江西省九师联盟2024-2025学年高二下学期7月期末质量检测（B卷）生物试题（解析版）

这是一份江西省九师联盟2024-2025学年高二下学期7月期末质量检测（B卷）生物试题（解析版），共24页。试卷主要包含了本试卷分选择题和非选择题两部分，本卷命题范围等内容，欢迎下载使用。
考生注意：
1．本试卷分选择题和非选择题两部分。满分100分，考试时间75分钟。
2．答题前，考生务必用直径0.5毫米黑色墨水签字笔将密封线内项目填写清楚。
3．考生作答时，请将答案答在答题卡上。选择题每小题选出答案后，用2B铅笔把答题卡上对应题目的答案标号涂黑；非选择题请用直径0.5毫米黑色墨水签字笔在答题卡上各题的答题区域内作答，超出答题区域书写的答案无效，在试题卷、草稿纸上作答无效。
4．本卷命题范围：人教版选择性必修2+选择性必修3。
一、选择题：本题共20小题，每小题2分，共40分。每小题只有一个选项符合题目要求。
1. “鸟鸣湖海·人悦自然”2025年“爱鸟周”宣传活动在钱塘大湾区湿地公园启幕。国家一级保护动物黑脸琵鹭属于迁徙生物，栖息于水塘、沼泽等区域。下列叙述错误的是（ ）
A. 导致该区域内黑脸琵鹭种群密度变化的主要因素是出生率、死亡率
B. 栖息地的人为破坏会降低野生黑脸琵鹭种群的环境容纳量
C. 无人机可通过模拟物理信息和行为信息带领黑脸琵鹭飞行迁徙
D. 食物和天敌等因素对琵鹭种群数量的影响属于密度制约因素
【答案】A
【分析】在环境条件不受破坏的情况下，一定空间中所能维持的种群最大数量称为环境容纳量，又称K值。
【详解】A、黑脸琵鹭属于迁徙生物，其种群密度变化不仅受出生率和死亡率影响，也受迁入率和迁出率的影响，A错误；
B、环境容纳量（K值）由资源和空间等条件决定，栖息地破坏会减少资源，降低K值，B正确；
C、无人机可通过声音（物理信息）或模拟飞行行为（行为信息）引导迁徙，C正确；
D、食物和天敌对种群数量的影响随种群密度变化而改变，属于密度制约因素，D正确。
故选A。
2. 2025年5月22日是国际生物多样性日，今年的主题为“万物共生，和美永续”。下列关于生物多样性的叙述，错误的是（ ）
A. 森林具有强大的固碳功能，体现了生物多样性的间接价值
B. 生物多样性的丧失可能是因为某些物种的栖息地丧失或碎片化
C. 外来物种一枝黄花入侵可能对本地生物多样性产生严重的不良影响
D. 生物多样性是生物进化的结果，其形成过程就是新物种的形成过程
【答案】D
【分析】生物的多样性：生物圈内所有的植物、动物和微生物，它们所拥有的全部基因以及各种各样的生态系统，共同构成了生物多样性。生物多样性包括基因多样性、物种多样性和生态系统多样性。
【详解】A、森林的固碳功能属于生态系统调节气候的生态功能，属于生物多样性的间接价值，A正确；
B、栖息地丧失或碎片化会破坏物种的生存环境，导致生物多样性减少，B正确；
C、外来物种入侵可能通过竞争资源、破坏生态平衡等方式威胁本地物种，即外来物种一枝黄花入侵可能对本地生物多样性产生严重的不良影响，C正确；
D、生物多样性包括遗传多样性、物种多样性和生态系统多样性，其形成是长期自然选择的结果，而新物种形成仅体现了物种多样性，即生物多样性的形成不一定是形成了新物种，D错误。
故选D。
3. 研究人员在大针茅草原调查了不同放牧方式对啮齿动物多样性的影响，部分调查结果如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A. 啮齿动物活动能力强，可采用标记重捕法估算其种群密度
B. 放牧干扰地区啮齿动物的个体数量和丰富度均高于禁牧区
C. 草原黄鼠可能是连续放牧区和过度放牧区的优势种，它可能加快群落演替
D. 季节轮牧能加大啮齿动物之间的竞争，有利于控制啮齿动物的数量
【答案】B
【分析】调查种群密度常用样方法和标记重捕法，其中样方法适用于调查植物和活动能力弱、活动范围小的动物，而标记重捕法适用于调查活动能力强、活动范围大的动物。
【详解】A、啮齿动物活动能力强，活动范围广，可采用标记重捕法估算其种群密度，A正确；
B、根据实验结果，放牧干扰地区啮齿动物的总捕获率高于禁牧区，说明数量多，但是物种数仅有季节轮牧区出现长爪沙鼠，其他区域的物种数与牧区相同，B错误；
C、根据右图可知，连续放牧区和过度放牧区中草原黄鼠捕获量比例明显高于其它啮齿动物，因此可推测草原黄鼠可能是连续放牧区和过度放牧区的优势种，优势种对其它物种的影响较大，因此它可能加快群落演替，C正确；
D、季节轮牧区的总捕获率较低，说明啮齿动物数量少，啮齿动物种类多，且优势种的比例差距较小，说明能加大啮齿动物之间的竞争，有利于控制啮齿动物数量，D正确。
故选B。
4. 某农业生态系统的模式简图如图，农作物既能为人类提供食物，又能为家禽和家畜提供饲料。下列叙述正确的是（ ）
A. 图中含有3条捕食食物链，人处于第四营养级
B. 该模式实现了能量的多级利用且提高了能量的利用率
C. 农作物和食用菌通过光合作用固定的能量可流向消费者
D. 沼气池中有大量微生物，有利于物质和能量的循环利用
【答案】B
【分析】能量流经生态系统各个营养级时是逐级递减，而且流动是单向的、不是循环的，最终在环境中消失。
【详解】A、捕食食物链中只包含生产者和消费者，图中包含农作物→人，农作物→家禽、家畜→人，共两条食物链，人处于第二、第三营养级，A错误；
B、题图属于生态农业，农作物既能为人类提供食物，又能为家禽和家畜提供饲料，该模式实现了能量的多级利用且提高了能量的利用率，B正确；
C、食用菌属于异养生物，不能进行光合作用，C错误；
D、生态系统中的能量不能循环利用，D错误。
故选B。
