2025届高考生物一轮总复习《基因工程》练习卷

这是一份2025届高考生物一轮总复习《基因工程》练习卷，共14页。试卷主要包含了选择题，非选择题等内容，欢迎下载使用。
1．(2024·山东临沂三模)脱氧核苷三磷酸(dNTP)和双脱氧核苷三磷酸(ddNTP，ddN-Pα～Pβ～Pγ)的结构均与核苷三磷酸(NTP)类似，仅是所含五碳糖的羟基(—OH)数目不同。在DNA复制时，ddNTP可以与dNTP竞争核苷酸链延长位点，从而终止DNA片段延伸。现有一些序列为5′—GACTATGATCGTA—3′的DNA分子单链片段，将其作为模板与引物、底物、TaqDNA聚合酶、Mg2+及缓冲溶液加入反应管中，底物中仅有一种被32P标记。通过PCR获得被32P标记且3′端为碱基A的不同长度子链DNA。下列叙述错误的是( )
A．dNTP作PCR的原料时也可为DNA复制提供能量
B．反应底物是dCTP、dGTP、dTTP、dATP和γ位32P标记的ddATP
C．ddNTP与dNTP竞争的延长位点是脱氧核苷酸链的3′末端
D．实验结束后最多可得到4种被32P标记的子链DNA
2．研究表明，服用α-干扰素在慢性乙肝、丙肝及部分肿瘤的治疗中有一定疗效。人参是一种名贵药材，具有较好的滋补作用。下图为科研人员制备能合成干扰素的人参愈伤组织细胞的流程，①～④表示相关的操作。若限制酶EcRⅠ识别G↓AATTC，BamHⅠ识别G↓GATCC。下列选项错误的是( )
A．步骤①中，利用 PCR 技术扩增干扰素基因时，设计引物序列的主要依据是干扰素基因两端的部分核苷酸序列
B．在过程③中T-DNA 整合到受体细胞的染色体 DNA 上
C．科研人员在两种引物的一端分别加上了 GAATTC 和 GGATCC 序列，目的是方便后续的剪切和连接
D．过程④中，科研人员最终未能检测出干扰素基因，其原因可能是干扰素基因未能导入人参愈伤组织细胞
3.采用基因工程技术调控植物激素代谢，可实现作物改良。下列相关叙述不合理的是( )
A．用特异启动子诱导表达iaaM(生长素合成基因)可获得无子果实
B．大量表达ipt(细胞分裂素合成关键基因)可抑制芽的分化
C．提高ga2x(氧化赤霉素的酶基因)的表达水平可获得矮化品种
D．在果实中表达acs (乙烯合成关键酶基因)的反义基因可延迟果实成熟
4．(2024·云南联考)戊型肝炎病毒是一种RNA病毒，ORF2基因编码的结构蛋白(pORF2)位于病毒表面，构成病毒的衣壳。我国科研人员利用基因工程技术，在大肠杆菌中表达pORF2，制备戊型肝炎疫苗，过程如下图。下列关于该疫苗的叙述，正确的是( )
A．过程①需要的酶是RNA聚合酶，原料是A、U、G、C
B．重组基因表达载体上的启动子需来源于戊型肝炎病毒
C．过程⑤需要用聚乙二醇处理大肠杆菌使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态
D．过程⑥大量制备pORF2蛋白前应做相应的检测与鉴定
5．不对称PCR是利用不等量的一对引物来产生大量单链DNA的方法。这两种引物分别为限制性引物与非限制性引物，其最佳比例一般为1∶50～1∶100，在PCR反应的最初10～15个循环中，其扩增产物最初主要是双链DNA，但当限制性引物消耗完后，非限制性引物引导的PCR就会产生大量的单链DNA。下列相关说法错误的是( )
A．可以利用不对称PCR来制备探针
B．复性温度过高可能导致PCR反应得不到任何扩增产物
C．用不对称PCR方法扩增目的基因时需知道基因的全部序列
D．因为双链DNA和单链DNA的分子量大小不同，可通过电泳方法将其分离
6．(2023·辽宁大连开学考)下列关于生物学中常见的几种酶的叙述，正确的是( )
A．DNA连接酶将目的基因的黏性末端与载体的黏性末端之间的碱基黏合形成氢键
B．用限制酶从质粒上切下一个目的基因需消耗4个水分子
C．Taq酶是PCR扩增仪扩增DNA分子时常用的一种耐高温的DNA连接酶
D．在解离根尖分生区细胞时加入纤维素酶有利于提高解离的效果
7．下图是剔除转基因植物中标记基因的一种策略，下列相关叙述错误的是( )
