江苏省扬州中学2025-2026学年高二下学期期中考试生物试题（含答案）

这是一份江苏省扬州中学2025-2026学年高二下学期期中考试生物试题（含答案），共7页。
2026.4
试卷满分：100 分，考试时间：75 分钟
注意事项:
1.作答第 I 卷前，请考生务必将自己的姓名、考试证号等写在答题卡上并贴上条形码。
2.将选择题答案填写在答题卡的指定位置上（使用机读卡的用2B 铅笔在机读卡上填涂），非选择题一律在答题卡上作答，在试卷上答题无效。
3.考试结束后，请将机读卡和答题卡交监考人员。
第 I 卷（选择题共 43 分）
一、单项选择题：本大题共 14 小题，每小题 2 分，共 28 分。在每题给出的四个选项中只有一项是最符合题意的。（请将所有选择题答案填到答题卡的指定位置中）
1．制醋、制酒是我国传统发酵技术。以下关于传统发酵技术与发酵工程的叙述正确的是( ) A ．在葡萄酒酿制的整个过程中需要严格保证无氧环境
B ．乙醇既是果酒发酵的产物，也是果醋发酵的底物，又可以抑制杂菌繁殖
C ．通过酵母菌发酵获得大量菌体，从菌体细胞中提取单细胞蛋白作为动物饲料
D ．啤酒生产的后发酵阶段是在密闭和酵母菌生长的最适温度下获得澄清、成熟的啤酒
2 ．选择培养基是指对培养基进行处理，使其能允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长，从而将目的菌株从混杂的微生物群体中分离出来的培养基。下列不属于选择培养基的是 ( )
A ．以纤维素为唯一碳源，用于筛选纤维素分解菌的培养基
B ．加入青霉素以分离酵母菌等真菌的培养基
C ．加入刚果红和纤维素的呈现红色的培养基
D ．不加氮源以分离固氮微生物的培养基
3 ．地膜的主要成分是聚乙烯，化学式是（C2H4）n 。残留在土壤中的地膜难以被降解，为筛选出高效降解地膜的细菌，研究人员进行了如图所示操作。下列叙述错误的是 ( )
A ．富集培养过程中摇床振荡便于微生物获取营养和氧气
B ．富集培养后，利用平板划线法将微生物接种于 X 培养基
C ．应挑选降解地膜最高效的细菌⑤接种到 Y 培养基
D ．若要研究目的菌的生长规律，可用细菌计数板计数方法进行计数
4 ．关于现代生物技术的应用叙述，正确的是 ( )
A ．克隆牛和试管牛均是无性繁殖
B ．需用促性腺激素释放激素处理使其超数排卵
C ．动物细胞培养的原理是细胞的全能性
D ．植物组织培养技术可用于转基因植物的培育
5 ．辣椒素是存在于辣椒细胞中的一种活性成分，具有抗癌、提高免疫力等功能。研究人员利用植物细胞培养技术实现了天然辣椒素的工厂化生产，其主要流程为：外植体→消毒→ 愈伤组织→悬浮培养→分离提纯。下列相关说法正确的是 ( )
A ．外植体应先后用酒精和次氯酸钠溶液进行消毒
B ．愈伤组织是薄壁组织团块，没有液泡，分化能力弱
C ．辣椒素属于辣椒的初生代谢产物
D ．选取幼嫩的茎尖作外植体，通过植物组织培养可获得抗毒苗
6 ．兴趣小组的同学用稀释涂布平板法分离、纯化金黄色葡萄球菌。下列实验结果及其可能的原因对应有误的是 ( )
选项
实验结果
可能的原因
A
菌落连接成片
稀释倍数不够
B
长出霉菌菌落
培养基灭菌不彻底
C
未长出菌落
涂布器未灼烧
A ．A B ．B C ．C D ．D
7 ．关于桑葚胚和囊胚的比较，下列叙述正确的是 ( )
A ．细胞分化开始于桑葚胚，这一阶段前的每一个细胞是全能细胞
B ．桑葚胚的内细胞团将来可发育成胎儿的各种组织
C ．囊胚期细胞分化是由遗传物质突变引起的
D ．囊胚的进一步扩大会导致透明带的破裂
8 ．干细胞是一类具有分裂、分化能力的细胞，在一定条件下可以分化成其他类型的细胞。科学家通过体外诱导小鼠的成纤维细胞，获得了诱导多能干细胞（iPS 细胞）。下列说法正确的是 ( )
A ．胚胎干细胞都是从早期胚胎中分离出来的
B ．不同类型的干细胞，它们的分化潜能没有差别
C ．由 iPS 细胞产生的特定细胞，可以在新药的测试中发挥重要作用
D ．胚胎干细胞的应用前景优于 iPS 细胞
9 ．下图是科研人员利用白鼠和黑鼠的早期胚胎培育黑白嵌合体小鼠的流程，相关叙述正确的是 ( )
A ．代孕母鼠对早期胚胎不发生免疫排斥反应
B ．过程②中可利用灭活的病毒诱导卵裂球细胞发生融合
C ．代孕母鼠生产的嵌合鼠毛色黑白相间，是四倍体小鼠
D ．嵌合体幼鼠的一个细胞中同时有白鼠和黑鼠的基因
10 ．如图为质粒 pUC18 ，为生产出满足需求的质粒载体，利用定点诱变技术，通过设计具有诱变位点的引物 P1 和引物 P2 进行 PCR ，来实现目标载体的单碱基突变， 目的是使质粒pUC18 不能被限制酶 Eam1105Ⅰ识别，但依然具有氨苄青霉素抗性。下列相关叙述，错误的是 ( )
D
菌落形成缓慢
培养温度过低
A ．诱变位点位于限制酶 Eam1105Ⅰ识别序列中
B ．PCR 的一轮循环一般可分为变性、复性、延伸三步，其中复性的温度高于延伸的温度
C ．诱变成功的质粒依然具有氨苄青霉素抗性，利用了密码子具有简并性的原理
D ．诱变成功的质粒 pUC18 经过 EcRⅠ 、Eam1105Ⅰ双酶切后进行电泳，只能产生 1 条条带
11．某科研团队通过转基因获得了一种大肠杆菌（工程菌），可作为监测残留在生物组织或环境中的四环素水平的“报警器”，其监测原理如下图所示，天然大肠杆菌不含有图中所示基因。（GFP 基因是绿色荧光蛋白基因）。下列有关说法正确的是 ( )
