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高中生物浙科版 (2019)选择性必修3 生物技术与工程第一章 发酵工程第二节 纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得授课ppt课件
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这是一份高中生物浙科版 (2019)选择性必修3 生物技术与工程第一章 发酵工程第二节 纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得授课ppt课件，共29页。PPT课件主要包含了素养目标，单菌落分离，扇形划线，接种环，4过程，单菌落，梯度稀释，涂布器，ml无菌水，b过程等内容，欢迎下载使用。
采用划线或涂布的接种方法能够实现对目标微生物的分离和纯化的调节
第二节 纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得（1）
一、采用划线或涂布的接种方法能够实现对目标微生物的分离和纯化1.接种方法
接种：微生物进入培养基质的过程。
自然接种：牛奶暴露在空气中，会由于微生物落入、生长、繁殖而变质。
人为接种：挑取目标微生物的纯种将其转移到液体培养基中培养，或在培养基斜面连续划线用于保存菌种（接种环）。
单菌落：在固体培养基上通过接种、培养获得的由一个细胞分裂形成的、肉眼可见的、有一定形态构造的子细胞集团。
意义： 单菌落的分离是消除杂菌污染的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一.
单菌落分离或接种的方法：通过平板划线法和稀释涂布平板法等方法获得单菌落
3．平板划线法：（1）原理 ：接种环划线的过程中，菌液被逐渐稀释，最终出现单个细菌，培养后形成单菌落。 (2)方法：通常用___________蘸取液体培养物或挑取固体表面的微生物后，在固体培养基表面进行连续平行划线、______________或其他形式的划线，以实现接种的目的。 (3)划线方式的比较
不能使用脱脂棉，否则容易吸水，造成污染。棉塞也可用封口膜替代或6层纱布封口
（1）一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；（2） 二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。
既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
接种环冷却后，蘸取带菌培养物
在酒精灯火焰旁，让带菌种的接种环在固体培养基上第一区划线。
烧灼接种环，从第一区末端开始往第二区划线
烧灼接种环，从第二区末端开始往第三区划线
烧灼接种环，从第三区末端开始往第四区划线
烧灼接种环，从第四区末端开始往第五区划线
烧灼接种环， 避免污染
培养皿倒置，放入培养箱培养
用接种环蘸菌液____次，在固体培养基表面划线，下一次划线应从上一次划线的______开始。每次划线前接种环要 ，聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。在数次划线后培养，可以在划线的末端出现不连续的 。若共划线五次，接种环要烧灼____次。另外：每次划线都不能与之前的线条_____；不能将最后一次划线与第一次划线相连；不能_____培养基。培养基需 后，放入培养箱培养。
注意：1.无论是何种划线法，蘸取菌种前和划线后，接种环都要灼烧灭菌。 2.无论是何种划线法，菌种只蘸取一次。
1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？
操作的第一步灼烧接种环：是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；
每次划线前灼烧接种环：是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。
划线结束后仍灼烧接种环：能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。
2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？
3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？
以免接种环温度太高，杀死菌种。
划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
例题1.微生物接种的方法很多,平板划线法是常用的一种。下图是平板划线示意图,划线的顺序为①②③④。下列相关叙述错误的是( )A.划线操作时,将蘸有菌种的接种环插入培养基B.平板划线后,培养微生物时要倒置培养C.不能将第④区域的划线与第①区域的划线相连D.在第②~④区域中划线前都要对接种环进行灭菌
划线时不能将接种环插入培养基,而是在培养基表面划线
