【生物】江苏省淮安市高中协作体联盟校2025-2026学年第二学期高二年级期中考试试卷（学生版+解析版）

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考试时间：75分钟；总分：100
一、单选题（每题2分，15题，共30分）
1. 北魏农学巨著《齐民要术》记载了许多古人在实际生产中积累的经验，也蕴藏着众多生物学知识。请阅读表格中的古籍原文，下列有关叙述正确的是（ ）
A. “衣生”指发酵液表面形成一层菌膜的现象，主要是酵母菌大量繁殖形成的
B. 从微生物培养的角度看，豆腐是固体培养基，接种时需要对其进行严格灭菌
C. “令没菜把即止”主要目的是让蔬菜充分吸收盐分，使风味品质更佳
D. “鱼眼汤”是指液面冒出小气泡的现象，主要由微生物呼吸作用释放CO2形成
【答案】D
【详解】A、制醋技术中“衣生”是发酵液表面形成菌膜的现象，菌膜由醋酸菌（好氧型细菌）大量繁殖形成（醋酸菌为果醋发酵的核心微生物，需在有氧的液面生长），A错误；
B、腐乳制作中，豆腐可作为毛霉等微生物的生长基质（类似固体培养基），但传统腐乳制作依赖豆腐表面的天然毛霉等微生物，无需严格灭菌（灭菌会杀死发酵所需的毛霉，导致发酵失败），B错误；
C、泡菜制作中“令没菜把即止”（盐水完全浸没蔬菜）的核心目的是创造无氧环境，保证乳酸菌（严格厌氧菌）进行无氧呼吸产生乳酸，C错误；
D、酿酒技术中“鱼眼汤”是液面冒出小气泡的现象，酒曲中的酵母菌活化后，通过细胞呼吸（有氧呼吸阶段繁殖、无氧呼吸阶段产酒精）释放CO2，从而形成小气泡，D正确。
2. 野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长，氨基酸营养缺陷型突变株无法合成某种氨基酸，只能在完全培养基上生长，下图为纯化某氨基酸营养缺陷型突变株的部分流程图，①②③④代表培养基，A、B、C表示操作步骤，D、E为菌落。下列叙述错误的是（ ）
A. 图中①②④为基本培养基，③为完全培养基
B. A操作的目的是提高突变频率，增加突变株的数量
C. B的正确操作是用涂布器把菌液均匀地涂布在②表面
D. 经C过程原位影印及培养后，可从④中挑取D进行纯化培养
【答案】A
【详解】A、野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长，氨基酸营养缺陷型突变株无法合成某种氨基酸，只能在完全培养基上生长，因此图中①②④为完全培养基，③为基本培养基，A错误；
B、紫外线可以提高突变的频率，A操作的目的是提高突变菌株的浓度，B正确；
C、B操作是将菌液滴加到培养基表面，再用涂布器将菌液均匀的涂布在②表面，C正确；
D、从图中可看出，D在基本培养基中无法生长，在完全培养基中可生长，说明D是氨基酸缺陷型菌落，故经C过程影印及培养后，可从④培养基中挑取D菌落进行纯化培养，D正确。
3. 某兴趣小组尝试进行“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验，下列有关该实验的叙述错误的是（ ）
A. 原理：该细菌合成的脲酶可将尿素分解成氨，使培养基的碱性增强
B. 方法：以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，观察颜色变化
C. 分离：利用接种环在固体培养基表面连续划线，将聚集的菌种逐步分散
D. 计数：选取菌落数在30～300之间的平板统计，计数多个平板后求平均值
【答案】C
【详解】A、分解尿素的细菌能合成脲酶，脲酶可将尿素分解为氨，氨为碱性物质，会使培养基的碱性增强，A正确；
B、该实验用以尿素为唯一氮源的选择培养基筛选目标菌，加入酚红指示剂后，尿素分解产生的氨会使培养基pH升高，酚红指示剂变红，可据此鉴别目标菌，B正确；
C、用接种环连续划线的方法是平板划线法，该方法仅能用于菌种的分离纯化，无法对细菌进行计数，本实验需要完成计数操作，应选择稀释涂布平板法接种，C错误；
D、为减小计数误差，统计菌落数时需选取菌落数在30～300之间的平板，对多个符合要求的平板计数后取平均值，D正确。
4. 除草剂莠去津是一种含氮的有机物，长期使用易对土壤造成污染。研究人员从土壤中筛选莠去津降解菌的过程如下图所示（含过量莠去津的固体培养基不透明）。下列叙述错误的是（ ）
A. 从A瓶到C瓶的目的是逐步稀释培养液中的目的菌
B. 选择固体培养基甲中出现的有透明带菌落进行再纯化
C. 图中进行再纯化的接种过程至少需要灼烧6次接种环
D. 整个实验过程中需设置未接种的选择培养基作为空白对照
【答案】A
【详解】A、从A、B、C 瓶是在无氮培养液中进行的富集培养，其主要目的是增加目的菌的浓度，而不是单纯的稀释，A错误；
