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河南省洛阳市2023-2024学年高二下期期中考试生物试卷
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这是一份河南省洛阳市2023-2024学年高二下期期中考试生物试卷，共25页。试卷主要包含了考试结束后，将答题卡交回等内容，欢迎下载使用。
注意事项：
1.答卷前，考生务必将自己的姓名、考号填写在答题卡上。
2.考试结束后，将答题卡交回。
一、选择题：本题共25小题，每小题2分，共50分。在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的。
1. 老坛酸菜古称菹，《周礼》中就有其名。北魏的《齐民要术》中更是详细介绍了祖先用白菜（古称菘）等原料腌制酸菜的多种方法。下列说法正确的是（ ）
A. 腌制酸菜是利用植物体表面天然的乳酸菌将葡萄糖分解为乳酸和CO2
B. 酸菜制作中选材装至半坛时，放入蒜瓣、生姜及其他香辛料，倒满盐水
C. 腌制的酸菜“咸而不酸”很可能是食盐浓度过多，抑制了菌种发酵
D. 酸菜要尽快食用，以免腌制发酵时间过长导致亚硝酸盐含量增加
【答案】C
【解析】
【分析】泡菜（酸菜）的制作原理：在无氧条件下，乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸。发酵过程中，亚硝酸盐先增加，然后下降至相对稳定。
【详解】A、泡菜（酸菜）的制作原理是在无氧条件下，乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸，但不会产生二氧化碳，A错误；
B、将经过预处理的新鲜蔬菜混合均匀，装入泡莱坛内，装至半坛时，放入蒜瓣、生姜及其他香辛料，继续装至八成满，再徐徐注入配制好的盐水，使盐水没过全部菜料，盖好坛盖，B错误；
C、“咸而不酸”的原因为加盐过多，使乳酸菌生长的环境溶液浓度过高，使乳酸菌失水，抑制了乳酸菌的发酵，C正确；
D、发酵初期，由于硝酸盐还原菌的作用使亚硝酸盐增加；发酵中期，硝酸盐还原菌受抑制，部分亚硝酸盐被分解含量下降；发酵后期，硝酸盐含量下降至相对稳定， D错误。
故选C。
2. 无菌技术是获得纯净微生物培养物的关键。下列相关叙述错误的是（ ）
A. 接种室、接种箱或超净工作台在使用前可用紫外线照射进行灭菌
B. 配制好的培养基装入锥形瓶，加棉塞用牛皮纸包扎好后，进行高压蒸汽灭菌
C. 接种前，操作者的衣着和手清洗后，双手在用酒精棉球进行擦拭消毒该试卷源自 每日更新，享更低价下载。D. 接种时，试管口、瓶口等容易被污染的部位，可通过酒精灯火焰灼烧来灭菌
【答案】A
【解析】
【分析】微生物培养过程中要进行无菌操作，关键就在于防止外来杂菌的入侵，其中消毒和灭菌是常用的防止杂菌入侵的方法，微生物的实验室分离的方法有平板划线法和稀释涂布平板法，通过不同方式的稀释，最终分离得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
【详解】A、接种室、接种箱或超净工作台在使用前可用紫外线照射进行消毒，A错误；
B、对实验用的培养基，采用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌，其操作将配制好的培养基装入锥形瓶，加棉塞用牛皮纸包扎好后，进行高压蒸汽灭菌，B正确；
C、为了防止杂菌污染，对操作者的双手采用酒精进行消毒，C正确；
D、对试管口、锥形瓶口等部位，通过火焰灼烧进行灭菌，以防止杂菌污染，D正确
故选A。
3. 用纸片扩散法测定某病原菌对各种抗生素敏感性的实验，是在某病原菌均匀分布的平板上，铺设含有不同种抗生素的纸片后进行培养。图示为培养的结果，其中抑菌圈是在纸片周围出现的透明区域。下列分析正确的是（ ）
A. 在图示固体培养基上可用平板划线法或涂布法接种病原菌
B. 未出现抑菌圈可能是病原菌与抗生素接触后发生抗性变异
C. 形成的抑菌圈较小的原因可能是该病原菌对该抗生素较为敏感
D. 不同抗生素在平板上的扩散速度不同会对实验结果造成影响
【答案】D
【解析】
【分析】纸片扩散法是药敏实验一种常用的方法，它将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片所含的药物吸取平板中的水分溶解后便不断向纸片周围区域扩散，形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌生长被抑制，形成透明的抑菌圈。
【详解】A、在图示固体培养基上用稀释涂布平板法进行接种病原菌，A错误；
B、病原菌发生抗性变异在接触之前，未出现抑菌圈可能是病原菌对该抗生素不敏感，B错误；
C、微生物对药物较敏感形成的抑菌圈应较大，形成的抑菌圈较小的原因可能是微生物对药物敏感程度较低，C错误；
D、纸片所含的药物吸取平板中的水分溶解后便不断向纸片周围区域扩散，不同抗生素在平板上的扩散速度不同会对实验结果造成影响，D正确。
故选D。
4. 下图为实验室培养和纯化酵母菌过程中的部分操作步骤，下列说法不正确的是（ ）
A. 步骤①是倒平板，待培养基冷却后培养皿要倒置
B. 步骤②在火焰附近用冷却的接种环蘸取一环菌液
C. 步骤③用接种环在培养基上连续划出5条相交的线
D. 步骤④操作时，第1区和第5区的划线不要相连
【答案】C
【解析】
【分析】平板划线法纯化大肠杆菌时不同阶段灼烧接种环的目的不同：
（1）第一次操作：杀死接种环上原有的微生物；
（2）每次划线之前：杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端；
（3）划线结束后：杀死接种环上残存的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。
【详解】A、将图①平板倒置后放入培养箱培养，有利于表面的水分更好的挥发和防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染，A正确。
B、步骤②接种环经灼烧灭菌后，应酒精灯火焰旁冷却后再蘸取菌液（避免杀死菌种），B正确；
C、操作③时，在第二次及以后的划线，总是从上一次划线的末端开始划线，可以将聚集的菌种逐步稀释以便获得单个菌落，C错误；
D、步骤④属于平板划线操作，操作时注意不要将最后一次的划线与第一次的划线相连，因为如果这两个区相连，则会污染已经稀释的菌液，无法达到分离微生物的目的了，D正确。
故选C。
5. 为测定某河流水样中的细菌含量，某研究小组将1 mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL稀释液，经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。下列叙述错误的是（ ）
A. 该实验可使用牛肉膏蛋白胨培养基
B. 可得出每升水样中活菌数大约为3.8×107个
C. 此方法统计的菌落数往往比实际的活菌数目低
D. 利用细菌计数板观察统计的是稀释液中活菌数
【答案】D
【解析】
【分析】稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落，该方法可用于统计活菌数。
【详解】A、培养细菌通常用牛肉膏蛋白胨培养基，细菌在该培养基上可长成菌落，A正确；
B、将1mL水样稀释100倍，在3个平板上分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37，据此可得出每升样品中的活菌数为（39+38+37）÷3÷0.1×1000×100=3.8×107个，B正确；
C、用稀释涂布平板法进行计数时，由于两个或多个细菌聚集在一起时在平板形成的是一个菌落，所以统计的菌落数往往比实际的活菌数目低，C正确；
D、利用细菌计数板观察，即用显微镜直接计数法统计的都是稀释液中所有个体的数目，包括死菌，D错误。
故选D。
6. 啤酒生产过程的简要流程如图所示，其中糖化的目的是将麦芽中的淀粉等有机物水解为小分子物质。下列叙述错误的是（ ）
A. 过程①可用赤霉素处理大麦种子，使种子无需发芽就能产生α-淀粉酶
B. 过程②破碎有利于淀粉与α-淀粉酶充分接触，缩短糖化过程的时间
C. 过程③的主发酵阶段初期应提供氧气，以便缩短完成酒精发酵的时间
D. 发酵过程中要适时往外排气，后发酵时期更应缩短排气时间间隔
【答案】D
【解析】
【分析】赤霉素可以解除休眠，促进种子的萌发；发酵初期应提供氧气，因酵母菌在有氧条件下能快速繁殖，以提高菌种数量、缩短发酵时间。
【详解】A、赤霉素可以解除休眠，促进种子的萌发，所以过程①可用赤霉素溶液浸泡大麦种子，无须发芽就能产生的α−淀粉酶，A正确；
B、据题意“糖化的目的是将麦芽中的淀粉等有机物水解为小分子物质”，故过程②破碎有利于淀粉与α−淀粉酶的充分接触，缩短糖化过程所用的时间，B正确；
C、为了提高菌种数量、缩短发酵时间，过程③的主发酵初期应提供氧气，酵母菌在有氧条件下能快速繁殖，C正确；
D、发酵过程中要适时往外排气，后发酵时期由于糖类物质不充足，产生的气体变少，可以适当延长排气时间间隔，D错误。
故选D。
7. 我国微生物发酵工程生产谷氨酸常用的菌种有谷氨酸棒状杆菌和黄色短杆菌等，下图是发酵工程的示意图。下列叙述错误的是（ ）
A. 谷氨酸是在谷氨酸棒状杆菌和黄色短杆菌的核糖体上合成的
B. 谷氨酸发酵的培养基应调节至中性和弱碱性，以利于谷氨酸的积累
C. 若代谢产物中出现大量的乳酸，从发酵条件看，其原因很可能是通气量不足
D. 图示培养装置可保证微生物对营养物质的需求，有利于提高生产效率
【答案】A
【解析】
【分析】微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。对异养微生物来说，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作为营养要素成分时并不是起单一方面的作用。
【详解】A、核糖体是合成蛋白质的场所，不是氨基酸的合成场所，A错误；
B、谷氨酸发酵时在中性和弱碱性条件下会积累谷氨酸；在酸性条件下则容易形成谷氨酰胺和N乙酰谷氨酰胺，B正确；
C、若代谢物中出现大量的乳酸，从发酵条件看，其原因很可能是通气量不足，微生物无氧条件下，产生乳酸，C正确；
D、图示培养装置可通过通入无菌空气为谷氨酸棒状杆菌提供氧气，通过控制新鲜培养液流入发酵罐的速度，可以保证微生物对营养物质的需求，有利于提高生产效率，D正确。
故选A。
8. 利用微生物发酵制作酱油在我国具有悠久的历史。某企业通过发酵制作酱油的流程示意图如下，有关叙述不正确的是（ ）
A. 酱油的制作是米曲霉、酵母菌等代谢类型不同的微生物共同作用的结果
B. 米曲霉发酵过程不断搅拌有利于其通过有氧呼吸快速增殖
C. 在发酵池中需加入抗生素去除杂菌以保证酱油质量
D. 大豆、小麦、麦麸为米曲霉大量增殖提供了充足的碳源、氮源
【答案】C
【解析】
【分析】微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。对异养微生物来说，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作为营养要素成分时并不是起单一方面的作用。
【详解】A、由图可知，酱油的发酵离不开米曲霉、酵母菌、乳酸菌等，酱油的制作是米曲霉、酵母菌、乳酸菌等代谢类型不同的微生物共同作用的结果，A正确；
B、米曲霉为好氧菌，米曲霉发酵过程不断搅拌有利于其通过有氧呼吸快速增殖，B正确；
C、发酵制作酱油时需要乳酸菌，乳酸菌细菌，抗生素会抑制细菌增殖，因此发酵池中不能加入抗生素，C错误；
D、微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，大豆、小麦、麦麸为米曲霉大量增殖提供了充足的碳源、氮源，D正确。
故选C。
