山东济宁市第二中学2025-2026学年第二学期高二年级3月份月考生物试卷含答案

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生物试卷
考试时间：90 分钟；满分：100 分
一、单选题（本大题共 20 小题，每小题 2.5 分，共 50 分。在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的）
1．玉米的阔叶和窄叶受一对等位基因控制，其中阔叶基因为显性，叶基因内部没有限制酶 A的酶切位点，与阔叶基因相比，窄叶基因有一个碱基对发生了改变，从而出现一个限制酶 A的酶切位点。为鉴定某阔叶玉米的基因型， 提取其 DNA 进行了PCR 和电冰，下列叙述错误的是( )
A ．需设计能与目的基因结合的单链 DNA 作为 PCR 引物
B ．应在 PCR 扩增体系中添加 Mg2+，以激活 DNA 聚合酶
C ．采用 PCR 技术对一个 DNA 进行扩增，第 n 次循环共需要引物 2n 个
D ．PCR 产物 DNA 用酶 A 充分作用后进行电泳，杂合子出现 2 条条带
2 ．下表是几种限制酶的识别序列及切割位点（Y=C 或 T ，R=A 或 G）。下列相关叙述正确的是( )
A ．限制酶都是从原核生物中分离纯化得到的
B ．限制酶识别序列越短，则相应酶切位点在 DNA 中出现的概率一般越大
C ．一种限制酶只能识别一种核苷酸序列，并在特定位点切割
D ．BamHI 和 Sau3AI 切割形成的片段进行重组后，BamHI 和 Sau3AI 均不能识别并切割
3 ．质粒 K 中含有 β-半乳糖苷酶基因，将该质粒导入大肠杆菌细胞后，其编码的酶可分解X-gal，产生蓝色物质，进而形成蓝色菌落，如图所示。科研小组以该质粒作为载体，采用基因工程技术实现人源干扰素基因在大肠杆菌中的高效表达。下列叙述错误的是( )
限制酶
HindⅡ
AluI
BamHI
Sau3AI
识别序列及切割位点
5'-GTY↓RAC-3'
5'-AG↓CT-3'
5'-G↓GATCC-3'
5'-↓GATC-3'
A ．使用氯化钙处理大肠杆菌以提高转化效率，可增加筛选平板上白色和蓝色菌落数
B ．如果筛选平板中仅含卡那霉素，生长出的白色菌落不可判定为含目的基因的菌株
C ．因质粒 K 中含两个标记基因，筛选平板中长出的白色菌落即为表达目标蛋白的菌株
D ．若筛选平板中蓝色菌落偏多，原因可能是质粒 K 经酶切后自身环化并导入了大肠杆菌
4 ．下列关于基因工程技术的叙述，错误的是( )
A ．基因工程的操作水平属于分子水平，其原理为基因重组
B ．基因工程中的基因载体都是小型环状 DNA---质粒
C ．基因工程中对基因的剪切和拼接过程是在生物体外完成的
D ．基因工程能定向改造生物遗传性状，实现了不同物种间的基因交流
5 ．花青素在植物抗逆和预防人类慢性疾病中起着重要作用。研究推测拟南芥中 AtMYBL2基因缺失与植株花青素合成量显著增加有关。研究者在验证该推测的过程中， 利用基因工程设计了重组 DNA(质粒三)。下列分析错误的是( )
A ．“质粒二”利用 BamH I 酶开环
B ．该基因工程中, “ 目的基因”是 AtMYBL2 基因
C ．构建质粒三时，最好在 A 、B 两端分别加 BamHⅠ酶、Ec l 酶的识别序列
D ．对于培育成功的拟南芥转基因植株， “发卡”在细胞内可以阻止翻译过程
6 ．图 1 和图 2 表示利用自身细胞进行器官移植的两种方法。下列叙述正确的是( )
A ．图 1 中 4 种基因经 Ti 质粒的 T-DNA 整合到受体细胞染色体上，促使 iPS 细胞形成
B ．图 2 中的卵母细胞培养至 MII 期再显微操作去核，获得的重构胚激活后诱导分化
C ．上述两种方法均用到动物细胞培养及核移植技术，但得到的组织器官不完全相同
D ．图 1 的成纤维细胞和图 2 的体细胞诱导分化过程选择了完全相同的基因进行表达
7 ．如图是被农杆菌侵染的水稻植株的 DNA 片段，研究者将其连接成环并以此环为模板进行 PCR，扩增出 T-DNA 插入位置两侧的未知序列，据此来确定 T-DNA 插入的具体位置。下列叙述正确的是( )
A ．农杆菌在自然条件下主要侵染单子叶植物和裸子植物，T-DNA 存在于其拟核上
B ．将扩增出的未知序列与水稻基因组序列比对可确定 T-DNA 的插入位置
C ．利用图中的引物②③组合可扩增出两侧的未知序列
D ．若用 PCR 技术扩增循环 n 次，需要 2n-1 个引物
8．农杆菌中含有一个大型的 Ti 质粒，若想用基因工程并通过农杆菌向某种双子叶植物中导入抗旱基因，下列分析不合理的是( )
A ．将重组 Ti 质粒导入农杆菌之前，可以用 CaCl2 溶液处理农杆菌
