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东北育才学校科学高中部2023-2024学年高二下学期期中考试生物试卷
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这是一份东北育才学校科学高中部2023-2024学年高二下学期期中考试生物试卷，共16页。试卷主要包含了选择题，非选择题等内容，欢迎下载使用。
时间：75分钟 满分：100分 命题、校对：耿迎俊 孙语晨
一、选择题：本题共15小题，每小题2分，共30分。在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的。
1．以下是以泡菜坛为容器制作泡菜时的4个处理：①沸盐水冷却后再倒入坛中；②盐水需要浸没全部菜料；③盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水；④检测泡菜中亚硝酸盐的含量。下列说法正确的是
A．①主要是为了防止菜料表面的醋酸杆菌被杀死
B．②的主要目的是用盐水杀死菜料表面的杂菌
C．③是为了使气体只能从泡菜坛排出而不能进入
D．④可检测到完整发酵过程中亚硝酸盐含量逐渐降低
2．传染性早熟病毒（IPV）是一种导致罗氏沼虾性早熟和生长缓慢的新型病毒，主要侵染罗氏沼虾的神经组织。研究人员利用虾类神经细胞系培养技术来研究IPV病毒与宿主细胞的互作情况，如图是部分培养过程。下列说法正确的是
A．IPV病毒与其宿主细胞的代谢类型均为异养需氧型
B．乙过程加入木瓜蛋白酶可将虾类神经组织分散成单个细胞
C．丁过程会出现悬浮或贴壁生长的细胞，可以直接采用离心法进行收集
D．为避免培养过程中杂菌污染，丁、戊过程培养瓶盖必须旋紧以防漏气
3．将蝌蚪肠细胞的细胞核移植到去核的蛙卵中，形成重建的“合子”。有些“合子”发育成正常的蝌蚪，而单独培养肠细胞却不能发育成蝌蚪。下列叙述错误的是
A．肠细胞不能表达全能性是受某些物质的限制
B．“合子”第一次分裂后形成的细胞已失去全能性
C．“合子”发育成正常蝌蚪的过程中伴随着细胞分化
D．细胞核具有全能性是由于其含有该物种的全套基因
4．大多数哺乳动物的晚期桑葚胚分割后，分离的卵裂球仍具有调整发育的能力，重新致密化使卵裂球重新分布而发育至囊胚。该调节能力随发育进程逐渐减弱甚至消失。下列说法错误的是
A．胚胎分割可看作无性繁殖或克隆的方法
B．卵裂过程中所需营养主要来源于培养液
C．桑葚胚及囊胚的内细胞团细胞具有发育的全能性
D．囊胚期的细胞出现了细胞分化，但遗传物质未发生改变
5．将马铃薯去皮切块，加水煮沸一定时间，过滤得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液来这里 全站资源一元不到！中加入一定量蔗糖和琼脂，用水定容后灭菌，得到M培养基。M培养基可用于真菌a的筛选，某同试卷源自 每日更新，汇集全国各地小初高最新试卷。学将获得的真菌a利用如图的方式进行稀释，统计甲、乙，丙三个平板中的菌落数分别是110、140和149。下列分析正确的是
A．若采用血细胞计数板直接对a培养液进行计数，计数的结果为活菌数
B．若在培养真菌a的培养基中添加一定量的青霉素，可抑制细菌的繁殖
C．选取甲、乙、丙三个培养基的目的是排除无关变量对实验的干扰
D．根据三个平板中的菌落数可推算培养液中真菌a的密度为1.33×107个/mL
6．下图为不同限制性内切核酸酶识别的序列及切割位置（箭头所指），下列叙述错误的是
A．图示4种限制酶均不能够识别和切割RNA分子内的核苷酸序列
B．若DNA上的碱基随机排列，Nt I限制性核酸内切酶切割位点出现频率较其他三种限制性核酸内切酶高
C．使用两种限制酶同时处理质粒和含目的基因的外源DNA可防止二者发生自身环化
D．用酶Bgl II切出的目的基因与酶BamH I切割的质粒重组后，不能再被这两种酶切开
7．如图表示植株A（杂合子Aa）和植株B培育植株①②③④⑤的过程，下列说法正确的是
A．培育植株①的过程为单倍体育种，获得的植株为纯合子
B．选择植物的愈伤组织进行诱变处理获得优质的突变体，未体现细胞的全能性
C．需要通过植物组织培养技术获得的植株只有①③④
D．植株①②④⑤与植株A基因型相同的概率分别是0、0、1、0（不考虑基因突变）
8．植物细胞工程在农业、医药工业等方面有着广泛的应用，相关叙述正确的是
A．细胞产物的工厂化生产主要是利用促进细胞生长的培养条件，提高单个细胞中次生代谢物的含量
B．植物顶端分生组织附近的病毒很少，甚至无病毒，因此人们为了获得抗病毒苗常常利用茎尖进行植物组织培养
C．利用花药离体培养获得玉米幼苗，直接从中选择出具有优良性状的个体，这样能够极大的缩短育种年限
D．快速繁殖花卉的过程中，诱导愈伤组织期间一般不需要光照，此时细胞代谢类型为异养需氧型
9．RNA干扰技术是指小分子双链RNA（dsRNA）可以特异性地降解或抑制同源mRNA表达，从而抑制或关闭特定基因表达的现象，下图是其作用机制，其中Dicer是具有特殊功能的物质，RISC是一种复合体。下列有关分析错误的是
A．siRNA和dsRNA分子中的嘧啶数量等于嘌呤数量
B．Dicer和RISC断裂的化学键相同，都是磷酸二酯键
C．RISC能够将mRNA剪切，最可能依赖于RISC中的蛋白质
D．RNA干扰技术通过抑制转录过程实现对特定基因表达的抑制
