人教版 (新课标)选修1《生物技术实践》土壤中分解尿素的细菌的分离与计数说课课件ppt

这是一份人教版 (新课标)选修1《生物技术实践》土壤中分解尿素的细菌的分离与计数说课课件ppt，共29页。PPT课件主要包含了研究思路，实验设计，结果分析与评价，课题延伸，一筛选菌株，一研究思路，分解石油的细菌，选择培养基，选择培养基配方，氮源尿素等内容，欢迎下载使用。
上一节课我们已经学习了培养基的配制以及接种技术，现在我们就来学习如何从土壤中将我们需要的微生物进行分离。
尿素是一种重要的农业氮肥，分子式为H2NCONH2，不能直接被农作物吸收。
土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。
土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶
你能想一想怎样能将分解尿素的细菌从土壤中分离出来吗？
筛选原则： 根据微生物对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。
实例：Taq DNA聚合酶的发现
DNA多聚酶链式反应是一种在体外将少量DNA大量复制的技术。此项技术的自动化，要求使用耐高温的DNA聚合酶，该去哪里寻找？
科学家是从水生耐热细菌 Taq中分离到耐高温的Taq DNA聚合酶的。
允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，叫做选择培养基。
在左图的培养基配方中，碳源和氮源分别是什么？
碳源——葡萄糖、 尿素
利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。
不能区分死菌与活菌；个体小的细菌在显微镜下难以观察；
2、稀释涂布平板法（活菌计数法）
原理： 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
恰当的稀释度是成功统计菌落数目的关键。
①选 30∼300 个菌落的平板统计。②每个稀释度取3个平板取其平均值。③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。
每克样品中的菌落数＝(C÷V)×MC代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。
是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
（1）设置对照的目的：
指除了被测试的条件外，其他条件都相同的实验。
实验组：对照组：设置对照 ---- 同等条件下，培养空白培养基。
实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验时，A同学从对应的106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落，但是其他同学在同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。分析其原因。
原因： ⑴土样不同， ⑵培养基污染或操作失误(或者是混入了其他的含氮物质)
小结： 通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。
方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验
方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。
结果预测： 如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。
1、土壤取样 从富含有机物、潮湿、酸碱度适中的土壤中取样。铲去表层土3cm左右，取样，将样品装入事先准备好的信封中。
“微生物的天然培养基”
大约70%—90%是细菌
制备选择培养基（尿素为唯一氮源）制备牛肉膏蛋白胨培养基
思考？为什么还要制备牛肉膏蛋白胨培养基？
2、制备培养基
分离不同的微生物采用不同的稀释度原因：不同微生物在土壤中含量不同目的：保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板
（1）测细菌数：一般用104、105、106稀释液（2）测放线菌：一般用103、104、105稀释液（3）测真菌数：一般用102、103、104稀释液
4、微生物的培养与观察
培养不同微生物往往需要不同培养温度。
细菌：30～37℃培养1～2d放线菌：25～28℃培养5～7d霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。
1、在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果， 这样以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。 2、以“稳定菌落”为观察对象。 原因：不同种类的细菌形成的菌落，在大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等方面具有一度的特征，菌落特征可作为菌种鉴定的重要依据。
（一）培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落 对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。牛肉膏培养基的菌落数目明显大于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些菌落。（二）样品的稀释操作是否成功 如果得到了2个或2个以上菌落数目在30～300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数。（三）重复组的结果是否一致 如果学生选取的是同一种土样，统计的结果应该接近。如果结果相差太远，教师需要引导学生一起分析产生差异的原因。
pH升高指示剂（酚红）将变红