5. 生态农业有多种实例，如：①果—草—畜（蜂）循环农业发展模式；②种植抗虫马铃薯；③鱼塘混合放养鲢鱼和青鱼；④蜜柚果园套种南瓜；⑤桑基鱼塘模式；⑥采用浮床工艺法治理水污染；⑦利用微生物改善化学污染的土壤条件；⑧利用昆虫信息素诱捕害虫。根据各自特点，下列匹配关系中，不合理的是（ ）
A. ①、③、⑤属于物质循环型
B. ②和⑧属于病虫害防治型
C. ①和④属于立体复合型
D. ⑥和⑦属于污染治理型
【答案】A
【分析】生态农业要求把发展粮食与多种经济作物生产，发展田种植与林、牧、副、渔业，发展大农业与第二、三产业结合起来，利用传统农业精华和现代科技成果，通过人工设计生态工程、协调发展与环境之间、资源利用与保护之间的矛盾，形成生态上与经济上两个良性循环，经济、生态、社会三大效益的统一。
【详解】A、①果—草—畜（蜂）模式通过物质循环利用（如果树落叶为草提供养分，草饲喂牲畜，粪便还田），⑤桑基鱼塘通过塘泥肥桑等实现物质循环，属于物质循环型；但③鱼塘混合放养鲢鱼和青鱼是依据不同鱼类的生态位分层养殖，属于立体复合型而非物质循环型，A错误；
B、②种植抗虫马铃薯（抗虫品种）和⑧信息素诱捕害虫（生物防治）均属于病虫害的生物防治方法，B正确；
C、①果—草—畜模式中果树、草、牲畜分层分布，④蜜柚果园套种南瓜为高低作物搭配，均属于立体复合型，C正确；
D、⑥浮床工艺利用植物吸收污染物，⑦微生物分解土壤污染物，均属于污染治理型，D正确。
故选A。
6. 传统发酵技术促进了中华民族特有饮食文化的形成，下列叙述错误的是（ ）
A. 酵母菌进行酒精发酵所需的酶存在于细胞质基质
B. 果酒、果醋的制作过程中发酵液的pH均会降低
C. 多种微生物参与生产腐乳，起主要作用的是毛霉
D. 传统发酵技术所利用的微生物都属于原核生物
【答案】D
【分析】温度是影响酵母菌和醋酸菌生长和发酵的重要因素。酿酒酵母的最适生长温度约为28℃。因此需要将温度控制在其最适温度范围内。而醋酸菌是嗜温菌，最适生长温度为30～35℃，因此要将温度控制在30～35℃。
【详解】A、酵母菌无氧呼吸产生酒精，相关酶存在于细胞质基质中，A正确；
B、果酒发酵中酵母菌无氧呼吸会产生CO₂，果醋发酵会生成醋酸，均导致pH下降，B正确；
C、腐乳的制作过程中，多种微生物参与了豆腐的发酵，如青霉、酵母、曲霉、毛霉等，其中起主要作用的是毛霉，C正确；
D、传统发酵技术中酵母菌用于果酒制作，酵母菌属于真核生物，D错误。
故选D。
7. 泡菜古称殖，是指为了利于长时间存放而经过发酵的蔬菜。家庭制作泡菜利用自然发酵（主要利用空气中的乳酸菌），随着泡菜制作规模增大，开始利用纯种菌种发酵。如图为自然发酵和纯种发酵时随着发酵天数的增加，泡菜（原料为白菜）中亚硝酸盐含量的变化情况。下列叙述正确的是（ ）
A. 乳酸菌中无细胞核，只能通过无丝分裂的方式增殖
B. 发酵过程亚硝酸盐含量仅与发酵时间有关，与其他因素无关
C. 家庭制作泡菜过程中，泡菜坛内表层白色菌膜主要由乳酸菌形成
D. 与家庭制作泡菜相比，用纯种发酵制作泡菜能够缩短发酵时间
【答案】D
【分析】泡菜的制作原理主要是乳酸菌在无氧条件下将蔬菜中的糖类分解为乳酸，使泡菜的pH降低（呈酸性）。
【详解】A、乳酸菌是原核生物，没有细胞核，无丝分裂是真核细胞的分裂方式，乳酸菌通过二分裂的方式增殖，A错误；
B、发酵过程中亚硝酸盐含量不仅与发酵时间有关，还与温度、食盐用量等因素有关，B错误；
C、家庭制作泡菜过程中，泡菜坛内表层白色菌膜主要是由酵母菌等形成的，而不是乳酸菌，乳酸菌是厌氧菌，一般分布在坛内发酵液中，C错误；
D、与家庭制作泡菜（自然发酵）相比，纯种发酵时菌种纯度高、活性强，能够缩短发酵时间，D正确。
故选D。
8. 中国载人航天工程空间应用系统将通过神舟二十号载人飞船，把斑马鱼、涡虫、链霉菌（细菌）这3种生物样品及其实验单元送至中国空间站，开展空间生命科学实验。下列有关实验室内培养链霉菌的叙述，错误的是（ ）
A. 培养基中一般含有碳源、氮源、水和无机盐等营养物质
B. 制备的链霉菌培养基，可用紫外线照射进行灭菌
C. 纯培养的一般步骤是配制培养基、灭菌、倒平板、接种、分离和培养
D. 倒好的平板冷凝后应倒置以减少水分的蒸发、防止培养基受到污染
【答案】B
【分析】获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染。无菌技术应围绕着如何避免杂菌的污染展开，主要包括消毒和灭菌。
【详解】A、培养基中必须含有碳源、氮源、水和无机盐等营养物质，以满足微生物的生长需求，A正确；
B、紫外线灭菌适用于物体表面或空气消毒，而培养基灭菌需采用高压蒸汽灭菌法，因紫外线无法穿透培养基内部，B错误；
C、纯培养的正确步骤为配制培养基→灭菌→倒平板→接种→分离（如划线法）→培养，C正确；
D、倒置平板可避免冷凝水污染培养基，同时减少水分蒸发，D正确。
故选B。
9. 新型杀虫剂噻嗪酮类属于昆虫蜕皮抑制剂。通过抑制壳多糖合成和干扰新陈代谢，使害虫不能正常蜕皮和变态而逐渐死亡，具有高活性、高选择性、长残效期的特点，在杀死昆虫的同时也能造成环境污染，生物防治是重要的改善方法之一。如图为筛选高效分解噻嗪酮（MM-1）菌株的过程。下列叙述错误的是（ ）

A. 研究人员可从常年生产噻嗪酮的工厂排污口附近采集土样
B. 过程a为扩大培养，目的是增加分解噻嗪酮菌株的数量
C. 用接种环将0．2mL稀释液均匀涂布在培养基表面
D. LB培养基中应含有琼脂，根据菌落特性筛选相关菌种
【答案】C
【分析】分析题意可知，富含MM-1的环境中MM-1降解菌较多，筛选MM-1降解菌时用MM-1作为唯一碳源的选择培养基中，MM-1降解菌能够很好地生长，其他微生物则不能生长。
【详解】A、生物对环境具有适应性，在常年生产噻嗪酮的工厂排污口附近土样中噻嗪酮含量高，容易筛选得到MM-1降解菌，因此研究人员可从常年生产噻嗪酮的工厂排污口附近采集土样，A正确；
