专题18+基因工程（复习课件）2026年高考生物二轮复习讲练测

这是一份专题18+基因工程（复习课件）2026年高考生物二轮复习讲练测，文件包含《司马光砸缸》课件pptx、《司马光砸缸》教案doc、16歌曲伴奏《司马光砸缸》_128kmp3、16歌曲范唱《司马光砸缸》_128kmp3、司马光砸缸故事mp4等5份课件配套教学资源，其中PPT共0页， 欢迎下载使用。
Cmpany prfile
自查探针+核心串讲+能力进阶，三步掌握核心整合
核心整合一 基因工程的基本工具串讲1 基因工程的三种基本工具 串讲2 DNA的粗提取与鉴定核心整合二 基因工程的基本操作程序 和应用串讲1 基因工程的基本操作程序串讲2 基因工程的应用串讲3 蛋白质工程
真题动向+命题预测，两步攻克高考题型
剖析考情动向，精研考点分布
搭建知识网络，整合能力体系
生物技术的安全性与伦理问题
限制酶DNA连接酶载体（作为载体的条件）
伦理问题禁止生殖性克隆允许治疗性克隆
种类：致病菌类、病毒类、生化毒剂类
我国政府态度：不发展、不生产、不储存
改造现有蛋白质或制造新的蛋白质
农牧业、医药、食品工业
将目的基因导入受体细胞（方法）
串讲核心考点，提炼方法技巧
(1)（2025 天津 T6）电泳分离DNA片段时，需用缓冲液配制琼脂糖凝胶( )(2)（2025 湖南 T2 改编）DNA的粗提取与鉴定可用“猪成熟红细胞”替代“猪肝细胞”( )(3)（2025 河北 T5 改编）在提取的DNA溶液中加入二苯胺试剂，沸水浴后观察颜色以鉴定DNA（ ）(4)（24年贵州T13改编）不同的限制酶识别的DNA序列不同，但使用不同的限制酶也能产生相同的黏性末端( )
核心整合一  植物细胞工程
串讲1 基因工程的三种基本工具
核心整合一  基因工程的基本工具
串讲1 植物组织培养技术
1、误认为限制酶可切割任意DNA序列，或切割单链DNA。实则仅识别特定双链DNA回文序列，切割磷酸二酯键，不切割氢键。2、混淆二者作用，认为均可连接DNA片段。实则DNA连接酶连接两个DNA片段，DNA聚合酶只能将脱氧核苷酸连接到已有DNA链上。3、仅记住载体需有标记基因，忽略需具备复制原点（自主复制）、多个限制酶切点（便于插入目的基因）等关键条件。
串讲2 DNA的粗提取与鉴定
核心整合一  基因工程的基本工具
核心整合一  基因工程的基本工具
能力1 与DNA有关的几种酶的比较
1.下面是3种限制性内切核酸酶对DNA分子的识别序列和剪切位点图(箭头表示切点，切出的断面为黏性末端)。下列叙述不正确的是(　 )A．不同的限制酶有不同的识别序列和切割位点，体现了酶的专一性B．限制酶2和3识别的序列都包含6个碱基对C．限制性酶1和酶3剪出的黏性末端相同D．能够识别和切割RNA分子内一小段核苷酸序列的酶只有限制酶2
限制酶只能识别特定的DNA序列，且具有专一性，因此三种限制酶均不能识别和切割RNA中的核糖核苷酸序列
(1)（2025 全国 T11 改编）PCR过程中解开双链的方法是用解旋酶处理（ ）(2)（2025 甘肃 T21）重组Ti质粒构建完成后，可通过农杆菌转化法将该质粒转入植物细胞（ ）(3)(2025 云南T21)构建的基因表达载体除启动子外，还必须有目的基因、终止子、标记基因。(　 　)
核心整合二  基因工程的基本操作程序和应用
串讲1 基因工程的基本操作程序
串讲2 基因工程的应用
能力1 限制酶与载体的精准选择
2、单酶切与双酶切的核心对比
核心整合二 基因工程的基本操作程序和应用
