时，光合作用产生氧气速率叶片A______叶片B（＞、＝、＜）。若在光强为222μml光子/(m2·s)时突然停止光照，在较短时间内叶绿体中ADP含量将__________（增加、不变、减少），C5含量将__________（增加、不变、减少）。
（3）根据表中数据能否确定叶片B进行光合作用所需的最适光照强度________________，如果能，请阐述理由；如果不能，请简述处理方案____________________________________。
12．萝卜的蛋白A具有广泛的抗植物病菌作用，而且对人体没有影响。我国科学家欲获得高效表达蛋白A的转基因大肠杆菌作为微生物农药，做了相关研究。
（1）研究者用相同的_________酶处理蛋白A基因和pET质粒，得到重组质粒，再将重组质粒置于经_________处理的大肠杆菌细胞悬液中，获得转基因大肠杆菌。
（2）检测发现，转入的蛋白A基因在大肠杆菌细胞中表达效率很低，研究者推测不同生物对密码子具有不同的偏好，因而设计了与蛋白A基因结合的两对引物（引物B和C中都替换了一个碱基），并按图2方式依次进行4次PCR扩增，以得到新的蛋白A基因。
①这是一种定点的_________技术。
②图2所示的4次PCR应该分别如何选择图1中所示的引物？请填写以下表格（若选用该引物划“√”，若不选用该引物则划“×”）。_____
（3）研究者进一步将含有新蛋白A基因的重组质粒和_________分别导入大肠杆菌，提取培养液中的蛋白质，用_________方法检测并比较三组受体菌蛋白A的表达产物，判断新蛋白A基因表达效率是否提高。为检测表达产物的生物活性，研究者将上述各组表达产物加入到长满了植物病菌的培养基上，培养一段时间后，比较_________的大小，以确定表达产物的生物活性大小。
（4）作为微生物农药，使用时常喷洒蛋白A基因的发酵产物而不是转蛋白A基因的大肠杆菌，其优点是_________。
参考答案
一、选择题(本大题共7小题,每小题6分,共42分。)
1、A
【解析】
分析题图和题干可知，虚线表示对植物牛长既不促进也不抑制的浓度，曲线上方是抑制植物生长的生长素浓度，虚线下方是促进植物生长的生长素浓度。
【详解】
A、没去掉顶芽之前，侧芽部位生长素浓度过高抑制侧芽发育，在虚线之上，去掉顶芽后，生长素浓度逐渐降低，抑制作用解除，进而促进生长，曲线在虚线之下，A正确；
B，在单侧光照下，胚芽鞘尖端向光侧生长素浓度，会随时间延长而降低，但是开始时生长素是促进植物生长，因此曲线应全部在虚线之下，B错误；
C、由于重力的作用，水平放置的根近地侧生长素浓度会随时间延长而升高，不是下降，C错误；
D、由于重力的作用，水平放置的茎的远地侧的生长素浓度会随时间延长而下降，但在促进植物生长的范围内，曲线应全部在虚线之下，D错误。
故选A。
本题考查了生长素的两重性，分析题图明确曲线的含义是解题的突破口，对生长素作用两重性的理解是解题的关键。
2、D
【解析】
1、大麦种子在萌发过程中需要将淀粉分解成葡萄糖，再进行氧化供能。
2、酵母菌在有氧的条件下进行有氧呼吸产生二氧化碳和水，在无氧的条件下生成酒精和二氧化碳。
【详解】
A、酵母菌无氧呼吸产生酒精，A错误；
B、大麦发芽过程中淀粉含量会细胞呼吸而减少，B错误；
