江苏省无锡市江阴市六校联考2024-2025学年高二下4月期中生物试卷（解析版）

这是一份江苏省无锡市江阴市六校联考2024-2025学年高二下4月期中生物试卷（解析版），共26页。试卷主要包含了单项选择题，多选题等内容，欢迎下载使用。
一、单项选择题：每题2分，共计28分。每题只有一个选项最符合题意。
1. 下列与发酵技术相关的描述，正确的是（ ）
A. 传统发酵技术是利用不同原核生物产生不同代谢物的原理，生产人们需要的产物
B. 通过酵母菌发酵获得大量菌体，并从细胞中提取单细胞蛋白作为动物饲料或食品添加剂
C. 水果等原料可为微生物的生长提供各种营养物质，传统发酵前无需进行灭菌处理
D. 与传统发酵技术相比，发酵工程要接种通过基因工程育种获得的优良菌种
【答案】C
【分析】发酵是利用微生物，在适宜的条件下，将原料经过特定的代谢途径转化为人类所需要的产物的过程。
【详解】A、传统发酵技术中用到的微生物包含酵母菌、醋酸菌、毛霉、乳酸菌等。其中，酵母菌属于真菌，毛霉也属于真菌，它们都具有成形的细胞核，是真核生物，并非全是原核生物，所以不能说传统发酵技术是利用不同原核生物产生不同代谢物的原理来生产人们需要的产物，A错误；
B、通过酵母菌发酵获得大量菌体，菌体本身即细胞就可以作为单细胞蛋白，用于动物饲料或食品添加剂，B错误；
C、谷物、水果等原料本身含有多种营养成分，像糖类、蛋白质、维生素等，这些可为微生物的生长提供各种营养物质。而且在传统发酵过程中，由于原料上本身携带的微生物就可以进行发酵，所以发酵前无需进行灭菌处理，C正确；
D、传统发酵技术所利用的菌株通常是原材料自带的菌株，或者是之前发酵保留下来的菌株，大多是混合菌种发酵。而发酵工程使用的菌株多是通过人工分离、选择和培育得到的，一般为纯种发酵，但不一定是通过基因工程育种获得的优良菌种，D错误。
故选C。
2. 研究者用酸笋开发具有降低胆固醇功能的益生菌。先将酸笋发酵液接种到含有CaCO3固体培养基上，筛选出乳酸菌，然后将扩大培养后的乳酸菌接种到含胆固醇培养液中，筛选出能高效降解胆固醇的乳酸菌。下列叙述正确的是（ ）
A. 酸笋发酵过程中需要定期排气以确保发酵罐内压强稳定
B. 培养基上生长的菌落直径与溶钙圈直径比值小的菌落为目标菌落
C. 与酸笋风味形成相关的乳酸菌为厌氧型，所以不会分布在空气中
D. 胆固醇既可为乳酸菌的生长提供氮源，也可参与动物细胞膜的组成
【答案】B
【分析】酸笋制作的原理是：乳酸菌在无氧条件下，将糖分解为乳酸。
【详解】A、乳酸菌是厌氧菌，发酵过程中不产生气体，不需要定期排气，A错误；
B、乳酸菌发酵产生的乳酸能与CaCO3发生反应，使CaCO3分解成可溶性物质乳酸钙和CO2，导致菌落周围出现溶钙圈，故溶钙圈直径与菌落直径的比值可代表微生物溶解CaCO3的能力大小，比值越大微生物溶解CaCO3的能力越大，培养基上生长的菌落直径与溶钙圈直径比值小的菌落即为目标菌落，B正确；
C、在自然界中，乳酸菌分布广泛，空气、土壤、植物体表、人和动物的肠道内都分布有乳酸菌，C错误；
D、胆固醇属于脂质，含有C、H、O元素，主要为微生物的生长提供碳源，胆固醇是构成动物细胞膜的重要成分，D错误。
故选B。
3. 发酵工程是指采用现代工程技术手段，利用微生物的某些特定功能，为人类生产有用的产品或直接把微生物应用于工业生产过程的一种新技术。发酵工程的基本环节如图所示。下列说法正确的是（ ）
A. 在发酵之前需要利用固体培养基对菌种进行扩大培养
B. 发酵结束后，可通过过滤、沉淀等方法分离出微生物细胞本身
C. 在酸性条件下可以利用谷氨酸棒状杆菌发酵得到谷氨酸
D. 发酵工程的产品就是微生物的代谢产物，包括初生代谢产物和次生代谢产物
【答案】B
【分析】发酵工程是指利用微生物的代谢活动，通过现代化工程技术，规模化生产特定的代谢产物或菌体本身的过程。
【详解】A、扩大培养的目的是增加菌种数量，通常使用液体培养基（营养成分均匀，菌体与营养物质接触充分，繁殖速度快）。固体培养基主要用于菌种分离、纯化和保藏，而非扩大培养，A错误；
B、若发酵产品是微生物细胞（如单细胞蛋白），可通过过滤、离心、沉淀等物理方法将菌体与发酵液分离。若产品是代谢产物，则需进一步提取纯化，B正确；
C、谷氨酸棒状杆菌发酵产生谷氨酸的适宜条件是中性至弱碱性环境。酸性条件下可能会抑制菌体代谢或导致产物降解，无法有效获得谷氨酸，C错误；
D、发酵工程的产品不仅包括微生物的代谢产物（如抗生素、氨基酸等），还包括微生物细胞本身（如酵母菌、乳酸菌等菌体用于食品或饲料），D错误。
故选B。
4. 以玄参茎段为外植体进行植物组织培养，流程图如下，相关叙述正确的是（ ）
①外植体的选择及其消毒→②外植体的接种及愈伤组织诱导→③丛芽与不定根的诱导→④炼苗与移栽
A. 所用培养基含植物细胞所必需的无机盐、蔗糖和激素等营养物质
B. 过程①需用酒精和次氯酸钠混合液对外植体进行消毒处理
C. 过程②脱分化形成愈伤组织时可发生基因突变和染色体变异
D. 只有再分化的过程中存在基因的选择性表达，脱分化的过程中不存在
【答案】C
【分析】植物组织培养就是在无菌和人工控制的条件下，将离体的植物器官、组织、细胞，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。
【详解】A、植物激素不属于营养物质，A错误；
B、过程①需依次用酒精和次氯酸钠对外植体进行无菌处理，B错误；
C、由根尖细胞脱分化形成愈伤组织的过程中，细胞不发生分化，但细胞通过有丝分裂方式进行增殖，在有丝分裂间期可能会发生基因突变，在细胞分裂期可能会发生染色体变异，C正确；
D、脱分化是由已分化的状态恢复到未分化的状态，在脱分化的过程中也有相应的基因选择性表达，D错误。
故选C。
5. 下列有关植物细胞工程应用的叙述，正确的是（ ）
A. 利用植物组织培养技术获得紫草宁，实现了细胞产物的工厂化生产
B. 花药离体培养得到的单倍体植株可大田栽培提高作物产量
C. 取香蕉茎尖进行组织培养，可获得抗病毒苗
D. 组培苗移植之前，需要用流水清洗掉根部的培养基
【答案】D
