2022版高考生物一轮复习第10单元生物技术与工程第34课微生物的培养技术及应用学案新人教版

这是一份2022版高考生物一轮复习第10单元生物技术与工程第34课微生物的培养技术及应用学案新人教版，共15页。学案主要包含了微生物的基本培养技术，微生物的纯培养，微生物的选择培养和计数，发酵工程及其应用等内容，欢迎下载使用。

一、微生物的基本培养技术
1．培养基的配制
(1)培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
(2)培养基的种类
按物理性质划分eq \b\lc\{(\a\vs4\al\c1(液体培养基,↓添加凝固剂（如琼脂）,固体培养基 ))
(3)培养基的组成成分
①主要营养物质：水、碳源、氮源和无机盐。
②其他条件：pH、特殊营养物质(如维生素)和O2。
2．无菌技术
(1)目的：获得纯净的微生物培养物。
(2)关键：防止杂菌污染。
(3)两种无菌技术的比较
(4)消毒和灭菌后的注意事项
①避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触；
②实验操作都应在超净工作台并在酒精灯火焰附近进行。
二、微生物的纯培养
1．相关概念
(1)培养物：在微生物学中，接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体。
(2)纯培养物：由单一个体繁殖所获得的微生物群体。
(3)纯培养：获得纯培养物的过程。
(4)菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部繁殖形成的肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体。
2．酵母菌纯培养的实验步骤
(1)制备培养基
(2)接种和分离酵母菌
(3)培养酵母菌：待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28 ℃左右的恒温培养箱中培养24～48 h。
三、微生物的选择培养和计数
1．选择培养基
(1)实验室中微生物的筛选原理：人为提供有利于目的菌生长的条件(包括营养、温度和pH等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长。
(2)选择培养基的概念：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。
2．微生物的选择培养
(1)稀释涂布平板法的操作过程
①系列稀释操作(如图)
注意：操作要在酒精灯火焰旁进行。
②涂布平板操作(如图)
(2)培养、观察：待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置；放入30～37 ℃的恒温培养箱中培养1～2 d。在涂布有合适浓度菌液的平板上观察分离的单菌落。
3．微生物的数量测定
(1)计数方法：稀释涂布平板法(活菌计数法)。
(2)计数要求：在同一稀释度下涂布3个(或3个以上)平板，并选择菌落数在30～300的平板进行计数。
4．土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
(1)实验原理
①分解尿素的原理：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是由于它们体内能合成脲酶，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到催化作用。
②筛选菌株的原理：在选择培养基的配方中，把尿素作为培养基中的唯一氮源，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。
(2)实验流程
四、发酵工程及其应用
1．发酵工程：利用微生物的特定功能，通过现代工程技术，规模化生产对人类有用的产品。
2．发酵工程的基本环节
eq \a\vs4\al(3.发酵工程, 的特点)eq \b\lc\{(\a\vs4\al\c1(生产条件温和,原料来源丰富且价格低廉,产物专一,废弃物对环境的污染小、容易,处理等,))
4．发酵工程的应用
(1)在食品工业上的应用
①生产传统的发酵产品：酱油、各种酒类等。
②生产各种各样的食品添加剂：柠檬酸、味精等。
③生产酶制剂：α­淀粉酶、β­淀粉酶、果胶酶、氨基肽酶和脂肪酶等。
(2)在医药工业上的应用
应用基因工程、蛋白质工程生产生长激素释放抑制激素、乙型肝炎疫苗。
(3)在农牧业上的应用
①生产微生物肥料：根瘤菌肥、固氮菌肥；
②生产微生物农药：利用微生物或其代谢产物来防治病虫害属于生物防治；
③生产微生物饲料：单细胞蛋白。
(4)其他方面的应用：利用纤维废料发酵生产酒精、乙烯等能源物质。
