山东省枣庄市滕州市第一中学2024-2025学年高二下学期3月月考生物试题（原卷版+解析版）

这是一份山东省枣庄市滕州市第一中学2024-2025学年高二下学期3月月考生物试题（原卷版+解析版），共36页。试卷主要包含了选择题，非选择题等内容，欢迎下载使用。
（时间：90分钟 满分：100分）
一、选择题：本题共15小题，每小题2分，共30分。每小题只有一个选项是最符合题目要求的。
1. 传统发酵食品的制作需要各种各样的微生物，且控制发酵条件至关重要。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 泡菜“咸而不酸”是因为盐水浓度过高，抑制乳酸菌发酵所致
B. 醋酸菌在O2、糖源充足时将乙醇转化为乙醛，然后变为醋酸
C. 葡萄皮上有酵母菌和醋酸菌，制作好葡萄酒后可直接通入无菌空气制作葡萄醋
D. 腐乳制作中毛霉起主要作用，酱油生产中主要利用黑曲霉，酵母菌胞吐产生的单细胞蛋白可制成微生物饲料
2. 下列关于酵母菌纯培养的叙述，正确的是（ ）
A. 微生物的纯培养步骤包括制备培养基、接种、灭菌、分离和培养等步骤
B. 将配制好的培养基放入高压蒸汽灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃的条件下，维持15~30min进行灭菌
C. 接种环在火焰上灼烧灭菌后，立即蘸取菌液在培养基表面连续划线以分离纯化菌种
D. 微生物的纯培养物就是不含有代谢废物的微生物培养物
3. 某实验室期望用夹层培养法筛选到符合预期的酵母菌，具体操作如下：先在培养皿底部倒一薄层已灭菌的基本培养基；待冷凝后，再添加一层内含酵母菌液（经诱变剂处理）的基本培养基；冷凝后再加一薄层已灭菌的基本培养基。培养一段时间后，对出现的菌落做好标记；然后再加一层完全培养基，培养一段时间后会长出形态不一的菌落。已知微生物可透过薄层培养基形成菌落，且所有培养基均含有抗生素。下列说法错误的是（ ）
A. 培养基中添加抗生素主要是为了抑制细菌的生长，对酵母菌影响较小
B. 下层的基本培养基为选择培养基，该实验预期想要得到没有营养缺陷的酵母菌
C. 应选取培养基上较小的菌落作为目标菌种进行后续实验
D. 在用诱变剂处理从外界富集而来的酵母菌前需要对酵母菌进行纯培养
4. 啤酒是以大麦为主要原料经酵母菌发酵制成的。酵母菌在最适pH条件下进行乙醇发酵，不产生甘油和醋酸；如果环境pH大于8，它的发酵产物除乙醇外，还会有甘油和醋酸。下列叙述错误的是（ ）
A. 用赤霉素处理大麦种子，可以使其无须发芽就能产生α－淀粉酶
B. 啤酒的工业化生产中，先进行糖化分解淀粉，再焙烤杀死种子，否则淀粉酶会失活
C. 在发酵过程中，必须对pH进行控制，同时可根据不同目的，进行变pH发酵，从而控制产物和生产效率
D. 对发酵后的啤酒进行消毒，杀死其中的大多数微生物，以延长啤酒保质期
5. 科学家利用马铃薯和西红柿叶片分离原生质体并进行细胞杂交，最终获得了杂种植株，相关过程如图所示。有关分析正确是（ ）
A. 过程①应将叶片上表皮向上，置于含纤维素酶和果胶酶的无菌水中
B. 过程②中的原生质体由细胞膜、液泡膜及两层膜之间的细胞质构成
C. ④过程可用高Ca2+—低pH融合法，目的是促进原生质体融合
D. ⑤进行脱分化和再分化过程，脱分化时需要避光，在诱导愈伤组织的培养基中培养，再分化则需要光照，先在诱导生芽培养基上培养，再转接到诱导生根培养基上培养
6. 中医常说“百病从肝治，养肝如养命”。近年来，我国酒精性肝病的发病率逐年提升，危害仅次于病毒性肝炎。研究发现，雪莲次生代谢物对急性酒精肝损伤具有较好的防治作用，利用植物细胞培养技术生产雪莲次生代谢物的大致流程如下。下列相关叙述错误的是（ ）
A. 从雪莲中提取的次生代谢物是雪莲生长所必需的一类小分子有机化合物
B. 经射线或化学物质处理①后可能获得雪莲培养物高产的细胞
C. 切取雪莲茎尖进行植物组织培养可获得脱毒苗，其病毒少或者无毒
D. 培养细胞获得次生代谢物时一般使用液体培养基，所用到的技术是植物细胞培养
7. 下列关于动物细胞工程的说法，不正确的有几项？（ ）
①通过PEG融合法、电融合法等方法可以诱导两个动物细胞相互识别而融合为一个细胞
②动物细胞和癌细胞在培养过程中均会出现细胞贴壁和接触抑制的现象
③灭活的病毒失去了其抗原结构，但保留其感染能力，可用于诱导动物细胞融合
④现阶段，体细胞核移植技术成功率非常低，而且绝大多数动物存在健康问题
⑤小鼠骨髓瘤细胞染色体数为40条，其B淋巴细胞的染色体数为40条，融合后形成的杂交瘤细胞DNA分子数为80个
⑥动植物组织经胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理成为单个细胞后才能进行培养
⑦动物细胞培养材料大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织或细胞具有更高的全能性
A. 4项B. 5项C. 6项D. 7项
8. 下图为双抗体夹心法是医学上常用的定量检测抗原的方法，利用细胞工程技术制备的单克隆抗体能增强该过程的有效性，下列相关叙述正确的是（ ）
A. 将相关抗原注射到小鼠体内，可从小鼠脾脏中获得所需的单克隆抗体
B. 固相抗体和酶标抗体均能与抗原结合，这是由于两者结构相同
C. 加入酶标抗体的目的是通过测定酶反应产物量来判断待测抗原量
D. 该方法与只使用一种单克隆抗体相比，能增加识别抗原的种类
9. 目前精子载体法逐渐成为最具诱惑力的制备转基因动物方法之一，该方法以精子作为外源基因的载体，使精子携带外源基因进入卵细胞受精。下图表示利用该方法制备转基因鼠的基本流程。下列说法错误的是（ ）
A. 将外源基因整合到精子染色体上，可保证外源基因稳定遗传
B. ①过程需将成熟的精子放入ATP溶液中进行获能处理
C. ②采用体外受精技术，受精完成的标志是雌雄原核的融合
D. 精子载体法与显微注射法相比，对受精卵中核的影响更小
10. 2017年，某国批准了首例使用细胞核移植技术培育“三亲婴儿”的申请。其培育过程可选用如下技术路线。
据图分析下列叙述错误的是（ ）
A. 可用梯度离心、紫外线短时间照射等方法在没有穿透卵母细胞透明带的情况下实现去核或使其中DNA 变性失活的目的
B. 为获得较多的卵母细胞，可对捐献者和母亲注射性激素，诱发其卵巢排出更多的成熟卵子
C. “三亲婴儿”和试管婴儿都是通过有性生殖得到的
D. “三亲婴儿”的体细胞中有小于1/2 的 DNA 来自母亲卵母细胞
11. 干细胞有自我更新能力及分化潜能，小鼠成纤维细胞可被诱导成为iPS细胞，而小鼠胚胎干细胞经定向诱导可获得多种功能细胞用于研究。某科研小组采用“胚胎干细胞介导法”将荧光素基因导入纯种灰色小鼠胚胎干细胞（ES细胞）中并整合到染色体上，然后将转基因的ES细胞注射到纯种黄色小鼠囊胚中培育嵌合体小鼠。下列错误的是（ ）
A. 荧光素基因可用于检测子代小鼠体内由灰色小鼠胚胎发育的部分
B. iPS细胞也能由已分化的B细胞和T细胞诱导而来，用iPS细胞分化形成的器官组织治疗疾病理论上可以避免免疫排斥
C. 注入ES细胞的囊胚移植前需用激素对受体母鼠进行同期发情处理
D. 割取黄色小鼠囊胚的滋养层细胞做DNA分析或核型分析即可检测嵌合体子代鼠的性别
12. 伯格首先在体外进行了DNA改造的研究，成功地构建了第一个体外重组DNA分子。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 两种不同的限制酶切割形成的黏性末端可能相同，用DNA连接酶将其连接形成重组序列，一定不能再被原来的限制酶切割。
B. 当限制酶在它识别序列的中心轴线两侧将DNA的两条链分别切开时，产生的是平末端
C. DNA连接酶、DNA聚合酶、RNA聚合酶和逆转录酶都能催化形成磷酸二酯键
D. E·cliDNA连接酶和T4DNA连接酶都能连接DNA片段的黏性末端和平末端，但T4DNA连接酶连接平末端的效率较E·cliDNA连接酶低
13. 科研人员利用花菜对DNA的粗提取实验进行改进。使用不同的研磨液过滤提取DNA、加酒精后用不同的去杂质方法纯化DNA，并进行相关检测，结果如下表。OD260/OD280的比值可检查DNA纯度，纯DNA的OD260/OD280为1.8，当存在蛋白质污染时，这一比值会明显降低。下列说法错误的是（ ）
A. 除花菜外，提取DNA可选用新鲜的香蕉、菠菜、猪肝等作为实验材料
B. 与0.14ml/L相比，用2ml/L的NaCl溶液研磨得到的沉淀物中的DNA浓度更高
C. 去杂质时应用1000r/min的离心转速将DNA沉淀下来，且离心法获得的纯度高
D. DNA分子沸水中加热可与二苯胺反应生成蓝色络合物
14. 下图表示PCR过程中某个阶段反应体系的情况，①②③④表示相关物质，L、R表示方向。下列叙述正确的是（ ）