例题2.下列有关分离酵母菌实验操作的叙述,错误的是( )A.在第二次划线时,接种环上的菌种直接来源于菌液B.第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物C.每次划线前,灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种D.划线结束后,灼烧接种环能及时杀死接种环上的菌种,避免细菌污染环境和感染操作者
例3：在分离、纯化大肠杆菌实验中，划线接种 （甲）、培养结果（乙）如图所示。 有关叙述错误的是 （ ） Ａ．接种前应对培养基进行高压蒸汽灭菌 Ｂ．连续划线的目的是获得单个细菌形成的菌落 Ｃ．接种过程中至少需要对接种环灼烧 ５ 次 Ｄ．甲中 ａ 区域为划线的起始位置例4．下列有关微生物培养的叙述中，不正确的是 （ ） Ａ．获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染 Ｂ．单菌落的分离是消除污染杂菌的通用方法 Ｃ．培养基都必须使用高压蒸汽灭菌法灭菌 Ｄ．倒置平板防止培养皿盖上的冷凝水滴落
例5：要筛选得到纯 净的菌种，通常在固体培养基上划线分离，下列操作正确的是（ ） Ａ．每次划线时，接种环都需蘸菌液一次 Ｂ．划线分离时，需要把接种环深入到培养基中进行接种 Ｃ．在超净台中接种时要在酒精灯火焰旁进行 Ｄ．划线分离后将培养皿正放在恒温培养箱中培养
例6： 若实验室为分离纯化优良菌种进 行如下操作，排序最合理的是 （ ） Ａ．②①④③ Ｂ．②①④①③② Ｃ．②①④②③② Ｄ．①④①③②
4．稀释涂布平板法接种时，通常需要先将菌液进行_____________，并在培养皿侧面或底面做好标记后，将稀释度不同的菌液各取0.1 mL，（移液管或枪）加在固体培养基表面，然后用___________将菌液均匀地涂布在培养基表面上进行培养。这样在稀释度适当的固体培养基表面也能得到单个细胞生长繁殖成的单菌落。根据菌落的形状，大小、颜色、边缘或表面光滑与否等特征可以选取目标微生物继续培养。
a.原理 ：用无菌水将菌液进行一系列的梯度稀释，在适当的稀释度下，可培养得到相互分开的单菌落。
分离、计数微生物——稀释涂布平板法
无法计数 159 17 2 0无法计数 141 13 1 0无法计数 150 11 3 1
加入0.1ml稀释液（移液管）
例：将1g土样加到盛有99ml无菌水的三角瓶中，如图进行稀释，每个稀释度涂布三个平板，根据结果计算1g土样中菌的数量？
注意：1.分离得到单菌落一般以培养皿中有20个以内菌落为宜。2.计算微生物数量一般以培养皿中有30~300个菌落为宜。
（159+141+150）÷3×10×105=1.5×108个/g
稀释菌液 （10-5 ~ 10-7倍）
用移液管吸取1ml细菌培养液加入另一个盛有9ml无菌水的试管中，混合均匀，以此制成10-1倍的稀释液，依次方法得到10-5 ~ 10-7倍稀释液。
用移液管取0.1ml稀释度不同的菌液，加在培养皿的固体培养基上。再将玻璃刮刀放在酒精灯火焰上灼烧，待刮刀冷却后，在酒精灯旁打开培养皿，将菌液涂布到整个平面上。
将培养皿倒置，在37℃恒温箱中培养24~48h。
涂布分离：单菌落更易分开，可用于计数，但操作复杂。
划线分离：方法简单，但单菌落较难分开，不能计数。
例7：划线分离法和涂布分离法是接种微生物的两种常用方法，下列描述正确的是 （ ） Ａ．都要将菌液进行一系列的梯度稀释Ｂ．划线分离法是将不同稀释度的菌液通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作 Ｃ．涂布分离法是将不同稀释度的菌液倒入液体培养基进行培养 Ｄ．都能在培养基表面形成单个菌落
例题8：（ 温州十校联合体期初联考）有些细菌 可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。 某同学欲从 污染的土壤中筛选出高效降解原油的菌株。 请回答下列问题： （１）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以 为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于 培养基。 （２）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即 和 。 常用的操作工具分别是 和 。 （３）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小， 分解圈大说明该菌株的降解能力 。 （４）实验室常用的灭菌方法有过滤灭菌法、 和 。 无菌技术要求实验操作应 在酒精灯 附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。 ????????????????????????????????????
某同学尝试过程③的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图乙所示。 该同学的接种方法是 ； 推测该同学接种时可能的操作失误是 。
现取5mL陈泡菜汁用于测定其中的乳酸菌含量,可采取 方法进行操作:取0.5mL泡菜汁逐级稀释至10-5,取10-4、10-5稀释液各0.ImL,分别接种到固体培养基,置于特定环境培养48h后，菌落计数。若培养結果如下图所示，则5mL陈泡菜汁中乳酸菌约 个.