10．为使玉米获得抗除草剂性状，科研人员进行了相关操作(如图所示)。含有内含子的报告基因不能在原核生物中正确表达，其正确表达产物能催化无色物质K呈现蓝色。转化过程中愈伤组织表面常残留农杆菌，会导致未转化的愈伤组织可能在含除草剂的培养基中生长。下列叙述错误的是
A．T-DNA可将基因G转移并整合到愈伤组织细胞的染色体DNA上
B．利用物质K和抗生素进行筛选1，可获得农杆菌的蓝色菌落
C．利用物质K和除草剂进行筛选2，更易于获得抗除草剂的转基因植株
D．愈伤组织重新分化为芽、根等器官的过程中，需要添加植物激素
11．通过设计引物，运用PCR技术可以实现目的基因的定点诱变。下图是获取突变基因的过程，其中引物1序列中含有一个碱基T不能与目的基因片段配对，但不影响引物与模板链的整体配对，反应体系中在目的基因两端的引物中分别设计增加限制酶a和限制酶b的识别位点。下列有关叙述错误的是
A．限制酶a和限制酶b的识别序列应分别增加至引物1和引物2的5'端
B．通过两种限制酶将扩增出的含突变位点的目的基因切割下来有利于其定向插入载体
C．第3轮PCR结束后，两条链完全等长的且含有突变碱基对的DNA分子有1个
D．PCR的一轮循环一般可分为变性、复性、延伸三步，其中延伸的温度高于复性的温度
12．下图表示pBR322质粒和人生长激素基因所在片段的结构信息，将二者构建的重组质粒导入受体菌并进行筛选。下列叙述错误的是
A．应选择的限制性内切核酸酶组合是酶F和酶G
B．只用酶F切割后的质粒，含有2个游离的磷酸基团
C．用含氨苄青霉素的培养基筛选出的为含重组质粒的受体菌
D．同时用三种限制性核酸内切酶处理图中质粒，充分酶切后可得到4个DNA片段
13．CRISPR/Cas9系统主要由向导RNA（SgRNA）和Cas9蛋白两部分组成，SgRNA可引导Cas9蛋白到特定基因位点进行切割，其机制如图所示。下列说法正确的是
A．SgRNA通过碱基互补配对原则识别目标DNA分子，Cas9蛋白的功能与DNA连接酶相似
B．若要利用CRISPR/Cas9技术将一个基因从目标DNA分子上去除，通常需设计两个序列不同的SgRNA
C．CRISPR/Cas9技术编辑基因有时会因SgRNA错误结合而出现“脱靶”现象，一般SgRNA序列越短，脱靶率越低
D．向导RNA可以在逆转录酶的催化下合成，合成的原料包括四种核糖核苷酸
14．实时荧光定量PCR简称qPCR，灵敏度高特异性好，是目前检测微小残留病变的常用方法。将荧光标记的Taqman探针与待测样本DNA混合，当探针完整时，不产生荧光。在PCR过程中，与目的基因结合的探针被TaqDNA聚合酶水解，R与Q分离后，R发出的荧光可被检测到在特定光激发下发出荧光（如图所示），随着循环次数的增加，荧光信号强度增加，通过实时检测荧光信号强度，可得Ct值（该值与待测样本中目的基因的个数呈负相关）。下列相关叙述正确的是
A．每个模板DNA分子含有4个游离的磷酸基团
B．在反应过程中，需要ATP为新链的合成提供能量C．做qPCR之前，需要先根据目的基因的核苷酸序列合成引物和Taqman探针
D．荧光信号达到设定阈值时经历的循环数越少，说明含有病变基因的概率越小
15．黑曲霉是一种丝状真菌，其代谢产物柠檬酸是广泛应用的一种食品添加剂。下图是食品工业以红薯粉为原料经黑曲霉发酵生产柠檬酸的简要流程图。下列叙述正确的是
A．黑曲霉与生产果醋时所用主要微生物的代谢类型相同
B．黑曲霉是一种霉菌，培养该菌种时应将培养基PH调节至中性
C．发酵罐内接种的是黑曲霉的纯培养物，所以发酵罐不需要严格灭菌
D．若发酵罐C中的原料为大豆粉，可利用黑曲霉水解大豆中的淀粉制成酱油
二、选择题：本题共5小题，每小题3分，共15分。在每小题给出的四个选项中，有一项或多项是符合题目要求的。全部选对得3分，选对但选不全得1分，有选错得0分。
16．安巴韦单抗/罗米司韦单抗注射液是我国首个全人源抗新冠病毒特效药，下图是一种制备抗新冠病毒全人源单克隆抗体的主要技术流程。相关叙述正确的是
A．过程a中，需要使用限制酶和DNA连接酶构建基因表达载体
B．过程b中，常用选择培养基筛选能产生特定抗体的杂交瘤细胞
C．过程c中，需要提供葡萄糖等营养物质、O2和CO2等气体
D．使用全人源单抗治疗新冠可以大大降低异源抗体对人体的副作用
17．某研究团队利用甲基化酶、去甲基化酶以及基因编辑技术增加了两个父系基因组印记控制区域的甲基化，以及母系控制区域的5个去甲基化，再将一个极体注入经修饰的卵母细胞，然后经早期胚胎培养后进行胚胎移植，成功培育出可育的孤雌小鼠，部分过程如下图所示。相关叙述错误的是
A．甲基化会关闭基因的活性，对某些基因进行去甲基化后该基因可正常表达
B．“极体”注入“修饰后的次级卵母细胞”后，可通过电融合法使两细胞融合
C．胚胎移植前，需对供体和受体进行免疫检查，避免发生免疫排斥反应
D．“孤雌小鼠”的诞生过程没有精子参与，其基因型与提供卵母细胞的雌鼠相同
18．下表为5种限制酶的识别序列及切割位点，下图为某种质粒和目的基因，箭头所指为限制酶酶切位点。现要将图中的目的基因定向插入到质粒中，以制备转基因植株。下列说法正确的是
A．BamHI和Nhe I切割形成相同的黏性末端
B．用EcRI和HindⅢ切割质粒，有助于目的基因的定向插入
C．在目的基因和NheI的识别位点之间添加 EcRI识别位点，可改变其插入的方向
D．通过花粉管通道法可将重组基因导入胚囊
