江苏省徐州市2025-2026学年高二下学期期末抽测 生物试题（含解析）

这是一份江苏省徐州市2025-2026学年高二下学期期末抽测 生物试题（含解析），共20页。试卷主要包含了单项选择题，多项选择题，非选择题等内容，欢迎下载使用。
1. 关于细胞内水和无机盐，下列叙述错误的是（ ）
A. 晒干的种子中自由水的比例降低，细胞代谢速率降低，便于储存
B. 细胞膜中磷脂具有疏水的尾部，水分子只能通过水通道蛋白进出细胞
C. 铁是构成血红素的元素，体现了无机盐参与组成复杂化合物的功能
D. 无机盐必须溶解在水中才能被植物吸收
2. 关于蛋白质、脂肪和淀粉，下列叙述正确的是（ ）
A. 三者组成元素都有C、H、O、N
B. 蛋白质和脂肪是构成生物膜的主要成分
C. 细胞中脂肪和淀粉都是储能物质
D. 蛋白质、脂肪和淀粉均为生物大分子
3. 如图为某同学绘制的细胞模式图，Ⅰ~Ⅳ表示细胞类型，①~⑥表示细胞器。下列相关叙述正确的是（ ）
A. ①~⑥都是具膜结构的细胞器
B. ②内部的结构只能在电子显微镜下看到
C. Ⅱ中没有③，不能进行有丝分裂
D. Ⅲ中没有④，不能进行光合作用
4. 关于生物学实验操作，下列叙述错误的是（ ）
A. 还原糖的鉴定实验中，加热温度过高，砖红色沉淀颜色会加深甚至变成黑色
B. 鉴定脂肪时，花生子叶切片先用体积分数50%的乙醇浸泡，再用苏丹Ⅲ染液染色
C. 检测生物组织中的蛋白质，向待测样液中先加双缩脲试剂A液，再加B液
D. 观察叶绿体的形态和分布，先用低倍镜找到黑藻叶肉细胞，再换高倍镜观察
5. 刚果红可与纤维素形成红色复合物，某同学在以纤维素为唯一碳源的培养基中添加了刚果红，然后用如图所示的方法接种纤维素分解菌。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 该接种方法既能分离提纯微生物，还能对微生物进行计数
B. 该过程中需对接种环进行灼烧灭菌，且灭菌次数为4次
C. 从用途的角度分，该培养基既是选择培养基，又是鉴别培养基
D. 菌落周围红色区域直径越大，纤维素分解菌的分解能力越强
6. 关于传统发酵食品，下列叙述错误的是（ ）
A. 红酒中的红色素主要来源于葡萄皮细胞的液泡
B. 酵母菌、曲霉和毛霉等真核微生物参与了腐乳的发酵
C. 乳酸菌可将牛奶中的部分乳糖水解为乳酸，从而赋予其酸甜的口感
D. 制作馒头时，可利用前一次发酵保留下来的面团中的酵母菌
7. 高效产出乙醇和单细胞蛋白的液态厌氧发酵工艺如图所示。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 乙醇梭菌的菌种选育是该发酵工程的中心环节
B. 发酵过程中需不断搅拌，以促进营养物质与乙醇梭菌充分接触
C. 发酵液进行蒸馏后，可采用稀释涂布平板法对其中的乙醇梭菌进行计数
D. 通过发酵获得的单细胞蛋白含有丰富的蛋白质，但不含有糖类和脂质
8. 图示一种植物组织培养周期，①~③表示有关过程。下列相关叙述错误的是（ ）
A. 培养基中糖类既能作为碳源，又与维持渗透压有关
B. 需用酒精和次氯酸钠混合液对组织块进行消毒处理
C. 过程①发生了细胞的脱分化和有丝分裂
D. 过程②经细胞的再分化形成不同种类的细胞
9. 关于植物细胞工程应用，下列叙述错误的是（ ）
A. 切取一定大小的草莓植株茎尖进行组织培养，可获得抗病毒苗
B. 利用植物细胞培养技术，可实现紫草宁等细胞活性成分的工厂化生产
C. 愈伤组织细胞分裂旺盛，用射线处理愈伤组织可培育出抗盐碱的烟草
D. 多数单倍体植株染色体加倍后隐性性状容易显现，是进行体细胞诱变育种的理想材料
10. 图中a、b、c表示现代生物技术，①②③表示a、b、c对应的结果。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 动物细胞培养过程中均会出现细胞贴壁和接触抑制现象
B. 若①是试管牛，则a过程体现了动物细胞核具有全能性
C. 若b是动物细胞融合技术，则②为良种家畜快速大量繁殖提供了可能
D. 若③是转基因牛，则c过程可用受精卵作为受体细胞
11. 关于哺乳动物受精和发育，下列叙述正确的是（ ）
A. 人工授精时，采集的精液经获能处理后才能输入雌性生殖道
B. 受精的标志是雌雄原核融合形成合子
C. 囊胚的内细胞团细胞具有发育的全能性
D. 哺乳动物体外受精后的早期胚胎培养不需要额外提供营养物质
12. 生产中常采用胚胎移植技术快速繁殖波尔山羊。下列相关叙述错误的是（ ）
A. 选择遗传性状优良的健康母羊进行超数排卵处理
B. 胚胎移植前可采集滋养层细胞进行遗传学检测
C. 经胚胎移植产生的后代，其遗传特性与受体保持一致
D. 健康的杜泊母绵羊一般不适合作为胚胎移植的受体
13. 关于基因工程的基本工具，下列叙述正确的是（ ）
A. 用限制酶切割DNA分子中部获得一个目的基因时，需断开2个磷酸二酯键
B. 用限制酶Spe Ⅰ（—A↓CTAGT—）和限制酶Xba Ⅰ（—T↓CTAGA—）切割产生的DNA片段可以相连接
C. E.cli DNA连接酶连接平末端的效率远高于T4 DNA连接酶
D. 基因工程中常用的载体除质粒外，还有大肠杆菌和动植物病毒
14. 关于“DNA片段的扩增及电泳鉴定”的实验，下列叙述正确的是（ ）
A. PCR技术与细胞内DNA复制的特点相似，都是边解旋边复制
B. 复性温度适当降低有利于引物和模板的特异性结合
C. 采用PCR技术对一个DNA进行扩增，第n次循环共需要引物2n个
D. 若待分离的DNA片段较大，应适当提高琼脂糖凝胶的浓度
15. 我国科学家研发的蛋白质生成大模型NewOrigin能通过AI高精度生成蛋白质的氨基酸序列，推动了蛋白质工程的发展。下列相关叙述错误的是（ ）
A. AI可通过改变氨基酸序列设计符合预期功能的蛋白质
B. AI设计新的蛋白质时首先应从其基因的碱基序列出发
C. 蛋白质工程和基因工程都需要构建基因表达载体
D. AI设计的蛋白质的功能需进行实验验证才能确定
二、多项选择题：共4题，每题3分，共12分。每题有不止一个选项符合题意。每题全选对者得3分，选对但不全的得1分，错选或不答的得0分。
16. 正常水稻籽粒细胞合成的谷蛋白大多数被定向运至液泡中，过程如图1所示。研究人员用放射性标记物追踪了正常水稻和异常水稻的谷蛋白的运输过程，结果如图2所示。下列相关叙述错误的有（ ）
A. 谷蛋白的合成起始于游离的核糖体，后附着于图1中的①上
B. 图1中的②为高尔基体形成的小泡，小泡能对谷蛋白进一步加工
C. 由图2可知，异常水稻的谷蛋白均被运至细胞壁
D. 可用3H标记氨基酸的羧基来研究谷蛋白合成和运输过程
17. 为分离土壤中能分解尿素的细菌并对其进行计数，某生物兴趣小组进行了实验操作如图所示。下列相关叙述错误的有（ ）
A. 涂布器使用前需用酒精浸泡，再灼烧灭菌后立即进行涂布
B. 若在培养基上生长的菌落平均数为130，则10 g土样中含有的该菌数约为1.3×1010个
C. 该方法计数的结果就是土样中实际活菌的数量
D. 由于在计算菌落数时会选择多个平板计算平均数，因此本实验无需设置对照组
