第38讲+微生物的培养技术和应用（复习课件）（天津专用）2026年高考生物一轮复习讲练测

这是一份第38讲+微生物的培养技术和应用（复习课件）（天津专用）2026年高考生物一轮复习讲练测，共24页。PPT课件主要包含了考情解码·考点定标，智能导览·极速定位，体系构建·思维领航，选择培养基的作用，稀释涂布平板法，科学实例，筛选原则，培养基的制备，土壤取样，样品的稀释等内容，欢迎下载使用。
考点一 微生物的培养技术知识点1 培养基的概念、用途、类型及营养构成知识点2 理清微生物纯培养的基本操作要求知识点3 运用表格，比较无菌技术的种类及区别知识点4 梳理酵母菌纯培养的操作步骤知识点5 接种和分离酵母菌的方法——平板划线法考向一：培养基配制的相关知识考向二：培养基的配制和无菌技术考向三：微生物的纯培养考向四：微生物的分离与培养
考点二　微生物的选择培养与计数 知识点1 阐明微生物的选择培养的原理 知识点2 阐述微生物的数量测定 知识点3 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的实验操作 知识点4 分解纤维素的微生物的分离 考向一：微生物的选择培养 考向二：稀释涂布平板法的相关知识
回归教材、教材命题点思考
01 考情解码·考点定标
02 体系构建·思维领航
选择培养基的概念及举例
稀释涂布平板法操作过程
间接计数法—稀释涂布平板法
直接计数—计数板计数法
紫外线消毒化学药物消毒巴氏消毒煮沸消毒
湿热灭菌干热灭菌灼烧灭菌
微生物的选择培养和计数
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
03 考点突破·考向探究
(1)培养基的概念、用途和类型
培养基↓(加入 ，如琼脂) 培养基
人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质
用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。
培养基的概念、用途、类型及营养构成
水、碳源、氮源、无机盐
NH4＋、NO3-、NH3等。
牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等。
CO2、CO32-、HCO3-。
葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等。
来源于动物，含有糖、维生素和有机氮等营养物质
Zn、Cu、Mn、C、M等
pH、 和氧气。如下表：
最常用的接种方法是______________和__________________。
接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体
(1)培养物、纯培养物、纯培养的概念
由一个微生物细胞繁殖而来的肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体。
配制培养基、________、接种、________和培养等。
由单一个体繁殖所获得的微生物群体
理清微生物纯培养的基本操作要求
【活动1】归纳总结以下概念
获得 的微生物培养物。
防止 污染。
运用表格，比较无菌技术的种类及区别
较为温和理化方法，杀死部分微生物(不包括芽孢、孢子)
强烈的理化方法，杀死所有微生物(包括芽孢、孢子)
100 ℃煮沸5～6 min
62～65 ℃煮30 min或80-90 ℃煮30s-1 min
擦拭等,如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源
紫外线照射30 min
接种的金属工具、接种时用的试管口或瓶口等
直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧
耐高温、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金属用具等
物品放入干热灭菌箱,160～170 ℃加热2～3h
培养基、培养皿等,生产和实验室常用
高压蒸汽灭菌锅内,100 kPa,温度121 ℃,15～30 min
接种室、接种箱，超净工作台
培养基灭菌: ;培养四灭菌: ;
湿热灭菌(高压蒸汽灭菌)法
去皮马铃薯200g,切成块
加水1000ml，加热煮沸至马铃薯软烂
用蒸馏水定容至1000ml
加入20g葡萄糖15-20g琼脂
待培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。
等待平板冷却凝固后才能进行
梳理酵母菌纯培养的操作步骤
①在未接种的培养基表面是否有菌落生长
②在接种酵母菌的培养基上可观察到单菌落。如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合酵母菌菌落的特点，
③如果观察到了不同形态的菌落，可能是接种的菌种不纯或者无菌操作不规范等原因引起的。
下图是平板划线操作的示意图，据图回答下列问题：
(1)平板划线操作的正确步骤是： 。
接种和分离酵母菌的方法——平板划线法
(2)在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？
杀死接种环上原有微生物。
杀死上次划线残留菌种,使下次划线菌种直接来自上次划线末端
杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。