B、过程a为扩大培养，通过含MM-1的选择培养基的培养，可增加分解噻嗪酮菌株的数量，B正确；
C、应用微量移液器将0.2mL稀释液滴到培养基上，在用涂布器将其涂布均匀，C错误；
D、用于筛选并分离菌体的LB培养基为固体培养基，培养基中应含有琼脂，不同菌体形成的菌落特征不同，因此可根据菌落特性筛选相关菌种，D正确。
故选C。
10. 植物组织培养技术的运用与推广，可控性高，可高效完成繁殖过程，极大缩短培育时间，加快枸杞的规模化生产。下列叙述正确的是（ ）
A. 通过愈伤组织再生出多个完整植株的过程属于有性繁殖
B. 对枸杞茎段进行消毒后，将外植体形态学上端插入培养基
C. 在生长素与细胞分裂素比值高的培养基中通常先分化出芽
D. 用射线或化学物质处理愈伤组织更易获得突变体植株
【答案】D
【分析】离体的植物组织或细胞，在培养一段时间后，会通过细胞分裂形成愈伤组织。愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为植物细胞的脱分化。脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫做再分化。再分化形成的试管苗，移栽到地里，可以发育成完整的植株体。
【详解】A、因未经过两性生殖细胞结合，直接由体细胞发育为个体，故通过愈伤组织再生植株属于无性繁殖，A错误；
B、外植体消毒后应将其形态学下端（如茎段的近基部）插入培养基，以利于吸收营养，以及生长素极性运输到下端促进下端生根，B错误；
C、生长素与细胞分裂素比值高时促进根分化，比值低时促进芽分化，故该条件下应先分化出根，C错误；
D、愈伤组织细胞分裂活跃，DNA复制时更易受诱变因素影响，导致基因突变，因此处理愈伤组织更易获得突变体，D正确。
故选D。
11. 稀有人参皂苷是原型人参皂苷的代谢产物，活性更高，更容易被人体吸收利用，已经被证明具有抗肿瘤、抗炎和增强免疫力的作用。科研人员利用人参茎尖进行育苗和提取稀有人参皂苷，过程如图所示，下列叙述正确的是（ ）

A. 人参皂苷和蛋白质都是人参生长和生存所必需的初生代谢物
B. 过程①为脱分化过程，植物激素会诱导细胞基因的选择性表达
C. 过程②为再分化过程，该过程可能会发生基因突变或基因重组
D. 工厂化细胞培养提高了单个人参细胞中稀有人参皂苷的含量
【答案】B
【分析】植物组织培养的原理是植物细胞具有全能性，其过程为：离体的植物组织，器官或细胞经过脱分化过程形成愈伤组织（高度液泡化，无定形状态薄壁细胞组成的排列疏松、无规则的组织），愈伤组织经过再分化过程形成胚状体，进一步发育成为植株。
【详解】A、人参皂苷属于次级代谢产物，但不是人参基本生命活动所必需，A错误；
B、过程①为脱分化，不需要光照，植物激素会诱导细胞发生基因的选择性表达，B正确；
C、过程②为再分化过程，该过程涉及有丝分裂，可能会发生基因突变，而基因重组发生在减数分裂过程中，因此过程②不涉及基因重组，C错误；
D、工厂化细胞培养提高了细胞数量，并未提高单个人参细胞中稀有人参皂苷的含量，D错误。
故选B。
12. 肉牛人工授精是现代畜牧业中一项重要的繁殖技术，能够明显提高繁殖效率、优化遗传品质。下列叙述正确的是（ ）
A. 为获取大量的卵母细胞，可在饲料中添加一定量的促性腺激素
B. 采集到的精子需在含ATP的培养液中进行获能处理才可受精
C. 人工授精获得的早期胚胎在卵裂过程中有机物的总量不断增加
D. 人工授精时精子入卵后，卵细胞膜会发生反应阻止其他精子入卵
【答案】D
【分析】胚胎工程是指对生殖细胞、受精卵或早期胚胎细胞进行多种显微操作和处理，然后将获得的胚胎移植到雌性动物体内生产后代，以满足人类的各种需求。胚胎工程技术包括体外受精、胚胎移植和胚胎分割等。
【详解】A、促性腺激素为蛋白质类激素，若口服会被消化酶分解而失效，需通过注射方式使用，A错误；
B、精子获能是指获得受精的能力，不是获得ATP，B错误；
C、卵裂期胚胎在透明带内发育，营养来自卵母细胞储存的有机物，细胞呼吸消耗导致有机物总量减少，C错误；
D、精子入卵后，卵细胞膜立即发生生理反应（如卵细胞膜反应），阻止其他精子进入，D正确。
故选D。
13. 家畜性别控制在胚胎工程的应用上具有重要意义。性别控制的主要思路有对精子性别控制和胚胎性别鉴定。下列关于家畜性别控制思路的叙述，不合理的是（ ）
A. 根据X染色体与Y染色体DNA含量的差异分离X精子和Y精子
B. 根据X精子与Y精子细胞表面抗原的差异分离X精子和Y精子
C. 利用X染色体上特异性序列的探针和PCR扩增技术检测雌性胚胎
D. 利用能够特异性识别Y染色体特定核酸序列的探针检测雄性胚胎
【答案】C
【分析】人类的性别由性染色体决定，女性的一对性染色体是同型的，用XX表示；男性的一对性染色体是异型的，用XY表示。人类的X染色体和Y染色体，无论大小还是携带的基因种类和数量都有差别。X染色体携带着许多个基因，Y染色体只有X染色体大小的1/5左右，携带的基因比较少。所以许多位于X染色体上的基因，在Y染色体上没有相应的等位基因。
【详解】A、X染色体比Y染色体大，DNA含量更高，可通过流式细胞仪分离X和Y精子。此方法合理，A不符合题意；
B、X和Y精子的表面抗原有差异，可根据表面抗原的差异分离X精子和Y精子，此方法合理，B不符合题意；
C、雌性胚胎（XX）和雄性胚胎（XY）均含X染色体，仅用X探针无法区分二者，此法不合理，C符合题意；
D、Y染色体含雄性特异性序列（如SRY基因），探针可特异性识别Y序列，从而检测雄性胚胎，此方法合理，D不符合题意。
故选C。
14. 下列关于动物细胞工程和胚胎工程的叙述，正确的是（ ）
A. 传代培养得到的细胞与接种的细胞的DNA不一定相同