19．我国科学家利用了Xba I和Sac I两种限制酶，并运用农杆菌转化法，将富含赖氨酸的蛋白质编码基因（含678bp）导入某植物细胞，再经植物组织培养获得转基因植株，使赖氨酸的含量比对照组明显提高，如图所示是相关培育过程（质粒的其他部位和目的基因内部均无Xba I、Sac I、Hind III的识别位点），下列说法正确的是
A．一个内含目的基因的模板DNA经PCR扩增6次共产生52个等长片段
B．农杆菌转化法是将目的基因导入植物细胞的常用方法
C．植物组织培养过程中，培养基需添加卡那霉素以便筛选转基因植株
D．使用Sac I和Hind III切割重组质粒后能得到1500bp左右的片段
20．IKK激酶参与动物体内免疫细胞的分化。临床上发现某重症联合免疫缺陷（SCID）患儿的IKKβ基因编码区第1183位碱基T突变为C．为研究该患儿发病机制，研究人员应用大引物PCR定点诱变技术获得突变基因，如图所示。下列说法正确的是限制酶
BamHⅠ
EcRⅠ
HindⅢ
NheⅠ
MunⅠ
识别序列和切割位点
G↓GATCC
G↓AATTC
A↓AGCTT
G↓CTAGC
C↓AATTG
A．PCR1中使用的引物有引物A、引物C
B．PCR2中使用的引物有引物B、大引物a
C．PCR1过程需要扩增3轮才能获得目标产物
D．PCR2过程中，为减少错误DNA片段的产生可适当升高复性温度
三、非选择题：本题共5小题，共55分。
21．（9分）
乳酸菌在工业、农业和医药领域都具有很高的应用价值。乳酸菌代谢产生的乳酸能保持食品的风味，其产生的细菌素具有较广的抑菌谱。实验小组从陈年泡菜水中筛选出高产细菌素的乳酸菌株，并进行抑菌培养。流程如图所示，回答下列问题：
（1）根据乳酸菌的代谢特点，在培养乳酸菌时，除主要营养物质外，还需要在培养基中添加____________，并提供中性或弱碱性等环境条件。
（2）获得纯净高产细菌素的乳酸菌株的关键是防止____________。为达到此目的，接种过程中还需要对接种环或涂布器进行____________灭菌。
（3）过程Ⅰ用的接种方法是____________。通过过程Ⅰ可以获得由一个细胞繁殖而来的菌落，达到纯化菌种的目的，其原理是____________。
（4）富集培养的目的是____________，进而增加上清液中细菌素的浓度。选用多种细菌作为检测的指示菌，得到细菌素的抑菌图谱如下，细菌素对____________的抑制作用最强。
注：+表示抑菌圈直径，“+”表示≤10mm，“++”表示 10~20mm，“+++”表示≥20mm。
22．（14分）指示菌
大肠杆菌
金黄色葡萄球菌
蜡状芽孢杆菌
植物乳杆菌
枯草芽孢杆菌
抑菌活性
++
++
+++
+
++
不对称体细胞杂交是指利用射线破坏供体细胞的染色质，与未经射线照射的受体细胞融合，所得融合细胞含受体全部遗传物质及供体部分遗传物质。红豆杉的次生产物紫杉醇是一种高效抗癌药物，但由于红豆杉野生资源匮乏，且红豆杉植株紫杉醇含量极低，导致了紫杉醇的供应严重不足。因此，研究人员尝试运用不对称体细胞杂交将红豆杉（2n=24）与柴胡（2n=12）进行了融合，培育能产生紫杉醇的柴胡，过程如下图。请回答下列问题。
注：X 射线处理能随机破坏染色体结构，使其发生断裂、易位、染色体消除等，使细胞不再持续分裂； 碘乙酰胺处理使细胞质中的某些酶失活，抑制细胞分裂。
（1）过程①中需将植物组织经____________后接种于MS 培养基上诱导____________过程，产生愈伤组织。
（2）过程②中将愈伤组织加入____________酶液去壁，离心后弃去上清液，加入洗液多次洗涤后获得原生质体。对红豆杉和柴胡原生质体进行的 A、B 处理分别为____________、____________。
（3）采用二乙酸荧光素(FDA) 法可测定原生质体活力。已知FDA本身无荧光，当其进入细胞后可被酯酶分解为无毒、具有荧光的物质，该荧光物质不能透过活细胞质膜，会留在细胞内发出荧光。据此应选择____________的原生质体用于融合。
（4）过程③常用的化学试剂是____________，经诱导融合后，只有异源融合的原生质体可持续分裂形成再生细胞团，原因是____________。
（5）过程④中，再分化阶段所用培养基需含有植物激素X 和 Y，逐渐改变培养基中这两种植物激素的浓度比，未分化细胞群的变化情况不同。当植物激素X 多Y少时，未分化细胞群将分化出芽，则植物激素X的名称是____________。
（6）科研人员对获得的部分植株细胞进行染色体观察、计数和DNA 分子标记鉴定，结果如下：
由表可知，后代植株中____________类型一定不是所需植株。科研人员推测杂种植株的染色体主要来源亲本____________的染色体，另一方亲本的遗传物质可能不是以染色体的形式存在于杂种植株细胞中，而是以DNA片段的方式整合进柴胡的基因组，作出以上推测的依据是____________。
23．（11分）后代植株类型
染色体数目、形态
DNA分子标记鉴定
甲
12，形态与柴胡染色体相似
含双亲DNA片段
乙
12，形态与柴胡染色体相似
无红豆杉DNA片段
丙
12， 形态与柴胡染色体相似
含双亲DNA片段和新的DNA片段
双特异性抗体是指一个抗体分子可以与两个不同抗原或同一抗原的两个不同抗原表位相结合，目前最常利用杂交瘤杂交法来制备。长春花是原产于非洲东海岸的野生花卉，其所含的长春碱具有良好的抗肿瘤作用。下图1是科研人员通过杂交—杂交瘤细胞技术（免疫的B淋巴细胞和杂交瘤细胞杂交技术）生产能同时识别癌胚抗原和长春碱的双特异性单克隆抗体的部分过程。图2是某双特异性抗体作用图。请分析回答下列问题：
