山东济南市2025-2026学年高二年级下学期期中检测生物试题（含解析）

这是一份山东济南市2025-2026学年高二年级下学期期中检测生物试题（含解析），共6页。试卷主要包含了04等内容，欢迎下载使用。
生物试题
2026.04
注意事项：
1．答题前，考生先将自己的姓名、考生号、座号填写在相应位置，认真核对条形码上的姓名、考生号和座号，并将条形码粘贴在指定位置上。
2．选择题答案必须使用2B铅笔（按填涂样例）正确填涂；非选择题答案必须使用0.5毫米黑色签字笔书写，绘图时，可用2B铅笔作答，字体工整、笔迹清楚。
3．请按照题号在各题目的答题区域内作答，超出答题区域书写的答案无效；在草稿纸、试题卷上答题无效。保持卡面清洁，不折叠、不破损。
一、选择题：本题共15小题，每小题2分，共30分。每小题只有一个选项符合题目要求。
1. 下表为不同发酵工程相关实验的菌种来源与处理方法、关键操作、条件控制与原理分析，预期达到发酵工程产物。下列分析错误的实验编号是（ ）
A. 实验①B. 实验②C. 实验③D. 实验④
【答案】B
【解析】
【详解】A、醋酸杆菌是好氧菌，果醋发酵需要30~35℃的有氧环境，实验①30℃恒温培养、持续通入无菌空气的操作符合要求，原理分析正确，A不符合题意；
B、腐乳制作中加盐可抑制杂菌污染，但后期卤汤的主要目的不仅是抑制微生物生长，还能赋予腐乳独特风味，实验②的原理描述错误，B符合题意；
C、酵母菌是兼性厌氧菌，果酒发酵前期通气可让酵母菌有氧呼吸大量繁殖，后期密封可创造无氧环境让酵母菌无氧呼吸产生酒精，实验③操作和原理均正确，C不符合题意；
D、乳酸菌是厌氧菌，泡菜坛边缘水槽注满水可创造无氧环境，既满足乳酸菌无氧呼吸产乳酸的需求，又能抑制好氧杂菌生长，实验④操作和原理均正确，D不符合题意。
2. 甜面酱是以小麦粉为原料的自然发酵产物，咸中带甜。酵母菌、霉菌等多种微生物参与了甜面酱的发酵过程。下列叙述错误的是（ ）
A. 甜面酱的甜味主要来源于酵母菌、霉菌等微生物水解淀粉形成的还原糖
B. 利用稀释涂布平板法分离纯化甜面酱中的酵母菌，能得到纯培养物
C. 用稀释涂布平板法和显微镜直接计数都能精准测定培养液中活酵母菌的数量
D. 不同产地的甜面酱品质不一的原因有菌种差异、杂菌情况不一和发酵过程控制标准差异
【答案】C
【解析】
【详解】A、甜面酱的甜味主要来自原料中的淀粉经酵母菌、曲霉淀粉酶水解生成的还原糖如葡萄糖和麦芽糖导致的，A正确；
B、稀释涂布平板法可将聚集的酵母菌分散为单个细胞，在培养基上形成由单个细胞繁殖而来的单菌落，可分离纯化得到酵母菌纯培养物，B正确；
C、显微镜直接计数无法区分死菌和活菌，除非对菌体进行台盼蓝染色后再进行观察，否则只能测定培养液中酵母菌的总数量，不能测定活菌数量；稀释涂布平板法统计时，若多个酵母菌粘连在一起只会形成一个菌落，统计结果低于实际活菌数，也无法精准测定活菌数，C错误；
D、不同产地的自然菌种存在差异、发酵过程杂菌污染情况不同，且发酵的温度、时间等控制标准有区别，都会导致甜面酱品质不一，D正确。
3. 为提高葡萄酒品质，科研人员利用如图所示技术流程，筛选出发酵速度快、具有较强酒精耐受力优良酿酒酵母，其能在WL培养基（含有指示剂溴甲酚绿）上形成奶油状略带绿色、球形的菌落。而酒精耐受力弱的酵母，因代谢改变pH值导致培养基颜色变化。下列相关说法正确的是（ ）
注：YPD培养基和WL培养基是酵母菌培养常用培养基
A. Ⅲ属于选择培养基，依据其上生长的菌落特征，可挑选出优良酵母菌种
B. 进行酒精耐受力检测时，需重新制备添加不同浓度酒精的YPD培养基
C. 颜色变化大的培养基中的酵母菌，即为有较强酒精耐受力优良酿酒酵母
D. Ⅰ、Ⅱ均为液体培养基，图中重复操作可提升酿酒酵母的酒精发酵能力
【答案】B
【解析】
【详解】A、WL培养基Ⅲ含有指示剂溴甲酚绿，且优良酿酒酵母能在其上形成奶油状略带绿色、球形的菌落，它属于鉴别培养基，而非选择培养基，A错误；
B、进行酒精耐受力检测时，需要重新制备添加不同浓度酒精的YPD培养基，以此来筛选出酒精耐受力强的酵母菌，B正确；
C、题干明确说明，酒精耐受力弱的酵母，因代谢改变pH导致培养基颜色变化，而优良酵母不会引起明显颜色变化，形成特征菌落，颜色变化大的培养基中的酵母菌，是酒精耐受力弱的酵母，不是优良菌株，C错误；
D、YPD培养基Ⅰ一般为固体培养基，YPD培养基Ⅱ为液体培养基，重复操作是为了筛选出更符合要求的酵母菌，而不是直接提升其酒精发酵能力，D错误。
4. 培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。下列关于利用培养基培养微生物的说法，错误的是（ ）
A. 培养乳酸杆菌的培养基需要加入维生素
B. 培养破伤风芽孢杆菌需要提供无氧条件
C. 除去培养基中成分①可培养硝化细菌
D. 培养基可以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物
【答案】C
【解析】
【详解】A、乳酸杆菌不能自身合成生长必需的维生素，因此培养乳酸杆菌的培养基需要加入维生素，A正确；
B、破伤风芽孢杆菌是厌氧型微生物，氧气会抑制其生命活动，因此培养时需要提供无氧条件，B正确；
C、成分①（NH4）2SO4可以为硝化细菌提供氮源和能量来源，硝化细菌没有固氮能力，除去①后培养基缺乏氮源，无法培养硝化细菌，C错误；
D、培养基的功能包括培养、分离、鉴定、保存微生物，也可用于积累微生物的代谢产物，D正确。
5. 酵母菌细胞壁的主要成分是几丁质。酿酒酵母产酒精能力强，但没有合成淀粉酶的能力；糖化酵母能合成淀粉酶，但酒精发酵能力弱。为了培育优良酵母菌种，实现以谷物为原料高效生产酒精的目的，科研人员进行了如图所示实验。下列叙述正确的是（ ）
A. 可以用纤维素酶处理酵母菌获得两种酵母菌的原生质体
B. 两种原生质体的成功融合说明成功培育出优良酵母菌种
C. 培养基X为选择性培养基，配制时需要淀粉做唯一碳源
D. 以淀粉转化为还原糖的效率作为最终鉴定目的菌的指标
【答案】C
【解析】
【详解】A、酵母菌细胞壁的主要成分是几丁质，可以用几丁质酶处理酵母菌获得两种酵母菌的原生质体，A错误；