C、未发芽的大麦种子淀粉酶活性较低，C错误；
D、酵母菌不能直接利用淀粉来发酵，是将淀粉分解成葡萄糖进行发酵，D正确。
故选D。
本题考查了种子萌发过程中物质的变化过程，结合酵母菌的呼吸作用进行解答。
3、C
【解析】
高尔基体在动植物细胞中都有，但功能不同，在动物细胞中与分泌物的形成有关，在植物细胞中与细胞壁的形成有关。
【详解】
A、高尔基体是真核细胞内的物质转运系统，承担着物质运输的任务，A正确；
B、高尔基体由一系列单位膜构成的扁平小囊及其产生的小泡组成，B正确；
C、高尔基体普遍存在于真核细胞中，C错误；
D、高尔基体的作用是把集中在高尔基体的蛋白质进行分拣，并分别送到细胞内或细胞外的目的地，D正确。
故选C。
4、D
【解析】
分析题中信息：“红色玫瑰与白色玫瑰交配，F1均为淡红色玫瑰，F1随机授粉，F2中红色玫瑰：淡红色玫瑰：白色玫瑰=1：2：1。”可知花的颜色的控制属于不完全显性，F1淡粉色玫瑰为杂合子。
【详解】
A、玫瑰花色性状中，红色对白色为不完全显性，A错误；
B、F2中出现红色、淡红色、白色是基因分离的结果，B错误；
C、F2中相同花色的玫瑰自交，其子代中红色玫瑰所占的比例为1/4+1/2×1/4＝3/8，C错误；
D、F2中淡红色玫瑰与红色玫瑰杂交，其子代基因型的比例为1：1，表现型为淡红色与红色，比例为1：1，D正确。
故选D。
5、C
【解析】
栖息地的碎片化造成小种群，会减少个体间交配繁殖的机会，导致物种有灭绝的可能，生物多样性减少。
【详解】
A. 栖息地片段化会阻碍动物个体的迁入和迁出，阻碍基因交流，A错误；
B. 栖息地片段化会造成小种群，减小个体间交配繁殖的机会，B错误；
C. 栖息地片段化会使动物种群活动空间变小，种内斗争加剧，C正确；
D. 小种群内部近亲繁殖会使种群的遗传多样性下降，D错误。
6、D
【解析】
1、等位基因是指位于同一对同源染色体的相同位置，控制相对性状的基因。
2、细胞中表达的基因形象地分为“管家基因”和“奢侈基因”。“管家基因”在所有细胞中表达，是维持细胞基本生命活动所必需的；而“奢侈基因”只在特定组织细胞中表达。
【详解】
基因I和基因Ⅱ位于同一条染色体上，所以不是等位基因。但生物的一个性状可能由多个基因决定，因此基因I和基因Ⅱ可能决定动物的同一性状，A正确；基因和基因、基因和基因产物、基因和环境之间存在着复杂的相互作用，因此基因I的表达产物可能影响基因II的表达，B正确；若基因I和基因Ⅱ是管家基因，在所有细胞中都表达，C正确；转录时，碱基互补配对为A-U、T-A、C-G、G-C，因此基因I和基因Ⅱ在转录时存在A和T配对，D错误。故选D。
理解等位基因的概念，明确基因、染色体和性状之间的关系是解答本题的关键。
7、A
【解析】
内环境也即细胞外液，包括血浆、淋巴和组织液；水肿是组织液增多，减少来，促进走，会消除水肿；O2与CO2过膜的方式是自由扩散。
【详解】
A.癌胚抗原和甲胎蛋白是机体合成的两种糖蛋白，存在于人体血清等内环境中，A正确；
B.人手和脚上出现的“水泡”中的液体主要是组织液，B错误；
C.人体的脑组织细胞内液中O2与CO2的比值小于组织液中的才有利于气体交换，C错误；
D.果糖属于单糖，人体的血浆中可能出现果糖，但不可能出现淀粉、蔗糖，D错误。
故选A。
明确内环境的成分是解答本题的关键!