【分析】植物细胞工程技术的应用：植物繁殖的新途径（微型繁殖、作物脱毒、人工种子）、作物新品种的培育（单倍体育种、突变体的利用）、细胞产物的工厂化生产。
【详解】A、利用细胞培养技术将细胞培养到愈伤组织时期可获得细胞代谢产物紫草宁，从而实现了细胞产物的工厂化生产，A错误；
B、花药离体培养得到的单倍体植株一般高度不育，不可大田栽培，还需要人工诱导染色体数目加倍后才可获得能稳定遗传的个体，B错误；
C、茎尖为新生组织，细胞内几乎不含病毒，利用茎尖进行植物组织培养可获得脱毒苗，而不是抗病毒苗，C错误；
D、组培苗移植之前，需要用流水清洗掉根部的培养基，防止培养基中的营养物质滋生杂菌等影响组培苗的生长，D正确。
故选D。
6. 蜗牛会取食水稻秸秆，下图是利用甲（高产）、乙（耐盐）两种水稻的各自优势，通过植物细胞工程技术培育高产、耐盐的杂种植株的流程图。下列相关叙述正确的是（ ）

A. 用蜗牛消化道提取液进行 a 处理时，也能获得原生质体
B. b 之前的诱导过程除 PEG 之外还可以使用灭活的病毒
C. b 之后得到的愈伤组织细胞与正常细胞相比没有细胞壁
D. c 是具有耐盐性状的幼芽，c 即可直接发育为耐盐植株
【答案】A
【分析】分析题图：图示为培育高产耐盐的杂种植株的培育过程，其中a表示酶解法去除细胞壁，b表示诱导原生质体融合，c为胚状体。
【详解】A、图中a处理是去除植物细胞的细胞壁获得原生质体。植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，根据酶的专一性，使用纤维素酶和果胶酶可以去除细胞壁，所以进行a处理时，需要用到纤维素酶和果胶酶，而根据题意，蜗牛会取食水稻秸秆，因此蜗牛消化道液提取液中含有纤维素和果胶酶，用其处理也能获得原生质体，A正确；
B、灭活的病毒常用于诱导动物细胞融合，而植物原生质体融合可以用PEG（聚乙二醇）等方法诱导，一般不使用灭活的病毒，B错误；
C、b过程是原生质体融合，之后得到的愈伤组织细胞是具有细胞壁的。植物组织培养过程中，愈伤组织是具有细胞壁的薄壁细胞，C错误；
D、是经过在含钠盐浓度为0.6%的固体培养基培养筛选出的具有耐盐性状的愈伤组织，愈伤组织需要经过再分化等过程才能发育为耐盐植株，而不是直接发育为植株，D错误。
故选A。
7. 如图表示试管鼠的基本制备流程，下列叙述正确的是（ ）
A 处理1给4-6周龄雌鼠注射性激素进行超数排卵处理
B. 处理2和处理3是分别使卵母细胞和精子获得受精能力
C. 过程1和过程2均在代孕鼠体内完成细胞的分裂和分化
D. 胚胎分割对囊胚阶段的胚胎进行分割时需将滋养层均等分割
【答案】B
【分析】图中处理1是注射促性腺激素使性成熟的雌鼠超数排卵处理，处理2是使卵母细胞需要发育至减数第二次分裂的中期，获得受精能力，处理3是精子进行处理，使其获得受精能力。过程1是胚胎的体外发育，过程2是胚胎移植。
【详解】A、处理1一般通过注射促性腺激素使性成熟的雌鼠超数排卵处理，A错误；
B、要使精子和卵母细胞在体外成功结合，需要对精子进行处理，使其获能，另外培养的卵母细胞需要发育至减数第二次分裂的中期，使卵母细胞获得受精能力，即图中的处理2和处理3，B正确；
C、过程1是胚胎的体外发育，在体外完成细胞的分裂和分化，C错误；
D、对囊胚期的胚胎进行分割，需要保证内细胞团均等切割，D错误。
故选B。
8. 下列关于细胞工程的有关叙述，不正确的是（ ）
A. 利用细胞工程培育“番茄—马铃薯”杂种植株需利用植物组织培养技术
B. 在进行组织培养时，由根尖细胞形成愈伤组织的过程中，可能会发生细胞脱分化、染色体变异或基因突变，而不可能发生细胞分化和基因重组
C. “试管婴儿”实质上就是“体外受精”和“胚胎移植”的“产物”，但无法使不能产生精子或卵细胞的夫妇得到自己的孩子
D. 目前人类的同卵双胞胎多数是通过胚胎分割技术产生的
【答案】D
【分析】试管婴儿技术包括体外受体、早期胚胎发育、胚胎移植等技术，属于有性生殖。
【详解】A、利用细胞工程培育“番茄--马铃薯”杂种植株也需要利用植物组织培养技术，原理包括植物细胞具有全能性，A正确；
B、在进行组织培养时，由根尖细胞脱分化形成愈伤组织的过程中，细胞通过有丝分裂方式增殖，可能会发生染色体变异或基因突变，没有发生分化和基因重组，B正确；
C、试管婴儿的产生采用了体外受精、早期胚胎培养和胚胎移植等技术，但该技术无法使不能产生精子或卵细胞的夫妇得到自己的孩子，C正确；
D、目前人类的同卵双胞胎少数是通过胚胎分割技术产生的，D错误。
故选D。
9. 在基因工程中常使用噬菌体作为载体。M13噬菌体与噬菌体均能侵染大肠杆菌，但被M13噬菌体侵染的大肠杆菌不发生裂解。科研小组欲将目的基因的特定序列和基因编辑酶基因与噬菌体DNA进行重组，进而对大肠杆菌进行基因编辑。下列说法错误的是（ ）
A. 噬菌体载体上需要含有标记基因和多个限制酶切割位点
B. 与噬菌体相比，M13噬菌体更适合作为转化大肠杆菌的载体
C. 将目的基因导入受体细胞时，必须先用处理大肠杆菌
D. 噬菌体重组DNA能在大肠杆菌中复制和表达才可实现对大肠杆菌的基因编辑
【答案】C
【分析】“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶），能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。常用的载体有质粒、动植物病毒、λ噬菌体的衍生物等。基因表达载体常包括目的基因、启动子、终止子、标记基因。题中基因编辑能将目的基因整合到受体细胞DNA的特定位置。
【详解】A、噬菌体载体上含有标记基因，可鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。噬菌体载体有多个限制酶切割位点，才具有携带多种目的基因的能力，A正确；
B、被M13噬菌体侵染的大肠杆菌不发生裂解，才能得到导入目的基因的大肠杆菌，B正确；
C、将目的基因导入微生物细胞时，常常先用 Ca2+ 处理大肠杆菌使其转化为感受态细胞。电击法也能达到相同效果，C错误；