A. ②链从L到R的方向为3′→5′，①②链均可作为子链合成的模板
B. PCR过程需要通过解旋酶断开氢键，且为边解旋边复制
C. 以1个DNA为模板经3次循环需消耗7个引物③
D. 物质③5′端添加了某序列，至少需经3次循环才可获得该序列的双链产物
15. 将马铃薯胰蛋白酶抑制剂基因Pin-Ⅱ导入杨树细胞，培育抗虫杨树。如图表示利用含目的基因的DNA分子和Ti质粒构建基因表达载体的过程，图中AmpR表示氨苄青霉素抗性基因，NeR表示新霉素抗性基因，箭头表示限制酶的酶切位点，相关酶的识别序列如表所示。下列叙述正确的是（ ）
A. 利用PCR扩增目的基因时，应该选择引物1和引物4
B. PCR扩增时，延伸过程需要将温度上升至65℃，同时还需要DNA聚合酶、ATP和4种脱氧核糖核苷酸等物质
C. 为使目的基因与质粒高效重组，应选用限制酶KpnⅠ和HindⅢ
D. 成功导入目的基因的杨树细胞既具有氨苄青霉素抗性，又有新霉素抗性
二、选择题：本题共5小题,每小题3分，共15分。每小题给出的四个选项中，有的只有一个选项正确，有的有多个选项正确，全部选对的得3分，选对但不全的得1分，有选错的得0分。
16. 某种物质A（一种含有C、H、N的有机物）难以降解，会对环境造成污染，只有某些细菌能降解A。研究人员按照如图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解A的细菌菌株。图中③将M中的菌液稀释一定倍数后，取0.1mL涂布到平板上，初步估测摇瓶M中1mL菌液中细菌数为2.4×108个。下列说法错误的是（ ）
A. 实验时，淤泥及盛有培养基的摇瓶通常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌
B. ③接种方法为稀释涂布平板法，涂布时用涂布器蘸取菌液均匀涂布于平板上
C. 乙平板中除了有高效降解A的细菌外，可能还有其他微生物
D. 若乙平板上菌落数平均为240个，则菌液稀释倍数为104
17. 人工基因驱动是以基因编辑技术为核心发展来的，可用于消灭携带疟疾的按蚊。决定野生型按蚊能携带疟原虫的基因组成为aa，科学家合成了使按蚊不能携带疟原虫的基因A。将由“A基因”“Cas9蛋白基因”和“可转录出sgRNA（可识别a基因的相关序列）的基因”组成的基因驱动器转入野生型按蚊受精卵中，基因驱动器被整合到含a基因的同源染色体（1和1＇）中的1上，使a基因改造成A基因，随后sgRNA识别并引导Cas9蛋白将1＇上的a基因切除，切除部位的DNA会以1上同一位点未断裂的DNA为模板完成修复。下列说法错误的是（ ）
A. Cas9蛋白作用于双链DNA分子中特定部位的磷酸二酯键
B. sgRNA依靠碱基互补配对来识别相关序列
C. 经过人工基因驱动改造的野生型按蚊的基因型为Aa
D. 若将A基因换成B基因，B基因可合成只剪切X染色体的酶，则一段时间后按蚊数量会大量增加
18. Transwell实验可模拟肿瘤细胞侵袭过程。取用无血清培养液制成的待测细胞悬液加入膜上铺有基质胶的上室中，下室为有血清培养液，上下层培养液以一层具有一定孔径的聚碳酸酯膜分隔开，放入培养箱中培养，通过计数下室的细胞量即可反映细胞的侵袭能力，如下图所示。下列说法正确的是（ ）
A. 培养过程中，添加CO2的目的是维持培养液的pH
B. 为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的抗生素
C. 血清培养液中可能含有某些因子促使肿瘤细胞向营养高的下室移动
D. 进入下室的肿瘤细胞数量越多，说明肿瘤细胞的分裂能力越强
19. 融合PCR技术采用具有互补末端的引物，形成具有重叠链的PCR产物，通过PCR产物重叠链的延伸，从而将不同来源的任意DNA片段连接起来。其原理如图所示，据图分析错误的是（ ）
A. 融合PCR的第一步两条链重叠部位可互为另一条链的引物
B. 上述过程中使用的引物P2和P3的碱基需要完全互补配对
C. 设计引物的目的是为了能够从其5'端开始连接脱氧核苷酸
D. 若融合PCR的第二步获得128个融合基因，理论上该过程消耗了256个引物
20. 《水平稳基因转移》是指在生物个体间所进行的遗传物质交流的现状，主要发生在微生物中。野生物型大肠菌足够在基础培养基中生长，突变菌株A和突变菌株B由于不能自己合成某种营养素，而不能在基础培养基础上生长。科学工作者利用菌株A和菌株B进行了如下两个实验。实验一：将菌株A和菌株B混合后，涂布于基础培养基础上，结果如图1；实验二：将菌株A和菌株B分别设置于U型管的两端，中间由过滤器隔开。加压或吸力以后，培养液可自由选择流通，但细菌细胞不能通过。经过几次小时候培养后，将菌液A、B分别涂在基础培养基础上，结果如图2。下列推测错误的是（ ）
A. 菌株A和菌株B互为提供所缺乏的营养素
B. 不同菌株间接触后才可能交换遗传物质
C. 混合培养的菌落都能在基础培养基上生长
D. 可以用“水平基因转移”来解释上面描述的现状
三、非选择题：本题包括5个小题，共55分。
21. 橙汁能帮助人体排毒，延缓人体衰老，深受消费者喜爱。但生产过程中感染脂环酸芽孢杆菌，橙汁的品质会受到影响。为优化橙汁生产的质量监控工艺，技术人员设计了如下流程，开展脂环酸芽孢杆菌的筛选和鉴定。请回答：
（1）步骤③将土壤悬浮液稀释了________倍，图中分离纯化微生物的方法是________。培养微生物时，结合对照组证明培养物中无杂菌污染的方法是_________
（2）若将④中分离得到的可疑菌株制成菌悬液，80℃水浴热处理10min，再取0．1mL热处理后的菌液涂布接种到培养基平板上，45℃培养48h。该操作的目的是________。
（3）若对土壤悬浮液中的微生物进行计数，步骤④在3个平板上分别接入0．1mL稀释液，进行适当培养，每隔24h统计一次菌落数目，选取________时的记录作为结果，这样统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，原因是________。
（4）为研究控制脂环酸芽孢杆菌生长的方法，科研人员进行了如下设计：①称取一定量的抑菌剂，配制成不同浓度的抑菌液。②将上图得到的菌株原液稀释。③分别取不同浓度的抑菌液和菌株稀释液，加入到相对应的培养液中形成菌悬液（三种液体均等量）。一段时间后，将菌悬液分别接种到适宜的培养基平板上。经后来论证发现，该设计不够严谨，理由是________。
22. 双特异性抗体是指一个抗体分子可以与两个不同抗原或同一抗原的两个不同抗原表位相结合，目前最常利用杂交瘤杂交法来制备。长春花是原产于非洲东海岸的野生花卉，其所含的长春碱具有良好的抗肿瘤作用。下图1是某双特异性抗体作用图。图2是科研人员通过杂交一杂交瘤细胞技术（免疫的B淋巴细胞和杂交瘤细胞杂交技术）生产能同时识别癌胚抗原和长春碱的双特异性单克隆抗体的部分过程。请分析回答下列问题：
（1）单克隆抗体的优点是________,对③筛选出的杂交瘤细胞，还需进行________和抗体检测，才能筛选出足够量的既能无限增殖又能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。
（2）图2中①步骤注射癌胚抗原的目的是________。图2方框内需要经过________次筛选，才能获取单克隆杂交一杂交瘤细胞。取一定稀释倍数的杂交瘤细胞悬液加入铺有饲养层细胞的多孔板中，适宜条件下培养并进行阳性检测，阳性检测的原理是________。若每孔中有很多细胞，阳性反应孔中的细胞还需多次稀释培养检测的目的是________。
（3）单克隆杂交一杂交瘤细胞在体外培养时，需要满足的条件是充足的营养，________的环境，适宜的温度、PH、渗透压，和适宜的气体环境等。
（4）与直接使用长春碱相比，将长春碱与双特异性单克隆抗体结合后给药，对人体的副作用更小，原因是________。
23. 和牛是世界公认的高档肉牛品种，其体型较小，肉质鲜嫩，营养丰富。我国科研人员利用胚胎移植技术，按如图所示流程操作，成功地批量培育了和牛这一优良品种。请回答下列问题：
（1）为了使成熟和牛排出更多的卵子，可以注射________，但只有发育到________期的卵子才能与精子结合。
（2）上述批量培育和牛的过程中用到的工程技术有________、________和胚胎移植等。
（3）移植的胚胎处于________期，移入的甲胚胎能在代孕雌牛子宫中存活的生理基础是________
（4）除图中所示外，胚胎移植技术中胚胎的来源还有________（答出两个即可）。为提高胚胎利用效率，尽快获得数量较多的子代和牛，图中甲环节中，要特别注意将____________分割。