18. 科研人员研究了红豆杉的细胞悬浮培养和原生质体培养方式对合成紫杉醇的影响。甲组为细胞悬浮培养，乙组为原生质体的液体静置培养，丙组为琼脂糖包埋后的原生质体悬浮培养，实验结果如图所示。下列相关叙述正确的有（ ）
A. 制备原生质体过程中用到的方法有酶解法和低速离心法
B. 细胞和原生质体培养所需的材料、器具和培养基等都需要灭菌处理
C. 乙、丙组原生质体无细胞壁，利于紫杉醇的分泌，对其合成无影响
D. 比较乙和丙，丙组的培养方式有利于应用到发酵罐进行紫杉醇的生产
19. 多种肿瘤细胞表面的CD47含量比正常细胞高1.6~5倍，导致巨噬细胞对肿瘤细胞的清除效果减弱。为解除CD47对巨噬细胞的抑制作用，科学家按照如图所示流程进行实验。下列相关叙述错误的有（ ）
A. 过程①可一次性注射较大剂量的CD47，以提高小鼠的免疫效果
B. 图中②使用选择培养基筛选，③用抗体检测方法筛选
C. 过程④可将杂交瘤细胞注射到小鼠脾脏中，一段时间后提取单克隆抗体
D. 实验组中巨噬细胞的吞噬指数显著低于对照组可验证上述推测
三、非选择题：共5题，共58分。除特别说明外，每空1分。
20. 盐胁迫下，植物部分根细胞会发生质壁分离，同时Na+大量进入根细胞，抑制酶的活性，对细胞产生毒害。图1为根的结构示意图，图2为耐盐植物细胞在盐胁迫下调控过程示意图。请回答下列问题：
（1）图1中能明显发生质壁分离的细胞主要分布于__________区，该部位细胞中的_________相当于一层半透膜，在一定相同浓度蔗糖溶液的处理下，不同的根尖细胞发生质壁分离的程度不同，推测出现这一现象最可能的原因是__________。
（2）图2细胞中的SOS2（一种激酶）激活_________，将细胞质基质中的Na+运出细胞和转运至________中以减轻盐毒害。该过程Na+跨膜转运的方式为_____________________________，理由是__________________________________________________________________。
（3）植物细胞成熟过程中，F蛋白调控多泡体（MVB）融合成大液泡。最新研究发现，盐胁迫下，拟南芥根尖伸长区表现为液泡碎片化，即液泡数量多而单个液泡体积小。对此提出三种假说：①原有大液泡缢裂为很多MVB；②MVB融合形成大液泡过程受阻；③细胞膜胞吞过程增强，形成很多MVB。以下实验结果支持假说②的有_________________（填字母）。
a.Na+内流进入细胞质基质，引发F蛋白降解
b.盐胁迫下部分MVB膜上有来自细胞膜的Na+/H+共转运载体
c.阻断F蛋白降解，盐胁迫下未出现液泡碎片化现象
（4）研究者将野生型拟南芥和SOS2功能缺失突变拟南芥（ss2）进行处理，分组及结果如图3.根据上述所有信息，分析耐盐植物的耐盐机制：盐胁迫→激活SOS2→__________________→MVB融合为大液泡受阻→导致液泡碎片化→液泡膜面积增大→液泡膜上________________→植物的耐盐性增强。
21. 尖镰孢菌（FOC）是一种土壤真菌，易引起黄瓜等蔬菜患枯萎病，严重影响产量。项目小组欲从土壤中筛选几种能抑制FOC的细菌，构建复合菌群，探究复合菌群对枯萎病的防治效果。请回答下列问题：
（1）取土样后，加入无菌水，制成菌悬液，将菌悬液中微生物接种于固体培养基上的方法有______________________________。该培养基需含有水、碳源、_____________等营养成分，常用_________________________方法对其灭菌。
（2）从分离出的菌株中筛选出HB1、HB5和HB15三株具有较强抑真菌潜力的功能细菌。将FOC接种于培养基一侧，并在距其2 cm处接种待测菌株，对照组只接种FOC，观察抑菌情况，以比较三种菌株的抑制效果。
据图1可知，_______________菌株对FOC的抑制效果最强。为检测三种菌株能否共存，进行了相容性（不相互抑制）试验：将HB1菌液均匀涂布在培养基平板上，将滴加有HB5、HB15菌液和无菌水（CK）的滤纸片放在平板上，培养结果如图2.结果表明，HB5和HB15不会抑制HB1生长，理由是_______________________________________________________________。完成相容性试验，还需进行两组实验，请根据图3写出其中一组设计：a______________________，b__________________，c________________________________。
（3）用复合菌群（HB1+HB5+HB15）灌根处理黄瓜幼苗，接种FOC，作为实验组，对照组仅接种FOC.15天后检测相应指标，结果如下表。复合菌群对黄瓜幼苗的生长具有___________________作用，使发病率_____________。
22. 真菌能够引发植物细胞内的防御反应，促进次生代谢产物的积累。科研人员选用红豆杉嫩枝条的愈伤组织进行悬浮细胞培养，生产抗肿瘤药物紫杉醇，主要流程如图1所示。请回答下列问题：
（1）过程①需要添加的两类植物激素是_______________________，在悬浮细胞体系中添加桔青霉的目的是__________________________________________________。
（2）研究人员还尝试运用植物体细胞杂交技术，将红豆杉与柴胡培育获得可产生紫杉醇的柴胡植株。实验过程中可用______________酶处理获得原生质体，再用化学诱导试剂_________________诱导原生质体融合，形成杂种细胞的标志是_________________，与该过程密切相关的单层膜细胞器为_________________________。
（3）科研人员继续研究了添加桔青霉诱导子对红豆杉愈伤组织鲜质量、紫杉醇总生产量、PPO（多酚氧化酶，活性高会引起愈伤组织褐化抑制细胞分裂）总活性、PLA（植物防御反应的标志酶，参与紫杉醇的合成）活性的影响，实验结果见图2、图3.据图2可知，添加桔青霉诱导子可以_______________愈伤组织生长，____________________紫杉醇总产量。据图3分析，出现图2所示结果的原因有_____________________________________________________________________________。
23. 我国科研人员全球首次在猪的体内培育出了一个“人源化中期肾”，且维持到胚胎第28天。实验过程如图1所示，其中iPS细胞为类似胚胎干细胞的一种细胞，①~⑨为技术操作或生理过程。请回答下列问题：
（1）过程②卵母细胞培养到______________________期才能去核，可以采用__________________技术对卵母细胞去核。过程④运用基因编辑技术（Cas9蛋白在向导RNA引导下，切割目标DNA双链，如图2所示）敲除成纤维细胞中的猪肾发育的关键基因SIX1，可以为后续人iPS细胞的生长和分化提供更合适的生存环境。下列对于该过程的分析，正确的有_____________________________（填字母）。
a.Cas9蛋白由相关基因指导在核糖体上合成
b.Cas9蛋白特异性识别并切割SIX1基因特定位点的磷酸二酯键