D、噬菌体重组DNA能在大肠杆菌中复制和表达，基因编辑酶基因表达后才能产生基因编辑酶，进而进行基因编辑，D正确。
故选C。
10. 下图为转基因抗冻番茄培育过程的示意图（其中ampr为氨苄青霉素抗性基因）。下列叙述不正确的是（ ）
A. 质粒上的抗性基因有利于筛选含目的基因的细胞和促进目的基因的表达
B. 可同时选用限制酶Pst I、Sma I对含目的基因的DNA进行剪切
C. 过程②可采用农杆菌转化法将含目的基因的表达载体导入受体细胞
D. ④过程中可利用放射性同位素标记的目的基因作为探针对植株进行筛选
【答案】A
【分析】根据题意和图示分析可知：①表示基因表达载体的构建过程，需要限制酶和DNA连接酶；②表示将目的基因导入受体细胞的过程，常用农杆菌转化法；③④表示植物组织培养过程，其中③是脱分化过程、④是再分化过程。
【详解】A、质粒上的抗性基因有利于筛选含目的基因的细胞，但不能促进目的基因的表达，A错误；
B、目的基因两侧是限制酶PstⅠ和SmaⅠ的识别序列，且质粒上也含有这两种限制酶的切割位点，所以可同时选用限制酶PstⅠ、SmaⅠ对含目的基因的DNA进行切割，B正确；
C、将目的基因导入植物细胞时，常用农杆菌转化法，C正确；
D、图中过程④可以利用放射性同位素标记的目的基因作为探针来筛选含有目的基因的幼苗，D正确。
故选A。
11. 1998年，我国科研人员用两个机理不同的抗虫基因（CryIA和Cpti）构建融合基因表达载体，导入棉花细胞培育出双价转基因抗虫棉。自主知识产权抗虫棉的推广在提高经济和环境效益的同时，也保护了中国棉花产业的安全。下列叙述错误的是（ ）
A. 基因表达载体中融合基因位于启动子与终止子之间
B. 该融合基因必须整合到棉花细胞的基因组DNA中
C. 可用DNA探针检测融合基因是否转录出mRNA
D. 双价抗虫棉比单价棉选择抗性棉铃虫的速率更快
【答案】D
【分析】基因工又称基因拼接技术和DNA重组技术，是以分子遗传学为理论基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子，然后导入活细胞，以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品。基因工程技术为基因的结构和功能的研究提供了有力的手段。
【详解】A、基因表达载体中融合基因位于启动子与终止子之间，才能保证抗性基因的表达，A正确；
B、该融合基因必须整合到棉花细胞的基因组DNA中，才能使抗性基因稳定存在并表达，B正确；
C、可用DNA探针检测融合基因是否转录出mRNA，遵循碱基互补配对原则，C错误；
D、双价抗虫棉与单价棉相选择的机理不同，从不同方向对害虫进行选择，双价抗虫棉比单价棉选择抗性棉铃虫的速率慢，D错误。
故选D。
12. 下列有关“DNA粗提取与鉴定”、“PCR扩增”、“琼脂糖凝胶电泳”实验的叙述中，正确的是（ ）
A. 将洋葱切碎加研磨液研磨、过滤后，滤液放置4℃冰箱中静置几分钟，DNA存在于沉淀
B. 洋葱滤液中加入冷酒精，用玻璃棒搅拌会使DNA的提取量增加
C. DNA片段的PCR扩增实验中反应缓冲溶液中的Mg2+能够激活TaqDNA聚合酶
D. 凝胶载样缓冲液中加入的核酸染料能与DNA分子结合，便于在紫外灯下观察
【答案】C
【分析】DNA粗提取和鉴定的原理：
（1）DNA的溶解性：DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些蛋白质溶于酒精。
（2）DNA的鉴定：在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。
【详解】A、将洋葱切碎加研磨液研磨、过滤后，滤液放置4℃冰箱中静置几分钟后，DNA存在于上清液中，A错误；
B、洋葱滤液中加入冷酒精，用玻璃棒搅拌会使DNA的析出，因为DNA不溶于冷酒精，B错误；
C、DNA片段的PCR扩增实验中反应缓冲溶液中的Mg2+能够激活TaqDNA聚合酶，即镁离子是DNA聚合酶的激活剂，C正确；
D、DNA分子在凝胶载样缓冲液中带正电荷或负电荷，可用于电泳；凝胶制备中加入的核酸染料能与DNA分子结合，在波长为300nm的紫外灯下可以被检测出来，D错误。
故选C。
13. 麦汁发酵是啤酒酿造的重要过程，可以分为接种酵母→充氧→前发酵→封罐→后发酵等重要步骤。下列相关叙述错误的是（ ）
A. 为避免杂菌污染，需对发酵罐、麦汁、接种仪器等进行灭菌
B. 前发酵阶段，葡萄糖在酵母菌中分解可生成二氧化碳
C. 后发酵阶段，酵母菌细胞主要进行无氧呼吸产生酒精
D. 发酵过程中会有较多热量释放，因此发酵罐需配有降温装置
【答案】C
【分析】果酒制作的原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精和二氧化碳，酵母菌是兼性厌氧微生物，在缺氧条件下进行无氧呼吸，在氧气充足的条件下进行有氧呼吸，酵母菌具有核膜包被的细胞核，属于真核生物。
【详解】A、在啤酒酿造过程中，杂菌污染会影响发酵过程和啤酒品质，对发酵罐、麦汁、接种仪器等进行灭菌处理能够有效避免杂菌污染，保证发酵顺利进行，A正确；
B、前发酵阶段，葡萄糖在酵母菌细胞质基质中进行糖酵解生成丙酮酸，丙酮酸再进入线粒体进一步分解并生成二氧化碳，B正确；
C、后发酵阶段，由于封罐缺少氧气，酵母菌细胞不能进行有氧呼吸，只能进行无氧呼吸产生酒精和CO2，C错误；
D、发酵过程中无论是有氧呼吸还是无氧呼吸，都会释放能量，其中大部分以热能形式散失，会使发酵罐内温度升高，所以发酵罐需配有降温装置来维持适宜的发酵温度，D正确。
故选C。
14. 下列关于细胞工程的相关“检测”的叙述，正确的是（ ）
A. “作物脱毒”是否成功可以接种一定的病毒来检测
B. 植物体细胞杂交过程中“去壁”过程是否充分，可取样用低渗溶液鉴定
C. 传代培养的成纤维细胞是否癌变可通过核型分析而确定
D. 在细胞培养过程中添加胰岛素可促进培养基中糖原的合成
【答案】B
【分析】（1）植物体细胞杂交是指将不同来源的植物体细胞，在一定条件下融合成 杂种细胞，并把杂种细胞培育成新植物体的技术。
