第42讲 基因工程以及生物技术的安全性和伦理问题（专练）-2025年高考生物一轮复习课件+讲义+专练（新教材新高考）

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高考一轮生物复习策略1、落实考点。一轮复习时要在熟读课本、系统掌握基础知识、基本概念和基本原理后，要找出重点和疑点；通过结合复习资料，筛选出难点和考点，有针对地重点复习。2、注重理论联系实际，高三生物的考试并不仅仅是考概念，学会知识的迁移非常重要，并要灵活运用课本上的知识。不过特别强调了从图表、图形提取信息的能力。历年高考试题，图表题都占有比较大的比例。3、一轮复习基础知识的同时，还要重点“攻坚”，突出对重点和难点知识的理解和掌握。这部分知识通常都是学生难于理解的内容，做题时容易出错的地方。分析近几年的高考生物试题，重点其实就是可拉开距离的重要知识点。　4、学而不思则罔，思而不学则殆。这一点对高三生物一轮复习很重要。尤其是对于错题。错题整理不是把错题抄一遍。也不是所有的错题都需要整理。第42讲 基因工程以及生物技术的安全性和伦理问题题型一 基因工程的基本工具1．Sau3AI和BamHI的识别序列及切割位点如表所示。某DNA分子经Sau3AⅠ和BamHⅠ分别切割以后，可形成4个和2个大小不同的片段。下列有关叙述正确的是（    ）A．两种限制酶切割后形成的黏性末端不相同B．能被Sau3AI识别的DNA位点均能被BamHI识别C．该DNA分子上有2个BamHⅠ不能识别但Sau3AⅠ能识别的酶切位点D．该DNA分子经Sau3AⅠ和BamHⅠ共同切割后可形成6个片段2．下列关于 “DNA的粗提取与鉴定”的相关描述，错误的是（　　）A．洋葱中加入适量研磨液，充分研磨、过滤并弃去滤液可以获得DNAB．向溶有DNA的NaCl溶液中加入适量二苯胺，沸水浴后溶液呈蓝色C．提取DNA时加入酒精，使溶于酒精的蛋白质等物质溶解D．可以选择香蕉、猪肝、菠菜等作为实验材料提取DNA3．DNA在生活中有多方面的应用。下列关于DNA粗提取、扩增和电泳鉴定叙述正确的是（    ）A．利用DNA在酒精中溶解度较大的原理来提取DNAB．PCR体系中加入dNTP可为DNA扩增提供原料和能量C．DNA电泳鉴定时，可加入二苯胺使DNA显色再观察条带D．DNA的片段大小与在琼脂糖凝胶电泳中的迁移距离呈正相关题型二 基因工程的基本操作程序4．PCR扩增的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定。下列说法错误的是（    ）A．DNA分子在电场的作用下会向着与它所带电荷相反的电极移动B．在凝胶中，DNA分子迁移的速率与凝胶浓度、DNA分子的大小和构象有关C．凝胶中的DNA分子可直接在波长为300nm的紫外灯下被检测出来D．向微量离心管中添加反应组分时，每吸取一种试剂都必须更换移液器上的枪头5．某种嗜热细菌，其栖息的热泉水温可达90℃左右，若该细菌DNA分子共有N个碱基对，其中胞嘧啶脱氧核苷酸M个，则下列关于嗜热细菌的叙述错误的是（    ）A．该细菌DNA聚合酶可以应用于PCR技术B．该细菌DNA分子中的每个磷酸基团都与2个脱氧核糖相连C．该细菌DNA分子的碱基中A+T/G+C的比例可能较高D．该细菌DNA分子第n次复制时需要游离的腺嘌呤脱氧核苷酸（N-M）×（2n-1）个6．