B、两种原生质体的成功融合，仅代表细胞融合操作完成，不能直接说明成功培育出优良酵母菌种，融合后的细胞需要经过筛选、鉴定，确认其同时具备“酒精发酵能力强”和“能合成淀粉酶”的优良性状，才能算成功获得目的菌种，B错误；
C、培养基X为以淀粉为唯一碳源的选择培养基，目的是筛选出能利用淀粉，又能产生大量酒精的杂种酵母，C正确；
D、目的菌最终鉴定指标是产酒精的能力，D错误。
6. 人参的代谢物人参皂苷具有抗衰老、抗癌等多种药理作用。通过植物细胞培养、不定根培养、工程酵母系统等生物工程技术，大规模生产人参皂苷。下列叙述正确的是（ ）
A. 人参皂苷是人参属植物基本的生命活动所必需的次生代谢物
B. 植物细胞培养通过提高单个细胞中人参皂苷的含量而实现大量生产
C. 外源基因能够在酵母菌中表达，为人参皂苷的大量生产提供了可能
D. 人参皂苷的工厂化生产需要将高产植物的外植体培养成完整植株后提取
【答案】C
【解析】
【详解】A、次生代谢物不是植物基本生命活动所必需的物质，人参皂苷属于次生代谢物，因此并非人参属植物基本生命活动所必需，A错误；
B、植物细胞培养生产人参皂苷是通过大规模培养细胞，实现细胞数量的大量增殖，从而提高人参皂苷的总产量，并非提高单个细胞中的人参皂苷含量，B错误；
C、不同生物共用一套遗传密码，因此人参的相关外源基因能够在酵母菌中表达，合成人参皂苷，为人参皂苷的大量生产提供了可能，C正确；
D、人参皂苷的工厂化生产只需要通过植物细胞培养获得大量愈伤组织或细胞团即可提取，不需要培养成完整植株，D错误。
7. 中国科研团队利用3D生物打印结合动物细胞培养技术，成功制备人造皮肤，修复多名伤病员难愈性皮肤创面，下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是（ ）
A. 动物细胞培养时，添加CO2的主要作用是维持培养液的pH和刺激细胞呼吸
B. 为防止动物细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量抗生素
C. 动物细胞培养的培养液只需进行消毒处理，避免高温灭菌破坏营养成分
D. 培养瓶中的细胞都需要定期用胰蛋白酶处理，分瓶后才能继续增殖
【答案】B
【解析】
【详解】A、动物细胞培养时，添加CO2的主要作用仅为维持培养液的pH，刺激细胞呼吸的气体是O2，CO2没有刺激细胞呼吸的作用，A错误；
B、抗生素能够抑制细菌的生长繁殖，向培养液中加入适量抗生素可有效防止动物细胞培养过程中的细菌污染，B正确；
C、消毒仅能杀死物体表面的部分微生物，无法满足动物细胞培养的无菌要求，培养液必须进行灭菌处理，可通过过滤灭菌等方式避免高温破坏营养成分，C错误；
D、只有贴壁生长且出现接触抑制的细胞需要用胰蛋白酶处理后分瓶，悬浮培养的细胞不需要经胰蛋白酶处理即可分瓶传代，D错误。
8. “早早孕试剂诊断盒”是利用女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白（HCG）制作的单克隆抗体，下图是抗HCG单克隆抗体制备流程示意图。下列叙述正确的是（ ）
A. 灭活病毒诱导法中病毒的抗原结构被破坏、失去感染力
B. 只考虑两两融合，克隆化培养液中的细胞一共有5种融合细胞
C. 大规模培养时可通过胰蛋白酶处理，避免发生接触抑制
D. 图中涉及到的原理有动物细胞膜的流动性和细胞增殖
【答案】D
【解析】
【详解】A、灭活病毒诱导法中，病毒的抗原结构没有被破坏，仍保留抗原性，只是失去感染力，A错误；
B、考虑两两融合，会产生B淋巴细胞-B淋巴细胞、骨髓瘤细胞-骨髓瘤细胞、B淋巴细胞-骨髓瘤细胞这3种融合细胞，再加上未融合的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，共5种细胞，但经过HAT培养基筛选后，存活的只有B淋巴细胞-骨髓瘤细胞，所以进行克隆化培养的细胞是杂交瘤细胞（B淋巴细胞-骨髓瘤细胞），B错误；
C、杂交瘤细胞具有骨髓瘤细胞的无限增殖特性，无接触抑制现象，无需酶解处理，C错误；
D、诱导细胞融合利用了动物细胞膜的流动性，而培养过程中细胞进行增殖，所以图中涉及到的原理有动物细胞膜的流动性和细胞增殖，D正确。
9. 下列关于细胞工程操作流程的表述，不正确的是（ ）
A. 动物组织细胞悬液→原代培养传代培养
B. 高产奶牛体细胞去核的牛卵母细胞重组细胞
C. B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合细胞单克隆抗体
D. 菊花幼嫩茎段切成0.5~1 cm长的小段愈伤组织植株
【答案】D
【解析】
【分析】根据植物组织培养的过程可知，菊花幼嫩茎段经过自来水冲洗后，需要用70%酒精消毒，用无菌水清洗后再用次氯酸钠溶液处理30min，无菌水清洗吸干水分后再切成0.5~1 cm长的小段，先接种到脱分化培养基上形成愈伤组织，再转接到分化培养基上培养，形成试管苗后，继续分裂和分化最终形成植株。
【详解】A、根据动物细胞培养的过程分析，取动物组织块剪碎，用胰蛋白酶处理分散成单个细胞，制成细胞悬液后在培养瓶中进行原代培养，分散的细胞会逐渐贴壁生长，进而出现接触抑制现象，需要重新用胰蛋白酶处理，然后进行传代培养，A正确；
B、根据动物体细胞核移植的过程分析，取供体高产奶牛体细胞，注入受体母牛去核的MⅡ期卵母细胞，通过电刺激使两细胞融合，供体核进入受体卵母细胞，构建重组胚胎，再将胚胎移入受体母牛体内，B正确；
C、根据单克隆抗体制备过程可知，将已免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞利用灭活的病毒或PEG等诱导，可获得融合细胞，然后需要利用选择培养基筛选杂交瘤细胞，并进行抗原抗体杂交以获得能产生特定抗体的杂交瘤细胞，最后在体外大规模培养，即可提取大量单克隆抗体，C正确；
D、根据植物组织培养的过程可知，菊花幼嫩茎段经过自来水冲洗后，需要用70%酒精消毒，用无菌水清洗后再用次氯酸钠溶液处理30min，无菌水清洗吸干水分后再切成0.5~1 cm长的小段，先接种到脱分化培养基上形成愈伤组织，再转接到分化培养基上培养，形成试管苗后，继续分裂和分化最终形成植株，D错误。