B ．若能够在植物细胞中检测到抗旱基因，则说明该基因工程项目获得成功
C ．若用 Ti 质粒作为抗旱基因的载体，要保证复制原点、启动子和终止子不被破坏
D ．要将抗旱基因插入到 Ti 质粒的T-DNA 上才能转移到双子叶植物的染色体上
9 ．下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中 TetR 表示四环素抗性基因，AmpR 表示氨苄青霉素抗性基因，BamHⅠ 、HindⅢ 、SmaⅠ直线箭头所示为三种限制酶的酶切位点。下列相关叙述错误的是( )
A ．要将人乳铁蛋白基因插入载体，需用 HindⅢ 和 BamHⅠ 限制酶同时酶切载体和目的基因
B ．图中能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是复制原点
C ．为检测人乳铁蛋白基因是否成功表达，可采用抗原-抗体杂交技术
D ．该过程中的早期胚胎一般需要培养至桑葚胚或囊胚阶段再进行胚胎移植
10．为提高植物抗病能力，研究人员将抗病基因（长度大约为 260bp）转入 A 植物中，然后通过 PCR 和电泳技术对 1~4 号 A 植物的细胞进行检测。该过程所用质粒与含抗病基因的
DNA 上相关限制酶的酶切位点分别如图 1、2 所示，电泳检测结果如图 3 所示。下列相关叙述正确的是( )
A ． 目的基因的筛选与获取是培育转基因 A 植物的核心步骤
B ．构建表达载体时应选用 BamHⅠ和 HindⅢ这两种限制酶
C ．受体细胞发育为转基因 A 植物的过程需在固体培养基上进行
D ．由图 3 电泳结果可知，4 号植株的转基因获得成功
11 ．PrGen 是一种新型人工智能系统，可用于蛋白质结构设计和预测、PrGen 将蛋白质的
功能和序列信息进行映射，从而设计出具备预期功能的 AI（人工智能）预测蛋白质。研究 者发现有的 AI 预测蛋白质与天然蛋白质的氨基酸序列相似度并不高，但活性的相似度较高。下列叙述错误的是( )
A ．PrGen 以蛋白质的结构规律及其与功能的关系作为基础预测蛋白质的结构
B ．PrGen 从预期蛋白质的功能出发，直接设计出相应基因的碱基序列
C ．PrGen 设计的蛋白质与天然蛋白质的活性相似度与二者结构相似度无关没直接联系
D ．PrGen 助力人类正确认识蛋白质的高级结构，从而突破蛋白质工程的难点
12 ．下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图 l、图 2 中箭头表示相关限制酶的酶切位点,请分析下列叙述正确的是
A ．一个图 1 所示的质粒分子经 SmaⅠ切割前后，分别含有 0 个和 4 个游离的磷酸基团
B ．若对图中质粒进行改造，插入的 SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越高
C ．用图中的质粒和外源 DNA 构建重组质粒，可以使用 SmaⅠ切割
D ．使用 EcRI 限制酶同时处理质粒、外源 DNA 可防止质粒和外源 DNA 发生自身环化
13 ．下列关于基因工程基本工具的叙述，正确的是( )
A ．限制酶只能特异性地识别 6 个核苷酸序列
B ．限制酶切割 DNA 分子一次可断开 2 个磷酸二酯键，产生 2 个游离的磷酸基团
C ．用做分子运输车的质粒常有特殊的抗生素合成基因，便于重组 DNA 分子的筛选
D．DNA 连接酶能连接双链 DNA 片段互补的黏性末端或平末端，从而恢复被限制酶切开的氢键
14 ．将某外源基因与质粒结合形成重组质粒的过程如图。下列说法错误的是( )
限制酶
BamHⅠ
HindⅢ
EcRⅠ
SmaⅠ
识别序
列及切
割位点
G↓GATCC
CCTAG↑G
A↓AGCTT
TTCGA↑A
G↓AATTC
CTTAA↑G
CCC↓GGG
GGG↑CCC
A ．氨苄青霉素抗性基因可作为筛选重组 DNA 的标记基因
B ．用不同限制酶分别切割含目的基因的 DNA 和质粒也能产生相同黏性末端
C ．构建重组质粒时，除了需 BamHI 酶外，还需 DNA 连接酶
D ．图中方法可保证目的基因定向与质粒相连形成重组质粒
15．应用生物工程技术培育人们需要的生物新品种或新产品，提高了经济效益。如图表示培育生物新品种的过程，请据图判断下列叙述中正确的是( )
A ．图中①过程需要的工具酶是限制酶、DNA 连接酶和载体
B ．图中⑤过程需要的培养基中只需加入无机营养和植物激素
C ．将 prG 导入细胞 I，细胞 I 是 B 淋巴细胞
D ．可用相应抗原进行抗原—抗体杂交，检测抗虫基因是否成功表达
16 ．下列有关高中教材实验叙述正确的是( )
A ．体积分数为 95％的乙醇加入碳酸钠可在绿叶中的色素提取实验中取代无水乙醇
B ．艾弗里肺炎链球菌体外转化实验中，利用“加法原理”加入不同酶处理细胞提取液