（2）动物细胞工程常用的技术包括动物细胞培养、动物细 胞融合和动物细胞核移植等，其中动物细胞培养是动物细胞工程的基础。
【详解】A、作物脱毒指的是作物本身没有病毒感染，但作物脱毒不代表它不能被病毒感染，因此不能通过是否成功可以接种一定的病毒来检测“作物脱毒”，A错误；
B、若植物体细胞杂交过程中“去壁”过程充分，在低渗溶液原生质体会发生渗透吸水膨涨甚至破裂，而未去壁植物体细胞有细胞壁的保护，在低渗溶液中不会吸水涨破，所以用低渗溶液可对去壁的植物体细胞进行鉴定，B正确；
C、核型分析是通过观察和分析细胞中染色体的数量、结构和形态来检测细胞是否发生异常的方法，但有些基因突变导致的癌变，染色体的数量、结构、形态不发生改变，无法根据核型分析而确定，C错误；
D、在细胞培养过程中添加胰岛素的目的是促进细胞摄取、利用葡萄糖，胰岛素可以促进机体肝脏细胞形成肝糖原，D错误。
故选B。
二、多选题：本部分包括5题，每题3分，共计15分。每题有不止一个选项符合题意。每题全选对的得3分，选对但不全的得1分，错选或不答的得0分。
15. 科研人员采集了某深海冷泉附近的沉积物样品，经分离、纯化、鉴定得到了降解藻类多糖的拟杆菌菌株，具体过程如图(Ⅰ～Ⅳ是操作步骤)。下列叙述正确的有（ ）
A. 步骤Ⅰ均采用湿热灭菌法对深海冷泉沉积物的样品和海水进行灭菌
B. 步骤Ⅱ可通过添加不同藻类多糖配制系列培养基①获得多种拟杆菌菌株
C. 步骤Ⅲ培养基②中以藻类多糖为唯一碳源，且需加入适量琼脂等凝固剂
D. 步骤Ⅳ可通过增加培养基③中碳源的浓度，获得高耐受藻类多糖的菌株
【答案】BCD
【分析】（1）培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。不同的培养基的配方不同，但一般都含有水、无机盐、碳源和氮源。
（2）微生物接种的方法最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。操作方法各不相同，但是核心都是要防止杂菌的污染，保证培养物的纯度。微生物常见的接种的方法： (1)平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。(2) 稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
【详解】A、深海冷泉沉积物的样品不能灭菌，否则得不到需要的菌株，A错误；
B、向基本培养基中分别添加不同藻类多糖来配制系列培养基①，可获得不同种类的拟杆菌菌株，B正确；
C、步骤IV需要挑取单菌落并转接，则需要再固体培养基上接种，需要加琼脂作为凝固剂，C正确；
D、本实验的目的是纯化、鉴定得到降解藻类多糖的拟杆菌菌株，步骤IV可通过增加培养基③中碳源的浓度，获得高耐受藻类多糖的菌株，D正确。
故选BCD。
16. 细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。某研究小组以小鼠甲为实验材料设计实验，研制抗病毒A的单克隆抗体。下列叙述正确的是（ ）

A. 筛选2利用96孔板经1次筛选获得足够数量的能分泌所需抗体的杂交瘤细胞
B. 将小鼠体内取出的脾脏用剪刀剪碎后加入胃蛋白酶处理，使其分散成单个细胞
C. 筛选1需用特定的选择培养基进行筛选才能获得融合的杂交痛瘤胞
D. 实验前必须给小鼠甲注射病毒A是为了得到能产生特定抗体的B淋巴细胞
【答案】CD
【分析】单克隆抗体的制备：（1）制备产生特异性抗体的B淋巴细胞：向免疫小鼠体内注射特定的抗原，然后从小鼠脾脏内获得相应的B淋巴细胞；（2）获得杂交瘤细胞：①将鼠的骨髓瘤细胞与脾细胞中形成的B淋巴细胞融合；②用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞，该杂种细胞既能够增殖又能产生抗体；（3）克隆化培养和抗体检测；（4）将杂交瘤细胞在体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖；（5）提取单克隆抗体：从细胞培养液或小鼠的腹水中提取。
【详解】A、第二次筛选用多孔培养皿培养，在每个孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始克隆化培养和抗体检测，经多次筛选得到能产生特异性抗体的细胞群，该过程用到抗原抗体杂交，获取的杂交瘤细胞通过培养获得大量的分泌特异性抗体的杂交瘤细胞，A错误；
B、由于胃蛋白酶的最适PH较低，因此将小鼠体内取出的脾脏用剪刀剪碎后加入胰蛋白酶处理，使其分散成单个细胞，B错误；
C、为了得到能产生抗病毒A单克隆抗体的杂交瘤细胞，需要进行筛选。第一次筛选用特定的选择培养基筛选：未融合的细胞和同种细胞融合后形成的细胞(“BB”细胞、“瘤瘤”细胞)都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞(“B瘤”细胞)才能生长，C正确；
D、该实验前必须给小鼠甲注射病毒A，该处理的目的是诱导小鼠甲产生能够分泌抗病毒A抗体的B淋巴细胞，D正确。
故选CD。
17. 最终获得克隆鼠。经鉴定证实克隆鼠是从iPS细胞发育而来的，并可繁殖后代。实验流程如图所示，下列相关叙述不正确的是（ ）
A. 可用显微注射法将iPS细胞注入四倍体囊胚中
B. 获得的iPS细胞在体外培育后能发育成个体
C. 四倍体囊胚因为染色体结构变异而无法发育
D. 重组囊胚的早期发育不需要额外提供营养物质
【答案】BCD
【分析】胚胎移植是指将雌性动物的早期胚胎，或者通过体外受精及及其他方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物体内，使之继续发育为新个体的技术。
【详解】A、显微注射法是一种常用的技术，可以将外源基因片段或细胞直接注射到早期胚胎中，包括四倍体囊胚中，A正确；
B、动物细胞（包括iPS细胞）不具有细胞全能性，在体外培育后并不能直接发育成个体，B错误；