B、固体培养基甲中含有过量莠去津，不透明。能降解莠去津的细菌会在菌落周围分解莠去津，形成透明带，因此，应选择有透明带的菌落进行再纯化，B正确；
C、图甲展示的是平板划线法纯化菌种，划线 5 次，每次划线前都要灼烧接种环，最后一次划线结束后也要灼烧接种环，共需要灼烧 5+1=6 次，C正确；
D、整个实验过程中，需设置未接种的选择培养基作为空白对照，以检验培养基是否被污染，D正确。
5. 与传统发酵相比，发酵工程的产品种类更加丰富，产量和质量均明显提高。下列说法正确的是（ ）
A. 传统发酵无需进行消毒、灭菌，而发酵工程需要消毒、灭菌
B. 发酵条件变化会影响微生物生长繁殖，但不影响其代谢途径
C. 发酵罐内的发酵可以通过反馈控制使发酵过程处于最佳状态
D. 发酵工程可获得大量微生物菌体并从菌体中提取单细胞蛋白
【答案】C
【详解】A、传统发酵也需要对发酵器具等进行基础消毒处理，以减少杂菌污染，并非完全无需消毒、灭菌，A错误；
B、发酵条件（如温度、pH、溶氧量等）不仅会影响微生物的生长繁殖，也会改变微生物的代谢途径，例如酵母菌在有氧和无氧条件下代谢途径完全不同，B错误；
C、发酵罐可配套传感器实时监测发酵过程中的各项参数，通过反馈控制及时调整发酵条件，可使发酵过程始终处于最佳状态，C正确；
D、单细胞蛋白本身就是发酵获得的微生物菌体，不需要从菌体中提取，D错误。
故选C。
6. 发酵工程在农牧业、食品工业等方面均有广泛的应用。下列关于发酵工程的叙述，错误的是（ ）
A. 向发酵液中加入一定量的酸性重铬酸钾溶液可以检测是否产生酒精
B. 可采用过滤、沉淀的方法将酵母菌从培养液中分离出来
C. 检测啤酒酿造过程中活体酵母菌的密度时，可采用稀释涂布平板法
D. 发酵工程与传统发酵技术的主要区别是菌种是否单一
【答案】A
【详解】A、发酵液中含有葡萄糖，葡萄糖也可与重铬酸钾反应，故向发酵液中加入一定量的酸性重铬酸钾溶液检测酒精可能存在误差，A错误；
B、酵母菌为单细胞生物，个体体积较大，可通过过滤、沉淀的方法将其从培养液中分离出来，B正确；
C、稀释涂布平板法中只有活菌能繁殖形成菌落，可通过统计菌落数推算活菌密度，因此检测活体酵母菌的密度可采用该方法，C正确；
D、发酵工程一般是利用单一菌种进行发酵，传统发酵技术利用的微生物往往不是单一菌种，故发酵工程与传统发酵技术的主要区别是菌种是否单一，D正确。
7. 山姜属的植物具有养胃、镇痛、抗癌、抗氧化、抗应激等多种效用，下列关于某山姜属植物组织培养的相关叙述正确的是（ ）
A. 配制培养基时一般需添加一定量的葡萄糖以提供碳源和能源
B. 植物组织培养过程中，脱分化与再分化的本质都是发生细胞的分裂
C. 接种需在超净工作台进行，期间需注意手部动作，已离开超净工作台的手不可再进入工作台内
D. 对外植体消毒时，使用体积分数为95%的酒精处理30s，立即用无菌水清洗2～3次
【答案】C
【详解】A、植物组织培养的培养基一般添加蔗糖作为碳源和能源，同时蔗糖可维持培养基渗透压，并非添加葡萄糖，A错误；
B、脱分化和再分化过程中会伴随细胞分裂，但二者的本质是基因的选择性表达，并非细胞分裂，B错误；
C、接种需在超净工作台的无菌环境中进行，一旦离开超净台的手部会携带杂菌，不可再进入工作台内，避免造成培养基污染，C正确；
D、外植体消毒使用的是体积分数为70%左右的酒精，95%的酒精会使菌体表面蛋白质快速凝固形成保护膜，无法有效杀灭微生物，D错误。
故选C。
8. 下列关于植物体细胞杂交技术的叙述，正确的是（ ）
A. 用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁获得原生质体
B. 诱导原生质体融合只能用聚乙二醇（PEG）
C. 杂种细胞再生细胞壁后即成为杂种植株
D. 该技术能克服远缘杂交不亲和性，但子代会遗传双亲全部性状
【答案】A
【详解】A、植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，使用纤维素酶和果胶酶可以去除细胞壁，获得原生质体，A正确；
B、诱导原生质体融合的方法有物理法（如电融合、离心）和化学法（如聚乙二醇PEG），B错误；
C、杂种细胞再生细胞壁后，还需要经过植物组织培养（脱分化、再分化）才能发育成杂种植株，C错误；
D、植物体细胞杂交技术能克服远缘杂交不亲和性，但子代不会遗传双亲全部性状，因为基因的表达会受到环境等因素的影响，且细胞融合后部分基因可能沉默，D错误。
9. 铁皮石斛是我国名贵中药，生物碱是其有效成分之一。以铁皮石斛新生营养芽为材料，培养拟原球茎（简称PLBs，类似愈伤组织）生产生物碱的实验如图所示。下列说法不正确的是（ ）
A. 铁皮石斛产生的生物碱属于其次生代谢产物
B. 过程①诱导新生营养芽变成PLBs的关键是适宜的植物激素和营养条件