下列关于生物技术说法正确的是（　　）A．细胞产物的工厂化生产过程利用了植物组织培养技术，体现了植物细胞的全能性B．利用单克隆抗体制备的ADC进行癌症的治疗，主要是单克隆抗体能够杀伤癌细胞C．胚胎干细胞具有发育的全能性，体外可以诱导产生人体所需的各种组织器官D．制备膀胱生物反应器过程中，通常将基因表达载体导入到膀胱上皮细胞中题型三 基因工程的应用7．生物制药是生物技术的综合利用，从生物体、生物组织、细胞和体液中分离出有效成分，制备用于预防、治疗和诊断的产品。如令，细胞工程在生物制药工业发挥着不可替代的作用，下列相关关于细胞工程制药的叙述，错误的是（　　）A．乳腺生物反应器是将药用蛋白基因的表达载体直接导入生物的乳腺细胞中，而后在转基因动物的乳汁中获得人类需要的药用蛋白B．将能够分泌特异性抗体的B淋巴细胞与能够无限增殖的骨髓瘤细胞融合筛选，形成能产生特定抗体的杂交瘤细胞，从而获得单克隆抗体C．利用植物细胞培养技术获得植物细胞次生代谢物，不会大量破坏植物资源，对于环境保护具有重要意义D．利用转基因植物也能生产疫苗，以植物作为生物反应器，将携带抗原基因的载体导入受体细胞，在植物体内表达和修饰这类特定抗原，成为具有免疫活性的蛋白质8．据统计，从20世纪90年代至今，全世界包括基因制药在内的生物技术药物的销售额以年均30%的速度增长，生物制药已成为21世纪的朝阳产业，下列有关说法不正确的是（    ）A．我们可以利用转基因技术使哺乳动物本身变成“批量生产药物的工厂”B．对于基因制药，我们应该科学地认识和评估，保障公众的知情权C．利用转基因技术还可以进行基因治疗，现在技术已经完全成熟D．由于转基因生物的安全问题，国家应建立相应的评估及预警机制9．“黑寡妇”蜘蛛吐出的丝强过钢丝，用其吐出的丝织成的布比制造防弹背心所用纤维的强度高很多。科学家把“黑寡妇”蜘蛛体内蜘蛛丝蛋白基因，导入到山羊细胞内，培育出转基因“蜘蛛羊”乳腺生物反应器，获得了坚韧程度极强的蜘蛛丝蛋白，取名为“生物钢”，操作过程如下。下列说法错误的是（　　）  A．丝蛋白基因会伴随受体细胞分裂而自我复制B．可用PCR 等技术检测目的基因是否表达C．“蜘蛛羊”乳腺生物反应器生产的“生物钢”不会造成环境污染D．乳腺生物反应器具有产量高、成本低、产品质量好和易提取等优点题型四 蛋白质工程10．研究发现，胰岛素进入血液循环后容易被降解，糖尿病患者需要反复注射胰岛素才能达到治疗效果。科研人员借助蛋白质工程改变了胰岛素中的某些氨基酸，提高了胰岛素在患者体内的稳定性，延长了其作用时间。下列有关叙述错误的是（　　）A．蛋白质工程的实质是在DNA分子水平上进行设计和改造B．氨基酸序列的差异是影响胰岛素在患者体内是否稳定的原因之一C．改造胰岛素应首先从设计胰岛素基因中的脱氧核苷酸序列出发D．蛋白质工程难度很大与蛋白质发挥功能必须依赖于正确的高级结构有关11．单克隆抗体可用于癌症治疗，但通过鼠杂交瘤细胞获得的鼠源单克隆抗体进入人体会作为抗原引起人体的免疫反应。科学家利用蛋白质工程对鼠源单克隆抗体进行改造，生产出含有人源性肽段的鼠—人嵌合抗体。下列说法错误的是（　　）A．生产单克隆抗体不能直接培养B淋巴细胞，因为其在体外培养条件下不能无限增殖B．将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞混合，诱导融合的细胞即为能产生单克隆抗体的杂交瘤细胞C．