24. 水体中的雌激素能使斑马鱼细胞产生E蛋白，激活卵黄蛋白原（vtg）基因（如图1所示）的表达，因此斑马鱼可用于监测环境雌激素污染程度。为了实现可视化监测，科学家将斑马鱼的vtg基因，与人工构建的含萤火虫荧光素酶基因（无启动子）的载体（如图2所示）连接，形成vtg-Luc基因重组载体，成功培育了转基因斑马鱼。图2中Luc表示萤火虫荧光素酶基因，可以催化荧光素氧化产生荧光；Ampr为氨苄青霉素抗性基因，TetR为四环素抗性基因，BamHⅠ、EcRⅠ、HindⅢ、BsrGⅠ为限制酶，→表示转录方向。
（1）为使vtg基因与Luc基因载体形成重组载体并降低“空载”概率，可选用限制酶_______进行双酶切Luc基因载体，其优点是_______。
（2）通过PCR技术获取vtg基因时，需设计合适的引物。依据图1、图2信息，推测引物1包含的碱基序列为_______。
A. 5’-AACTAT-3’B. 5’-TTGATA-3’C. 5’-GAATTCAACTAT-3’D. 5’-AAGCTTAACTAT-3’
（3）若筛选导入vtg-Luc基因重组载体的大肠杆菌，可将大肠杆菌依次放在含有氨苄青霉素、四环素的培养基中培养，筛选_______（选填“能”或“不能”）在含有氨苄青霉素的培养基中生长但_____（选填“能”或“不能”）在含有四环素的培养基中生长的大肠杆菌即为目的菌；若要判断斑马鱼转基因是否成功，可在水体中添加_______进行检测。（编号选填）
①氨苄青霉素 ②雌激素 ③荧光素 ④卵黄蛋白原 ⑤荧光素酶
25. 图示为利用农杆菌培育转基因植物的基本流程，请据图回答：
（1）经过过程①②形成的重组质粒中，除目的基因外，还必须有启动子、______、______等，其中启动子的作用是_________。
（2）过程③常用_________处理使农杆菌成为感受态细胞。若转基因技术受体细胞为动物受精卵，则是利用______方法将目的基因注入
（3）步骤⑤⑥启动细胞分裂、脱分化、再分化的关键植物激素是__________
（4）可通过_________技术检测试管苗的染色体DNA上是否插入了目的基因，该技术中将温度下降到50℃左右的目的是让_____________________
高二下学期3月份月考
生物试题
（时间：90分钟 满分：100分）
一、选择题：本题共15小题，每小题2分，共30分。每小题只有一个选项是最符合题目要求的。
1. 传统发酵食品的制作需要各种各样的微生物，且控制发酵条件至关重要。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 泡菜“咸而不酸”是因为盐水浓度过高，抑制乳酸菌发酵所致
B. 醋酸菌在O2、糖源充足时将乙醇转化为乙醛，然后变为醋酸
C. 葡萄皮上有酵母菌和醋酸菌，制作好葡萄酒后可直接通入无菌空气制作葡萄醋
D. 腐乳制作中毛霉起主要作用，酱油生产中主要利用黑曲霉，酵母菌胞吐产生的单细胞蛋白可制成微生物饲料
【答案】A
【解析】
【分析】参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。
【详解】A、若制作的泡菜“咸而不酸”，最可能的原因是制作泡菜使用的盐水浓度过高，乳酸菌通过渗透作用失水，其生长及发酵受到抑制，A正确；
B、当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸。当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为乙酸，B错误；
C、醋酸菌为需氧菌，且发酵温度高于果酒的发酵温度，因此制作好葡萄酒后，除通入无菌空气，还需要适当提高发酵装置的温度，C错误
D、单细胞蛋白，也被称为微生物蛋白、菌体蛋白，它是利用发酵工程获得的大量的微生物菌体，不是微生物产生的某种蛋白质，D错误。
故选A。
2. 下列关于酵母菌纯培养的叙述，正确的是（ ）
A. 微生物的纯培养步骤包括制备培养基、接种、灭菌、分离和培养等步骤
B. 将配制好的培养基放入高压蒸汽灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃的条件下，维持15~30min进行灭菌
C. 接种环在火焰上灼烧灭菌后，立即蘸取菌液在培养基表面连续划线以分离纯化菌种
D. 微生物的纯培养物就是不含有代谢废物的微生物培养物
【答案】B
【解析】
【分析】无菌技术的主要内容：①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。
【详解】A、微生物纯培养步骤一般为：制备培养基、灭菌、接种、分离和培养等，应先灭菌再接种，防止杂菌污染，A错误；
B、高压蒸汽灭菌锅是以水蒸气为介质，在压力为100KPa、温度为121℃的条件下维持15～30min来灭菌的，B正确；
C、接种环在火焰上灼烧灭菌后，需冷却后再蘸取菌液在培养基表面连续划线以分离纯化菌种，若立即蘸取菌液，高温会杀死菌种，C错误；
D、微生物的纯培养物是由单一个体繁殖所获得的微生物群体，D错误。
故选B。
3. 某实验室期望用夹层培养法筛选到符合预期的酵母菌，具体操作如下：先在培养皿底部倒一薄层已灭菌的基本培养基；待冷凝后，再添加一层内含酵母菌液（经诱变剂处理）的基本培养基；冷凝后再加一薄层已灭菌的基本培养基。培养一段时间后，对出现的菌落做好标记；然后再加一层完全培养基，培养一段时间后会长出形态不一的菌落。已知微生物可透过薄层培养基形成菌落，且所有培养基均含有抗生素。下列说法错误的是（ ）
A. 培养基中添加抗生素主要是为了抑制细菌的生长，对酵母菌影响较小
B. 下层的基本培养基为选择培养基，该实验预期想要得到没有营养缺陷的酵母菌
C. 应选取培养基上较小的菌落作为目标菌种进行后续实验
D. 在用诱变剂处理从外界富集而来的酵母菌前需要对酵母菌进行纯培养
【答案】B
【解析】
【分析】选择培养是利用培养基或培养条件针对性地促进或抑制某类微生物的生长，从而使目标微生物数目增加的一种培养方法。
【详解】A、 酵母菌是真菌，细菌是原核生物，抗生素可以抑制细菌细胞壁的形成，对细菌抑制作用强，对酵母菌影响较小，在培养基中添加抗生素可抑制细菌生长，A正确；
B、在夹层培养法中，中间层含诱变处理后的酵母菌液，基本培养基不含特定营养成分，若有菌落能在基本培养基上生长，后在完全培养基上长出形态不同的菌落，说明这些菌落可能是具有营养缺陷的酵母菌，B错误；
C、营养缺陷型酵母菌在基本培养基上难以生长，在完全培养基上才可以繁殖形成菌落，最终应选取培养基上较小的菌落作为目标菌种进行后续实验，C正确；
D、在用诱变剂处理酵母菌前需要对酵母菌进行纯培养，这样才能保证处理后的结果是针对单一酵母菌种群的，D正确。
故选B。
4. 啤酒是以大麦为主要原料经酵母菌发酵制成的。酵母菌在最适pH条件下进行乙醇发酵，不产生甘油和醋酸；如果环境pH大于8，它的发酵产物除乙醇外，还会有甘油和醋酸。下列叙述错误的是（ ）
A. 用赤霉素处理大麦种子，可以使其无须发芽就能产生α－淀粉酶
B. 啤酒的工业化生产中，先进行糖化分解淀粉，再焙烤杀死种子，否则淀粉酶会失活
C. 在发酵过程中，必须对pH进行控制，同时可根据不同目的，进行变pH发酵，从而控制产物和生产效率
D. 对发酵后的啤酒进行消毒，杀死其中的大多数微生物，以延长啤酒保质期
【答案】B
【解析】
【分析】果酒制作的原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精和二氧化碳，酵母菌是兼性厌氧微生物，在缺氧条件下进行无氧呼吸，在氧气充足的条件下进行有氧呼吸，酵母菌具有核膜包被的细胞核，属于真核生物，适宜酵母菌生长的温度范围是18～25°C。
【详解】A、赤霉素能促进α－淀粉酶合成，故用赤霉素处理大麦种子，可以使其无须发芽就能产生α－淀粉酶，A正确；
B、焙烤后才进行糖化，焙烤可以杀死大麦种子的胚，但不使淀粉酶失活，而后淀粉酶将淀粉分解成葡萄糖，作为无氧呼吸的底物用于产生酒精，B错误；
C、pH会影响酶的活性，故在发酵过程中，可根据不同目的，进行变pH发酵，从而控制产物和生产效率，C正确；
D、消毒能杀死其中大多数微生物（不包括芽孢和孢子），对发酵后的啤酒进行消毒，可以延长啤酒保质期，D正确。
故选B。
5. 科学家利用马铃薯和西红柿叶片分离原生质体并进行细胞杂交，最终获得了杂种植株，相关过程如图所示。有关分析正确的是（ ）
A. 过程①应将叶片上表皮向上，置于含纤维素酶和果胶酶的无菌水中
B. 过程②中的原生质体由细胞膜、液泡膜及两层膜之间的细胞质构成
C. ④过程可用高Ca2+—低pH融合法，目的是促进原生质体融合
D. ⑤进行脱分化和再分化过程，脱分化时需要避光，在诱导愈伤组织的培养基中培养，再分化则需要光照，先在诱导生芽培养基上培养，再转接到诱导生根培养基上培养