B. 培养液中添加抗生素可实现动物细胞培养的无菌和无毒条件
C. 在胚胎移植前，可取内细胞团细胞进行DNA分析，鉴定性别
D. 核移植前，常用显微操作法去除由核膜包被的卵母细胞的细胞核
【答案】A
【详解】（1）由于人们对动物细胞所需的营养物质尚未全部研究清楚，因此在使用合成培养基时，通常需要加入血清等一些天然成分；（2）减数分裂Ⅱ中期卵母细胞中的“核”其实是纺锤体—染色体复合物，去核是指去除该复合物；（3）诱导植物细胞融合的方法有两大类，物理法包括电融合法、离心法等，化学法包括聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca2+—高pH融合法等；诱导动物融合常用的方法有PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法等。
【分析】A、传代培养过程中，细胞可能发生基因突变或染色体变异，导致DNA与接种细胞不同，尤其在癌细胞传代时更常见，A正确；
B、抗生素仅能抑制细菌，无法消除病毒及其他微生物，且无毒条件还需定期更换培养液以清除代谢废物，B错误；
C、胚胎移植前性别鉴定应取滋养层细胞，避免损伤内细胞团（发育为胎儿），C错误；
D、核移植使用的卵母细胞通常处于MⅡ期，此时细胞核已分解，需去除的是第一极体或细胞质中的遗传物质，而非核膜包被的细胞核，D错误。
故选A。
15. 顾方舟团队在1982年成功研制出“脊灰”病毒单克隆抗体检测试剂盒。2000年7月，世卫组织确认中国阻断了本土脊髓灰质炎病毒的传播，实现了无脊髓灰质炎的目标。下列叙述正确的是（ ）
A. 试剂盒中的抗体需定期更换，因为单克隆抗体识别位点单一、易失效
B. 制备的相关杂交瘤细胞在培养过程中会发生接触抑制而停止分裂
C. 制备杂交瘤细胞和植物体细胞杂交过程都涉及了细胞膜的结构特性
D. 制备的单克隆抗体通过识别“脊灰”病毒RNA序列实现精准检测
【答案】C
【分析】与血清抗体相比，单克隆抗体具有特异性强、产量高和灵敏度高等特点。
【详解】A、单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高的特点，其化学性质稳定，不易失效，因此无需定期更换，A错误；
B、杂交瘤细胞由浆细胞与骨髓瘤细胞融合形成，具有无限增殖的特性，不会因接触抑制而停止分裂，B错误；
C、制备杂交瘤细胞（动物细胞融合）和植物体细胞杂交均依赖细胞膜的流动性（结构特性），C正确；
D、单克隆抗体识别是病毒表面的抗原蛋白，而非直接识别病毒内部的RNA。病毒RNA需通过裂解病毒释放后才能被检测，D错误。
故选C。
16. 下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验和电泳过程的叙述，正确的是（ ）
A. 猪的肝脏细胞或香蕉不可以作为DNA粗提取的实验材料
B. 将白色丝状物直接加入二苯胺试剂后，需进行加热观察颜色变化
C. 凝胶载样缓冲液中加入的指示剂能与DNA结合便于紫外灯下观察
D. DNA分子在凝胶中的迁移速率与DNA分子的大小和构象等都有关
【答案】D
【详解】DNA粗提取的原理主要基于DNA与其他物质在物理和化学性质上的差异，通过一系列处理将DNA从细胞中分离出来。DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，在0.14ml/L的NaCl溶液中溶解度最低，而蛋白质等杂质在此浓度下溶解度较高。DNA不溶于酒精（尤其是体积分数为95%的冷酒精），而蛋白质等杂质可溶于酒精。因此，将处理后的DNA溶液加入冷酒精，可使DNA析出并沉淀，进一步纯化DNA。
【分析】A、猪的肝脏细胞含有细胞核，DNA含量较高，但可能因含较多DNA酶导致提取困难；香蕉富含DNA且可通过研磨破碎细胞壁，可作为实验材料。因此“不可以作为”表述错误，A错误；
B、DNA鉴定需在沸水浴条件下与二苯胺反应显蓝色，但白色丝状物需先溶解于2ml/L的NaCl溶液后再加试剂。直接加入未溶解的DNA无法充分反应，B错误；
C、凝胶载样缓冲液中的指示剂（如溴酚蓝）用于指示电泳进程，而非与DNA结合；与DNA结合显色的通常是预先加入凝胶的荧光染料（如EB），C错误；
D、DNA在凝胶中的迁移速率与分子大小（小分子迁移快）和构象（如超螺旋结构迁移更快）均相关，D正确。
故选D。
17. 在基因工程中，科学家需选择合适的限制酶切割质粒和目的基因以构建重组载体。下列叙述正确的是（ ）
A. 限制酶主要从原核生物中分离获得，可识别DNA特定的核糖核苷酸序列
B. 限制酶的作用效率与识别位点数量呈正相关，因此需选择识别位点多的限制酶
C. 若质粒和目的基因选用不同的限制酶处理，也可能通过DNA连接酶实现拼接
D. 限制酶的活性受温度影响，因此需在低温条件下（如4℃）进行切割反应
【答案】C
【分析】基因工程的工具：（1）限制酶：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。（2）DNA连接酶：连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键。（3）运载体：常用的运载体：质粒、噬菌体、动植物病毒。
【详解】A、限制酶主要来源于原核生物，但其识别的是DNA特定的脱氧核糖核苷酸序列，A错误；
B、限制酶的作用效率与酶浓度、反应条件等有关，识别位点过多可能导致质粒被多次切割，破坏结构，因此需选择仅切割一次的酶，而非识别位点多的酶，B错误；
C、若不同限制酶切割质粒和目的基因后产生互补的黏性末端（如相同黏性末端或平末端），DNA连接酶仍可实现拼接，C正确；