9. 培育“番茄-马铃薯”杂种植株的过程如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A. 过程Ⅰ是利用纤维素酶、果胶酶在等渗溶液中处理去除细胞壁
B. 过程Ⅱ常用PEG融合法等进行诱导，体现植物细胞的全能性
C. 过程Ⅲ中，细胞内的高尔基体会参与细胞壁的再生
D. 由过程Ⅳ过渡到Ⅴ通常需要更换培养基，并给予适当的光照
【答案】B
【解析】
【分析】据图分析，图示过程I为去除植物细胞壁获得原生质体，过程II为原生质体融合，过程III为再生出细胞壁，IV、V是植物组织培养。
【详解】A、植物细胞壁的成分主要是纤维素和果胶，过程Ⅰ需要用纤维素酶、果胶酶处理去除细胞壁获得原生质体，A正确；
B、过程Ⅱ是诱导原生质体融合，常用PEG融合法等进行诱导，体现植物细胞的具有一定的流动性，B错误；
C、过程Ⅲ是杂种细胞的融合，该过程完成的标志是杂种细胞再生出细胞壁，细胞内的高尔基体会参与细胞壁的再生，C正确；
D、过程IV和过程V是诱导植物生芽和生根的过程，生长素与细胞分裂素的比值不同，故由过程Ⅳ过渡到Ⅴ通常需要更换培养基，并给予适当的光照，D正确。
故选B。
10. 紫杉醇是红豆杉属植物体内的一种次生代谢物，主要存在于红豆杉的树皮和树叶中，具有高抗癌活性，现在已被广泛应用于乳腺癌等癌症的治疗。通过植物细胞工程技术获得紫杉醇的途径如图所示。下列相关叙述错误的是（ ）
A. 过程①中，已分化的细胞经过脱分化会失去其特有的结构和功能
B. 红豆杉根尖组织要消毒处理，整个培养过程要在无菌条件下进行
C. 通过上述过程提高了单个细胞产生紫杉醇的产量，推广价值极高
D. 紫杉醇可能不属于红豆杉属植物细胞基本生命活动所必需的物质
【答案】C
【解析】
【分析】分析题图：图示是通过植物细胞工程技术获得紫杉醇的途径，其中①表示脱分化过程，②表示将愈伤组织分散成单个细胞，③表示细胞增殖过程。
【详解】A、图示是通过植物细胞工程技术获得紫杉醇的途径，其中①表示脱分化过程，脱分化过程中已分化的细胞经过脱分化会失去其特有的结构和功能，A正确；
B、为了防止杂菌污染，红豆杉根尖组织要消毒处理，整个培养过程要在无菌条件下进行，B正确；
C、紫杉醇的工厂化生产主要是利用促进细胞分裂的培养条件，提高了多个细胞中次生代谢物的含量，C错误；
D、紫杉醇属于红豆杉的次生代谢物，可能不属于红豆杉基本生命活动所必需的物质，D正确。
故选C。
11. 实验小鼠皮肤细胞培养的基本过程如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A. 过程甲往往选取幼龄小鼠的皮肤组织进行处理
B. 过程乙中可用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理皮肤组织
C. 过程丙属于原代培养，培养液中要含有细胞所需的各种营养成分
D. 过程丁属于传代培养，若细胞贴壁可直接用离心法收集
【答案】D
【解析】
【分析】据图分析，甲表示取实验小鼠的组织细胞，乙表示将动物组织分散成单个皮肤细胞，丙表示原代培养，丁表示传代培养。
【详解】A、甲过程是取样过程，幼龄小鼠的细胞分裂能力较强，选取幼龄小鼠的皮肤组织进行处理有利于培养成功，A正确；
B、乙表示将动物组织分散成单个皮肤细胞，可用机械的方法或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等方法处理，B正确；
C、丙表示原代培养，细胞在体外培养时，培养液中应含有细胞所需的各种营养物质，C正确。
D、丁表示传代培养，进行传代培养时，悬浮培养的细胞可以直接用离心法收集，贴壁细胞需要用胰蛋白酶等处理使其分散成单个细胞后再用离心法收集，D错误。
故选D。
12. 科研人员将抗癌药物连接在单抗上制成“生物导弹”用于癌症治疗。“生物导弹”由两部分组成，一是“瞄准装置”，二是“杀伤性弹头”，下列叙述不正确的是（ ）
A. “瞄准装置”由识别肿瘤的单克隆抗体组成
B. “弹头”由放射性同位素、化学药物和毒素等物质构成
C. “弹头”中的药物有选择杀伤肿瘤细胞的功能
D. “生物导弹”的制备应用了动物细胞培养及动物细胞融合技术
【答案】C
【解析】
【分析】生物导弹=单克隆抗体+ 放射性同位素、化学药物或细胞毒素(借助单克隆抗体定位导向作用将药物定向带到癌细胞，在原位杀死癌细胞)。
【详解】A、抗体能特异性的识别抗原，因此“瞄准装置”由识别肿瘤的单克隆抗体组成，A正确；
B、“弹头”由放射性同位素、化学药物和毒素等物质构成，B正确；
C、“弹头”中的药物不具有选择作用，C错误；
D、生物导弹是单克隆抗体的应用，其制备过程用到了动物细胞培养技术和动物细胞融合技术，属于细胞工程，D正确。
故选C。
13. 某研究人员欲利用核移植技术来治疗糖尿病，提出了下图所示的方案。下列相关叙述，错误的是（ ）
A. 动物体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植
B. 图中用到了体细胞核移植技术、DNA重组技术等
C. 图中所用的去核卵母细胞一般处于减数第二次分裂中期
D. 图中“定向诱导”的目的是使重组细胞B发生基因突变
【答案】D
【解析】
【分析】动物核移植是指将动物的一个细胞的细胞核移入一个去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体；核移植得到的动物称克隆动物，克隆动物的核基因完全来自供体动物，而细胞质基因来自受体细胞；核移植包括体细胞核移植和胚胎细胞核移植，其中体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植，因为体细胞的全能性低于胚胎细胞。
【详解】A、胚胎细胞的全能性高于体细胞，所以动物体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植，A正确；
B、图中用到了体细胞核移植技术（将细胞核导入去核卵母细胞）、DNA重组技术（将正常胰岛素基因导入胚胎干细胞）等，B正确；
C、由于减数第二次分裂中期卵母细胞核的位置靠近第一极体，用微型吸管可一并吸出细胞核和第一极体，所以核移植所用的去核卵母细胞一般处于减数第二次分裂中期，C正确；
D、图中“定向诱导”的目的是使重组细胞B发生细胞分化，D错误。
故选D。
14. 我国科学家在干细胞研究中取得新进展，他们使用一种无转基因、快速和可控的方法，可将人类多能干细胞（PSC）转化成为8细胞阶段全能性胚胎样细胞（8CLC，相当于受精卵发育3天状态的全能干细胞）。下列叙述错误的是（ ）
A. 制备8CLC 的过程中，细胞的形态、结构和功能等未发生改变
B. 体外培养时，细胞密度、有害代谢物含量等可影响8CLC 的增殖
C. 来源于病人自身的8CLC 诱导产生的器官进行移植，可避免免疫排斥反应
D. PSC转化成为8CLC 的过程中，细胞内基因会选择性表达
【答案】A
【解析】
【分析】胚胎干细胞的特点是：在形态上，表现为体积较小，细胞核大，核仁明显;在功能上，具有发育的全能性，可分化为成年动物任何一种组织细胞；另一方面，在体外培养条件下， 可不断增殖而不发生分化，可进行冷冻保存，也可以进行某些遗传改造。
【详解】A、制备8CL细胞的过程，细胞的形态、结构和功能均发生改变，A错误；
B、体外培养时，8CL细胞的增殖受细胞密度、有害代谢物等的影响，B正确；
C、来源于病人自身的8CLC 诱导产生的器官进行移植，可避免免疫排斥反应，C正确；
D、细胞分化（或脱分化）都是细胞内基因选择性表达的结果，即PSC转化为8CLC的过程中发生了细胞内多种基因的选择性表达，D正确。
故选A。
15. 下列关于哺乳动物受精过程的叙述，错误的是（ ）
①刚排出的精子需要在雌性动物的生殖道“获能”才具备受精能力
②由卵巢排出的卵子即已具备与精子受精的能力
③自然条件下，哺乳动物的受精是在子宫内完成的
④受精过程中透明带和卵细胞膜会先后发生生理反应
⑤雄原核形成的同时，卵子完成减数分裂Ⅱ，排出第一极体
⑥受精的标志是观察到两个极体或者雌、雄原核
A. ①②③B. ①⑤⑥C. ②③⑤D. ③④⑥
【答案】C
【解析】
【分析】受精过程为：顶体反应→穿越放射冠→穿越透明带（透明带反应）→卵细胞膜反应（卵黄膜封闭作用）→卵子完成减数第二次分裂并释放第二极体→雌雄原核的形成、核膜消失，雌、雄原核融合形成合子→第一次卵裂开始。
【详解】①受精前精子需要在雌性动物的生殖道或人工配置的获能液中获能才具备受精能力，①正确；
②卵巢中排出的卵子要在输卵管或体外培养到MⅡ期才具备受精的能力，②错误；
③自然条件下，哺乳动物的受精是在输卵管中完成的，③错误；
④受精过程阻止多精入卵的两道屏障是透明带反应和卵细胞膜反应，④正确；
⑤精子入卵后被激活的卵子完成减数分裂Ⅱ，排出第二极体后，形成雌原核，随后雌、雄原核融合形成合子，⑤错误；
⑥常以在透明带与卵细胞膜之间观察到两个极体或者雌、雄原核作为受精的标志，⑥正确。
故选C。
16. 科学家采用体外受精技术获得紫羚羊胚胎，并将其移植到长角羚羊体内，使后者成功妊娠并产仔，该工作有助于恢复濒危紫羚羊的种群数量。此过程不涉及的操作是（ ）
A. 超数排卵B. 精子获能处理
C. 细胞核移植D. 胚胎培养
【答案】C
【解析】
【分析】体外受精主要包括：卵母细胞的采集和培养、精子的采集和获能、受精。
（1）卵母细胞的采集和培养①主要方法是：用促性腺激素处理，使其超数排卵，然后，从输卵管中冲取卵子。②第二种方法：从已屠宰母畜的卵巢中采集卵母细胞或直接从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞。
（2）精子的采集和获能①收集精子的方法：假阴道法、手握法和电刺激法；②对精子进行获能处理：包括培养法和化学诱导法。
（3）受精：在获能溶液或专用的受精溶液中完成受精过程。
【详解】由题干信息可知，该过程通过体外受精获得胚胎，再通过胚胎移植，使长角羚羊成功妊娠并产仔，因此需要进行超数排卵、精子获能处理，并对获得的受精卵进行胚胎培养；由于该过程为有性生殖，因此不需要涉及细胞核移植，所以C正确、ABD错误。
故选C。
17. 某同学拟用限制酶（酶1、酶2、酶3和酶4）、DNA连接酶为工具，将目的基因（两端含相应限制酶的识别序列和切割位点）和质粒进行切割、连接，以构建重组表达载体。限制酶的切割位点如图所示。
下列重组表达载体构建方案合理且效率最高的是（ ）
A. 质粒和目的基因都用酶3切割，用E. cli DNA连接酶连接
B. 质粒用酶3切割、目的基因用酶1切割，用T4 DNA连接酶连接
C. 质粒和目的基因都用酶1和酶2切割，用T4 DNA连接酶连接
D. 质粒和目的基因都用酶2和酶4切割，用E. cli DNA连接酶连接
【答案】C
【解析】
【分析】DNA连接酶：
（1）根据酶的来源不同分为两类：E.cliDNA连接酶、T4DNA连接酶。这二者都能连接黏性末端，此外T4DNA连接酶还可以连接平末端，但连接平末端时的效率比较低。
（2）DNA连接酶连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键。
【详解】A、酶3切割后得到的是平末端，应该用T4 DNA连接酶连接，A错误；
B、质粒用酶3切割后得到平末端，目的基因用酶1切割后得到的是黏性末端，二者不能连接，B错误；
C、质粒和目的基因都用酶1和酶2切割后得到黏性末端，用T4 DNA连接酶连接后，还能保证目的基因在质粒上的连接方向，此重组表达载体的构建方案最合理且高效，C正确；
D、若用酶2和酶4切割质粒和目的基因，会破坏质粒上的抗生素抗性基因，连接形成的基因表达载体缺少标记基因，无法进行后续的筛选，D错误。
故选C。
18. 用XhI和SalI两种限制性核酸内切酶分别处理同一DNA片段，酶切位点及酶切产物分离结果如图。以下叙述不正确的是（ ）
A. 如图中两种酶识别的核苷酸序列不同
B. 如图中酶切产物可用于构建重组DNA
C. 泳道①中是用SalI处理得到的酶切产物
D. 图中被酶切的DNA片段是单链DNA
【答案】D
【解析】