A ．启动子 1 、2 是 DNA 聚合酶识别和结合的位点，启动基因的转录过程
B ．该转基因工程菌中的GFP 基因表达产物不需要内质网等细胞器的加工
C ．培育“报警器” 需要构建的基因表达载体只有 GFP 基因表达载体
D ．当环境中存在四环素时，生物报警器的绿色荧光会熄灭
12．不对称 PCR 是一种通过控制引物浓度比例选择性扩增单链 DNA 的技术，其核心原理是使用限制性引物与非限制性引物按 1:50 的比例进行 PCR 扩增，初期生成双链 DNA ，当限制性引物耗尽后转为单链扩增，该方法可用于制备 DNA 探针，部分过程如图所示，下列叙述错误的是 ( )
A ．为标记 DNA 探针，可掺入含 32P 的 dNTP
B ．第一阶段的扩增以 DNA 的两条链为模板
C ．非限制性引物的作用是为单链扩增提供所需模板
D ．制备的单链 DNA 探针与目标 DNA 的α链相同
13 ．下列关于基因工程的应用的叙述，正确的是 ( )
A ．将药用蛋白基因注射入牛的乳腺细胞，从牛乳汁中获得所需的药品
B ．基因工程改造后的个体与未经改造的同种个体之间已产生生殖隔离
C ．利用基因工程生产的甜味剂对人体无害，在食品中可以大量添加
D ．基因工程可以改良动植物品种、提高作物和畜产品的产量
14 ．以下关于生物学知识在生产生活中的应用，不合理的是 ( )
A ．有些新闻报道转基因产品存在安全隐患，应该禁止转基因技术的应用
B ．利用转基因技术制造的新型致病菌，可能让感染者发病后无药可医
C ．生殖性克隆人存在伦理问题，我国政府不允许任何生殖性克隆人实验
D ．为提高经济作物的产量，可以适时适量使用植物生长调节剂
二、多项选择题：本大题共 5 个小题，每小题 3 分，共 15 分。每题有不止一个选项符合题意。每题选对但不全的得 1 分，错选或不答的得 0 分。
15．从自然界中筛选具有优良性状的菌种的一般步骤为：采集样品→ 富集培养（使菌体数量增多）→纯种分离→性能测定，如图 a 、b 是采用两种接种方法接种后纯化培养的效果图。下列相关叙述正确的是 ( )
A ．在培养细菌时，一般需要将培养基调至中性或弱碱性
B ．为获得纯种的目的菌种，需对采集的样品进行灭菌
C ．获得图 a 所示结果的接种过程中，接种环需灼烧灭菌 3 次
D ．利用图 b 计算出样品中菌体浓度为 5.8×108 个/ml ，若涂布平板的菌液体积为 0. 1ml ，则接种稀释液的稀释倍数为 106 倍
16．T4 溶菌酶在温度较高时容易失去活性，科学家对影响 T4 溶菌酶耐热性的相关基因进行改造，使该酶的第 3 位异亮氨酸变为半胱氨酸，且与第 97 位的半胱氨酸之间形成二硫键，提高了该酶的耐热性。下列有关叙述错误的是 ( )
A ．引起 T4 溶菌酶分子结构改变的根本原因是基因的碱基序列发生了变化
B ．该技术是细胞水平的操作，可改变细胞合成的蛋白质
C ．T4 溶菌酶在温度较高时失去活性是因为空间结构改变
D ．T4 溶菌酶的改造属于基因工程，耐热性提高可能与其分子内部二硫键的数量有关
17 ．下图表示利用基因工程制备某种病毒单克隆抗体的操作流程，下列叙述正确的是 ( )
A ．过程①所用的mRNA 可从病毒感染者的浆细胞中提取
B ．过程①②④⑥遵循碱基互补配对原则
C ．过程③⑤⑦需要依赖于生物膜的结构特点而完成
D ．图中的鼠瘤细胞在体外培养时既能无限增殖又能产生病毒抗体
18．运用植物细胞工程技术，可以培育单倍体植株和进行细胞产物的工厂化生产，下列有关说法正确的是 ( )
A ．单倍体育种中，需经过植物组织培养和诱导染色体加倍，以得到能稳定遗传的优良品种
B ．利用花药通过植物组织培养获得的单倍体植株可作为研究遗传突变的理想材料
C ．利用植物细胞培养生产紫草宁时，需要把外植体培养成完整的紫草植株
D ．细胞产物的工厂化生产主要是利用促进细胞生长的培养条件，提高了单个细胞中次生代谢物的含量
19 ．下列关于“DNA 的粗提取与鉴定”实验的分析，正确的是 ( )
A ．可选择鸡的成熟的红细胞作为提取细胞中 DNA 的材料
B ．研磨液在 4℃下静置，主要目的是降低 DNA 分子的溶解度
C ．在上清液中加入预冷酒精后轻缓搅拌，可避免 DNA 分子的断裂
D ．粗提取得到的白色丝状物中仍含有蛋白质等杂质
Ⅱ卷（非选择题，共 57 分）
三、非选择题（本大题共 5 小题，共 57 分）
20．工业发酵生产维生素 C 常采用“两步发酵法” 的工艺路径（如图所示）。路径 1 为“三菌两步法” ，是一种利用三种微生物分两步进行发酵生产的生物技术， 目前在维生素 C 生产中应
用最广泛；路径 2 为未来技术优化方向。回答下列问题：
(1)路径 1 中，为纯化和保存菌种，取适量第一步发酵液稀释后用 法接种在含有碳酸钙粉的培养基上，以 （填下列选项代号）为最佳指标，分离保存菌种。
A ．菌落直径大小
B ．溶钙圈大小
C ．溶钙圈直径与菌落直径比值
(2)路径 1 中，第一步发酵结束后，在发酵液转移至第二步发酵前，需先进行 处理，以防止因种间关系而干扰后续菌种生长。生酮基古龙酸菌和巨大芽孢杆菌发酵过程中发酵液pH 的变化是 ，第二步发酵过程中两种菌的菌种数比例会影响产酸率，种液接入发酵罐前需对种液中的两种菌计数，计数所用的培养基除含有与发酵液相同的成分外，还需添加 ，在培养基上，可根据菌落的 等特征（至少写两个）对两种菌分别计数。
(3)两种路径中，均有氧化葡萄糖酸杆菌参与，由图可知该种菌株存在 （填“专一性”或“广谱性”）代谢能力。