故选D。
10. 科研人员利用野生森林猫和中华田园猫培育出首只猫科克隆动物“平安”。实验流程如图所示。下列叙述正确的是（ ）
A. 过程①采用了胚胎细胞核移植技术，技术难度小于体细胞核移植技术
B. 卵母细胞需先通过显微操作去除细胞核，再培养至减数分裂Ⅱ中期
C. 过程②模拟了哺乳动物早期胚胎发育过程，囊胚中没有胚胎干细胞
D. 克隆猫培育成功，说明卵母细胞中可能存在使体细胞核表现全能性的物质
【答案】D
【解析】
【详解】A、过程①是将成纤维细胞的细胞核移入到去核卵母细胞中，为体细胞核移植，技术难度大于胚胎核移植技术，A错误；
B、接受供体细胞核前，卵母细胞需先培养至减数分裂Ⅱ中期，再通过显微操作去核，B错误；
C、囊胚中的内细胞团细胞具有发育的全能性，属于胚胎干细胞，C错误；
D、克隆猫培育成功，说明卵母细胞细胞质中某些物质可促使体细胞细胞核表现出全能性，D正确。
11. 胚胎工程技术为现代畜牧业提供了快速繁育优良品种的途径。下列关于哺乳动物胚胎工程的叙述，正确的是（ ）
A. 体外受精时，将获能处理的精子与卵细胞进行共同培养完成受精
B. 高等动物早期胚胎发育顺序为受精卵→囊胚→桑葚胚→原肠胚
C. 早期胚胎发育的卵裂期，细胞数量增加但胚胎总体积并不增加
D. 进行胚胎分割时，可选择发育正常的桑葚胚并将其内细胞团均等分割
【答案】C
【解析】
【详解】A、体外受精时，获能精子需要和培养至减数第二次分裂中期的成熟卵母细胞共同培养才能完成受精，未成熟的卵细胞无法完成受精过程，A错误；
B、高等动物早期胚胎发育的正确顺序为受精卵→桑葚胚→囊胚→原肠胚，B错误；
C、卵裂期细胞通过有丝分裂持续增殖，细胞数量不断增加，但胚胎的总体积并不增加，甚至略有缩小，C正确；
D、内细胞团是囊胚阶段才分化形成的结构，桑葚胚无内细胞团；只有对囊胚进行分割时，才需要将内细胞团均等分割，D错误。
12. DNA连接酶是基因工程中最常用的工具酶。下列箭头指向处属于DNA连接酶正确连接位点的是（ ）
A. B.
C. D.
【答案】C
【解析】
【详解】DNA连接酶的作用是将限制酶切下来的DNA片段拼接成新的DNA分子，单链DNA中，5′端存在游离的磷酸基团(P)，3′端存在-OH，两个DNA片段之间的磷酸基团(P)和-OH在DNA连接酶作用下形成磷酸二酯键，ABD错误，C正确。
13. 科学家利用重组DNA技术将人工改造后的某植物的抗虫基因导入大肠杆菌，通过发酵工程大规模生产抗虫蛋白，用于制备生物杀虫剂。下列关于重组DNA技术操作过程中所用工具的叙述，正确的是（ ）
A. 可用DNA聚合酶将抗虫基因与质粒进行连接
B. 限制酶能特异性识别并切割抗虫基因和质粒的特定脱氧核苷酸序列
C. 质粒可作为载体，其本质是大肠杆菌的拟核DNA
D. 抗虫基因与质粒连接过程须用到解旋酶来断开氢键
【答案】B
【解析】
【详解】A、将抗虫基因与质粒连接的酶是DNA连接酶，DNA聚合酶的作用是催化单个脱氧核苷酸连接到DNA链上，用于DNA复制过程，A错误；
B、限制酶具有专一性，能特异性识别特定的脱氧核苷酸序列，并在特定位点切割磷酸二酯键，构建重组载体时需用同种（或同尾）限制酶切割目的基因和质粒，以获得相同的末端，B正确；
C、质粒是独立于大肠杆菌拟核DNA之外的小型环状双链DNA分子，C错误；
D、抗虫基因与质粒连接时仅需DNA连接酶催化形成磷酸二酯键，不需要解旋酶，解旋酶的作用是断开氢键，用于DNA复制过程，D错误。
14. 某同学在进行菜花DNA的粗提取与鉴定实验时，发现最终提取到的DNA总量较少。下列操作与提取到的DNA总量较少无关的是（ ）
A. 将适量菜花切碎后放入研钵中，倒入10mL蒸馏水充分研磨
B. 研磨液置于实验台静置几分钟，分层后提取上清液
C. 向上清液中加入等体积预冷的体积分数为95%的酒精溶液
D. 用玻璃棒沿不同方向快速搅拌，使DNA析出形成丝状物
【答案】C
【解析】
【详解】A、植物细胞有细胞壁支持保护，仅加蒸馏水研磨无法使细胞充分胀破，DNA释放量少，会导致最终提取的DNA总量减少，A不符合题意；
B、研磨液静置后部分DNA会附着在细胞碎片等沉淀物中，仅提取上清液会损失这部分DNA，导致提取总量减少，B不符合题意；
C、DNA不溶于体积分数为95%的冷酒精，加入等体积该试剂是DNA析出的标准操作，不会造成DNA总量损失，与提取量少无关，C符合题意；
D、DNA为大分子易断裂，不同方向快速搅拌会打碎DNA分子，使可收集的DNA丝状物减少，导致提取总量降低，D不符合题意。