A．分别带有目的基因和标记基因的两个质粒，都带有T-DNA序列
B．该方法建立在高转化频率基础上，标记基因和目的基因须转到不同染色体上
C．若要获得除标记基因的植株，转化植株必须经过有性繁殖阶段遗传重组
D．获得的无筛选标记转基因植株发生了染色体结构变异
8．(2023·广东广州模拟)自然界中很少出现蓝色的花，天然蓝色花产生的主要原因是花瓣细胞液泡中花青素在碱性条件下显蓝色。我国科学家利用链霉菌的靛蓝合成酶基因(idgS)及其激活基因(sfp)构建基因表达载体(如下图所示)，通过农杆菌转化法导入白玫瑰中，在细胞质基质中形成稳定显色的靛蓝。下列相关叙述错误的是( )
A．上述获得蓝色玫瑰的方案中无需转入能调控液泡pH的基因
B．将sfp基因插入Ti质粒时使用的限制酶是PmeⅠ和BamHⅠ
C．sfp和idgS基因具有各自的启动子，表达是相互独立进行的
D．农杆菌可将Ti质粒上的T-DNA整合到白玫瑰染色体DNA上
9．20世纪70年代，科学家发明了双脱氧终止法对DNA进行测序。其原理如图，在4个试管中分别加入4种脱氧核苷三磷酸(dNTP)和1种双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)；ddNTP可以与dNTP竞争核苷酸链延长位点，并终止DNA片段的延伸。在4个试管中DNA链将会分别在A、G、C及T位置中止，并形成不同长度的DNA片段。这些片段随后可被电泳分开并显示出来。下列说法中错误的是( )
A．这种测序方法需要引物和耐高温的DNA聚合酶
B．电泳图谱中的箭头所指的DNA片段以鸟嘌呤结尾
C．测得未知DNA的序列为5′—GATTCGAGCTGA—3′
D．ddNTP与dNTP竞争的延长位点是核苷酸链的3′末端
10．在基因工程操作过程中，科研人员利用识别两种不同序列的限制酶(R1和R2)处理基因载体，进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，结果如下图所示。以下相关叙述中错误的是( )
A．该载体最可能为环状DNA分子
B．两种限制酶在载体上各有一个酶切位点
C．限制酶R1与R2的切点最短相距约200 bp
D．限制酶作用位点会导致氢键和肽键断裂
11．菊花是一种双子叶植物，易感桃蚜。桃蚜不但直接影响植物生长，还是多种植物病毒的传播媒介。雪花莲凝集素基因GNA的表达产物能有效抑制桃蚜生长，某科研团队运用农杆菌转化法获得了转GNA基因菊花。下列有关叙述错误的是( )
A．受体细胞可以选择菊花叶片细胞或桃蚜细胞
B．将目的基因GNA插入Ti质粒的T-DNA上构建表达载体
C．可以将菊花叶片取下与农杆菌共培养，然后筛选转化细胞
D．应用抗虫接种实验，检测转基因菊花对桃蚜的抗性及抗性的程度
12．新型冠状病毒的检测可以采用实时荧光RT-PCR(逆转录聚合酶链式反应)的方法，RT-PCR的具体过程如图。下列有关叙述错误的是( )
A．过程①以mRNA为模板合成单链DNA
B．过程②③拟对单链cDNA进行n次循环的扩增，理论上需要n个引物B
C．该技术用于对某些微量RNA病毒的检测，可提高检测的灵敏度
D．游离的脱氧核苷酸只能从引物的3′端开始连接
二、非选择题
13．PHB2蛋白具有抑制细胞增殖的作用。为初步探究某动物PHB2蛋白抑制人宫颈癌细胞增殖的原因，研究者从基因数据库中获取了该蛋白的基因编码序列(简称phb2基因)，大小为0.9 kb(1 kb＝1 000碱基对)，利用大肠杆菌表达该蛋白。回答下列问题。
(1)为获取phb2基因，提取该动物肝脏组织的总RNA，再经____________过程得到cDNA，将其作为PCR反应的模板，并设计一对特异性引物来扩增目的基因。
(2)图1为所用载体图谱示意图，图中限制酶的识别序列及切割位点见下表。为使phb2基因(该基因序列不含图1中限制酶的识别序列)与载体正确连接，在扩增的phb2基因两端分别引入________和__________两种不同限制酶的识别序列。经过这两种酶酶切的phb2基因和载体进行连接时，可选用______________(填“E．cli DNA连接酶”或“T4 DNA连接酶”)。