D、限制酶的活性受温度影响，在低温条件下（如4℃），限制酶的活性会降低，影响限制酶的功能，不利于切割反应，D错误。
故选C。
18. 白僵菌是一种真菌，能寄生到松毛虫等农业害虫体内致其死亡，但对环境和温血动物安全无害，被广泛用于害虫防治。由苏云金芽孢杆菌产生的Bt毒蛋白可以使多种害虫死亡。某研究小组尝试使用农杆菌转化法，将Bt基因转入白僵菌中以加强白僵菌对害虫的防治效果。实验使用的Bt基因与Ti质粒如下图。下列叙述正确的是（ ）
A. 为构建基因表达载体应用BamHI和NheI切割Bt基因和Ti质粒
B. 采用转基因白僵菌防治农业害虫对环境的污染较小，属于化学防治
C. 培养含重组质粒的白僵菌时，培养基上发绿色荧光的菌落即为目的菌
D. 除了对转基因白僵菌进行分子水平的检测外，还应对其进行抗虫实验
【答案】D
【分析】基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。（4）目的基因的检测与鉴定。
【详解】A、由图可知，需将Bt基因整合到T-DNA中，且不能破坏Bt基因，因此构建基因表达载体应使用限制酶BamH I，切割 Bt基因和 Ti质粒，再将二者进行连接，若用BamHI和NheI切割Ti质粒，会导致T-DNA中终止子丢失，A错误；
B、采用转基因白僵菌防治农业害虫对环境的污染较小，属于生物防治，B错误；
C、构建基因表达载体时，用BamH I切割质粒时会破坏绿色荧光蛋白基因，因此含重组质粒的白僵菌中不含绿色荧光蛋白基因，因此培养基上发绿色荧光的菌落不是导入重组DNA的目的菌，可能是导入空质粒的菌体，C错误；
D、除了对转基因白僵菌进行分子水平的检测外，还应对其进行抗虫实验，在个体水平上检测转基因生物是否被赋予了目的基因所控制的性状，D正确。
故选D。
19. 利用重叠延伸PCR技术可对基因进行定点突变，如图为相关过程，下列叙述错误的是（ ）
A. 为获得产物甲，过程②至少循环2次
B. 过程②和过程③不可以在同一体系中进行
C. 过程④中，杂交延伸无需添加引物
D. 若突变后基因扩增30轮，则消耗引物231个
【答案】D
【分析】PCR是聚合酶链式反应的缩写，是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。通过这一技术，可以获取大量的目的基因。PCR扩增反应需要两种引物、模板DNA、原料（4种脱氧核苷酸）、酶（耐高温的DNA聚合酶）。PCR反应过程是：变性→复性→延伸。
【详解】A、获得产物甲需要用引物1和2扩增，扩增一次时，引物1延伸的子链与亲代模板链等长，该DNA不符合要求，且该DNA经过第二次复制后得到的两个DNA也不符合要求，扩增一次时，引物2延伸的子链比亲代模板链短，该DNA不符合要求，但该DNA中引物2所在的子链在第二次复制后可形成产物甲，因此为获得产物甲，过程②至少循环2次，A正确；
B、过程②和过程③需要扩增的产物不同，且引物2和引物3存在互补的碱基，因此过程②和过程③不可以在同一体系中进行，B正确；
C、过程④中两条DNA链部分碱基互补，每条链都可以为另一条链的延伸提供模板，且每条链的3’端都可以向后延伸，因此杂交延伸无需添加引物，C正确；
D、DNA复制为半保留复制，每条新形成的子链中都含有引物，若突变后基因扩增30轮，则新形成的子链为230×2－2=231－2，D错误。
故选D。
20. 近年来，我国科学家利用CRISPR-Cas12f系统开发出微型基因编辑工具。相较于CRISPR-Cas9系统，该工具因体积小、递送效率高而备受关注，为基因治疗的临床应用提供了新利器。下列叙述正确的是（ ）
A. 推测CRISPR-Cas12f系统能识别特定的RNA序列并进行切割
B. 微型基因编辑工具因体积小易进入细胞核而提高基因编辑效率
C. 推测基因治疗对单基因遗传病的治疗效果显著低于多基因遗传病
D. CRISPR-Cas12f系统的开发标志着基因治疗已完全克服脱靶效应
【答案】B
【分析】CRISPR/Cas9系统基因编辑技术是利用该基因表达系统中的引导RNA能识别并结合特定的DNA序列，从而引导Cas9蛋白结合到相应位置并剪切DNA，最终实现对靶基因序列的编辑。
【详解】A、CRISPR-Cas系统通过引导RNA识别特定DNA序列，Cas蛋白切割DNA。Cas12f属于Cas家族，其作用对象应为DNA而非RNA，A错误；
B、微型基因编辑工具体积小，更易穿过细胞膜和核膜进入细胞核，从而提高基因编辑效率，B正确；
C、单基因遗传病由单一基因突变引起，基因治疗靶点明确，效果更显著；多基因遗传病涉及多个基因及环境因素，治疗难度大，C错误；
D、脱靶效应是基因编辑技术的普遍问题，CRISPR-Cas12f系统的开发可能降低但未完全克服脱靶效应，D错误。
故选B。
二、非选择题：本题共5小题，共60分。
21. 研究人员调查了草型湖泊部分生物之间的能量流动情况，包括三个营养级主要生物以及底栖动物的能量流动（单位：kJ·m-2·a-1），数据见下表。回答下列问题：
（1）草鱼主要摄食水草，鲫鱼主要摄食水草、浮游动物、底栖动物和植物碎屑等，两者分别属于生态系统的________、________（填成分）。
（2）底栖动物铜锈环棱螺、羽摇蚊等摄食有机碎屑、藻类和微生物，在一定程度上促进了水草的生长，其原因是_______。
（3）鲇鱼、翘嘴鲌等动物的生长能为_______，鲫鱼、草鱼、麦穗鱼等动物的排粪能为_______。
（4）若要调查鲇鱼的生态位，则可调查的指标有_________（答两点）。在湖泊放养空间生态位不同的鱼类，可充分利用群落的________。投放鱼类需考虑所养殖生物的环境容纳量、种间关系等因素，这样做遵循生态学的__________原理，其目的是_________。