15. 科学家将苏云金杆菌中的Bt基因通过农杆菌转化法导入棉花叶肉细胞，利用植物组织培养获得棉花植株。经棉铃虫饲喂实验，发现棉花植株并无抗虫性状，科学家提取棉花叶片细胞中的有关成分进行了如下检测，下列分析正确的是（ ）
A. 对细胞中蛋白质进行抗原-抗体杂交检测，若无杂交带，说明Bt基因不能转录
B. 采用核酸分子杂交技术检测细胞中mRNA，若无杂交带，说明Bt基因无法复制
C. 采用PCR技术检测Bt基因，若能测到结果，说明可能Bt基因反向插入T-DNA
D. 采用PCR技术没有检测Bt基因，说明Bt基因没有成功导入土壤农杆菌质粒中
【答案】C
【解析】
【详解】A、抗原-抗体杂交用于检测目的基因是否翻译出对应蛋白质，若无杂交带说明Bt基因未成功翻译，也可能存在已转录但未翻译的情况，A错误；
B、核酸分子杂交检测mRNA是检测目的基因是否完成转录，若无杂交带说明Bt基因未转录，与基因复制无关，B错误；
C、PCR能检测到Bt基因说明Bt基因已成功导入棉花细胞，若Bt基因反向插入T-DNA，会导致基因无法正常启动转录，进而无法表达出抗虫蛋白，符合题干无抗虫性状的情况，C正确；
D、PCR未在棉花细胞中检测到Bt基因，可能是Bt基因未导入农杆菌，也可能是农杆菌中的Bt基因未成功转移到棉花叶肉细胞中，D错误。
二、选择题：本题共5小题，每小题3分，共15分。每小题有一个或多个选项符合题目要求，全部选对得3分，选对但不全的得1分，有选错的得0分。
16. 利用某方法测定野生菌株B的数量，在同一稀释倍数下3个平板上均接种0.1mL样品溶液，菌落数分别为156、178、191，经计算得知每毫升原样品溶液中含有目的菌1.75×108个。该菌经人工诱变后，形成了某种氨基酸缺陷型菌株C和D，培养情况如表所示。下列叙述错误的是（ ）
A. 据结果可推测，上述测定过程中样液稀释倍数为1×104倍
B. 接种前需要对涂布器进行酒精消毒以彻底排除杂菌的干扰
C. 结果表明菌株C中可能是控制合成氨基酸甲相关酶的基因发生突变
D. 结果表明菌株C可能为菌株D提供生长所需的氨基酸乙
【答案】AB
【解析】
【详解】A、统计的菌落数应介于30～300之间，故选择细菌菌落数为156、178和191的平板计数，每毫升原样品溶液中的菌落数为（156+178+191）÷3÷0.1×稀释倍数=1.75×108个，因此稀释倍数为1×105，A错误；
B、接种前对涂布器进行酒精消毒，之后还需将涂布器在酒精灯火焰上灼烧灭菌，仅酒精消毒不能彻底排除杂菌的干扰，B错误；
C、突变株C不能在一般培养基上生长的直接原因是不能合成氨基酸甲，其原因是合成氨基酸甲的酶不能合成，其根本原因是控制合成氨基酸甲的酶的基因发生突变，C正确；
D、由表格分析可知，突变株C的生长依赖于氨基酸甲，突变株D的生长依赖于氨基酸乙。不添加氨基酸甲和乙，二者混合培养时都能生长，最可能的原因是菌株D为菌株C提供生长所需的氨基酸甲，菌株C为菌株D提供生长所需的氨基酸乙，D正确。
17. 紫草宁是从紫草细胞中提取的一种药物和色素，有抗菌、消炎和抗肿瘤等活性。利用植物细胞培养生产的紫草宁是世界上首例药用植物细胞工程产品。下列相关说法错误的是（ ）
A. 紫草宁具有抗菌作用，因此生产时不需要进行无菌操作
B. 植物组织培养时，应对外植体进行灭菌处理以防止杂菌污染
C. 可以对紫草茎尖细胞进行植物组织培养以获取脱毒植物
D. 可将紫草愈伤组织细胞置于低渗溶液中涨破以提取紫草宁
【答案】ABD
【解析】
【详解】A、紫草宁虽有抗菌作用，但生产时仍需进行无菌操作，因为杂菌可能会与培养的细胞竞争营养等，影响紫草宁的生产，A错误；
B、植物组织培养时，应对外植体进行消毒处理，而不是灭菌处理，灭菌会将外植体的细胞杀死，B错误；
C、茎尖细胞病毒极少甚至无病毒，所以可以对紫草茎尖细胞进行植物组织培养以获取脱毒植物，C正确；
D、植物细胞有细胞壁，不能置于低渗溶液中涨破来提取紫草宁，D错误。
18. 大熊猫是我国特有的珍稀濒危野生动物，繁殖率低是其种群延续的重要限制因素。为扩大大熊猫种群数量，结合克隆与试管动物技术，科研人员设计了如图所示的繁殖方案，下列叙述正确的是（ ）
A. 通常用外源促性腺激素释放激素处理甲，诱导其超数排卵
B. 从乙获取的精子需要诱导其获能，获能液中常添加肝素等
C. 可用显微操作去核，核移植时用PEG法诱导两细胞融合
D. 克隆熊猫和试管熊猫的性别因繁殖方式不同而不一定相同
【答案】BCD
【解析】
【详解】A、通常用外源促性腺激素处理甲，诱导其超数排卵，A错误；
B、获取的精子需要诱导其获能，获能液中常添加肝素、钙离子载体等，B正确；
C、用显微操作去核，核移植时用PEG法或电融合法诱导两细胞融合，C正确；