c.若α链剪切点附近序列为……TCCACAATC……，则相应的识别序列为……UCCACAAUC……
d.敲除SIX1基因的猪胚胎可避免猪细胞与人iPS细胞竞争肾脏发育的环境
（2）选择iPS细胞进行实验，而非成体干细胞是因为______________________________。对iPS细胞培养的气体环境是____________________，在培养过程中需要________________________，以便清除代谢废物。
（3）将DsRed（红色荧光蛋白基因）标记的改造iPS细胞注射到猪胚胎中，共1820枚胚胎移植到13只受体母猪体内。在胎龄28天收集到三个正常胚胎，胚胎移植前可通过_________________________技术产生同卵多仔后代，提高胚胎利用率。免疫荧光检测显示，DsRed标记的细胞仅出现在嵌合体胚胎________________的区域。
（4）为确认改造iPS细胞的嵌合性，利用PCR技术检测是否存在DsRed基因，请在图3中将对应位置的条带涂黑___________________________，以得到电泳后预期的条带。获得的人源化肾脏仍然带有猪血管，若移植到患者体内可能会存在________________________________________________问题。
24. 为培育耐盐碱大豆新品种，科研人员把水稻耐盐碱基因OsJRL40和荧光素酶基因构建成融合基因，荧光素酶可催化荧光素产生荧光，部分操作流程及可能用到的限制酶及识别序列如图所示，其中DEX启动子在DEX（地塞米松试剂，可由地塞米松磷酸钠溶解于无菌水配制而成）诱导下才可发挥作用：UAA、UGA、UAG为终止密码子。请回答下列问题：
（1）获取的水稻基因OsJRL40的cDNA，与水稻基因组的OsJRL40基因相比在结构上缺少__________________________________（写出2个）等序列。
（2）图中构建基因表达载体时，切割载体用到的限制酶有________________。已知OsJRL40基因转录的非模板链的序列为：5'-ATGATCCAG……GCTGACTAG-3'，为构建融合基因，引物2的前10个碱基序列为_______（填字母）。
a.5'-GATCCTAGTC-3'
b.5'-GATCGTCAGC-3'
c.5'-AGATCTCTAG-3'
d.5'-AGATCTGTCA-3'
（3）将初步构建的融合基因表达载体转入大豆细胞，常用的方法为_______________________，在培养大豆细胞的基本培养液中添加_________________以检测转化成功的细胞，成功后需除去荧光素酶基因，已知Cre酶可以将DNA上两个相同lxP序列位点之间的片段切除，因此在设计引物3和引物4时需要在限制酶识别序列的_________________（填“5'端”或“3'端”）添加lxP序列。
（4）为验证荧光素酶基因是否被成功敲除，科研人员利用PCR技术进行鉴定，并设计了如下实验。请补充实验步骤并预期结果。
【实验步骤】
①实验分组与处理：
实验组：在培养液中加入________________，培养转基因大豆细胞。
对照组：在培养液中加入____________________，培养转基因大豆细胞。
②RNA提取与逆转录：分别提取两组细胞总RNA，通过逆转录获得cDNA.
③PCR扩增及电泳检测：以cDNA为模板，选择图中引物___________________________进行PCR扩增。
用Bgl Ⅱ完全切割，再进行琼脂糖凝胶电泳，观察有无OsJRL40基因和荧光素酶基因的条带。
【预期结果】
若荧光素酶基因被成功敲除，则实验组和对照组的电泳条带结果分别为________________________________________。
生物
一、单项选择题：共15题，每题2分，共30分。每题只有一个选项最符合题意。
1. 关于细胞内水和无机盐，下列叙述错误的是（ ）
A. 晒干的种子中自由水的比例降低，细胞代谢速率降低，便于储存
B. 细胞膜中磷脂具有疏水的尾部，水分子只能通过水通道蛋白进出细胞
C. 铁是构成血红素的元素，体现了无机盐参与组成复杂化合物的功能
D. 无机盐必须溶解在水中才能被植物吸收
答案：B
解析：
解答过程：A、自由水参与细胞内的代谢反应，晒干种子时种子丢失大量自由水，自由水比例降低后细胞代谢速率下降，有机物消耗减少，便于种子长期储存，A正确；
B、水分子可以通过自由扩散、协助扩散（水通道蛋白）进出细胞，B错误；
C、无机盐的功能之一是参与构成细胞内的复杂化合物，如铁是血红素的组成元素，C正确；
D、植物主要吸收离子态的无机盐，无机盐只有溶解在水中解离为离子，才能被植物根系吸收利用，D正确。
2. 关于蛋白质、脂肪和淀粉，下列叙述正确的是（ ）
A. 三者组成元素都有C、H、O、N
B. 蛋白质和脂肪是构成生物膜的主要成分
C. 细胞中脂肪和淀粉都是储能物质
D. 蛋白质、脂肪和淀粉均为生物大分子
答案：C
解析：
解答过程：A、淀粉属于糖类，脂肪属于脂质，二者组成元素均只有C、H、O，仅蛋白质的组成元素包含C、H、O、N，因此三者并非都含N，A错误；
B、生物膜的主要成分是磷脂（属于脂质）和蛋白质，脂肪不参与生物膜的构成，B错误；
C、脂肪是细胞内良好的储能物质，淀粉是植物细胞特有的储能物质，二者均属于细胞中的储能物质，C正确；
D、高中阶段生物大分子包括多糖、蛋白质、核酸，脂肪相对分子质量较小，不属于生物大分子，D错误。
3. 如图为某同学绘制的细胞模式图，Ⅰ~Ⅳ表示细胞类型，①~⑥表示细胞器。下列相关叙述正确的是（ ）
A. ①~⑥都是具膜结构的细胞器
B. ②内部的结构只能在电子显微镜下看到
C. Ⅱ中没有③，不能进行有丝分裂
D. Ⅲ中没有④，不能进行光合作用
答案：B
解析：
解答过程：A、①为内质网、②为线粒体、③为中心体、④为叶绿体、⑤为液泡、⑥为高尔基体；细胞类型：Ⅰ是动物细胞，Ⅱ是高等植物细胞，Ⅲ是蓝细菌（原核生物），Ⅳ是低等植物细胞，①~⑥中③中心体无膜结构，因此并非所有细胞器都具膜，A错误；
B、②是线粒体，其内部的嵴等结构属于亚显微结构，只能在电子显微镜下观察到，光学显微镜仅能观察到线粒体的外部形态，B正确；
C、Ⅱ是高等植物细胞，无③中心体，可通过细胞两极发出纺锤丝形成纺锤体完成有丝分裂，C错误；
D、Ⅲ是蓝细菌，属于原核生物，无④叶绿体，但含有叶绿素和藻蓝素，可进行光合作用，D错误。
4. 关于生物学实验操作，下列叙述错误的是（ ）
A. 还原糖的鉴定实验中，加热温度过高，砖红色沉淀颜色会加深甚至变成黑色
B. 鉴定脂肪时，花生子叶切片先用体积分数50%的乙醇浸泡，再用苏丹Ⅲ染液染色
C. 检测生物组织中的蛋白质，向待测样液中先加双缩脲试剂A液，再加B液
D. 观察叶绿体的形态和分布，先用低倍镜找到黑藻叶肉细胞，再换高倍镜观察
答案：B
解析：
解答过程：A、还原糖鉴定实验中，若加热温度过高，一方面生成的砖红色氧化亚铜可能被进一步氧化，另一方面斐林试剂中的氢氧化铜会受热分解为黑色的氧化铜，因此砖红色沉淀颜色会加深甚至变成黑色，A正确；