C、四倍体囊胚属于染色体数目异常，C错误；
D、重组囊胚的早期发育为体外培养，需要额外提供营养物质，以支持其生长和发育，D错误。
故选BCD。
18. 聚合酶链式反应（PCR）是一种体外扩增DNA片段的技术。某DNA片段的PCR反应程序如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A. 预变性可促进模板DNA边解旋边复制
B. 退火是让解旋状态模板DNA恢复双螺旋
C. 延伸结束后，新片段中的引物将被切除
D. 终延伸可使目的基因的扩增更加充分
【答案】ABC
【分析】PCR过程为①变性，当温度超过90℃时，氢键断裂，双链DNA解聚为单链；②复性，当温度降低到50℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合；③延伸，温度上升到72℃左右时，溶液中的四种脱氧核苷酸在耐高温的DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。
【详解】A、预变性的目的是破坏DNA中可能存在的较难破坏的复杂二级结构，使DNA充分变性，A错误；
B、退火是让两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合，B错误；
C、延伸结束后，新片段中不会切除引物，C错误；
D、终延伸过程是为了让引物完全延伸并让单链产物完全复性形成双链结构，可使目的基因的扩增更加充分，D正确。
故选ABC。
19. 下图是利用猪唾液腺生产大量高纯度人神经生长因子（hNGF）的流程，相关说法正确的是（ ）
A. 培养猪细胞A和重构胚胎通常需在培养液中加入血清
B. 培育转基因猪D的过程涉及核移植、胚胎移植等技术
C. 转基因猪D的遗传性状由A和C的遗传物质决定
D. 猪唾液腺作为生物反应器具有不受性别限制的特点
【答案】ABD
【分析】图示是利用了基因工程、细胞核移植和胚胎移植等技术生产人神经生长因子（hNGF）。
【详解】A、血清中含有多种未知的促进细胞生长的物质，因此培养猪细胞A和重构胚胎通常需在培养液中加入血清，A正确；
B、图示将经过转基因的猪的成纤维细胞核导入去核的卵细胞，采用了细胞核移植技术，形成的重构胚发育到桑椹胚或囊胚后经胚胎移植导入代孕猪C子宫内，该过程采用了胚胎移植技术，B正确；
C、据图可知，转基因猪的遗传物质来自卵细胞B的细胞质和成纤维细胞A的细胞核以及人的hNGF基因，代孕猪C没有为其提供遗传物质，C错误；
D、雌、雄动物体的唾液腺都可以合成分泌物，因此猪唾液腺作为生物反应器具有不受性别限制的特点，D正确。
故选ABD。
20. 某品牌老陈醋有丰富的营养成分，在酿造过程中产生了川芎嗪、黄酮类化合物等对人体有益的物质，极具养生价值。一企业对老配方进行了更新，并设计了如下制作流程。请回答下列问题：
注：膨化处理是指将粮食加入密闭容器中，加热加压后突然减压，粮食中的水分汽化膨胀，使其出现许多小孔，变得松脆。红曲菌属于真菌。
（1）对主粮膨化处理的作用是___________。酿制粮食酒时，______（填“需要”或“不需要”）对主粮进行严格的消毒处理，原因是______________。多次实验发现，在发酵液的液面经常观察到一层明显的菌膜，该膜是由_______________繁殖而成。
（2）利用菌种发酵获得醋酸的条件有两种情况，一是在___________________时，将糖分解成醋酸：二是在缺少糖源时，利用__________生成醋酸。
（3）研究表明，在陈醋的酿造过程中，起主导作用的是醋酸菌，而乳酸菌也存在于醋醅中，其代谢产生的乳酸是影响陈醋风味的重要因素。成熟醋醅中乳酸菌的种类明显减少，主要原因是发酵后期__________________（至少写出2种）等环境因素的变化，淘汰了部分乳酸菌种类。
（4）乙偶姻和川穹嗪均是山西老陈醋中重要的风味物质，对熏醅阶段中二者的含量进行测定得到了如下结果，由图可知，川穹嗪最早产生于__________，乙偶姻可能在更早的醋酸发酵阶段就开始产生。随着熏醅阶段的进行，乙偶姻与川穹嗪的含量变化趋势______（填“相同”“相反”或“无关联”），推测二者关系为_________________。
【答案】（1）①. 加大与红曲菌的接触面积 ②. 不需要 ③. 随着发酵过程的进行，酒精逐渐积累，大多数杂菌对酒精不耐受，杂菌的生命活动受到抑制 ④. 醋酸菌
（2）①. 氧气和糖源都充足 ②. 酒精
（3）氧气、营养物质、pH等
（4）①. 熏醅阶段第二天 ②. 相反 ③. 川穹嗪可能是由乙偶姻转化而来
【分析】醋酸制作的菌种是醋酸菌，代谢类型是需氧型细菌，属于原核细胞，条件是30～35℃、一直需氧。当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的果糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。
【解析】（1）由题意可知，膨化处理是指将粮食加入密闭容器中，加热加压后突然减压，粮食中的水分汽化膨胀，使其出现许多小孔，变得松脆，这有利于加大与红曲菌的接触面积，使发酵更充分。酿制粮食酒时，不需要对主粮进行严格的消毒处理，原因是随着发酵过程逐渐进行，酒精逐渐积累，大多数杂菌对酒精不耐受，杂菌的生命活动受到抑制。发酵液的液面经常观察到一层明显的菌膜，该膜是由醋酸菌繁殖而成。
（2）利用醋酸菌获得醋酸的条件有两种情况，一是在氧气和糖源都充足时，将糖分解成醋酸；二是在糖源不充足时，也可以利用酒精生成醋酸。
（3）在陈醋的酿造过程中，起主导作用的是醋酸菌，成熟醋醅中乳酸菌的种类明显减少，主要原因是发酵后期氧气、营养物质、pH等环境因素的变化，加剧了不同种乳酸菌之间的种间竞争（或竞争），淘汰了部分乳酸菌种类。
（4）据右图可知，生产线1、2、3都在熏醅第2天就出现了川穹嗪，因此川穹嗪最早产生于熏醅阶段第二天。据左图可知，随着熏醅阶段的进行，乙偶姻含量逐渐下降；据右图可知，随着熏醅阶段的进行，川穹嗪含量逐渐增加，乙偶姻与川穹嗪的含量变化趋势相反，据此可推测二者之间可能的关系是川穹嗪可能是由乙偶姻转化而来。