1．（2025·云南昆明·模拟预测）以下是几种不同限制性内切核酸酶切割DNA分子后形成的部分片段。下列有关叙述正确的是（    ）A．切割产生①片段的限制酶识别序列由5个碱基对构成B．限制酶只存在于原核生物，作用的化学键为磷酸二酯键和氢键C．上述能进行连接的两个黏性片段，其连接后形成的DNA分子是D．两个③片段只能被E.cli DNA连接酶催化连接形成重组DNA
限制酶主要是从原核细胞中分离纯化出来的，作用的化学键为磷酸二酯键
两个③片段属于平末端，只能被T4 DNA连接酶催化连接形成重组 DNA
能力2 基因表达载体的优化设计
2．（2025·广东汕尾·一模）研究表明，COX-2基因与肿瘤细胞的迁移有关，科研人员通过构建COX-2基因表达载体（如图），用于进一步研究COX-2基因表达产物对肿瘤细胞迁移的作用机制。图中1链为转录的模板链，BamHⅠ、SacⅠ为限制酶识别序列，LacZ基因表达产物可使显色剂X-gal变蓝。下列说法正确的是（    ）A．通过PCR扩增COX-2基因片段，需要加入引物A和引物DB．为构建COX-2表达载体，需在与1链结合的引物的5'端添加BamHⅠ识别序列C．在含氨苄青霉素的培养基中能生长的是含重组质粒的菌落D．在含X-gal培养基中长出的蓝色菌落含重组质粒
在含X-gal培养基中长出的白色菌落含重组质粒
能力3 基因工程与其他技术的综合应用
3．（2025·山东青岛·二模）微生物底盘细胞是指经过基因工程改造、用于高效表达目标蛋白的宿主细胞系统。利用合成生物学相关技术对底盘细胞进行遗传及代谢途径改造，可以构建出较为理想的细胞工厂，具体流程见图。研究者已用毕赤酵母作为底盘细胞来生产次生代谢产物萜类物质。下列说法错误的是（　　）A．毕赤酵母生产的萜类物质是酵母生长所必需的物质B．某基因失活后菌株无法存活可以确定该基因是必需基因C．去除野生菌株的非必需基因降低底盘细胞的复杂性，保证目的基因的高效表达D．选择大肠杆菌做底盘细胞直接合成的胰岛素通常不具备生物活性
毕赤酵母生产的萜类物质是次生代谢物，不是酵母生长所必需的物质
破解题型规律，攻克解题难关
1．（2025·福建·高考真题）质粒P含有2个EcRⅠ、1个SacⅠ和1个BamHⅠ的限制酶切割位点。已知BamHⅠ位点位于2个EcRⅠ位点的正中间，用上述3种酶切割该质粒，酶切产物的凝胶电泳结果如图，其中泳道①条带是未酶切的质粒P，泳道②③④条带为3种单酶切产物，泳道⑤⑥⑦条带为双酶切产物。下列叙述正确的是（    ）A．DNA分子在该凝胶的迁移方向是从电源正极到 负极B．可确认泳道②③条带分别是SacⅠ和EcRⅠ的 单酶切产物C．泳道⑤条带是SacⅠ和EcRⅠ的双酶切产物D．泳道①②说明未酶切质粒的碱基数小于酶切后质粒的碱基数
DNA分子带负电，在凝胶中会向电源正极迁移，所以其迁移方向是从电源负极到正极，
泳道②条带和泳道④条带位置一致，无法区分泳道②条带是SacI还是BamHI的单酶切产物
酶切只是将质粒的环状结构切开，变成线性等结构，碱基总数不会改变
2．（2025·江西·高考真题）为了获得抗白叶枯病的水稻品种，研究人员构建了含有抗病基因D的重组Ti质粒(如图)，通过农杆菌转化法将D基因导入水稻种子诱导的愈伤组织，最终获得抗病植株。下列叙述正确的是( )A．水稻愈伤组织细胞中RNA聚合酶无法识别U6启动子B．在含重组Ti质粒的农杆菌中U6启动子不能驱动卡那霉素抗性基因表达C．农杆菌侵染愈伤组织后所用的筛选培养基中需加入卡那霉素D．愈伤组织再分化获得的含有D基因的幼苗属于抗病植株