B、鉴定脂肪时，正确操作是先对花生子叶切片用苏丹Ⅲ染液染色，再用体积分数50%的乙醇洗去浮色，选项操作顺序颠倒，B错误；
C、检测蛋白质时，需先加双缩脲试剂A液（0.1g/mL的NaOH溶液）创造碱性环境，再加双缩脲试剂B液（0.01g/mL的CuSO4溶液），使肽键在碱性条件下与铜离子反应生成紫色络合物，C正确；
D、显微镜观察的通用操作规则为先使用低倍镜找到目标细胞并移至视野中央，再换高倍镜观察，观察叶绿体的实验也遵循该操作，D正确。
5. 刚果红可与纤维素形成红色复合物，某同学在以纤维素为唯一碳源的培养基中添加了刚果红，然后用如图所示的方法接种纤维素分解菌。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 该接种方法既能分离提纯微生物，还能对微生物进行计数
B. 该过程中需对接种环进行灼烧灭菌，且灭菌次数为4次
C. 从用途的角度分，该培养基既是选择培养基，又是鉴别培养基
D. 菌落周围红色区域直径越大，纤维素分解菌的分解能力越强
答案：C
解析：
解答过程：A、该接种方法为平板划线法，可用于分离提纯微生物，但无法对微生物计数，稀释涂布平板法才可用于微生物计数，A错误；
B、平板划线操作中，每次划线前需灼烧接种环，划线操作结束后仍需灼烧接种环，图中共4次划线，需灼烧接种环5次，B错误；
C、该培养基以纤维素为唯一碳源，可筛选出纤维素分解菌，属于选择培养基；同时添加刚果红，可通过透明圈情况鉴别纤维素分解菌，也属于鉴别培养基，C正确；
D、刚果红与纤维素结合呈红色，纤维素被分解后红色消失会形成透明圈，透明圈直径与菌落直径的比值越大，说明纤维素分解菌的分解能力越强，而非红色区域直径越大，D错误。
6. 关于传统发酵食品，下列叙述错误的是（ ）
A. 红酒中的红色素主要来源于葡萄皮细胞的液泡
B. 酵母菌、曲霉和毛霉等真核微生物参与了腐乳的发酵
C. 乳酸菌可将牛奶中的部分乳糖水解为乳酸，从而赋予其酸甜的口感
D. 制作馒头时，可利用前一次发酵保留下来的面团中的酵母菌
答案：C
解析：
解答过程：A、葡萄皮细胞的液泡中含有花青素等色素，红酒发酵过程中葡萄皮的色素溶入发酵液，使红酒呈现红色，A正确；
B、腐乳发酵的主要参与菌种包括毛霉、曲霉、酵母菌，都属于真核微生物，可将豆腐中的大分子营养物质分解为小分子，B正确；
C、乳糖是二糖，水解产物为葡萄糖和半乳糖，乳酸是乳酸菌通过无氧呼吸（乳酸发酵）分解葡萄糖产生的代谢产物，不是乳糖的水解产物，C错误；
D、前一次发酵保留的面团（俗称老面）中含有大量活性酵母菌，可作为下次馒头制作的发酵菌种，D正确。
7. 高效产出乙醇和单细胞蛋白的液态厌氧发酵工艺如图所示。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 乙醇梭菌的菌种选育是该发酵工程的中心环节
B. 发酵过程中需不断搅拌，以促进营养物质与乙醇梭菌充分接触
C. 发酵液进行蒸馏后，可采用稀释涂布平板法对其中的乙醇梭菌进行计数
D. 通过发酵获得的单细胞蛋白含有丰富的蛋白质，但不含有糖类和脂质
答案：B
解析：
解答过程：A、发酵工程的中心环节是发酵罐内的发酵过程，菌种选育是发酵工程的前期准备步骤，并非中心环节，A错误；
B、发酵过程中搅拌可以使乙醇梭菌与营养物质充分接触，提高营养物质的利用效率，该工艺为厌氧发酵，搅拌过程不引入氧气，不会破坏厌氧环境，B正确；
C、蒸馏需要在较高温度下进行，高温会杀死发酵液中的乙醇梭菌，而稀释涂布平板法只能统计活菌数量，因此无法用该方法对蒸馏后的乙醇梭菌计数，C错误；
D、单细胞蛋白的本质是微生物菌体，细胞中除蛋白质外，还含有糖类、脂质等组成细胞结构的成分，D错误。
8. 图示一种植物组织培养周期，①~③表示有关过程。下列相关叙述错误的是（ ）
A. 培养基中糖类既能作为碳源，又与维持渗透压有关
B. 需用酒精和次氯酸钠混合液对组织块进行消毒处理
C. 过程①发生了细胞的脱分化和有丝分裂
D. 过程②经细胞的再分化形成不同种类的细胞
答案：B
解析：
解答过程：A、培养基中常加入蔗糖，既能作为碳源，又与维持渗透压有关，A正确；
B、对组织块（外植体）消毒时，需先后用酒精、次氯酸钠溶液分别处理，二者不能混合使用，B错误；
C、过程①形成了愈伤组织，发生了细胞的脱分化，此时细胞还进行有丝分裂，C正确；
D、过程②是愈伤组织经再分化形成胚状体的过程，故经过再分化形成不同种类的细胞，D正确。
9. 关于植物细胞工程应用，下列叙述错误的是（ ）
A. 切取一定大小的草莓植株茎尖进行组织培养，可获得抗病毒苗
B. 利用植物细胞培养技术，可实现紫草宁等细胞活性成分的工厂化生产
C. 愈伤组织细胞分裂旺盛，用射线处理愈伤组织可培育出抗盐碱的烟草
D. 多数单倍体植株染色体加倍后隐性性状容易显现，是进行体细胞诱变育种的理想材料
答案：A
解析：
解答过程：A、植物茎尖等分生区病毒极少甚至无病毒，切取茎尖进行组织培养可获得脱毒苗，脱毒苗不带病毒，但不具备抗病毒的能力，要获得抗病毒苗需通过基因工程转入抗病毒基因，A错误；
B、利用植物细胞培养技术可大量增殖愈伤组织，从中提取紫草宁等次生代谢产物，可实现细胞活性成分的工厂化生产，B正确；
C、愈伤组织细胞分裂旺盛，分裂间期DNA复制时易发生基因突变，用射线处理可诱导基因突变，经筛选可获得抗盐碱的烟草新品种，C正确；
D、单倍体植株染色体加倍后一般为纯合子，隐性突变性状不会被显性等位基因掩盖，容易显现，因此是进行体细胞诱变育种的理想材料，D正确。
10. 图中a、b、c表示现代生物技术，①②③表示a、b、c对应的结果。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 动物细胞培养过程中均会出现细胞贴壁和接触抑制现象
B. 若①是试管牛，则a过程体现了动物细胞核具有全能性
C. 若b是动物细胞融合技术，则②为良种家畜快速大量繁殖提供了可能
D. 若③是转基因牛，则c过程可用受精卵作为受体细胞
答案：D
解析：
解答过程：A、正常的动物细胞培养过程中会出现细胞贴壁和接触抑制现象，但发生癌变的细胞等培养时无接触抑制，并非所有动物细胞培养均会出现该现象，A错误；
B、试管牛通过体外受精、胚胎培育、胚胎移植获得，发育起点是受精卵，属于有性生殖，不涉及核移植，不能体现动物细胞核的全能性，B错误；
C、动物细胞融合技术的产物是杂交细胞，主要用于单克隆抗体制备等，无法发育为完整个体，不能为良种家畜快速大量繁殖提供可能，C错误；
D、培育转基因动物时，动物受精卵全能性高，常作为目的基因的受体细胞，因此c过程可用受精卵作为受体细胞，D正确。
11. 关于哺乳动物受精和发育，下列叙述正确的是（ ）
A. 人工授精时，采集的精液经获能处理后才能输入雌性生殖道
B. 受精的标志是雌雄原核融合形成合子
C. 囊胚的内细胞团细胞具有发育的全能性
D. 哺乳动物体外受精后的早期胚胎培养不需要额外提供营养物质
答案：C
解析：
解答过程：A、人工授精属于体内受精，雌性生殖道本身就存在使精子获能的生理环境，采集的精液无需提前进行获能处理即可输入雌性生殖道，A错误；
B、受精的标志是在卵细胞膜和透明带的间隙观察到两个极体，雌雄原核融合形成合子是受精完成的标志，B错误；