8、B
【解析】
1、在一定生活环境中的所有生物种群的总和叫做群落。
2、能量流动的特点：单向流动，逐级递减。
【详解】
A、群落是指一个地方的所有生物的集合，而不是只有植物和动物，A错误；
B、光照、水和温度等因素影响红树林的生活情况，与红树林高生产力特性密切相关，B正确；
C、能量不能循环，C错误；
D、相手蟹栖息于红树林冠层，主要以新鲜树叶为食，所以是初级消费者，D错误。
故选B。
本题考查生态学的基本知识，识记教材内容即可。
二、非选择题
9、生物群落 开放 天敌 多样性 自我调节能力（抵抗力稳定性或稳定性或稳态） 鲤鱼能够通过视觉逃避鳄龟和巴西龟的捕食且鳄龟对鲤鱼的危险更大 综合实验结果，说明鲤鱼可以通过视觉识别捕食者 据协调与平衡、物种多样性等原理，解释有利或不利，逻辑合理即可。
示例一：有利；可以增加物种多样性且对生态系统稳定性的保持和恢复具有促进作用。
示例二：有利：使生态系统营养结构的复杂化，提高自我调节能力。
示例三：不利；放生会导致被放养生物不适应环境，或死亡或被天敌捕食。或者没有天敌，导致生物入侵。
示例四：不利；放养的生物携带病原体，危害人类（或本地物种）健康
【解析】
1. 生态系统是指由生物群落与它的无机环境相互作用而形成的统一整体。
2.抵抗力稳定性和恢复力稳定性的关系：抵抗力稳定性的大小取决于该生态系统的生物物种的多少和营养结构的复杂程度。生物种类越多，营养结构越复杂，生态系统的抵抗力稳定性就越高；而恢复力稳定性则是生态系统被破坏后恢复原状的能力，恢复力稳定性的大小和抵抗力稳定性的大小往往存在着相反的关系。
【详解】
（1）湿地生态系统是由无机环境和生物群落组成；需要输入太阳光能等能量，是一个开放的生命系统。
（2）鳄龟和巴西龟入侵，在缺少天敌的情况下，种群数量很容易剧增，导致入侵地生物多样性降低，营养结构简单，其生态系统的自我调节能力（抵抗力稳定性或稳定性或稳态）下降。
（3）为探究本地物种鲤鱼是否能通过视觉逃避鳄龟和巴西龟的捕食，分析研究人员做的实验及结果：①据图乙可知，实验一中线两侧鲤鱼数量大致相同，实验二加入鳄龟后，随时间延长，远离捕食者方向的鲤鱼数平均值先下降，在8min后略有增加，说明鲤鱼能够通过视觉逃避鳄龟和巴西龟的捕食且鳄龟对鲤鱼的危险更大。
②据图丙可知，实验三在实验二基础上，更换10条鲤鱼，并于第三室中加入两只巴西龟，实验组三中随时间延长，远离捕食者方向的鲤鱼数平均值先下降，在4min后略有增加，综合乙丙实验结果，说明鲤鱼可以通过视觉识别捕食者。
（4）由于弃养、放生、养殖逃逸等因素，巴西龟遍布我国野外，根据协调与平衡、物种多样性等原理，有利的一方面如：可以增加物种多样性且对生态系统稳定性的保持和恢复具有促进作用；使生态系统营养结构的复杂化，提高自我调节能力等。也有不利的一面，如：放生会导致被放养生物不适应环境，或死亡或被天敌捕食，或者没有天敌，导致生物入侵；放养的生物携带病原体，危害人类（或本地物种）健康。
本题涉及种群数量增长曲线，首先要曲线图中纵横坐标的含义进行对比，意在考查考生的识图能力和理解所学知识要点，把握知识间内在联系，形成知识网络结构的能力；能运用所学知识，准确判断问题的能力。
10、增加 红光和蓝紫 拔节 此时期用蔗糖基聚合物处理叶片，叶绿素增加量最多，从而使有机物合成量增加最多；同时呼吸速率降幅也最大，所以此时有机物积累量增加最多 取大小、成熟度一致的新鲜芒果若干，随机均分成甲、乙两组；甲组用一定浓度的蔗糖基聚合物水溶液处理，乙组用等量的清水（或蒸馏水）处理；在相同的常温条件下放置一段时间，检测两组芒果的呼吸速率和蒸腾速率
【解析】
由表格可知：经过蔗糖基聚合物后，在苗期、拔节期、抽穗期和灌浆期的叶绿素a、叶绿素b、净光合速率均有所提高，呼吸速率、蒸腾速率有所下降。
【详解】
（10）由表格可知，蔗糖基聚合物处理会使玉米叶片中叶绿素a和叶绿素b的含量增加；植物进行光合作用时，绿叶中的光合色素可以吸收、传递、转换光能，其中叶绿素a和叶绿素b主要吸收蓝紫光和红光。
（12）净光合速率可用单位时间内、单位面积内有机物的积累量来表示，故用蔗糖基聚合物处理叶片后，在玉米生长的拔节期有机物积累量增加最多；此时期用蔗糖基聚合物处理叶片，叶绿素增加量最多，从而使有机物合成量增加最多；同时呼吸速率降幅也最大，所以此时有机物积累量增加最多。
（4）蔗糖基聚合物对芒果具有常温保鲜的效果的实验思路：取大小、成熟度一致的新鲜芒果若干，随机均分成甲、乙两组；甲组用一定浓度的蔗糖基聚合物水溶液处理，乙组用等量的清水（或蒸馏水）处理；在相同的常温条件下放置一段时间，检测两组芒果的呼吸速率和蒸腾速率。
本题主要考查光合作用和呼吸作用的关系，意在考查考生能理解所学知识的要点；具备设计相关实验验证简单生物学事实的能力，能对实验现象和结果进行解释、分析和处理。
11、光照强度和植物种类 温度、光照时间、CO2量等 叶片B 线粒体和叶绿体 大于 增加 减少 不能确定 缩小光照梯度，在252—622μml光子/(m2·s)之间增加更多实验组进行实验
【解析】
影响光合作用的主要环境因素有光照强度、温度和二氧化碳浓度等。真正的光合作用速率=呼吸作用速率+净光合作用速率。
【详解】