C. 过程②培养高产细胞系应选择细胞数量/生物碱产量比值大的PLBs
D. PLBs重量、光照等因素均会影响生物碱的产量
【答案】C
【详解】A、植物细胞的次生代谢物含量很低，从植物组织提取会大量破坏植物资源，有些产物又不能或难以通过化学合成途径得到，因此人们期望利用植物细胞培养来获得目标产物，铁皮石斛产生的生物碱属于其次生代谢产物，A正确；
B、过程①表示脱分化，脱分化的关键是适宜的植物激素和营养条件，B正确；
C、培养高产细胞系时，应该选择生物碱产量/细胞数量比值大的PLBs，因为我们的目的是获得高产生物碱的细胞系，生物碱产量/细胞数量比值大意味着单位细胞数量产生的生物碱多，更符合高产的要求，C错误；
D、PLBs重量、光照等因素均会影响生物碱的产量，D正确。
故选C。
10. 动物细胞培养是细胞工程的基础。关于动物细胞培养的叙述，错误的是（ ）
A. 培养液通常需添加血清等天然成分
B. 传代培养时，贴壁细胞需用胰蛋白酶处理分散
C. 原代培养细胞一般传至10代以内遗传物质未改变
D. 细胞系通常具有无限增殖的潜能，均具有接触抑制现象
【答案】D
【详解】A、动物细胞培养液通常需要添加血清等天然成分，这些成分可以提供细胞生长所需的未知营养物质，A正确；
B、传代培养时，贴壁生长的细胞需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理，使细胞分散成单个细胞，便于后续培养，B正确；
C、原代培养的细胞一般传至10代以内时，遗传物质未发生改变，细胞的生长状态较为稳定，C正确；
D、细胞系通常具有无限增殖的潜能，但癌细胞系（如HeLa细胞）不具有接触抑制现象，D错误。
11. 如图表示利用细胞融合技术进行基因定位的过程。在人-鼠杂种细胞中人的染色体会以随机方式丢失，通过分析基因产物进行基因定位。现检测细胞I、Ⅱ、Ⅲ中人的4种酶活性，只有Ⅱ具有芳烃羟化酶活性，只有Ⅲ具有胸苷激酶活性，I、Ⅲ都有磷酸甘油酸激酶活性，I、Ⅱ、Ⅲ均有乳酸脱氢酶活性。下列有关叙述错误的是（ ）
A. 聚乙二醇也可诱导人细胞与小鼠细胞融合
B. 编码磷酸甘油酸激酶的基因在X染色体上
C. 编码芳烃羟化酶的基因位于11号染色体上
D. 培养杂种细胞时，通常需定期更换培养液
【答案】C
【详解】A、诱导动物细胞融合的常用方法有PEG（聚乙二醇）融合法、电融合法和灭活病毒诱导法等，A正确；
BC、I、Ⅱ、Ⅲ均有乳酸脱氢酶活性，细胞I、Ⅱ、Ⅲ共有的是11号染色体，可以推测乳酸脱氢酶基因最可能在11号染色体上，同时因为Ⅱ没有磷酸甘油酸激酶活性，所以该酶基因不可能在11号染色体上；只有Ⅱ具有芳烃羟化酶活性，只有Ⅱ有2号染色体，所以芳烃羟化酶基因最可能在2号染色体上；I、Ⅲ共有的是X染色体和11号染色体，又因为已判定磷酸甘油酸激酶基因不在11号染色体，所以该酶基因应该最可能在X染色体上；只有Ⅲ有胸苷激酶活性，I、Ⅱ、Ⅲ中，只Ⅲ具有17号染色体，所以胸苷激酶基因最可能位于17号染色体上，B正确，C错误；
D、动物细胞培养时培养液还需定期更换，以便清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害，D正确。
故选C。
12. 2025年，研究人员成功利用体细胞核移植技术克隆出白洗猪，为黔东南地方猪种的保护提供了新思路。下列叙述正确的是（ ）
A. 供体细胞的分化程度影响细胞核全能性的表达
B. 采集的卵母细胞在去核后需体外培养至MⅡ期
C. 通常用Ca2+载体、灭活病毒等方法激活重构胚
D. 重构胚移植前需进行免疫检查以防止免疫排斥
【答案】A
【详解】A、细胞分化程度越高，基因选择性表达程度越深，细胞核重编程难度越大，全能性越难表达，因此供体细胞的分化程度会影响细胞核全能性的表达，A正确；
B、采集的卵母细胞需先体外培养至MⅡ期（减数第二次分裂中期），再进行去核操作，选项操作顺序错误，B错误；
C、通常用电刺激、Ca2+载体、乙醇、蛋白酶合成抑制剂等方法激活重构胚，灭活病毒是诱导动物细胞融合的方法，不用于重构胚激活，C错误；
D、受体子宫对移入的外来胚胎基本不发生免疫排斥反应，这是胚胎移植的生理学基础之一，因此重构胚移植前无需进行免疫检查，D错误。
故选A。
13. 研究发现：双胞胎有同卵双胞胎、异卵双胞胎和“半同卵双胞胎”。1对“半同卵小姐弟双胞胎”形成过程如图所示。下列相关叙述错误的是（ ）
A. “半同卵双胞胎”的产生可能与受精过程中透明带生理反应异常有关
B. 动物排出的卵子需要在输卵管内发育到MII期才能受精
C. 这对小姐弟源于母亲的染色体相同，源于父亲的常染色体可能不同
D. 细胞a的染色体组成为MP1，则细胞c的染色体组成为P1P1或MM
【答案】D
【详解】A、“半同卵双胞胎”的产生是由于两个精子与一个卵细胞受精引起的，可能与透明带反应异常有关，A正确；
