人教版 (2019)选择性必修3动物细胞工程集体备课课件ppt

这是一份人教版 (2019)选择性必修3动物细胞工程集体备课课件ppt，共46页。PPT课件主要包含了动物细胞融合技术，离心法，聚乙二醇PEG法，灭活病毒诱导法，动物细胞融合特有，单克隆抗体及其应用，如何筛选，不能无限增殖死亡，不能合成DNA死亡，杂交瘤细胞等内容，欢迎下载使用。
运用植物体细胞杂交技术，可以跨越不同种植物之间生殖隔离的屏障，培育出新的作物类型。
有没有技术能让不同种动物的体细胞进行杂交，培育出集不同细胞的优势于一身的动物细胞呢？
动物细胞融合技术（cell fusin technique）就是使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。
融合后形成的杂交细胞具有原来两个或多个细胞的遗传信息。
形成的杂交细胞具有原来两个或多个细胞遗传信息的。
细胞膜具有一定的流动性。
与植物原生质体融合的方法相同
动物细胞没有细胞壁，可以直接诱导融合。
灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，并不破坏它们的抗原结构。
动物细胞就像植物的原生质体一样，即使相互紧贴在一起也不会自动发生融合，需要提供一些特殊的诱导因素。
灭活的病毒黏附于细胞表面
细胞质膜被病毒颗粒穿通
细胞质膜融合 ，细胞质流通
突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。
①至今，种间、属间、科间，甚至动物和植物之间的细胞融合都已获得成功。
②研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。
③为制造单克隆抗体开辟了新途径。
细胞膜具有一定的流动性、植物细胞的全能性
细胞膜具有一定的流动性
用果胶酶和纤维素酶去除细胞壁
用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散成单个细胞
聚乙二醇（PEG）融合法、电融合法、离心法；高Ca2+-高pH融合法
聚乙二醇（PEG）融合法、电融合法、灭活病毒诱导法
打破生殖隔离，实现远缘杂交育种，培育植物新品种
突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能
主要用于制造单克隆抗体
由血清中提取的抗体是由不同浆细胞产生的多种抗体的混合物，可达百万种以上。
每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体
问题:若我们只需要大量抗体1，有什么办法吗？
向动物体内反复注射某种抗原
大量纯度高特异性强的抗体（单克隆抗体）
克隆单一的B淋巴细胞，形成B淋巴细胞群，由细胞群产生大量的纯度高的抗体
一个正常的B淋巴细胞不可能无限增殖的。怎样才能使B细胞在产生抗体的同时，具备无限增殖能力呢？
大量制备单一抗体的思路：
能产生抗体1，但不能大量增殖
能无限增殖，但不能产生抗体
既能无限增殖，又能产生专一性抗体
骨髓瘤细胞 （能无限增殖）
一种B淋巴细胞（只分泌一种特异性抗体）
既能迅速大量增殖，又能产生专一抗体
极富创造性的实验方案:
米尔斯坦和科勒制备单克隆抗体过程的示意图
用特定的抗原对小鼠进行免疫，并从该小鼠的脾中得到能产生特定抗体的 B 淋巴细胞。
从小鼠脾脏中获取B淋巴细胞
融合后会出现哪些不同细胞？
……等多种B细胞间融合
……等多种未融合的细胞
第一次筛选：HAT培养基
未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡
只有融合的杂交瘤细胞才能生长
小资料：细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。
②鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，可是能无限增殖。
①人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但不能无限增殖。
HAT培养基：在培养液中加入氨基嘌呤，阻断D途径
B淋巴细胞及同型融合细胞
骨髓瘤细胞及同型融合细胞
融合的具有同种核的细胞
第二次筛选：得到能产生所需抗体的杂交瘤细胞
将这些杂交瘤细胞进行培养并稀释
稀释到之后将培养液滴入96孔板的每个孔中，每一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞。