【答案】（1）①. 消费者 ②. 消费者、分解者
（2）产生无机盐和CO2，有利于水草的光合作用
（3）①. 加快能量流动和物质循环 ②. 水草等水生植物提供养分
（4）①. 栖息地、食物、天敌以及与其他物种的相互作用 ②. 垂直结构 ③. 协调 ④. 强调系统内部各组成部分应和谐配合，以实现整体效益最大化
【分析】生态系统的组成成分：非生物的物质和能量、生产者、消费者、分解者。生产者在生物学分类上主要是各种绿色植物，也包括化能合成细菌与光合细菌，它们都是自养生物，植物与光合细菌利用太阳能进行光合作用合成有机物，化能合成细菌利用某些物质氧化还原反应释放的能量合成有机物，比如，硝化细菌通过将氨氧化为硝酸盐的方式利用化学能合成有机物。消费者指以动植物为食的异养生物，消费者的范围非常广，包括了几乎所有动物和部分微生物（主要有真细菌），它们通过捕食和寄生关系在生态系统中传递能量。分解者又称“还原者”它们是一类异养生物，以各种细菌（寄生的细菌属于消费者，腐生的细菌是分解者）和真菌为主，也包含屎壳郎、蚯蚓等腐生动物。
【解析】（1）水草为生产者，草鱼主要摄食水草，草鱼为初级消费者；鲫鱼主要摄食水草、浮游动物、底栖动物和植物碎屑等，鲫鱼属于消费者、分解者。
（2）底栖动物铜锈环棱螺、羽摇蚊等摄食有机碎屑、藻类和微生物，产生无机盐和CO2，有利于水草的光合作用，有利于其生长。鲫鱼、草鱼、麦穗鱼等水生动物的排泄物（粪便）能为 莲藕 等水生植物提供养分，其粪便中含有氮、磷、钾等元素，这些元素是植物生长所需的重要营养来源。 ‌
（3）鲇鱼、翘嘴鲌等动物的生长直接或间接利用植物所制造的现成有机物得到能量的生物，能加快能量流动和物质循环；鲫鱼、草鱼、麦穗鱼等水生动物的排泄物（粪便）能为 莲藕 等水生植物提供养分，其粪便中含有氮、磷、钾等元素，这些元素是植物生长所需的重要营养来源。 ‌
（4）生态位是指每个个体或种群在种群或群落中的时空位置及功能关系，动物的生态位研究需涵盖其栖息地(生活空间)、食物(营养来源)、天敌(生存威胁)，以及与其他物种的相互作用(如竞争或共生关系)。在湖泊放养空间生态位不同的鱼类，可充分利用群落的垂直结构，在不同的深度放养不同的鱼类。投放鱼类需考虑所养殖生物的环境容纳量、种间关系等因素，这样做遵循生态学的‌ 协调原理 ‌。生态工程中的协调原理强调系统内部各组成部分应和谐配合，以实现整体效益最大化。
22. 利用微生物将无机硒转化为单质硒的研究已开展多年，与无机硒相比，单质硒具有低毒性以及高生物利用率等优点，且这种生产单质硒的方式更加方便、高效和经济，具有十分广阔的应用前景，如利用短乳杆菌代谢无机硒，可用于制作富硒奶和泡菜。回答下列问题：
（1）短乳杆菌常分布于泡菜中，传统泡菜制作过程中用清水和食盐配制质量分数为5%～20%的盐水，将盐水煮沸、冷却待用的目的分别是________。若制作的泡菜“咸而不酸”，可能的原因是__________。
（2）进一步研究无机硒转为单质硒的过程中对短乳杆菌的影响，科研人员进行了相关探究。①将活化好的短乳杆菌以5%的接种量接种到25mL含有不同浓度Na2SeO3（0、2、5、10、15、20mml/L）的MRS液体培养基中，37℃、150r/min恒温摇床培养24h，此操作的目的是________。
②取上述菌液1mL，接种于平板上培养，待生长36～48h后进行平板计数，接种的方法为________；以Na2SeO3浓度（mml/L）为横坐标，细菌生物量的对数值（lgCFU/mL）为纵坐标，绘制短乳杆菌的生物量柱状图，结果如图所示，结果说明________。
③SYTO-9和PI结合法常用于检测菌体细胞膜的完整性。其原理是：荧光染料SYTO-9是一种核酸结合染料，它可以标记所有待检测菌体，荧光呈绿色；PI只可以标记细胞膜发生损伤的细胞，并且由于其与核酸亲和能力强于SYTO-9，所以可以将SYTO-9替换掉，荧光呈红色。上述检测结果显示：短乳杆菌未经Na2SeO3处理，24h后，激光共聚焦显微镜下的荧光呈_______，而经不同浓度Na2SeO3处理后的短乳杆菌，其镜下荧光出现红色且这种现象随着Na2SeO3浓度的增加而更加明显，说明菌体细胞膜受到损伤。
（3）综合“（2）”过程实验数据，无机硒转为单质硒过程中，短乳杆菌生物量下降的原因为_______。
【答案】（1）①. 除去盐水中的空气和杀菌、防止高温杀死乳酸菌等发酵菌种 ②. 盐的浓度过高，抑制了乳酸菌的发酵
（2）①. 探究不同浓度Na2SeO3对短乳杆菌生长的影响 ②. 稀释涂布平板法 ③. Na2SeO3对短乳杆菌的生长具有抑制作用，且浓度越高，抑制作用越强 ④. 绿色
（3）随着无机硒（Na2SeO3）浓度的增加，短乳杆菌细胞膜受到损伤，影响了细胞的正常代谢和生长繁殖，导致生物量下降
【分析】乳酸菌是原核生物，异养厌氧型微生物，无氧条件下将糖类等有机物转化为乳酸。
【解析】（1）将盐水煮沸的目的是除去盐水中的空气和杀菌，冷却的目的是防止高温杀死乳酸菌等发酵菌种。 若制作的泡菜“咸而不酸”，可能的原因是盐的浓度过高，抑制了乳酸菌的发酵 。因为盐浓度过高时，乳酸菌细胞会因失水而影响其代谢活动，从而不能正常发酵产生乳酸。
（2）①将活化好的短乳菌以5%的接种量接种到含有不同浓度Na2SeO3的MRS液体培养基中，37℃、150r/min恒温摇床培养24h，此操作的目的是探究不同浓度Na2SeO3对短乳杆菌生长的影响。通过设置不同浓度的Na2SeO3，观察短乳杆菌在这些条件下的生长情况。 -
②取上述菌液1mL接种于平板上培养后进行平板计数，常用的接种方法为稀释涂布平板法。由以Na2SeO3浓度为横坐标，细菌生物量的对数值为纵坐标绘制的柱状图可知，随着Na2SeO3浓度的升高，短乳杆菌的生物量逐渐下降，说明Na2SeO3对短乳杆菌的生长具有抑制作用，且浓度越高，抑制作用越强。