（2）据表中数据分析，该实验的自变量是光照强度和植物种类，因变量是放氧速率，无关变量有温度、光照时间、CO2量等。氧气释放速率为2时对应的光照强度为光补偿点，由表中数据可推知，B叶片的光补偿点小于A叶片，且表中的光照强度下B叶片的光合速率已经出现了最大值，但A叶片的光合速率还没有出现最大值，说明B叶片的光饱和点低于A叶片，所以B叶片为取自荫蔽下的叶片。
（2）在光强为22μml光子/（m2•s）时，两种叶片均吸收氧气，说明光合速率小于呼吸速率，且光合速率大于2，此时叶肉细胞中能产生ATP的细胞器有线粒体和叶绿体。在光强为25μml光子/（m2•s）时，叶片A光合作用产生氧气速率为：-5-（-22）=25，而叶片B光合作用产生氧气速率为：2.5-（-2）=3.5，即氧气产生速率叶片A 大于叶片B。若在光强为222μml光子/（m2•s）时突然停止光照，则直接影响光反应进行，导致在较短时间内叶绿体中ATP合成减少，ADP积累增加；同时影响暗反应C3的还原，产生的C5含量减少，而此时二氧化碳固定利用的C5不变，综合以上两个因素，可知C5含量将减少。
（3）根据表中数据不能确定叶片B进行光合作用所需的最适光照强度，只能确定其最适光照强度在522μml光子/（m2•s）左右。因此要想确定叶片B进行光合作用所需的最适光照强度，应做以下处理：缩小光照梯度，在252-622μml光子/（m2•s）之间增加更多实验组进行实验。
本题主要考查植物光合作用和呼吸作用的相关知识，解答本题的关键是明确影响光合作用和呼吸作用的因素，知道真正的光合作用速率=呼吸作用速率+净光合作用速率，理解净光合速率的表示方法。
12、限制酶和DNA连接 CaCl2 基因突变
含有蛋白A基因的重组质粒、空质粒（pET质粒） 抗原-抗体杂交 抑菌圈 对人、畜、农作物和自然环境安全；不会造成基因污染；有效成分纯度较高
【解析】
（一）基因工程的基本工具
1、“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）
（1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。
（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。
（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。
2、“分子缝合针”——DNA连接酶
（1）两种DNA连接酶（E•cliDNA连接酶和T4DNA连接酶）的比较：
①相同点：都缝合磷酸二酯键。
②区别：E•cliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶来源于T4噬菌体，可用于连接粘性末端和平末端，但连接效率较低。
（2）与DNA聚合酶作用的异同：DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键．DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。
3、“分子运输车”——载体
（1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。
②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。
③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。
（2）最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。
（3）其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒。
（二）基因工程的基本操作程序
第一步：目的基因的获取
1、目的基因是指：编码蛋白质的结构基因。
2、原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成．人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。
3、PCR技术扩增目的基因
（1）原理：DNA双链复制
（2）过程：第一步：加热至90～95℃DNA解链；第二步：冷却到55～60℃，引物结合到互补DNA链；第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。
第二步：基因表达载体的构建
1、目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。
2、组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因
（1）启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。
（2）终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端。
（3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来．常用的标记基因是抗生素抗性基因。