D基因上游的U6启动子需被水稻愈伤组织细胞中RNA聚合酶识别
还需要进行个体生物学水平的鉴定。不一定是抗病植株，
3．（2025·安徽·高考真题）质粒K中含有β-半乳糖苷酶基因，将该质粒导入大肠杆菌细胞后，其编码的酶可分解X-gal，产生蓝色物质，进而形成蓝色菌落，如图所示。科研小组以该质粒作为载体，采用基因工程技术实现人源干扰素基因在大肠杆菌中的高效表达。下列叙述错误的是（    ）A．使用氯化钙处理大肠杆菌以提高转化效率，可增加筛选平板上白色和蓝色菌落数B．如果筛选平板中仅含卡那霉素，生长出的白色菌落不可判定为含目的基因的菌株C．因质粒K中含两个标记基因，筛选平板中长出的白色菌落即为表达目标蛋白的菌株D．若筛选平板中蓝色菌落偏多，原因可能是质粒K经酶切后自身环化并导入了大肠杆菌
筛选平板中长出的白色菌落，可能是导入了重组质粒（含目的基因），但也可能是虽然导入了质粒但目的基因没有成功表达目标蛋白
4．（2025·海南·高考真题）绵羊的羊毛长度与毛囊细胞的增殖有关，毛囊细胞中表达的基因Z可能是调控羊毛长度的关键基因。某团队利用基因工程技术，探究了基因Z对绵羊毛囊细胞X增殖的影响。回答下列问题。(1)质粒甲保存有目的基因Z，如图。质粒乙有4种限制酶的酶切位点，识别序列见表。现需将质粒甲中的基因Z插入质粒乙中，构建重组质粒乙用于研究，须用的限制酶是________和_________。(2)细胞X是一种贴壁细胞，可用_______（填“固体”或“液体”）培养基培养。在进行传代培养时，需使用胰蛋白酶并置于37℃环境中处理，理由是_______________。
EcR Ⅰ Xh Ⅰ
液体 使贴壁细胞分散为单个细胞，37℃是胰蛋白酶的最适温度
4．(3)将空质粒乙和重组质粒乙分别导入细胞X，导入后测定不同时间的细胞数量，结果如图。根据实验结果说明基因Z的表达对细胞增殖有_____作用，且随导入时间推移，增殖速率_____。(4)siRNA是一种短的双链RNA，能引导内切核酸酶切割靶基因的mRNA。①人工合成靶向基因Z的siRNA，将其导入细胞X作为实验组，同时设置对照组，将_____________________导入细胞X。一段时间后，发现实验组细胞数量少于对照组。该实验的目的是探究基因Z的___________对细胞X增殖的影响。②为检测靶向基因Z的siRNA导入细胞X后能否发挥作用，简要写出在分子水平上检测的2种实验思路是：_____。
无靶向的siRNA 表达减少
a、提取实验组和对照组的mRNA，使用PCR技术进行扩增，对比检测Z基因的mRNA的含量，若实验组含量减少，则说明siRNA起作用；b、提取实验组和对照组的蛋白质，使用抗原-抗体杂交技术，对比检测Z基因表达蛋白质的含量，若实验组含量减少，则说明siRNA起作用）
1．（2025·四川·一模）大量研究表明，蛋白激酶 SOS2 响应盐胁迫应答，该酶由 SOS2 基因编码。为研究其机制，研究者将质粒 pART27 与 SOS2 基因结合后形成重组质粒。在构建过程中，研究者分别使用“单酶切”和“双酶切”切割质粒与含 SOS2 基因的 DNA 片段（如图），酶切产物用 DNA 连接酶连接。在只考虑产物两两结合的情况下，下列叙述错误的是（    ）A．“单酶切”组的产物中含有 SOS2 基因与 SOS2 基因的连接物B．SOS2 基因与 pART27 的正向连接物只能来自“双酶切”组C．pART27 与 pART27 的连接物是“单酶切”组的最大产物D．“单酶切”组连接物的种类较“双酶切”组的连接物多