C ．用标记重捕法调查鸟类的种群密度时，若标记个体在重捕前死亡，会使调查结果比实际值偏小
D ．“DNA 的粗提取与鉴定”实验不需要对最后的实验结果精确定量
17 ．研究人员用 X 基因和 pBR322 质粒构建基因表达载体，图中X 基因转录方向为从左向
右。对受体细胞大肠杆菌（对四环素和氯霉素均没有抗性）进行转化和筛选，导入基因表达载体过程中，受体菌存在未导入质粒、导入空质粒（不含目的基因的 pBR322 质粒）或导入重组质粒的情况。下列叙述正确的是( )
A ．用 BamHI 和 SalI 同时切割后 X 基因不能正确插入 pBR322 质粒
B ．培养基添加氯霉素可将未导入质粒和导入质粒的受体菌分离
C ．该实验也可以使用没有复制原点的质粒与 X 基因构建基因表达载体
D ．用 X 基因的引物进行 PCR 扩增可对转化后的大肠杆菌进行个体生物学水平鉴定
18．图中 pUC18 是一种常用质粒，其中 ri 为复制原点，AmpR 为氨苄青霉素抗性基因，lacZ基因指导合成的某种酶能将无色染料 X-gal 变成蓝色。已知目的基因插入的位置如图所示，且将含有重组质粒的大肠杆菌用含有氨苄青霉素和无色染料 X-gal 的培养基培养，下列叙述错误的是( )
A ．将图中质粒导入大肠杆菌时，一般先用 Ca2+处理大肠杆菌
B ． 目的基因插入时破坏了 lacZ 基因，有利于后续筛选目的菌株
C ．含有该重组质粒的大肠杆菌在上述培养基上生长出的菌落呈蓝色
D ．大肠杆菌细胞内导入了不含目的基因的空质粒时，也会形成菌落
19 ．如图是利用基因工程技术培育抗除草剂作物的部分过程，其中 Pst I 、Sma I 、EcR I、 Apa I 为四种限制酶，且切割 DNA 分子后形成的末端均不同。下列说法正确的是( )
A ．图示质粒分子在 Sma I 切割前后分别含有 0 或 1 个游离的磷酸基团
B ．培育抗除草剂作物的核心是将含 bar 基因的表达载体导入受体细胞
C ．可选用 Pst I 和 EcR I 切割质粒和 bar 基因，确保目的基因正确插入
D ．利用 PCR 技术可从分子水平检测 bar 基因是否翻译出抗除草剂蛋白
20 ．双元载体系统由微型质粒（含 T-DNA，不含 Vir 区）和辅助 Ti 质粒（含 Vir 区，不含T-DNA）组成，辅助 Ti 质粒可使微型质粒上的 T-DNA 整合到受体植株细胞染色体上。某研究团队利用该系统研究了 P 启动子的调控活性，部分过程如图所示。下列说法错误的是( )
A ．可以将农杆菌转入双子叶植株进行研究
B ．通过检测 GUS 基因的表达情况，可知 P 启动子的调控活性
C ．检测发现受体植株具有卡那霉素抗性或潮霉素抗性能说明受体植株转化成功
D ．辅助 Ti 质粒可使 T-DNA 整合到受体植株细胞染色体上，依靠的可能是 Vir 区表达产物
二、不定项选择题（本大题共 5 小题，每小题 3 分，共 15 分。在每小题给出的选项中，有多项符合题目要求，全部选对得 3 分，选对但不全得 1 分，有选错的得 0 分）
21 ．下列关于“DNA 的粗提取与鉴定”“DNA 片段的扩增及电泳鉴定”操作和结果的叙述错误的是( )
A ．新鲜的洋葱、菠菜、猪肝等均可作为 DNA 粗提取的实验材料
B ．鉴定 DNA 时，应将丝状物直接加到二苯胺试剂中进行沸水浴
C ．在凝胶溶液凝固前加入核酸染料以便对 DNA 进行染色
D ．PCR 实验中使用的枪头、蒸馏水和移液器等在使用前都必须进行高压蒸汽灭菌
22 ．下图表示某基因表达载体中的潮霉素抗性基因和 psy 基因，有关叙述正确的是( )
A ．潮霉素抗性基因可以作为标记基因用于筛选
B ．启动子的转录产物为 mRNA 的起始密码子
C ．转录过程 RNA 聚合酶沿 3'→5'方向读取模板链的碱基序列
D ．潮霉素抗性基因和 psy 基因以同一条链为模板进行转录
23 ．图示人体正常基因 A 突变为致病基因 a 及 HindⅢ切割位点。AluⅠ限制酶识别序列及切割位点为，下列相关叙述正确的有( )
A ．基因 A 突变为 a 是一种碱基增添的突变
B ．用两种限制酶分别酶切 A 基因后，形成的末端类型不同
C ．用两种限制酶分别酶切 a 基因后，产生的片段大小一致
D ．产前诊断时，该致病基因可选用 HindⅢ限制酶开展酶切鉴定
24 ．下表为几种限制酶的识别序列及其切割位点。下列叙述正确的有( )
注:Y 为 C 或 T,R 为 A 或 G。
A ．HindⅡ能识别GTTAAC 序列，也能识别GTCGAC 序列
B ．AluI 和 SmaI 切割后的序列可通过 T4 DNA 连接酶相连
C ．BamHI 和 Sau3AI 两种限制酶可识别相同的序列但切割后形成不同的黏性末端