B、排卵是指卵子从卵泡中排出，此时的卵子通常是处于减数第二次分裂时期的次级卵母细胞。卵子发育到减数第二次分裂中期（MII期）才具备受精的能力，B正确；
CD、来自母系的染色体为M，来自父系的染色体为P1、P2，经过一次复制后，染色体进行组合，若细胞a的染色体组成为MP1，细胞c的染色体均来自父亲，其染色体组成为P1P2，细胞b的染色体组成为MP2，故这对小姐弟来源于母亲的染色体相同，来源于父亲的常染色体可能不同，C正确,D错误。
故选D。
14. 将基因型为AA的黑色小鼠囊胚的内细胞团部分细胞注射到基因型为aa的白色小鼠囊胚腔中，接受注射的囊胚发育为黑白相间的小鼠（Mc）。下列相关叙述正确的是（ ）
A. Mc的培育过程体现了动物细胞的全能性
B. 孕育Mc小鼠的胎膜和胎盘的基因型均为aa
C. 获得Mc的生物技术包括动物细胞培养和动物细胞核移植等
D. 取白色小鼠囊胚的滋养层细胞进行性别鉴定可确定Mc的性别
【答案】B
【详解】A、动物细胞全能性指单个细胞发育成完整个体的能力。该过程仅形成嵌合体（组织器官混合），未形成完整新个体，未体现全能性，A错误；
B、胎膜和胎盘由囊胚的滋养层发育而来，滋养层来自受体白色小鼠（基因型aa），故其基因型均为aa，B正确；
C、该过程仅涉及动物细胞培养和胚胎移植，不涉及动物细胞核移植技术，C错误；
D、滋养层细胞来自受体白色小鼠（aa），其性别鉴定结果反映受体胚胎性别，而非嵌合体Mc（含供体AA细胞）的性别，D错误。
故选B。
15. 胚胎工程中各种胚胎操作技术如图所示。下列分析正确的是（ ）
A. 图中“小牛”的性别为雄性
B. 胚胎体外培养需抑制其分化
C. d移植给受体得到小牛的途径属于无性生殖
D. 早期囊胚a、b、c基因型相同，但发育得到的个体表型不一定相同
【答案】C
【详解】A、题图未知受精形成的早期囊胚c的性别，所以无法确定图中“小牛”的性别，可能为雄性，也可能为雌性，A错误；
B、在胚胎体外培养中，囊胚过程中细胞继续分化，会形成内细胞团和滋养层细胞，其中内细胞团将来发育成胎儿的各种组织，滋养层细胞将来发育成胎膜和胎盘的一部分，在原肠胚过程中，三个胚层会逐渐分化形成各种组织、器官等，胚胎体外培养不需抑制其分化，B错误；
C、d的获得是利用胚胎分割的技术获得的，所以为无性生殖，C正确；
D、图中三种早期囊胚由不同受精卵发育而来，所以a、b、c细胞核中的遗传物质不一定相同，基因型不一定相同，D错误。
二、多选题（每题3分，漏选1分，错选0分，4题，共12分）
16. 藜麦蛋白酸奶中不含胆固醇，具有热量低、易吸收等优点，更适合乳糖不耐受的人群食用。科学家研究了酸奶发酵过程中白砂糖添加量对酸奶口感和酸度的影响，酸奶制作过程及实验结果如下图。下列叙述正确的是（ ）
A. 发酵过程中若密封不严，会导致氧气进入，促进杂菌繁殖，使酸奶酸度异常升高
B. 当白砂糖添加量从5%增至7%时，感官评分上升，说明适量的糖可提升酸奶口感
C. 制作流程中“加糖溶解”的操作应在“杀菌”之后进行，以避免白砂糖带入杂菌
D. 由实验结果可知，白砂糖添加量为7%时，酸奶的感官评分与酸度达到最佳平衡
【答案】BD
【分析】制作酸奶时要用到乳酸菌，先是将牛奶煮沸，进行高温灭菌，然后冷却，再在冷却后的牛奶中加入少量的含乳酸菌的酸奶，相当于接种。乳酸菌要在无氧的条件下才能发酵产生乳酸，因此容器要密封，以创造无氧的环境。
【详解】A、乳酸菌通过无氧呼吸将乳糖转化为乳酸，从而降低pH值，发酵过程中若密封不严，会导致氧气进入，会抑制乳酸菌的生长繁殖，同时促进需氧杂菌的生长，使pH值升高，故酸奶酸度不会异常升高，A错误；
B、从图中可以看出，当白砂糖添加量从5%增至7%时，感官评分上升，说明适量的糖可提升酸奶口感，B正确；
C、为避免白砂糖带入杂菌，制作流程中“加糖溶解”的操作应在“杀菌”之前进行，C错误；
D、由图中可以看出，白砂糖添加量为7%时，感官评分最高，说明此时酸奶的口感最好，与酸度达到最佳平衡，D正确。
故选BD。
17. 苹果树腐烂由苹果树腐烂菌感染引起，为开发生物防治途径，研究者拟从土壤中分离筛选出能抑制苹果树腐烂菌生长的芽孢杆菌，实验流程如下图。相关叙述正确的是（ ）
A. 过程①取5g土壤加入45mL无菌水中
B. 过程③应用涂布法进行接种，在适宜条件下培养
C. 过程③可通过观察芽孢杆菌的形状、大小、颜色进行筛选
D. 乙组A处长出的菌落直径应大于甲组A处长出的菌落直径
【答案】ABD
【详解】A、过程①是制备土壤悬液，取 5g 土壤加入 45mL 无菌水中，可得到稀释度为10−1的土壤悬液，A正确；
B、过程③是分离筛选芽孢杆菌，梯度稀释后常用涂布法进行接种，在适宜条件下培养，以获得单菌落，B正确；
C、不同微生物的菌落形态具有特异性，因此可通过观察菌落特征对芽孢杆菌进行初步筛选，C错误；