【答案】D
【解析】
【分析】植物体细胞杂交要将不同种的植物细胞诱导融合成一个杂种细胞，再利用植物组织培养技术将杂种细胞培育成植株，体现的生物学原理为细胞膜的流动性和植物细胞的全能性。在融合之前需先用纤维素酶和果胶酶去除植物的细胞壁获得原生质体，杂种细胞再生出新的细胞壁是细胞融合完成的标志。
【详解】A、①应将叶片下表皮的一面朝下（能与溶液接触），原生质体没有细胞壁，为避免原生质体吸水涨破，将叶片置于等渗或略高渗溶液中，A错误；
B、原生质层的结构是由细胞膜、液泡膜以及这两层膜之间的细胞质组成，而原生质体是植物细胞去除细胞壁的结构，B错误；
C、诱导原生质体融合的化学法包括聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca2+—高pH融合法等，④过程可用高Ca2＋—高pH融合法，目的是促进原生质体融合，C错误；
D、⑤进行脱分化和再分化过程，脱分化时需要避光，在诱导愈伤组织的培养基中培养，再分化则需要光照，先在诱导生芽培养基上培养，再转接到诱导生根培养基上培养，D正确。
故选D。
6. 中医常说“百病从肝治，养肝如养命”。近年来，我国酒精性肝病的发病率逐年提升，危害仅次于病毒性肝炎。研究发现，雪莲次生代谢物对急性酒精肝损伤具有较好的防治作用，利用植物细胞培养技术生产雪莲次生代谢物的大致流程如下。下列相关叙述错误的是（ ）
A. 从雪莲中提取的次生代谢物是雪莲生长所必需的一类小分子有机化合物
B. 经射线或化学物质处理①后可能获得雪莲培养物高产的细胞
C. 切取雪莲茎尖进行植物组织培养可获得脱毒苗，其病毒少或者无毒
D. 培养细胞获得次生代谢物时一般使用液体培养基，所用到技术是植物细胞培养
【答案】A
【解析】
【分析】植物组织培养过程是：离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织，然后再分化生成根、芽，最终形成植物体。植物组织培养依据的原理是植物细胞的全能性。
【详解】A、次生代谢物不是雪莲生长必需的产物，A错误；
B、可用射线或化学物质处理①愈伤组织，促使其发生突变，从中筛选雪莲培养物高产的细胞，B正确；
C、茎尖中带毒少或无毒，因而切取一定大小的茎尖进行组织培养可获得脱毒苗，C正确；
D、细胞产物的工业化生产是从人工培养的愈伤组织细胞中提取某种成分，该过程使用的是液体培养基，所用到的技术是植物细胞培养，D正确。
故选A。
7. 下列关于动物细胞工程的说法，不正确的有几项？（ ）
①通过PEG融合法、电融合法等方法可以诱导两个动物细胞相互识别而融合为一个细胞
②动物细胞和癌细胞在培养过程中均会出现细胞贴壁和接触抑制的现象
③灭活的病毒失去了其抗原结构，但保留其感染能力，可用于诱导动物细胞融合
④现阶段，体细胞核移植技术成功率非常低，而且绝大多数动物存健康问题
⑤小鼠骨髓瘤细胞染色体数为40条，其B淋巴细胞的染色体数为40条，融合后形成的杂交瘤细胞DNA分子数为80个
⑥动植物组织经胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理成为单个细胞后才能进行培养
⑦动物细胞培养材料大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织或细胞具有更高的全能性
A. 4项B. 5项C. 6项D. 7项
【答案】C
【解析】
【分析】诱导动物细胞融合的方法与植物原生质体融合的方法类似，常用诱导因素有PEG、灭活病毒、电激等。灭活病毒诱导细胞融合的原理是：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。
【详解】①通过PEG融合法、电融合法等方法可以诱导两个动物细胞融合为一个细胞，但没有涉及相互识别，①错误；
②正常体细胞在培养过程中会出现接触抑制和贴壁生长现象，但癌细胞能无限增殖，故在培养过程中不会出现接触抑制的现象，②错误；
③灭活是指用物理或化学的手段使病毒失去感染能力，但没有破坏抗原结构，③错误；
④现阶段，体细胞核移植技术成功率非常低，而且绝大多数动物存在健康问题，许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大、异常肥胖、发育困难、脏器缺陷和免疫失调等，④正确；
⑤小鼠骨髓瘤细胞染色体数为40条，其B淋巴细胞的染色体数为40条，融合后形成的杂交瘤细胞的核DNA分子数为80个，此外在细胞质中还有少量的DNA分子，⑤错误；
⑥动物组织经胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理成为单个细胞后才能进行培养，植物组织培养时不需要用酶处理，⑥错误；
⑦动物细胞培养材料大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织或细胞的分裂能力强，⑦错误。
综上所述，①②③⑤⑥⑦错误，④正确，ABD错误，C正确。
故选C。
8. 下图为双抗体夹心法是医学上常用的定量检测抗原的方法，利用细胞工程技术制备的单克隆抗体能增强该过程的有效性，下列相关叙述正确的是（ ）
A. 将相关抗原注射到小鼠体内，可从小鼠脾脏中获得所需的单克隆抗体
B. 固相抗体和酶标抗体均能与抗原结合，这是由于两者结构相同
C. 加入酶标抗体的目的是通过测定酶反应产物量来判断待测抗原量
D. 该方法与只使用一种单克隆抗体相比，能增加识别抗原的种类
【答案】C
【解析】
【分析】1、据图分析，固相抗体和抗原特异性结合，再与酶标抗体结构，催化特定底物形成检测产物。
2、单克隆抗体的制备过程的细节：（1）二次筛选：①筛选得到杂交瘤细胞（去掉未杂交的细胞以及自身融合的细胞）；②筛选出能够产生特异性抗体的细胞群。（2）细胞来源：B淋巴细胞：能产生特异性抗体，在体外不能无限繁殖；骨髓瘤细胞：不产生专一性抗体，体外能无限繁殖。（3）杂交瘤细胞的特点：既能大量增殖，又能产生特异性抗体。
【详解】A、将相关抗原注射到小鼠体内，可从小鼠脾脏中获得能产生相应抗体的浆细胞，而单克隆抗体是由杂交瘤细胞产生的，A错误；
B、据图可知，固相抗体和酶标抗体分别与抗原的不同部位结合，说明两者的结构不同，B错误；
C、加入酶标抗体目的是通过酶的催化作用，检测底物含量，可通过酶反应产物量来测定待测抗原量，C正确；
D、该技术可用于定量检测抗原，据图可知，该方法没有增加识别抗原的种类，D错误。
故选C。
9. 目前精子载体法逐渐成为最具诱惑力的制备转基因动物方法之一，该方法以精子作为外源基因的载体，使精子携带外源基因进入卵细胞受精。下图表示利用该方法制备转基因鼠的基本流程。下列说法错误的是（ ）
A. 将外源基因整合到精子的染色体上，可保证外源基因稳定遗传
B. ①过程需将成熟的精子放入ATP溶液中进行获能处理
C. ②采用体外受精技术，受精完成的标志是雌雄原核的融合
D. 精子载体法与显微注射法相比，对受精卵中核的影响更小
【答案】B
【解析】
【分析】分析题图：图示表示培育转基因鼠的基本流程，其中①是筛选获得导入外源基因的精子的过程，②是体外受精过程，③是早期胚胎培养过程，④是胚胎移植过程。
【详解】A、受精卵中几乎不含精子的细胞质，将外源基因整合到精子的染色体上，是保证外源基因稳定遗传的关键，A正确；
B、①过程需将成熟的精子放在一定浓度的肝素或钙离子载体溶液中，用化学药物诱导精子获能，获能是指获得受精的能力而不是获得能量，因此不是放在ATP溶液中，B错误；
C、受精是精子和卵细胞的结合，②采用体外受精技术，受精完成的标志是雌雄原核融合，C正确；
D、与显微注射法相比，精子载体法对受精卵中核的影响会更小，理由是不需要穿过核膜，雌雄原核自动融合（通过受精作用完成整合），D正确。
故选B。
10. 2017年，某国批准了首例使用细胞核移植技术培育“三亲婴儿”的申请。其培育过程可选用如下技术路线。
据图分析下列叙述错误的是（ ）
A. 可用梯度离心、紫外线短时间照射等方法在没有穿透卵母细胞透明带的情况下实现去核或使其中DNA 变性失活的目的
B. 为获得较多的卵母细胞，可对捐献者和母亲注射性激素，诱发其卵巢排出更多的成熟卵子
C. “三亲婴儿”和试管婴儿都是通过有性生殖得到的
D. “三亲婴儿”的体细胞中有小于1/2 的 DNA 来自母亲卵母细胞
【答案】B
【解析】
【分析】分析题图：图示表示“三亲婴儿”的培育过程，该过程中采用了核移植技术、体外受精技术、早期胚胎培养技术及胚胎移植技术。
【详解】A、卵母细胞去核或使其中DNA失活的方法有梯度离心、紫外线短时间照射等，A正确；
B、为获得较多的卵母细胞，可对捐献者和母亲注射促性腺激素，而不是性激素，B错误；
C、“三亲婴儿”和试管婴儿采用体外受精技术，属于有性生殖，C正确；