图1
表 相关限制酶的识别序列及切割位点
注：箭头表示切割位点
(3)转化前需用CaCl2处理大肠杆菌细胞，使其处于__________的生理状态，以提高转化效率。
(4)将转化后的大肠杆菌接种在含氨苄青霉素的培养基上进行培养，随机挑取菌落(分别编号为1、2、3、4)培养并提取质粒，用(2)中选用的两种限制酶进行酶切，酶切产物经电泳分离，结果如图2，________号菌落的质粒很可能是含目的基因的重组质粒。
图2
注：M为指示分子大小的标准参照物；小于0.2 kb的DNA分子条带未出现在图中
(5)将纯化得到的PHB2蛋白以一定浓度添加到人宫颈癌细胞培养液中，培养24小时后，检测处于细胞周期(示意图见图3)不同时期的细胞数量，统计结果如图4。分析该蛋白抑制人宫颈癌细胞增殖可能的原因是将细胞阻滞在细胞周期的________(填“G1”“S”或“G2/M”)期。
14．神经纤毛蛋白-1(NRP-1)能在肿瘤细胞内表达，是血管内皮生长因子的新型受体，通过参与多种信号转导来促进肿瘤血管的生成。研究人员从肿瘤细胞中扩增出NRP-1基因并将其导入大肠杆菌体内进行发酵培养，分离提纯相应NRP-1，并将其免疫小鼠，为靶向治疗乳腺癌(MCF7)提供抗NRP-1的单克隆抗体(NRP-1MAb)。
(1)利用PCR技术可以从肿瘤细胞的基因组中分离扩增得到完整的NRP-1基因，其原因是使用__________________的引物可以从模板DNA中扩增出该基因。该技术可用于基因工程四个基本步骤中的____________________________步骤。
(2)NRP-1基因表达载体的构建如图1所示。表达载体上除了标注的DNA片段外，在NRP-1基因上游还必须拥有的DNA片段(箭头所示)是__________，其作用是_________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
___________________________________________________________________。
(3)研究人员将分离提纯的NRP-1免疫小鼠后，取其脾脏中B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，用特定的选择培养基进行筛选，在该培养基上不能存活的是________________________________________。选取检测抗体阳性的杂交瘤细胞进行体外培养时需要的气体环境是_________________________________。
(4)研究发现，NRP-1在MCF7细胞中高表达。将MCF7细胞制成单细胞悬液，等量注入4组裸鼠右前腋下，接种后3天开始给药NRP-1MAb(低剂量1 mg/kg；中剂量5 mg/kg；高剂量10 mg/kg)，共给药7次。每隔5天测算一次肿瘤的体积，如图2所示。分析上图可得出的结论是_______________________________
___________________________________________________________________。
(5)由题中信息推测NRP-1MAb抑制肿瘤的作用机理是：NRP-1MAb与NRP-1特异性结合，阻断了______________________________，抑制了肿瘤血管生成，进而降低了肿瘤的体积。
基因工程
一、选择题：每小题给出的四个选项中只有一个符合题目要求。
1．(2024·山东临沂三模)脱氧核苷三磷酸(dNTP)和双脱氧核苷三磷酸(ddNTP，ddN-Pα～Pβ～Pγ)的结构均与核苷三磷酸(NTP)类似，仅是所含五碳糖的羟基(—OH)数目不同。在DNA复制时，ddNTP可以与dNTP竞争核苷酸链延长位点，从而终止DNA片段延伸。现有一些序列为5′—GACTATGATCGTA—3′的DNA分子单链片段，将其作为模板与引物、底物、TaqDNA聚合酶、Mg2+及缓冲溶液加入反应管中，底物中仅有一种被32P标记。通过PCR获得被32P标记且3′端为碱基A的不同长度子链DNA。下列叙述错误的是( )