(4)在发酵过程中要不断搅拌的目的是 。
(5)与从植物中提取维生素C 相比，图示两种路径生产维生素C 的优势有 （答两点）。
21 ．尼帕病毒（NV）是一种新型人畜共患病毒，科学家利用该病毒的结构蛋白（蛋白A）为抗原制备单克隆抗体的流程如图所示。回答下列问题：
(1)制备单克隆抗体涉及多种技术手段，其中 是动物细胞工程的基础，实验时一般需要多次注射蛋白 A 免疫小鼠， 目的是 。
(2)与骨髓瘤细胞融合前，B 淋巴细胞 （填“ 需要”或者“ 不需要”）通过原代培养扩大细胞数量。诱导细胞融合时，灭活病毒表面的糖蛋白和酶能与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞相互凝聚，细胞膜上 重新排布，使细胞融合。
(3)杂交瘤细胞筛选过程中，常使用特定的选择培养基，在该培养基上 细胞会死亡。经筛选②得到的细胞最简便的培养方法是 （填“体内培养”或“体外培养”），原因是 。
(4)提取的单克隆抗体，需鉴定其特异性，操作方法是 。
(5)为鉴定单克隆抗体识别抗原的具体区域，可将抗原（A 蛋白）逐步截短，分别与纯化的单克隆抗体反应，实验结果如图所示（“+”表示有反应，“-”表示无反应，“aa”表示氨基酸）。
结果证明该单克隆抗体识别抗原（A 蛋白）的区域大概为 （填“40～50” 、“40～55”或“40～60”）位氨基酸。
22 ．利用山金柑愈伤组织细胞（2n）和早花柠檬叶肉细胞（2n）进行体细胞杂交可获得高品质、抗逆性强的杂种植株，流程如图。回答下列问题：
(1)实验中常用 酶去除细胞壁得到山金柑与早花柠檬原生质体，需要向原生质体培养液中加入适宜浓度的甘露醇以保持一定的渗透压，其作用是 。
(2)过程②利用化学试剂 诱导融合，可通过观察 进行杂种细胞的初步筛选，愈伤组织形成和生长、分化过程中，培养基中的碳源是 （填“无机碳源”或“有机碳源”），在③ 、④过程中发生基因选择性表达的是 。
(3)为探究 6-BA 和IAA 对愈伤组织再生丛芽的影响，某研究小组在 MS 培养基中加入 6-BA和 IAA ，配制成四种培养基，培养后统计愈伤组织再生丛芽的比例（m），以及愈伤组织上的再生丛芽的平均数（n），结果如表所示。
该实验中， 自变量是 ，6-BA 属于 类生长调节剂。分析实验结果可知，诱导丛芽总数最少的培养基是 号培养基，当 6-BA / IAA 的值 （填“低”或“ 高”）时，诱导生芽成功率较高。
(4)与其他育种方式相比，植物体细胞杂交的突出优点是 。
23．异种器官移植是解决人类器官短缺的重要途径。近年来，我国科研团队在此领域取得了突破性进展。云南农业大学某研究团队与多家机构合作，于 2025 年成功培育出无特定病原体的 10 基因编辑猪，并利用体细胞核移植技术克隆 10 基因编辑猪，用于异种器官移植研究，主要技术操作流程如图所示。回答下列问题。
培养基编号
浓度/（mg·L- 1）
m/%
n/个
6-BA
IAA
1
0.5
0
76.7
3. 1
2
0. 1
77.4
6. 1
3
0.2
66.7
5.3
4
0.5
60.0
5.0
(1)图中过程①培养时，应使用 培养基（按物理性质划分），除了细胞需要的营养物质外，通常还需要添加 等天然成分，同时需要提供的气体环境是 。过程②可通过显微操作对卵母细胞进行“去核” ， “去核”实际上去除的是“纺锤体—染色体复合物” ，理由是 。
(2)在转基因重构胚胎移植前开展遗传病筛查时，应选取胚胎的 细胞进行 DNA 分析，进行胚胎移植时需对代孕母猪进行同期发情处理， 目的是 。
(3)猪受精卵可通过体外受精的方式获得，此时，卵子需要培养到 期才具备与精子受精的能力；而精子需要获能后才能受精。精子发生过程中， 发育形成精子头部的顶体，其中的顶体酶能协助精子穿过卵细胞外的放射冠和 。
(4)重构胚成活率低是限制核移植成功的主要因素之一，研究人员探究了不同浓度的 TSA（组蛋白去乙酰化酶抑制剂）对猪重构胚发育成囊胚的影响，结果如下表所示：
由上表可知，选用浓度为 nM 的 TSA 处理更有利于提高囊胚的形成率，由此推测：一定范围内组蛋白乙酰化程度的升高会 （填“促进”或“抑制”）重构胚的发育。
(5)为提高基因编辑猪细胞核移植的成功率，可以用胚胎细胞核移植替代体细胞核移植，原因是 。
24 ．某真菌的 W 基因编码一种高效降解纤维素的酶，利用转基因技术可改造出生产该酶的大肠杆菌工程菌，相关限制酶的识别序列如下表。请回答下列问题：
TSA 浓度（nM）
0
20
40
60
囊胚的形成率（%）
13%
22.8%
35.7%
21%
限制酶
XbaI
EcRI
SpeI
XhI
HindIII
识别序列（5′→3 ′）
T↓CTAGA
G↓AATTC
A↓CTAGT
C↓TCGAG
A↓AGCTT
(1)利用PCR 技术扩增W 基因，需要引物、 、4 种脱氧核苷酸、含 Mg2+的缓冲液和耐高温的 Taq 酶，耐高温的 Taq 酶的适宜温度通常在 ℃左右。在制备 PCR 反应体系时，每次用微量移液器吸取不同试剂前，需调整刻度和量程，并更换经 灭菌处理过的枪头。
(2)图 1 标识了载体 pBL 和 W 基因中限制酶的切割位点（1kb= 1000bp，假设构建重组质粒前后，质粒 pBL 对应部分大小基本不变）。已知 a 链为 W 基因转录模板链，结合上表分析，