上述获得鼠—人嵌合抗体的研究中需对基因进行操作D．经过改造的鼠—人嵌合抗体可降低人对该抗体的免疫反应12．蛋白质工程是研究蛋白质结构和功能的重要手段，并将广泛应用于医药及工农业生产中，下列叙述中错误的是（    ）A．蛋白质工程可以制造出自然界中不存在的蛋白质B．通过蛋白质工程制造蛋白质可以不遵循中心法则C．蛋白质工程常要借助计算机来建立三维结构模型D．运用蛋白质工程可以改变天然蛋白质的空间结构题型五 生物技术的安全性和伦理问题13．生物技术的安全性和伦理问题是社会关注的热点。下列叙述错误的是（　　）A．我国已申明在任何情况下，不发展、不生产、不储存生物武器B．治疗性克隆的目的是为了获得治疗所用的克隆细胞，需要在严格的监管下进行C．反对设计试管婴儿的原因之一是有人滥用此技术选择性设计婴儿D．转基因植物进入自然生态系统都会因具有较强的“选择优势”而严重影响生物多样性14．转基因产品的安全性一直是人们关注的焦点。下列哪项是对待转基因技术的理性态度（　　）A．转基因农作物对于解决粮食、能源等问题起了积极作用，同时也存在一定风险B．转基因技术是按照人们的意愿对生物进行的设计，不存在负面影响C．大量引入国外转基因作物与本地近缘作物品种杂交D．转基因技术如果被恐怖分子利用将可能导致人类灭绝，应停止转基因研究15．生物安全一般是指由现代生物技术开发和应用对生态环境和人体健康造成的潜在威胁，及对其所采取的一系列有效预防和控制措施。下列做法与我国政府相关法规或主张不符的是（　　）A．全面禁止和彻底销毁生物武器B．收集他国的生物资源遗传信息C．销售转基因农产品应有明确标注D．禁止非医学需要的胎儿性别鉴定一、单选题1．CRISPR/Cas9是一种高效的基因编辑技术，Cas9基因表达的Cas9蛋白像一把“分子剪刀”，在单链向导RNA（SgRNA）引导下，切割DNA双链以敲除目标基因或插入新的基因。CRISPR/Cas9基因编辑技术的工作原理如图所示。据图分析，下列叙述正确的是（    ）A．构建CRISPR/Cas9重组质粒，需要用到的工具酶有限制酶、DNA连接酶和质粒B．将重组质粒导入大肠杆菌细胞的方法是农杆菌转化法C．SgRNA与Cas9蛋白形成复合体，该复合体的Cas9蛋白可识别并与目标DNA序列特异性结合D．利用基因编辑技术进行特定基因敲除，可以通过DNA分子杂交技术进行检测2．反向PCR是一种通过已知序列设计引物对未知序列进行扩增的技术，其过程如下图所示。下列叙述正确的是（　　）A．应选择引物2和引物3进行PCR扩增B．设计的引物中GC碱基含量越高，变性的温度越高C．PCR产物是包含所有已知序列和未知序列的链状DNA分子D．整个过程需用到限制酶、DNA连接酶、耐高温DNA聚合酶及逆转录酶3．如图为DNA半保留复制相关示意图。DNA聚合酶不能催化DNA新链从头合成，因而需先借助引物酶以DNA为模板合成RNA引物，再在引物的3′-OH末端聚合脱氧核苷酸。当DNA整条单链合成完毕或冈崎片段相连后，DNA聚合酶再把RNA引物去掉，填补脱氧核苷酸。下列说法正确的是（    ）  A．解旋酶断开氢键，其移动方向与滞后链的延伸方向相同B．DNA在体内复制和体外复制（PCR）过程中均为边解旋边复制C．DNA聚合酶既能催化磷酸二酯键形成也能催化磷酸二酯键断裂D．