【详解】【分析】该题考查DNA的结构、限制酶的特点和功能等。DNA一般是双螺旋结构；限制酶可以识别特定的脱氧核苷酸序列，并在每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割。
【详解】限制酶识别特定的脱氧核苷酸序列，不同的限制酶能识别不同的核苷酸序列，由电泳图可知XhI和SalI两种酶分别切割时，识别的序列不同，A正确；同种限制酶切割出的DNA片段，具有相同的黏性末端，再用DNA连接酶进行连接，可以构成重组DNA，B正确；Sal I将DNA片段切成4段，Xh I将DNA片段切成3段，根据电泳结果可知泳道①为Sal I，泳道②为Xh I，C正确；限制酶切割双链DNA，酶切后的DNA片段仍然是双链DNA，D错误，所以选D。
【点睛】注意图1两种限制酶的识别位点数量，Sal I有3个识别位点，能将DNA片段切成4段，Xh I有2个识别位点，能将DNA片段切成3段。
19. 科学家将苏云金杆菌中的Bt基因（抗虫基因）利用农杆菌转化法导入棉花的愈伤组织细胞，并进行组织培养获得棉花植株。下列相关检测方法与结果的分析错误的是（ ）
A. 提取棉花细胞核DNA，利用PCR技术检测 Bt基因是否插入T-DNA上
B. 提取棉花细胞中的RNA，利用PCR 技术检测Bt基因是否转录出了 mRNA
C. 提取棉花细胞中的蛋白质，利用抗原-抗体杂交技术检测Bt基因是否翻译成Bt抗虫蛋白
D. 用棉花的叶片饲喂棉铃虫来确定Bt基因是否赋予棉花抗虫特性以及抗性程度
【答案】A
【解析】
【分析】目的基因的检测与鉴定：
（1）分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因：DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA：分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质：抗原-抗体杂交技术；
（2）个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
【详解】A、提取棉花细胞核DNA，利用目的基因来设计引物进行PCR扩增，根据扩增是否出现的目条带，检测Bt基因是否插入棉花的染色体DNA上，A错误；
B、提取棉花细胞中的RNA，通过逆转录获得cDNA，利用目的基因来设计引物进行PCR扩增，根据扩增是否出现的目条带，检测Bt基因是否转录出了mRNA，B正确；
C、提取细胞中的蛋白质，采用抗原-抗体分子杂交技术进行检测，根据是否出现杂交带，检测测Bt基因是否翻译成Bt抗虫蛋白，C正确；
D、用棉花的叶片饲喂棉铃虫，根据棉铃虫的死亡情况来确定Bt基因是否赋予棉花抗虫特性以及抗性程度，D正确。
故选A。
20. 科研人员利用乙烯合成酶的反义基因，通过转基因技术获得耐储存的转基因番茄的过程如图所示。下列相关叙述错误的是（ ）
A. 该转基因技术所用的目的基因是乙烯合成酶基因
B. 乙烯合成酶基因与其基因的反义拷贝转录的模板链不同
C. 由图可知过程③依据的原理是碱基互补配对原则
D. 转基因番茄中乙烯含量低的原因可能是乙烯合成酶基因的翻译过程受阻
【答案】A
【解析】
【分析】分析图示可知，转基因番茄中，乙烯合成酶基因的反义拷贝两条链的位置与原基因相反，能通过②转录出反义mRNA，与乙烯合成酶基因转录出的mRNA碱基互补配对，③形成双链RNA，从而阻断翻译抑制乙烯的合成过程，使转基因番茄维持不成熟。
【详解】A、由图示和题意可知，该转基因技术所用的目的基因是乙烯合成酶的反义基因，A错误；
B、由图示可知，乙烯合成酶的反义基因与乙烯合成酶基因都是由α链和β链组成，区别是转录mRNA的模板链相反，使二者转录出的mRNA能互补配对，形成双链RNA，B正确；
C、由图可知，过程③依据的原理是碱基互补配对原则，通过反义mRNA与乙烯合成酶基因转录的mRNA结合，阻碍乙烯合成酶mRNA的翻译过程，C正确；
D、转基因番茄中乙烯含量低的原因是由于乙烯合成酶基因的反义拷贝转录出的反义mRNA与翻译的模板结合，使乙烯合成酶基因的翻译过程受阻，D正确。
故选A。
21. 葡萄糖异构酶在工业上应用广泛，科学家将其第 138 位甘氨酸替换为脯氨酸后，其最适温度提高了 10℃左右。相关叙述正确的是（ ）
A. 蛋白质功能是由氨基酸的种类和数量决定
B. 改造蛋白质结构可通过改造基因结构实现
C. 蛋白质工程不可以定向改变蛋白质的结构
D. 酶最适温度提高是因为脯氨酸比甘氨酸更耐热
【答案】B
【解析】
【分析】1、蛋白质工程：通过设计和改造编码蛋白质的基因获得特定功能的蛋白质。
2、目的：改造现有蛋白质或者制造新的蛋白质。
3、蛋白质功能多样性的原因：氨基酸的种类、数目和排列顺序的不同，肽链的盘曲折叠方式及蛋白质的空间结构的多样性。
【详解】A、蛋白质的功能是由蛋白质的结构决定的，从根本上来说，是由基因决定的，A错误。
B、改造蛋白质结构可通过改造编码蛋白质的基因结构实现，B正确；
C、蛋白质工程可以获得特定功能的蛋白质，因此可以定向改变蛋白质的结构，C错误；
D、酶最适温度提高是因为酶的空间结构发生改变，D错误。
故选B。
22. “DNA 的粗提取与鉴定”实验中的两个操作步骤如图所示。下列相关叙述错误的是（ ）
A. 图l操作的原理是DNA能溶于酒精，而蛋白质等杂质不溶于酒精
B. 图中的丝状物是粗提取的DNA，溶液b是2ml/L 的NaCl溶液
C. 图2所示实验的结果是试管1不变蓝，试管2变蓝色
D. 图2所示实验中设置试管1的目的是作为空白对照
【答案】A
【解析】
【分析】DNA的溶解性：
（1）DNA和蛋白质等其它成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同。
（2） DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA和蛋白质进一步分离。
【详解】A、DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA和蛋白质进一步分离，A错误；
B、DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精，所以图1中溶液a为酒精溶液，其中用玻璃棒卷起的丝状物为粗提取的 DNA，DNA在2ml/L的NaCl溶液中溶解度较大，可用二苯胺沸水浴鉴定DNA，将丝状物DNA溶解于2ml/L的NaCl溶液，故溶液b是2ml/L 的NaCl溶液，B正确；
CD、溶液b是2ml/L 的NaCl溶液，图 2 试管1的作用是证明 2 ml•L-1NaCl 溶液遇二苯胺不会出现蓝色，故设置试管1的目的是作为空白对照，试管2将丝状物DNA溶解于2ml/L的NaCl溶液，加入二苯胺试剂，沸水浴冷却后呈蓝色，因此图2所示实验的结果是试管1不变蓝，试管2变蓝色，CD正确。
故选A。
23. 转基因作物的推广种植，大幅提高了粮食产量，取得了巨大的经济效益和生态效益；硕果累累的转基因作物相关研究在带给人们喜悦的同时，也促使人们关注转基因作物的安全性问题。下列有关转基因作物安全性的叙述，错误的是（ ）
A. 抗性基因可能会随花粉传播到田间近缘野生植物体内，造成基因污染
B. 转入抗性基因的植物可能成为"入侵物种”，影响生态系统的稳定性
C. 大面积种植转基因抗虫棉，有可能会导致棉铃虫群体中相关抗性基因频率增加
D. 只要目的基因来自自然界，培自出的转基因植物就不会有安全性问题
【答案】D
【解析】
【分析】转基因生物的安全性问题包括：食物安全（滞后效应、过敏源、营养成分改变）、生物安全（对生物多样性的影响）、环境安全（对生态系统稳定性的影响）。
【详解】A、抗性基因可能会随花粉传播到田间近缘野生植物体内，造成基因污染，A正确；
B、转基因生物具有某些特殊性质，他们在某地区的竞争能力较强，可能成为“外来物种”，威胁生态系统中其他生物的存在，从而影响生态系统的稳定性，B正确；
C、大面积种植转基因抗虫棉，有可能会导致棉铃虫群体中相关抗性基因频率增加，C正确；
D、即使目的基因来自自然界，培自出的转基因植物仍然可能会有安全性问题，D错误。
故选D。
24. 下列关于治疗性克隆和生殖性克隆的说法，错误的是（ ）
A. 使用病人自己的细胞产生胰岛细胞以治疗糖尿病属于治疗性克隆
B. 将一个克隆的胚胎植入一个女性子宫发育出婴儿的过程属于生殖性克隆
C. 治疗性克隆属于无性生殖，生殖性克隆属于有性生殖
D. 治疗性克隆和生殖性克隆技术均需要应用到动物细胞培养和核移植
【答案】C
【解析】
【分析】1.“治疗性克隆”将使人胚胎干细胞（简称ES细胞）造福于人类的一种非常重要的途径。治疗性克隆是指把患者体细胞移植到去核卵母细胞中构建形成重组胚胎，体外培养到一定时期分离出ES细胞，获得的ES细胞定向分化为所需的特定类型细胞（如神经细胞、肌肉细胞和血细胞），用于治疗。
2.生殖性克隆就是以产生新个体为目的克隆。即用生殖技术制造完整的克隆人。目的是产生一个独立生存的个体。与此相对的是研究性克隆或医学性克隆，指的是产生研究所用的克隆细胞。不产生可独立生存的个体。
【详解】A、把病人的胚胎干细胞在一定的条件下，通过离体培养和诱导分化形成胰岛细胞以治疗糖尿病，属于治疗性克隆，A正确；
B、生殖性克隆就是以产生新个体为目的进行克隆。即用生殖技术将一个克隆的胚胎植入一个女性子宫发育成婴儿的过程，B正确；
C、克隆是无性生殖，C错误；
D、治疗性克隆和生殖性克隆技术均需要应用到动物细胞培养和核移植，D正确。
故选C。
25. 下列关于生物武器的说法，错误的是（ ）
A. 我们对待生物武器的态度应明确而坚定，坚决禁止研制生物武器
B. 生物武器是利用致病菌、病毒、生化毒剂或毒品等形成杀伤力的
C. 生物武器容易被恐怖势力掌握，也容易伤及无辜平民
D. 生物武器的传染性极强，传播途径多、速度快，危害强
【答案】B
【解析】
【分析】生物武器的特点：单位面积效应大；有特定的伤害对象；具有传染性；危害时间久；不易被发现和鉴定；使用者本身易受伤害；生物武器造价低，技术难度不大，隐秘性强，可以在任何地方研制和生产。
【详解】A、我国对待生物武器的态度明确而坚定，即在任何情况下都不发展、不生产、不储存生物武器，坚决禁止研制生物武器，A正确；
B、生物武器包括致病菌、病毒、生化毒剂以及经过基因重组的致病菌，把这些病原体直接或间接得散布到敌方，以造成大规模伤害，因此，社会普遍反对生化武器，毒品不属于生物武器，B错误；
C、生物武器一旦被使用，就可以对军队和平民造成大规模杀伤后果，因此生物武器容易被恐怖势力掌握，也容易伤及无辜平民，C正确；
D、生物武器具有传染范围广、传播途径多、传染性强、速度快，危害强等特点，D正确。
故选B。
二、非选择题（共50分）
26. 偃师葡萄果肉松脆、风味芳香，远近闻名。2017年，国家农业部正式批准对“偃师葡萄”实施农产品地理标志登记保护。葡萄丰收季节，家庭可自制葡萄酒，基本流程如图所示。回答下列问题。
（1）在家庭自制葡萄酒工艺中，起主要作用的菌种是____。
（2）加入适量的糖可以提高发酵液中酒精浓度，但初始糖的浓度过高时，酒精浓度反而降低，可能是因为____。
（3）采摘的葡萄若不及时处理，堆积的葡萄会积累醋酸菌，可以从中筛选出优良醋酸菌菌株。实验人员分离得到4株高产醋酸菌株S1~S4，然后测定了不同条件下的产酸量（单位为g·L-1），结果如图所示。
①与酿酒相比，酿醋需要改变的基本条件有____（答出2点）。
②据图分析，若要高效产酸，可以选择的乙醇浓度和醋酸菌株分别是____、____。
（4）先酿制果酒再生产果醋优势有____（填编号）
①先酿制果酒，发酵液能抑制杂菌的生长，有利于提高果醋的产率
②酿制果酒时形成的醋酸菌膜，有利于提高果醋的产率
③果酒有利于溶出水果中的风味物质并保留在果醋中
【答案】（1）酵母菌 （2）初始糖度太高，酵母菌失水导致生长受抑制
（3） ①. 氧气（空气）、温度 ②. 7% ③. S4 （4）①③
【解析】
【分析】1、果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。故果酒的制作原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精，酵母菌最适宜生长繁殖的温度范围是18～30℃；生产中是否有酒精的产生，可用酸性重铬酸钾来检验，该物质与酒精反应呈现灰绿色。