为保证 W 基因与质粒 pBL 正确连接，PCR 扩增 W 基因时需在引物 1 和引物 2 的 5 ′端分别添加的碱基序列 5 ′- -3 ′ 、5′- -3 ′ 。切割载体时应选用的限制酶是 。
(3)图 1 载体 pBL 中的色氨酸合成酶基因的作用是 ，将重组质粒导入色氨酸合成缺陷的大肠杆菌菌株，利用 的培养基筛选菌株并提取质粒，用引物 1 和引物 2 进行 PCR 扩增，相关产物电泳图见图 2 ．已知 1 号泳道和 2 号泳道分别是重组质粒和空载质粒的电泳图（均用 EcRI 酶切成线性），在 3 号、4 号的 PCR 扩增产物中，符合预期的 W 基因的 DNA 片段是 号，若要进一步验证可对其进行 。空白对照组 5 中使用无菌水代替实验组的模板 DNA ， 目的是 。
1 ．B
【详解】A 、葡萄酒酿制前期需要通入氧气，保证酵母菌进行有氧呼吸大量繁殖，仅后期酒精发酵阶段需要严格无氧环境，并非整个过程都保持无氧，A 错误；
B 、果酒发酵的产物是酵母菌无氧呼吸产生的乙醇；果醋发酵时若糖源不足，醋酸菌可将乙醇转化为醋酸，此时乙醇是果醋发酵的底物；同时一定浓度的乙醇可以抑制杂菌繁殖，B 正确；
C 、单细胞蛋白本身就是微生物菌体，不需要从菌体细胞中提取，可直接作为动物饲料，C错误；
D、啤酒生产的后发酵阶段需要在低温、密闭条件下进行，酵母菌生长的最适温度约为 28℃ ,后发酵温度远低于该最适温度，D 错误。
2 ．C
【详解】A 、以纤维素为唯一碳源的培养基中，仅能分解纤维素的微生物可利用纤维素获得碳源生长，其他微生物因缺乏碳源无法存活，属于选择培养基，A 不符合题意；
B 、青霉素可抑制细菌细胞壁的合成，对酵母菌等真菌无抑制作用，加入青霉素的培养基中仅真菌可生长，细菌被抑制，属于选择培养基，B 不符合题意；
C 、加入刚果红和纤维素的红色培养基是鉴别培养基，刚果红可与纤维素结合形成红色复合物，若存在纤维素分解菌，其分解纤维素后会在菌落周围形成透明圈，从而鉴别出纤维素分解菌，该培养基不会抑制其他微生物生长，不属于选择培养基，C 符合题意；
D 、无氮源的培养基中，仅固氮微生物可利用空气中的氮气作为氮源生长，其他非固氮微生物因缺乏氮源无法存活，属于选择培养基，D 不符合题意。
3 ．B
【分析】在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。
【详解】A 、富集培养过程中摇床振荡便于微生物与营养物质充分接触，并增加溶氧量，所以摇床振荡便于微生物获取营养和氧气，A 正确；
B 、富集培养后，利用稀释涂布平板法将微生物接种于 X 培养基，B 错误；
C 、抑菌圈越大，说明降解地膜的效果越好，故可挑选⑤中的单菌落接种到 Y 培养基上，C正确；
D 、若要研究目的菌的生长规律，可用细菌计数板计数方法进行计数，D 正确。
故选 B。
4 ．D
【详解】A 、克隆牛通过核移植技术获得，未经过两性生殖细胞的结合，属于无性繁殖；试管牛通过体外受精、胚胎移植技术获得，经过了生殖细胞结合的过程，属于有性繁殖，二者不都是无性繁殖，A 错误；
B 、使雌性动物超数排卵需注射促性腺激素处理，促性腺激素释放激素的作用是促进垂体分泌促性腺激素，不直接用于超数排卵处理，B 错误；
C 、动物细胞培养的目的是获得大量细胞或细胞产物，原理是细胞增殖，细胞全能性是已分化细胞发育为完整个体的潜能，不是动物细胞培养的原理，C 错误；
D 、培育转基因植物时，将导入目的基因的植物受体细胞培育为完整植株，需要利用植物组织培养技术，因此该技术可用于转基因植物的培育，D 正确。
5 ．A
【详解】A 、对外植体进行消毒时，通常先使用体积分数为 70%的酒精处理，再用次氯酸钠溶液处理，最后用无菌水冲洗干净，操作符合消毒流程，A 正确；
B 、愈伤组织是脱分化形成的高度液泡化、无定形状态的薄壁细胞团块，分化程度低，分化能力强，B 错误；
C 、辣椒素不是辣椒生长发育必需的物质，属于次生代谢产物，初生代谢产物是植物生长必需的糖类、蛋白质等物质，C 错误；
D 、幼嫩茎尖病毒极少甚至无病毒，选取其作为外植体培养可获得脱毒苗，抗毒苗需要通过基因工程导入抗病毒基因才能获得，D 错误。
6 ．C
【分析】稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养基表面，经培养后可形成单个菌落。操作步骤主要包括：梯度稀释、涂布平板、培养与计数、计算浓度。 【详解】A、菌落连接成片是因稀释倍数不够，导致菌液浓度过高，多个细胞聚集形成菌膜， A 正确；
B 、培养基灭菌不彻底可能残留霉菌孢子，导致长出霉菌菌落，B 正确；
C 、未长出菌落可能是涂布器灼烧后未冷却，高温杀死菌种，或稀释度过高，而非“未灼烧涂布器”（未灼烧会导致杂菌污染，而非无菌落），C 错误；
D 、培养温度过低会抑制微生物代谢，导致菌落形成缓慢，D 正确。
故选 C。
7 ．D
【详解】A 细胞分化起始于囊胚阶段 桑葚胚时期细胞尚未发生分化 该阶段前的每个细
、 ， ，
胞都属于全能细胞，A 错误；
B 、内细胞团是囊胚时期才分化形成的结构，桑葚胚未出现细胞分化，不存在内细胞团，B错误；
C 、细胞分化的实质是基因的选择性表达，分化过程中遗传物质不发生改变，因此囊胚期细胞分化不是由遗传物质突变引起的，C 错误；
D 、囊胚进一步发育扩大会导致包裹在胚胎外侧的透明带破裂，该过程称为孵化，D 正确。
8 ．C
【详解】A 、胚胎干细胞的来源包括早期胚胎（囊胚的内细胞团）和原始性腺等，并非都从早期胚胎中分离得到，A 错误；
