高中生物微生物的选择培养和计数教学课件ppt

这是一份高中生物微生物的选择培养和计数教学课件ppt，共40页。PPT课件主要包含了选择培养基，以尿素为唯一氮源，牛肉膏蛋白胨培养基，分离能分解尿素的细菌，只生长能分解尿素的菌，生长多种微生物，选择培养基例证，青霉素的培养基，高浓度的食盐，碳有机物等内容，欢迎下载使用。
自然界中微生物数量繁多，种类庞杂，要想从中分离出需要的特定微生物并不容易，尤其当要分离的微生物在混合菌群中不是优势种群时，仅通过一般的平板划线法或稀释涂布平板法很难实现。
那么我们又如何达成这一目标呢？
科学家们用选择性培养基解决了这一难题。
1973年，科学家从美国黄石国家公园的热泉中筛选出水生栖热菌，进而提取出耐高温的DNA聚合酶。
为什么水生栖热菌能从热泉中筛选出来呢？
因为水生栖热菌能在70-80℃的高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下不能生存。
启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。
原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。
实验室中微生物的筛选：
实质：要分离一种微生物，须根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等；配置合适的培养基。
方法：造成有利于该菌生长的环境；抑制大多数微生物生长。
思考：如何利用培养基筛选出能够分解尿素的微生物？
在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。
怎样证明此培养基具有选择性呢？
判断该培养基有无选择性
以尿素为唯一氮源的培养基
如：加______________可得到金黄色葡萄球菌。加______________筛选出抗青霉素的微生物。
①在培养基中加入某种化学物质
②改变培养基中的营养成分
③改变微生物的培养条件
如：缺乏______时可以分离固氮微生物。不加含___________的无碳培养基可将土壤中自养微生物分离出来。
如：普通的培养基在______条件下分离厌氧型和兼性厌氧型微生物。
土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶。
尿素［CO(NH2)2］含氮量高，化学性质稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素被土壤中某些细菌分解成NH3，再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。
讨论1、你如何设计培养基配方，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来？
培养基添加尿素作唯一氮源，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。缺乏脲酶的微生物因不能分解尿素、缺乏氮源而不能生长发育繁殖，故用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。
讨论2：该培养基与普通培养基有哪异同点？
①从物理性质看此两培养基都属于__________，从功能上看该培养基属于____________。
②在此培养基中，作为碳源的是____________、作为氮源的是_______。
1.下列有关微生物筛选的叙述中不正确的是（ ）A.用全营养牛肉膏蛋白胨培养基筛选大肠杆菌B.用高NaCl的培养基筛选抗盐突变菌株C.含酚红的尿素培养基筛选鉴别出分解尿素的菌株D.利用高温条件筛选耐热的Taq细菌
2.在培养基中加入尿素（唯一氮源）。以分离出能分解尿素的细菌。这种加入尿素的培养基在功能上属于（ ）A.选择培养基　　　B.固体培养基C.液体培养基 D.鉴别培养基
3.下面是某一课题将用到的培养基配方。请根据下表回答下面的问题：
（1）在该培养基的配方中，为微生物提供碳源的是_______________，提供氮源的是______。（2）绝大多数微生物能利用__________。但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解________。
（3）分析该培养基的配方，该培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，又何进行选择的？
有。以尿素为唯一氮源的培养基可以分离到产生脲酶的微生物（即分解尿素的微生物）。　
利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。
小格样均值×400（格/.1μm）×稀释倍数×量值（ml）
个体小而动的细菌难以计数且无法区分死与活。
容积换算：1ml=1000μm
2.酵母菌的计数通常用血球计数板进行，血球计数板每个大方格容积为0.1mm3 ，由400个小方格组成。现对某一样液进行检测，如果一个小方格内酵母菌过多，难以计数，应先_______后再计数。若多次重复计数后，算得每个小方格中平均有5个酵母菌，则10mL该培养液中酵母菌总数有______个。
1.在用血球计数板对某一稀释50倍样品进行计数时，发现在一个计数室内（2mm*2mm方格）（盖玻片下的培养液厚度为0.1mm）酵母菌平均数为16，据此估算10mL培养液中有酵母_______个。
2、间接计数法（活菌计数法）
在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。
①菌落数30——300个②每个稀释度下三个及以上的平板
例：统计某土壤样品中的微生物数目，选取1g土壤进行一系列的梯度稀释，每一稀释度下吸取0.1ml菌液进行涂布，分别涂布三个平板。最终结果如下：
请计算每克土壤中的菌种数。
当两个或多个细胞连在一起时观察到的是一个菌落
两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为106的培养基中，得到两种统计结果。
女：没有重复实验（至少涂布3个平板）男：A组结果误差过大，不应用于计算平均值
你认为这两位同学的做法正确吗？如果有问题，错在哪？