⑤在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线以免接种环温度太高，杀死菌种。
①接种环只蘸一次菌液,在培养基不同位置连续划线多次
(3)平板划线法在划线时注意哪些问题？
④划线后,培养皿倒置培养
③每次划线前接种环进行灼烧灭菌，待冷却后再开始画线
(4)第二次及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？
划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
(5)接种结束后，为什么要将一个未接种的培养基和一个已接种的培养基放在一起培养，未接种的培养基表面如果有菌落生长，说明了什么？
培养未接种的培养基的作用是对照，未接种的培养基经过培养后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的；若有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底，或培养基被污染了，需要重新制备。
1．在培养霉菌时，需要将培养基调至中性或弱碱性。 (　　)2．获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染。 (　　)3．为了避免周围环境中微生物的污染，接种过程中许多操作都应在超净工作台并在酒精灯火焰附近进行。(　　)4．由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物的过程就是纯培养。(　　)
常见物品的消毒或灭菌方法
牛奶等不耐高温的液体等
用酒精擦拭操作者双手、用氯气消毒水源等
接种室、接种箱或超净工作台等
接种工具、其他金属用具等
考向一：培养基配制的相关知识
需要调节PH值才能保证微生物正常生长
1.（2025 ·天津市高三第一次模拟）培养细菌、真菌的过程一般包括配制培养基、高温灭菌冷却、接种、恒温培养等步骤。下列关于配制培养基的叙述，正确的是（ ）配制培养基是指将各种营养物质按照一定的比例混合在一起，制成适合细菌、真菌生长的营养基质，一般包括称量、溶解、灭菌等步骤B. 配制培养基只能用液体培养基，不能用固体培养基C. 培养基中不需要添加碳源，因为细菌、真菌都能自己合成碳源D. 配制培养基时不需要考虑pH值，细菌、真菌对pH值要求不高
2.(2024·广东深圳联考)某同学将5个手指尖在贴有“洗手前”标签的固体培养基上轻轻按一下，然后用肥皂将该手洗干净，再将5个手指尖在贴有“洗手后”标签的同种培养基上轻轻按一下。将这两个培养皿放入37 ℃恒温培养箱中培养24 h后，发现贴有“洗手后”标签的培养皿中菌落较少。下列相关叙述错误的是(　　)A.这个实验中需要进行灭菌处理的材料用具有培养皿和培养基等B.“将手指尖在培养基上轻轻按一下”相当于微生物培养中的接种C.从实验结果来看，洗手后的操作不会污染培养基D.培养基中的氮元素是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的
考向二：培养基的配制和无菌技术
不能说明不会污染培养基
3.(2024·东北育才中学模拟)下列关于“酵母菌的纯培养”实验的叙述，错误的是(　　)A.马铃薯捣烂后的滤液中含有酵母菌生长所需的多种营养成分B.接种环灭菌时，顶端的环和环后的部分柄均需通过火焰灼烧C.平板划线时，接种环应在固体培养基表面轻轻地连续划线D.完成平板划线后，应将平板立刻倒置培养以免污染培养基
考向三：微生物的纯培养
完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，再将平板倒置培养
4.（2025 ·天津市十二区重点学校高三下学期一模）物质 A 是一种难降解的有机物，细菌 X 体内存在可降解 A 的酶。科研人员欲从淤泥中分离得到细菌 X，相关叙述正确的是（ ）需对配制好的培养基进行湿热灭菌用于分离 X 的培养基蛋添加葡萄糖作为碳源细菌 X 的纯化与计数可使用平板划线法培养后某平板无菌落生长，则原因不可能是样品稀释倍数过大
考向四：微生物的分离与培养
只能以物质A为唯一的碳源
平板划线法不能用于计数
样品稀释倍数过大是可能的原因
允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基
酵母菌和霉菌(青霉素能杀死细菌、放线菌)
能消除石油污染的微生物
阐明微生物的选择培养的原理
微生物的选择培养与计数
②火焰旁将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中,充分摇匀,制成菌液。取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。
①铲取土壤，将样品装入纸袋中
③取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。
④将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。
⑤将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。
⑥用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。
各梯度分别涂布3个平板1个不涂布作空白对照
待涂布的菌液被培养基吸收
30～37℃恒温培养1～2d后进行计数
(1)显微镜直接计数法