考向1 基因工程的基本工具
不管是“单酶切法”还是“双酶切法”，均可使SOS2基因与质粒正向（正确）连接
2．（2025·四川泸州·二模）虾青素是雨生红球藻产物，具有抗氧化和提高免疫力等特点，但并非其基本生命活动必需的产物。某科研团队从雨生红球藻中克隆虾青素合成关键酶基因（crtZ），通过基因工程改造酿酒酵母构建工程菌株，并结合发酵工艺优化实现虾青素产业化生产。请回答下列问题:(1)图中质粒还缺少的必备元件是__________。为使基因 crtZ 片段能正确连接到图中质粒，应选用限制酶__________________________来处理质粒。(2)将重组质粒导入大肠杆菌后，需在含氨苄青霉素的培养基上筛选，目的是__________________________________；再从阳性大肠杆菌中提取重组质粒，导入URA3基因缺失的酿酒酵母，应在________________的培养基上筛选工程酵母。
考向2 基因工程的基本操作程序
复制原点 BamHI和 EcRI
排除未导入质粒的大肠杆菌 不含尿嘧啶
2．（2025·四川泸州·二模）虾青素是雨生红球藻产物，具有抗氧化和提高免疫力等特点，但并非其基本生命活动必需的产物。某科研团队从雨生红球藻中克隆虾青素合成关键酶基因（crtZ），通过基因工程改造酿酒酵母构建工程菌株，并结合发酵工艺优化实现虾青素产业化生产。请回答下列问题:(3)虾青素的部分代谢途径如下图所示，通过基因编辑技术将crtZ基因定向整合到酿酒酵母染色体上的ERG3基因中，该方法可避免因________________________（生理过程）导致的目的基因丢失，提高遗传稳定性；同时能进一步提高虾青素产量，原因是______。
有丝分裂（细胞增殖） ERG3基因被破坏，使更多前体物质用于虾青素合成途径
3．（2025·四川泸州·一模）研究人员利用花粉管通道法将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因Cry导入某玉米品系，通过室内和田间试验证实其对玉米螟具有较高的抗虫性，下列叙述不合理的是（　　）A．花粉管通道法无需使用载体就能直接将Cry基因导入受体细胞B．从室内鉴定抗虫到田间调查抗虫性的做法，符合风险防控的要求C．为防止转基因玉米Cry基因传播到野生近缘种，需将其隔离种植D．长期大面积单一种植抗虫玉米，玉米螟种群中抗性基因频率会上升
花粉管通道法在导入Cry基因前，需先将该基因克隆到载体中进行扩增和操作，再提取重组DNA直接导入受体细胞，因此需要载体
4．（2025·浙江·一模）科学家利用蛋白质工程研制出了赖脯胰岛素，与天然胰岛素相比，赖脯胰岛素经皮下注射后易吸收、起效快。下列相关叙述错误的是（　　）A．赖脯胰岛素在受体工程菌的核糖体上合成B．通过蛋白质工程获取赖脯胰岛素的过程是④⑤⑥①②③C．必须先合成天然胰岛素基因，再定点突变获得赖脯胰岛素基因D．物质a是mRNA，物质b是多肽链，二者序列对应关系由密码子决定
利用蛋白质工程获得新蛋白基因，也可直接合成带有突变位点的DNA序列
关联特色情境，提升学科素养