B 、干细胞按分化潜能可分为全能干细胞、多能干细胞和专能干细胞，不同类型的干细胞分化潜能差异明显，B 错误；
C 、iPS 细胞可被诱导分化为特定类型的功能细胞，可用于测试新药的药效、毒副作用等，在新药测试中发挥重要作用，C 正确；
D 、iPS 细胞可由患者自身体细胞诱导获得，既避免了移植后的免疫排斥反应，也不存在胚胎干细胞相关的伦理争议，应用前景优于胚胎干细胞，D 错误。
9 ．A
【详解】A 、在胚胎移植过程中，受体（代孕母鼠）对植入子宫的外来胚胎基本不会发生免疫排斥反应，这是胚胎移植能够成功的生理学基础之一，A 正确；
BCD、过程②中是将两个卵裂球重组形成嵌合胚胎，但并未诱导卵裂球细胞融合，故代孕母鼠生产的嵌合鼠仍是二倍体，其一个细胞中应含有白鼠或黑鼠的基因，BCD 错误。
10 ．B
【详解】A 、利用定点诱变使质粒 pUC18 不能被限制酶 Eam1105Ⅰ识别，因此诱变位点位于限制酶 Eam1105Ⅰ识别序列中，A 正确；
B 、PCR 的一轮循环一般可分为变性、复性、延伸三步，变性：90~95℃（双链解开） 复性（退火）：50~65℃（引物结合模板） 延伸：72℃左右（Taq 酶合成 DNA 链） 因此延伸温度 > 复性温度，B 错误；
C 、诱变成功的质粒依然具有氨苄青霉素抗性，由于密码子的简并性，该基因虽然发生了基因突变，但其控制的性状不变，C 正确；
D 、诱变成功的质粒 pUC18 只有限制酶 EcRⅠ识别序列，没有限制酶 Eam1105Ⅰ的识别序列，
因此经过 EcRⅠ , Eam1105Ⅰ双酶切后进行电泳，只能产生 1 条条带，D 正确。
11．B
【详解】A 、启动子是 RNA 聚合酶识别和结合的位点，启动基因的转录过程，A 错误；
B 、转基因工程菌是大肠杆菌，为原核生物，无内质网，因此该转基因工程菌中的GFP 基因表达产物不需要内质网等细胞器的加工，B 正确；
C 、天然大肠杆菌不具备题图中所示基因，要检测残留在生物组织或环境中的四环素水平的“报警器”，根据题图分析可知，必须导入天然大肠杆菌的目的基因有 TetR 基因和GFP 基因， C 错误；
D 、从图中可以看出，当环境中存在四环素时，四环素与TetR 蛋白结合，使得 TetR 蛋白对GFP 基因的抑制作用被解除，从而 GFP 基因能够表达，大肠杆菌可在一定条件下发出绿色荧光，D 错误。
12 ．C
【详解】A 、DNA 探针的标记可通过掺入含放射性同位素（如 32P ）的 dNTP 实现，这样得到的探针带有放射性标记，可用于后续检测，A 正确；
B 、第一阶段，扩增产物是双链 DNA ，因此该阶段扩增是以 DNA 的两条链为模板进行的， B 正确；
C 、限制性引物的作用是增加第二阶段扩增的模板，进而获得更多的非限制性引物引导的单链 DNA 探针，C 错误；
D 、第二阶段中，非限制性引物结合目标 DNA 的β链（3’→5’）并以其为模板延伸，合成的单链探针与β链互补，即与α链序列相同（而非互补），D 正确。
13 ．D
【分析】基因工程的应用：
1 、基因工程在农牧业方面的应用： 目前，基因工程技术已被广泛用于改良动植物品种，提高作物和畜产品的产量等方面。
农业方面的应用：（1）转基因的抗虫植物，（2）转基因抗病植物，（3）转基因抗除草剂植物， （4）改良植物的品质。
畜牧业方面：（1）提高动物的生长速率，（2）改善畜产品的品质。
2 、基因工程在医药卫生领域的应用：
（1）对微生物或动植物的细胞进行基因改造，使它们能够生产药物，是目前基因工程取得实际应用成果非常多的领域。这些药物包括细胞因子、抗体、疫苗和激素等，它们可以用来
预防和治疗人类肿瘤、心血管疾病、传染病、糖尿病和类风湿关节炎等。
（2）利用基因工程技术，还可以让哺乳动物批量生产药物。科学家将药用蛋白基因与乳腺中特异表达的基因的启动子等调控元件重组在一起，通过显微注射的方法导入哺乳动物的受精卵中，由这个受精卵发育成的转基因动物在进入泌乳期后，可以通过分泌乳汁来生产所需要的药物，这称为乳腺生物反应器或乳房生物反应器。
（3）基因工程技术还可能使建立移植器官工厂的设想成为现实。
3 、基因工程在食品工业方面的应用：利用基因工程菌除了可以生产药物，还能生产食品工业用酶、氨基酸和维生素等。例如，阿斯巴甜是一种普遍使用的甜味剂，主要由天冬氨酸和苯丙氨酸形成，这两种氨基酸就可以通过基因工程实现大规模生产。
【详解】A 、将药物蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，导入哺乳动物的受精卵中，最终培育的转基因动物进入泌乳期后，可以通过分泌的乳汁生产所需要的药物，A 错误；
B 、基因工程的原理是基因重组，经过基因工程改造后的个体与未经改造的同种个体之间只有一个或少数几个基因不同，一般不会产生生殖隔离，B 错误；
C 、过量甜味剂对人体会产生危害，不能在食品中大量添加，C 错误；
D 、根据基因工程在农牧业方面的应用可知， 目前，基因工程技术已被广泛用于改良动植物品种，提高作物和畜产品的产量等方面，如抗逆性作物的出现以及改善畜产品的品质等的应用，D 正确。
故选 D。
14 ．A
【详解】A 、转基因技术需在严格监管下应用，其安全性评价遵循科学标准。全面禁止会阻碍农业和医学发展，该观点片面且违背理性看待科技发展的原则，A 错误；