（1）与植物体细胞杂交相比，图2中过程②特有的诱导融合的方法是____________，过程②选用的骨髓瘤细胞____________（选填“能”或“不能”）在HAT培养基上生长。
（2）对③筛选出的杂交瘤细胞，还需进行____________和____________，才能筛选出足够量的既能无限增殖又能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。与传统血清抗体相比，单克隆抗体最主要的优点是____________（至少答出两点）。
（3）图2中①步骤注射癌胚抗原的目的是____________。图2方框内需要经过筛选，才能获取单克隆杂交-杂交瘤细胞。体外培养到一定时期的单克隆杂交—杂交瘤细胞分裂受阻，需进行传代培养，原因有____________（答出两点）。
（4）与直接使用长春碱相比，将长春碱与双特异性单克隆抗体结合后给药，对人体的副作用更小，原因是____________，体现的是双特异性单克隆抗体在运载药物方面的用途。
24．（12分）
某研究所采用最新生物技术首次实现了哺乳动物的同性繁殖，操作流程如图所示。请回答下列问题：
（1）为了获得更多的卵母细胞，可以用促性腺激素处理雌性小鼠，使其___________。将卵母细胞转化为phESC的过程类似于植物组织培养中的___________过程。据图分析，将卵细胞和具有精子细胞核特点的phESC融合并培养至___________期，然后将其转移至代孕动物体内。
（2）图中对ahESC进行的基因编辑是对ahESC中的8个基因的甲基化情况进行改变，使ahESC的细胞核具有卵细胞核的特点，主要是调控了部分基因的___________，这种改变属于___________遗传。要培育孤雄小鼠需要将精子和具卵细胞细胞核特点的ahESC同时注入去核的卵母细胞中形成重构胚，在对卵母细胞进行去核时，需借助精密的___________进行操作，核移植过程还需要借助高效率的电融合法，电融合法除了促进细胞融合，同时还起到了___________重组细胞发育的作用。最终得到的融合细胞的性染色体组成可能为___________。
（3）将phESC的细胞核注入去核卵母细胞中，培育获得的小鼠均为____________倍体，该技术培育的动物可成为研究____________（填“显性”或“隐性”）基因功能的理想细胞模型，为获取更多的模型动物，可以将得到的早期胚胎进行____________处理。
25．（9分）
为使甘蓝具有抗除草剂能力，科研人员将除草剂草甘膦抗性基因转入甘蓝植株，获得抗草甘膦转基因甘蓝。
（1）基因工程中最核心的步骤是①基因表达载体的构建。步骤②用Ca2+处理农杆菌后获得感受态细胞，以便将重组质粒导入。步骤③将农杆菌与甘蓝愈伤组织共培养后，在步骤④的培养基中添加____________以便筛选出含目的基因的甘蓝植株。
（2）草甘膦抗性基因一条链的两端序列如下，采用PCR技术获取和扩增草甘膦抗性基因，应选用的引物组合为____________。
A．5'-CTTGGATGAT-3'和5'-TCTGTTGAAT-3'
B．5'-CTTGGATGAT-3'和5'-TAAGTTGTCT-3'
C．5'-ATTCAACAGA-3'和S'-ATCATCCAAG-3'
D．5'-ATTCAACAGA-3'和5'-GAACCTACTA-3'（3）若目的基因用BamHI和BglⅡ剪切，质粒用BamHI剪切，酶切后的目的基因存在正向与反向两种连接方式。可用BamHI和EcRI酶对两种重组质粒进行剪切，正向连接的重组质粒会被切去 kb长度的片段，反向连接的重组质粒会被切去 kb长度的片段。通过凝胶电泳分析产物大小进行区分，如下图所示，图中 （样品1/样品2）为所需基因表达载体。
答案
CBBBB BDDDB CCBCA ACD CD BD ABD AD
21．（9分）
(1)维生素
(2)杂菌污染 灼烧
(3)平板划线法 通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，可将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面
(4)增加乳酸菌的浓度 蜡状芽孢杆菌
22．（14分）
(1)消毒 脱分化
(2)纤维素酶、果胶酶 X射线 碘乙酰胺
(3)有荧光
(4) PEG 杂种细胞由于融合后在细胞核和细胞质的功能上实现了互补，使细胞恢复正常分裂
(5)细胞分裂素
(6)乙 柴胡 甲、丙类型植株细胞的染色体与柴胡细胞中的染色体数目相同、形态相似，且含有双亲的 DNA 片段
23．（11分）
(1)灭活病毒诱导法 不能
(2)克隆化培养 （专一）抗体检测 能准确地识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合，并且可以大量制备（特异性强，灵敏度高，可大量制备）
(3)刺激小鼠产生相应的B淋巴细胞 细胞细胞密度过大，有害代谢物的积累，培养液中营养物质缺乏等
(4)双特异性单克隆抗体能将抗癌药物定向带到癌细胞所在位置，在原位杀死癌细胞
24．（12分）
(1)超数排卵 脱分化 囊胚
(2)选择性表达 表观 显微操作仪 激活 XX、XY或YY
(3)单 隐性 胚胎分割
25．（9分）
(1) 潮霉素