A．dNTP作PCR的原料时也可为DNA复制提供能量
B．反应底物是dCTP、dGTP、dTTP、dATP和γ位32P标记的ddATP
C．ddNTP与dNTP竞争的延长位点是脱氧核苷酸链的3′末端
D．实验结束后最多可得到4种被32P标记的子链DNA
B
2．研究表明，服用α-干扰素在慢性乙肝、丙肝及部分肿瘤的治疗中有一定疗效。人参是一种名贵药材，具有较好的滋补作用。下图为科研人员制备能合成干扰素的人参愈伤组织细胞的流程，①～④表示相关的操作。若限制酶EcRⅠ识别G↓AATTC，BamHⅠ识别G↓GATCC。下列选项错误的是( )
A．步骤①中，利用 PCR 技术扩增干扰素基因时，设计引物序列的主要依据是干扰素基因两端的部分核苷酸序列
B．在过程③中T-DNA 整合到受体细胞的染色体 DNA 上
C．科研人员在两种引物的一端分别加上了 GAATTC 和 GGATCC 序列，目的是方便后续的剪切和连接
D．过程④中，科研人员最终未能检测出干扰素基因，其原因可能是干扰素基因未能导入人参愈伤组织细胞
B
3.采用基因工程技术调控植物激素代谢，可实现作物改良。下列相关叙述不合理的是( )
A．用特异启动子诱导表达iaaM(生长素合成基因)可获得无子果实
B．大量表达ipt(细胞分裂素合成关键基因)可抑制芽的分化
C．提高ga2x(氧化赤霉素的酶基因)的表达水平可获得矮化品种
D．在果实中表达acs (乙烯合成关键酶基因)的反义基因可延迟果实成熟
B
4．(2024·云南联考)戊型肝炎病毒是一种RNA病毒，ORF2基因编码的结构蛋白(pORF2)位于病毒表面，构成病毒的衣壳。我国科研人员利用基因工程技术，在大肠杆菌中表达pORF2，制备戊型肝炎疫苗，过程如下图。下列关于该疫苗的叙述，正确的是( )
A．过程①需要的酶是RNA聚合酶，原料是A、U、G、C
B．重组基因表达载体上的启动子需来源于戊型肝炎病毒
C．过程⑤需要用聚乙二醇处理大肠杆菌使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态
D．过程⑥大量制备pORF2蛋白前应做相应的检测与鉴定
D
5．不对称PCR是利用不等量的一对引物来产生大量单链DNA的方法。这两种引物分别为限制性引物与非限制性引物，其最佳比例一般为1∶50～1∶100，在PCR反应的最初10～15个循环中，其扩增产物最初主要是双链DNA，但当限制性引物消耗完后，非限制性引物引导的PCR就会产生大量的单链DNA。下列相关说法错误的是( )
A．可以利用不对称PCR来制备探针
B．复性温度过高可能导致PCR反应得不到任何扩增产物
C．用不对称PCR方法扩增目的基因时需知道基因的全部序列
D．因为双链DNA和单链DNA的分子量大小不同，可通过电泳方法将其分离
C
6．(2023·辽宁大连开学考)下列关于生物学中常见的几种酶的叙述，正确的是( )
A．DNA连接酶将目的基因的黏性末端与载体的黏性末端之间的碱基黏合形成氢键
B．用限制酶从质粒上切下一个目的基因需消耗4个水分子
C．Taq酶是PCR扩增仪扩增DNA分子时常用的一种耐高温的DNA连接酶
D．在解离根尖分生区细胞时加入纤维素酶有利于提高解离的效果
B
7．下图是剔除转基因植物中标记基因的一种策略，下列相关叙述错误的是( )
A．分别带有目的基因和标记基因的两个质粒，都带有T-DNA序列
B．该方法建立在高转化频率基础上，标记基因和目的基因须转到不同染色体上
C．若要获得除标记基因的植株，转化植株必须经过有性繁殖阶段遗传重组
D．获得的无筛选标记转基因植株发生了染色体结构变异
D
8．(2023·广东广州模拟)自然界中很少出现蓝色的花，天然蓝色花产生的主要原因是花瓣细胞液泡中花青素在碱性条件下显蓝色。我国科学家利用链霉菌的靛蓝合成酶基因(idgS)及其激活基因(sfp)构建基因表达载体(如下图所示)，通过农杆菌转化法导入白玫瑰中，在细胞质基质中形成稳定显色的靛蓝。下列相关叙述错误的是( )
A．上述获得蓝色玫瑰的方案中无需转入能调控液泡pH的基因