D、甲组 A 处（苹果树腐烂菌）周围接种了芽孢杆菌（B），芽孢杆菌会抑制腐烂菌生长，导致甲组 A 处腐烂菌菌落直径较小，乙组 A 处仅接种苹果树腐烂菌，无芽孢杆菌抑制，其菌落生长不受限制，因此乙组 A 处菌落直径应大于甲组 A 处，D正确。
18. 水果红提中富含槲皮素，槲皮素具有抗氧化、抗癌等多种生物活性。科研人员以二倍体红提和植株F为材料，采用多种途径尝试培育不同品种，培育途径如图所示，其中①~⑤表示过程。下列有关叙述错误的是（ ）
A. 进行过程④前需要用胶原蛋白酶处理植物细胞，从而获得原生质体
B. 过程④可以用离心法、聚乙二醇或灭活病毒诱导两种原生质体融合
C. 上述植株中，属于四倍体的只有植株E
D. 途径丙和丁均利用了植物细胞的全能性的原理
【答案】ABC
【详解】A、过程④表示植物原生质体融合，过程④之前需要用纤维素酶和果胶酶去除植物细胞的细胞壁，从而获取原生质体，A错误；
B、过程④表示植物原生质体融合，灭活的病毒诱导的是动物细胞融合，不能用于植物原生质体融合，B错误；
C、植株A是有性生殖产生的二倍体，植株B是单倍体，植株C是单倍体育种获得的纯合二倍体，植株D是植物组织培养技术获得的二倍体，植株E是多倍体育种获得的四倍体，植株G是植物体细胞杂交技术获得的四倍体，因此属于四倍体植物的有植株E、植株G，C错误；
D、植物组织培养的原理是植物细胞的全能性，过程③和⑤利用了植物组织培养技术，所以途径丙和丁均利用了植物细胞的全能性的原理，D正确。
19. 动物细胞工程在医疗、物种繁殖等方面有着广泛的应用。下列关于动物细胞工程的叙述，正确的是（ ）
A. 从动物体内取出组织，用酶处理后直接培养的细胞称为传代细胞
B. 核移植技术与干细胞诱导技术结合，可用于修补人体损伤的器官
C. 采用胚胎分割技术克隆动物时，可选用细胞未发生分化的桑葚胚
D. 胚胎移植后，经受体孕育的后代，其遗传特性与受体保持基本一致
【答案】BC
【详解】A、从动物体内取出组织，用胰蛋白酶处理后直接培养的细胞称为原代细胞，A错误；
B、核移植技术得到的重组细胞，利用干细胞诱导技术得到iPS细胞，可用于修补人体损伤的器官，理论上可以避免免疫排斥反应，B正确；
C、采用胚胎分割技术克隆动物常可选用桑葚胚或囊胚，桑葚胚时期，细胞未发生分化，囊胚时期，细胞发生了分化，C正确；
D、供体胚胎与受体子宫建立的仅是生理和组织上的联系，其遗传物质在孕育过程中不会发生任何变化，故胚胎移植后，经受体孕育的后代的遗传特性与供体保持一致，D错误。
故选BC。
三、非选择题（本大题共5小题，共计58分，除特别说明外，每空1分）
20. 桑葚营养价值丰富，但不耐贮藏，研究人员利用发酵工程技术将其制成桑葚果酒，工业化生产大致流程为①桑葚挑选、清洗、榨汁；②酶解；③接种酵母菌；④发酵；⑤终止（澄清、过滤、分装）。回答下列问题。
（1）过程②酶解时，需向桑葚汁中添加_____，破坏细胞壁以提高果汁出汁率和澄清度。
（2）过程④开始时需要进行一段时间的通氧，目的是_____。密封后，酵母菌进行发酵产生酒精，该生理过程的化学反应式为_____。发酵过程中需定期对酒精进行检测，常用的检测试剂是_____。
（3）为及时了解发酵进程，研究人员还需定期对发酵液中酵母菌进行计数。采用稀释涂布平板法计数时，统计的活菌数目往往比实际数目少，原因是_____。若某次检测时采用图甲所示规格的血细胞计数板进行计数，检测时将发酵液稀释100倍，经过一系列操作，检测四角中方格的酵母菌数量分别为22、26、24、28个，则此时发酵液中酵母菌的种群密度约为_____。
（4）为提高发酵效率，研究人员从自然发酵液中筛选出2株产酒精效果较好的酵母菌菌株，进行性能测试，结果如图乙所示。
分析图乙可知，桑葚酒生产中的优良菌种是菌株_____（填“J1”或“J3”），判断的依据是_____。
（5）在桑葚果醋的发酵工程中，防止杂菌污染是保证产品质量的关键。下列有关该生产过程中无菌操作的叙述，正确的有______。
A. 在接种前，需对发酵罐进行彻底的灭菌处理
B. 对压榨后的桑葚汁进行适当消毒，可有效减少杂菌污染
C. 醋酸发酵阶段需要持续通入经过滤除菌处理的无菌空气
D. 酒精发酵后，发酵液中的乙醇本身已能完全抑制所有杂菌生长，无需额外处理
【答案】（1）纤维素酶和果胶酶
（2）①. 让酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖 ②. C6H12O62C2H5OH＋2CO2＋能量 ③. 酸性重铬酸钾溶液
（3）①. 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 ②. 4×108个/mL
（4）①. J3 ②. 在相同发酵时间内，J3菌株的酒精度高于对照组和J1菌株，总糖含量低于对照组和J1菌株 （5）ABC