D、“三亲婴儿”的遗传物质来自捐献者、母亲及提供精子的男子，其中细胞质中的遗传物质来自捐献者，故体细胞中有小于1/2 的 DNA 来自母亲卵母细胞，D正确。
故选B。
11. 干细胞有自我更新能力及分化潜能，小鼠成纤维细胞可被诱导成为iPS细胞，而小鼠胚胎干细胞经定向诱导可获得多种功能细胞用于研究。某科研小组采用“胚胎干细胞介导法”将荧光素基因导入纯种灰色小鼠胚胎干细胞（ES细胞）中并整合到染色体上，然后将转基因的ES细胞注射到纯种黄色小鼠囊胚中培育嵌合体小鼠。下列错误的是（ ）
A. 荧光素基因可用于检测子代小鼠体内由灰色小鼠胚胎发育的部分
B. iPS细胞也能由已分化的B细胞和T细胞诱导而来，用iPS细胞分化形成的器官组织治疗疾病理论上可以避免免疫排斥
C. 注入ES细胞的囊胚移植前需用激素对受体母鼠进行同期发情处理
D. 割取黄色小鼠囊胚的滋养层细胞做DNA分析或核型分析即可检测嵌合体子代鼠的性别
【答案】D
【解析】
【分析】胚胎干细胞是早期胚胎（原肠胚期之前）或原始性腺中分离出来的一类细胞，它具有体外培养无限增殖、自我更新和多向分化的特性。无论在体外还是体内环境，ES细胞都能被诱导分化为机体几乎所有的细胞类型。
【详解】A、荧光素基因导入到灰色小鼠胚胎，荧光素基因会表达荧光蛋白，将来检测子代小鼠有荧光蛋白的即为灰色小鼠胚胎发育而来的，据此推测荧光素基因在该实验操作中可起到检测灰色小鼠囊胚发育的部分，A正确；
B、由于iPS细胞可以来源于患者自身的细胞，因此用这些细胞分化形成的器官组织进行治疗理论上可以避免免疫排斥反应，B正确；
C、注入ES细胞的囊胚移植前需用促性腺激素对受体母鼠进行同期发情处理，C正确；
D、嵌合体小鼠中既有纯种灰色小鼠胚胎干细胞，也有纯种黄色小鼠细胞，不能只割取黄色小鼠囊胚的滋养层细胞做DNA分析即可检测嵌合体子代鼠的性别，D错误。
故选D。
12. 伯格首先在体外进行了DNA改造的研究，成功地构建了第一个体外重组DNA分子。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 两种不同的限制酶切割形成的黏性末端可能相同，用DNA连接酶将其连接形成重组序列，一定不能再被原来的限制酶切割。
B. 当限制酶在它识别序列的中心轴线两侧将DNA的两条链分别切开时，产生的是平末端
C. DNA连接酶、DNA聚合酶、RNA聚合酶和逆转录酶都能催化形成磷酸二酯键
D. E·cliDNA连接酶和T4DNA连接酶都能连接DNA片段的黏性末端和平末端，但T4DNA连接酶连接平末端的效率较E·cliDNA连接酶低
【答案】C
【解析】
【分析】基因工程的工具：（1）限制酶：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。（2）DNA连接酶：连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键。（3）运载体：常用的运载体有质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒。
【详解】A、两种不同的限制酶切割形成的黏性末端可能相同，用DNA连接酶将其连接形成重组序列，可能再被原来的限制酶切割，A错误；
B、当限制酶在它识别序列的中心轴线两侧将 DNA 的两条链分别切开时，产生的是黏性末端，而不是平末端，B错误；
C、DNA 连接酶可连接 DNA 片段形成磷酸二酯键，DNA 聚合酶在 DNA 复制时催化形成磷酸二酯键，RNA 聚合酶在转录时催化形成磷酸二酯键，逆转录酶在逆转录过程中催化形成磷酸二酯键，它们都能催化形成磷酸二酯键，C正确；
D、E·cli DNA连接酶和T4 DNA连接酶都能连接DNA片段的黏性末端和平末端，但T4 DNA连接酶连接平末端的效率较E·cli DNA连接酶高，而不是低，D错误。
故选C。
13. 科研人员利用花菜对DNA的粗提取实验进行改进。使用不同的研磨液过滤提取DNA、加酒精后用不同的去杂质方法纯化DNA，并进行相关检测，结果如下表。OD260/OD280的比值可检查DNA纯度，纯DNA的OD260/OD280为1.8，当存在蛋白质污染时，这一比值会明显降低。下列说法错误的是（ ）
A. 除花菜外，提取DNA可选用新鲜的香蕉、菠菜、猪肝等作为实验材料
B. 与0.14ml/L相比，用2ml/LNaCl溶液研磨得到的沉淀物中的DNA浓度更高
C. 去杂质时应用1000r/min的离心转速将DNA沉淀下来，且离心法获得的纯度高
D. DNA分子沸水中加热可与二苯胺反应生成蓝色络合物
【答案】B
【解析】
【分析】DNA的粗提取与鉴定的实验原理是：①DNA的溶解性，DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的氯化钠溶液中的溶解度不同，利用这一特点可以选择适当浓度的盐溶液可以将DNA溶解或析出，从而达到分离的目的；②DNA不溶于酒精溶液，细胞中的某些蛋白质可以溶解于酒精，利用这一原理可以将蛋白质和DNA进一步分离；③在沸水浴的条件下DNA遇二苯胺会呈现蓝色。
【详解】A、花菜、新鲜的香蕉、菠菜、猪肝等均富含DNA，可以作为提取DNA的实验材料，A正确；
B、表格显示，与0.14ml/L相比，2 ml/L NaCl研磨后提取的DNA浓度更高，这是由于高盐浓度下DNA溶解度高，高盐浓度下DNA溶解于上清液，沉淀物中的DNA更少，B错误；
C、已知OD260/OD280的比值可检查DNA纯度，纯DNA的OD260/OD280为1.8，当存在蛋白质污染时，这一比值会明显降低，根据图表信息可知，离心法获得的OD260/OD280比值为1.53，高于静置法的1.41，说明离心法获得的纯度更高，C正确；
D、在沸水浴条件下，二苯胺试剂与DNA反应生成蓝色络合物，D正确。
故选B。
14. 下图表示PCR过程中某个阶段反应体系的情况，①②③④表示相关物质，L、R表示方向。下列叙述正确的是（ ）
A. ②链从L到R的方向为3′→5′，①②链均可作为子链合成的模板
B. PCR过程需要通过解旋酶断开氢键，且为边解旋边复制
C. 以1个DNA为模板经3次循环需消耗7个引物③
D. 物质③的5′端添加了某序列，至少需经3次循环才可获得该序列的双链产物
【答案】C
【解析】
【分析】PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术。条件：模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶）：过程：①高温变性：DNA解旋过程（PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶高温条件下氢键可自动解开）：低温复性：引物结合到互补链DNA上；③中温延伸：合成子链。
【详解】A、根据DNA分子中两条链的反向平行关系可判断，②链从 L 到 R 的方向为 5′→3′，图中①②链均可作为子链合成的模板，A错误；
B、PCR 过程需要通过高温处理使双链中氢键断裂成为单链，而后通过降温使子链和引物之间形成双链结构，而后调节温度是子链沿着引物的3’端延伸，B错误；
C、以 1 个 DNA 为模板经 3 次循环产生的DNA分子数目为23=8，则需消耗 引物③的数目为（8×2-2）÷2=7，C正确；
D、物质③的 5′端添加了某序列，至少需经 2 次循环才可获得以该序列为模板合成的双链DNA产物，D错误。
故选C。
15. 将马铃薯胰蛋白酶抑制剂基因Pin-Ⅱ导入杨树细胞，培育抗虫杨树。如图表示利用含目的基因的DNA分子和Ti质粒构建基因表达载体的过程，图中AmpR表示氨苄青霉素抗性基因，NeR表示新霉素抗性基因，箭头表示限制酶的酶切位点，相关酶的识别序列如表所示。下列叙述正确的是（ ）
A. 利用PCR扩增目的基因时，应该选择引物1和引物4
B. PCR扩增时，延伸过程需要将温度上升至65℃，同时还需要DNA聚合酶、ATP和4种脱氧核糖核苷酸等物质
C. 为使目的基因与质粒高效重组，应选用限制酶KpnⅠ和HindⅢ
D. 成功导入目的基因的杨树细胞既具有氨苄青霉素抗性，又有新霉素抗性
【答案】C
【解析】
【分析】基因工程包括四个基本程序：目的基因的筛选与获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细 胞、目的基因的检测与鉴定。
【详解】A、DNA聚合酶只能从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸，利用PCR扩增目的基因时，应该选择引物2和引物3，A错误；
B、PCR扩增时，延伸过程需要将温度调至72℃左右，B错误；