C、囊胚的内细胞团细胞将来可分化发育为胎儿的各类组织器官，具有发育的全能性，C正确；
D、哺乳动物早期胚胎培养需要额外提供无机盐、有机盐、维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养物质，还需要添加血清等天然成分，D错误。
12. 生产中常采用胚胎移植技术快速繁殖波尔山羊。下列相关叙述错误的是（ ）
A. 选择遗传性状优良的健康母羊进行超数排卵处理
B. 胚胎移植前可采集滋养层细胞进行遗传学检测
C. 经胚胎移植产生的后代，其遗传特性与受体保持一致
D. 健康的杜泊母绵羊一般不适合作为胚胎移植的受体
答案：C
解析：
解答过程：A、胚胎移植中供体需选择遗传性状优良的个体，对供体母羊进行超数排卵处理可获得更多卵母细胞，进而培育更多可用胚胎，A正确；
B、滋养层细胞将来发育为胎膜和胎盘，采集滋养层细胞进行遗传学检测不会影响胚胎内细胞团的正常发育，因此可在移植前进行该操作，B正确；
C、胚胎的遗传物质来自供体公羊和供体母羊，受体仅为胚胎发育提供营养和孕育场所，不影响后代的遗传特性，后代遗传特性与供体保持一致，而非受体，C错误；
D、胚胎移植要求供体和受体为同一物种，保证胚胎发育的生理环境兼容，波尔山羊属于山羊，杜泊绵羊属于绵羊，二者为不同物种，因此杜泊母绵羊不适合作为波尔山羊胚胎移植的受体，D正确。
13. 关于基因工程的基本工具，下列叙述正确的是（ ）
A. 用限制酶切割DNA分子中部获得一个目的基因时，需断开2个磷酸二酯键
B. 用限制酶Spe Ⅰ（—A↓CTAGT—）和限制酶Xba Ⅰ（—T↓CTAGA—）切割产生的DNA片段可以相连接
C. E.cli DNA连接酶连接平末端的效率远高于T4 DNA连接酶
D. 基因工程中常用的载体除质粒外，还有大肠杆菌和动植物病毒
答案：B
解析：
解答过程：A、DNA为双链结构，切割获得DNA分子中部的目的基因时，需在目的基因两端各切割1次，每次切割断开2个磷酸二酯键（两条链各1个），共断开4个磷酸二酯键，A错误；
B、SpeⅠ和XbaⅠ切割后产生的黏性末端均为CTAG，二者黏性末端互补配对，因此切割产生的DNA片段可相互连接，B正确；
C、E.cliDNA连接酶和T4DNA连接酶都可以连接平末端和黏性末端，在连接平末端的时候，T4DNA连接酶效率高于E.cliDNA连接酶，C错误；
D、基因工程常用载体包括质粒、λ噬菌体衍生物、动植物病毒，大肠杆菌是常用的基因工程受体细胞，不属于载体，D错误。
14. 关于“DNA片段的扩增及电泳鉴定”的实验，下列叙述正确的是（ ）
A. PCR技术与细胞内DNA复制的特点相似，都是边解旋边复制
B. 复性温度适当降低有利于引物和模板的特异性结合
C. 采用PCR技术对一个DNA进行扩增，第n次循环共需要引物2n个
D. 若待分离的DNA片段较大，应适当提高琼脂糖凝胶的浓度
答案：C
解析：
解答过程：A、PCR技术先通过高温使DNA双链完全解旋，再进行引物结合和延伸，并非边解旋边复制，而细胞内DNA复制是边解旋边复制，二者特点不同，A错误；
B、复性温度过低会导致引物与模板发生非特异性结合，适当提高复性温度才有利于引物和模板的特异性结合，B错误；
C、第n次循环时，新合成的DNA单链数量为2n，每条新链需要1个引物，因此第n次循环共需要引物2n个，C正确；
D、琼脂糖凝胶浓度越高，凝胶孔径越小，适合分离小分子DNA片段；待分离DNA片段较大时，应适当降低琼脂糖凝胶浓度，增大孔径便于大片段迁移，D错误。
15. 我国科学家研发的蛋白质生成大模型NewOrigin能通过AI高精度生成蛋白质的氨基酸序列，推动了蛋白质工程的发展。下列相关叙述错误的是（ ）
A. AI可通过改变氨基酸序列设计符合预期功能的蛋白质
B. AI设计新的蛋白质时首先应从其基因的碱基序列出发
C. 蛋白质工程和基因工程都需要构建基因表达载体
D. AI设计的蛋白质的功能需进行实验验证才能确定
答案：B
解析：
解答过程：A、蛋白质工程的目标是获得符合预期功能的蛋白质，可通过改造对应的基因进而改变蛋白质的氨基酸序列实现，AI生成氨基酸序列的技术可辅助该过程，A正确；
B、蛋白质工程设计新蛋白质的基本流程为：从预期的蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到对应的脱氧核苷酸序列（基因），设计起点是预期蛋白质功能而非基因的碱基序列，B错误；
C、蛋白质工程是在基因工程的基础上延伸出来的，最终需要将改造或合成的目的基因导入受体细胞表达，因此和基因工程一样都需要构建基因表达载体，C正确；
D、AI预测设计的蛋白质的实际功能是否符合预期，必须经过实验检测验证才能确定，D正确。
二、多项选择题：共4题，每题3分，共12分。每题有不止一个选项符合题意。每题全选对者得3分，选对但不全的得1分，错选或不答的得0分。
16. 正常水稻籽粒细胞合成的谷蛋白大多数被定向运至液泡中，过程如图1所示。研究人员用放射性标记物追踪了正常水稻和异常水稻的谷蛋白的运输过程，结果如图2所示。下列相关叙述错误的有（ ）
A. 谷蛋白的合成起始于游离的核糖体，后附着于图1中的①上
B. 图1中的②为高尔基体形成的小泡，小泡能对谷蛋白进一步加工
C. 由图2可知，异常水稻的谷蛋白均被运至细胞壁
D. 可用3H标记氨基酸的羧基来研究谷蛋白合成和运输过程
答案：BCD
解析：
解答过程：A、谷蛋白的合成起始于细胞质中游离核糖体，之后在信号肽引导下，核糖体附着到内质网（①）上继续合成，A正确；
B、②为高尔基小泡，此时在高尔基体中已经完成加工与分拣，出芽形成的囊泡负责运输，B错误；
C、由图2可知，异常水稻的谷蛋白大部分被运至细胞壁，少量运送至液泡，C错误；
D、氨基酸脱水缩合形成肽链时，羧基会脱去羟基，若标记羧基中的3H，放射性3H会随脱去的水分子离开，无法进入合成好的谷蛋白中，不能追踪谷蛋白的合成和运输，D错误。
17. 为分离土壤中能分解尿素的细菌并对其进行计数，某生物兴趣小组进行了实验操作如图所示。下列相关叙述错误的有（ ）
A. 涂布器使用前需用酒精浸泡，再灼烧灭菌后立即进行涂布
B. 若在培养基上生长的菌落平均数为130，则10 g土样中含有的该菌数约为1.3×1010个
C. 该方法计数的结果就是土样中实际活菌的数量
D. 由于在计算菌落数时会选择多个平板计算平均数，因此本实验无需设置对照组
答案：ACD
解析：
解答过程：A、涂布器经灼烧灭菌后需要冷却至室温再进行涂布，若立即涂布，高温会杀死待接种的目的菌，A错误；
B、10g土样加入90mL无菌水后稀释10倍，后续共进行5次10倍梯度稀释，总稀释倍数为106，取0.1mL稀释液涂布，平均菌落数为130，则每克土样中菌数为(130/0.1)×106=1.3×109个，10g土样中菌数约为1.3×1010个，B正确；
C、稀释涂布平板法计数时，若两个或多个活菌粘连在一起，平板上仅能形成一个菌落，因此统计的菌落数往往低于实际活菌数，并非土样中实际活菌的数量，C错误；
D、本实验需要设置空白对照组（接种等量无菌水的空白培养基），用来检验培养基是否被杂菌污染，排除无关变量对实验结果的干扰，D错误。