③短乳杆菌未经Na2SeO3处理时，细胞膜完整，PI不能进入细胞，只有SYTO - 9标记菌体，荧光呈绿色。
（3）综合（2）过程实验数据，无机硒转为单质硒过程中，短乳杆菌生物量下降的原因为随着无机硒（Na2SeO3）浓度的增加，短乳杆菌细胞膜受到损伤，影响了细胞的正常代谢和生长繁殖，导致生物量下降。因为细胞膜是细胞与外界环境进行物质交换、信息传递等重要生理活动的结构基础，细胞膜受损会严重影响细胞的功能。
23. 黑足雪貂，原产于北美洲。为了丰富黑足雪貂的基因库，科学家将冷冻保存的野生黑足雪貂体细胞细胞核移植到一只家养的雪貂提供的去核卵母细胞内，使细胞核和受体细胞融合，随后在体外培育，使其发育成胚胎。最后将发育的胚胎移植到一只雌性家养雪貂的子宫内，繁育出了8只黑脚雪貂。回答下列问题：
（1）采集到的家养雪貂的卵母细胞，应在体外培养到_______期，通过电融合使供体细胞的细胞核和受体细胞融合，并形成重构胚，用________（答一点）激活重构胚。一般动物体细胞核移植技术难度明显高于胚胎细胞核移植，原因是______。
（2）体外培育细胞时，通常将细胞置于通入______混合气体的CO2培养箱，CO2的主要作用是______。
（3）移植的胚胎应选择_________期，胚胎移植前，要对受体雌性家养雪貂进行_________处理。最终产下的黑足雪貂与家养雪貂不同，原因是_________。
（4）科研人员在胚胎培养过程中使用了去甲基化酶（Kdm4d）的mRNA，在确定其作用时，研究人员用正常培养液培养融合细胞得到A组实验数据，用正常培养液培养注入去甲基化酶（Kdm4d）mRNA的融合细胞得到B组实验数据。图中X为融合细胞发育成的胚胎数、Y为囊胚数、Z为内细胞团数。分析实验数据可知，Kdm4d的mRNA的作用是：_________。
【答案】（1）①. MⅡ ②. 电刺激、Ca2+载体、乙醇、蛋白酶合成抑制剂 ③. 体细胞分化程度高,恢复其全能性较难
（2）①. 95%空气和5%的CO2 ②. 维持培养液的pH
（3）①. 桑甚胚或囊胚 ②. 同期发情 ③. 最终产下的黑足雪貂的遗传物质主要来自野生黑足雪貂,家养雪貂只是提供细胞质遗传物质和作为受体孕育胚胎
（4）既能提高融合细胞发育成囊胚成功率，又能提高囊胚中内细胞团的形成率
【分析】（1）动物细胞核移植是用体细胞作为供体细胞进行的细胞核移植，将供核细胞注射到培养到减数第二次分裂中期的卵母细胞中，用人工的方法将其培养成胚胎，再将胚胎移植到雌性动物子宫内，就可以孕育出新的个体。
（2）动物细胞培养需要满足以下条件：①无菌、无毒的环境；②营养；③温度和pH；④气体环境：95%空气+5%CO2。
（3）胚胎移植是指将雌性动物体内（供体）的早期胚胎，或者通过体外受精及其他方式提到的胚胎，移植到同一种的其他雌性动物（受体）体内，使之继续发育成新个体的技术。
【解析】（1）动物体细胞核移植技术，需要将卵母细胞培养至MⅡ期，激活重构胚可以采用电刺激、Ca2+载体、乙醇、蛋白酶合成抑制剂，由于体细胞分化程度高,恢复其全能性较难，所以动物体细胞核移植技术难度明显高于胚胎细胞核移植。
（2）动物细胞培养需要将动物细胞置于95%空气和5%的CO2的CO2培养箱中培养，CO2的主要作用是维持培养液的pH。
（3）胚胎移植最好选择桑甚胚或囊胚，胚胎移植前，要对受体雌性家养雪貂进行同期发情处理，黑足雪貂的遗传物质（细胞核中遗传物质）主要来自野生黑足雪貂，而家养雪貂只是提供细胞质遗传物质和作为受体孕育胚胎，所以黑足雪貂与家养雪貂不同。
（4）分析图中数据，正常培养的A组与向融合细胞中注入去甲基化酶（Kd4d）的mRNA的融合细胞B组数据进行对照分析，后者的融合细胞发育成囊胚的成功率、囊胚中内细胞团的形成率都高于前者，说明Kd4d的mRNA的作用是既能提高融合细胞发育成囊胚的成功率、又能提高囊胚中内细胞团的形成率。
24. 肝细胞表面的低密度脂蛋白受体（LDLR）与含有载装胆固醇的蛋白结合，可介导胆固醇进入肝细胞降解，从而降低血浆中胆固醇的水平，而PCSK9与肝细胞的LDLR结合，会促进LDLR的降解。针对PCSK9的单克隆抗体可有效降低血浆的胆固醇水平，用于治疗原发性高胆固醇血症和心血管疾病预防。下图是生产该类单克隆抗体的流程图，回答下列问题：
（1）制备单克隆抗体的过程涉及的细胞工程技术有________。动物细胞体外培养时，培养基中除了添加葡萄糖、氨基酸等必要的营养成分外，还需要添加________。为防止有害代谢物的积累，可采用______的方法。
（2）每隔2周用PCSK9注射小鼠1次，共注射3次，其目的是________，最后一次免疫后的第3天，取脾脏内部分组织制成细胞悬液与骨髓瘤细胞诱导融合，过程①用化学方法诱导融合时常用的试剂为_________，能得到_________类两两融合的细胞。
（3）步骤②的细胞经_____培养基选出杂交瘤细胞，该培养基对_________生长具有抑制作用。单克隆抗体筛选中，将抗体与PCSK9进行杂交，其目的是________。
【答案】（1）①. 动物细胞培养技术、动物细胞融合技术 ②. 血清 ③. 定期更换培养液
（2）①. 加强免疫，刺激小鼠机体产生更多的B淋巴细胞； ②. 聚乙二醇（或PEG） ③. 3（或三）
（3）①. 特定的选择 ②. 未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞 ③. 筛选出能够特异性结合PCSK9的杂交瘤细胞