利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计数一定容积的样品中微生物的数量
不能区分死菌与活菌而使计数结果偏大
当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
(2)间接计数法——活菌计数法(即稀释涂布平板法)
选择30-300个菌落的平板进行计数；每个稀释度至少取3个平板取其平均值；
③为什么用此种方法统计的菌落数目往往比活菌的实际数目低？
因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。
④某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为234个(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1 mL)，那么稀释倍数为106的试管中细菌的浓度是 个/mL，稀释倍数为10的锥形瓶中细菌的浓度为 个/mL，所以每克样品中的细菌数是 个。
C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数
V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)
①士壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶；
②配制以尿素为唯一氮源的培养基，能够在该培养基中生长的细菌就是能分解尿素的细菌
①制备选择培养基（尿素为唯一氮源）
②制备牛肉膏蛋白胨培养基
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的实验操作
酸碱度接近中性的潮湿土壤中,铲去表层，取距地表3～8cm的土壤层,将样品装入事先准备好的信封中。
取土样时用的铁铲和取样袋在使用前都需要灭菌。操作完成后，一定要洗手。
测细菌数：一般用104、105、106稀释液。测放线菌：一般用103、104、105稀释液。测真菌数：一般用102、103、104稀释液。
不同微生物在土壤中含量不同，分离不同的微生物采用不同的稀释度，以保证获得菌落数在30～300之间适于计数的平板。
在初次实验中，对于稀释的范围没有把握，怎样做才能保证从中选择出菌落数在30～300的平板进行计数？
选用稀释范围更大的稀释液进行平板培养
①每个浓度至少设置4个平板
选择培养基（平行重复）
②本实验使用的平板和试管较多，为了避免混淆，最好在使用前做好标记。 例：标记注明组别、培养日期和平板上培养样品的稀释度等。
接种：稀释液涂布平板法
不涂布稀释液的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基
判断选择培养基是否具有筛选作用
以验证培养基中是否含有杂菌
通用型培养基上所有菌种都生长
选择培养基上部分菌种才能生长
30-37℃的温度下培养1-2d。
根据菌落的特征区分微生物；
每隔24h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目
当菌落数目稳定时，选取菌落数在30～300的平板进行计数，同一稀释度下至少计数3个平板，求出平均值，并根据所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。设计如下表格记录并计数:
用稀释涂布平板法计数微生物时,为了使结果接近真实值,应设置三个或以上的平板,计算菌落平均数。另外,要求选择菌落数在30~300的平板进行计数。解题时应注意:（1）只得到1个菌落数在30~300的平板是错误的,原因是不符合实验的重复原则,易受到偶然因素的影响。（2）得到3个或3个以上菌落数在30~300的平板,也不一定正确。 ①不同平板间差异较大,如得到3个平板,菌落数分别为230、34、240,虽然菌落数均在“30~300”之间,但是“34”与“230”“240”差距太大,所以应找出原因,重新实验。 ②不同平板之间差异不大,是符合要求的,用其平均值作为估算的最终结果。 故“菌落数在30~300的平板”且无较大差异, 才能按照计算公式进行计算。
稀释涂布平板法计数微生物的注意事项
利用富含纤维素的选择培养基进行选择培养
以纤维素为唯一碳源，加入刚果红染料
红色环带直径与菌落直径比值越大，说明分解能力越强。
分解纤维素的微生物的分离
(1)利用稀释涂布平板法统计菌落数目时,统计的菌落数就是活菌的实际数(　)(2)统计菌落数目为保证准确，一般选择菌落数目最多的平板进行统计(　　)(3)利用稀释涂布平板法和平板划线法均可实现细菌的分离和计数(　　)(4)倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上 (　 )(5)分解尿素的细菌可以将尿素转化为氨，使得培养基的酸碱度降低 ( )
（6）菌液的稀释度足够高时，培养基表面会获得单菌落 (　　)（7）适于平板计数的菌落数范围为40～300。(　　)（8）稀释涂布平板法计数时，统计的菌落数往往比活菌的实际数目少。(　　)（9）稀释涂布平板法计数时，平板上的一个菌落就是一个细菌。 (　　)
1.(2024·广东佛山模拟)野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长，氨基酸营养缺陷型突变株无法合成某种氨基酸，只能在完全培养基上生长，下图为纯化某氨基酸营养缺陷型突变株的部分流程图，①②③④代表培养基，A、B、C表示操作步骤，D、E为菌落。下列叙述错误的是(　　)