B．将sfp基因插入Ti质粒时使用的限制酶是PmeⅠ和BamHⅠ
C．sfp和idgS基因具有各自的启动子，表达是相互独立进行的
D．农杆菌可将Ti质粒上的T-DNA整合到白玫瑰染色体DNA上
B
9．20世纪70年代，科学家发明了双脱氧终止法对DNA进行测序。其原理如图，在4个试管中分别加入4种脱氧核苷三磷酸(dNTP)和1种双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)；ddNTP可以与dNTP竞争核苷酸链延长位点，并终止DNA片段的延伸。在4个试管中DNA链将会分别在A、G、C及T位置中止，并形成不同长度的DNA片段。这些片段随后可被电泳分开并显示出来。下列说法中错误的是( )
A．这种测序方法需要引物和耐高温的DNA聚合酶
B．电泳图谱中的箭头所指的DNA片段以鸟嘌呤结尾
C．测得未知DNA的序列为5′—GATTCGAGCTGA—3′
D．ddNTP与dNTP竞争的延长位点是核苷酸链的3′末端
C
10．在基因工程操作过程中，科研人员利用识别两种不同序列的限制酶(R1和R2)处理基因载体，进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，结果如下图所示。以下相关叙述中错误的是( )
A．该载体最可能为环状DNA分子
B．两种限制酶在载体上各有一个酶切位点
C．限制酶R1与R2的切点最短相距约200 bp
D．限制酶作用位点会导致氢键和肽键断裂
D
11．菊花是一种双子叶植物，易感桃蚜。桃蚜不但直接影响植物生长，还是多种植物病毒的传播媒介。雪花莲凝集素基因GNA的表达产物能有效抑制桃蚜生长，某科研团队运用农杆菌转化法获得了转GNA基因菊花。下列有关叙述错误的是( )
A．受体细胞可以选择菊花叶片细胞或桃蚜细胞
B．将目的基因GNA插入Ti质粒的T-DNA上构建表达载体
C．可以将菊花叶片取下与农杆菌共培养，然后筛选转化细胞
D．应用抗虫接种实验，检测转基因菊花对桃蚜的抗性及抗性的程度
A
12．新型冠状病毒的检测可以采用实时荧光RT-PCR(逆转录聚合酶链式反应)的方法，RT-PCR的具体过程如图。下列有关叙述错误的是( )
A．过程①以mRNA为模板合成单链DNA
B．过程②③拟对单链cDNA进行n次循环的扩增，理论上需要n个引物B
C．该技术用于对某些微量RNA病毒的检测，可提高检测的灵敏度
D．游离的脱氧核苷酸只能从引物的3′端开始连接
B
二、非选择题
13．PHB2蛋白具有抑制细胞增殖的作用。为初步探究某动物PHB2蛋白抑制人宫颈癌细胞增殖的原因，研究者从基因数据库中获取了该蛋白的基因编码序列(简称phb2基因)，大小为0.9 kb(1 kb＝1 000碱基对)，利用大肠杆菌表达该蛋白。回答下列问题。
(1)为获取phb2基因，提取该动物肝脏组织的总RNA，再经____________过程得到cDNA，将其作为PCR反应的模板，并设计一对特异性引物来扩增目的基因。
(2)图1为所用载体图谱示意图，图中限制酶的识别序列及切割位点见下表。为使phb2基因(该基因序列不含图1中限制酶的识别序列)与载体正确连接，在扩增的phb2基因两端分别引入________和__________两种不同限制酶的识别序列。经过这两种酶酶切的phb2基因和载体进行连接时，可选用______________(填“E．cli DNA连接酶”或“T4 DNA连接酶”)。
图1
表 相关限制酶的识别序列及切割位点
注：箭头表示切割位点
(3)转化前需用CaCl2处理大肠杆菌细胞，使其处于__________的生理状态，以提高转化效率。
(4)将转化后的大肠杆菌接种在含氨苄青霉素的培养基上进行培养，随机挑取菌落(分别编号为1、2、3、4)培养并提取质粒，用(2)中选用的两种限制酶进行酶切，酶切产物经电泳分离，结果如图2，________号菌落的质粒很可能是含目的基因的重组质粒。
图2
注：M为指示分子大小的标准参照物；小于0.2 kb的DNA分子条带未出现在图中