例题9：图甲、图乙是微生物接种常用的两种方法，请回答相关问题：
（１）图甲是利用 法进行微生物接种，图乙是利用 法进行微生物接种。 （２）这两种方法所用的接种工具分别是 和 ； 对这两种接种工具进行灭菌和消毒的方法依次是灼烧和酒精消毒。 （３）下图是采用上述接种方法接种后培养的效果图解，其接种方法是 （填“图甲”或“图乙”）。
（4）下列关于微生物培养和利用的叙述不正确的是（ ） 。 Ａ．利用图乙所示接种法可以分离微生物但不能对微生物进行计数Ｂ．接种时连续划线的目的是将聚集的菌种逐步稀释获得单菌落Ｃ．以尿素为唯一氮源的培养基可分离出能利用尿素的细菌Ｄ．图乙所示接种法中使用的接种工具须保存在 ７０％的酒精中
采用划线或涂布的接种方法能够实现对目标微生物的分离和纯化的调节
第二节 纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得（1）
一、采用划线或涂布的接种方法能够实现对目标微生物的分离和纯化1.接种方法
接种：微生物进入培养基质的过程。
自然接种：牛奶暴露在空气中，会由于微生物落入、生长、繁殖而变质。
人为接种：挑取目标微生物的纯种将其转移到液体培养基中培养，或在培养基斜面连续划线用于保存菌种（接种环）。
单菌落：在固体培养基上通过接种、培养获得的由一个细胞分裂形成的、肉眼可见的、有一定形态构造的子细胞集团。
意义： 单菌落的分离是消除杂菌污染的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一.
单菌落分离或接种的方法：通过平板划线法和稀释涂布平板法等方法获得单菌落
3．平板划线法：（1）原理 ：接种环划线的过程中，菌液被逐渐稀释，最终出现单个细菌，培养后形成单菌落。 (2)方法：通常用___________蘸取液体培养物或挑取固体表面的微生物后，在固体培养基表面进行连续平行划线、______________或其他形式的划线，以实现接种的目的。 (3)划线方式的比较
不能使用脱脂棉，否则容易吸水，造成污染。棉塞也可用封口膜替代或6层纱布封口
（1）一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；（2） 二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。
既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
接种环冷却后，蘸取带菌培养物
在酒精灯火焰旁，让带菌种的接种环在固体培养基上第一区划线。
烧灼接种环，从第一区末端开始往第二区划线
烧灼接种环，从第二区末端开始往第三区划线
烧灼接种环，从第三区末端开始往第四区划线
烧灼接种环，从第四区末端开始往第五区划线
烧灼接种环， 避免污染
培养皿倒置，放入培养箱培养
用接种环蘸菌液____次，在固体培养基表面划线，下一次划线应从上一次划线的______开始。每次划线前接种环要 ，聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。在数次划线后培养，可以在划线的末端出现不连续的 。若共划线五次，接种环要烧灼____次。另外：每次划线都不能与之前的线条_____；不能将最后一次划线与第一次划线相连；不能_____培养基。培养基需 后，放入培养箱培养。
注意：1.无论是何种划线法，蘸取菌种前和划线后，接种环都要灼烧灭菌。 2.无论是何种划线法，菌种只蘸取一次。
1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？
操作的第一步灼烧接种环：是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；
每次划线前灼烧接种环：是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。
划线结束后仍灼烧接种环：能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。
2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？
3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？
以免接种环温度太高，杀死菌种。
划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
例题1.微生物接种的方法很多,平板划线法是常用的一种。下图是平板划线示意图,划线的顺序为①②③④。下列相关叙述错误的是( )A.划线操作时,将蘸有菌种的接种环插入培养基B.平板划线后,培养微生物时要倒置培养C.不能将第④区域的划线与第①区域的划线相连D.在第②~④区域中划线前都要对接种环进行灭菌
划线时不能将接种环插入培养基,而是在培养基表面划线
例题2.下列有关分离酵母菌实验操作的叙述,错误的是( )A.在第二次划线时,接种环上的菌种直接来源于菌液B.第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物C.每次划线前,灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种D.划线结束后,灼烧接种环能及时杀死接种环上的菌种,避免细菌污染环境和感染操作者