21. 某种物质S（一种含有C、H、N的有机物）难以降解，会对环境造成污染，只有某些细菌能降解S。研究人员按照下图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解S的细菌菌株。实验过程中需要甲、乙两种培养基，甲的组分为无机盐、水和S，乙的组分为无机盐、水、S和Y。
（1）实验时，盛有水或培养基的摇瓶通常采用_______________的方法进行灭菌。乙培养基中的Y物质是_______________。甲、乙培养基均属于______________培养基。
（2）制备实验所需的培养基时，需要调节培养基的 pH，应该在灭菌 ______（填“前”或“后”）进行操作。倒平板时为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在________附近进行，接种后的培养皿需________放于 37 ℃恒温培养箱中培养。
（3）实验中初步估测摇瓶M中细菌细胞数为2×107 个/mL，若要在每个平板上涂布100μL稀释后的菌液，且保证每个平板上长出的菌落数不超过200个，则至少应将摇瓶M中的菌液稀释______倍。
（4）在步骤⑤的筛选过程中，发现当培养基中的S超过某一浓度时，某菌株对S的降解量反而下降，其原因可能是________________（答出1点即可）。
（5）若要测定淤泥中能降解S的细菌细胞数，请写出主要实验步骤___________________。
【答案】（1）①. 高压蒸汽灭菌 ②. 琼脂 ③. 选择
（2）①. 前 ②. 酒精灯火焰旁 ③. 倒置
（3）104 （4）S的浓度超过某一值时会抑制菌株的生长
（5）取淤泥加入无菌水，涂布（或稀释涂布）到乙培养基上，培养后计数
【分析】分析题图：①为淤泥取样进行稀释，②为接种到液体培养基上，③稀释涂布平板法接种到以S为唯一碳源和氮源的选择培养基上，其中Y为琼脂，④为挑取单菌落接种，⑤在以S为唯一碳源和氮源的选择培养基上进一步筛选出高效降解S的菌株。
【解析】（1）常用高压蒸汽灭菌法对盛有水或培养基的摇瓶进行灭菌；乙培养基为接种的培养基，属于固体培养基，结合题干“乙的组分为无机盐、水、S和Y”，其中S（一种含有C、H、N的有机物）为碳源和氮源，则Y物质是琼脂（凝固剂）；甲、乙培养基均以S（一种含有C、H、N的有机物）为唯一碳源和氮源，属于选择培养基。
（2）制备实验所需的培养基时，需要调节培养基的 pH，应该在灭菌前进行操作，以防灭菌以后再调节pH带入新的杂菌等微生物，倒平板实验操作应在酒精灯火焰旁附近进行，接种后的培养皿需倒置放于 37 ℃恒温培养箱中培养。
（3）利用稀释涂布平板法对细菌进行计数，要保证每个平板上长出的菌落数不超过200，假设稀释倍数为a，在每个平板上涂布100μL（即0.1mL）稀释后的菌液，则有200×a÷0.1=2×107，则稀释倍数a=104。
（4）在步骤⑤的筛选过程中，发现当培养基中的S超过某一浓度时，某菌株对S的降解量反而下降， 其原因可能是：S的浓度超过某一值时，此时外界溶液浓度大于细菌细胞内的浓度，导致细菌细胞由于渗透作用失水过多，从而抑制菌株的生长。
（5）若要测定淤泥中能降解S的细菌细胞数，主要实验步骤有淤泥中取样，然后进行梯度稀释，微生物的培养与观察，计数。
22. 狼爪瓦松是一种具有观赏价值的野生花卉，其产生的黄酮类化合物可入药。狼爪瓦松野生资源有限，难以满足市场化需求。因此，目前一般通过植物细胞工程进行培养，具体过程如图所示，其中的数字序号代表处理或生理过程。请回答下列相关问题：
（1）进行①过程前要对狼爪瓦松植株甲幼嫩的叶进行________处理，所用的试剂为体积分数为70%的酒精和质量分数为5%左右的次氯酸钠溶液。图中②过程称为_________，通过②③培养获得植株乙所利用技术的细胞学原理是________________。
（2）培养中的愈伤组织细胞一直处于 _________________的状态，可用于④诱导产生突变体。
（3）⑤过程需要用_________________酶进行处理，形成植株丁的过程中，PEG的作用是______________________。
（4）黄酮类化合物是狼爪瓦松的次生代谢物，⑥为对该产物进行工厂化生产，某同学认为细胞产物的工厂化生产主要目的是提高单个细胞中黄酮类化合物的含量，你同意该同学的观点吗_______，请说明相应的理由：__________________。
（5）通过植物细胞工程对狼爪瓦松培养，获得药物黄酮类化合物，下列相关叙述正确的是___。
A. 过程③通常先在生长素与细胞分裂素比例高的培养基中培养
B. 过程④常用射线或化学物质处理后即可获得大量目的植株
C. 过程⑥中甘草西定可通过植物细胞培养获得，应将愈伤组织细胞在液体培养基培养
D. 所得三种植株中乙和丙的遗传信息与甲相同，植株丁和甲是同一物种
【答案】（1）①. 消毒 ②. 脱分化 ③. 植物细胞的全能性
（2）不断增殖 （3）①. 纤维素酶、果胶酶 ②. 促进原生质体融合
（4）①. 不同意 ②. 植物细胞的次生代谢物含量很低，利用细胞产物的工厂化生产黄酮类化合物主要是通过增加细胞数量从而增加黄酮类化合物的含量
（5）C
【分析】图中①表示外植体接种，②表示脱分化，③表示再分化，④表示再分化过程产生突变体，⑤表示去除细胞壁获得原生质体，⑥表示黄酮类化合物的提取。
【解析】（1） 用体积分数为70%的酒精和质量分数为5%左右的次氯酸钠溶液对外植体消毒。②表示脱分化，③表示再分化，通过②③培养获得植株乙为植物组织培养，所利用的原理是植物细胞的全能性。
（2）愈伤组织在不诱导再分化的情况下，一般处于不断增殖的状态。
（3）⑤表示去除细胞壁获得原生质体，该过程需用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁。培育形成植株丁的过程中，PEG的作用是诱导原生质体融合，属于化学方法诱导原生质体融合。