C、为使目的基因与质粒高效重组，选用KpnⅠ和HindⅢ比选用KpnⅠ和SmaⅠ效果更好，因为SmaI切割DNA后形成平末端，T4DNA连接酶连接平末端的效率相对较低，C正确；
D、只有T-DNA区段会导入植物受体细胞，因此氨苄青霉素抗性基因不会导入植物受体细胞中，即成功导入目的基因的杨树细胞只能表现出新霉素抗性，D错误。
故选C。
二、选择题：本题共5小题,每小题3分，共15分。每小题给出的四个选项中，有的只有一个选项正确，有的有多个选项正确，全部选对的得3分，选对但不全的得1分，有选错的得0分。
16. 某种物质A（一种含有C、H、N的有机物）难以降解，会对环境造成污染，只有某些细菌能降解A。研究人员按照如图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解A的细菌菌株。图中③将M中的菌液稀释一定倍数后，取0.1mL涂布到平板上，初步估测摇瓶M中1mL菌液中细菌数为2.4×108个。下列说法错误的是（ ）
A. 实验时，淤泥及盛有培养基的摇瓶通常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌
B. ③接种方法为稀释涂布平板法，涂布时用涂布器蘸取菌液均匀涂布于平板上
C. 乙平板中除了有高效降解A的细菌外，可能还有其他微生物
D. 若乙平板上菌落数平均为240个，则菌液稀释倍数为104
【答案】ABD
【解析】
【分析】分析题图：①为淤泥取样进行稀释，②为接种到液体培养基上，③稀释涂布平板法接种到以A为唯一碳源和氮源的选择培养基上，④为挑取单菌落接种，⑤在以A为唯一碳源和氮源的选择培养基上进一步筛选出高效降解A的菌株。
【详解】A、实验时，从淤泥中分离得到能高效降解A的细菌菌株，则图①为淤泥取样进行稀释，可以取淤泥加无菌水制成菌悬液，淤泥中有菌种，因此不能进行灭菌处理；盛有培养基的摇瓶通常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，A错误；
B、识图分析可知，③稀释涂布平板法接种到以A为唯一碳源和氮源的选择培养基上，因此步骤③的接种工具是涂布器，但是不能用涂布器蘸取菌液，应该将菌液加入培养基中，用涂布器进行均匀涂抹，B错误；
C、乙平板中大小不同的菌落说明分解菌对物质A的分解能力不同，但是乙平板中可能还存在其他分解菌，也可能是不同分解菌所形成的菌落大小不同，C正确；
D、利用稀释涂布平板法对细菌进行计数，要保证每个平板上长出的菌落数平均为240个，假设稀释倍数为a，根据摇瓶M中1mL菌液中细菌数为2.4×108个，在每个平板上涂布100μL（即0.1mL）稀释后的菌液，则有240×a÷0.1=2.4×108，则稀释倍数a=105，D错误。
故选ABD。
17. 人工基因驱动是以基因编辑技术为核心发展来的，可用于消灭携带疟疾的按蚊。决定野生型按蚊能携带疟原虫的基因组成为aa，科学家合成了使按蚊不能携带疟原虫的基因A。将由“A基因”“Cas9蛋白基因”和“可转录出sgRNA（可识别a基因的相关序列）的基因”组成的基因驱动器转入野生型按蚊受精卵中，基因驱动器被整合到含a基因的同源染色体（1和1＇）中的1上，使a基因改造成A基因，随后sgRNA识别并引导Cas9蛋白将1＇上的a基因切除，切除部位的DNA会以1上同一位点未断裂的DNA为模板完成修复。下列说法错误的是（ ）
A. Cas9蛋白作用于双链DNA分子中特定部位的磷酸二酯键
B. sgRNA依靠碱基互补配对来识别相关序列
C. 经过人工基因驱动改造的野生型按蚊的基因型为Aa
D. 若将A基因换成B基因，B基因可合成只剪切X染色体的酶，则一段时间后按蚊数量会大量增加
【答案】CD
【解析】
【分析】将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
【详解】A、由题意可知，Cas9蛋白的作用是将1＇上的a基因切除，所以Cas9蛋白作用于双链DNA分子中特定部位的磷酸二酯键，A正确；
B、由题意“sgRNA识别并引导Cas9蛋白将1＇上的a基因切除”可推测，sgRNA依靠碱基互补配对来识别相关序列，B正确；
C、由题意可知，决定野生型按蚊能携带疟原虫的基因组成为aa，且“基因驱动器被整合到含a基因的同源染色体（1和1＇）中的1上，使a基因改造成A基因，随后sgRNA识别并引导Cas9蛋白将1＇上的a基因切除，切除部位的DNA会以1上同一位点未断裂的DNA为模板完成修复”，所以经过人工基因驱动改造的野生型按蚊的基因型为AA，C错误；
D、若将A基因换成可控制只剪切X染色体的酶的合成的基因B，转基因雄蚊的性染色体只能为Y，种群中雌性个体的数量明显下降，则一段时间后按蚊数量会大量减少，D错误。
故选CD。
18. Transwell实验可模拟肿瘤细胞侵袭过程。取用无血清培养液制成的待测细胞悬液加入膜上铺有基质胶的上室中，下室为有血清培养液，上下层培养液以一层具有一定孔径的聚碳酸酯膜分隔开，放入培养箱中培养，通过计数下室的细胞量即可反映细胞的侵袭能力，如下图所示。下列说法正确的是（ ）
A. 培养过程中，添加CO2的目的是维持培养液的pH
B. 为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的抗生素
C. 血清培养液中可能含有某些因子促使肿瘤细胞向营养高的下室移动
D. 进入下室的肿瘤细胞数量越多，说明肿瘤细胞的分裂能力越强
【答案】ABC
【解析】
【分析】分析题意和题图：将待测细胞悬液加入膜上铺有基质胶的上室中，下室为有血清培养液，一段时间后计数下室的细胞量即可反映细胞的侵袭能力，数量越多，则说明肿瘤细胞的侵袭能力越强。
【详解】A、动物细胞培养过程中，添加CO2的目的是维持培养液的pH，A正确；
B、动物细胞培养需要无菌条件，为防止培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的抗生素，B正确；
C、上室含无血清培养液，下室含血清培养液，加入上室的肿瘤细胞一段时间后出现在下室中，说明血清培养液中含有某些因子促使肿瘤细胞向营养高的下室移动，C正确；
D、由题意可知，可通过计数下室的细胞量即可反映细胞的侵袭能力，若进入下室的肿瘤细胞数量越多，说明肿瘤细胞的侵袭能力越强，但不能说明肿瘤细胞的分裂能力越强，D错误。
故选ABC。
19. 融合PCR技术采用具有互补末端的引物，形成具有重叠链的PCR产物，通过PCR产物重叠链的延伸，从而将不同来源的任意DNA片段连接起来。其原理如图所示，据图分析错误的是（ ）
A. 融合PCR的第一步两条链重叠部位可互为另一条链的引物
B. 上述过程中使用的引物P2和P3的碱基需要完全互补配对
C. 设计引物的目的是为了能够从其5'端开始连接脱氧核苷酸
D. 若融合PCR的第二步获得128个融合基因，理论上该过程消耗了256个引物
【答案】BCD
【解析】
【分析】PCR是利用DNA在体外摄氏90°高温时变性会变成单链，低温（经常是50°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。
【详解】A、结合图示可知，融合PCR的第一步两条链重叠部位即互补配对，可互为另一条链的引物，A正确；
B、上述过程中使用的引物P2和P3的碱基不需要完全互补配对，只需要部分碱基互补配对即可，B错误；
C、引物为一段核苷酸，引物与DNA模板链结合后，能够从其3＇端开始连接脱氧核苷酸，开始子链的合成，C错误；
D、若融合PCR的第二步获得了128个融合基因，引物数目和新合成的子链数目相同，即该过程消耗了128×2-2=254个引物，D错误。
故选BCD。
20. 《水平稳基因转移》是指在生物个体间所进行的遗传物质交流的现状，主要发生在微生物中。野生物型大肠菌足够在基础培养基中生长，突变菌株A和突变菌株B由于不能自己合成某种营养素，而不能在基础培养基础上生长。科学工作者利用菌株A和菌株B进行了如下两个实验。实验一：将菌株A和菌株B混合后，涂布于基础培养基础上，结果如图1；实验二：将菌株A和菌株B分别设置于U型管的两端，中间由过滤器隔开。加压或吸力以后，培养液可自由选择流通，但细菌细胞不能通过。经过几次小时候培养后，将菌液A、B分别涂在基础培养基础上，结果如图2。下列推测错误的是（ ）
A. 菌株A和菌株B互为提供所缺乏的营养素
B. 不同菌株间接触后才可能交换遗传物质
C. 混合培养的菌落都能在基础培养基上生长
D. 可以用“水平基因转移”来解释上面描述的现状
【答案】AC
【解析】
【分析】根据题意，突变菌株A和突变菌株B由于不能自己合成某些营养素而不能在基本培养基上生长。实验一中将菌株A和菌株B混合后，涂布于基本培养基上，基本培养基上有菌落产生；实验二中将菌株A和菌株B分别置于U型管的两端，中间由过滤器隔开，培养液可以自由流通，但细菌细胞不能通过，将菌液A、B分别涂布于基本培养基上，培养基上无菌落产生。