18. 科研人员研究了红豆杉的细胞悬浮培养和原生质体培养方式对合成紫杉醇的影响。甲组为细胞悬浮培养，乙组为原生质体的液体静置培养，丙组为琼脂糖包埋后的原生质体悬浮培养，实验结果如图所示。下列相关叙述正确的有（ ）
A. 制备原生质体过程中用到的方法有酶解法和低速离心法
B. 细胞和原生质体培养所需的材料、器具和培养基等都需要灭菌处理
C. 乙、丙组原生质体无细胞壁，利于紫杉醇的分泌，对其合成无影响
D. 比较乙和丙，丙组的培养方式有利于应用到发酵罐进行紫杉醇的生产
答案：AD
解析：
解答过程：A、植物细胞细胞壁主要成分为纤维素和果胶，制备原生质体时，常用纤维素酶+果胶酶的酶解法去除细胞壁，酶解后需要通过低速离心收集原生质体（高速离心会破坏原生质体），A正确；
B、细胞/原生质体培养过程中，器具、培养基都需要灭菌，但作为培养对象的活细胞/原生质体不能灭菌，灭菌会杀死活细胞，仅需要进行消毒处理，B错误；
C、从图中可知，乙、丙原生质体组的紫杉醇总浓度远高于甲组有细胞壁的细胞悬浮培养，说明无细胞壁对紫杉醇的合成是有影响的，C错误；
D、丙组是琼脂糖包埋后的原生质体悬浮培养，和乙组液体静置培养相比，丙组紫杉醇产量更高，且悬浮培养模式适合放大到发酵罐进行大规模生产，因此丙组更适合用于紫杉醇生产，D正确。
19. 多种肿瘤细胞表面的CD47含量比正常细胞高1.6~5倍，导致巨噬细胞对肿瘤细胞的清除效果减弱。为解除CD47对巨噬细胞的抑制作用，科学家按照如图所示流程进行实验。下列相关叙述错误的有（ ）
A. 过程①可一次性注射较大剂量的CD47，以提高小鼠的免疫效果
B. 图中②使用选择培养基筛选，③用抗体检测方法筛选
C. 过程④可将杂交瘤细胞注射到小鼠脾脏中，一段时间后提取单克隆抗体
D. 实验组中巨噬细胞的吞噬指数显著低于对照组可验证上述推测
答案：ACD
解析：
解答过程：A、过程①为给小鼠注射抗原CD47，不能一次性注射较大剂量，通常需多次、小剂量注射以增强免疫效果，诱导产生更多能分泌抗CD47抗体的B淋巴细胞，A错误；
B、过程②是第一次筛选，使用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，去除未融合细胞、同种细胞融合的细胞；过程③是第二次筛选，需要通过抗体检测筛选出能产生特异性抗CD47抗体的杂交瘤细胞，B正确；
C、过程④为获取单克隆抗体，正确操作是将杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔中（而非脾脏，脾脏是免疫器官，并非生产单克隆抗体的部位），一段时间后从腹水中提取单克隆抗体，C错误；
D、实验组加入单克隆抗体后，CD47的抑制作用被解除，巨噬细胞吞噬能力增强，因此实验组吞噬指数应显著高于对照组才能验证推测，D错误。
三、非选择题：共5题，共58分。除特别说明外，每空1分。
20. 盐胁迫下，植物部分根细胞会发生质壁分离，同时Na+大量进入根细胞，抑制酶的活性，对细胞产生毒害。图1为根的结构示意图，图2为耐盐植物细胞在盐胁迫下调控过程示意图。请回答下列问题：
（1）图1中能明显发生质壁分离的细胞主要分布于__________区，该部位细胞中的_________相当于一层半透膜，在一定相同浓度蔗糖溶液的处理下，不同的根尖细胞发生质壁分离的程度不同，推测出现这一现象最可能的原因是__________。
（2）图2细胞中的SOS2（一种激酶）激活_________，将细胞质基质中的Na+运出细胞和转运至________中以减轻盐毒害。该过程Na+跨膜转运的方式为_____________________________，理由是__________________________________________________________________。
（3）植物细胞成熟过程中，F蛋白调控多泡体（MVB）融合成大液泡。最新研究发现，盐胁迫下，拟南芥根尖伸长区表现为液泡碎片化，即液泡数量多而单个液泡体积小。对此提出三种假说：①原有大液泡缢裂为很多MVB；②MVB融合形成大液泡过程受阻；③细胞膜胞吞过程增强，形成很多MVB。以下实验结果支持假说②的有_________________（填字母）。
a.Na+内流进入细胞质基质，引发F蛋白降解
b.盐胁迫下部分MVB膜上有来自细胞膜的Na+/H+共转运载体
c.阻断F蛋白降解，盐胁迫下未出现液泡碎片化现象
（4）研究者将野生型拟南芥和SOS2功能缺失突变拟南芥（ss2）进行处理，分组及结果如图3.根据上述所有信息，分析耐盐植物的耐盐机制：盐胁迫→激活SOS2→__________________→MVB融合为大液泡受阻→导致液泡碎片化→液泡膜面积增大→液泡膜上________________→植物的耐盐性增强。
答案：（1） ①. 成熟 ②. 原生质层 ③. 不同根尖细胞的细胞液浓度存在差异，导致在相同外界蔗糖溶液浓度下失水程度不同
（2） ①. Na⁺/H⁺共转运载体 ②. 液泡 ③. 主动运输 ④. 该过程为逆浓度运输，需要载体蛋白的协助，消耗H+浓度差提供的能量
（3）ac （4） ①. F蛋白降解 ②. Na+/H+共转运载体增多
解析：
（1）图1中①成熟区（根毛区）细胞具有中央大液泡，是发生明显质壁分离的主要部位。该区域细胞的原生质层（由细胞膜、液泡膜及两者之间的细胞质组成）相当于半透膜。不同根尖细胞的细胞液浓度存在差异，导致在相同外界蔗糖溶液浓度下失水程度不同，从而质壁分离程度不同。
（2）分析图2可知，SOS2激活细胞膜和液泡膜上的Na⁺/H⁺共转运载体。将细胞质基质中的Na⁺运出细胞或转运至液泡内，以降低细胞质中Na⁺浓度，减轻毒害。据图可知Na+外排和转运到液泡中均为逆浓度运输，需要载体蛋白的协助，消耗H+浓度差提供的能量，因此运输方式均为主动运输。
（3）A、若F蛋白降解，其调控MVB融合的功能丧失使MVB融合受阻，支持假说②，a正确；
B、盐胁迫下部分MVB膜上有来自细胞膜的Na+/H+共转运载体，表明MVB可能来自细胞膜胞吞，支持假说③，b错误；
C、说明F蛋白正常存在时，MVB能融合，若F蛋白被降解，融合受阻，支持假说②，c正确。
（4）据图3可知，盐胁迫下野生型拟南芥F蛋白相对含量降低，而用蛋白酶体抑制剂MG132处理后，F蛋白相对含量升高，而SOS2功能缺失突变拟南芥F蛋白含量没有变化，所以盐胁迫激活SOS2后，会促进F蛋白降解，由于F蛋白原本调控MVB融合成大液泡，所以F蛋白降解使MVB融合受阻导致液泡碎片化，液泡碎片化增大了液泡膜面积，从而有更多位置可插入Na+/H+共转运载体，载体增多对Na+的区隔化效率升高，提高了植物的耐盐性。
21. 尖镰孢菌（FOC）是一种土壤真菌，易引起黄瓜等蔬菜患枯萎病，严重影响产量。项目小组欲从土壤中筛选几种能抑制FOC的细菌，构建复合菌群，探究复合菌群对枯萎病的防治效果。请回答下列问题：
（1）取土样后，加入无菌水，制成菌悬液，将菌悬液中微生物接种于固体培养基上的方法有______________________________。该培养基需含有水、碳源、_____________等营养成分，常用_________________________方法对其灭菌。