D ．AluI 和 Sau3AI 破坏的都是识别序列中心轴线处的磷酸二酯键，因而形成平末端
25 ．除草剂的有效成分草甘膦能够专一性抑制 EPSP 合成酶的作用，从而使植物多种代谢途径受影响而导致植物死亡。草甘膦没有选择性， 除掉杂草的同时作物也会受损，培育抗草甘膦作物是解决办法之一。下列关于转入外源 EPSP 合成酶基因使矮牵牛抗草甘膦流程的叙述错误的是( )
A．用限制酶和 DNA 连接酶处理目的基因和Ti 质粒，涉及磷酸二酯键、氢键的断裂和形成
B ．载体 Ti 质粒上的抗生素合成基因通常作为对重组 DNA 分子鉴定和筛选的标记基因
C ．基因表达载体组件中的启动子是 RNA 聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录
D．利用农杆菌转化法可以将含有目的基因的重组 Ti 质粒整合到受体细胞的染色体 DNA 上
三、非选择题（本大题共 2 小题，共 35 分）
26．人血清白蛋白（HSA）是由肝脏细胞合成的，具有重要的医用价值，原本只能从血清中提取，现利用基因工程的方法生产 HSA。图 1 为 HSA 基因（仅列出部分序列），图 2 为构建的基因表达载体，甲、乙、丙表示引物，其碱基分别与相近的核苷酸链互补配对。
限制酶名称
识别序列和切割位点
限制酶名
识别序列和切割位点
BamHI
5'-G↓GATCC-3'
Sau3AI
5'-↓GATC-3'
AluI
5'-AG↓CT-3'
SmaI
5'-CCC↓GGG-3'
HindⅡ
5'-GTY↓RAC-3'
(1)利用PCR 扩增技术获取 HSA 基因，PCR 缓冲液中一般要添加 ，需要的酶 ，该技术每次循环需要 三步。在 PCR 扩增仪中完成反应后，常采用 来鉴定 PCR 的产物。
(2)根据 HSA 基因的已知序列，应选用引物 进行 PCR 扩增。
A ．5'-CTGTATGCG-3' B ．5'-TACGCGTTA-3'
C ．5'-GACATACGC-3' D ．5'-ATGCGCAAT-3'
经过 4 轮扩增，扩增产物中含有的符合要求的 HSA 基因的数量为 。
(3)为了检测 HSA 基因是否正确连接在质粒上，应选择图 2 中的引物 对构建的载体进行 PCR 扩增，理论上出现 bp 的条带表明 HSA 正确连接在了载体上。
27．幽门螺杆菌（Hp）可导致慢性胃炎等疾病，该菌的 Ipp20 基因编码其特有的抗原蛋白质，研究者欲利用基因工程制备 Hp 疫苗，用于预防幽门螺杆菌感染。如图表示基本操作流程，如表表示所用质粒上 4 种限制酶的识别序列及切割位点。
限制酶
BamHI
XhI
SphI
XbaI
识别序列切割位点
G↓CTAGC
↓TCGAG
GCATG↓C
C↓CATGG
(1)质粒的基本组成单位是 ，其中终止子的作用是 。
(2)限制酶 SphI 切割其识别序列产生的黏性末端是 5'- -3'。构建基因表达载体时，为了确保将 Ipp20 基因正确连接在质粒上，最好选用 酶切割 Ipp20 基因和质粒。
(3)将重组质粒导入大肠杆菌常用 Ca2+处理，使其处于 的生理状态。后续采用影印法筛选出含有目的基因的大肠杆菌。用无菌毡布压在培养基 A 的菌落上，带出菌种，平移并压在培养基 B 上，培养一段时间后的结果，其中数字表示不同的菌落。根据以上步骤分析，培养基 A 中添加的抗生素是 ，培养基 A 中的菌落中含有 Ipp20 基因的大肠杆菌形成的菌落是 （填数字）。
1 ．D
PCR 原理：在解旋酶作用下，打开 DNA 双链，每条 DNA 单链作为母链，以 4 种游离脱氧核苷酸为原料，合成子链，在引物作用下，DNA 聚合酶从引物 3'端开始延伸 DNA链，即 DNA 的合成方向是从子链的 5'端自3'端延伸的。实际上就是在体外模拟细胞内 DNA的复制过程。DNA 的复制需要引物，其主要原因是 DNA 聚合酶只能从 3′端延伸 DNA 链。 A、PCR 引物一般是单链 DNA，故需设计能与目的基因结合的单链 DNA 作为 PCR引物，A 正确；
B、PCR 过程中用到了缓冲液，缓冲液中一般要添加 Mg2+，用于激活 DNA 聚合酶，B 正确；
C 、DNA 分子进行第 n 次复制是以第 n-1 次复制为模板，第 n-1 次复制共产生 2n-1 个 DNA分子，每个 DNA 分子的每条链做模板都需要一个引物，故需要引物为 2×2n-1=2n ，C 正确；
D、阔叶基因没有限制酶 A 的酶切位点，用酶 A 作用后只 1 个片段，窄叶基因上有 1 个酶 A的酶切位点，酶切后得到 2 个片段，所以杂合子出现 3 条条带，D 错误。
故选 D。
2 ．B
限制酶的特点： 识别特定的脱氧核苷酸序列，并在特定的位点进行切割，切割后可能形成黏性末端或平末端。
A、限制酶主要来源于原核生物， 但并非全部，如某些真核生物也可能产生限制酶， A 错误；