1.用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是（ ）A.涂布了一个平板，统计的菌落数是230B.涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238C.涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163D.涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、240和250，取平均值233
2.某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每克样品中的菌落数是（ ）（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1ml）A. 2.34×108 B. 2.34×109C. 234 D. 23.4
（1）从土壤中分离出能够分解尿素的细菌（2）统计每克土壤样品中含多少这样的细菌
绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成_____的微生物才能分解尿素，利用___________________的_____培养基，可以从土壤中分离出_________的细菌。
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
中性，潮湿。富含有机质。
取土样用的小铁铲和盛土样的信封。
选择培养基：以尿素为唯一氮源的培养基。
普通培养基：牛肉膏蛋白胨培养基。
思考：为什么还要制备牛肉膏蛋白胨培养基？
结果：相同的菌液，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可作为对照，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。
目的：保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板。
原因：不同微生物在土壤中含量不同。
若得到2个或2个以上菌落数目在30—300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数；若同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确，需重新实验。
（5）微生物的培养与观察
观察：在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
培养：不同微生物往往需要不同培养温度细菌：30～37℃培养1～2d放线菌：25～28℃培养5～7d霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。
菌落：关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。
阅读操作提示说出本实验应该从哪些方面注意无菌操作和标记？
1、取土用的小铁铲的盛土样的信封在使用前都需要__________。2、应在_________称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。3、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在________操作。
4、实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。
1.结合对照组，分析培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出一些菌落。
如果没有接种的培养基上没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。如果接种后的完全培养基上的菌落数明显多于选择培养基上的菌落数，说明选择培养基筛选出了一些尿素分解菌。
2.你是否获得了某一稀释度下菌落数为30～300的平板?在这一稀释度下，是否至少有2个平板的菌落数接近？
如果得到了两个或多个菌落数为30～300的平板，说明稀释度合适，操作比较成功，能够进行菌落的计数。
3.在做本课题实验时，A同学平板上菌落数与其他同学明显不同，试分析A结果出现的原因？
原因（1）土样不同，（2）培养基污染或操作失误（或者是混入了其他的含氮物质）
若结果与A同学一致，则证明A 无误；若结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基配制有问题。
由其他同学用与A同学相同土样进行实验。
如果培养基上无菌落生长，说明培养基无污染，否则受到污染。
若是培养基污染或操作失误
将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照。
在以_____为唯一氮源的培养基中加入_____指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将_______，说明该细菌能够分解尿素。
五、进一步探究——菌种鉴定
脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增强→ 酚红变红
通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。
排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
等量对照原则；单一变量原则；重复实验原则
将马铃薯去皮切块，加水煮沸一定时间，过滤得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液中加入一定量蔗糖和琼脂，用水定容后灭菌，得到M培养基。回答下列问题：（1）M培养基若用于真菌的筛选，则培养基中应加入链霉素以抑制_________的生长，加入了链霉素的培养基属于________培养基。（2）M培养基中的马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质，营养物质类型除氮源外还有______________ （答出两点即可）。氮源进入细胞后，可参与合成的生物大分子有______________（答出两点即可）。
（3）若在M培养基中用淀粉取代蔗糖，接种土壤滤液并培养，平板上长出菌落后可通过加入显色剂筛选出能产淀粉酶的微生物。加入的显色剂是_______，该方法能筛选出产淀粉酶微生物的原理是：
淀粉遇碘液显蓝色，产淀粉酶的菌落周围淀粉被水解，形成透明圈。