（2）从分离出的菌株中筛选出HB1、HB5和HB15三株具有较强抑真菌潜力的功能细菌。将FOC接种于培养基一侧，并在距其2 cm处接种待测菌株，对照组只接种FOC，观察抑菌情况，以比较三种菌株的抑制效果。
据图1可知，_______________菌株对FOC的抑制效果最强。为检测三种菌株能否共存，进行了相容性（不相互抑制）试验：将HB1菌液均匀涂布在培养基平板上，将滴加有HB5、HB15菌液和无菌水（CK）的滤纸片放在平板上，培养结果如图2.结果表明，HB5和HB15不会抑制HB1生长，理由是_______________________________________________________________。完成相容性试验，还需进行两组实验，请根据图3写出其中一组设计：a______________________，b__________________，c________________________________。
（3）用复合菌群（HB1+HB5+HB15）灌根处理黄瓜幼苗，接种FOC，作为实验组，对照组仅接种FOC.15天后检测相应指标，结果如下表。复合菌群对黄瓜幼苗的生长具有___________________作用，使发病率_____________。
答案：（1） ①. 平板划线法和稀释涂布平板法 ②. 氮源和无机盐 ③. 高压蒸汽灭菌
（2） ①. HB15 ②. 没有出现抑菌圈 ③. HB1 ④. HB15 ⑤. HB5或a∶HB1 b∶HB5 c∶HB15
（3） ①. 促进 ②. 降低
解析：
（1）高中微生物分离实验中，将微生物接种到固体培养基的常用方法为平板划线法和稀释涂布平板法；微生物培养基的基本营养成分包括水、碳源、氮源、无机盐；对固体培养基常用高压蒸汽灭菌法灭菌。
（2）抑菌实验中，菌株对FOC抑制效果越强，FOC生长被限制越明显，菌株和FOC之间的无FOC生长区（抑菌带）越宽，据图1可知HB15的抑菌带最宽，抑制效果最强。相容性实验中，如果某菌株会抑制涂布菌生长，会在滤纸片周围出现透明抑菌圈；图中HB5、HB15滤纸片周围和对照组一样没有抑菌圈，说明二者不抑制HB1生长。本实验需要验证三种菌株两两都不相互抑制，已经检测了HB5、HB15对HB1的影响，还需要检测另外两组：检测对HB5的影响，或检测对HB15的影响，对应上述实验设计，故a∶HB1，b∶HB15，c∶HB5或a∶HB1 b∶HB5 c∶HB15。
（3）对比表格数据，实验组（添加复合菌群）的茎粗、株高、鲜重等生长指标均高于仅接种FOC的对照组，说明复合菌群对黄瓜幼苗生长有促进作用；发病率从对照组的86.67%降为实验组的40%，因此发病率降低。
22. 真菌能够引发植物细胞内的防御反应，促进次生代谢产物的积累。科研人员选用红豆杉嫩枝条的愈伤组织进行悬浮细胞培养，生产抗肿瘤药物紫杉醇，主要流程如图1所示。请回答下列问题：
（1）过程①需要添加的两类植物激素是_______________________，在悬浮细胞体系中添加桔青霉的目的是__________________________________________________。
（2）研究人员还尝试运用植物体细胞杂交技术，将红豆杉与柴胡培育获得可产生紫杉醇的柴胡植株。实验过程中可用______________酶处理获得原生质体，再用化学诱导试剂_________________诱导原生质体融合，形成杂种细胞的标志是_________________，与该过程密切相关的单层膜细胞器为_________________________。
（3）科研人员继续研究了添加桔青霉诱导子对红豆杉愈伤组织鲜质量、紫杉醇总生产量、PPO（多酚氧化酶，活性高会引起愈伤组织褐化抑制细胞分裂）总活性、PLA（植物防御反应的标志酶，参与紫杉醇的合成）活性的影响，实验结果见图2、图3.据图2可知，添加桔青霉诱导子可以_______________愈伤组织生长，____________________紫杉醇总产量。据图3分析，出现图2所示结果的原因有_____________________________________________________________________________。
答案：（1） ①. 生长素、细胞分裂素 ②. 引发植物细胞内的防御反应，促进次生代谢产物紫杉醇的积累
（2） ①. 纤维素酶和果胶 ②. 聚乙二醇（PEG） ③. 杂种细胞再生出细胞壁 ④. 高尔基体
（3） ①. 促进 ②. 提高 ③. 抑制了PPO活性，抑制了愈伤组织褐化，促进愈伤组织生长，提高紫杉醇总产量；促进了细胞中PLA活性的提高，促进紫杉醇合成
解析：
（1）过程①为脱分化，需要添加生长素和细胞分裂素。在悬浮细胞体系中添加桔青霉，引发植物细胞内的防御反应，促进次生代谢产物紫杉醇的积累。
（2）植物体细胞杂交过程中可用纤维素酶和果胶酶处理获得原生质体，再用化学诱导试剂聚乙二醇（PEG）诱导原生质体融合，形成杂种细胞的标志是杂种细胞再生出细胞壁，与该过程密切相关的单层膜细胞器为高尔基体。
（3）根据图2可知，添加桔青霉诱导子可以促进愈伤组织生长，提高紫杉醇总产量。据图3分析，添加桔青霉诱导子抑制了PPO活性，抑制了愈伤组织褐化，促进愈伤组织生长，提高紫杉醇总产量。添加桔青霉诱导子促进了愈伤组织的生长（鲜重增大），促进了细胞中PLA（植物防御反应的标志酶，参与紫杉醇的合成）活性的提高，促进紫杉醇产量提高。
23. 我国科研人员全球首次在猪的体内培育出了一个“人源化中期肾”，且维持到胚胎第28天。实验过程如图1所示，其中iPS细胞为类似胚胎干细胞的一种细胞，①~⑨为技术操作或生理过程。请回答下列问题：
（1）过程②卵母细胞培养到______________________期才能去核，可以采用__________________技术对卵母细胞去核。过程④运用基因编辑技术（Cas9蛋白在向导RNA引导下，切割目标DNA双链，如图2所示）敲除成纤维细胞中的猪肾发育的关键基因SIX1，可以为后续人iPS细胞的生长和分化提供更合适的生存环境。下列对于该过程的分析，正确的有_____________________________（填字母）。
a.Cas9蛋白由相关基因指导在核糖体上合成
b.Cas9蛋白特异性识别并切割SIX1基因特定位点的磷酸二酯键
c.若α链剪切点附近序列为……TCCACAATC……，则相应的识别序列为……UCCACAAUC……
d.敲除SIX1基因的猪胚胎可避免猪细胞与人iPS细胞竞争肾脏发育的环境
（2）选择iPS细胞进行实验，而非成体干细胞是因为______________________________。对iPS细胞培养的气体环境是____________________，在培养过程中需要________________________，以便清除代谢废物。
（3）将DsRed（红色荧光蛋白基因）标记的改造iPS细胞注射到猪胚胎中，共1820枚胚胎移植到13只受体母猪体内。在胎龄28天收集到三个正常胚胎，胚胎移植前可通过_________________________技术产生同卵多仔后代，提高胚胎利用率。免疫荧光检测显示，DsRed标记的细胞仅出现在嵌合体胚胎________________的区域。