【解析】（1）植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，过程②酶解时，需向桑葚汁中添加纤维素酶和果胶酶，以破坏细胞壁提高果汁出汁率和澄清度。
（2）过程④开始时进行一段时间的通氧，目的是让酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖，增加酵母菌数量，为后续发酵做准备。密封后，酵母菌进行无氧呼吸发酵产生酒精，该生理过程的化学反应式为C₆H₁₂O₆2C₂H₅OH+2CO₂+能量。发酵过程中常用酸性重铬酸钾溶液检测酒精，酒精与之反应呈现灰绿色。
（3）采用稀释涂布平板法计数时，统计的活菌数目往往比实际数目少，原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。血细胞计数板计数时，检测四角中方格的酵母菌数量分别为22、26、24、28个，则每个中方格的酵母菌平均数为(22+26+24+28)÷4=25个。由图可知该血细胞计数板的计数室规格为16×25型（中方格子为16个），则0.1 mm3计数室中酵母菌数量为25×16=400个。已知检测时将发酵液稀释100倍，0.1 mm3=10-4mL，所以此时发酵液中酵母菌的种群密度约为400÷10-4×100=4×108个/mL。
（4）分析图乙可知，桑葚酒生产中的优良菌种是菌株J3。判断的依据是在相同发酵时间内，J3菌株的酒精度高于对照组和J1菌株，并且总糖含量低于对照组和J1菌株，说明J3发酵产生酒精的效率高，能将更多的糖转化为酒精。
（5）A、接种前对发酵罐彻底灭菌，可以避免杂菌污染，A正确；
B、对压榨后的桑葚汁消毒，能减少原料中的杂菌，B正确；
C、醋酸菌是好氧菌，醋酸发酵阶段需要持续通入无菌空气，C正确；
D、酒精发酵后，发酵液中的乙醇不能完全抑制所有杂菌生长，还需要进行无菌处理，D错误。
21. 土壤中的磷大多数以难溶性磷酸盐[如Ca3（PO4）2]的形式存在，不利于植物吸收。科研人员尝试从土壤中筛选将难溶性磷转化成可溶性磷的高效解磷菌（可形成溶磷圈），主要流程如图甲所示。请回答下列问题：
（1）步骤②需充分振荡20min，主要目的是_____，步骤③将土壤悬浮液稀释了_____倍。
（2）步骤④中培养基的成分：葡萄糖、（NH4）2SO4、NaCl、MgSO4·7H2O、KCl、FeSO4·7H2O、MnSO4、Ca3（PO4）2、琼脂粉等。该培养基中的氮源是_____。步骤④使用的接种工具为_____。
（3）步骤⑤使用接种环挑取步骤④培养基中的_____菌落（选填图中的字母），采用_____的方法在培养基表面接种，目的是_____，每次划线前都要对接种环进行灼烧的目的是_____，图1中接种环灼烧的总次数应为_____。
（4）将得到的高效解磷菌接入已灭菌的含难溶磷的液体培养基中培养，每天取样测定溶磷量和pH变化情况，结果如图乙所示。
①结果表明，高效解磷菌分解难溶磷的能力呈现_____的趋势。
②根据培养液的pH变化情况，推测高效解磷菌的溶磷原理为_____。
【答案】（1）①. 使土壤中的微生物充分释放到无菌水中 ②. 1000
（2）①. （NH4）2SO4 ②. 涂布器
（3）①. a ②. 平板划线 ③. 获得单菌落 ④. 杀死接种环上的微生物 ⑤. 4
（4）①. 先上升后下降 ②. 溶磷菌可能通过产生酸性代谢物分解难溶磷
【解析】（1）土壤中含有多种微生物和有机质，步骤②需充分振荡20min，主要目的是使土壤中的微生物充分释放到无菌水中，由图观察可知，步骤③中的稀释梯度分别为10、100、1000倍，步骤③将土壤悬浮液稀释了1000倍。
（2）该培养基中的氮源是（NH4）2SO4，步骤④是稀释涂布平板法，所用工具是涂布器。
（3）透明圈直径与菌落直径的比值代表微生物溶解磷能力的大小，该比值越大，溶磷能力越强，故挑出溶磷圈直径与菌落直径比值较大的菌落a，步骤⑤是平板划线操作，该操作的目的是获得单菌落。每次划线前都要对接种环进行灼烧的目的是杀死接种环上的微生物，⑤中有3个划线区域，每次划线前和最后划线结束后需要灼烧灭菌，因此接种环灼烧的总次数应为3+1=4。
（4）①据题图可知，1~4d溶磷量随时间延长而逐渐增多，在4~8d溶磷量随时间延长而逐渐减少，即目的菌分解难溶磷的能力先升高后降低。
②由题图可知，加入溶磷菌后培养基的pH迅速降低，溶磷量逐渐增多，之后随着pH回升，溶磷量逐渐减少，据此推测溶磷菌可能通过产生酸性代谢物分解难溶磷。
22. 人参作为名贵中药材，素有“百草之王”的美誉，其主要活性成分为人参皂苷。药用参主要依赖人工栽培，不仅生长周期漫长，还易受病虫害侵扰。为解决这些问题，科研人员制定的研究方案如下图。