(2) A
(3) 45 20 样品2限制酶
识别序列和切割位点
BamHI
—G'GATCC—
BglII
—A'GATCT—
EcRI
—G'AATTC—
时间：75分钟 满分：100分 命题、校对：耿迎俊 孙语晨
一、选择题：本题共15小题，每小题2分，共30分。在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的。
1．以下是以泡菜坛为容器制作泡菜时的4个处理：①沸盐水冷却后再倒入坛中；②盐水需要浸没全部菜料；③盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水；④检测泡菜中亚硝酸盐的含量。下列说法正确的是
A．①主要是为了防止菜料表面的醋酸杆菌被杀死
B．②的主要目的是用盐水杀死菜料表面的杂菌
C．③是为了使气体只能从泡菜坛排出而不能进入
D．④可检测到完整发酵过程中亚硝酸盐含量逐渐降低
2．传染性早熟病毒（IPV）是一种导致罗氏沼虾性早熟和生长缓慢的新型病毒，主要侵染罗氏沼虾的神经组织。研究人员利用虾类神经细胞系培养技术来研究IPV病毒与宿主细胞的互作情况，如图是部分培养过程。下列说法正确的是
A．IPV病毒与其宿主细胞的代谢类型均为异养需氧型
B．乙过程加入木瓜蛋白酶可将虾类神经组织分散成单个细胞
C．丁过程会出现悬浮或贴壁生长的细胞，可以直接采用离心法进行收集
D．为避免培养过程中杂菌污染，丁、戊过程培养瓶盖必须旋紧以防漏气
3．将蝌蚪肠细胞的细胞核移植到去核的蛙卵中，形成重建的“合子”。有些“合子”发育成正常的蝌蚪，而单独培养肠细胞却不能发育成蝌蚪。下列叙述错误的是
A．肠细胞不能表达全能性是受某些物质的限制
B．“合子”第一次分裂后形成的细胞已失去全能性
C．“合子”发育成正常蝌蚪的过程中伴随着细胞分化
D．细胞核具有全能性是由于其含有该物种的全套基因
4．大多数哺乳动物的晚期桑葚胚分割后，分离的卵裂球仍具有调整发育的能力，重新致密化使卵裂球重新分布而发育至囊胚。该调节能力随发育进程逐渐减弱甚至消失。下列说法错误的是
A．胚胎分割可看作无性繁殖或克隆的方法
B．卵裂过程中所需营养主要来源于培养液
C．桑葚胚及囊胚的内细胞团细胞具有发育的全能性
D．囊胚期的细胞出现了细胞分化，但遗传物质未发生改变
5．将马铃薯去皮切块，加水煮沸一定时间，过滤得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液来这里 全站资源一元不到！中加入一定量蔗糖和琼脂，用水定容后灭菌，得到M培养基。M培养基可用于真菌a的筛选，某同试卷源自 每日更新，汇集全国各地小初高最新试卷。学将获得的真菌a利用如图的方式进行稀释，统计甲、乙，丙三个平板中的菌落数分别是110、140和149。下列分析正确的是
A．若采用血细胞计数板直接对a培养液进行计数，计数的结果为活菌数
B．若在培养真菌a的培养基中添加一定量的青霉素，可抑制细菌的繁殖
C．选取甲、乙、丙三个培养基的目的是排除无关变量对实验的干扰
D．根据三个平板中的菌落数可推算培养液中真菌a的密度为1.33×107个/mL
6．下图为不同限制性内切核酸酶识别的序列及切割位置（箭头所指），下列叙述错误的是
A．图示4种限制酶均不能够识别和切割RNA分子内的核苷酸序列
B．若DNA上的碱基随机排列，Nt I限制性核酸内切酶切割位点出现频率较其他三种限制性核酸内切酶高
C．使用两种限制酶同时处理质粒和含目的基因的外源DNA可防止二者发生自身环化
D．用酶Bgl II切出的目的基因与酶BamH I切割的质粒重组后，不能再被这两种酶切开
7．如图表示植株A（杂合子Aa）和植株B培育植株①②③④⑤的过程，下列说法正确的是
A．培育植株①的过程为单倍体育种，获得的植株为纯合子
B．选择植物的愈伤组织进行诱变处理获得优质的突变体，未体现细胞的全能性
C．需要通过植物组织培养技术获得的植株只有①③④
D．植株①②④⑤与植株A基因型相同的概率分别是0、0、1、0（不考虑基因突变）
8．植物细胞工程在农业、医药工业等方面有着广泛的应用，相关叙述正确的是
A．细胞产物的工厂化生产主要是利用促进细胞生长的培养条件，提高单个细胞中次生代谢物的含量
B．植物顶端分生组织附近的病毒很少，甚至无病毒，因此人们为了获得抗病毒苗常常利用茎尖进行植物组织培养
C．利用花药离体培养获得玉米幼苗，直接从中选择出具有优良性状的个体，这样能够极大的缩短育种年限
D．快速繁殖花卉的过程中，诱导愈伤组织期间一般不需要光照，此时细胞代谢类型为异养需氧型
9．RNA干扰技术是指小分子双链RNA（dsRNA）可以特异性地降解或抑制同源mRNA表达，从而抑制或关闭特定基因表达的现象，下图是其作用机制，其中Dicer是具有特殊功能的物质，RISC是一种复合体。下列有关分析错误的是
A．siRNA和dsRNA分子中的嘧啶数量等于嘌呤数量
B．Dicer和RISC断裂的化学键相同，都是磷酸二酯键
C．RISC能够将mRNA剪切，最可能依赖于RISC中的蛋白质
D．RNA干扰技术通过抑制转录过程实现对特定基因表达的抑制
10．为使玉米获得抗除草剂性状，科研人员进行了相关操作(如图所示)。含有内含子的报告基因不能在原核生物中正确表达，其正确表达产物能催化无色物质K呈现蓝色。转化过程中愈伤组织表面常残留农杆菌，会导致未转化的愈伤组织可能在含除草剂的培养基中生长。下列叙述错误的是
A．T-DNA可将基因G转移并整合到愈伤组织细胞的染色体DNA上