2、果醋制作中起到主要作用的微生物是醋酸菌，醋酸菌是一种好氧细菌，只有当氧气充足时，才能进行旺盛的生理活动，其代谢类型属于异养需氧型。当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解为醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。醋酸菌的最适生长温度为30～35℃。
【小问1详解】
在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵，在家庭自制葡萄酒工艺中，起主要作用的菌种是酵母菌。
【小问2详解】
若初始糖度太高，则酵母菌会通过渗透作用失去水分导致生长受抑制，从而影响酵母菌的酒精发酵过程，使酒精浓度降低。
【小问3详解】
①酿醋菌属于好氧菌，且生长最适温度更高，与酿酒相比，酿醋需要改变的基本条件有氧气（空气）、温度。
②据图分析，图中信息表明当乙醇浓度为7%，醋酸菌株为S4时，产酸量最高。因此若要高效产酸，可以选择的乙醇浓度和醋酸菌株分别是7%、S4。
【小问4详解】
①先酿制果酒，酒精能杀死一部分杂菌，有利于醋酸菌生长，有利于提高果醋的产率，①正确；
②酿制果酒时形成的醋酸菌膜会造成局部缺氧，不利于好氧菌醋酸菌的代谢，因此不利于提高果醋的产率，②错误；
③果酒是酵母菌酒精发酵制得，有利于溶出水果中的风味物质并保留在果醋中，③正确。
故选①③。
27. 随着社会的发展，石油烃污染也越来越严重。为了筛选出分解石油烃能力更强的微生物，科研人员获取土壤样品后的培养研究过程如图所示。回答下列问题。
（1）为有利于目的菌株的生长、同时抑制其他微生物的生长，过程①~④所使用的培养基在成分上的要求是____。步骤②、③的目的是____。
（2）根据⑤平板上生长的菌落，对④进行接种时用到的接种工具是____；接种后的平板和一个未接种的平板共同培养，其目的是____。
（3）反刍动物，如牛和山羊，具有特殊的器官——瘤胃。在瘤胃中生活着多种微生物，其中许多微生物能分解尿素。请你设计一个实验，从瘤胃中分离出能够分解尿素的微生物____。
【答案】（1） ①. 只含石油烃一种碳源 ②. 富集培养
（2） ①. 涂布器 ②. 检验培养过程中是否有杂菌污染
（3）制备以尿素为唯一氮源的培养基，从牛或羊的瘤胃取样制备菌悬进行梯度稀释，然后在无菌条件下将其接种在以尿素为唯一氮源的培养基上进行无氧培养。经过培养之后获得的单菌落即为目标菌，为了进行鉴定，需要向培养基中加入酚红指示剂，若菌落周围出现红色环，可以初步确定所得微生物为目标菌，而且红色环越大，说明该菌株利用尿素的能力越强。获取分解尿素的目标菌后，若要长期保存，可以采用甘油管藏的方法。
【解析】
【分析】1、在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源（提供碳元素的物质）、氮源（提供氮元素的物质）和无机盐。另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时需将培养基的pH调至酸性，培养细菌时需将pH调至中性或微碱性，培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件。
2、微生物常见的接种的方法：
（1）平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。
（2）稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
【小问1详解】
有些培养基可以抑制其他微生物的生长，这样的培养基可称做选择培养基。因此，为了能有效地分离出分解石油烃的微生物，过程①～④所用培养基，其成分的特点是只含石油烃一种碳源，从而有利于目的菌（分解石油烃微生物）的生长，抑制其他微生物的生长。步骤②③的目的是富集培养，增加目的菌株的浓度。
【小问2详解】
由⑤平板上生长的菌落分布可知，接种方法是稀释涂布平板法，即对④进行接种时用到的接种工具是涂布器。用未接种的平板共同培养，可以检验培养过程中是否有杂菌污染，若有污染，则平板上会有微生物生长。
【小问3详解】
设计实验从瘤胃中分离出能够分解尿素的微生物的步骤为：
1、制备以尿素为唯一氮源的培养基。利用该培养基能将分解尿素微生物筛选出来，而不能分解尿素的微生物在其上不能生长，从而达到筛选的目的
2、从牛或羊的瘤胃取样制备菌悬进行梯度稀释，然后在无菌条件下将其接种（稀释涂布平板法）在以尿素为唯一氮源的培养基上进行无氧培养。
3、经过培养之后获得的单菌落即为目标菌（分解尿素的微生物），为了进行鉴定，需要向培养基中加入酚红指示剂，若菌落周围出现红色环，可以初步确定所得微生物为目标菌，而且红色环越大，说明该菌株利用尿素的能力越强。
4、获取分解尿素目标菌后，若要长期保存，可以采用甘油管藏的方法。
28. 抗人体胃癌的单克隆抗体的制备过程如图所示。回答下列问题。
（1）生产单克隆抗体时，一般不直接利用B淋巴细胞，主要原因是____。在培养箱中还需通入混合气体，其中CO2的主要作用是____。
（2）与诱导植物原生质体融合的方法不同，获得乙可采用____诱导法；由于细胞融合是____的，细胞乙会有3种类型；通过首次筛选获得的丙是____细胞；在二次筛选中，将丙接种到96孔板，进行____培养，再利用____技术检测每孔中的抗体，最终筛选出细胞丁。
【答案】（1） ①. B淋巴细胞不能无限增殖 ②. 维持培养液的pH
（2） ①. 灭活的病毒 ②. 随机 ③. 杂交瘤细胞 ④. 克隆化培养 ⑤. 抗体检测
【解析】
【分析】1、单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。
2、据图分析，甲表示人的胃癌细胞，乙为杂种细胞，表示杂交瘤细胞，丁表示能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。
【小问1详解】
B淋巴细胞不能无限增殖，故生产单克隆抗体时，一般不直接利用B淋巴细胞。动物细胞培养需要一定的气体环境，包括95%的空气和5%CO2，其中CO2的主要作用是维持培养液的pH。
【小问2详解】
与诱导植物原生质体融合的方法不同的是，诱导动物细胞融合特有的方法是用灭活的病毒诱导细胞融合，即获得乙（杂种细胞）可采用灭活的病毒诱导法，由于细胞融合是随机的，细胞乙会有3种类型（B淋巴细胞自身融合的细胞、骨髓瘤细胞自身融合的细胞，杂交瘤细胞）。用选择性培养基对融合后的细胞进行首次筛选获得丙（多种类型的杂交瘤细胞），此后将其接种到96孔板，进行克隆化培养和抗体检测，最终筛选出细胞丁（能产生特异性抗体的杂交瘤细胞）。
29. 畜牧业生产上，培育优良种牛的两种方法如图所示。回答下列问题。
（1）方法Ⅰ中，过程①使用的激素为____。胚胎移植在畜牧生产中的优势主要是____。
（2）方法Ⅱ中，收集的卵母细胞可通过____去核；研究发现用一定浓度的HDACIs（组蛋白去乙酰化酶抑制剂）处理受体卵母细胞能够提高重组胚胎的成活率，据此推测组蛋白乙酰化程度的升高会____（填“促进”或“抑制”）重组胚胎的发育。
（3）在培育良种奶牛时，方法____（填“I”、“Ⅱ”或“I和Ⅱ”）得到的胚胎在移植前要进行性别鉴定；采用SRY-PCR 法进行性别鉴定时，需要使用位于 Y 染色体上的性别决定基因SRY制作的探针对从囊胚的____细胞中提取出的DNA扩增产物进行检测，若结果为____（填“阴性”或“阳性”），则可对该胚胎进行移植，否则不移植。
【答案】（1） ①. 促性腺激素 ②. 充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力
（2） ①. 显微操作 ②. 促进
（3） ①. I ②. 滋养层 ③. 阴性
【解析】
【分析】胚胎移植的基本程序：对供体和受体的选择和处理（同期发情处理，超数排卵处理）、配种或进行人工授精、对胚胎的收集检查培养或保存、进行胚胎移植。用促性腺激素处理，既可以促进供体超数排卵，也可以对供、受体动物进行同期发情处理。
【小问1详解】
促性腺激素能够促进性腺发育，从而促进排卵，给母牛注射促性腺激素可获得更多的牛卵母细胞，故方法I中的①过程使用的激素为促性腺激素。在畜牧生产中采用胚胎移植的优势主要是充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力。
【小问2详解】
采集到的卵母细胞在体外培养到减数第二次分裂中期即可通过显微操作将其细胞核去除，即方法Ⅱ中，收集的卵母细胞可通过显微操作去核。HDACIs是组蛋白去乙酰化酶抑制剂，当它存在时，组蛋白去乙酰化酶不能发挥作用，组蛋白不能去乙酰化，重组胚胎的成活率提高，因此推测组蛋白乙酰化程度的升高会促进重组胚胎的发育。
【小问3详解】
方法I中需要进行精卵的结合，则可能会出现雄性个体，方法Ⅱ进行的是核移植，选取的是雌性乳腺细胞的细胞核，则一定是雌性，所以两种方法得到的胚胎在移植前需要进行性别鉴定的是方法I。进行性别鉴定最有效的方法是SRY—PCR法，取囊胚中滋养层细胞进行性别鉴定，这样不会破坏胚胎，该方法需要使用位于Y染色体上的性别决定基因制作探针，对从滋养层细胞中提取出的DNA扩增产物进行检测；若未出现杂交链，结果为阴性，则该胚胎为雌性，可进行移植，否则不移植。
30. 人类是乙型肝炎病毒的唯一宿主，接种乙肝疫苗是预防乙肝病毒感染的最有效方法。乙肝基因工程疫苗的生产和使用过程如图所示。回答下列问题。
（1）利用PCR 技术扩增目的基因时，PCR 反应体系中，除加入引物和模板DNA 外，一般还要加入____等；PCR 过程每次循环分为3步，其中温度最低的一步是____。PCR产物一般用琼脂糖凝胶电泳来鉴定，可以通过在紫外灯下直接观察____来评价扩增结果。
（2）构建的基因表达载体中除具有图示的组分外，还应含有____（答出2个即可）。图中过程①限制酶的选择方案有两种，一种是只用BamHⅠ，另一种是____。
（3）已知质粒中lacZ基因可使细菌利用加入培养基的物质X-gal，从而使菌落显现出蓝色，若无该基因，菌落则呈白色。为了筛选含目的基因的重组质粒的大肠杆菌，可在培养大肠杆菌的基本培养基中加入____，培养一段时间后，挑选出____色菌落进一步培养以获得大量目的菌。
【答案】（1） ①. 原料、耐高温的DNA聚合酶 ②. 复性 ③. 被染色的DNA电泳条带
（2） ①. 启动子、终止子 ②. 同时使用EcRⅠ和 BamHⅠ
（3） ①. X-gal和青霉素 ②. 白
【解析】
【分析】图示①过程为基因表达载体的构建，②是将重组质粒导入大肠杆菌，③是提取乙肝病毒外壳，④是将乙肝病毒外壳作为疫苗接种，⑤是机体产生特异性免疫产生抗体。
【小问1详解】
PCR反应体系中，除加入引物和模板DNA外，一般还要加入四种脱氧核苷酸做原料及耐高温的DNA聚合酶等；PCR过程每次循环分为3步：第一步为90°C高温变性：DNA解旋过程；第二步为50°C低温复性，即引物结合到互补链DNA上；第三步是72°C中温延伸，即合成子链，因此温度最低的一步是复性。凝胶中的DNA分子通过染色才可以在波长为300nm的紫外灯下被检测出来，因此可以通过在紫外灯下直接观察被染色的DNA电泳条带来评价扩增结果。
【小问2详解】
图示构建的基因表达载体中含有标记基因和目的基因，还应该含有启动子和终止子才能调控目的基因的转录。根据图解可知，含有目的基因的外源DNA和运载体上都有限制酶BamHⅠ、EcRⅠ和EcRV的识别序列和切割位点，用EcRV切割会破坏目的基因，因此图中过程①有两种限制酶选择方案，它们分别是只用BamHⅠ或同时用EcRⅠ和BamHⅠ。
【小问3详解】
用限制酶BamHⅠ切割时破坏了lacZ基因，但没有破坏青霉素抗性基因，因此为了筛选含目的基因的重组质粒的大肠杆菌，可在培养大肠杆菌的基本培养基中加入青霉素和X-gal，根据题干信息“质粒中lacZ基因可使细菌利用加入培养基的物质X-gal，从而使菌落显现出蓝色，若无该基因，菌落则成白色”可知，培养一段时间后挑选出白色的菌落进一步培养可获得大量目的菌。