筛选分泌专一抗体的杂交瘤细胞（第二次筛选）
用培养液 稀释培养
每一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞
抗体检测呈 阳性的杂交瘤细胞
阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行3～4次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。
优点：可大规模培养，大量生产缺点：需要人为控制培养条件，成本相对较高
优点：易于控制培养条件，成本较低缺点：规模小，产量少
——获得大量单克隆抗体
培养杂交瘤细胞的方法有哪些？从哪里收集产物？方法的优缺点？
【扩展资料】①细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基蝶呤阻断。②免疫的B淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但它不能分裂增殖，本身也不能在体外长期存活。③鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，但它能不断分裂增殖。如果它的D途径被阻断的话，它会因不能合成DNA而死亡。
【核心归纳】单克隆抗体制备过程中，第一次筛选的目的是： 。方法是：用 进行筛选。根据上述资料可知，应向培养基中加入 。第二次筛选的目的是： 。方法是： 。其原理是： 。
筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞
抗原—抗体的特异性结合
动物细胞融合技术与单克隆抗体
二、单克隆抗体及其应用
资料1 用抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体做成的“早早孕诊断试剂盒”，在妊娠第8天就可以作出诊断，这比原来的诊断方法提前了10d左右，可以避免孕妇在不知道妊娠的情况下因服用药物而对胎儿造成不利影响。该方法检测的准确率在90%以上。
（1）作为诊断试剂 (最广泛的用途)
女性怀孕后会分泌一种糖蛋白——人绒毛膜促性腺激素（HCG），尿液中会检出HCG的存在。
用抗HCG单克隆抗体制备的试纸可以测试女性是否怀孕。
【资料】使用高效的细胞毒素类药物进行化疗可以有效杀伤肿瘤细胞。但细胞毒素没有特异性，在杀伤肿瘤细胞的同时还会对健康细胞造成伤害，这限制了它在临床上的应用。抗体-药物偶联物(ADC)，将细胞毒素与能特异性识别肿瘤抗原的单克隆抗体结合，实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤。
【小结②】可以 。
（2）用于疾病的治疗和运载药物 (主要用于癌症的治疗)
单克隆抗体+接头+药物=ADC
①传递ADC释放到血液中
②结合ADC与肿瘤抗原结合
③内吞ADC通过受体介导的内吞作用进入细胞
④循环部分ADCs在早期胞内体中与FcRn受体结合并被运出细胞
⑤释放溶酶体与晚期胞内体融合，释放活性细胞毒素
不损伤正常细胞 ，减少剂量。
导向作用，将药物定向带到癌细胞所在位置。
②疗效高、毒副作用小
抗体主要发挥靶向运输作用，即通过特异性结合靶细胞表面的抗原，将连接的药物输送到靶细胞；药物发挥治疗效应，如杀伤靶细胞。
可以用放射性同位素标记单克隆抗体进行靶向放疗。一些作用于细胞信号转导通路的药物可以通过阻断肿瘤细胞的信号通路来抑制其生长，理论上也可以将这些药物与单克隆抗体结合进行治疗。
单克隆抗体诊断试剂盒中的单克隆抗体只与特定的抗原反应，因此检测的特异性和灵敏度大大提高；生产单克隆抗体的杂交瘤细胞可以传代培养、冷冻保存和复苏利用，有利于控制产品的质量和标准化生产诊断试剂盒。ADC能够协同发挥抗体特异性识别的靶向作用和细胞毒素对肿瘤细胞的杀伤作用，因此它在临床上具有靶点清楚、毒副作用小等优点。
1.下列有关动物细胞融合与植物体细胞杂交比较的叙述,错误的是( )A.它们的原理都涉及细胞膜的流动性B.都可以用电融合法或PEG融合法诱导融合C.融合前都需用纤维素酶或果胶酶处理细胞D.前者主要是为了获得细胞产品,后者主要是为了获得杂种植株2.科学家以SARS病毒的核衣壳蛋白为抗原,制备出了单克隆抗体。下列相关叙述正确的是( )A.利用该单克隆抗体可以诊断是否感染SARS病毒B.体外培养单个B淋巴细胞可以获得针对SARS病毒的单克隆抗体C.将等量B淋巴细胞和骨髓瘤细胞混合,经诱导后融合的细胞即为杂交瘤细胞D.将纯化的核衣壳蛋白反复注射到小鼠体内,从小鼠血清中分离出的抗体 为单克隆抗体