在PCR过程中，除耐高温的DNA聚合酶外，还需加入DNA连接酶4．某课题组为得到青蒿素产量高的新品系，将青蒿素合成过程的某一关键酶基因fps在野生青蒿中过量表达，其过程如图所示。下列有关叙述正确的是（　　）A．经图示过程得到的fps基因不含启动子和终止子B．酶1、酶2和酶3作用的化学键不都是磷酸二酯键C．图中含fps基因的DNA片段中不含有酶2的识别序列D．将fps基因导入青蒿植株中只能用农杆菌转化法5．某种二倍体植物的P1和P2植株杂交得F1，F1自交得F2。对个体的DNA进行PCR检测，产物的电泳结果如图所示，其中①～⑧为部分F2个体，上部2条带是一对等位基因的扩增产物，下部2条带是另一对等位基因的扩增产物，这2对等位基因位于非同源染色体上。下列叙述错误的是（    ）A．这两对等位基因遵循自由组合定律B．理论上位于下部等位基因所含碱基对相对于上部等位基因少C．还有一种F2个体的PCR产物电泳结果有3条带D．①②个体均为杂合体，F2中③所占的比例小于⑤6．某同学对质粒DNA进行限制酶切割时，发现DNA完全没有被切割，分析可能的原因并提出解决方法。下列相关叙述错误的是（　　）A．限制酶失活，更换新的限制酶B．酶切温度过高，适当降低温度C．限制酶用量过少，适当增加酶的用量D．质粒DNA突变，更换正常质粒DNA7．免疫PCR是对微量抗原的一种检测方法。下图是利用该技术检测牛乳中微量抗生素的流程图：首先将抗体1固定在微板上，冲洗后加入待检的牛乳，再加入DNA标记的抗体2，进行PCR扩增，最后进行电泳检测。下列相关叙述错误的是（    ）A．PCR扩增获得产物的量越多，电泳后距离点样孔越近B．图示过程所需抗体无需对高温有较强的耐受性C．图示过程中三次冲洗的目的均不同D．图示抗原检测过程发生两次抗原与抗体的结合8．利用pBR322质粒将人胰岛素基因导入大肠杆菌（如图1）可进行工业化生产。为检验基因表达载体是否成功导入，将处理后的大肠杆菌接种在培养基上，长出的四个菌落用无菌纸分别盖印至四种不同的培养基上（如图2，菌落相对位置不变），菌落生长状况如图所示，则成功导入基因表达载体的菌落是（    ）A．菌落1、2、3 B．菌落1C．菌落2、3 D．菌落49．重组人干扰素α-1b是我国批准生产的第一个基因工程药物，利用基因工程获得工程菌的过程如图所示。步骤①～④中，不发生碱基互补配对的是（    ）A．① B．② C．③ D．④10．野生型小鼠含有Gata3基因，科研人员将GFP基因插入Gata3基因编码区的下游，获得Gata3-GFP融合基因并将其转入小鼠受精卵，获得4只小鼠。设计引物1和引物2，用PCR技术鉴定这4只小鼠的基因型，相关基因及PCR产物电泳结果如图所示。下列分析正确的是（    ）  A．插入后，由不同的启动子驱动Gata3基因与GFP基因转录B．融合基因表达时会按顺序依次合成GFP蛋白和Gata3蛋白C．2号小鼠为融合基因的纯合子，4号小鼠为野生型小鼠D．若用引物1、3，则更易区分融合基因的纯合子和杂合子二、多选题11．反向PCR是一种通过已知序列设计引物对未知序列进行扩增的技术，其过程如下图所示。下列叙述错误的有（　　）A．应选择引物1和引物4进行PCR扩增B．设计的引物中GC碱基含量越高，退火温度越低C．PCR产物是包含所有已知序列和未知序列的环状DNA分子D．整个过程需用到限制酶、DNA连接酶、耐高温DNA聚合酶及逆转录酶12．