1. 人工智能辅助基因编辑工具的精准设计突破基因编辑技术的迭代升级始终是基因工程的核心热点，而人工智能与CRISPR-Cas系统的结合实现了突破性进展。2025年7月，《自然》杂志发表研究成果，科研团队通过大规模挖掘26太碱基的组装基因组和宏基因组，构建了包含100多万个CRISPR操纵子的数据集，利用大型语言模型训练设计出可编程基因编辑器，成功实现人类基因组的精准编辑。这类人工智能设计的编辑器，部分活性和特异性优于传统的SpCas9，且与天然序列差异达400个突变位点，其中Open CRISPR-1编辑器还可兼容碱基编辑，为基因编辑工具的定制化开发提供了全新路径，也打破了天然CRISPR系统的进化限制。2. 个性化基因编辑治疗的临床里程碑突破2024-2025年，基因治疗从罕见病向常见病跨越，个性化基因编辑治疗实现历史性突破。2025年5月，美国费城儿童医院与宾夕法尼亚大学医学团队，成功为一名6个月大的CPS1基因突变婴儿实施全球首例个性化CRISPR碱基编辑治疗，通过脂质纳米颗粒将定制编辑工具递送至肝脏，纠正缺陷酶，治疗后患者无严重副作用，蛋白质饮食耐受性显著增强，氮清除药物需求减少。此外，2024年底至2025年，多项针对性基因编辑疗法取得临床突破，包括治疗镰状细胞病的BEAM-101、治疗输血依赖性β地中海贫血的CS-101，均展现出优异的治疗效果，推动基因治疗从实验室走向规模化临床应用。
一、情境拓展·科技前沿（2024-2025热点聚焦）
3. 新型基因编辑策略与递送系统的创新升级2024-2025年间，基因编辑策略和递送技术的创新的突破，解决了传统技术的核心瓶颈。2025年11月，Brad研究所提出PERT新型基因编辑策略，利用先导编辑技术将人体内冗余的天然tRNA改造成抑制性tRNA，有望用单一治疗方案纠正多种无义突变引发的遗传病。同时，递送系统持续优化，优化后的脂质纳米颗粒配方可显著提高核糖核蛋白（RNPs）的递送效率，细胞穿透肽的应用进一步增强了递送效果，而“AAVLINK”策略则实现了超过11kb长致病基因的分段递送与精准重组，为肌肉疾病、癫痫等疾病的治疗提供了新方案。4. 基因编辑与CAR-T细胞治疗的融合革新作为基因工程与细胞治疗的交叉热点，CAR-T细胞治疗在2024-2025年借助基因编辑技术实现效能升级。传统CAR-T治疗存在T细胞耗竭、持久性不足、细胞因子毒性等问题，而CRISPR-Cas9、碱基编辑等技术的应用，可精准优化CAR-T细胞的基因序列，增强其肿瘤杀伤能力、降低毒性并延长体内存活时间。此外，基因编辑技术还助力解决CAR-T治疗的制造难题，推动自体CAR-T向通用型CAR-T发展，降低治疗成本，同时拓展其在实体肿瘤治疗中的应用，为癌症免疫治疗提供了更高效、更安全的新路径。
5. 基因治疗监管批准与产业化进程加速2024-2025年，全球基因治疗领域监管批准迎来爆发期，标志着技术进入成熟商业化阶段。2025年11月，美国FDA批准诺华Itvisma基因替代疗法，用于治疗2岁及以上SMN1基因突变的脊髓性肌萎缩症患者，成为首个覆盖该广泛患者群体的疗法；同年12月，FDA批准针对Wisktt-Aldrich综合征的Waskyra基因疗法，填补了该疾病的治疗空白。中国在基因治疗领域同样表现突出，2024年有23家公司的基因疗法获得IND批准，复旦大学团队实现全球首个耳聋基因治疗临床试验成功，正序生物完成全球首个APOC3基因编辑治疗高血脂的临床案例，推动我国基因治疗产业跻身世界前沿。
1．（结合教材）分析并回答下列问题：(1)基因工程中，构建基因表达载体时，将目的基因插入Ti质粒的T-DNA区域的原因是?(2)PCR技术扩增目的基因时，需要加入引物的原因是?(3)基因工程中，目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法，而导入动物细胞常用显微注射法，原因是?