【分析】制备单克隆抗体的流程：①向小鼠体内注射特定的抗原，使其发生免疫，然后从小鼠脾内获得能产生特定抗体的B淋巴细胞。②将小鼠的骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合，用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞。③克隆化培养和抗体检测，从而筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞。④将最终筛选出的杂交瘤细胞在体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖，从细胞培养液或小鼠的腹水中提取单克隆抗体。
【解析】（1）制备单克隆抗体过程，需要利用动物细胞培养技术培养骨髓瘤细胞与免疫的B淋巴细胞等，而后利用动物细胞融合技术诱导骨髓瘤细胞与免疫的B淋巴细胞融合。由于人们对动物细胞所需的营养物质尚未全部研究清楚，因此在动物细胞体外培养时，培养基中除了添加葡萄糖、氨基酸等必要的营养成分外，还需要添加血淸等一些天然成分。为防止有害代谢物的积累对细胞自身造成危害，应定期更换培养液，以便清除代谢物。
（2）每隔2周用PCSK9注射小鼠1次，共注射3次，其目的是加强免疫，刺激小鼠机体产生更多的B淋巴细胞。诱导动物细胞融合的常用方法有电融合法、PEG融合法、灭活病毒诱导法等。取脾脏内部分组织制成细胞悬液与骨髓瘤细胞诱导融合，过程①用化学方法诱导融合时常用的试剂为PEG（聚乙二醇），能得到3类两两融合的细胞（B淋巴细胞与B淋巴细胞融合的、骨髓瘤细胞与骨髓瘤细胞融合的、骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合的）。
（3）步骤②是用特定的选择培养基筛选：该培养基对未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞的生长具有抑制作用，因此在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长。抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞分泌的抗体能与特定抗原结合，在单克隆抗体筛选中，将抗体与PCSK9进行杂交，其目的是筛选出能够特异性结合PCSK9的杂交瘤细胞。
25. 下图是转基因抗冻番茄的培育过程，其中图甲为北极鱼抗冻蛋白基因的扩增过程。已知ampr为氨苄青霉素抗性基因。回答下列问题：
（1）图甲A过程中，PCR仪的温度需调节至95℃，其目的是通过高温_______，使双链DNA解聚为单链。B过程中需要两种引物，引物是_______。
（2）PCR扩增DNA过程中需要耐高温的DNA聚合酶，该酶是在图甲的________过程起作用，其具体作用是________。
（3）分析图乙可知，对质粒和目的基因需要使用限制酶_______处理，目的是_______。
（4）为了检验目的基因是否重组成功，提取农杆菌中的质粒为模板，设计相应的引物进行PCR扩增，最好选择下图中的引物_________，再将扩增产物进行电泳。电泳时需将待测样品与载样缓冲液混合后加入加样孔，缓冲液中含有的溴酚蓝作为电泳指示剂，以防_______。
（5）为了鉴定转基因的番茄果实是否具有抗冻性状，除了进行分子水平检查，还需要进行个体水平的鉴定，请写出转基因番茄果实的个体水平鉴定的操作方法______。
【答案】（1）①. 破坏DNA分子中的氢键 ②. 一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸
（2）①. C ②. 将4种脱氧核苷酸加到引物的3'端，催化合成DNA子链
（3）①. Pst I和Sma I ②. 确保目的基因正确插入质粒中且防止质粒和目的基因自身环化和反向连接
（4）①. P1和P6 ②. 条带迁移出凝胶
（5）摘取等量的非转基因番茄果实和转基因的番茄果实，放置在相同的较低温度（0°以下)）环境中储存，检测并比较两组番茄果实的抗冻情况
【分析】基因工程需要四个步骤：目的基因的筛选与获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。
【解析】（1）PCR过程中，温度升高至95℃称为变性，目的是通过高温破坏DNA分子中的氢键，使DNA分子解开双链，引物是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸。
（2）耐高温的DNA聚合酶在延伸阶段发挥作用，对应图甲的C阶段，该酶将4种脱氧核苷酸加到引物的3'端，催化合成DNA子链。
（3）分析目的基因和质粒，不能使用Alu Ⅰ，否则将目的基因破坏，不能用Hind Ⅲ，因为目的基因没有该酶的识别序列，为了确保目的基因正确插入质粒中且防止质粒和目的基因自身环化和反向连接，通常采用双酶切法，所以应该用Pst I和 Sma I对质粒和目的基因处理。
（4）要检测目的基因是否与质粒重组成功，设计引物需要将目的基因两端的A、B序列考虑进去，所以A、B序列也需要扩增，因此选择引物P1和P6。缓冲液中含有的溴酚蓝作为电泳指示剂，当指示剂接近终点时，停止电泳，防止条带迁移出凝胶。
（5）为了鉴定转基因的番茄果实是否具有抗冻性状，从个体水平鉴定，可以摘取等量的非转基因番茄果实和转基因的番茄果实，放置在相同的较低温度（0°以下）环境中储存，检测并比较两组番茄果实的抗冻情况。
生物
摄入能
排粪能
呼吸代谢能
生长能
水草等
-
-
13323.2
2351.16
鲇鱼、翘嘴鲌等
1110.91
1023.55
83.2
-
鲫鱼、草鱼、麦穗鱼等
14107.46
-
745.4
299.56
铜锈环棱螺、羽摇蚊等
2119.55
1642.1
389.7
87.70