1．防止杂菌污染，获得纯净的微生物培养物是研究和应用微生物的前提
(1)培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，有时还需要加入一些特殊的物质。(√)
(2)消毒的原则是既杀死材料表面的微生物，又减少消毒剂对细胞的伤害。(√)
(3)为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落。(×)
2．借助选择培养基可有目的地分离某种微生物
(1)选择培养基可以鉴定某种微生物的种类。(×)
(2)对细菌进行计数只能采用稀释涂布平板法，而不能用平板划线法。(×)
(3)筛选能分解尿素的细菌所利用的培养基中，尿素是唯一的氮源。(√)
(4)能分解尿素的细菌在分解尿素时，可以将尿素转化为氨，使得培养基的酸碱度降低。(×)
3．发酵工程实现了发酵食品、药物等的工业化生产
(1)应用于工业化生产的发酵罐内的培养基是固体培养基。(×)
(2)青霉素的发现和产业化生产推动发酵工程在医药领域的应用和发展。(√)
(3)发酵工程具有生产条件温和、原料丰富且价格低廉、产物专一、废弃物对环境的污染小、容易处理等特点。(√)
(4)发酵工程在食品工业、医药工业、农牧业上应用广泛。(√)
微生物的基本培养技术

资料：下表为牛肉膏蛋白胨固体培养基配方：
(1)该培养基中主要提供碳源和氮源的物质各是什么？
答案：主要提供碳源的是牛肉膏；主要提供氮源的是蛋白胨。
(2)培养基中的碳源和氮源均可分为有机物类和无机物类。
(3)试从碳源和氮源的角度分析不同类型的微生物所需的培养基成分的特点。
1．微生物和动植物营养要素的比较
2.平板划线法和稀释涂布平板法的区别
3.平板划线操作的注意事项
(1)灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。
(2)第二次及其以后的划线操作总是从上一次划线末端开始，能使微生物的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
(3)划线时最后一区不要与第一区相连。
(4)划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。
(5)接种环三次灼烧的目的
考向1| 培养基的配制
1．下列关于微生物培养基的叙述，错误的是( )
A．制备固体培养基，一般需在液体培养基中加入琼脂
B．微生物在固体培养基表面生长形成的菌落，可以用肉眼观察到
C．根据微生物对碳源需要的差别，使用不同碳源的培养基
D．培养基中的营养物质浓度越高，对微生物的增殖越有利
D 解析：制备固体培养基，一般需在液体培养基中加入适量的凝固剂——琼脂，A正确；菌落是由微生物在固体培养基表面生长形成的肉眼可见的具有一定形态结构的细胞群体，B正确；大多数微生物培养基都含有水、碳源、氮源和无机盐等营养物质，自养型微生物的培养基可以没有碳源，固氮微生物的培养基可以没有氮源，C正确；培养基中的营养物质浓度过高，微生物会通过渗透作用失水，对微生物的增殖不利，D错误。
考向2| 无菌技术
2．(2020·河南开封模拟)关于灭菌和消毒的理解，正确的是( )
A．灭菌是指杀灭物体内外的一切微生物，但不包括芽孢和孢子
B．消毒和灭菌实质上是相同的
C．常用的灭菌法有灼烧灭菌、干热灭菌、酒精灭菌
D．常用的消毒方法有煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线消毒法、化学药物法
D 解析：灭菌是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子；消毒是指用较为温和的物理、化学等方法杀死物体表面或内部的部分微生物，它们的本质不同，A、B项错误。常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和湿热灭菌，C项错误。常用的消毒方法有煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线消毒法或化学药物消毒法等，D项正确。
考向3| 微生物的纯培养
3．有关平板划线操作的说法，正确的是( )
A．使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌
B．打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞
C．要将最后一区的划线与第一区的划线相连
D．最后将平板倒置，放入培养箱中培养