D、克隆熊猫（核移植）性别完全由供核个体的性染色体决定，性别是固定的（和供核个体完全一致，试管熊猫（体外受精）性别由精子的性染色体决定，精子携带X染色体则为雌性，携带Y染色体则为雄性，性别是随机的，因此克隆熊猫性别固定，试管熊猫性别随机，二者的性别可能相同，也可能不同，即“不一定相同”，D正确。
19. 关于“DNA片段的扩增及电泳鉴定”实验，下列说法错误的是（ ）
A. 根据DNA片段大小配制一定质量分数的琼脂糖溶液以便分离DNA分子
B. 待指示剂前沿迁移到达凝胶加样孔边缘时需停止电泳以防DNA跑出凝胶
C. PCR反应需在反应体系中添加一定量的无菌水，以补齐反应体系体积
D. 扩增得到的PCR产物与凝胶载样缓冲液混匀后需缓慢注入加样孔中
【答案】B
【解析】
【详解】A、琼脂糖凝胶的浓度会影响DNA分子的分离效果，DNA片段越大，需要的琼脂糖浓度越低，所以需要根据DNA片段大小配制合适质量分数的琼脂糖溶液，A正确；
B、电泳时，当指示剂前沿迁移到凝胶边缘（不是加样孔边缘）时需要停止电泳，否则DNA会跑出凝胶，B错误；
C、PCR反应体系需要按照配方配制，添加无菌水是为了补齐反应体系的体积，保证各试剂的浓度符合要求，C正确；
D、PCR产物与载样缓冲液混匀后，需要缓慢注入加样孔，防止样品溢出或加样孔被破坏，D正确。
20. 人干扰素（IFN）是机体免疫细胞产生的一类细胞因子。用白细胞生产干扰素时，产量低且保存困难。如果通过基因工程技术将干扰素分子上的一个半胱氨酸变为丝氨酸，利用大肠杆菌发酵生产可以快速生产大量可以延长保存时间的干扰素分子。原理如图所示，下列说法错误的是（ ）
A. 基因工程核心步骤需要的工具酶有质粒、限制酶、DNA连接酶
B. 通过显微注射技术将重组质粒导入大肠杆菌后，干扰素基因就能表达
C. 酵母菌或大肠杆菌都可作受体菌，二者生产的干扰素在结构上完全一样
D. 为延长保存时间，对干扰素进行改造，需通过改造干扰素基因来实现
【答案】ABC
【解析】
【详解】A、基因工程核心步骤是基因表达载体的构建，需要的工具酶是限制酶、DNA连接酶，质粒是运载体，A错误；
B、将重组质粒导入大肠杆菌的常用方法是Ca²⁺处理，显微注射技术主要用于将目的基因导入动物细胞；且导入后还需目的基因成功转录、翻译，干扰素基因才能表达，并非导入就一定表达，B错误；
C、酵母菌是真核生物，大肠杆菌是原核生物（没有内质网和高尔基体），干扰素是糖蛋白，蛋白质的糖链是在内质网和高尔基体上加工完成的，所以二者生产的干扰素在结构上会存在一定的区别，C错误；
D、为延长保存时间，对干扰素进行的改造属于蛋白质工程，需要通过改造干扰素基因来实现，D正确。
三、非选择题：本题共5题，共55分。
21. 葡萄酒富含糖、氨基酸、维生素等营养物质，可以缓解食欲不振、精神困倦、失眠的作用，葡萄醋含有丰富的维生素及矿物质，可降低血液中的胆固醇含量。以鲜葡萄为原料利用发酵瓶制作葡萄酒和葡萄醋的过程如图1所示，请分析回答：
（1）葡萄酒的自然发酵过程中，起作用的主要是附着在葡萄皮上的________。若利用图2所示生产工艺流程制作葡萄酒，其中冲洗的目的是________。葡萄榨汁前需要除去枝梗，此操作是在冲洗________（填“前”或“后”）进行的。
（2）为适当提高果酒的生产速率，充气口应________；排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身相连，这样做的目的是________。为验证葡萄酒制作是否成功，可将发酵液用酸性重铬酸钾来鉴定，若出现_______色，则说明有果酒产生。
（3）通过过程乙制作葡萄醋需要的菌种是________，在________（有氧/无氧）条件下，进行果醋发酵，写出相应的反应式：________。减少充气口带来的空气中杂菌污染的措施有________。
【答案】（1） ①. 野生型酵母菌 ②. 洗去浮尘 ③. 后
（2） ①. 先打开后关闭 ②. 既可以放气，又可防止污染 ③. 灰绿色
（3） ①. 醋酸菌 ②. 有氧 ③. ④. 在充气口设置过滤装置（如无菌棉花、除菌滤膜），对通入的空气进行灭菌处理
【解析】
【小问1详解】
葡萄酒自然发酵的菌种是附着在葡萄皮上的野生型酵母菌；冲洗的目的是洗去浮尘；除去枝梗要在冲洗后进行，若先去枝梗，会造成葡萄破损，增加被杂菌污染的风险；
【小问2详解】
由于酵母菌为兼性厌氧菌，为适当提高果酒的生产速率，充气口应先打开后关闭，排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身相连，这样做的原因是既可以放气，又可防止污染；酒精和酸性的重铬酸钾反应溶液由橙色变成灰绿色，因此葡萄酒制作是否成功，发酵后可在酸性条件下用重铬酸钾溶液来鉴定，若出现灰绿色，则说明有果酒产生；