B．利用物质K和抗生素进行筛选1，可获得农杆菌的蓝色菌落
C．利用物质K和除草剂进行筛选2，更易于获得抗除草剂的转基因植株
D．愈伤组织重新分化为芽、根等器官的过程中，需要添加植物激素
11．通过设计引物，运用PCR技术可以实现目的基因的定点诱变。下图是获取突变基因的过程，其中引物1序列中含有一个碱基T不能与目的基因片段配对，但不影响引物与模板链的整体配对，反应体系中在目的基因两端的引物中分别设计增加限制酶a和限制酶b的识别位点。下列有关叙述错误的是
A．限制酶a和限制酶b的识别序列应分别增加至引物1和引物2的5'端
B．通过两种限制酶将扩增出的含突变位点的目的基因切割下来有利于其定向插入载体
C．第3轮PCR结束后，两条链完全等长的且含有突变碱基对的DNA分子有1个
D．PCR的一轮循环一般可分为变性、复性、延伸三步，其中延伸的温度高于复性的温度
12．下图表示pBR322质粒和人生长激素基因所在片段的结构信息，将二者构建的重组质粒导入受体菌并进行筛选。下列叙述错误的是
A．应选择的限制性内切核酸酶组合是酶F和酶G
B．只用酶F切割后的质粒，含有2个游离的磷酸基团
C．用含氨苄青霉素的培养基筛选出的为含重组质粒的受体菌
D．同时用三种限制性核酸内切酶处理图中质粒，充分酶切后可得到4个DNA片段
13．CRISPR/Cas9系统主要由向导RNA（SgRNA）和Cas9蛋白两部分组成，SgRNA可引导Cas9蛋白到特定基因位点进行切割，其机制如图所示。下列说法正确的是
A．SgRNA通过碱基互补配对原则识别目标DNA分子，Cas9蛋白的功能与DNA连接酶相似
B．若要利用CRISPR/Cas9技术将一个基因从目标DNA分子上去除，通常需设计两个序列不同的SgRNA
C．CRISPR/Cas9技术编辑基因有时会因SgRNA错误结合而出现“脱靶”现象，一般SgRNA序列越短，脱靶率越低
D．向导RNA可以在逆转录酶的催化下合成，合成的原料包括四种核糖核苷酸
14．实时荧光定量PCR简称qPCR，灵敏度高特异性好，是目前检测微小残留病变的常用方法。将荧光标记的Taqman探针与待测样本DNA混合，当探针完整时，不产生荧光。在PCR过程中，与目的基因结合的探针被TaqDNA聚合酶水解，R与Q分离后，R发出的荧光可被检测到在特定光激发下发出荧光（如图所示），随着循环次数的增加，荧光信号强度增加，通过实时检测荧光信号强度，可得Ct值（该值与待测样本中目的基因的个数呈负相关）。下列相关叙述正确的是
A．每个模板DNA分子含有4个游离的磷酸基团
B．在反应过程中，需要ATP为新链的合成提供能量C．做qPCR之前，需要先根据目的基因的核苷酸序列合成引物和Taqman探针
D．荧光信号达到设定阈值时经历的循环数越少，说明含有病变基因的概率越小
15．黑曲霉是一种丝状真菌，其代谢产物柠檬酸是广泛应用的一种食品添加剂。下图是食品工业以红薯粉为原料经黑曲霉发酵生产柠檬酸的简要流程图。下列叙述正确的是
A．黑曲霉与生产果醋时所用主要微生物的代谢类型相同
B．黑曲霉是一种霉菌，培养该菌种时应将培养基PH调节至中性
C．发酵罐内接种的是黑曲霉的纯培养物，所以发酵罐不需要严格灭菌
D．若发酵罐C中的原料为大豆粉，可利用黑曲霉水解大豆中的淀粉制成酱油
二、选择题：本题共5小题，每小题3分，共15分。在每小题给出的四个选项中，有一项或多项是符合题目要求的。全部选对得3分，选对但选不全得1分，有选错得0分。
16．安巴韦单抗/罗米司韦单抗注射液是我国首个全人源抗新冠病毒特效药，下图是一种制备抗新冠病毒全人源单克隆抗体的主要技术流程。相关叙述正确的是
A．过程a中，需要使用限制酶和DNA连接酶构建基因表达载体
B．过程b中，常用选择培养基筛选能产生特定抗体的杂交瘤细胞
C．过程c中，需要提供葡萄糖等营养物质、O2和CO2等气体
D．使用全人源单抗治疗新冠可以大大降低异源抗体对人体的副作用
17．某研究团队利用甲基化酶、去甲基化酶以及基因编辑技术增加了两个父系基因组印记控制区域的甲基化，以及母系控制区域的5个去甲基化，再将一个极体注入经修饰的卵母细胞，然后经早期胚胎培养后进行胚胎移植，成功培育出可育的孤雌小鼠，部分过程如下图所示。相关叙述错误的是
A．甲基化会关闭基因的活性，对某些基因进行去甲基化后该基因可正常表达
B．“极体”注入“修饰后的次级卵母细胞”后，可通过电融合法使两细胞融合
C．胚胎移植前，需对供体和受体进行免疫检查，避免发生免疫排斥反应
D．“孤雌小鼠”的诞生过程没有精子参与，其基因型与提供卵母细胞的雌鼠相同
18．下表为5种限制酶的识别序列及切割位点，下图为某种质粒和目的基因，箭头所指为限制酶酶切位点。现要将图中的目的基因定向插入到质粒中，以制备转基因植株。下列说法正确的是
A．BamHI和Nhe I切割形成相同的黏性末端
B．用EcRI和HindⅢ切割质粒，有助于目的基因的定向插入
C．在目的基因和NheI的识别位点之间添加 EcRI识别位点，可改变其插入的方向
D．通过花粉管通道法可将重组基因导入胚囊
19．我国科学家利用了Xba I和Sac I两种限制酶，并运用农杆菌转化法，将富含赖氨酸的蛋白质编码基因（含678bp）导入某植物细胞，再经植物组织培养获得转基因植株，使赖氨酸的含量比对照组明显提高，如图所示是相关培育过程（质粒的其他部位和目的基因内部均无Xba I、Sac I、Hind III的识别位点），下列说法正确的是