B 、转基因技术可能改造病原体，使其耐药性或毒性增强，符合“生物武器公约”禁止的生物武器特征，该应用具有现实风险，B 正确；
C 、生殖性克隆人违背人类尊严和伦理规范，我国《人类辅助生殖技术规范》明确禁止，该表述符合法规和伦理要求，C 正确；
D、植物生长调节剂可调控作物生长发育，科学使用能提高产量，该措施符合农业生产实践， D 正确。
故选 A。
15 ．AD
【详解】A 、不同微生物对于 pH 的要求不同，在培养细菌时，一般需要将培养基调至中性或弱碱性，A 正确；
B 、需从采集的样品中分离得到目的菌种，不能对样品进行灭菌，B 错误；
C 、图 a 所示结果的接种次数为 3 次，最后还需经过灼烧灭菌，故接种环需灭菌 4 次，C 错误；
D、利用稀释涂布平板法计算菌体浓度的方法为菌落数÷接种液体积×稀释倍数，而用于计数的平板的菌落数应在 30-300 之间，因此 58 个÷0. 1ml×稀释倍数=5.8×108 个/ml,计算得出稀释倍数为 106 倍，D 正确。
16 ．BD
【详解】A 、T4 溶菌酶的氨基酸序列改变，根本原因是控制该酶合成的基因的碱基序列发生了改变，A 正确；
B 、该技术对基因进行改造，属于分子水平的操作，不是细胞水平，B 错误；
C 、高温使蛋白质失活的原理是破坏蛋白质的空间结构，C 正确；
D 、T4 溶菌酶的改造属于蛋白质工程（第二代基因工程），而非传统的基因工程；二硫键可以增强蛋白质结构的稳定性，因此耐热性提高与二硫键数量有关，D 错误。
17 ．ABD
【详解】A 、图中①为逆转录，利用mRNA 获得目的基因后，必须再表达产生相应的抗体，抗体由浆细胞分泌，因此需要从病毒感染者的浆细胞中提取对应的 mRNA ，A 正确；
B 、过程①②④⑥分别表示逆转录、基因表达载体的构建，转录、翻译过程，需遵循碱基互补配对原则，B 正确；
C、③为目的基因导入受体细胞，⑤为mRNA 通过核孔进入细胞质，未体现生物膜的结构特点（流动性）；⑦为鼠瘤细胞以胞吐的方式分泌抗体，需要依赖于生物膜的结构特点而完成， C 错误；
D 、导入重组质粒的鼠瘤细胞能产生抗体，所以在体外培养时既能无限增殖又能产生病毒抗体，D 正确。
18 ．AB
【详解】A 、单倍体育种中，需经过花药离体培养（植物组织培养）后得到单倍体植株，后经秋水仙素诱导染色体加倍，得到能稳定遗传的优良品种，A 正确；
B 、利用花药通过植物组织培养获得的单倍体植株，大多数单倍体植株的细胞中只含有一套染色体，染色体加倍后得到的植株隐性性状容易显现，因此可作为研究遗传突变的理想材料，
B 正确；
C 、紫草宁是从细胞中提取的一种药物和色素，利用植物细胞培养生产紫草宁时，不需要把外植体培养成完整的紫草植株，培育出能产生紫草宁的组织细胞即可，C 错误；
D 、细胞产物的工厂化生产主要是利用促进细胞分裂和生长的培养条件，使细胞大量增殖，从而获得大量的细胞，进而提高细胞产物的总量，并没有提高单个细胞中次生代谢物的含量， D 错误。
19 ．ACD
【详解】A 、鸡的成熟红细胞含有细胞核，可作为提取 DNA 的材料，A 正确；
B 、研磨液在 4℃下静置的主要目的是抑制 DNA 酶的活性，避免 DNA 被降解，同时促进杂质沉淀，并非降低 DNA 的溶解度，B 错误；
C 、加入预冷酒精后轻缓搅拌，可减少对 DNA 分子的机械损伤，避免 DNA 分子断裂，便于收集完整的 DNA 丝状物，C 正确；
D 、粗提取得到的白色丝状物主要是 DNA ，但由于实验过程中不能完全去除其他杂质，所以仍含有蛋白质等杂质，D 正确。
20 ．(1) 涂布法 C
(2) 灭菌（除菌） 逐渐下降，最后趋于稳定 琼脂 大小、颜色、形状或隆起程度
(3)广谱性
(4)使菌种与培养液充分接触，提高原料的利用率（或增加溶氧量，使菌种与培养液充分接触，提高原料的利用率）
(5)生产周期短、产量高、成本低、产品纯度高、质量稳定，且不受季节和地域限制，适合大规模工业化生产）
【详解】（1）为了纯化和保存菌种，将发酵液稀释后接种到培养基上，常用的方法是稀释涂布平板法（也叫涂布法），该方法可以通过稀释得到单菌落，实现菌种的分离纯化。培养基中添加了碳酸钙，而氧化葡萄糖酸杆菌能产生酸，酸会溶解碳酸钙，在菌落周围形成透明的溶钙圈。 溶钙圈直径与菌落直径的比值，反映了菌株产酸能力的强弱，比值越大，说明菌株目标产物的生产能力越强，因此选 C 。 只看菌落直径或溶钙圈大小，无法直接反映菌株的生产性能，因此 A 、B 不是最佳指标。
（2）第一步发酵结束后，发酵液中仍有第一步的菌种，若直接转移到第二步，会与第二步的菌种竞争营养、空间，干扰后续菌种生长，因此需要先进行灭菌（除菌）处理，去除第一
步的菌种。生酮基古龙酸菌和巨大芽孢杆菌发酵过程中，会不断产生酸性的中间产物，导致发酵液 pH 逐渐下降；当发酵结束、产物生成量稳定后，pH 也会趋于稳定。要对菌种进行菌落计数，需要使用固体培养基，因此在含有发酵液成分的培养基中，还需要添加凝固剂琼脂。不同菌种形成的菌落具有不同的特征，比如菌落的大小、颜色、形状、隆起程度、边缘是否整齐、表面是否光滑等，可通过这些特征对两种菌分别计数。
（3）从图中可以看到，氧化葡萄糖酸杆菌既可以利用山梨醇（路径 1）作为底物发酵，也可以利用葡萄糖（路径 2）作为底物发酵，说明该菌株可以利用多种不同的碳源进行代谢，因此具有广谱性的代谢能力，而非专一性（专一性只能利用单一底物）。