（4）不同意该同学观点，黄酮类化合物属于植物的次生代谢物，植物细胞的次生代谢物含量很低，利用细胞产物的工厂化生产黄酮类化合物主要是通过增加细胞数量从而增加黄酮类化合物的含量。
（5）A、生长素与细胞分裂素比值高时，利于生根；该比值低时，利于生芽。过程③是再分化，需先生芽再生根，所以需要先在生长素与细胞分裂素比例低的培养基中培养，A错误；
B、过程④为诱变育种，常用射线或化学物质处理的是愈伤组织，经筛选并进一步培养才能获得大量所需的突变体植株丙，B错误；
C、过程⑥中甘草西定可通过植物细胞培养获得，应将愈伤组织细胞在液体培养基悬浮培养，即植物组织培养，C正确；
D、所得三种植株中乙和丙的遗传信息不一定与甲相同，因为植株丙是诱变育种得到的，遗传信息可能发生改变；植株丁经过植物体细胞杂交，染色体数目发生了改变，和甲不一致，所以不是同一物种，D错误。
故选C。
23. 2018年1月25日，我国研究人员在世界上率先利用去甲基化酶（Kd4d）的mRNA，经体细胞核移植技术培育出第一批灵长类动物-食蟹猴，流程如图所示，①~⑥表示过程。
（1）动物细胞核移植技术中一般选择MII中期卵母细胞作为受体细胞，最主要的原因是_______________去掉卵母细胞细胞核的目的是_____________。
（2）过程③之后需要将获得的融合细胞在含“两盐”、氨基酸、核苷酸、维生素、激素和____________的培养液中培养至_____________阶段再进行胚胎移植。
（3）研究人员在确定去甲基化酶（Kd4d）的mRNA的作用时，做了两组实验，其中A组用正常培养液培养融合细胞，B组用正常培养液培养注入了Kd4d的mRNA的融合细胞，实验结果如下图所示。分析实验数据可知，Kd4d的mRNA的作用是______________。
（4）假如用胚胎分割移植的方式来克隆食蟹猴，依据的原理是__________，胚胎分割时应注意的问题是________________。请从遗传物质角度分析，利用这些孤雄小鼠作为实验材料进行医学研究的优点是_____________。
【答案】（1）①. 卵母细胞的细胞质种含有促进细胞核恢复分裂能力的物质 ②. 使克隆出的动物个体的细胞核内的遗传物质几乎全部来自供体细胞（避免卵母细胞核中的遗传物质传递到子代）
（2）① 血清 ②. 桑葚胚或囊胚
（3）注入mRNA通过翻译产生的去甲基化酶促进了相关基因的表达进而表现出既能提高融合细胞发育成囊胚的成功率、也能提高囊胚中内细胞团的形成率
（4）①. 胚胎干细胞的全能性 ②. 注意切割囊胚阶段的胚胎要将内细胞团均等分割，否则会影响胚胎的正常发育。 ③. 这些小鼠遗传物质相同，所以作为实验材料可以排除由基因的差异造成的个体差异，进而可以通过这些遗传背景相同的个体来对比来分析.
【分析】动物细胞核移植是用体细胞作为供体细胞进行的细胞核移植，将供核细胞注射到培养到减数第二次分裂中期的卵母细胞中，用人工的方法将其培养成胚胎，再将胚胎移植到雌性动物子宫内，就可以孕育出新的个体。
【解析】（1）卵母细胞的细胞质种含有促进细胞核恢复分裂能力的物质，故动物细胞核移植技术中一般选择MII中期卵母细胞作为受体细胞。为了使克隆出的动物个体的细胞核内的遗传物质几乎全部来自供体细胞，需要去掉卵母细胞细胞核。
（2）融合细胞需要在含“两盐”、氨基酸、核苷酸、维生素、激素和血清的培养基中培养至桑葚胚或囊胚期再进行移植。
（3）根据图中数据可知，正常培养的A组与向融合细胞中注入去甲基化酶（Kd4d）的mRNA的融合细胞B组数据进行对照分析，后者的融合细胞发育成囊胚的成功率、囊胚中内细胞团的形成率都高于前者，说明Kd4d的mRNA的作用是注入mRNA通过翻译产生的去甲基化酶促进了相关基因的表达进而表现出既能提高融合细胞发育成囊胚的成功率、也能提高囊胚中内细胞团的形成率。
（4）胚胎分割形成克隆动物体现胚胎干细胞的全能性，即胚胎分割的原理是胚胎干细胞的全能性，另外注意切割囊胚阶段的胚胎要将内细胞团均等分割，否则会影响胚胎的正常发育。这些孤雄小鼠遗传物质相同，所以作为实验材料可以排除由基因的差异造成的个体差异，进而可以通过这些遗传背景相同的个体来对比来分析，故常作为实验材料进行医学研究。
24. 某植物蛋白酶抑制剂Ⅱ基因，转录的mRNA下游序列已知，但其上游序列未知。现利用PCR等技术扩增该基因，具体原理如下图所示，其中①∼③表示有关过程，Ⅰ∼Ⅲ表示有关物质。请回答：
（1）过程反应体系中，生成杂合链物质Ⅰ需要加入____________种引物，一般来说所用的引物越短，引物特异性越__________（填“高”或“低”）；同时还需加入____________酶。
（2）利用DNA末端转移酶催化过程②，使DNA单链左侧末端增加十多个腺嘌呤脱氧核苷酸序列 [AAA（A）n]，其目的是___________________， 进而利于过程③扩增获得目的基因序列Ⅲ；据此推测③过程除了引物1的另一种引物富含_______碱基。
（3）在物质Ⅲ的两端通常还需要增加____________序列，以便与相应的载体重组，再利用_______处理大肠杆菌等，以利于将重组质粒导入细胞，构建c DNA文库。
（4）微滴式数字PCR（ddPCR）是一种检测RNA病毒等病原体的手段，正确的
A. RNA病毒样本在进行ddPCR检测时，需要先进行逆转录处理
B. 多孔板中如果某个孔没有核酸分子，就不需要加入引物和Taq酶
C. 检测时只要有一个孔出现阳性结果，就可以说明原样本中有病毒核酸
D. 相对于传统手段，ddPCR更加灵敏，更容易检测出微量病毒
【答案】（1）①. 1 ②. 低 ③. 逆转录
（2）①. 便于设计引物 ②. T
（3）①. 限制酶识别 ②. Ca2+ （4）ACD
【分析】分析图解：图中过程①表示逆转录过程，即以RNA为模板合成cDNA单链的过程；过程②表示在末端转移酶的作用下在cDNA末端增加十多个腺嘌呤脱氧核苷酸序列；过程③表示在DNA聚合酶的作用下生成互补链。