（1）过程①使外植体（人参或胡萝卜的组织、细胞）转变为愈伤组织状态，该过程称为______。该过程______（填“是”或“否”）需要给予光照；与完整的人参植株相比，愈伤组织细胞的全能性______（填“更高”“更低”或“相同”）。
（2）原生质体融合的原理______，③过程细胞两两融合时，可出现_____种融合细胞。
（3）过程③常用一定浓度的PEG诱导融合，但高浓度的PEG会对原生质体产生毒性，且会持续诱导非特异性融合。PEG处理一定时间后，需向体系中加入过量的培养基进行稀释，其目的是______。除了使用PEG诱导，常用的化学方法还有______。
（4）过程⑤和⑥体现了______。过程⑤和⑥两个培养基的主要区别在于______，过程⑥中生长素与细胞分裂素的比值______（填高或低）有利于芽的分化。人参皂苷属于人参的______（填“初生”或“次生”）代谢物。与传统人工栽培提取模式相比，通过筛选和培养高产细胞来生产人参皂苷的优点有______（答出1点）。
【答案】（1）①. 脱分化 ②. 否 ③. 更高
（2）①. 细胞膜具有一定的流动性 ②. 3
（3）①. 降低PEG浓度，终止融合并减少对原生质体的损伤 ②. 高Ca2⁺-高pH融合法
（4）①. 植物细胞的全能性 ②. 培养基中激素的含量和比例不同 ③. 低 ④. 次生 ⑤. 保护野生人参资源、不占用土地、不受季节和天气限制、产量稳定、生产周期短
【解析】（1）外植体失去原有分化状态，转变为未分化愈伤组织的过程叫作脱分化。脱分化过程不需要光照，因为此阶段主要是细胞恢复分裂能力，光照可能会抑制脱分化。与完整植株相比，愈伤组织细胞分化程度低，全能性更高，因为它更容易发育成完整的个体。
（2）原生质体融合的原理是细胞膜具有一定的流动性，③过程细胞两两融合时，可出现3种融合细胞，分别是杂种细胞、人参-人参融合细胞、胡萝卜-胡萝卜融合细胞。
（3）高浓度PEG具有毒性且会持续诱导融合，稀释可快速降低其浓度，从而终止融合反应并减轻对原生质体的损伤；除PEG法外，另一种常用的诱导原生质体融合的化学方法是高Ca2+-高pH融合法。
（4）杂种细胞能够发育成完整植株体现了植物细胞的全能性，过程⑤和⑥为脱分化和再分化，两个过程中培养基中激素的含量和比例不同，细胞分裂素可促进芽的分化和侧枝的发育，过程⑥再分化中生长素与细胞分裂素的比值低有利于芽的分化。人参皂苷并非细胞基本生命活动所必需的代谢物，是次生代谢物；植物细胞大规模培养可摆脱天气和季节的限制，同时有效保护野生人参资源，不占用土地，还能实现产量稳定、缩短生产周期。
23. 肿瘤细胞表面有受体EGFR，CD3是T细胞表面的标志性抗原。科研人员制备双特异性抗体EGFR/CD3，可招募T细胞定向移至肿瘤细胞，增强其对肿瘤细胞的杀伤力，过程如下图所示。
（1）动物细胞培养：动物细胞培养应提供的气体条件是_____，其中CO2的作用是_____。注射EGFR进入小鼠体内后，可从小鼠______中获取能产生特异性抗体的细胞B，并用______酶进行处理分离制备成细胞悬液。细胞B与细胞A融合前，_____（填“需要”或“不需要”）通过原代培养扩大细胞B数量。
（2）诱导融合：细胞融合过程中可添加脂溶性物质______促进细胞融合。
（3）第一次筛选：常使用特定的选择培养基（如HAT培养基），该培养基对未融合的细胞和_____细胞生长具有抑制作用。为了提高异种细胞筛选的成功率，也可以通过红、绿颜色荧光分别标记A、B细胞膜蛋白，再用荧光显微镜观察融合细胞表面的______现象进行筛选。
（4）第二次筛选：筛选出杂交瘤细胞后，先进行______培养，再利用______方法，来获得能产生特定抗体的单克隆杂交瘤细胞。
（5）克隆培养：在体外进行杂交瘤细胞培养时需要在合成培养基的基础上添加______等天然成分。据图分析，抗体是由两条H链和两条L链组成的4条肽链的对称结构，双杂交瘤细胞在理论上会产生多种抗体，原因是______。
（6）与常规血清抗体相比，单克隆抗体的优点是______（写出两点）。
【答案】（1）①. 95%空气和5%CO2 ②. 维持培养液的pH ③. 脾脏 ④. 胰蛋白酶/胶原蛋白酶 ⑤. 不需要
（2）聚乙二醇/PEG
（3）①. 融合的具有同种核/同种融合 ②. 荧光的颜色/红绿相间
（4）①. 克隆化/细胞克隆/克隆 ②. 抗体检测呈阳性/抗原—抗体杂交法/抗体阳性检测
（5）①. 动物血清 ②. 双杂交瘤细胞会表达产生两种H链和两种L链，H链和L链的结合又是随机的，因而产生多种抗体
（6）特异性强；灵敏度高、可大量制备