（4）搅拌在发酵中的作用有两个核心点： 物质交换：让菌体均匀分布，与培养液中的营养物质充分接触，提高原料的利用率。 供氧：增加培养液中的溶氧量（氧气在液体中溶解度低，搅拌可以促进氧气溶解），满足好氧微生物的呼吸需求，保证菌体的正常代谢。
（5）与从植物中提取相比，微生物发酵法的优势主要体现在： 不受植物生长的季节、地域限制，可全天候工业化生产，周期短、效率高； 发酵过程可控，产物纯度高、质量稳定； 原料来源广泛、成本低，适合大规模生产； 避免了植物提取中杂质多、分离提纯复杂的问题。
21 ．(1) 动物细胞培养技术 增强小鼠机体的免疫反应，从而从该小鼠的脾中获得更多能产生特定抗体（抗蛋白 A 的抗体）的 B 淋巴细胞
(2) 不需要 蛋白质分子和脂质分子
(3) 未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞 体内培养 体内培养条件容易控制、不需要更换培养基、不需要考虑温度、pH 是否合适等
(4)将提取的单克隆抗体与尼帕病毒（NV）、其他病毒分别进行混合，检测单克隆抗体与不同抗原的结合情况
(5)40~55
【详解】（1）制备单克隆抗体涉及动物细胞培养技术和动物细胞融合技术，其中动物细胞培养是动物细胞工程的基础；实验时一般需要多次注射蛋白A 免疫小鼠， 目的是增强小鼠机体的免疫反应，从而从该小鼠的脾中获得更多能产生特定抗体（抗蛋白 A 的抗体）的 B 淋巴细胞。
（2）已免疫的 B 淋巴细胞本身数量相对较多，且在后续与骨髓瘤细胞融合等操作中会有进一步的处理和筛选，所以不需要通过原代培养扩大细胞数量；灭活病毒诱导细胞融合的原理是病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用， 使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布， 细胞膜打开，细胞发生融合。
（3）用特定的选择培养基进行筛选杂交瘤细胞过程中：在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长。经筛选②得到的细胞最简便的培养方法是体内培养，因为体内培养条件容易控制、不需要更换培养基、不需要考虑温度、pH 是否合适等。
（4）鉴定提取的单克隆抗体特异性：可将提取的单克隆抗体与尼帕病毒（NV）、其他病毒分别进行混合，检测单克隆抗体与不同抗原的结合情况。
（5）根据图可知，1~50 氨基酸序列片段与抗体无反应，而 1~55 氨基酸序列片段与抗体有反应，说明该单克隆抗体识别的区域大概为 50~55 位氨基酸。
50~ 153 氨基酸序列片段与抗体无反应，而 40~ 153 氨基酸序列片段与抗体有反应，说明该单克隆抗体识别的区域大概为 40~50 位氨基酸。综上分析可知，该单克隆抗体识别抗原（A 蛋白）的区域大概为 40~55 位氨基酸。
22 ．(1) 纤维素酶和果胶 保持原生质体的完整性
(2) 聚乙二醇##PEG 是否再生新细胞壁 有机碳源 ③④
(3) IAA 浓度 细胞分裂素 1 高
(4)克服远缘杂交不亲和的障碍，打破生殖隔离，实现远缘杂交
【详解】（1）植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，根据酶的专一性，去除细胞壁需要用纤维素酶和果胶酶，获得无壁的原生质体。 原生质体没有细胞壁保护，易吸水胀破。培养液中加入甘露醇（维持渗透压的溶质）， 目的是维持原生质体内外的渗透压平衡，防止原生质体吸水破裂，保持其结构完整和活性。
（2）过程②是原生质体融合，常用的化学诱导剂是聚乙二醇（PEG），它能促进原生质体膜融合。植物细胞完成融合的标志是再生出新的细胞壁，因此可以通过观察 “是否再生新细胞壁” ，初步筛选出成功融合的杂种细胞。愈伤组织细胞无叶绿体，无法进行光合作用，必须依赖外界提供的有机碳源（如蔗糖）获取能量，因此培养基碳源为有机碳源。③是脱分化形成愈伤组织，④是再分化形成芽、根并发育为植株。 脱分化和再分化过程中，细胞的形态、结构和功能发生变化，是基因选择性表达的结果，因此③、④过程都发生了基因的选择性表达。
（3）实验中 6-BA 浓度固定为 0.5 mg・L⁻¹ , IAA 浓度分别为 0 、0. 1 、0.2 、0.5 mg・L⁻¹ , 因此自变量是 IAA 浓度。由于植物组织培养基中需要添加生长素和细胞分裂，根据题意“某研究小组在 MS 培养基中加入 6-BA 和 IAA ，配制成四种培养基”可知，6-BA 是人工合成的细胞分裂素类生长调节剂，主要作用是促进细胞分裂、诱导芽的分化。表格中 “n” 表示每个
愈伤组织上再生丛芽的平均数，1 号培养基的 n 值为 3. 1 ，是四组中最低的，因此诱导丛芽总数最少的是 1 号培养基。植物组织培养中，生长素（IAA）与细胞分裂素（6-BA）的比值会影响分化方向：比值高时，利于根的分化；比值低时，利于芽的分化。故当 6-BA / IAA的值高时，诱导生芽成功率较高。
（4）传统的有性杂交受生殖隔离限制，不同物种间难以杂交产生可育后代。而植物体细胞杂交技术可以将不同物种的原生质体融合，再培育为杂种植株，打破了物种间的生殖隔离，克服了远缘杂交不亲和的障碍，是其最核心的优势。
23 ．(1) 液体 动物血清 95%空气+5%二氧化碳 MⅡ期卵母细胞中原有的核仁已解体，核膜已消失，新的核膜和核仁未出现，新的细胞核还没有形成
(2) 滋养层 为胚胎移入受体提供相同的生理环境，确保胚胎移植后能正常发育