某质粒中氨苄青霉素抗性基因（AmpR），四环素抗性基因（TetR）和多种限制酶的识别位点如图所示。下列叙述正确的是（　　）A．基因工程的载体也可选用噬菌体和动植物病毒B．质粒和目的基因用ScaI和HindⅢ切割，用四环素进行筛选C．质粒和目的基因用SalⅠ和SphⅠ切割，用氨苄青霉素进行筛选D．质粒和目的基因用ScaⅠ和PUuⅠ切割，用四环素进行筛选13．如图是将目的基因导入大肠杆菌内制备“工程菌”的示意图，其中引物1-4在含有目的基因的DNA上的结合位置如甲图所示，限制酶BamHI、EcoRI、HindIII在质粒上的识别位点如乙图所示。以下说法中错误的是（    ）A．PCR过程完成4轮循环，理论上至少需加入引物28个B．若已经合成了甲图所示4种引物，应选择引物2和3扩增目的基因C．过程①中应使用限制酶BamHI切割质粒D．对于转化失败的大肠杆菌及其培养基应进行灭菌处理，以防其污染环境14．基因工程在社会生产、生活及科研等方面有着广泛的应用。运用基因工程技术可培养优质、高产、抗性好的农作物及畜、禽新品种，培养出具有特殊用途的动、植物，还可应用于生产药物和器官等。如图所示为利用基因工程培育出转基因鱼、转基因牛、抗虫棉等的过程。下列相关叙述正确的是（    ）A．应用①中，药用蛋白基因需与乳腺蛋白基因的启动子共同构建表达载体B．应用②中，可通过PCR技术检测棉花的染色体DNA上是否插入抗虫基因C．应用③中，将生长激素基因导入鲤鱼受精卵最常用的方法是农杆菌转化法D．应用④中，调节因子的作用可能是调控猪的某些器官组织细胞的抗原不表达15．下列对于基因工程所需基本工具的叙述，正确的是（    ）A．用限制酶SpeⅠ（—A↓CTAGT—）切割产生的DNA片段和限制酶XbaⅠ（—T↓CTAGA—）切割产生的DNA片段不可以相连接B．用限制酶EcoRV（—GAT↓ATC—）切割产生的DNA片段和限制酶SmaⅠ（—CCC↓GGG—）切割产生的DNA片段可以相连接C．DNA连接酶和DNA聚合酶连接的是同一化学键，但它们催化底物不同D．培育转基因抗虫水稻，可以选用质粒或者植物病毒作为运载体三、非选择题16．镰状细胞贫血是一种在地中海地区发病率较高的单基因遗传病，是由位于人类6号染色体上的血红蛋白基因发生隐性突变导致的，纯合子患者多数在幼年时期因红细胞严重溶血而亡。某夫妻双方都为该致病基因的携带者，为了生下健康孩子，每次妊娠早期都进行产前诊断。下图为这对夫妇及腹中孩子核酸分子杂交诊断的结果示意图。请回答下列问题：  (1)由图中可知，正常基因B有三个酶切位点，由于发生了 导致突变基因b上只有两个酶切位点。凝胶电泳分离酶切片段，与探针杂交后可显示出不同的带谱。与图中正常基因模板链杂交的碱基对应序列为 。(2)根据凝胶电泳带谱分析，腹中胎儿的基因型为 。(3)若通过基因治疗将正常的血红蛋白基因导入患者的骨髓造血干细胞将有望彻底治愈镰状细胞贫血。某科研团队设想运用重叠延伸PCR技术来实现对致病基因的定点诱变，原理如图所示：  ①PCR过程中需要的物质有DNA模板、引物、 （至少写出两个）。②该过程共用到4种引物，引物B的突起处的碱基应设计为 （假设引物为单链DNA，且上方这条链为模板链）。③在第一阶段获得两种具有重叠片段DNA的过程中，两个反应系统中均进行一次复制，共产生 种DNA分子。请分析该阶段两个反应系统必须分开进行的原因是 。