考向一：微生物的选择培养
A.图中①②④为基本培养基，③为完全培养基B.A操作的目的是提高突变频率，增加突变株的数量C.B的正确操作是用涂布器把菌液均匀地涂布在②表面D.经C过程原位影印及培养后，可从④中挑取D进行纯化培养
下列叙述错误的是(　　)
①②④为完全培养基，③为基本培养基
2.稀释涂布平板法是分离菌种常用的方法，下列相关叙述不恰当的是( ) A.固体培养基灭菌后，应冷却至50 ℃左右时倒平板 B.倒好的平板需立即使用，以免表面干燥，影响菌的生长 C.稀释涂布平板分离到的单菌落需进一步划线纯化 D.稀释涂布平板法既可用于微生物的分离，也可用于微生物的计数
考向二：稀释涂布平板法的相关知识
倒好的平板需要放置一段时间，用以观察培养基是否被杂菌污染
04 真题感知·命题洞见
1.（2024·江苏·高考真题）酵母菌是基因工程中常用的表达系统。下列相关叙述正确的是（ ）A．酵母菌培养液使用前要灭活所有细菌，但不能灭活真菌B．酵母菌是真核细胞，需放置在CO2培养箱中进行培养C．可用稀释涂布平板法对酵母菌计数D．该表达系统不能对合成的蛋白质进行加工和修饰
放置在28℃恒温培养箱中进行培养
酵母菌是真核细胞，具有高尔基体和内质网，可以对合成的蛋白质进行加工和修饰。
2.（2024·重庆·高考真题）养殖场粪便是农家肥的重要来源，其中某些微生物可使氨氮化合物转化为尿素进而产生NH3，影响畜禽健康。为筛选粪便中能利用氨氮化合物且减少NH3产生的微生物。兴趣小组按图进行实验获得目的菌株，正确的是（ ）
A.①通常在等比稀释后用平板划线法获取单个菌落B.②挑取在2种培养基上均能生长的用于后续的实验C.③可通过添加脲酶并检测活性，筛选得到甲、乙D.粪便中添加菌株甲比乙更有利于NH3的减少
②筛选不能在尿素唯一氮源培养基上生长
乙比甲更有利于NH3的减少
3.（2024·浙江·高考真题）脲酶催化尿素水解，产生的氨可作为细菌的氮源。脲酶被去除镍后失去活性。下列叙述错误的是（ ）A．镍是组成脲酶的重要元素B．镍能提高尿素水解反应的活化能C．产脲酶细菌可在以NH4Cl为唯一氮源的培养基生长繁殖D．以尿素为唯一氮源的培养基可用于筛选产脲酶细菌
镍作为脲酶的重要组成元素，与降低尿素水解反应的活化能有关
4.(2023·山东卷)平板接种常用在微生物培养中。下列说法正确的是(　　)A.不含氮源的平板不能用于微生物培养B.平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒C.接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃D.利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物
不含氮源的平板可用于固氮菌的培养
不能直接丢弃，以免污染环境
(2025 年天津卷)中微生物培养相关知识的题目以甜瓣子发酵为背景(部分)•培养基中的营养成分：培养基中的碳源可为微生物的生命活动提供______，氮源可为微生物在体内__________________提供氮元素。 • 微生物的计数方法：若需对培养过程中的微生物进行计数，常用的两种方法是_______________________________________。
稀释涂布平板法和显微镜直接计数法。
05 学以致用·能力提升
1.结合教材，分析并回答下列问题：
分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部繁殖形成的肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体
大多数微生物以葡萄糖作为碳源，不具有选择作用
2.结合教材，分析并回答下列问题：
（2）对细菌计数时往往会产生实验误差，采用稀释涂布平板法计数的值比实际值____，原因是_____________________________________________________________；显微镜直接计数法计数的结果比实际值____，原因是__________________________________________________________。
当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落
显微镜下无法区分细胞的死活，计数时包括了死菌
3.结合情境，分析以下问题：
（1）经多次规范操作、重复实验，平板上均出现_____________________的菌落，初步证明鲜牛奶中存在金黄色葡萄球菌，但鲜牛奶供应商仍认为此菌并非鲜牛奶携带，因此，要对本操作进行完善，完善的方案是_________________________________________________。
为增强实验结论的严谨性，应增加空白对照组
（2）甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中微生物的数量,在同一稀释倍数下得到以下结果:甲同学涂布了3个平板,统计的菌落数分别是110、140和149,取平均值133；乙同学涂布了3个平板,统计的菌落数分别是27、169和176,取平均值124。有人认为这两位同学的结果中,乙同学的结果可信度低,其原因是____________________________________________________________________________。
乙同学的结果中,1个平板的计数结果与另外2个相差悬殊,结果的重复性差