D 解析：接种环在使用过程中需要多次灭菌，第一次灭菌是为了杀死接种环上原有的微生物，每次划线结束后需要灭菌是为了杀死上次残留的菌种，A错误。打开含菌种的试管需要通过火焰灭菌，取出菌种后还需要通过火焰灭菌再塞上棉塞，B错误。划线时最后一区的划线与第一区的划线不能相连，因为最后一区是细菌最稀少的，而第一区是细菌最致密的，如果连在一起则有可能影响单个菌落的分离效果，C错误。最后将平板倒置，防止皿盖上的水滴落引起污染，D正确。
微生物的选择培养和计数
1．微生物的筛选与鉴别方法
(1)微生物的筛选方法
(2)微生物的鉴别方法
2.选择培养基与鉴别培养基实例归纳
(1)选择培养基
①培养基中加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌；
②培养基中加入高浓度的食盐用于分离得到金黄色葡萄球菌；
③以尿素作为唯一氮源的培养基用于分离分解尿素的细菌；
④不添加氮源的培养基用于分离固氮微生物；
⑤石油是唯一碳源时，可以抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，达到分离能消除石油污染的微生物的目的；
⑥培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物。
(2)鉴别培养基：伊红—亚甲蓝琼脂培养基可以鉴别大肠杆菌(菌落呈深紫色，并有金属光泽)
3．两种微生物计数方法的比较
考向1| 选择培养基
1．用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是( )
A．未接种的选择培养基
B．未接种的牛肉膏蛋白胨培养基
C．接种了的选择培养基
D．接种了的牛肉膏蛋白胨培养基
D 解析：将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基作为对照。对照遵循的原则是单一变量原则，所以与选择培养基一样接种、培养。
考向2| 微生物的选择培养
2．随着手机和网络的发展，外卖由于其便捷性，广受普通大众青睐。为检测外卖食品的质量状况，食品监管人员利用稀释涂布平板法对外卖食品中的微生物进行了调查。在稀释涂布平板法对微生物进行计数时的错误操作是( )
A．将1 mL样品稀释10倍，需加入10 mL无菌水
B．吸取菌液的移液管需要干热灭菌避免杂菌污染
C．将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃
D．每一个稀释度涂布多个平板，计算各组平均值
A 解析：将1 mL样品稀释10倍，需加入9 mL无菌水，A错误；吸取菌液的移液管需要干热灭菌避免杂菌污染，B正确；涂布器灭菌时，将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃，待酒精燃尽、冷却后再用，C正确；每一个稀释度涂布多个平板，计算各组平均值，D正确。
考向3| 微生物的数量测定
3．用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为1×106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是( )
A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230
B．涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238
C．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163
D．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、240和250，取平均值233
D 解析：在设计实验时，一定要涂布至少3个平板作为重复组，才能增强实验结果的说服力与准确性，A、B错误。C项虽涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另两个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值，C错误，D正确。
土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
尿素是一种重要的农业氮肥，但是尿素不能被农作物直接吸收，只有被土壤中的细菌分解变成氨才能被利用。为了从土壤中获得尿素分解菌，首先要配制以尿素为唯一氮源的选择培养基。思考有关尿素数量测定的实验设计的问题：
(1)分离不同的微生物要采用不同的稀释度，原因是土壤中各种微生物的数量是不同的，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离。
(2)怎样根据结果判断样品稀释操作是否成功？
答案：若得到了2个或2个以上菌落数目在30～300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数。