【小问3详解】
果醋发酵的菌种是醋酸菌，醋酸菌为好氧菌，需在有氧条件下发酵；进行果醋发酵，相应的反应式：；减少充气口杂菌污染的措施是在充气口设置过滤装置（如无菌棉花、除菌滤膜），对通入的空气进行灭菌处理。
22. 地球上的植物每年产生的纤维素超过70亿吨，其中40%～60%能被土壤中某些微生物分解利用。科研人员从森林土壤中筛选纤维素分解菌并计数，进行了如图所示操作。请回答下列有关问题：
（1）防止杂菌污染，________是研究和应用微生物的前提，也是发酵工程的重要基础。在提取分离过程中，对吸管、培养皿通常采用________法进行灭菌，对操作的空间、操作者的衣着和手进行________。筛选时所用的培养基需添加________作为唯一碳源。
（2）图中的接种方法是________。用该计数方法得到的菌落数量比活菌的实际值小，原因是________；若用显微镜计数法统计，结果比实际活菌数________（偏大/偏小），原因是________。
（3）可通过________（填“甲”或“乙”）菌落周围的透明圈判断其分解纤维素能力更强，判断依据是________。
若将稀释倍数是105的菌液涂布平板，3个平板平均菌落数分别为111，120，129，则每1mL菌液中活菌数为________个。
【答案】（1） ①. 获得纯净的微生物培养物 ②. 干热灭菌 ③. 消毒 ④. 纤维素
（2） ①. 稀释涂布平板法 ②. 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 ③. 偏大 ④. 显微镜计数法将死菌也计数在内
（3） ①. 甲 ②. 甲菌落产生的透明圈大，乙菌落产生透明圈较小 ③. 1.2×108
【解析】
【小问1详解】
防止杂菌污染，获得纯净的微生物培养物是研究和应用微生物的前提、也是发酵工程的重要基础。在提取分离过程中，对吸管、培养皿通常采用干热灭菌法进行灭菌，对操作的空间、操作者的衣着和手进行消毒。因为要筛选纤维素分解菌，所以筛选时所用的培养基需添加纤维素作为唯一碳源。
【小问2详解】
图中的接种方法是稀释涂布平板法。用该计数方法得到的菌落数量比活菌的实际值小，原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落；若用显微镜计数法统计，由于显微镜计数法将死菌也计数在内，所以结果比实际活菌数偏大。
【小问3详解】
甲菌落产生的透明圈大，乙菌落产生透明圈较小，说明甲菌落分解纤维素的能力更强。若将稀释倍数是105的菌液涂布平板，3个平板平均菌落数分别为111、120、129，则每1mL菌液中活菌数为（111+120+129）÷3÷0.1×105=1.2×108个。
23. 人们希望种植地上结番茄、地下长马铃薯的“超级作物”。经过长期实验，科学家采用体细胞杂交的方法得到了“番茄—马铃薯”杂种植株，培育过程如图所示。请回答下列问题：
（1）植物细胞的细胞壁阻碍着细胞间的杂交，在进行体细胞杂交之前，必须先用________处理以获得________，之后诱导二者融合的方法除用PEG处理外，还有________（答两点）等具体方法。
（2）原生质体融合完成的标志是________，⑤过程的实质是________。和传统杂交技术相比，植物体细胞杂交技术的优点是________。
（3）由杂种细胞培育成试管苗，需要经过细胞的④________和⑤再分化过程。体现了植物体细胞的________。
（4）“番茄—马铃薯”杂种植株实际上地上不结番茄，地下没长马铃薯，原因可能是________。
【答案】（1） ①. 纤维素酶和果胶酶 ②. 原生质体 ③. 电融合法、离心法
（2） ①. 杂种细胞再生出细胞壁 ②. 基因的选择性表达 ③. 克服远缘杂交不亲和的障碍
（3） ①. 脱分化 ②. 全能性
（4）生物体内基因的表达不是孤立的，它们之间是相互调控、相互影响的。杂种植株虽然具有两个物种的遗传物质，但这些遗传物质的表达会相互干扰，无法有序表达，故无法实现地上结番茄、地下长马铃薯
【解析】
【小问1详解】
植物细胞细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，根据酶的专一性，要用纤维素酶和果胶酶处理植物细胞，以去除细胞壁获得原生质体，诱导原生质体融合的方法，除了用PEG（聚乙二醇）处理外，还有电融合法、离心法等。
【小问2详解】
