2027年高考生物一轮复习练习 046-每日一默-第46天 基因工程的基本工具和基本操作程序（教用）

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默教材
1．( 选必3P68、69)1967年，科学家发现，在细菌拟核DNA之外的质粒有_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ ，并可以在细菌细胞间_ _ _ _ 。1973年，科学家证明质粒可以作为基因工程的载体，构建重组DNA，导入受体细胞，使外源基因在原核细胞中成功表达，并实现_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 。
【答案】自我复制能力； 转移； 物种间的基因交流
2．( 选必3P72)用作载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行人工改造的，这些质粒上常有特殊的_ _ _ _ _ _ _ _ ，如四环素抗性基因、氨芐青霉素抗性基因等，便于_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 。
【答案】标记基因； 重组DNA分子的筛选
3．基因表达载体的构建的目的：使目的基因_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ ，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。基因表达载体是载体的一种，除目的基因、_ _ _ _ _ _ _ _ 外，还必须含有启动子、终止子等。启动子是_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终表达出人类需要的_ _ _ _ _ _ 。
【答案】在受体细胞中稳定存在，并且遗传给下一代； 标记基因； RNA聚合酶； 蛋白质
4．（选必3P81、82）将目的基因导入植物细胞的方法是_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 、_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ ；导入动物细胞的方法是_ _ _ _ _ _ _ _ ；导入微生物细胞的方法是_ _ _ _ _ _ _ _ 处理法。
【答案】农杆菌转化法； 花粉管通道法； 显微注射法； Ca2+
5．( 选必3P74)DNA的粗提取与鉴定的原理：_ _ _ _ _ _ 不溶于酒精，但某些_ _ _ _ _ _ 溶于酒精，利用这一原理，可以初步分离DNA与蛋白质。DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，它能溶于2ml⋅L−1的NaCl溶液。在一定温度下，DNA遇_ _ _ _ _ _ 试剂会呈现_ _ _ _ 。
【答案】DNA； 蛋白质； 二苯胺； 蓝色
6．( 选必3P84)PCR的产物一般通过_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 来鉴定。在凝胶中DNA分子的迁移速率与_ _ _ _ _ _ _ _ 、DNA分子的_ _ _ _ 和_ _ _ _ 等有关。凝胶中的DNA分子通过染色，可以在波长为300nm的_ _ _ _ _ _ 下被检测出来。
【答案】琼脂糖凝胶电泳； 凝胶的浓度； 大小； 构象； 紫外灯
7．( 选必3P81)农杆菌细胞内含有Ti质粒，当它侵染植物细胞后，能将目的基因导入受体细胞并整合到染色体的DNA上，原因是_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 。
【答案】农杆菌能将Ti质粒上的T−DNA转移到被侵染的细胞，并且将其整合到该细胞的染色体DNA上
8．在构建质粒载体时，目的基因的序列中能否含有用到的限制酶的识别序列，为什么？_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 。
【答案】不能，因为目的基因的序列中若含有用到的限制酶的识别序列，目的基因可能会被切断
明高考
9．（2025·河南卷·21节选）卡拉胶是一类源于海洋红藻的大分子多糖，可被某些细菌降解为具有多种应用前景的卡拉胶寡糖。某研究小组拟筛选具有高活性卡拉胶酶（CG）的菌种用于生产卡拉胶寡糖。回答下列问题：
（1） 为构建携带cg(CG的编码基因)的大肠杆菌表达载体（如图），对cg的PCR扩增产物和质粒进行双酶切，随后用E.cliDNA连接酶连接。为保证连接准确性和效率，cg转录模板链的5′端最好含有_ _ _ _ _ _ _ _ 酶切位点。另有两组同学选用了各不相同的双酶切组合和T4DNA连接酶重复上述实验，获得的部分重组质粒分子大小符合预期，但均无法使用各自构建表达载体的双酶切组合进行切割，其原因是_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 。
限制酶的识别序列和切割位点如下：
（2） 为将构建好的表达载体转入大肠杆菌，需要先用Ca2+处理大肠杆菌细胞，目的是_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ ，随后在含_ _ _ _ _ _ 和_ _ _ _ _ _ 的培养基中培养一段时间后，根据菌落周围有无水解透明圈筛选目的菌株。
【答案】（1） BamHⅠ；重组质粒连接处的序列不再是原来的限制酶识别序列
（2） 使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态；卡拉胶；四环素