A．一个内含目的基因的模板DNA经PCR扩增6次共产生52个等长片段
B．农杆菌转化法是将目的基因导入植物细胞的常用方法
C．植物组织培养过程中，培养基需添加卡那霉素以便筛选转基因植株
D．使用Sac I和Hind III切割重组质粒后能得到1500bp左右的片段
20．IKK激酶参与动物体内免疫细胞的分化。临床上发现某重症联合免疫缺陷（SCID）患儿的IKKβ基因编码区第1183位碱基T突变为C．为研究该患儿发病机制，研究人员应用大引物PCR定点诱变技术获得突变基因，如图所示。下列说法正确的是限制酶
BamHⅠ
EcRⅠ
HindⅢ
NheⅠ
MunⅠ
识别序列和切割位点
G↓GATCC
G↓AATTC
A↓AGCTT
G↓CTAGC
C↓AATTG
A．PCR1中使用的引物有引物A、引物C
B．PCR2中使用的引物有引物B、大引物a
C．PCR1过程需要扩增3轮才能获得目标产物
D．PCR2过程中，为减少错误DNA片段的产生可适当升高复性温度
三、非选择题：本题共5小题，共55分。
21．（9分）
乳酸菌在工业、农业和医药领域都具有很高的应用价值。乳酸菌代谢产生的乳酸能保持食品的风味，其产生的细菌素具有较广的抑菌谱。实验小组从陈年泡菜水中筛选出高产细菌素的乳酸菌株，并进行抑菌培养。流程如图所示，回答下列问题：
（1）根据乳酸菌的代谢特点，在培养乳酸菌时，除主要营养物质外，还需要在培养基中添加____________，并提供中性或弱碱性等环境条件。
（2）获得纯净高产细菌素的乳酸菌株的关键是防止____________。为达到此目的，接种过程中还需要对接种环或涂布器进行____________灭菌。
（3）过程Ⅰ用的接种方法是____________。通过过程Ⅰ可以获得由一个细胞繁殖而来的菌落，达到纯化菌种的目的，其原理是____________。
（4）富集培养的目的是____________，进而增加上清液中细菌素的浓度。选用多种细菌作为检测的指示菌，得到细菌素的抑菌图谱如下，细菌素对____________的抑制作用最强。
注：+表示抑菌圈直径，“+”表示≤10mm，“++”表示 10~20mm，“+++”表示≥20mm。
22．（14分）指示菌
大肠杆菌
金黄色葡萄球菌
蜡状芽孢杆菌
植物乳杆菌
枯草芽孢杆菌
抑菌活性
++
++
+++
+
++
不对称体细胞杂交是指利用射线破坏供体细胞的染色质，与未经射线照射的受体细胞融合，所得融合细胞含受体全部遗传物质及供体部分遗传物质。红豆杉的次生产物紫杉醇是一种高效抗癌药物，但由于红豆杉野生资源匮乏，且红豆杉植株紫杉醇含量极低，导致了紫杉醇的供应严重不足。因此，研究人员尝试运用不对称体细胞杂交将红豆杉（2n=24）与柴胡（2n=12）进行了融合，培育能产生紫杉醇的柴胡，过程如下图。请回答下列问题。
注：X 射线处理能随机破坏染色体结构，使其发生断裂、易位、染色体消除等，使细胞不再持续分裂； 碘乙酰胺处理使细胞质中的某些酶失活，抑制细胞分裂。
（1）过程①中需将植物组织经____________后接种于MS 培养基上诱导____________过程，产生愈伤组织。
（2）过程②中将愈伤组织加入____________酶液去壁，离心后弃去上清液，加入洗液多次洗涤后获得原生质体。对红豆杉和柴胡原生质体进行的 A、B 处理分别为____________、____________。
（3）采用二乙酸荧光素(FDA) 法可测定原生质体活力。已知FDA本身无荧光，当其进入细胞后可被酯酶分解为无毒、具有荧光的物质，该荧光物质不能透过活细胞质膜，会留在细胞内发出荧光。据此应选择____________的原生质体用于融合。
（4）过程③常用的化学试剂是____________，经诱导融合后，只有异源融合的原生质体可持续分裂形成再生细胞团，原因是____________。
（5）过程④中，再分化阶段所用培养基需含有植物激素X 和 Y，逐渐改变培养基中这两种植物激素的浓度比，未分化细胞群的变化情况不同。当植物激素X 多Y少时，未分化细胞群将分化出芽，则植物激素X的名称是____________。
（6）科研人员对获得的部分植株细胞进行染色体观察、计数和DNA 分子标记鉴定，结果如下：
由表可知，后代植株中____________类型一定不是所需植株。科研人员推测杂种植株的染色体主要来源亲本____________的染色体，另一方亲本的遗传物质可能不是以染色体的形式存在于杂种植株细胞中，而是以DNA片段的方式整合进柴胡的基因组，作出以上推测的依据是____________。
23．（11分）后代植株类型
染色体数目、形态
DNA分子标记鉴定
甲
12，形态与柴胡染色体相似
含双亲DNA片段
乙
12，形态与柴胡染色体相似
无红豆杉DNA片段
丙
12， 形态与柴胡染色体相似
含双亲DNA片段和新的DNA片段
双特异性抗体是指一个抗体分子可以与两个不同抗原或同一抗原的两个不同抗原表位相结合，目前最常利用杂交瘤杂交法来制备。长春花是原产于非洲东海岸的野生花卉，其所含的长春碱具有良好的抗肿瘤作用。下图1是科研人员通过杂交—杂交瘤细胞技术（免疫的B淋巴细胞和杂交瘤细胞杂交技术）生产能同时识别癌胚抗原和长春碱的双特异性单克隆抗体的部分过程。图2是某双特异性抗体作用图。请分析回答下列问题：
（1）与植物体细胞杂交相比，图2中过程②特有的诱导融合的方法是____________，过程②选用的骨髓瘤细胞____________（选填“能”或“不能”）在HAT培养基上生长。