原生质体融合完成的标志是杂种细胞再生出细胞壁，⑤过程是再分化，其实质是基因的选择性表达。与传统杂交技术相比，植物体细胞杂交技术能够克服远缘杂交不亲和的障碍，因为传统杂交技术受物种亲缘关系的限制，而体细胞杂交可以打破这种限制。
【小问3详解】
由杂种细胞培育成试管苗，需要经过脱分化和再分化过程，图中④为脱分化。该过程体现了植物体细胞具有全能性，即已分化的细胞仍具有发育成完整个体的潜能。
【小问4详解】
生物体内基因的表达不是孤立的，它们之间是相互调控、相互影响的。“番茄-马铃薯”虽然具有两个物种的遗传物质，但这些遗传物质的表达受到相互干扰，不能再有序表达，所以获得的“番茄-马铃薯”，没有实现地上长番茄、地下结马铃薯。
24. 抗体—药物偶联物是肿瘤治疗最有效的手段之一，其基本原理是将特定的药物与单克隆抗体结合在一起，可特异性地杀死患者体内的癌细胞，基本过程如图所示。回答下列问题：
（1）给小鼠多次注射特定抗原，从小鼠的________（免疫器官）中获取________（已免疫的B淋巴细胞/浆细胞）。多次注射同种抗原的目的是________。
（2）过程③用________对细胞乙进行筛选，所得细胞丙的特点是________。过程④对细胞丙进行________培养和抗体检测，最终得到细胞丁，其中检测时所采用的操作技术的原理是________。
（3）体外培养杂交瘤细胞的培养基，还需要加入________。细胞体外培养需要精准调控培养条件，成本较高，与之相比，通过小鼠体内培养获得抗体的优势有________。
（4）紫杉醇能阻止肿瘤细胞有丝分裂，促进其凋亡，用单克隆抗体与紫杉醇结合研制而成的“生物导弹”，对某些癌症患者有较好的疗效，这利用的是单克隆抗体的_______（填“导向”或“治疗”）功能。“生物导弹”中单克隆抗体能识别癌变细胞并与之结合，不攻击正常细胞，这体现了单克隆抗体具有_______的优点。
【答案】（1） ①. 脾脏 ②. 已免疫的B淋巴细胞 ③. 获取较多的已经免疫的B淋巴细胞
（2） ①. 选择培养基 ②. 既能大量增殖，又能产生抗体 ③. 克隆化 ④. 细胞增殖和抗原与抗体的特异性结合
（3） ①. 动物血清 ②. 操作容易、成本较低
（4） ①. 导向 ②. 特异性强
【解析】
【小问1详解】
给小鼠多次注射特定抗原，从小鼠的脾脏中获取已免疫的B淋巴细胞，为后续的动物细胞融合作准备。多次注射同种抗原的目的是获取数量较多的B淋巴细胞。
【小问2详解】
过程③用选择培养基对细胞乙进行筛选，获得的是杂交瘤细胞，所得细胞丙的特点是既能产生抗体，也能大量增殖。过程④对细胞丙进行克隆化培养和抗体检测，进而可以获得足够数量的能产生所需抗体的杂交瘤细胞，即细胞丁，该过程所采用的操作技术的原理是细胞增殖和抗原与抗体的特异性结合。
【小问3详解】
体外培养杂交瘤细胞的培养基，还需要加入动物血清，这样可以弥补动物细胞生长的未知营养。细胞体外培养需要精准调控培养条件，成本较高，与之相比，通过小鼠体内培养获得抗体的优势有操作容易（培养条件不需要人为控制）、成本较低，但小鼠腹腔内获取的单克隆抗体产量较低。
【小问4详解】
紫杉醇能阻止肿瘤细胞有丝分裂，促进其凋亡，用单克隆抗体与紫杉醇结合研制而成的“生物导弹”，对某些癌症患者有较好的疗效，这利用的是单克隆抗体的“导向”功能，能够实现定向治疗，降低副作用，“生物导弹”中单克隆抗体能识别癌变细胞并与之结合，不攻击正常细胞，这体现了单克隆抗体的特异性强的优点，此外还具有在体外大量制备的优点。
25. 某种能以甲醇为唯一碳源的酵母菌可作为生产抗原蛋白的工程菌。研究人员以图1所示质粒为载体，构建含乙型肝炎病毒表面抗原蛋白（HBsAg）基因的重组质粒，将重组质粒导入组氨酸缺陷型大肠杆菌（在缺失组氨酸的培养基中无法生存）中进行扩增，再经酶切后导入酵母菌，经同源重组整合到其染色体DNA上。请回答下列问题：
（1）基因工程又称_______技术，利用PCR技术扩增HBsAg基因，需要原料，酶和引物等参与，为了特异性扩增HBsAg基因序列，需根据________设计特异性引物，为保证目的基因能与质粒连接，还需在引物的________端添加限制酶的识别序列。
（2）已知HBsAg基因的a链的部分序列为5'-CGCTACTCATTGCTGCG……CGGAT-GAGCGCGTAGAT-3'。利用PCR技术获取HBsAg基因时，引物M与________（填“a链”或“b链”）的部分序列相同。某同学设计了如下的4种引物，引物M、N对应的序列分别为________、________。
A．5'-GGATCCATCTACGCGCTCATCCG-3'