B、识别序列越短， 可能的碱基组合越少，出现概率越大（如 4 碱基序列概率为 1/256，6 碱基为 1/4096），B 正确；
C、一种限制酶一般只能识别一种核苷酸序列，并在特定位点切割，但表中信息显示，HindⅡ识别序列为 GTY↓RAC，其中 Y 和 R 为可变碱基），可见限制酶并非仅识别单一序列，C 错误；
D 、BamHI 切割后产生--CTAG 末端，Sau3AI 切割后产生--CTAG，即二者切割后形成的黏性末端相同，因而可以在 DNA 连接酶的催化下实现连接，连接后的序列为 GGATC，其中没有 BamHI 的完整识别位点（GGATCC），但有 Sau3AI 的完整识别位点 GATC，因此，连接后的片段可被 Sau3AI 切割，但不能被 BamHI 切割，D 错误。
故选 B。
3 ．C
基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用
PCR 技术扩增和人工合成；（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等；（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样；（4）目的基因的检测与鉴定。
A、使用氯化钙处理大肠杆菌， 可使其处于感受态，提高转化效率，即更多的大肠杆菌能吸收质粒，无论吸收的是含目的基因的重组质粒（可能形成白色菌落）还是未重组的质粒 K（形成蓝色菌落），都可增加筛选平板上白色和蓝色菌落数，A 正确；
B、由于仅含卡那霉素，未添加 X-gal，无论导入的是重组质粒还是空白质粒，因不含X-gal，无法产生蓝色物质，故生长出的菌落均为白色，B 正确；
C、筛选平板中长出的白色菌落，可能是导入了重组质粒（含目的基因），但也可能是虽然导入了质粒但目的基因没有成功表达目标蛋白，不能仅仅因为是白色菌落就判定为表达目标蛋白的菌株，C 错误；
D、若筛选平板中蓝色菌落偏多，原因可能是质粒 K 经酶切后自身环化并导入了大肠杆菌，因为自身环化的质粒K 中 β - 半乳糖苷酶基因完整，能表达活性 β - 半乳糖苷酶，分解X - gal形成蓝色菌落，D 正确。
故选 C。
4 ．B
基因工程又叫 DNA 重组技术，是指按照人们的意愿，进行严格的设计，并通过体外 DNA 重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品．
（1）原理：基因重组；
（2）工具：限制酶、DNA 连接酶和运载体；
（3）操作步骤：①目的基因的获取；②基因表达载体的构建；③将目的基因导入受体细胞；④目的基因的检测与表达．
A、基因工程又叫基因拼接技术或 DNA 重组技术，操作水平属于分子水平，其生物学原理是基因重组，A 正确；
B、在基因工程中使用的载体除质粒外， 还有入噬菌体的衍生物、动植物病毒等， B 错误；
C、基因工程中获取目的基因、构建基因表达载体和将目的基因导入受体细胞是在细胞外进行，即基因工程中对基因的剪切和拼接过程是在生物体外完成的，C 正确；
D、目的是定向改造生物的遗传性状基因工程的原理是基因重组，能定向改造生物遗传性状，实现了不同物种间的基因交流，D 正确。
故选 B。
5 ．C
A、据图可知， “质粒二”开环后两侧均有 BamHⅠ酶的切割位点，因此“质粒二”开环所用酶是 BamHⅠ酶，A 正确；
B、科学家利用基因工程将目的基因-AtMYBL2 基因设计的重组 DNA（质粒三）表达出双链 RNA（发卡），进而抑制 AtMYBL2 基因表达，从而验证拟南芥中 AtMYBL2 基因缺失与植株花青素合成量显著增加的关系，B 正确；
C、图中目的基因两侧存在 Ecl 、BamHⅠ酶的切割位点，所以为保证第二个目的基因反向连接，所以构建质粒三时，最好在第二个目的基因的 A 、B 两端分别加 Ecl 酶、BamHⅠ酶的识别序列，C 错误；
D、图中“发卡” 能转录，但 RNA 会降解，所以对于培育成功的拟南芥转基因植株，“发卡”在细胞内可以阻止翻译过程，D 正确。
故选 C。
6 ．B
A、将目的基因导入动物细胞常用的方法是显微注射法，通过 Ti 质粒导入即农杆菌转化法是将目的基因导入植物细胞常用的方法，A 错误；
B、图 2 中的卵母细胞培养至 MII 期再显微操作去核，获得重构胚后先用物理或化学方法将其激活，再经过诱导分化形成相应的细胞、组织或器官，B 正确；
C、图 1 中的方法没有用到核移植技术，C 错误；
D、图 1 的成纤维细胞和图 2 的体细胞都是由受精卵分裂分化而来，遗传物质相同，诱导分化的本质是发生了基因的选择性表达，故选择表达的基因不完全相同，D 错误。
故选 B。
7 ．B