【详解】A、综合实验一和二可知，图1培养基上的菌落的产生原因不可能是菌株A、B互相提供营养素产生的，因此推测其可能是A和B混合后产生了新的菌株类型，A错误；
B、由图2看出，将菌株A和菌株B分别置于U型管的两端，中间由过滤器隔开，培养基上无菌落产生，所以不同菌株间接触后才可能交换遗传物质，导致产生了变异，B正确；
C、据图可知，混合培养液中有可在基本培养基上生长的菌株，但不能说明混合培养的菌株都能在基本培养基上生长，C错误；
D、水平基因转移是指差异生物个体之间的基因转移，新菌落的产生可能是菌株A和菌株B发生了基因重组，即水平基因转移，D正确。
故选AC。
三、非选择题：本题包括5个小题，共55分。
21. 橙汁能帮助人体排毒，延缓人体衰老，深受消费者喜爱。但生产过程中感染脂环酸芽孢杆菌，橙汁的品质会受到影响。为优化橙汁生产的质量监控工艺，技术人员设计了如下流程，开展脂环酸芽孢杆菌的筛选和鉴定。请回答：
（1）步骤③将土壤悬浮液稀释了________倍，图中分离纯化微生物的方法是________。培养微生物时，结合对照组证明培养物中无杂菌污染的方法是_________
（2）若将④中分离得到的可疑菌株制成菌悬液，80℃水浴热处理10min，再取0．1mL热处理后的菌液涂布接种到培养基平板上，45℃培养48h。该操作的目的是________。
（3）若对土壤悬浮液中的微生物进行计数，步骤④在3个平板上分别接入0．1mL稀释液，进行适当培养，每隔24h统计一次菌落数目，选取________时的记录作为结果，这样统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，原因是________。
（4）为研究控制脂环酸芽孢杆菌生长的方法，科研人员进行了如下设计：①称取一定量的抑菌剂，配制成不同浓度的抑菌液。②将上图得到的菌株原液稀释。③分别取不同浓度的抑菌液和菌株稀释液，加入到相对应的培养液中形成菌悬液（三种液体均等量）。一段时间后，将菌悬液分别接种到适宜的培养基平板上。经后来论证发现，该设计不够严谨，理由是________。
【答案】（1） ①. 1000 ②. 稀释涂布平板法 ③. 没有接种的培养基上没有菌落生长
（2）分离纯化（用80℃水浴筛选）耐热菌株
（3） ①. 菌落数目稳定 ②. 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落
（4）缺少等量的无菌水＋等量的菌株稀释液的对照组（缺少空白对照组）
【解析】
【分析】微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
【小问1详解】
由图观察可知，步骤③中的稀释梯度分别为10、100、1000倍，即最终将土壤悬浮液稀释了1000倍；图中是将菌液涂布在培养基平板上，所以分离纯化微生物的方法是稀释涂布平板法。培养微生物时，结合对照组证明培养物中无杂菌污染的方法是将未接种的培养基和接种菌液的培养基一同培养，若未接种的培养基上没有菌落生长，接种菌液的培养基上有特定菌落生长，说明培养物中无杂菌污染。
【小问2详解】
将④中分离得到的可疑菌株制成菌悬液，于80℃水浴中热处理10min，目的是用80℃水浴筛选出耐热菌株，再取0.1mL热处理后的菌液涂布接种到培养基平板上，45℃培养48h，目的是分离纯化目的菌。
【小问3详解】
若对土壤悬浮液中的微生物进行计数，每隔 24h 统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果。用稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。
【小问4详解】
实验设计应遵循对照与单一变量等原则，研究控制脂环酸芽孢杆菌生长的方法，上述实验设计缺少空白对照组，即缺少等量的无菌水＋等量的菌株稀释液的对照组，故不够严谨。
22. 双特异性抗体是指一个抗体分子可以与两个不同抗原或同一抗原的两个不同抗原表位相结合，目前最常利用杂交瘤杂交法来制备。长春花是原产于非洲东海岸的野生花卉，其所含的长春碱具有良好的抗肿瘤作用。下图1是某双特异性抗体作用图。图2是科研人员通过杂交一杂交瘤细胞技术（免疫的B淋巴细胞和杂交瘤细胞杂交技术）生产能同时识别癌胚抗原和长春碱的双特异性单克隆抗体的部分过程。请分析回答下列问题：
（1）单克隆抗体的优点是________,对③筛选出的杂交瘤细胞，还需进行________和抗体检测，才能筛选出足够量的既能无限增殖又能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。
（2）图2中①步骤注射癌胚抗原的目的是________。图2方框内需要经过________次筛选，才能获取单克隆杂交一杂交瘤细胞。取一定稀释倍数的杂交瘤细胞悬液加入铺有饲养层细胞的多孔板中，适宜条件下培养并进行阳性检测，阳性检测的原理是________。若每孔中有很多细胞，阳性反应孔中的细胞还需多次稀释培养检测的目的是________。
（3）单克隆杂交一杂交瘤细胞在体外培养时，需要满足的条件是充足的营养，________的环境，适宜的温度、PH、渗透压，和适宜的气体环境等。
（4）与直接使用长春碱相比，将长春碱与双特异性单克隆抗体结合后给药，对人体的副作用更小，原因是________。
【答案】（1） ①. 能准确地识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合，并可大量制备 ②. 克隆化培养
（2） ①. 刺激小鼠产生相应的B淋巴细胞 ②. 2（或两） ③. 抗原与抗体特异性结合 ④. 保证分配到每个孔中的细胞数不超过1个，以获得能产生单一抗体的杂交瘤细胞
（3）无菌、无毒 （4）双特异性单克隆抗体能将抗癌药物定向带到癌细胞所在位置，在原位杀死癌细胞
【解析】
【分析】根据题图分析，双特异性抗体制备流程为，先给小鼠注射特定癌胚抗原使之发生免疫反应，然后获取已经免疫的B淋巴细胞。诱导免疫的B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；再把单克隆杂交瘤细胞与经注射长春碱后从小鼠中获得的免疫的B淋巴细胞再杂交，得到单克隆杂交—杂交瘤细胞，再培养该细胞，最终生产出能同时识别癌胚抗原和长春碱（一种抗癌药物）的双特异性单克隆抗体。
【小问1详解】
单克隆抗体的优点是能准确地识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合，并可大量制备；为选出能产生专一抗体的细胞，要将从HAT培养基上筛选出的细胞稀释液滴入多孔培养板中，使多孔培养板每孔中有一个细胞，然后筛选出专一抗体检测呈阳性的细胞，进行克隆化培养；
【小问2详解】
图2中①步骤注射癌胚抗原的目的是刺激小鼠产生相应的B淋巴细胞；图2方框内至少需要经过2次筛选，先筛选得到杂交-杂交瘤细胞，后筛选出产生所需抗体的杂交—杂交瘤细胞。适宜条件下培养并进行阳性检测，阳性检测的原理是抗原与抗体特异性结合，若每孔中有很多细胞，阳性反应孔中的细胞还需多次稀释培养检测的目的是保证分配到每个孔中的细胞数不超过1个，以获得能产生单一抗体的杂交瘤细胞。
【小问3详解】
动物细胞培养时，需要满足的条件是充足的营养，无菌、无毒的环境，适宜的温度、PH、渗透压，和适宜的气体环境等。
【小问4详解】
双特异性单克隆抗体能将抗癌药物定向带到癌细胞所在位置，在原位杀死癌细胞，对人体的副作用更小
23. 和牛是世界公认的高档肉牛品种，其体型较小，肉质鲜嫩，营养丰富。我国科研人员利用胚胎移植技术，按如图所示流程操作，成功地批量培育了和牛这一优良品种。请回答下列问题：
（1）为了使成熟和牛排出更多的卵子，可以注射________，但只有发育到________期的卵子才能与精子结合。
（2）上述批量培育和牛的过程中用到的工程技术有________、________和胚胎移植等。
（3）移植的胚胎处于________期，移入的甲胚胎能在代孕雌牛子宫中存活的生理基础是________
（4）除图中所示外，胚胎移植技术中胚胎的来源还有________（答出两个即可）。为提高胚胎利用效率，尽快获得数量较多的子代和牛，图中甲环节中，要特别注意将____________分割。
【答案】（1） ①. （外源）促性腺激素 ②. MⅡ（中）
（2） ①. 体外受精 ②. 胚胎分割
（3） ①. 桑葚胚或囊胚 ②. 受体雌牛子宫对外来胚胎基本不发生免疫排斥反应
（4） ①. 转基因技术、体内受精、动物体细胞核移植 ②. 内细胞团均等
【解析】