二、新情境探究、结合教材分析以及长句作答
Ti质粒的T-DNA可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体DNA上，从而使目的基因稳定存在并表达
DNA聚合酶不能从头合成DNA链，只能从引物的3'端开始延伸DNA链，引物可与模板DNA结合，为DNA聚合酶提供延伸起点
农杆菌易感染植物细胞，可通过其Ti质粒的T-DNA将目的基因转移到植物细胞中；动物细胞结构复杂，显微注射法可精准将目的基因导入动物细胞的细胞核中，提高导入效率。
2．（长句作答类）基因编辑技术（CRISPR/Cas9）可精准编辑生物体内的特定基因，其核心组件包括Cas9核酸酶和向导RNA（gRNA），gRNA可特异性结合靶基因序列，引导Cas9切割靶基因，进而实现基因的敲除、插入等修饰。回答下列问题：(1)Cas9核酸酶的作用是切割靶基因的特定脱氧核苷酸序列（切割磷酸二酯键），判断的依据是?(2)gRNA能特异性结合靶基因的原因是___________________________________________，这一过程遵循_____________________________________。
CRISPR/Cas9技术可精准编辑特定基因，gRNA特异性结合靶基因后，Cas9可对靶基因进行切割，从而实现基因修饰
gRNA的核苷酸序列与靶基因的特定序列互补配对
碱基互补配对原则（A与U配对、G与C配对）
3、（长句作答）分析并回答下列问题：(1)基因工程中，目的基因成功导入受体细胞后，还需要进行目的基因的检测与鉴定，其中检测目的基因是否转录出mRNA的方法是?(2)基因表达载体中，启动子的作用是?(3)将目的基因导入微生物细胞时，常用Ca²⁺处理微生物细胞，使细胞处于感受态，其目的是?若目的基因导入后未表达，可能的原因是?
分子杂交技术，用标记的目的基因作探针，与受体细胞的mRNA进行杂交，若出现杂交带，则说明目的基因已转录出mRNA
RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动目的基因转录出mRNA
使微生物细胞膜的通透性改变，便于目的基因进入细胞
启动子序列异常，导致RNA聚合酶无法结合，或目的基因插入位置不当，或受体细胞内缺少目的基因表达所需的酶、原料等。
4．（新情境）科学家利用基因工程技术培育抗虫转基因棉花，其核心过程是将Bt毒蛋白基因（可控制合成Bt毒蛋白，对棉铃虫等害虫有毒性）导入棉花细胞，培育出抗虫棉品系。研究人员对转基因棉花和普通棉花的抗虫性进行检测，结果如下表所示（虫食率越低，抗虫性越强）：回答下列问题：(1)构建含Bt毒蛋白基因的基因表达载体时，除了目的基因和Ti质粒外，还需要加入的组件有 。
启动子、终止子、标记基因
(2)转基因棉花品系A的抗虫性强于品系B的原因是 ?(3)若要进一步提高转基因棉花的抗虫性，可采取的措施有?（答出两点）
品系A的Bt毒蛋白含量高于品系B，Bt毒蛋白对棉铃虫有毒性，含量越高，对害虫的抑制作用越强，虫食率越低，抗虫性越强。。
优化基因表达载体，提高Bt毒蛋白基因的表达水平；导入多种抗虫基因，增强抗虫范围和效果。
1．（2025·陕西西安·一模）科研人员将增强型启动子连接在水稻高产基因(Os)基因上游，构建超表达载体，并将其导入水稻中，研究该基因表达对产量的影响。下图为利用农杆菌转化法获得Os基因超表达水稻的过程。(1)农杆菌转化愈伤组织时，用含________的选择培养基筛选，通过组织培养技术获得Os基因过表达水稻。过程Ⅰ用的酶为_____________________，该过程需要的原料为___________________。(2)利用双酶切法将Os基因插入质粒，若在基因上游加入SpeI的酶切位点，下游应加入___________的酶切位点。扩增该基因所需的引物F和R应选用下列引物组合为___________。①5′-…CTTGGATGAT-3′    ②5′-…TAAGTTGTCT-3′③5′-…ATTCAACAGA-3′   ④5′-…TCTGTTGAAT-3′