农杆菌的转化作用原理： 农杆菌细胞中含有 Ti 质粒，其上的 T-DNA 在侵染植物细胞时，会整合到植物细胞的染色体 DNA 上；把目的基因插入 Ti 质粒的 T-DNA 中，通过农杆菌的转化作用，就可以使目的基因进入植物细胞。
A、农杆菌在自然条件下主要侵染双子叶植物和裸子植物，T-DNA 存在于其 Ti 质粒上，A 错误；
B、不同的 DNA 分子或 DNA 区段具有特异性，将扩增出的未知序列与水稻基因组序列比对可确定 T-DNA 的插入位置，B 正确；
C、耐高温的 DNA 聚合酶可在引物的 3'端延伸子链，利用图中的引物①④组合可扩增出两侧的未知序列，C 错误；
D、扩增循环 n 次，得到 2n 个 DNA 分子，共有 2n+1 条 DNA 单链，只有最初的两条母链不需要引物，共需要 2n+1-2 个引物，D 错误。
故选 B。
8 ．B
A、将目的基因导入细菌时， 需要用 Ca2+处理细菌，使其成为易于吸收周围环境中DNA 分子的生理状态，A 正确；
B、基因工程成功的标志是目的基因在受体细胞中稳定表达并产生相应性状， 仅检测到抗旱基因存在（未验证其是否表达）不能说明成功，B 错误；
C 、Ti 质粒作为载体需保留复制原点（保证自主复制）、启动子和终止子（调控目的基因表达），C 正确；
D 、T-DNA 是农杆菌转移至植物细胞的关键片段，必须将抗旱基因插入此区域才能整合到植物染色体 DNA 上，D 正确。
故选 B。
9 ．B
A、将人乳铁蛋白基因插入载体， 一方面不能破坏目的基因，另一方面酶切的载体和目的基因两端露出的黏性末端碱基序列应相同，结合前面的分析可知，应选用二者共有的限制酶 Hind Ⅲ和 BamHⅠ 切割，A 正确；
B、能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是启动子、终止子等， B 错误；
C、为检测人乳铁蛋白基因是否成功表达，可采用抗原-抗体杂交技术检测，C 正确；
D、胚胎移植时，早期胚胎一般需要培养至桑椹胚或囊胚阶段再进行移植，D 正确。故选 B。
10 ．C
A、在基因工程的基本操作程序中，基因表达载体的构建是核心步骤，A 错误；
B、构建基因表达载体时， 应选用 BclⅠ和 HindⅢ这两种限制酶，若用BamHⅠ, 两种标记基因都会被破坏，B 错误；
C、受体细胞发育为转基因 A 植物的过程需要应用植物组织培养技术，需在特定营养条件下的固体培养基上进行，C 正确；
D、由图 3 电泳结果可知，抗病基因片段长度大约为 260bp ，4 号植株电泳结果没有任何条
带，所以 4 号植株的转基因很可能是失败的，D 错误。
故选 C。
11 ．B
A、根据题意， PrGen 将蛋白质的功能和序列信息进行映射来设计蛋白质，这必然是以蛋白质的结构规律及其与功能的关系为基础的，A 正确；
B、文中提到 PrGen 是设计出具备预期功能的 AI 预测蛋白质，而不是直接设计出相应基因的碱基序列，B 错误；
C、由题意可知， PrGen 设计的蛋白质与天然蛋白质氨基酸序列相似度不高，但活性相似度较高，说明活性相似度与结构相似度相关性不大，C 正确；
D、PrGen 可用于蛋白质结构设计和预测，这有助于人类正确认识蛋白质的高级结构，从而突破蛋白质工程的难点，D 正确。
故选 B。
12 ．B
识图分析可知，质粒为环状 DNA 分子，其上有 4 种限制酶的切割位点，其中的 SmaⅠ酶切位点位于质粒的标记基因序列中；目的基因中含有 4 种限制酶的切割位点，但是因此 SmaⅠ酶切位点位于目的基因序列中，因此如果选择 SmaⅠ酶切质粒和目的基因会将标记基因和目的基因破坏，因此该限制酶不能选择使用。构建基因表达载体时， 一般如果选择两种不同的限制酶进行切割质粒和目的基因会产生不同的末端，可以防止质粒和外源 DNA 发生自身环化。
由于质粒在切割前是一个环状 DNA 分子，因此上面没有游离的磷酸基团；当质粒被切割后形成了两个末端各有 1 个游离的磷酸基团，故共有 2 个游离的磷酸基团，A 错误； SmaⅠ酶切位点越多，表示 G 和C 这一对碱基对所占的比例就超高，而 G 和C 之间含有三个氢键，故其热稳定性超高，B 正确；质粒抗生素抗性基因为标记基因，由图可知，标记基因和外源 DNA 目的基因中 均含有 SmaI 酶切位点，都可以被 SmaI 酶破环，故不能使用该酶剪切质粒和含有目的基因的 DNA ，C 错误；构建含目的基因的重组质粒 A 时，使用 EcRI限制酶同时处理质粒、外源 DNA 会产生相同的黏性末端，不能防止质粒和外源 DNA 发生 自身环化，D 错误。
13 ．B
A、大多数限制酶能特异性地识别 6 个核苷酸序列，A 错误；
B、限制酶切割双链 DNA 时，会在两条链上各断开一个磷酸二酯键，共断开 2 个，每个切
口产生 1 个游离的磷酸基团，总计 2 个，B 正确；