注意事项：
1.答卷前，考生务必将自己的姓名、考号填写在答题卡上。
2.考试结束后，将答题卡交回。
一、选择题：本题共25小题，每小题2分，共50分。在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的。
1. 老坛酸菜古称菹，《周礼》中就有其名。北魏的《齐民要术》中更是详细介绍了祖先用白菜（古称菘）等原料腌制酸菜的多种方法。下列说法正确的是（ ）
A. 腌制酸菜是利用植物体表面天然的乳酸菌将葡萄糖分解为乳酸和CO2
B. 酸菜制作中选材装至半坛时，放入蒜瓣、生姜及其他香辛料，倒满盐水
C. 腌制的酸菜“咸而不酸”很可能是食盐浓度过多，抑制了菌种发酵
D. 酸菜要尽快食用，以免腌制发酵时间过长导致亚硝酸盐含量增加
【答案】C
【解析】
【分析】泡菜（酸菜）的制作原理：在无氧条件下，乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸。发酵过程中，亚硝酸盐先增加，然后下降至相对稳定。
【详解】A、泡菜（酸菜）的制作原理是在无氧条件下，乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸，但不会产生二氧化碳，A错误；
B、将经过预处理的新鲜蔬菜混合均匀，装入泡莱坛内，装至半坛时，放入蒜瓣、生姜及其他香辛料，继续装至八成满，再徐徐注入配制好的盐水，使盐水没过全部菜料，盖好坛盖，B错误；
C、“咸而不酸”的原因为加盐过多，使乳酸菌生长的环境溶液浓度过高，使乳酸菌失水，抑制了乳酸菌的发酵，C正确；
D、发酵初期，由于硝酸盐还原菌的作用使亚硝酸盐增加；发酵中期，硝酸盐还原菌受抑制，部分亚硝酸盐被分解含量下降；发酵后期，硝酸盐含量下降至相对稳定， D错误。
故选C。
2. 无菌技术是获得纯净微生物培养物的关键。下列相关叙述错误的是（ ）
A. 接种室、接种箱或超净工作台在使用前可用紫外线照射进行灭菌
B. 配制好的培养基装入锥形瓶，加棉塞用牛皮纸包扎好后，进行高压蒸汽灭菌
C. 接种前，操作者的衣着和手清洗后，双手在用酒精棉球进行擦拭消毒该试卷源自 每日更新，享更低价下载。D. 接种时，试管口、瓶口等容易被污染的部位，可通过酒精灯火焰灼烧来灭菌
【答案】A
【解析】
【分析】微生物培养过程中要进行无菌操作，关键就在于防止外来杂菌的入侵，其中消毒和灭菌是常用的防止杂菌入侵的方法，微生物的实验室分离的方法有平板划线法和稀释涂布平板法，通过不同方式的稀释，最终分离得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
【详解】A、接种室、接种箱或超净工作台在使用前可用紫外线照射进行消毒，A错误；
B、对实验用的培养基，采用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌，其操作将配制好的培养基装入锥形瓶，加棉塞用牛皮纸包扎好后，进行高压蒸汽灭菌，B正确；
C、为了防止杂菌污染，对操作者的双手采用酒精进行消毒，C正确；
D、对试管口、锥形瓶口等部位，通过火焰灼烧进行灭菌，以防止杂菌污染，D正确
故选A。
3. 用纸片扩散法测定某病原菌对各种抗生素敏感性的实验，是在某病原菌均匀分布的平板上，铺设含有不同种抗生素的纸片后进行培养。图示为培养的结果，其中抑菌圈是在纸片周围出现的透明区域。下列分析正确的是（ ）
A. 在图示固体培养基上可用平板划线法或涂布法接种病原菌
B. 未出现抑菌圈可能是病原菌与抗生素接触后发生抗性变异
C. 形成的抑菌圈较小的原因可能是该病原菌对该抗生素较为敏感
D. 不同抗生素在平板上的扩散速度不同会对实验结果造成影响
【答案】D
【解析】
【分析】纸片扩散法是药敏实验一种常用的方法，它将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片所含的药物吸取平板中的水分溶解后便不断向纸片周围区域扩散，形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌生长被抑制，形成透明的抑菌圈。
【详解】A、在图示固体培养基上用稀释涂布平板法进行接种病原菌，A错误；
B、病原菌发生抗性变异在接触之前，未出现抑菌圈可能是病原菌对该抗生素不敏感，B错误；
C、微生物对药物较敏感形成的抑菌圈应较大，形成的抑菌圈较小的原因可能是微生物对药物敏感程度较低，C错误；
D、纸片所含的药物吸取平板中的水分溶解后便不断向纸片周围区域扩散，不同抗生素在平板上的扩散速度不同会对实验结果造成影响，D正确。
故选D。
4. 下图为实验室培养和纯化酵母菌过程中的部分操作步骤，下列说法不正确的是（ ）
A. 步骤①是倒平板，待培养基冷却后培养皿要倒置
B. 步骤②在火焰附近用冷却的接种环蘸取一环菌液
C. 步骤③用接种环在培养基上连续划出5条相交的线
D. 步骤④操作时，第1区和第5区的划线不要相连
【答案】C
【解析】
【分析】平板划线法纯化大肠杆菌时不同阶段灼烧接种环的目的不同：
（1）第一次操作：杀死接种环上原有的微生物；
（2）每次划线之前：杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端；
（3）划线结束后：杀死接种环上残存的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。
【详解】A、将图①平板倒置后放入培养箱培养，有利于表面的水分更好的挥发和防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染，A正确。
B、步骤②接种环经灼烧灭菌后，应酒精灯火焰旁冷却后再蘸取菌液（避免杀死菌种），B正确；
C、操作③时，在第二次及以后的划线，总是从上一次划线的末端开始划线，可以将聚集的菌种逐步稀释以便获得单个菌落，C错误；
D、步骤④属于平板划线操作，操作时注意不要将最后一次的划线与第一次的划线相连，因为如果这两个区相连，则会污染已经稀释的菌液，无法达到分离微生物的目的了，D正确。
故选C。
5. 为测定某河流水样中的细菌含量，某研究小组将1 mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL稀释液，经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。下列叙述错误的是（ ）
A. 该实验可使用牛肉膏蛋白胨培养基
B. 可得出每升水样中活菌数大约为3.8×107个
C. 此方法统计的菌落数往往比实际的活菌数目低
D. 利用细菌计数板观察统计的是稀释液中活菌数
【答案】D
【解析】
【分析】稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落，该方法可用于统计活菌数。
【详解】A、培养细菌通常用牛肉膏蛋白胨培养基，细菌在该培养基上可长成菌落，A正确；
B、将1mL水样稀释100倍，在3个平板上分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37，据此可得出每升样品中的活菌数为（39+38+37）÷3÷0.1×1000×100=3.8×107个，B正确；
C、用稀释涂布平板法进行计数时，由于两个或多个细菌聚集在一起时在平板形成的是一个菌落，所以统计的菌落数往往比实际的活菌数目低，C正确；
D、利用细菌计数板观察，即用显微镜直接计数法统计的都是稀释液中所有个体的数目，包括死菌，D错误。
故选D。
6. 啤酒生产过程的简要流程如图所示，其中糖化的目的是将麦芽中的淀粉等有机物水解为小分子物质。下列叙述错误的是（ ）
A. 过程①可用赤霉素处理大麦种子，使种子无需发芽就能产生α-淀粉酶
B. 过程②破碎有利于淀粉与α-淀粉酶充分接触，缩短糖化过程的时间
C. 过程③的主发酵阶段初期应提供氧气，以便缩短完成酒精发酵的时间
D. 发酵过程中要适时往外排气，后发酵时期更应缩短排气时间间隔
【答案】D
【解析】
【分析】赤霉素可以解除休眠，促进种子的萌发；发酵初期应提供氧气，因酵母菌在有氧条件下能快速繁殖，以提高菌种数量、缩短发酵时间。
【详解】A、赤霉素可以解除休眠，促进种子的萌发，所以过程①可用赤霉素溶液浸泡大麦种子，无须发芽就能产生的α−淀粉酶，A正确；
B、据题意“糖化的目的是将麦芽中的淀粉等有机物水解为小分子物质”，故过程②破碎有利于淀粉与α−淀粉酶的充分接触，缩短糖化过程所用的时间，B正确；
C、为了提高菌种数量、缩短发酵时间，过程③的主发酵初期应提供氧气，酵母菌在有氧条件下能快速繁殖，C正确；
D、发酵过程中要适时往外排气，后发酵时期由于糖类物质不充足，产生的气体变少，可以适当延长排气时间间隔，D错误。
故选D。
7. 我国微生物发酵工程生产谷氨酸常用的菌种有谷氨酸棒状杆菌和黄色短杆菌等，下图是发酵工程的示意图。下列叙述错误的是（ ）
A. 谷氨酸是在谷氨酸棒状杆菌和黄色短杆菌的核糖体上合成的
B. 谷氨酸发酵的培养基应调节至中性和弱碱性，以利于谷氨酸的积累
C. 若代谢产物中出现大量的乳酸，从发酵条件看，其原因很可能是通气量不足
D. 图示培养装置可保证微生物对营养物质的需求，有利于提高生产效率
【答案】A
【解析】
【分析】微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。对异养微生物来说，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作为营养要素成分时并不是起单一方面的作用。
【详解】A、核糖体是合成蛋白质的场所，不是氨基酸的合成场所，A错误；
B、谷氨酸发酵时在中性和弱碱性条件下会积累谷氨酸；在酸性条件下则容易形成谷氨酰胺和N乙酰谷氨酰胺，B正确；
C、若代谢物中出现大量的乳酸，从发酵条件看，其原因很可能是通气量不足，微生物无氧条件下，产生乳酸，C正确；
D、图示培养装置可通过通入无菌空气为谷氨酸棒状杆菌提供氧气，通过控制新鲜培养液流入发酵罐的速度，可以保证微生物对营养物质的需求，有利于提高生产效率，D正确。
故选A。
8. 利用微生物发酵制作酱油在我国具有悠久的历史。某企业通过发酵制作酱油的流程示意图如下，有关叙述不正确的是（ ）
A. 酱油的制作是米曲霉、酵母菌等代谢类型不同的微生物共同作用的结果
B. 米曲霉发酵过程不断搅拌有利于其通过有氧呼吸快速增殖
C. 在发酵池中需加入抗生素去除杂菌以保证酱油质量
D. 大豆、小麦、麦麸为米曲霉大量增殖提供了充足的碳源、氮源
【答案】C
【解析】
【分析】微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。对异养微生物来说，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作为营养要素成分时并不是起单一方面的作用。
【详解】A、由图可知，酱油的发酵离不开米曲霉、酵母菌、乳酸菌等，酱油的制作是米曲霉、酵母菌、乳酸菌等代谢类型不同的微生物共同作用的结果，A正确；
B、米曲霉为好氧菌，米曲霉发酵过程不断搅拌有利于其通过有氧呼吸快速增殖，B正确；
C、发酵制作酱油时需要乳酸菌，乳酸菌细菌，抗生素会抑制细菌增殖，因此发酵池中不能加入抗生素，C错误；
D、微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，大豆、小麦、麦麸为米曲霉大量增殖提供了充足的碳源、氮源，D正确。
故选C。
9. 培育“番茄-马铃薯”杂种植株的过程如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A. 过程Ⅰ是利用纤维素酶、果胶酶在等渗溶液中处理去除细胞壁
B. 过程Ⅱ常用PEG融合法等进行诱导，体现植物细胞的全能性
C. 过程Ⅲ中，细胞内的高尔基体会参与细胞壁的再生
D. 由过程Ⅳ过渡到Ⅴ通常需要更换培养基，并给予适当的光照