例3：在分离、纯化大肠杆菌实验中，划线接种 （甲）、培养结果（乙）如图所示。 有关叙述错误的是 （ ） Ａ．接种前应对培养基进行高压蒸汽灭菌 Ｂ．连续划线的目的是获得单个细菌形成的菌落 Ｃ．接种过程中至少需要对接种环灼烧 ５ 次 Ｄ．甲中 ａ 区域为划线的起始位置例4．下列有关微生物培养的叙述中，不正确的是 （ ） Ａ．获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染 Ｂ．单菌落的分离是消除污染杂菌的通用方法 Ｃ．培养基都必须使用高压蒸汽灭菌法灭菌 Ｄ．倒置平板防止培养皿盖上的冷凝水滴落
例5：要筛选得到纯 净的菌种，通常在固体培养基上划线分离，下列操作正确的是（ ） Ａ．每次划线时，接种环都需蘸菌液一次 Ｂ．划线分离时，需要把接种环深入到培养基中进行接种 Ｃ．在超净台中接种时要在酒精灯火焰旁进行 Ｄ．划线分离后将培养皿正放在恒温培养箱中培养
例6： 若实验室为分离纯化优良菌种进 行如下操作，排序最合理的是 （ ） Ａ．②①④③ Ｂ．②①④①③② Ｃ．②①④②③② Ｄ．①④①③②
4．稀释涂布平板法接种时，通常需要先将菌液进行_____________，并在培养皿侧面或底面做好标记后，将稀释度不同的菌液各取0.1 mL，（移液管或枪）加在固体培养基表面，然后用___________将菌液均匀地涂布在培养基表面上进行培养。这样在稀释度适当的固体培养基表面也能得到单个细胞生长繁殖成的单菌落。根据菌落的形状，大小、颜色、边缘或表面光滑与否等特征可以选取目标微生物继续培养。
a.原理 ：用无菌水将菌液进行一系列的梯度稀释，在适当的稀释度下，可培养得到相互分开的单菌落。
分离、计数微生物——稀释涂布平板法
无法计数 159 17 2 0无法计数 141 13 1 0无法计数 150 11 3 1
加入0.1ml稀释液（移液管）
例：将1g土样加到盛有99ml无菌水的三角瓶中，如图进行稀释，每个稀释度涂布三个平板，根据结果计算1g土样中菌的数量？
注意：1.分离得到单菌落一般以培养皿中有20个以内菌落为宜。2.计算微生物数量一般以培养皿中有30~300个菌落为宜。
（159+141+150）÷3×10×105=1.5×108个/g
稀释菌液 （10-5 ~ 10-7倍）
用移液管吸取1ml细菌培养液加入另一个盛有9ml无菌水的试管中，混合均匀，以此制成10-1倍的稀释液，依次方法得到10-5 ~ 10-7倍稀释液。
用移液管取0.1ml稀释度不同的菌液，加在培养皿的固体培养基上。再将玻璃刮刀放在酒精灯火焰上灼烧，待刮刀冷却后，在酒精灯旁打开培养皿，将菌液涂布到整个平面上。
将培养皿倒置，在37℃恒温箱中培养24~48h。
涂布分离：单菌落更易分开，可用于计数，但操作复杂。
划线分离：方法简单，但单菌落较难分开，不能计数。
例7：划线分离法和涂布分离法是接种微生物的两种常用方法，下列描述正确的是 （ ） Ａ．都要将菌液进行一系列的梯度稀释Ｂ．划线分离法是将不同稀释度的菌液通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作 Ｃ．涂布分离法是将不同稀释度的菌液倒入液体培养基进行培养 Ｄ．都能在培养基表面形成单个菌落
例题8：（ 温州十校联合体期初联考）有些细菌 可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。 某同学欲从 污染的土壤中筛选出高效降解原油的菌株。 请回答下列问题： （１）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以 为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于 培养基。 （２）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即 和 。 常用的操作工具分别是 和 。 （３）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小， 分解圈大说明该菌株的降解能力 。 （４）实验室常用的灭菌方法有过滤灭菌法、 和 。 无菌技术要求实验操作应 在酒精灯 附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。 ????????????????????????????????????
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现取5mL陈泡菜汁用于测定其中的乳酸菌含量,可采取 方法进行操作:取0.5mL泡菜汁逐级稀释至10-5,取10-4、10-5稀释液各0.ImL,分别接种到固体培养基,置于特定环境培养48h后，菌落计数。若培养結果如下图所示，则5mL陈泡菜汁中乳酸菌约 个.
例题9：图甲、图乙是微生物接种常用的两种方法，请回答相关问题：
（１）图甲是利用 法进行微生物接种，图乙是利用 法进行微生物接种。 （２）这两种方法所用的接种工具分别是 和 ； 对这两种接种工具进行灭菌和消毒的方法依次是灼烧和酒精消毒。 （３）下图是采用上述接种方法接种后培养的效果图解，其接种方法是 （填“图甲”或“图乙”）。
（4）下列关于微生物培养和利用的叙述不正确的是（ ） 。 Ａ．利用图乙所示接种法可以分离微生物但不能对微生物进行计数Ｂ．接种时连续划线的目的是将聚集的菌种逐步稀释获得单菌落Ｃ．以尿素为唯一氮源的培养基可分离出能利用尿素的细菌Ｄ．图乙所示接种法中使用的接种工具须保存在 ７０％的酒精中
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