(3)本实验中应如何统计培养基上生长的菌落数？
答案：每隔24 h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果。
1．土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
(1)设置对照和重复
(2)分析结果与获得结论
2．用稀释涂布平板法计数微生物的注意事项
(1)先进行梯度稀释：因为样品的稀释倍数将直接影响平板上生长的菌落数目，实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数符合计数要求的平板。
(2)菌落计数
①选择菌落数在30～300的平板进行计数，然后取平均值。
②只有重复实验的结果均在30～300且无较大差异才符合实验要求，而不是只要得到菌落数在30～300的平板即可。
3．影响菌落数目的原因分析
(1)菌种来源的影响：如土壤中分解尿素的细菌的分离实验中所选土样不同，实验结果就不同。
(2)培养基制备是否合格：如果培养基被污染，实验结果菌落数将会偏多；如果培养基中缺少营养成分，实验结果菌落数将会偏少。
(3)稀释涂布平板操作失误：如果没有严格无菌操作，实验结果菌落数将会偏多；如果灼烧的涂布器未经充分冷却即进行涂布平板操作，实验结果菌落数可能会偏少。
(4)培养条件的影响：如果培养的环境条件不适宜，实验结果菌落数可能会偏少。
分解尿素的微生物广泛存在于农田等土壤中，某生物实验小组尝试对分解尿素的微生物进行分离与计数。请回答下列问题：
(1)分解尿素的微生物含有的酶是________，为筛选出能分解尿素的微生物，配制培养基时应以________作为唯一氮源，因此该培养基属于________培养基。
(2)常用来统计样品中活菌数目的方法是__________。
(3)该小组对分解尿素的微生物进行计数时，在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先培养一段时间，这样做的目的是________________________，然后将1 mL样液稀释10 000倍，在3个平板上用涂布法分别涂布 0.1 mL 稀释液；经适当培养后，统计活菌数目，每隔一个“时间间隔”统计一次菌落数目，最后选取____________作为结果；3个平板的菌落数分别为39、42和45。据此可得出每毫升样液中分解尿素的微生物活菌数为________个。
解析：(1)分解尿素的微生物含有脲酶；培养基的成分一般包括水、无机盐、碳源、氮源等，利用培养基对分解尿素的微生物进行筛选，应该用选择培养基，配制培养基时应以尿素作为唯一氮源等。(2)常用的微生物接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，其中稀释涂布平板法可以用于活菌的计数。(3)为了检测培养基平板灭菌是否合格，应该在接种前随机取若干灭菌后的空白平板先培养一段时间。在用稀释涂布平板法计数时，应该选择菌落数目稳定时的记录作为结果；3个平板的菌落数的平均值为(39＋42＋45)/3＝42(个)，则每毫升样液中分解尿素的微生物活菌数为42÷0.1×10 000＝4.2×106(个)。
答案：(1)脲酶 尿素 选择 (2)稀释涂布平板法 (3)检测培养基平板灭菌是否合格 菌落数目稳定时的记录 4.2×106
【备选案例】
(2020·山东聊城模拟)某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用。下列关于土壤中分解尿素的细菌的分离和计数的叙述，正确的是( )
A．分解尿素的细菌是以尿素的分解产物CO2为碳源的
B．倒平板时应将打开的培养皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上
C．培养基中KH2PO4等的作用之一是作为缓冲剂保持pH稳定
D．若实验组菌落平均数为37个/平板，空白对照平板上有3个菌落，则本组菌落数的平均值为34个/平板
C 解析：分解尿素的细菌是异养型细菌，不能以CO2为碳源，A错误；倒平板时，正确的做法是用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基(10～20 mL)倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖，B错误；无机盐可以作为缓冲剂保持细胞生长过程中pH的稳定，所以培养基中KH2PO4等的作用之一是作为缓冲剂保持pH稳定，C正确；在完全正确的操作情况下，空白对照组中不应出现菌落，若空白对照组出现菌落，说明操作过程中存在杂菌污染，属于实验失误，所有实验数据均不应采用，D错误。
命题生长点1 微生物的培养与分离