【答案】B
【解析】
【分析】据图分析，图示过程I为去除植物细胞壁获得原生质体，过程II为原生质体融合，过程III为再生出细胞壁，IV、V是植物组织培养。
【详解】A、植物细胞壁的成分主要是纤维素和果胶，过程Ⅰ需要用纤维素酶、果胶酶处理去除细胞壁获得原生质体，A正确；
B、过程Ⅱ是诱导原生质体融合，常用PEG融合法等进行诱导，体现植物细胞的具有一定的流动性，B错误；
C、过程Ⅲ是杂种细胞的融合，该过程完成的标志是杂种细胞再生出细胞壁，细胞内的高尔基体会参与细胞壁的再生，C正确；
D、过程IV和过程V是诱导植物生芽和生根的过程，生长素与细胞分裂素的比值不同，故由过程Ⅳ过渡到Ⅴ通常需要更换培养基，并给予适当的光照，D正确。
故选B。
10. 紫杉醇是红豆杉属植物体内的一种次生代谢物，主要存在于红豆杉的树皮和树叶中，具有高抗癌活性，现在已被广泛应用于乳腺癌等癌症的治疗。通过植物细胞工程技术获得紫杉醇的途径如图所示。下列相关叙述错误的是（ ）
A. 过程①中，已分化的细胞经过脱分化会失去其特有的结构和功能
B. 红豆杉根尖组织要消毒处理，整个培养过程要在无菌条件下进行
C. 通过上述过程提高了单个细胞产生紫杉醇的产量，推广价值极高
D. 紫杉醇可能不属于红豆杉属植物细胞基本生命活动所必需的物质
【答案】C
【解析】
【分析】分析题图：图示是通过植物细胞工程技术获得紫杉醇的途径，其中①表示脱分化过程，②表示将愈伤组织分散成单个细胞，③表示细胞增殖过程。
【详解】A、图示是通过植物细胞工程技术获得紫杉醇的途径，其中①表示脱分化过程，脱分化过程中已分化的细胞经过脱分化会失去其特有的结构和功能，A正确；
B、为了防止杂菌污染，红豆杉根尖组织要消毒处理，整个培养过程要在无菌条件下进行，B正确；
C、紫杉醇的工厂化生产主要是利用促进细胞分裂的培养条件，提高了多个细胞中次生代谢物的含量，C错误；
D、紫杉醇属于红豆杉的次生代谢物，可能不属于红豆杉基本生命活动所必需的物质，D正确。
故选C。
11. 实验小鼠皮肤细胞培养的基本过程如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A. 过程甲往往选取幼龄小鼠的皮肤组织进行处理
B. 过程乙中可用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理皮肤组织
C. 过程丙属于原代培养，培养液中要含有细胞所需的各种营养成分
D. 过程丁属于传代培养，若细胞贴壁可直接用离心法收集
【答案】D
【解析】
【分析】据图分析，甲表示取实验小鼠的组织细胞，乙表示将动物组织分散成单个皮肤细胞，丙表示原代培养，丁表示传代培养。
【详解】A、甲过程是取样过程，幼龄小鼠的细胞分裂能力较强，选取幼龄小鼠的皮肤组织进行处理有利于培养成功，A正确；
B、乙表示将动物组织分散成单个皮肤细胞，可用机械的方法或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等方法处理，B正确；
C、丙表示原代培养，细胞在体外培养时，培养液中应含有细胞所需的各种营养物质，C正确。
D、丁表示传代培养，进行传代培养时，悬浮培养的细胞可以直接用离心法收集，贴壁细胞需要用胰蛋白酶等处理使其分散成单个细胞后再用离心法收集，D错误。
故选D。
12. 科研人员将抗癌药物连接在单抗上制成“生物导弹”用于癌症治疗。“生物导弹”由两部分组成，一是“瞄准装置”，二是“杀伤性弹头”，下列叙述不正确的是（ ）
A. “瞄准装置”由识别肿瘤的单克隆抗体组成
B. “弹头”由放射性同位素、化学药物和毒素等物质构成
C. “弹头”中的药物有选择杀伤肿瘤细胞的功能
D. “生物导弹”的制备应用了动物细胞培养及动物细胞融合技术
【答案】C
【解析】
【分析】生物导弹=单克隆抗体+ 放射性同位素、化学药物或细胞毒素(借助单克隆抗体定位导向作用将药物定向带到癌细胞，在原位杀死癌细胞)。
【详解】A、抗体能特异性的识别抗原，因此“瞄准装置”由识别肿瘤的单克隆抗体组成，A正确；
B、“弹头”由放射性同位素、化学药物和毒素等物质构成，B正确；
C、“弹头”中的药物不具有选择作用，C错误；
D、生物导弹是单克隆抗体的应用，其制备过程用到了动物细胞培养技术和动物细胞融合技术，属于细胞工程，D正确。
故选C。
13. 某研究人员欲利用核移植技术来治疗糖尿病，提出了下图所示的方案。下列相关叙述，错误的是（ ）
A. 动物体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植
B. 图中用到了体细胞核移植技术、DNA重组技术等
C. 图中所用的去核卵母细胞一般处于减数第二次分裂中期
D. 图中“定向诱导”的目的是使重组细胞B发生基因突变
【答案】D
【解析】
【分析】动物核移植是指将动物的一个细胞的细胞核移入一个去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体；核移植得到的动物称克隆动物，克隆动物的核基因完全来自供体动物，而细胞质基因来自受体细胞；核移植包括体细胞核移植和胚胎细胞核移植，其中体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植，因为体细胞的全能性低于胚胎细胞。
【详解】A、胚胎细胞的全能性高于体细胞，所以动物体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植，A正确；
B、图中用到了体细胞核移植技术（将细胞核导入去核卵母细胞）、DNA重组技术（将正常胰岛素基因导入胚胎干细胞）等，B正确；
C、由于减数第二次分裂中期卵母细胞核的位置靠近第一极体，用微型吸管可一并吸出细胞核和第一极体，所以核移植所用的去核卵母细胞一般处于减数第二次分裂中期，C正确；
D、图中“定向诱导”的目的是使重组细胞B发生细胞分化，D错误。
故选D。
14. 我国科学家在干细胞研究中取得新进展，他们使用一种无转基因、快速和可控的方法，可将人类多能干细胞（PSC）转化成为8细胞阶段全能性胚胎样细胞（8CLC，相当于受精卵发育3天状态的全能干细胞）。下列叙述错误的是（ ）
A. 制备8CLC 的过程中，细胞的形态、结构和功能等未发生改变
B. 体外培养时，细胞密度、有害代谢物含量等可影响8CLC 的增殖
C. 来源于病人自身的8CLC 诱导产生的器官进行移植，可避免免疫排斥反应
D. PSC转化成为8CLC 的过程中，细胞内基因会选择性表达
【答案】A
【解析】
【分析】胚胎干细胞的特点是：在形态上，表现为体积较小，细胞核大，核仁明显;在功能上，具有发育的全能性，可分化为成年动物任何一种组织细胞；另一方面，在体外培养条件下， 可不断增殖而不发生分化，可进行冷冻保存，也可以进行某些遗传改造。
【详解】A、制备8CL细胞的过程，细胞的形态、结构和功能均发生改变，A错误；
B、体外培养时，8CL细胞的增殖受细胞密度、有害代谢物等的影响，B正确；
C、来源于病人自身的8CLC 诱导产生的器官进行移植，可避免免疫排斥反应，C正确；
D、细胞分化（或脱分化）都是细胞内基因选择性表达的结果，即PSC转化为8CLC的过程中发生了细胞内多种基因的选择性表达，D正确。
故选A。
15. 下列关于哺乳动物受精过程的叙述，错误的是（ ）
①刚排出的精子需要在雌性动物的生殖道“获能”才具备受精能力
②由卵巢排出的卵子即已具备与精子受精的能力
③自然条件下，哺乳动物的受精是在子宫内完成的
④受精过程中透明带和卵细胞膜会先后发生生理反应
⑤雄原核形成的同时，卵子完成减数分裂Ⅱ，排出第一极体
⑥受精的标志是观察到两个极体或者雌、雄原核
A. ①②③B. ①⑤⑥C. ②③⑤D. ③④⑥
【答案】C
【解析】
【分析】受精过程为：顶体反应→穿越放射冠→穿越透明带（透明带反应）→卵细胞膜反应（卵黄膜封闭作用）→卵子完成减数第二次分裂并释放第二极体→雌雄原核的形成、核膜消失，雌、雄原核融合形成合子→第一次卵裂开始。
【详解】①受精前精子需要在雌性动物的生殖道或人工配置的获能液中获能才具备受精能力，①正确；
②卵巢中排出的卵子要在输卵管或体外培养到MⅡ期才具备受精的能力，②错误；
③自然条件下，哺乳动物的受精是在输卵管中完成的，③错误；
④受精过程阻止多精入卵的两道屏障是透明带反应和卵细胞膜反应，④正确；
⑤精子入卵后被激活的卵子完成减数分裂Ⅱ，排出第二极体后，形成雌原核，随后雌、雄原核融合形成合子，⑤错误；
⑥常以在透明带与卵细胞膜之间观察到两个极体或者雌、雄原核作为受精的标志，⑥正确。
故选C。
16. 科学家采用体外受精技术获得紫羚羊胚胎，并将其移植到长角羚羊体内，使后者成功妊娠并产仔，该工作有助于恢复濒危紫羚羊的种群数量。此过程不涉及的操作是（ ）
A. 超数排卵B. 精子获能处理
C. 细胞核移植D. 胚胎培养
【答案】C
【解析】
【分析】体外受精主要包括：卵母细胞的采集和培养、精子的采集和获能、受精。
（1）卵母细胞的采集和培养①主要方法是：用促性腺激素处理，使其超数排卵，然后，从输卵管中冲取卵子。②第二种方法：从已屠宰母畜的卵巢中采集卵母细胞或直接从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞。
（2）精子的采集和获能①收集精子的方法：假阴道法、手握法和电刺激法；②对精子进行获能处理：包括培养法和化学诱导法。
（3）受精：在获能溶液或专用的受精溶液中完成受精过程。
【详解】由题干信息可知，该过程通过体外受精获得胚胎，再通过胚胎移植，使长角羚羊成功妊娠并产仔，因此需要进行超数排卵、精子获能处理，并对获得的受精卵进行胚胎培养；由于该过程为有性生殖，因此不需要涉及细胞核移植，所以C正确、ABD错误。
故选C。
17. 某同学拟用限制酶（酶1、酶2、酶3和酶4）、DNA连接酶为工具，将目的基因（两端含相应限制酶的识别序列和切割位点）和质粒进行切割、连接，以构建重组表达载体。限制酶的切割位点如图所示。
下列重组表达载体构建方案合理且效率最高的是（ ）
A. 质粒和目的基因都用酶3切割，用E. cli DNA连接酶连接
B. 质粒用酶3切割、目的基因用酶1切割，用T4 DNA连接酶连接
C. 质粒和目的基因都用酶1和酶2切割，用T4 DNA连接酶连接
D. 质粒和目的基因都用酶2和酶4切割，用E. cli DNA连接酶连接
【答案】C
【解析】
【分析】DNA连接酶：
（1）根据酶的来源不同分为两类：E.cliDNA连接酶、T4DNA连接酶。这二者都能连接黏性末端，此外T4DNA连接酶还可以连接平末端，但连接平末端时的效率比较低。
（2）DNA连接酶连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键。
【详解】A、酶3切割后得到的是平末端，应该用T4 DNA连接酶连接，A错误；
B、质粒用酶3切割后得到平末端，目的基因用酶1切割后得到的是黏性末端，二者不能连接，B错误；
C、质粒和目的基因都用酶1和酶2切割后得到黏性末端，用T4 DNA连接酶连接后，还能保证目的基因在质粒上的连接方向，此重组表达载体的构建方案最合理且高效，C正确；
D、若用酶2和酶4切割质粒和目的基因，会破坏质粒上的抗生素抗性基因，连接形成的基因表达载体缺少标记基因，无法进行后续的筛选，D错误。
故选C。
18. 用XhI和SalI两种限制性核酸内切酶分别处理同一DNA片段，酶切位点及酶切产物分离结果如图。以下叙述不正确的是（ ）
A. 如图中两种酶识别的核苷酸序列不同
B. 如图中酶切产物可用于构建重组DNA
C. 泳道①中是用SalI处理得到的酶切产物
D. 图中被酶切的DNA片段是单链DNA
【答案】D
【解析】
【详解】【分析】该题考查DNA的结构、限制酶的特点和功能等。DNA一般是双螺旋结构；限制酶可以识别特定的脱氧核苷酸序列，并在每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割。