B．5'-CCCGGGCGCTACTCATTGCTGCG-3'
C．5'-CGCAGCAATGAGTAGCGGGGCCC-3'
D．5'-CGGATGAGCGCGTAGATGGATCC-3'
（3）科研人员构建HBsAg基因表达载体时，应选用________酶对质粒进行酶切处理，并使用E.cliDNA连接酶将扩增后的HBsAg基因正确插入图1所示质粒。质粒上诱导型启动子的作用是________。
（4）将重组载体导入大肠杆菌时，应在_________的培养基上进行筛选。将重组质粒导入大肠杆菌的目的是________。
（5）转化的酵母菌在培养基上培养时，需向其中加入甲醇，目的是________。
【答案】（1） ①. 重组DNA ②. HBsAg基因（目的基因）两端的脱氧核苷酸序列 ③. 5’
（2） ①. a ②. B ③. A
（3） ①. Xma Ⅰ和Bcl Ⅰ ②. 作为RNA聚合酶识别和结合的位点，可被甲醇诱导，驱动目的基因转录
（4） ①. 缺失组氨酸且添加氨苄青霉素 ②. 大量扩增目的基因（HBsAg基因）
（5）提供碳源，启动甲醇代谢相关的基因表达，从而启动目的基因的表达。
【解析】
【小问1详解】
基因工程又称重组DNA技术，利用PCR技术扩增HBsAg基因，需要原料，酶和引物等参与，为了特异性扩增HBsAg基因序列，需根据目的（HBsAg）基因两端的碱基序列设计特异性引物，为保证目的基因能与质粒连接，还需在引物的5'端添加相应的酶切位点，这样可以方便目的基因的切割。
【小问2详解】
图中HBsAg基因转录的模板链为b链，且目的基因和甲醇启动子转录方向一致，因而b链的左侧为3’端，在PCR技术获取HBsAg基因时，引物是与模板链的3'端结合，因此，引物M结合的单链是b链，部分序列与a链相同。同时需要在引物的5'端添加限制酶酶切位点，根据目的基因上和质粒上的酶切位点可知，切割目的基因用的BamH Ⅰ和Bcl Ⅰ为同尾酶，因而，需要在引物M、N的5’端分别添加限制酶Smal/Xma Ⅰ和BamH Ⅰ的酶切序列，因而可以判断引物M的序列应为5′−CCCGGGCGCTACTCATTGCTGCG−3′，故选B，其中前六个碱基是在引物的5’端加了限制酶的序列CCCGGG。而引物N与a链的3’端结合互补配对，引物N的前六个碱基是在引物N的5’端加上了限制酶序列GGATCC，即5′−GGATCCATCTACGCGCTCATCCG−3′，故选A。
【小问3详解】
结合题（2）可知，科研人员构建HBsAg基因表达载体时，应选用Xma Ⅰ和Bcl Ⅰ酶对质粒进行酶切处理，这样可获得与目的基因两端相同的黏性末端，保证E.cliDNA连接酶将扩增后的HBsAg基因正确插入图1所示质粒。质粒上诱导型启动子的作用是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA，该启动子需要在甲醇的诱导下起作用。
【小问4详解】
将重组载体导入大肠杆菌时，应在含有氨苄青霉素、不含组氨酸的培养基上进行筛选，能存活下来的大肠杆菌是导入了重组质粒的大肠杆菌，因为大肠杆菌是组氨酸缺陷型，只有导入携带HIS4（合成组氨酸）和氨苄青霉素抗性基因（AmpR）的质粒才能存活，因此选择缺失组氨酸、添加氨苄青霉素的培养基筛选；题意显示将重组质粒导入大肠杆菌是为了扩增目的基因，获得大量拷贝的HBsAg基因。
【小问5详解】
转化的酵母菌在培养基上培养时，需要向其中加入甲醇。加入甲醇的作用有两点：一是提供碳源，促进酵母菌的生长和代谢；二是启动甲醇代谢相关的基因表达，从而启动目的基因的表达。实验编号
菌种来源或处理方式
关键操作及控制条件
原理及分析
①果醋
空气中的醋酸杆菌
30℃恒温培养，持续通入无菌空气
醋酸杆菌为好氧菌，有氧条件产醋酸。
②腐乳
扩大培养从腐乳表面分离纯化的毛霉菌种
湿度85%，15℃恒温，豆腐块间留空隙，随层数增多增加盐量，后期卤汤腌制
加盐能有效防止杂菌污染，后期卤汤主要目的是抑制微生物生长
③果酒
葡萄皮表面的酵母菌
前期通气，后期密封
前期通气保障酵母菌大量繁殖，后期密封无氧呼吸产生酒精
④泡菜
自然附着的乳酸菌
泡菜坛边缘水槽注满水，定期补水
创造无氧环境，满足乳酸菌无氧呼吸需求，抑制好氧杂菌
编号
①
②
③
④
⑤
成分
（NH4）2SO4
KH2PO4
FeSO4
CaCl2
H2O
含量
0.4g
4.0g
0.5g
0.5g
100mL
接种的菌种
一般培养基
实验处理和结果
野生菌株B
能生长
不处理
诱变菌株C
不生长
添加氨基酸甲，能生长
诱变菌株D
不生长
添加氨基酸乙，能生长
诱变菌株C+D
能生长
不添加氨基酸甲、乙，都能生长