（4）为确认改造iPS细胞的嵌合性，利用PCR技术检测是否存在DsRed基因，请在图3中将对应位置的条带涂黑___________________________，以得到电泳后预期的条带。获得的人源化肾脏仍然带有猪血管，若移植到患者体内可能会存在________________________________________________问题。
答案：（1） ①. 减数第二次分裂中##MⅡ ②. 显微操作 ③. acd
（2） ①. iPS细胞类似胚胎干细胞，具有更高的全能性##iPS细胞增殖能力强，分化程度低 ②. 95%空气和5%CO2 ③. 定期更换培养液
（3） ①. 胚胎分割 ②. 肾脏
（4） ①. ②. 免疫排斥反应
解析：
（1）过程②中，卵母细胞培养到减数第二次分裂中（或MⅡ） 期才能去核，可采用显微操作技术对卵母细胞去核。
a、蛋白质由基因指导在核糖体上合成，Cas9蛋白也不例外，由相关基因指导在核糖体上合成，a正确；
b、Cas9蛋白无特异性识别DNA序列的功能，由向导RNA特异性识别SIX1基因特定位点，引导Cas9切割特定位点的磷酸二酯键，b错误；
c、α链为DNA链，识别序列为向导RNA上的序列，除了碱基T和U不同外，其他碱基序列与α链相同，若α链剪切点附近序列为……TCCACAATC……，则相应的识别序列为……UCCACAAUC……，c正确；
d、敲除SIX1基因的猪胚胎可避免猪细胞与人iPS细胞竞争肾脏发育的环境，d正确。
（2）选择iPS细胞进行实验，而非成体干细胞是因为iPS细胞类似胚胎干细胞，具有更高的全能性（或增殖能力强，分化程度低） 。对iPS细胞培养的气体环境是95%空气加5%CO2，在培养过程中需要定期更换培养液 ，以便清除代谢废物。
（3）胚胎移植前可通过胚胎分割技术产生同卵多仔后代，提高胚胎利用率。免疫荧光检测显示，DsRed标记的细胞仅出现在嵌合体胚胎肾脏的区域。
（4）由于DsRed标记的细胞仅出现在嵌合体胚胎的肾脏区域，经电泳后得到预期条带在嵌合体中都存在。如图，获得的人源化肾脏仍然带有猪血管，若移植到患者体内会存在免疫排斥等问题。
24. 为培育耐盐碱大豆新品种，科研人员把水稻耐盐碱基因OsJRL40和荧光素酶基因构建成融合基因，荧光素酶可催化荧光素产生荧光，部分操作流程及可能用到的限制酶及识别序列如图所示，其中DEX启动子在DEX（地塞米松试剂，可由地塞米松磷酸钠溶解于无菌水配制而成）诱导下才可发挥作用：UAA、UGA、UAG为终止密码子。请回答下列问题：
（1）获取的水稻基因OsJRL40的cDNA，与水稻基因组的OsJRL40基因相比在结构上缺少__________________________________（写出2个）等序列。
（2）图中构建基因表达载体时，切割载体用到的限制酶有________________。已知OsJRL40基因转录的非模板链的序列为：5'-ATGATCCAG……GCTGACTAG-3'，为构建融合基因，引物2的前10个碱基序列为_______（填字母）。
a.5'-GATCCTAGTC-3'
b.5'-GATCGTCAGC-3'
c.5'-AGATCTCTAG-3'
d.5'-AGATCTGTCA-3'
（3）将初步构建的融合基因表达载体转入大豆细胞，常用的方法为_______________________，在培养大豆细胞的基本培养液中添加_________________以检测转化成功的细胞，成功后需除去荧光素酶基因，已知Cre酶可以将DNA上两个相同lxP序列位点之间的片段切除，因此在设计引物3和引物4时需要在限制酶识别序列的_________________（填“5'端”或“3'端”）添加lxP序列。
（4）为验证荧光素酶基因是否被成功敲除，科研人员利用PCR技术进行鉴定，并设计了如下实验。请补充实验步骤并预期结果。
【实验步骤】
①实验分组与处理：
实验组：在培养液中加入________________，培养转基因大豆细胞。
对照组：在培养液中加入____________________，培养转基因大豆细胞。
②RNA提取与逆转录：分别提取两组细胞总RNA，通过逆转录获得cDNA.
③PCR扩增及电泳检测：以cDNA为模板，选择图中引物___________________________进行PCR扩增。
用Bgl Ⅱ完全切割，再进行琼脂糖凝胶电泳，观察有无OsJRL40基因和荧光素酶基因的条带。
【预期结果】
若荧光素酶基因被成功敲除，则实验组和对照组的电泳条带结果分别为________________________________________。
答案：（1）启动子、终止子
（2） ①. SacI和XhI ②. d
（3） ①. 农杆菌转化法 ②. 荧光素 ③. 3′端
（4） ①. DEX ②. 等量无菌水 ③. 1和4 ④. 实验组两种基因的条带都无，对照组两种基因的条带都有
解析：
（1）cDNA是由成熟mRNA逆转录得到的，真核生物基因组中的基因包含启动子、终止子、内含子等序列，而成熟mRNA已经剪切去除内含子，也不携带启动子、终止子序列。
（2）构建基因表达载体时，要将目的基因插入启动子和终止子之间，一般选用双酶切，避免目的基因、载体自身环化或反向连接（保证目的基因与载体正确连接），切割载体用到的限制酶有SacⅠ和XhⅠ，不能选用BglⅡ，若用该酶切会破坏质粒上的四环素抗性基因，导致后续无法对重组DNA分子进行筛选。引物2为下游引物，其5'端需要添加BglⅡ的识别序列（5'-AGATCT-3'，共6个碱基），剩余4个碱基与OsJRL40末端互补，GTCA，因此前10个碱基为5'-AGATCTGTCA-3'，d正确，abc错误。
（3）将Ti质粒携带的目的基因转入植物细胞，常用方法是农杆菌转化法。融合基因的表达依赖DEX启动子，而该启动子仅在DEX诱导下才能启动转录，才能诱导融合基因表达出荧光素酶，因此培养液中须添加荧光素。lxP等额外序列必须添加在引物的3'端，才能使Cre酶将DNA上两个相同lxP序列位点之间的片段切除，完整保留目的片段两端。
（4）实验组：在培养液中加入DEX，培养转基因大豆细胞。
对照组：在培养液中加入等量无菌水，培养转基因大豆细胞。
要扩增同时包含OsJRL40和荧光素酶基因的片段，需要选择OsJRL40上游的引物1和荧光素酶基因下游的引物4。Cre酶仅切除两个lxP序列之间的荧光素酶基因，OsJRL40基因不会被切除。
实验组：DEX诱导Cre酶表达，荧光素酶基因被敲除，cDNA中仅保留OsJRL40基因，两种基因的条带都无；对照组：无DEX诱导，Cre酶不表达，荧光素酶基因完整保留，两种基因的条带都有。检测指标
茎粗（cm）
株高（cm）
地上部鲜重（g）
地下部鲜重（g）
发病率
对照组
0.36
32.0
17.78
0.61
86.67%
实验组
0.40
43.15
26.08
0.98
40.0%
检测指标
茎粗（cm）
株高（cm）
地上部鲜重（g）
地下部鲜重（g）
发病率
对照组
0.36
32.0
17.78
0.61
86.67%
实验组
0.40
43.15
26.08
0.98
40.0%