【详解】限制酶识别特定的脱氧核苷酸序列，不同的限制酶能识别不同的核苷酸序列，由电泳图可知XhI和SalI两种酶分别切割时，识别的序列不同，A正确；同种限制酶切割出的DNA片段，具有相同的黏性末端，再用DNA连接酶进行连接，可以构成重组DNA，B正确；Sal I将DNA片段切成4段，Xh I将DNA片段切成3段，根据电泳结果可知泳道①为Sal I，泳道②为Xh I，C正确；限制酶切割双链DNA，酶切后的DNA片段仍然是双链DNA，D错误，所以选D。
【点睛】注意图1两种限制酶的识别位点数量，Sal I有3个识别位点，能将DNA片段切成4段，Xh I有2个识别位点，能将DNA片段切成3段。
19. 科学家将苏云金杆菌中的Bt基因（抗虫基因）利用农杆菌转化法导入棉花的愈伤组织细胞，并进行组织培养获得棉花植株。下列相关检测方法与结果的分析错误的是（ ）
A. 提取棉花细胞核DNA，利用PCR技术检测 Bt基因是否插入T-DNA上
B. 提取棉花细胞中的RNA，利用PCR 技术检测Bt基因是否转录出了 mRNA
C. 提取棉花细胞中的蛋白质，利用抗原-抗体杂交技术检测Bt基因是否翻译成Bt抗虫蛋白
D. 用棉花的叶片饲喂棉铃虫来确定Bt基因是否赋予棉花抗虫特性以及抗性程度
【答案】A
【解析】
【分析】目的基因的检测与鉴定：
（1）分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因：DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA：分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质：抗原-抗体杂交技术；
（2）个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
【详解】A、提取棉花细胞核DNA，利用目的基因来设计引物进行PCR扩增，根据扩增是否出现的目条带，检测Bt基因是否插入棉花的染色体DNA上，A错误；
B、提取棉花细胞中的RNA，通过逆转录获得cDNA，利用目的基因来设计引物进行PCR扩增，根据扩增是否出现的目条带，检测Bt基因是否转录出了mRNA，B正确；
C、提取细胞中的蛋白质，采用抗原-抗体分子杂交技术进行检测，根据是否出现杂交带，检测测Bt基因是否翻译成Bt抗虫蛋白，C正确；
D、用棉花的叶片饲喂棉铃虫，根据棉铃虫的死亡情况来确定Bt基因是否赋予棉花抗虫特性以及抗性程度，D正确。
故选A。
20. 科研人员利用乙烯合成酶的反义基因，通过转基因技术获得耐储存的转基因番茄的过程如图所示。下列相关叙述错误的是（ ）
A. 该转基因技术所用的目的基因是乙烯合成酶基因
B. 乙烯合成酶基因与其基因的反义拷贝转录的模板链不同
C. 由图可知过程③依据的原理是碱基互补配对原则
D. 转基因番茄中乙烯含量低的原因可能是乙烯合成酶基因的翻译过程受阻
【答案】A
【解析】
【分析】分析图示可知，转基因番茄中，乙烯合成酶基因的反义拷贝两条链的位置与原基因相反，能通过②转录出反义mRNA，与乙烯合成酶基因转录出的mRNA碱基互补配对，③形成双链RNA，从而阻断翻译抑制乙烯的合成过程，使转基因番茄维持不成熟。
【详解】A、由图示和题意可知，该转基因技术所用的目的基因是乙烯合成酶的反义基因，A错误；
B、由图示可知，乙烯合成酶的反义基因与乙烯合成酶基因都是由α链和β链组成，区别是转录mRNA的模板链相反，使二者转录出的mRNA能互补配对，形成双链RNA，B正确；
C、由图可知，过程③依据的原理是碱基互补配对原则，通过反义mRNA与乙烯合成酶基因转录的mRNA结合，阻碍乙烯合成酶mRNA的翻译过程，C正确；
D、转基因番茄中乙烯含量低的原因是由于乙烯合成酶基因的反义拷贝转录出的反义mRNA与翻译的模板结合，使乙烯合成酶基因的翻译过程受阻，D正确。
故选A。
21. 葡萄糖异构酶在工业上应用广泛，科学家将其第 138 位甘氨酸替换为脯氨酸后，其最适温度提高了 10℃左右。相关叙述正确的是（ ）
A. 蛋白质功能是由氨基酸的种类和数量决定
B. 改造蛋白质结构可通过改造基因结构实现
C. 蛋白质工程不可以定向改变蛋白质的结构
D. 酶最适温度提高是因为脯氨酸比甘氨酸更耐热
【答案】B
【解析】
【分析】1、蛋白质工程：通过设计和改造编码蛋白质的基因获得特定功能的蛋白质。
2、目的：改造现有蛋白质或者制造新的蛋白质。
3、蛋白质功能多样性的原因：氨基酸的种类、数目和排列顺序的不同，肽链的盘曲折叠方式及蛋白质的空间结构的多样性。
【详解】A、蛋白质的功能是由蛋白质的结构决定的，从根本上来说，是由基因决定的，A错误。
B、改造蛋白质结构可通过改造编码蛋白质的基因结构实现，B正确；
C、蛋白质工程可以获得特定功能的蛋白质，因此可以定向改变蛋白质的结构，C错误；
D、酶最适温度提高是因为酶的空间结构发生改变，D错误。
故选B。
22. “DNA 的粗提取与鉴定”实验中的两个操作步骤如图所示。下列相关叙述错误的是（ ）
A. 图l操作的原理是DNA能溶于酒精，而蛋白质等杂质不溶于酒精
B. 图中的丝状物是粗提取的DNA，溶液b是2ml/L 的NaCl溶液
C. 图2所示实验的结果是试管1不变蓝，试管2变蓝色
D. 图2所示实验中设置试管1的目的是作为空白对照
【答案】A
【解析】
【分析】DNA的溶解性：
（1）DNA和蛋白质等其它成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同。
（2） DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA和蛋白质进一步分离。
【详解】A、DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA和蛋白质进一步分离，A错误；
B、DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精，所以图1中溶液a为酒精溶液，其中用玻璃棒卷起的丝状物为粗提取的 DNA，DNA在2ml/L的NaCl溶液中溶解度较大，可用二苯胺沸水浴鉴定DNA，将丝状物DNA溶解于2ml/L的NaCl溶液，故溶液b是2ml/L 的NaCl溶液，B正确；
CD、溶液b是2ml/L 的NaCl溶液，图 2 试管1的作用是证明 2 ml•L-1NaCl 溶液遇二苯胺不会出现蓝色，故设置试管1的目的是作为空白对照，试管2将丝状物DNA溶解于2ml/L的NaCl溶液，加入二苯胺试剂，沸水浴冷却后呈蓝色，因此图2所示实验的结果是试管1不变蓝，试管2变蓝色，CD正确。
故选A。
23. 转基因作物的推广种植，大幅提高了粮食产量，取得了巨大的经济效益和生态效益；硕果累累的转基因作物相关研究在带给人们喜悦的同时，也促使人们关注转基因作物的安全性问题。下列有关转基因作物安全性的叙述，错误的是（ ）
A. 抗性基因可能会随花粉传播到田间近缘野生植物体内，造成基因污染
B. 转入抗性基因的植物可能成为"入侵物种”，影响生态系统的稳定性
C. 大面积种植转基因抗虫棉，有可能会导致棉铃虫群体中相关抗性基因频率增加
D. 只要目的基因来自自然界，培自出的转基因植物就不会有安全性问题
【答案】D
【解析】
【分析】转基因生物的安全性问题包括：食物安全（滞后效应、过敏源、营养成分改变）、生物安全（对生物多样性的影响）、环境安全（对生态系统稳定性的影响）。
【详解】A、抗性基因可能会随花粉传播到田间近缘野生植物体内，造成基因污染，A正确；
B、转基因生物具有某些特殊性质，他们在某地区的竞争能力较强，可能成为“外来物种”，威胁生态系统中其他生物的存在，从而影响生态系统的稳定性，B正确；
C、大面积种植转基因抗虫棉，有可能会导致棉铃虫群体中相关抗性基因频率增加，C正确；
D、即使目的基因来自自然界，培自出的转基因植物仍然可能会有安全性问题，D错误。
故选D。
24. 下列关于治疗性克隆和生殖性克隆的说法，错误的是（ ）
A. 使用病人自己的细胞产生胰岛细胞以治疗糖尿病属于治疗性克隆
B. 将一个克隆的胚胎植入一个女性子宫发育出婴儿的过程属于生殖性克隆
C. 治疗性克隆属于无性生殖，生殖性克隆属于有性生殖
D. 治疗性克隆和生殖性克隆技术均需要应用到动物细胞培养和核移植
【答案】C
【解析】
【分析】1.“治疗性克隆”将使人胚胎干细胞（简称ES细胞）造福于人类的一种非常重要的途径。治疗性克隆是指把患者体细胞移植到去核卵母细胞中构建形成重组胚胎，体外培养到一定时期分离出ES细胞，获得的ES细胞定向分化为所需的特定类型细胞（如神经细胞、肌肉细胞和血细胞），用于治疗。
2.生殖性克隆就是以产生新个体为目的克隆。即用生殖技术制造完整的克隆人。目的是产生一个独立生存的个体。与此相对的是研究性克隆或医学性克隆，指的是产生研究所用的克隆细胞。不产生可独立生存的个体。
【详解】A、把病人的胚胎干细胞在一定的条件下，通过离体培养和诱导分化形成胰岛细胞以治疗糖尿病，属于治疗性克隆，A正确；
B、生殖性克隆就是以产生新个体为目的进行克隆。即用生殖技术将一个克隆的胚胎植入一个女性子宫发育成婴儿的过程，B正确；
C、克隆是无性生殖，C错误；
D、治疗性克隆和生殖性克隆技术均需要应用到动物细胞培养和核移植，D正确。
故选C。
25. 下列关于生物武器的说法，错误的是（ ）
A. 我们对待生物武器的态度应明确而坚定，坚决禁止研制生物武器
B. 生物武器是利用致病菌、病毒、生化毒剂或毒品等形成杀伤力的
C. 生物武器容易被恐怖势力掌握，也容易伤及无辜平民
D. 生物武器的传染性极强，传播途径多、速度快，危害强
【答案】B
【解析】
【分析】生物武器的特点：单位面积效应大；有特定的伤害对象；具有传染性；危害时间久；不易被发现和鉴定；使用者本身易受伤害；生物武器造价低，技术难度不大，隐秘性强，可以在任何地方研制和生产。
【详解】A、我国对待生物武器的态度明确而坚定，即在任何情况下都不发展、不生产、不储存生物武器，坚决禁止研制生物武器，A正确；
B、生物武器包括致病菌、病毒、生化毒剂以及经过基因重组的致病菌，把这些病原体直接或间接得散布到敌方，以造成大规模伤害，因此，社会普遍反对生化武器，毒品不属于生物武器，B错误；
C、生物武器一旦被使用，就可以对军队和平民造成大规模杀伤后果，因此生物武器容易被恐怖势力掌握，也容易伤及无辜平民，C正确；
D、生物武器具有传染范围广、传播途径多、传染性强、速度快，危害强等特点，D正确。
故选B。
二、非选择题（共50分）
26. 偃师葡萄果肉松脆、风味芳香，远近闻名。2017年，国家农业部正式批准对“偃师葡萄”实施农产品地理标志登记保护。葡萄丰收季节，家庭可自制葡萄酒，基本流程如图所示。回答下列问题。
（1）在家庭自制葡萄酒工艺中，起主要作用的菌种是____。
（2）加入适量的糖可以提高发酵液中酒精浓度，但初始糖的浓度过高时，酒精浓度反而降低，可能是因为____。
（3）采摘的葡萄若不及时处理，堆积的葡萄会积累醋酸菌，可以从中筛选出优良醋酸菌菌株。实验人员分离得到4株高产醋酸菌株S1~S4，然后测定了不同条件下的产酸量（单位为g·L-1），结果如图所示。
①与酿酒相比，酿醋需要改变的基本条件有____（答出2点）。
②据图分析，若要高效产酸，可以选择的乙醇浓度和醋酸菌株分别是____、____。
（4）先酿制果酒再生产果醋优势有____（填编号）
①先酿制果酒，发酵液能抑制杂菌的生长，有利于提高果醋的产率
②酿制果酒时形成的醋酸菌膜，有利于提高果醋的产率
③果酒有利于溶出水果中的风味物质并保留在果醋中
【答案】（1）酵母菌 （2）初始糖度太高，酵母菌失水导致生长受抑制
（3） ①. 氧气（空气）、温度 ②. 7% ③. S4 （4）①③
【解析】
【分析】1、果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。故果酒的制作原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精，酵母菌最适宜生长繁殖的温度范围是18～30℃；生产中是否有酒精的产生，可用酸性重铬酸钾来检验，该物质与酒精反应呈现灰绿色。