（2）对③筛选出的杂交瘤细胞，还需进行____________和____________，才能筛选出足够量的既能无限增殖又能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。与传统血清抗体相比，单克隆抗体最主要的优点是____________（至少答出两点）。
（3）图2中①步骤注射癌胚抗原的目的是____________。图2方框内需要经过筛选，才能获取单克隆杂交-杂交瘤细胞。体外培养到一定时期的单克隆杂交—杂交瘤细胞分裂受阻，需进行传代培养，原因有____________（答出两点）。
（4）与直接使用长春碱相比，将长春碱与双特异性单克隆抗体结合后给药，对人体的副作用更小，原因是____________，体现的是双特异性单克隆抗体在运载药物方面的用途。
24．（12分）
某研究所采用最新生物技术首次实现了哺乳动物的同性繁殖，操作流程如图所示。请回答下列问题：
（1）为了获得更多的卵母细胞，可以用促性腺激素处理雌性小鼠，使其___________。将卵母细胞转化为phESC的过程类似于植物组织培养中的___________过程。据图分析，将卵细胞和具有精子细胞核特点的phESC融合并培养至___________期，然后将其转移至代孕动物体内。
（2）图中对ahESC进行的基因编辑是对ahESC中的8个基因的甲基化情况进行改变，使ahESC的细胞核具有卵细胞核的特点，主要是调控了部分基因的___________，这种改变属于___________遗传。要培育孤雄小鼠需要将精子和具卵细胞细胞核特点的ahESC同时注入去核的卵母细胞中形成重构胚，在对卵母细胞进行去核时，需借助精密的___________进行操作，核移植过程还需要借助高效率的电融合法，电融合法除了促进细胞融合，同时还起到了___________重组细胞发育的作用。最终得到的融合细胞的性染色体组成可能为___________。
（3）将phESC的细胞核注入去核卵母细胞中，培育获得的小鼠均为____________倍体，该技术培育的动物可成为研究____________（填“显性”或“隐性”）基因功能的理想细胞模型，为获取更多的模型动物，可以将得到的早期胚胎进行____________处理。
25．（9分）
为使甘蓝具有抗除草剂能力，科研人员将除草剂草甘膦抗性基因转入甘蓝植株，获得抗草甘膦转基因甘蓝。
（1）基因工程中最核心的步骤是①基因表达载体的构建。步骤②用Ca2+处理农杆菌后获得感受态细胞，以便将重组质粒导入。步骤③将农杆菌与甘蓝愈伤组织共培养后，在步骤④的培养基中添加____________以便筛选出含目的基因的甘蓝植株。
（2）草甘膦抗性基因一条链的两端序列如下，采用PCR技术获取和扩增草甘膦抗性基因，应选用的引物组合为____________。
A．5'-CTTGGATGAT-3'和5'-TCTGTTGAAT-3'
B．5'-CTTGGATGAT-3'和5'-TAAGTTGTCT-3'
C．5'-ATTCAACAGA-3'和S'-ATCATCCAAG-3'
D．5'-ATTCAACAGA-3'和5'-GAACCTACTA-3'（3）若目的基因用BamHI和BglⅡ剪切，质粒用BamHI剪切，酶切后的目的基因存在正向与反向两种连接方式。可用BamHI和EcRI酶对两种重组质粒进行剪切，正向连接的重组质粒会被切去 kb长度的片段，反向连接的重组质粒会被切去 kb长度的片段。通过凝胶电泳分析产物大小进行区分，如下图所示，图中 （样品1/样品2）为所需基因表达载体。
答案
CBBBB BDDDB CCBCA ACD CD BD ABD AD
21．（9分）
(1)维生素
(2)杂菌污染 灼烧
(3)平板划线法 通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，可将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面
(4)增加乳酸菌的浓度 蜡状芽孢杆菌
22．（14分）
(1)消毒 脱分化
(2)纤维素酶、果胶酶 X射线 碘乙酰胺
(3)有荧光
(4) PEG 杂种细胞由于融合后在细胞核和细胞质的功能上实现了互补，使细胞恢复正常分裂
(5)细胞分裂素
(6)乙 柴胡 甲、丙类型植株细胞的染色体与柴胡细胞中的染色体数目相同、形态相似，且含有双亲的 DNA 片段
23．（11分）
(1)灭活病毒诱导法 不能
(2)克隆化培养 （专一）抗体检测 能准确地识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合，并且可以大量制备（特异性强，灵敏度高，可大量制备）
(3)刺激小鼠产生相应的B淋巴细胞 细胞细胞密度过大，有害代谢物的积累，培养液中营养物质缺乏等
(4)双特异性单克隆抗体能将抗癌药物定向带到癌细胞所在位置，在原位杀死癌细胞
24．（12分）
(1)超数排卵 脱分化 囊胚
(2)选择性表达 表观 显微操作仪 激活 XX、XY或YY
(3)单 隐性 胚胎分割
25．（9分）
(1) 潮霉素
(2) A
(3) 45 20 样品2限制酶
识别序列和切割位点
BamHI
—G'GATCC—
BglII
—A'GATCT—
EcRI
—G'AATTC—
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