(1)配制牛肉膏蛋白胨培养基时，调节pH和灭菌两步骤的先后顺序是先调pH后灭菌，顺序不能颠倒的原因是什么？
答案：避免调节pH过程中引入新的杂菌。
(2)图中所示的接种方法是稀释涂布平板法。当培养基上的菌落数为30～300个时，可对其进行菌落数统计。
命题生长点2 微生物的计数
(1)若培养基上平均有40个菌落，则1 g样品中大致的活菌数量是4×106个。该结果往往较实际值偏小，原因是少数菌落可能是由两个或多个细菌形成的。
(2)有人认为，此处统计的菌落总数实际上仅为糕点样品中总细菌数的一部分，为什么？
答案：每种细菌需求的营养物质和生长条件不同，培养时需满足其营养、温度、pH、需氧性等条件。
选择培养基的设计方法
(1)营养缺陷型选择培养基：通过控制培养基的营养成分，使营养缺陷型微生物不能正常生长。
(2)添加抑菌物质的选择培养基：在完全培养基中加入某些化学物质，利用加入的化学物质对非目的微生物产生的抑制作用选择目的菌。
(3)特殊培养条件的选择培养基：改变微生物的培养条件(如高温、特殊pH等)。
关于“选择菌落数在30～300的平板”的两个理解误区
(1)只得到1个菌落数在30～300的平板：不符合实验的重复原则，易受到偶然因素的影响。
(2)得到3个或3个以上菌落数在30～300的平板：也不一定正确，如得到3个平板，菌落数分别为230、34、240，虽然菌落数均在“30～300”，但由于34与另外两个平板上的菌落数差异较大，应找出原因并重新实验。
课程标准要求
学业质量水平
3.1.1 阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的微生物培养物的前提
3.1.2 阐明无菌技术是在操作过程中，保持无菌物品与无菌区域不被微生物污染的技术
3.1.3 举例说明通过调整培养基的配方可有目的地培养某种微生物
3.1.4 概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室中进行微生物分离和纯化的常用方法
3.1.5 概述稀释涂布平板法和显微镜计数法是测定微生物数量的常用方法
3.2.2 阐明发酵工程利用现代工程技术及微生物的特定功能，工业化生产人类所需产品
3.2.3 举例说明发酵工程在医药、食品及其他工农业生产上有重要的应用价值
1.基于科学事实，形成培养基的概念，理解培养基的种类、成分及配制配方，并能进行选择培养基配方的设计。(生命观念 科学思维)
2.基于事实和证据，运用归纳的方法概括出无菌技术的种类及常用方法与原理。(科学思维 科学探究)
3.按照实验操作步骤，使用简单的实验器具进行配制培养酵母菌的培养基、平板划线、消毒和灭菌等的纯培养实验操作，如实记录实验数据，并分析得出结论，写出实验报告并与他人进行必要的交流。(科学探究)
4.能使用简单的实验器具，进行微生物的选择培养及稀释涂布平板法的操作，进行微生物的选择培养及分离与计数实验，如实记录实验数据，并分析得出结论。(科学探究)
5.理解发酵工程的含义， 掌握发酵工程的一般流程，并论述生物工程与技术的原理及其与社会之间的关系。(科学思维 科学探究)
6.客观分析与评价生物技术产品在生产和生活中的应用，以及所产生的效益和风险。(科学思维 社会责任)
比较项目
条件
结果
常用方法
应用范围
消毒
较为温和的物理、化学方法
仅杀死物体表面或内部一部分微生物
煮沸消毒法
日常用品
巴氏消毒法
不耐高温的液体
化学药物消毒法
操作空间、操作者的衣物和手等
紫外线消毒法
接种室、接种箱或超净工作台
灭菌
强烈的理化方法
杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子
湿热灭菌法
培养基、容器等
干热灭菌法
玻璃器皿、金属用具等
灼烧灭菌法
接种工具等
操作步骤
操作内容
①接种环灭菌
将接种环放在酒精灯火焰上灼烧直至烧红
②取菌种
a
在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开盛有菌液的试管的棉塞
b
将试管口通过火焰，以防止试管口杂菌污染
c
将已冷却的接种环伸入菌液中，蘸取一环菌液
d
将试管口通过火焰，并塞上棉塞
③平板划线
a
左手将皿盖打开一条缝隙，右手把接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基
b
灼烧接种环，冷却后从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复上述操作，作第三、四、五次划线。注意不要将最后一次的划线与第一次的划线相连
操作步骤
操作内容
a.取试管、编号
取盛有9 mL无菌水的试管7支，并编号为1×101、1×102、1×103、1×104、1×105、1×106、1×107
b.系列稀释
取1 mL菌液，注入1×101倍稀释的试管中，使菌液与无菌水充分混匀