2、果醋制作中起到主要作用的微生物是醋酸菌，醋酸菌是一种好氧细菌，只有当氧气充足时，才能进行旺盛的生理活动，其代谢类型属于异养需氧型。当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解为醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。醋酸菌的最适生长温度为30～35℃。
【小问1详解】
在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵，在家庭自制葡萄酒工艺中，起主要作用的菌种是酵母菌。
【小问2详解】
若初始糖度太高，则酵母菌会通过渗透作用失去水分导致生长受抑制，从而影响酵母菌的酒精发酵过程，使酒精浓度降低。
【小问3详解】
①酿醋菌属于好氧菌，且生长最适温度更高，与酿酒相比，酿醋需要改变的基本条件有氧气（空气）、温度。
②据图分析，图中信息表明当乙醇浓度为7%，醋酸菌株为S4时，产酸量最高。因此若要高效产酸，可以选择的乙醇浓度和醋酸菌株分别是7%、S4。
【小问4详解】
①先酿制果酒，酒精能杀死一部分杂菌，有利于醋酸菌生长，有利于提高果醋的产率，①正确；
②酿制果酒时形成的醋酸菌膜会造成局部缺氧，不利于好氧菌醋酸菌的代谢，因此不利于提高果醋的产率，②错误；
③果酒是酵母菌酒精发酵制得，有利于溶出水果中的风味物质并保留在果醋中，③正确。
故选①③。
27. 随着社会的发展，石油烃污染也越来越严重。为了筛选出分解石油烃能力更强的微生物，科研人员获取土壤样品后的培养研究过程如图所示。回答下列问题。
（1）为有利于目的菌株的生长、同时抑制其他微生物的生长，过程①~④所使用的培养基在成分上的要求是____。步骤②、③的目的是____。
（2）根据⑤平板上生长的菌落，对④进行接种时用到的接种工具是____；接种后的平板和一个未接种的平板共同培养，其目的是____。
（3）反刍动物，如牛和山羊，具有特殊的器官——瘤胃。在瘤胃中生活着多种微生物，其中许多微生物能分解尿素。请你设计一个实验，从瘤胃中分离出能够分解尿素的微生物____。
【答案】（1） ①. 只含石油烃一种碳源 ②. 富集培养
（2） ①. 涂布器 ②. 检验培养过程中是否有杂菌污染
（3）制备以尿素为唯一氮源的培养基，从牛或羊的瘤胃取样制备菌悬进行梯度稀释，然后在无菌条件下将其接种在以尿素为唯一氮源的培养基上进行无氧培养。经过培养之后获得的单菌落即为目标菌，为了进行鉴定，需要向培养基中加入酚红指示剂，若菌落周围出现红色环，可以初步确定所得微生物为目标菌，而且红色环越大，说明该菌株利用尿素的能力越强。获取分解尿素的目标菌后，若要长期保存，可以采用甘油管藏的方法。
【解析】
【分析】1、在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源（提供碳元素的物质）、氮源（提供氮元素的物质）和无机盐。另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时需将培养基的pH调至酸性，培养细菌时需将pH调至中性或微碱性，培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件。
2、微生物常见的接种的方法：
（1）平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。
（2）稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
【小问1详解】
有些培养基可以抑制其他微生物的生长，这样的培养基可称做选择培养基。因此，为了能有效地分离出分解石油烃的微生物，过程①～④所用培养基，其成分的特点是只含石油烃一种碳源，从而有利于目的菌（分解石油烃微生物）的生长，抑制其他微生物的生长。步骤②③的目的是富集培养，增加目的菌株的浓度。
【小问2详解】
由⑤平板上生长的菌落分布可知，接种方法是稀释涂布平板法，即对④进行接种时用到的接种工具是涂布器。用未接种的平板共同培养，可以检验培养过程中是否有杂菌污染，若有污染，则平板上会有微生物生长。
【小问3详解】
设计实验从瘤胃中分离出能够分解尿素的微生物的步骤为：
1、制备以尿素为唯一氮源的培养基。利用该培养基能将分解尿素微生物筛选出来，而不能分解尿素的微生物在其上不能生长，从而达到筛选的目的
2、从牛或羊的瘤胃取样制备菌悬进行梯度稀释，然后在无菌条件下将其接种（稀释涂布平板法）在以尿素为唯一氮源的培养基上进行无氧培养。
3、经过培养之后获得的单菌落即为目标菌（分解尿素的微生物），为了进行鉴定，需要向培养基中加入酚红指示剂，若菌落周围出现红色环，可以初步确定所得微生物为目标菌，而且红色环越大，说明该菌株利用尿素的能力越强。
4、获取分解尿素目标菌后，若要长期保存，可以采用甘油管藏的方法。
28. 抗人体胃癌的单克隆抗体的制备过程如图所示。回答下列问题。
（1）生产单克隆抗体时，一般不直接利用B淋巴细胞，主要原因是____。在培养箱中还需通入混合气体，其中CO2的主要作用是____。
（2）与诱导植物原生质体融合的方法不同，获得乙可采用____诱导法；由于细胞融合是____的，细胞乙会有3种类型；通过首次筛选获得的丙是____细胞；在二次筛选中，将丙接种到96孔板，进行____培养，再利用____技术检测每孔中的抗体，最终筛选出细胞丁。
【答案】（1） ①. B淋巴细胞不能无限增殖 ②. 维持培养液的pH
（2） ①. 灭活的病毒 ②. 随机 ③. 杂交瘤细胞 ④. 克隆化培养 ⑤. 抗体检测
【解析】
【分析】1、单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。
2、据图分析，甲表示人的胃癌细胞，乙为杂种细胞，表示杂交瘤细胞，丁表示能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。
【小问1详解】
B淋巴细胞不能无限增殖，故生产单克隆抗体时，一般不直接利用B淋巴细胞。动物细胞培养需要一定的气体环境，包括95%的空气和5%CO2，其中CO2的主要作用是维持培养液的pH。
【小问2详解】
与诱导植物原生质体融合的方法不同的是，诱导动物细胞融合特有的方法是用灭活的病毒诱导细胞融合，即获得乙（杂种细胞）可采用灭活的病毒诱导法，由于细胞融合是随机的，细胞乙会有3种类型（B淋巴细胞自身融合的细胞、骨髓瘤细胞自身融合的细胞，杂交瘤细胞）。用选择性培养基对融合后的细胞进行首次筛选获得丙（多种类型的杂交瘤细胞），此后将其接种到96孔板，进行克隆化培养和抗体检测，最终筛选出细胞丁（能产生特异性抗体的杂交瘤细胞）。
29. 畜牧业生产上，培育优良种牛的两种方法如图所示。回答下列问题。
（1）方法Ⅰ中，过程①使用的激素为____。胚胎移植在畜牧生产中的优势主要是____。
（2）方法Ⅱ中，收集的卵母细胞可通过____去核；研究发现用一定浓度的HDACIs（组蛋白去乙酰化酶抑制剂）处理受体卵母细胞能够提高重组胚胎的成活率，据此推测组蛋白乙酰化程度的升高会____（填“促进”或“抑制”）重组胚胎的发育。
（3）在培育良种奶牛时，方法____（填“I”、“Ⅱ”或“I和Ⅱ”）得到的胚胎在移植前要进行性别鉴定；采用SRY-PCR 法进行性别鉴定时，需要使用位于 Y 染色体上的性别决定基因SRY制作的探针对从囊胚的____细胞中提取出的DNA扩增产物进行检测，若结果为____（填“阴性”或“阳性”），则可对该胚胎进行移植，否则不移植。
【答案】（1） ①. 促性腺激素 ②. 充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力
（2） ①. 显微操作 ②. 促进
（3） ①. I ②. 滋养层 ③. 阴性
【解析】
【分析】胚胎移植的基本程序：对供体和受体的选择和处理（同期发情处理，超数排卵处理）、配种或进行人工授精、对胚胎的收集检查培养或保存、进行胚胎移植。用促性腺激素处理，既可以促进供体超数排卵，也可以对供、受体动物进行同期发情处理。
【小问1详解】
促性腺激素能够促进性腺发育，从而促进排卵，给母牛注射促性腺激素可获得更多的牛卵母细胞，故方法I中的①过程使用的激素为促性腺激素。在畜牧生产中采用胚胎移植的优势主要是充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力。
【小问2详解】
采集到的卵母细胞在体外培养到减数第二次分裂中期即可通过显微操作将其细胞核去除，即方法Ⅱ中，收集的卵母细胞可通过显微操作去核。HDACIs是组蛋白去乙酰化酶抑制剂，当它存在时，组蛋白去乙酰化酶不能发挥作用，组蛋白不能去乙酰化，重组胚胎的成活率提高，因此推测组蛋白乙酰化程度的升高会促进重组胚胎的发育。
【小问3详解】
方法I中需要进行精卵的结合，则可能会出现雄性个体，方法Ⅱ进行的是核移植，选取的是雌性乳腺细胞的细胞核，则一定是雌性，所以两种方法得到的胚胎在移植前需要进行性别鉴定的是方法I。进行性别鉴定最有效的方法是SRY—PCR法，取囊胚中滋养层细胞进行性别鉴定，这样不会破坏胚胎，该方法需要使用位于Y染色体上的性别决定基因制作探针，对从滋养层细胞中提取出的DNA扩增产物进行检测；若未出现杂交链，结果为阴性，则该胚胎为雌性，可进行移植，否则不移植。
30. 人类是乙型肝炎病毒的唯一宿主，接种乙肝疫苗是预防乙肝病毒感染的最有效方法。乙肝基因工程疫苗的生产和使用过程如图所示。回答下列问题。
（1）利用PCR 技术扩增目的基因时，PCR 反应体系中，除加入引物和模板DNA 外，一般还要加入____等；PCR 过程每次循环分为3步，其中温度最低的一步是____。PCR产物一般用琼脂糖凝胶电泳来鉴定，可以通过在紫外灯下直接观察____来评价扩增结果。
（2）构建的基因表达载体中除具有图示的组分外，还应含有____（答出2个即可）。图中过程①限制酶的选择方案有两种，一种是只用BamHⅠ，另一种是____。
（3）已知质粒中lacZ基因可使细菌利用加入培养基的物质X-gal，从而使菌落显现出蓝色，若无该基因，菌落则呈白色。为了筛选含目的基因的重组质粒的大肠杆菌，可在培养大肠杆菌的基本培养基中加入____，培养一段时间后，挑选出____色菌落进一步培养以获得大量目的菌。
【答案】（1） ①. 原料、耐高温的DNA聚合酶 ②. 复性 ③. 被染色的DNA电泳条带
（2） ①. 启动子、终止子 ②. 同时使用EcRⅠ和 BamHⅠ
（3） ①. X-gal和青霉素 ②. 白
【解析】
【分析】图示①过程为基因表达载体的构建，②是将重组质粒导入大肠杆菌，③是提取乙肝病毒外壳，④是将乙肝病毒外壳作为疫苗接种，⑤是机体产生特异性免疫产生抗体。
【小问1详解】
PCR反应体系中，除加入引物和模板DNA外，一般还要加入四种脱氧核苷酸做原料及耐高温的DNA聚合酶等；PCR过程每次循环分为3步：第一步为90°C高温变性：DNA解旋过程；第二步为50°C低温复性，即引物结合到互补链DNA上；第三步是72°C中温延伸，即合成子链，因此温度最低的一步是复性。凝胶中的DNA分子通过染色才可以在波长为300nm的紫外灯下被检测出来，因此可以通过在紫外灯下直接观察被染色的DNA电泳条带来评价扩增结果。
【小问2详解】
图示构建的基因表达载体中含有标记基因和目的基因，还应该含有启动子和终止子才能调控目的基因的转录。根据图解可知，含有目的基因的外源DNA和运载体上都有限制酶BamHⅠ、EcRⅠ和EcRV的识别序列和切割位点，用EcRV切割会破坏目的基因，因此图中过程①有两种限制酶选择方案，它们分别是只用BamHⅠ或同时用EcRⅠ和BamHⅠ。
【小问3详解】
用限制酶BamHⅠ切割时破坏了lacZ基因，但没有破坏青霉素抗性基因，因此为了筛选含目的基因的重组质粒的大肠杆菌，可在培养大肠杆菌的基本培养基中加入青霉素和X-gal，根据题干信息“质粒中lacZ基因可使细菌利用加入培养基的物质X-gal，从而使菌落显现出蓝色，若无该基因，菌落则成白色”可知，培养一段时间后挑选出白色的菌落进一步培养可获得大量目的菌。
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