【解析】（1）动物细胞培养需95%空气和5%CO2的混合气体。95%空气提供细胞呼吸所需的O2，5%CO2能维持培养液的pH稳定。EGFR作为抗原注射小鼠后，小鼠免疫系统会产生特异性抗体，能产生该抗体的B淋巴细胞主要存在于脾脏中，因此从脾脏中获取细胞B。脾脏组织中的细胞相互黏连，需用胰蛋白酶或胶原蛋白酶分解细胞间的蛋白质，使细胞分散形成细胞悬液。细胞B是已免疫的B淋巴细胞，与骨髓瘤细胞（细胞A）融合前无需原代培养扩大数量，直接融合即可满足实验需求。
（2）诱导动物细胞融合的脂溶性物质是PEG（聚乙二醇）。PEG能改变细胞膜的通透性，使两个细胞的细胞膜融合，进而实现细胞质和细胞核的融合。
（3）HAT培养基是筛选杂交瘤细胞的常用选择培养基，它能抑制未融合的亲本细胞（细胞A、细胞B）和同种融合细胞（如细胞A与细胞A融合、细胞B与细胞B融合）的生长，仅允许异种融合的杂交瘤细胞存活。若用红、绿荧光分别标记细胞A和细胞B的膜蛋白，异种融合的杂交瘤细胞表面会同时出现红色和绿色荧光（红绿相间），可通过荧光显微镜观察该现象快速筛选出目标融合细胞。
（4）第一次筛选得到的杂交瘤细胞可能存在多种，需先进行克隆化培养，获得单一细胞来源的克隆群，保证细胞的纯度。通过抗原—抗体杂交法等抗体阳性检测方法，筛选出能产生特定抗体（抗EGFR抗体或抗CD3抗体）的单克隆杂交瘤细胞，排除产生无关抗体的细胞。
（5）体外培养杂交瘤细胞时，合成培养基需添加动物血清等天然成分，血清中含多种未知营养物质，能满足细胞生长和增殖的需求。双杂交瘤细胞由单克隆杂交瘤细胞与细胞C融合形成，会表达两种不同的H链和两种不同的L链。由于H链和L链的结合是随机的，会形成多种组合，因此理论上会产生多种抗体。
（6）常规血清抗体从血液中获取，血液来源少，且不稳定，而血液中抗体数量少，种类多，因此灵敏度低，特异性不强，不能大量制备，但单克隆抗体数量多，种类比较单一，可以培养具有无限增殖能力的杂交瘤细胞来获取，因此具有特异性强；灵敏度高、可大量制备的特点。
24. 随着生物科学技术的发展，动物的生殖方式变得越来越多样化。如图是胚胎工程技术研究及应用的相关情况，供体1是良种荷斯坦高产奶牛，供体2是健康的黄牛，请据图分析并回答下列问题。
（1）图中产生小牛的几个途径中，属于无性繁殖途径的有应用______（填数字）。
（2）应用1中，为了大量获取细胞B，需对供体2注射______，使用______技术获得重组细胞，最终获得的良种小牛性别为______。
（3）供体1完成体内受精的场所在______。在应用2、3、4中，若要使精子和卵母细胞在体外成功结合，需要对精子进行处理，使其______，胚胎移植前需要对受体进行______处理，______（填“需要”或“不需要”）注射免疫抑制剂。
（4）应用3可解决良种动物快速大量繁殖的问题：对囊胚阶段的胚胎通过______技术获得二分胚①和②，操作时需要注意______，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。
【答案】（1）1、3 （2）①. 促性腺激素 ②. 体细胞核移植 ③. 雌性
（3）①. 输卵管 ②. 获能 ③. 同期发情 ④. 不需要
（4）①. 胚胎分割 ②. 将内细胞团进行均等分割
【解析】（1）应用1采用了核移植技术，形成克隆动物，属于无性生殖；应用2采用体外受精、早期胚胎培养和胚胎移植技术，形成的是试管动物，属于有性生殖；应用4表示从早期胚胎或原始性腺中提取胚胎干细胞；应用3采用了胚胎分割技术，属于无性生殖，故图中产生小牛的几个途径中，属于无性繁殖途径的为应用1、3。
（2）应用1中，为了大量获取细胞B，即卵母细胞，需要对供体2注射促性腺激素，使其超数排卵，使用动物体细胞核移植技术获得重组细胞，由于供体1是良种荷斯坦高产奶牛，其提供细胞核，所以最终获得的良种小牛为雌性。
（3）供体1完成体内受精的场所发生在输卵管内，在应用2、3、4中，若要使精子和卵母细胞在体外成功结合，需要对精子进行获能处理，因为获能后的精子才具备与卵细胞受精的能力，应用2过程中得到的胚胎应该移植到和供体同种的、生理状态相同的雌性动物体内，因此受体雌性动物需要经过同期发情处理，不需要注射免疫抑制剂。
（4）应用3可解决良种动物快速大量繁殖的问题：对囊胚阶段的胚胎通过胚胎分割技术获得二分胚①和②，对囊胚阶段的胚胎进行分割时需要将内细胞团进行均等分割，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育，若要进行性别鉴定，取滋养层细胞进行。
工艺名称
古籍原文
酿酒技术
浸曲发，如鱼眼汤，净淘米八斗，炊作饭，舒令极冷
制醋技术
大率酒斗，用水三斗，合瓮盛，置日中曝之……七日后当
臭，衣生，勿得怪也，但停置，勿移动，挠搅之。数十日，醋成
腐乳制作技术
豆腐又名菽乳，以豆腐腌过酒糟或酱制者，味咸甘心
泡菜制作
作盐水，令极咸，于盐水中洗菜，内（纳）瓮中。其洗菜
盐水，澄取清者，泻著瓮中，令没菜把即止，不复调和