从1×101倍稀释的试管中吸取1 mL稀释液，注入1×102倍稀释的试管中使之混匀。依次类推，直到完成最后一支试管的稀释
操作流程
注意事项
(1)选育菌种
①从自然界中筛选；
②通过诱变育种或基因工程育种获得
(2)配制培养基
在菌种确定后选择原料，反复试验确定培养基配方
(3)灭菌
培养基和发酵设备都必须严格灭菌
(4)扩大培养
在发酵之前进行
(5)接种
无菌操作
(6)发酵罐内发酵(发酵工程的中心环节)
①了解发酵进程：随时检测培养液中的微生物数量、产物浓度等；
②及时添加必需的营养组分；
③严格控制温度、pH和溶解氧等发酵条件
(7)分离、提纯产物
①发酵产品是微生物细胞：在发酵结束之后，采用过滤、沉淀等方法将菌体分离和干燥；
②发酵产品是代谢物：根据产物的性质采取适当的提取、分离和纯化措施来获得产品
成分
含量
牛肉膏
5 g
蛋白胨
10 g
NaCl
5 g
琼脂
15～20 g
蒸馏水
定容至1 000 mL
类型
自养型微生物
异养型微生物
碳源
CO2、NaHCO3等无机物
糖类等有机物
氮源
NH3、硝酸盐等无机物
尿素、蛋白质等有机物
项目
碳源
氮源
能源
无机盐、水
动物
糖类、脂肪等
蛋白质或其降解物
糖类、脂肪等
都需要，种类及功能基本相同
微生物
异养型
糖类、脂肪、醇、有机酸等
蛋白质或其降解物、铵盐、硝酸盐、N2等
糖类、脂肪、
醇、有机酸等
自养型
CO2、碳酸盐等
NH3、铵盐、硝酸盐等
氧化无机物
或利用光能
绿色植物
铵盐、硝酸盐
光能
项目
平板划线法
稀释涂布平板法
关键
操作
接种环在固体培养基表面连续划线
①一系列的梯度稀释；
②涂布平板操作
注意
事项
每次划线前后均需灼烧接种环
稀释度要足够高，为确保实验成功可以增加稀释度的范围
菌体
获取
在具有显著菌落特征的区域挑取菌体
从适宜稀释度的平板上的菌落中挑取菌体
优点
可以根据菌落的特点获得某种微生物的单细胞菌落
既可以获得单细胞菌落，又能对微生物计数
缺点
不能对微生物计数
操作复杂，需要涂布多个平板
目的
第一次操作
杀死接种环上原有的微生物
每次划线之前
杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端，使每次划线菌种数目减少
划线结束
杀死接种环上残存的菌种，避免微生物污染环境和感染操作者
单菌落
挑取法
利用平板划线法或稀释涂布平板法接种到固体平板培养基表面，直接根据微生物菌落的特征利用单菌落挑取的方法获得目的微生物
选择
培养法
利用选择培养基对微生物进行选择培养，直接获得目的微生物
鉴别
培养法
利用鉴别培养基使目的微生物菌落呈现特有的特征，然后筛选目的微生物
菌落特征
鉴别法
根据微生物在固体培养基表面形成的菌落的形状、大小和颜色等特征进行鉴别
指示剂
鉴别法
如以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种微生物后，培养基变红说明该种微生物能够分解尿素
染色
鉴别法
如利用刚果红染色法，根据培养基中出现以纤维素分解菌为中心的透明圈来筛选分解纤维素的微生物
项目
间接计数法
(稀释涂布平板法)
直接计数法
(显微镜计数法)
原理
当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌
利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定体积的样品中微生物的数量
缺点
当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落
不能区分细胞死活
结果
比实际值偏小
比实际值偏大
比较项目
对照
重复
目的
排除非测试因素对实验结果的影响
排除偶然因素对实验结果的影响
方法
空白对照：确定培养基制作是否合格；
条件对照：用完全培养基与选择培养基对照，说明选择培养基具有选择作用
同一稀释度涂布至少3个平板
内容
现象
结论
有无杂菌污染的判断
对照的培养皿中无菌落生长
未被杂菌污染
培养物中菌落数偏高
被杂菌污染
菌落形态多样，菌落数偏高
被杂菌污染
选择培养基的筛选作用
牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目大于选择培养基上的数目
选择培养基具有筛选作用
样品的稀释操作
得到2个或2个以上菌落数目在30～300的平板
操作成功
重复组
的结果
若选取同一种土样，统计结果应接近
生活实践情境
“互联网＋餐饮”为大众生活带来了诸多改变，动动手指点外卖已经成为普通大众的生活方式。为检测外卖糕点中的微生物指标，食品监管人员通过无菌操作，将25 g样品以及225 mL磷酸盐缓冲液一起置于均质器中以8 000～10 000 r/min的速度处理1 min，获得均匀稀释液待用。