第三步：将目的基因导入受体细胞
1、转化的概念：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。
2、常用的转化方法：
将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是 农杆菌转化法，其次还有基因枪法和 花粉管通道法等。
将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是 显微注射技术．此方法的受体细胞多是受精卵。
将目的基因导入微生物细胞：原核生物作为受体细胞的原因是 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少，最常用的原核细胞是 大肠杆菌，其转化方法是：先用Ca2+处理细胞，使其成为感受态细胞，再将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程。
3、重组细胞导入受体细胞后，筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。
第四步：目的基因的检测和表达
1、首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是采用 DNA分子杂交技术。
2、其次还要检测目的基因是否转录出了mRNA，方法是采用用标记的目的基因作探针与 mRNA杂交。
3、最后检测目的基因是否翻译成蛋白质，方法是从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原——抗体杂交。
4、有时还需进行个体生物学水平的鉴定，如转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。
【详解】
（1）在基因工程中，利用相同的限制酶和DNA连接酶处理蛋白A基因和pET质粒，得到重组质粒；大肠杆菌作为受体细胞，需要用氯化钙处理，以便重组质粒的导入。
（2）①根据题意和图示分析，经过4次PCR技术后获得了新的基因，这是一种定点的基因突变技术。
②与研究者推测不同生物对密码子具有不同的偏好，因而设计了与蛋白A基因结合的两对引物（引物B和C中都替换了一个碱基），因此4次PCR应该分别选择如图所示的引物如下表所示：
（3）根据实验中的对照原则，若要比较新蛋白A的表达效率是否提高，则需设置三组实验实验变量的处理分别为：仅含新蛋白质A的重组质粒，仅含蛋白A的重组质粒和空白对照（仅含空质粒，以排除空质粒可能产生的影响）。因此，将含有新蛋白A基因的重组质粒和含有蛋白A基因的重组质粒、空质粒（pET质粒）分别导入大肠杆菌，提取培养液中的蛋白质，用抗原——抗体杂交方法检测并比较三组受体菌蛋白A的表达产物，判断新蛋白A基因表达效率是否提高。由于蛋白A（或新蛋白A）具有抗菌作用，所以为检测表达产物的生物活性，研究者将上述各组表达产物加入到长满了植物病菌的培养基上，培养一段时间后，比较抑菌圈的大小，以确定表达产物的生物活性大小。
（4）作为微生物农药，使用时常喷洒蛋白A基因的发酵产物而不是转蛋白A基因的大肠杆菌，是因为蛋白A基因的发酵产物对人、畜、农作物和自然环境安全；不会造成基因污染；有效成分纯度较高。
本题主要考查基因工程、PCR技术等相关知识，考生需要理解和记忆相关知识，并学会应用所学知识正确答题。
处理
叶绿素a
（mg/g）
叶绿素b
（mg/g）
净光合速率
μ ml/(m12·s)
呼吸速率
μ ml/(m12·s)
蒸腾速率
mml/(m12·s)
苗期
对照组
10．8410
10．4912
410．910
4．104
4．44
实验组
10．998
10．121212
410．1012
12．104
4．1012
拔节期
对照组
10．12412
10．101210
44．1210
1010．128
10．1210
实验组
10．894
10．494
11．1212
4．108
12．412
抽穗期
对照组
10．91010
10．1244
104．1010
4．44
10．108
实验组
10．101212
10．101012
109．128
4．1010
10．124
灌浆期
对照组
10．91210
10．1244
108．910
4．1210
10．1210
实验组
10．101012
10．10412
1212．104
4．124
10．104
光强[μml光子/(m2·s)]
2
22
25
52
222
252
522
622
放氧速率[μml O2/(m2·s)]
叶片A
－22
－22
－5
－2
5
25
28
32
叶片B
－2
－2．5
2．5
3
6
22
22
22
引物A
引物B
引物C
引物D
PCR1
PCR2
PCR3
PCR4
引物A
引物B
引物C
引物D
PCR1
√
√
×
×
PCR2
×
×
√
√
PCR3
×
×
×
×
PCR4
√
×
×
√
引物A
引物B
引物C
引物D
PCR1
√
√
×
×
PCR2
×
×
√
√
PCR3
×
×
×
×
PCR4
√
×
×
√