④第二阶段PCR4反应系统选择的引物为 。17．原核生物基因表达的调控一般是通过操纵子机制实现的。大肠杆菌的乳糖操纵子由调控序列和 3 个结构基因组成，3 个基因表达的酶在乳糖代谢中有不同分工。请回答下列问题：(1)图 1 所示结构 P 的单体是 ，过程①产生的 mRNA （选填“需要”或“不需要”）通过核孔进入细胞质。(2)图 2 所示RNA 聚合酶与 DNA 一个启动部位结合后， （选填“能”或“不能”）启动多个基因的转录。mRNA2 中含有 个起始密码子。(3)当大肠杆菌培养基中仅有葡萄糖而没有乳糖时，会发生图 1 所示的调控过程，大肠杆菌阻止乳糖代谢所需酶类基因表达的机制是 ，从而实现在转录水平上抑制结构基因的表达。(4)分析图 2，当培养基中只有乳糖时，大肠杆菌中结构基因表达的机制是：乳糖与阻遏蛋白结合，使 改变而不能与操纵基因（O）结合，此时细菌细胞中 cAMP 含量升高，cAMP 与某种物质的二聚体结合到P 上游识别位点上，通过招募 激活乳糖操纵子的转录， 使结构基因正常表达。图 1 和图 2 的乳糖代谢酶的表达调控意义是 。(5)体外培养时，β-半乳糖苷酶能将培养基中 X-gal 分解产生蓝色物质。大肠杆菌在添加 X-gal的培养基上生长的菌落颜色符合预期的组别是 。1．（2024·福建·高考真题）病毒感染初期，机体会分泌干扰素并作用于细胞受体IFNAR来应对感染。麻疹是由麻疹病毒感染引起的急性传染病。已知人白细胞分化抗原46（hCD46）是麻疹病毒入侵细胞的主要受体，小鼠没有该受体，科研人员构建hCD46转基因小鼠用于相关研究，部分流程如图所示。回答下列问题：(1)利用PCR技术获取目的基因hCD46，复性温度下发生的扩增过程是 。(2)将hCD46接入质粒应选用的限制酶组合是 。为提高转基因效率，同时避免标记基因进入胚胎体内，应选用 限制酶组合将重组质粒变为线性DNA。(3)为获取大量胚胎用于移植，可用激素处理小鼠a，使其 。将胚胎移植到小鼠c的子宫中，应选用桑葚胚的原因是 。(4)利用PCR技术对子代小鼠进行hCD46基因检测，应设置不加DNA模板的对照组，目的是 。(5)若能进一步构建既表达hCD46受体又敲除IFNAR基因的小鼠，则该小鼠对麻疹病毒具有高易感性，原因是 。2．（2024·江苏·高考真题）为了高效纯化超氧化物歧化酶（SOD），科研人员将ELP50片段插入pET-SOD构建重组质粒pET-SOD-ELP50，以融合表达SOD-ELP50蛋白，过程如图1。其中，ELP50是由人工合成的DNA片段，序列为：限制酶a识别序列-（GTTCCTGGTGTTGGC）50-限制酶b识别序列，50为重复次数。请回答下列问题：  (1)步骤①双酶切时，需使用的限制酶a和限制酶b分别是 。(2)步骤②转化时，科研人员常用 处理大肠杆菌，使细胞处于感受态；转化后的大肠杆菌采用含有 的培养基进行筛选。用PCR技术筛选成功导入pET-SOD-ELP50的大肠杆菌，应选用的一对引物是 。(3)步骤③大肠杆菌中RNA聚合酶与 结合，驱动转录，翻译SOD-ELP50蛋白。已知蛋白质中氨基酸残基的平均相对分子质量约为0.11kDa，将表达的蛋白先进行凝胶电泳，然后用SOD抗体进行杂交，显示的条带应是 （从图2的“A~D”中选填）。  (4)步骤④为探寻高效纯化SOD-ELP50蛋白的方法，科研人员研究了温度、NaCl对SOD-ELP50蛋白纯化效果的影响，部分结果如图3。  （ⅰ）20℃时，加入NaCl后实验结果是 。（ⅱ）100℃时，导致各组中所有蛋白都沉淀的原因是 。（ⅲ）据图分析，融合表达SOD-ELP50蛋白的优点有 。3．（2024·重庆·高考真题）有研究者构建了H基因条件敲除小鼠用于相关疾病的研究，原理如图。构建过程如下：在H基因前后均插入LX序列突变成h基因（仍正常表达H蛋白），获得Hh雌性小鼠；将噬菌体的G酶基因插入6号染色体上，获得G+G-雄鼠（G+表示插入，G_表示未插入G酶基因）(1)以上述雌雄小鼠为亲本，最快繁殖两代就可以获得H基因条件敲除小鼠（hhG+G-和hhG+G+）。在该过程中，用于繁殖F1的基因型是 。长期采用近亲交配，会导致小鼠后代生存和生育能力下降，诱发这种情况的遗传学原因是 。在繁殖时，研究人员偶然发现一只G+G-不表达G酶的小鼠，经检测发现在6号和8号染色体上含有部分G酶基因序列，该异常结果形成的原因是 。(2)部分小鼠的基因型鉴定结果如图2，③的基因型为 。结合图1的原理，若将图2中所有基因型的小鼠都喂食TM试剂一段时间后，检测H蛋白水平为0的是 （填序号）。(3)某种病的患者在一定年龄会表现出智力障碍，该病与H蛋白表达下降有关（小鼠H蛋白与人的功能相同）。现有H基因完全敲除鼠甲和H基因条件敲除鼠乙用于研究缺失H蛋白导致该病发生的机制，更适合的小鼠是 （“甲”或“乙”），原因是 。4．（2024·重庆·高考真题）大豆是重要的粮油作物，提高大豆产量是我国农业领域的重要任务。我国研究人员发现，基因S在大豆品种DN（种子较大）中的表达量高于品种TL（种子较小），然后克隆了该基因（两品种中基因S序列无差异）及其上游的启动子序列，并开展相关研究。(1)基因S启动子的基本组成单位是 。(2)通过基因工程方法,将DN克隆的“启动子D+基因S”序列导入无基因S的优质大豆品种YZ。根据题19图所示信息（不考虑未标明序列）判断构建重组表达载体时，为保证目标序列的完整性，不宜使用的限制酶是 ；此外，不宜同时选用酶SpeⅠ和XbaⅠ。原因是 。(3)为验证“启动子D+基因S”是否连接在表达载体上，可用限制酶对重组表达载体酶切后进行电泳。电泳时，对照样品除指示分子大小的标准参照物外，还应有 。经验证的重组表达载体需转入农杆菌，检测转入是否成功的技术是 。(4)用检测后的农杆菌转化品种YZ所得再生植株YZ-1的种子变大。同时将从TL克隆的“启动子T+基因S”序列成功导入YZ，所得再生植株YZ-2的种子也变大，但小于YZ-1。综合分析，大豆品种DN较TL种子大的原因是 。5．（2024·贵州·高考真题）研究者用以蔗糖为唯一碳源的液体培养基，培养真菌A的野生型（含NV基因）、突变体（NV基因突变）和转基因菌株（转入NV基因），检测三种菌株NV酶的生成与培养液中的葡萄糖含量，结果如表所示（表中“+”表示有，“—”表示无）。回答下列问题。(1)据表可推测 诱导了NV基因表达。NV酶的作用是 。检测NV酶活性时，需测定的指标是 （答出1点即可）。(2)表中突变体由T-DNA随机插入野生型菌株基因组DNA筛选获得。从野生型与突变体中分别提取基因组DNA作为模板，用与 （选填“T-DNA”或“NV基因”）配对的引物进行PCR扩增。若突变体扩增片段长度 （选填“>”“=”或“