潮霉素 逆转录酶(或反转录酶) 四种脱氧核苷酸
EcRI ①④
1．(3)科研人员将Os基因过表达水稻(①组)、OS基因敲除水稻(②组)以及野生型(③组)三组水稻进行一系列实验，定期测量相关数据，记录于下表：为研究Os基因对N吸收、运输和利用率的影响，将三组幼苗进行低氮培养。实验前三组幼苗均需进行氮饥饿处理，其目的是______________________________________________________________。据表中数据，Os基因表达量与植株N的吸收、运输呈___________(填“正”或“负”)相关，这些N为水稻的暗反应所需__________________________________(至少填三种物质)的合成提供原料。
为了消耗水稻自身的氮元素，排除对实验结果的干扰
正 NADPH、ATP、酶(合理即可)
注：“+”的数目代表程度或数量变化。
2．（2025·江苏南京·二模）中国“干扰素之父”侯云德院士于1982年成功研发我国第一个基因工程创新药物——干扰素。干扰素是一种白细胞产生的具有抗病毒能力的分泌蛋白。研究人员从感染病毒的鸡白细胞提取全基因组mRNA，利用PCR技术获取鸡干扰素基因，图1表示鸡干扰素蛋白有关的基因片段，序号①~④表示引物。然后将获取的目的基因连接在大肠杆菌的pET32a质粒（5900bp，注：bp表示碱基对）上，图2表示pET32a质粒及其上部分限制酶切割位点。最后将重组质粒导入大肠杆菌后获得成熟干扰素。(1)利用鸡白细胞总mRNA获得干扰素蛋白基因，需要在_________酶的作用下先合cDNA。选择cDNA而不是提取DNA后进行PCR获取干扰素蛋白基因的原因是 _________。图1表示成熟干扰素蛋白序列及其前端的信号肽序列，信号肽是分泌蛋白合成过程中开始合成的一段肽链，其在干扰素合成中的作用是________。
受体细胞大肠杆菌无法对转录产生的mRNA进行加工（大肠杆菌无法切除内含子的转录序列）
引导游离的核糖体转移到内质网上继续肽链的合成
2．(2)为了获取不含信号肽序列的干扰素基因，在进行PCR扩增时需要用到的一对引物是_______，为了将目的基因准确连接到pET32a质粒上需要在目的基因的两端添加___________________限制酶的序列。PCR扩增过程除了引物，还需要的条件有_____________________________________________________________________________（答出2点）。(3)为了检测目的基因是否插入pET32a质粒，利用目的基因两端添加的限制酶切割质粒，然后对产物进行电泳，结果如图3，样品________最可能是插入了目的基因的重组质粒，判断的理由是______。
②④ EcRI、XhI
模板；4种游离的脱氧核苷酸（dNTP）；耐高温的DNA聚合酶；含Mg2+缓冲液
EcRⅠ、XhⅠ可以把重组质粒切成约500bp和5800bp的两个片段
2．(4)将重组pET32a质粒导入大肠杆菌的方法为____________________，检测大肠杆菌是否能成功表达干扰素蛋白的方法为____________________。天然的干扰素在体外保存相当困难，为了生产出耐储存干扰素，科学家可通过蛋白质工程对干扰素进行改造，具体流程是：从预期的蛋白质功能出发→______________________________→________________________→找到并改变对应的脱氧核苷酸序列或合成新的基因→使用工程菌获得耐储存的干扰素。
用Ca2+处理
抗原-抗体杂交
设计预期的蛋白质结构 推测应有的氨基酸序列