(3) 减数第二次分裂中 高尔基体 透明带
(4) 40 促进
(5)胚胎细胞分化程度低，全能性更容易恢复
【详解】（1）按物理性质划分，动物细胞培养用的是液体培养基（固体 / 半固体培养基多用于微生物培养或植物组织培养）。天然成分通常添加动物血清（或血浆），因为血清中含有细胞生长所必需的多种未知生长因子，而合成培养基无法完全模拟。气体环境为 95% 空气+ 5% CO₂：95% 空气提供细胞呼吸所需的 O₂ , 5% CO₂用于维持培养液的 pH 稳定。理由： MⅡ 期卵母细胞中原有的核仁已解体，核膜已消失，新的核膜和核仁未出现，新的细胞核还没有形成。此时卵母细胞的染色体附着在纺锤体上，去除纺锤体 - 染色体复合物，就相当于去除了卵母细胞的细胞核，避免其核物质对后续重构胚的遗传干扰。
（2）囊胚期胚胎分为内细胞团和滋养层细胞。内细胞团将来发育成胎儿的各种组织，滋养层细胞将来发育成胎膜和胎盘。为了不损伤内细胞团，筛查时选取滋养层细胞进行 DNA 分析。同期发情处理的目的是为胚胎移入受体提供相同的生理环境，确保胚胎移植后能正常发育，使供体和受体的子宫内环境处于同步状态，利于胚胎着床和发育。
（3）卵子需培养到减数第二次分裂中期（MⅡ 中期），此时卵母细胞的细胞质中积累了受精所需的物质，且染色体状态稳定，具备受精能力。精子发生过程中，高尔基体发育形成顶体，顶体内含多种水解酶（顶体酶）。顶体酶可溶解卵丘细胞之间的物质，协助精子穿过放射冠，随后溶解透明带，穿过透明带，完成受精前的穿透过程。
（4） 由表中数据可知，当为 40 nM 时，囊胚形成率达到最高的 35.7% ，因此选用 40 nM 的TSA 处理更有利于提高囊胚的形成率。TSA 作为组蛋白去乙酰化酶抑制剂，其作用是抑制
组蛋白去乙酰化酶的活性，从而使组蛋白乙酰化程度升高，由此可推测组蛋白乙酰化程度的升高会促进重构胚的发育。
（5）胚胎细胞分化程度低，全能性更容易恢复，因此，为提高基因编辑猪细胞核移植的成功率，可以用胚胎细胞核移植替代体细胞核移植。
24 ．(1) 模板 DNA 72 湿热（或高压蒸汽）
(2) CTCGAG TCTAGA SpeI 和 XhI
(3) 作为标记基因 不含色氨酸 3 DNA 测序 检验 PCR 反应中是否有外源 DNA 的污染
【分析】基因工程是在 DNA 分子水平上进行设计和施工的，因此又叫作重组 DNA 技术。包括四个基本程序：目的基因的筛选与获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、 目的基因的检测与鉴定。
【详解】（1）PCR 技术扩增特定基因（如 W 基因）的核心物质条件需满足“模板-引物-酶-原料-缓冲环境” 的完整体系。其中，模板 DNA 是待扩增基因（W 基因）的载体，是 PCR的基础，缺少模板则无法定位和扩增目标序列；4 种脱氧核苷酸（dNTPs）是合成新 DNA链的原料，Taq 酶是催化 DNA 合成的关键酶，引物用于定位 W 基因的上下游区域，含 Mg2+的缓冲液则为酶活性和反应体系提供适宜环境，几者共同构成 PCR 反应的必要物质条件。耐高温的 Taq 酶的适宜温度通常在 72℃左右。微量移液器的枪头需经过高压蒸汽灭菌（湿热灭菌）处理，该方法能有效杀灭包括细菌芽孢、病毒在内的几乎所有微生物和生物活性物质，确保吸取的试剂不被污染。
（2）为了使目的基因能在受体细胞中表达，应该将目的基因插在启动子和终止子之间，载体 pBL 启动子和终止子之间有限制酶有 SpeI 、XhI 、HindIII ，但载体 pBL 的启动子和终止子之外还有另外的 HindIII 识别位点，因此切割载体时应选用的限制酶是 SpeI 、XhI ，要想W 基因与质粒 pBL 正确连接，目的基因也应该用这两种限制酶切割，两端应该有 SpeI、XhI识别序列，但图中显示目的基因中有 SpeI 识别序列，不能用该酶切割目的基因，从表格中各酶的识别序列可知，XbaI 和 SpeI 是同尾酶，因此目的基因两端需要添加 XbaI 和 XhI 的识别序列，已知 a 链为 W 基因转录模板链，转录方向是从模板链 3 ′→5' ，因此为保证目的基因能在受体细胞表达，引物 2 端应该与启动子相连，引物 1 端应该与终止子相连，即 PCR扩增 W 基因时需在引物 1 和引物 2 的 5 ′端分别添加的 XhI、XbaI 碱基序列 5 ′-CTCGAG-3 ′、 5 ′-TCTAGA-3 ′。
（3）图 1 载体 pBL 中的色氨酸合成酶基因属于标记基因，有利于目的基因的初步检测。由
于受体大肠杆菌是色氨酸合成缺陷型，只有导入含该基因的质粒（空载或重组），才能在无外源色氨酸的培养基上存活，因此可利用不含色氨酸的培养基筛选菌株并提取质粒。已知 1号泳道和2 号泳道分别是重组质粒和空载质粒的电泳图（均用EcRI 酶切成线性），长度分别是 3000bp 左右、2000bp 左右，因此目的基因（W）的长度大约是 1000bp ，图中 3 号泳道上 DNA 片段长度是 1000bp 左右，因此符合预期的 W 基因的 DNA 片段是 3 号。进一步验证：PCR 产物的大小仅为初步判断，需通过 DNA 测序确认其序列与 W 基因完全一致，排除非特异性扩增产物。空白对照组用无菌水代替模板 DNA ，检验 PCR 反应中是否有外源 DNA 的污染，若出现扩增产物，说明试剂或操作中存在外源 DNA 污染；若无产物，证明实验体系无污染，确保实验组结果的可靠性。