【分析】分析题图：图中①表示精子的采集；②表示卵母细胞的采集；③表示体外受精过程。通过胚胎工程培育试管牛的过程，包括卵母细胞的采集和培养、精子的采集和获能、体外受精、早期胚胎培养和胚胎移植等过程。
【小问1详解】
用促性腺激素处理雌牛后，可使供体母牛成熟和一次性排出多个卵细胞；卵母细胞需要发育到MⅡ（中）期才能与精子结合。
【小问2详解】
分析题图可知，上述批量培育和牛的过程中用到的工程技术有体外受精、胚胎分割和胚胎移植等。
【小问3详解】
可以将桑葚胚或囊胚期的胚胎精选移植；移入的胚胎能在受体雌牛子宫中存活的生理基础是代孕雌牛子宫对外来胚胎基本不会发生免疫排斥反应。
【小问4详解】
除图中所示外，还通过动物体细胞核移植、转基因技术或体内受精获得早期胚胎进行胚胎移植。为提高胚胎利用效率，尽快获得数量较多的子代和牛，应对胚胎进行胚胎分割处理，该处理过程需特别注意的是要将内细胞团均等分割，否则将影响分割后胚胎的恢复和发育，比如含内细胞团少的部分发育不良或不发育。
24. 水体中的雌激素能使斑马鱼细胞产生E蛋白，激活卵黄蛋白原（vtg）基因（如图1所示）的表达，因此斑马鱼可用于监测环境雌激素污染程度。为了实现可视化监测，科学家将斑马鱼的vtg基因，与人工构建的含萤火虫荧光素酶基因（无启动子）的载体（如图2所示）连接，形成vtg-Luc基因重组载体，成功培育了转基因斑马鱼。图2中Luc表示萤火虫荧光素酶基因，可以催化荧光素氧化产生荧光；Ampr为氨苄青霉素抗性基因，TetR为四环素抗性基因，BamHⅠ、EcRⅠ、HindⅢ、BsrGⅠ为限制酶，→表示转录方向。
（1）为使vtg基因与Luc基因载体形成重组载体并降低“空载”概率，可选用限制酶_______进行双酶切Luc基因载体，其优点是_______。
（2）通过PCR技术获取vtg基因时，需设计合适的引物。依据图1、图2信息，推测引物1包含的碱基序列为_______。
A. 5’-AACTAT-3’B. 5’-TTGATA-3’C. 5’-GAATTCAACTAT-3’D. 5’-AAGCTTAACTAT-3’
（3）若筛选导入vtg-Luc基因重组载体的大肠杆菌，可将大肠杆菌依次放在含有氨苄青霉素、四环素的培养基中培养，筛选_______（选填“能”或“不能”）在含有氨苄青霉素的培养基中生长但_____（选填“能”或“不能”）在含有四环素的培养基中生长的大肠杆菌即为目的菌；若要判断斑马鱼转基因是否成功，可在水体中添加_______进行检测。（编号选填）
①氨苄青霉素 ②雌激素 ③荧光素 ④卵黄蛋白原 ⑤荧光素酶
【答案】（1） ①. EcRI、HindⅢ ②. 防止质粒和目的基因的自身环化和目的基因的反向连接 （2）C
（3） ①. 能 ②. 不能 ③. ②③
【解析】
【分析】基因工程技术的基本步骤：
1、目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成；
2、基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等；
3、将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法；
4、目的基因的检测与鉴定：
（1）分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术；
（2）个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
【小问1详解】
要使vtg基因与Luc基因载体形成重组载体并降低“空载”概率，应选用两种不同的限制酶进行双酶切。观察图2，EcRI和HindⅢ的酶切位点分别位于Luc基因载体的不同位置，用这两种酶双酶切可以满足要求，可以防止质粒和目的基因的自身环化和目的基因的反向连接；
【小问2详解】
依据图1推测引物1是以3’-TTGATA-5’为模板的，并与其互补，所以引物1碱基序列中应该含有5’ -AACTAT-3 ’，以及EcR Ⅰ的识别序列（5’ -GAATTC-3 ’），故引物1包含的碱基序列为5’ -GAATTCAACTAT-3 ’，C符合题意。
故选C。
【小问3详解】
重组载体中含有氨苄青霉素抗性基因，而四环素抗性基因因酶切被破坏，所以导入vtg - Luc基因重组载体的大肠杆菌能在含有氨苄青霉素的培养基中生长，不能在含有四环素的培养基中生长，筛选能在氨苄青霉素培养基中生长，不能在四环素培养基中生长的大肠杆菌即为目的菌；水体中的雌激素能使斑马鱼细胞产生E蛋白，激活卵黄蛋白原（vtg）基因的表达，因此斑马鱼可用于监测环境雌激素污染程度。因为转基因斑马鱼含有萤火虫荧光素酶基因，该酶可以催化荧光素氧化产生荧光，所以若要判断斑马鱼转基因是否成功，可在水体中添加雌激素②和荧光素③进行检测。
25. 图示为利用农杆菌培育转基因植物的基本流程，请据图回答：
（1）经过过程①②形成的重组质粒中，除目的基因外，还必须有启动子、______、______等，其中启动子的作用是_________。
（2）过程③常用_________处理使农杆菌成为感受态细胞。若转基因技术受体细胞为动物受精卵，则是利用______方法将目的基因注入
（3）步骤⑤⑥启动细胞分裂、脱分化、再分化的关键植物激素是__________
（4）可通过_________技术检测试管苗的染色体DNA上是否插入了目的基因，该技术中将温度下降到50℃左右的目的是让_____________________
【答案】（1） ①. 终止子 ②. 标记基因 ③. RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动目的基因转录出mRNA
（2） ①. Ca2+ ②. 显微注射
（3）生长素和细胞分裂素
（4） ①. PCR ②. 两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合
【解析】
【分析】基因工程的基本操作步骤主要包括四步：①目的基因的获取；②基因表达载体的构建；③将目的基因导入受体细胞；④目的基因的检测与表达。其中，基因表达载体的构建是基因工程的核心。
【小问1详解】
质粒作为目的基因的载体，其上必须有启动子启动转录，终止子终止转录，标记基因用来筛选目的基因，复制原点启动复制，酶切位点方便质粒与目的基因相连等；启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动目的基因转录出mRNA。
【小问2详解】
过程③为将重组载体转入农杆菌的过程，常用钙离子处理使农杆菌处于感受态而增大转化的概率；若受体细胞为动物受精卵，一般采用显微注射法将目的基因注入。
【小问3详解】
过程⑤为脱分化形成愈伤组织，过程⑥为再分化形成试管苗，两过程需要调节细胞分裂素和生长素的比例。一般当生长素和细胞分裂素都比较少时，易于过程⑤的进行，而细胞分裂素偏多、生长素偏少，有利于芽的形成，而细胞分裂素偏少、生长素偏多时，易于根的形成。
【小问4详解】
PCR技术可以检测试管苗的染色体DNA上是否插入了目的基因，提取试管苗的DNA，加入相应的引物，PCR后电泳，若能扩增出条带，则说明转入成功；PCR是体外扩增DNA的技术，分为变性（高温解旋）、复性（引物结合）、延伸（子链合成），将温度下降到50℃左右，有利于两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。
研磨提取
加酒精后去杂质
研磨液的NaCl
浓度（ml/L）
沉淀质
量（g）
提取的DNA
浓度（ng/μL）
OD260/
OD280
去杂质
方式
沉淀质
量（g）
纯化的DNA
浓度（ng/μL）
OD260/
OD280
0.14
0.0789
59.5
1.29
离心
0.068
81.5
153
2
0.0409
100.6
1.57
4℃冰箱静置
0.1028
336.4
1.41
限制酶
识别位点
EcRI
5'G↓AATTC3'
Kpn I
5↓GGTACC3'
Hindlll
5'A↓AGCTT3'
SImal
5'CCC↓GGG3'
研磨提取
加酒精后去杂质
研磨液的NaCl
浓度（ml/L）
沉淀质
量（g）
提取的DNA
浓度（ng/μL）
OD260/
OD280
去杂质
方式
沉淀质
量（g）
纯化的DNA
浓度（ng/μL）
OD260/
OD280
0.14
0.0789
59.5
1.29
离心
0.068
81.5
1.53
2
0.0409
100.6
1.57
4℃冰箱静置
0.1028
336.4
1.41
限制酶
识别位点
EcRI
5'G↓AATTC3'
Kpn I
5↓GGTACC3'
Hindlll
5'A↓.AGCTT3'
SImal
5'CCC↓GGG3'