C、质粒作为运载体需携带标记基因（如抗生素抗性基因），而非“抗生素合成基因”，C 错误；
D 、DNA 连接酶的作用是连接磷酸二酯键，而非恢复氢键。氢键的恢复依赖碱基互补配对， D 错误。
故选 B。
14 ．D
A、氨苄青霉素抗性基因是质粒上的标记基因，可用于筛选含有重组 DNA 的受体细胞，A 正确；
B、不同的限制酶识别不同的核苷酸序列， 但可能由于识别序列部分相同，切割后可能会产生相同的黏性末端，B 正确；
C、构建重组质粒时，首先要用 BamHI 酶切割质粒和含目的基因的 DNA，产生相同的黏性末端，然后再用 DNA 连接酶将目的基因和质粒连接起来，C 正确；
D、仅用 BamHI 一种限制酶切割，目的基因和质粒都可能会发生自身环化，或者目的基因与质粒反向连接，不能保证目的基因定向与质粒相连形成重组质粒，D 错误。
故选 D。
15 ．C
A 、①表示基因表达载体的构建，该过程需要的工具酶是限制酶和DNA 连接酶，载体不是工具酶，A 错误；
B、⑤表示采用植物组织培养技术将转基因植物细胞培育成转基因植株，该过程需要的培养基中含有植物激素、无机营养、有机营养、琼脂等，B 错误；
C、将 prG 导入到细胞Ⅰ形成的重组细胞能产生单克隆抗体，prG 能无限增殖，则Ⅰ是 B 淋巴细胞，能产生抗体，C 正确；
D、检测抗虫基因是否成功表达， 应检测是否产生了相应的抗虫蛋白，可通过抗原—抗体杂交的方法，用相应抗体进行抗原—抗体杂交，D 错误。
故选 C。
16 ．D
A、体积分数为 95%的乙醇加入无水碳酸钠可在绿叶中的色素提取实验中取代无水乙醇，A 错误；
B、艾弗里肺炎链球菌体外转化实验中，加入不同酶处理细胞提取液是利用了 “减法原理”去掉提取液中的相应物质，B 错误；
C、若标记个体在重捕前死亡，会使调查结果比实际值偏大，C 错误；
D、“DNA 的粗提取与鉴定” 只需要对最后的实验结果定性，不需要对最后的实验结果精确定量，D 正确。
故选 D。
17 ．B
A、在构建表达载体时， 使用双酶切割能使目的基因正确插入质粒中，故用 BamHI和 SalI 同时切割有利于 X 基因正确插入 pBR322 质粒，A 错误；
B、未导入质粒的受体菌不能在含有氯霉素的培养基上生长， 培养基添加氯霉素可筛选出导入质粒的受体菌，B 正确；
C、没有复制原点的质粒没有自我复制能力，无法在细胞内扩增，C 错误；
D、在鉴定导入重组质粒的受体菌时，重组质粒中含有 X 基因，因此可用X 基因的引物来扩增，若扩增出目的产物，则说明受体菌含有重组质粒，这属于分子水平上的鉴定，D 错误。故选 B。
18 ．C
A、大肠杆菌是原核生物， 需要用 Ca2+处理，使其处于一种能吸收周围环境中 DNA分子的生理状态，A 正确；
B、插入目的基因时，通常会破坏 lacZ 基因，导致 lacZ 基因无法正常表达，lacZ 基因编码的酶能将无色染料 X-gal 变成蓝色，因此破坏 lacZ 基因后，含有重组质粒的菌落将呈现白色，而不是蓝色。这有助于筛选出成功插入目的基因的菌株，B 正确，
C、插入目的基因时，通常会破坏 lacZ 基因，导致 lacZ 基因无法正常表达，lacZ 基因编码的酶能将无色染料 X-gal 变成蓝色，因此破坏 lacZ 基因后，含有重组质粒的菌落将呈现白色， C 错误；
D、由于质粒含有氨苄青霉素抗性基因， 导入空质粒的大肠杆菌仍然能够在含有氨苄青霉素的培养基上生长，D 正确。
故选 C。
19 ．C
A、质粒为环状 DNA ，Sma I 切割后形成线性 DNA，含 2 个游离磷酸基团，A 错误；
B、基因工程核心是构建基因表达载体，B 错误；
C 、Pst I 和EcR I 切割可避免质粒自身环化和目的基因反向连接，C 正确；
D 、PCR 检测目的基因是否导入，抗原-抗体杂交检测是否翻译，D 错误。
故选 C。
20 ．C
A、农杆菌转化法常用于双子叶植物，烟草属于双子叶植物，A 正确；
B、因为 GUS 基因的表达情况可检测，且与 P 启动子相关联，所以通过检测GUS 基因的表达情况，能知晓 P 启动子的调控活性，B 正确；
C、卡那霉素抗性基因位于微型质粒的非 T - DNA 区域，在双元载体系统中，只有 T - DNA （含P 启动子、GUS 基因等）会整合到受体植株染色体上，卡那霉素抗性基因不会随 T - DNA
转移到受体植株中；只有检测发现植株具有潮霉素抗性，才能说明 T-DNA 转移到了受体植株细胞染色体 DNA 上，C 错误；
D、辅助 Ti 质粒含 Vir 区且可使微型质粒上的 T-DNA 整合到受体植株细胞染色体上，依赖的可能是 Vir 区的表达产物，D 正确。
故选 C。
21 ．BD
DNA 的粗提取与鉴定的实验原理是：