(5)将纯化得到的PHB2蛋白以一定浓度添加到人宫颈癌细胞培养液中，培养24小时后，检测处于细胞周期(示意图见图3)不同时期的细胞数量，统计结果如图4。分析该蛋白抑制人宫颈癌细胞增殖可能的原因是将细胞阻滞在细胞周期的________(填“G1”“S”或“G2/M”)期。
答案：(1)逆转录 (2)EcRⅠ PvuⅡ T4 DNA连接酶 (3)感受态 (4)3 (5)G2/M
14．神经纤毛蛋白-1(NRP-1)能在肿瘤细胞内表达，是血管内皮生长因子的新型受体，通过参与多种信号转导来促进肿瘤血管的生成。研究人员从肿瘤细胞中扩增出NRP-1基因并将其导入大肠杆菌体内进行发酵培养，分离提纯相应NRP-1，并将其免疫小鼠，为靶向治疗乳腺癌(MCF7)提供抗NRP-1的单克隆抗体(NRP-1MAb)。
(1)利用PCR技术可以从肿瘤细胞的基因组中分离扩增得到完整的NRP-1基因，其原因是使用__________________的引物可以从模板DNA中扩增出该基因。该技术可用于基因工程四个基本步骤中的____________________________步骤。
(2)NRP-1基因表达载体的构建如图1所示。表达载体上除了标注的DNA片段外，在NRP-1基因上游还必须拥有的DNA片段(箭头所示)是__________，其作用是_________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
___________________________________________________________________。
(3)研究人员将分离提纯的NRP-1免疫小鼠后，取其脾脏中B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，用特定的选择培养基进行筛选，在该培养基上不能存活的是________________________________________。选取检测抗体阳性的杂交瘤细胞进行体外培养时需要的气体环境是_________________________________。
(4)研究发现，NRP-1在MCF7细胞中高表达。将MCF7细胞制成单细胞悬液，等量注入4组裸鼠右前腋下，接种后3天开始给药NRP-1MAb(低剂量1 mg/kg；中剂量5 mg/kg；高剂量10 mg/kg)，共给药7次。每隔5天测算一次肿瘤的体积，如图2所示。分析上图可得出的结论是_______________________________
___________________________________________________________________。
(5)由题中信息推测NRP-1MAb抑制肿瘤的作用机理是：NRP-1MAb与NRP-1特异性结合，阻断了______________________________，抑制了肿瘤血管生成，进而降低了肿瘤的体积。
答案：(1)与NRP-1基因两端特异性结合 获取目的基因和目的基因的检测与鉴定 (2)启动子 RNA聚合酶识别和结合的位点，启动转录 (3)未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞 95%的空气和5%的CO2 (4)NRP-1MAb能有效降低肿瘤的体积，中、高剂量抗体的降低效果比低剂量的更显著 (5)血管内皮生长因子与NRP-1的结合
名称
识别序列及
切割位点
名称
识别序列及
切割位点
HindⅢ
A↓AGCTT
TTCGA↑A
EcRⅠ
G↓AATTC
CTTAA↑G
PvuⅡ
CAG↓CTG
GTC↑GAC
PstⅠ
CTGC↓AG
GA↑CGTC
KpnⅠ
G↓GTACC
CCATG↑G
BamHⅠ
G↓GATCC
CCTAG↑G
名称
识别序列及
切割位点
名称
识别序列及
切割位点
HindⅢ
A↓AGCTT
TTCGA↑A
EcRⅠ
G↓AATTC
CTTAA↑G
PvuⅡ
CAG↓CTG
GTC↑GAC
PstⅠ
CTGC↓AG
GA↑CGTC
KpnⅠ
G↓GTACC
CCATG↑G
BamHⅠ
G↓GATCC
CCTAG↑G