①DNA 的溶解性，DNA 和蛋白质等其他成分在不同浓度的氯化钠溶液中的溶解度不同，利用这一特点可以选择适当浓度的盐溶液可以将 DNA 溶解或析出，从而达到分离的目的；
②DNA 不溶于酒精溶液，细胞中的某些蛋白质可以溶解于酒精，利用这一原理可以将蛋白质和 DNA 进一步分离；
③在沸水浴的条件下 DNA 遇二苯胺会呈现蓝色。
A、新鲜的洋葱、菠菜、猪肝等细胞中都含有 DNA，均可作为 DNA 粗提取的实验材料，A 正确；
B、鉴定 DNA 时，不能将丝状物直接加到二苯胺试剂中，应先将丝状物溶解在 2ml/L 的NaCl 溶液中，再加入二苯胺试剂进行沸水浴，B 错误；
C、在凝胶溶液凝固前加入核酸染料（如溴化乙锭等 ），可以在电泳后对 DNA 进行染色，便于观察，C 正确；
D 、PCR 实验中使用的微量离心管、枪头、蒸馏水等在使用前都必须进行高压灭菌处理，移液器需要清洗，D 错误。
故选 BD。
22 ．AC
转录是以 DNA 的一条链为模板合成 RNA 的过程，该过程主要在细胞核中进行，需要 RNA 聚合酶参与。
A、潮霉素抗性基因可以作为标记基因用于筛选，筛选出含有目的基因的受体细胞， A 正确；
B 、启动子是 RNA 聚合酶识别并结合的位点，使转录开始，启动子不对应 mRNA 的起始密码子，B 错误；
C 、转录过程 RNA 聚合酶沿 3'→5'方向读取模板链的碱基序列，而子链的延伸方向为 5'→3'， C 正确；
D 、根据图中潮霉素抗性基因和 psy 基因的启动子和终止子的位置可知，潮霉素抗性基因转录方向向左，psy 基因转录方向向右，二者以不同的子链为模板进行转录，D 错误。
故选 AC。
23 ．BD
“分子手术刀”——限制酶：（1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。（2）功能：能够识别双链 DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。（3）结果：经限制酶切割产生的 DNA 片段末端通常有两种形式，即黏性末端和平末端。
A 、对比 A 基因和 a 基因的序列，A 基因中 “AAGCTT” 变为 a 基因中“AAGCTG” ，是碱基替换（T→G），并非碱基增添，A 错误；
B 、HindⅢ 切割产生黏性末端，AluⅠ 切割后产生的是平末端，二者末端类型不相同，B 正确；
C 、a 基因中有 2 个 Hind Ⅲ切割位点，切割后产生 3 个片段，有 3 个 Alu Ⅰ切割位点，切割后产生 4 个片段，用两种限制酶分别酶切 a 基因后，产生的片段大小不一致，C 错误；
D 、因为正常基因 A 和致病基因 a 的 HindⅢ 切割位点数量不同，所以产前诊断时，该致病基因可选用 HindⅢ 限制酶开展酶切鉴定，D 正确。
故选 BD。
24 ．AB
A 、当 Y 为 C ，R 为 A 时，Hind Ⅱ的识别序列为 GTCAAC 序列，当 Y 为 T ，R 为A 时，识别序列为 GTTAAC 序列，A 正确；
B 、AluI 和 SmaI 切割后形成的都是平末端，可通过 T4DNA 连接酶相连，B 正确；
C 、BamHI 识别序列是 5'-G↓GATCC-3' ，切割后的末端是-GATC- ，Sau3AI 识别序列是
5'-↓GATC-3'，末端是-GATC-，故 BamHI 和 Sau3AI 两种限制酶可识别不同的序列，C 错误；
D、由表格可知，Sau3AI 识别序列是 5'-↓GATC-3'，该限制酶的切割位点不在识别序列中心轴线上，不能形成平末端，D 错误。
故选 AB。
25 ．BD
基因工程的步骤： 目的基因的筛选和获取；构建基因表达载体；将目的基因导入受体细胞；目的基因的检测和鉴定。
A、用限制酶和 DNA 连接酶处理目的基因和Ti 质粒，涉及碱基之间的氢键和 DNA片段之间的磷酸二酯键的断裂和形成，A 正确；
B、载体 Ti 质粒上的抗生素抗性基因通常作为对重组 DNA 分子鉴定和筛选的标记基因，不是抗生素合成基因，B 错误；
C、基因表达载体组件中的启动子是 RNA 聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录，是转录的起点，C 正确；
D、由于 T-DNA 可转移到受体细胞并整合到受体细胞染色体的 DNA 上，故利用农杆菌转化法可以将含有目的基因的 T-DNA 整合到受体细胞的染色体 DNA 上，D 错误。
故选 BD。
26 ．(1) Mg2+ 耐高温的 DNA 聚合酶##TaqDNA 聚合酶 变性、复性、延伸琼脂糖凝胶电泳
(2) AD 8##八
(3) 乙、丙 350
27．(1) 脱氧核苷酸 基因转录停止的区域（或终止转录）
(2) CATG XhI、XbaI
(3) 能吸收周围环境中 DNA 潮霉素 3、5