【解析】（1）过程①表示逆转录过程，即以RNA为模板合成cDNA单链的过程，该过程需要逆转录酶的催化；由于该过程只生成了一条单链cDNA，因此反应体系中，只需要加入1种引物。一般来说所用的引物越短，引物特异性越低。其次RNA合成DNA需要逆转录酶催化，因此同时还需加入逆转录酶。
（2）利用DNA末段转移酶催化过程②，使cDNA单链左侧末端增加十多个腺嘌呤脱氧核苷酸序列 [AAA（A）n]，其目是便于设计引物，进而利于过程③扩增获得目的基因序列Ⅲ。根据题图分析，同时结合碱基互补配对原则推测③过程除了引物1的另一种引物富含T碱基。
（3）获取目的基因是需要用限制酶切割获得，因此在物质Ⅲ的两端通常还需增加限制酶识别序列，以便与相应的载体重组；将目的基因导入微生物细胞常用感受态细胞法，即用Ca2+处理大肠杆菌，使其成为感受态细胞，以利于将重组质粒导入细胞。
（4）A、逆转录是以 RNA 为模板合成 DNA 的过程，因此RNA病毒样本在进行ddPCR检测时，需要先进行逆转录处理，A正确；
B、多孔板中如果某个孔没有核酸分子，仍然需要加入引物和Taq酶，排除无关变量影响，B错误；
C、检测时只要有一个孔出现阳性结果，就可以说明含有病毒核酸，证明原样本中有病毒核酸，C正确；
D、传统手段检测抗原，要求抗原数量一定值，因此相对于传统手段，ddPCR更加灵敏，更容易检测出微量病毒，D正确。
故选ACD。
25. 新霉素磷酸转移酶基因（ne）是转基因动物中常用的标记基因，但ne存在于动物细胞中会影响动物体生长和发育。为实现在敲除目的基因后，将ne基因从基因组中敲除，科研人员构建了Cre-lxP重组系统。图1为lxP序列的结构示意图，图2为Cre-lxP重组系统的作用机理示意图，图3为通用型基因打靶载体的构建及Flx鼠建立过程示意图。请回答下列问题：
（1）lxP位点是一段长为34bp的序列，具有方向性，结合图1，推测其方向性由区段_____决定。Cre酶可同时识别2个lxP位点的a和c区段，并同时催化b区段箭头处___________键水解。
（2）据图2分析，若同一个DNA分子上具有2个同向的lxP位点，经Cre酶作用后会得到一条链状DNA分子和一个环状DNA分子，从作用结果分析，Cre酶同时具有类似___________酶的作用。
（3）图3中，过程①可在限制酶和DNA连接酶等作用下，将同源臂1和同源臂2插入pAT质粒中的多克隆位点序列MCS中。作为通用型载体，pAT质粒的MCS中含有多个在基因组（待敲除基因所在DNA）中出现频率较低的酶切位点，其意义是____________。
（4）两段拥有相同/相似碱基序列（如同源臂）的DNA片段在重组酶的催化下，可发生同源重组，同源臂间的DNA序列可发生交换。为敲除特定基因，以待敲除基因两端的短小序列为依据设计引物，经PCR1和PCR2获得同源臂1和同源臂2，PCR1和PCR2不能在同一反应体系中进行的原因是__________；为将同源臂定向插入pAT的MCS中，设计引物时需要在引物的___________端添加相应的限制酶切位点。
（5）过程②为重组pAT质粒转染小鼠受精卵的过程，该过程通常采用___________法。过程③需将转染后的受精卵置于适宜培养液中，培养24h后，能存活的胚胎为成功转染并整合到染色体DNA上的胚胎，后续通过___________等技术获得Flx小鼠。
（6）Flx小鼠中存在的ne基因，其两侧的2个LxP位点的方向是___________的，可利用Cre酶将其敲除，获得不含ne基因的基因敲除鼠。为实现在特定的时间对特定细胞中的ne基因进行敲除，可在Cre基因的cDNA一段添加________________实现。
【答案】（1）①. b ②. 磷酸二酯
（2）限制酶和DNA连接
（3）使目的基因准确连接到质粒的特定位点上
（4）①. PCR1和PCR2所用引物存在互补配对片段，至于同一反应系统时他们会发生相互结合而失去作用 ②. 5'
（5）①. 显微注射 ②. 胚胎移植
（6）①. 相反 ②. 特异型启动子序列
【分析】基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样，将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术；个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
【解析】（1）Cre酶能识别lxP位点（特定的DNA序列），并使lxP位点间的基因序列被重组或删除，如图1中箭头表示Cre酶的作用位点，则说明b区域决定了lxP位点的方向性。Cre酶催化b区段箭头处磷酸二酯键的水解。
（2）Cre酶作用后会得到一条链状DNA分子和一个环状DNA分子，说明能使lxP位点间的基因序列被重组或删除，则需要切割DNA序列并连接，说明Cre酶的功能类似于限制酶和DNA连接酶。
（3）pAT质粒的MCS中含有多个在基因组中出现频率较低的酶切位点，而同源臂1和同源臂2插入pAT质粒中的多克隆位点序列MCS中，如果MCS中的酶切位点在基因中出现频率较高，可能会使目的基因插入其他位点，因此pAT质粒的MCS中含有多个在基因组中出现频率较低的酶切位点的意义是使目的基因准确连接到质粒的特定位点上。
（4）为敲除特定基因，以待敲除基因两端的短小序列为依据设计引物，由于两段拥有相同/相似碱基序列（如同源臂）的DNA片段在重组酶的催化下，可发生同源重组，因此经PCR1和PCR2获得同源臂1和同源臂2，PCR1和PCR2所用引物存在互补配对片段，至于同一反应系统时他们会发生相互结合而失去作用，所以PCR1和PCR2不能在同一反应体系中进行。设计引物时需要在引物的5'端添加相应的限制酶切位点，因为3'端连接脱氧核苷酸。
（5）将重组质粒导入受体细胞通常选择显微注射法，为获得Flx小鼠，需要通过胚胎移植技术。
（6）Cre酶可同时识别2个lxP位点a和c区段，根据图1中a段和c段的序列，可以推测ne基因其两侧的2个LxP位点的方向是相反的，为实现在特定的时间对特定细胞中的ne基因进行敲除，可在Cre基因的cDNA一段添加特异型启动子序列实现，实现基因选择性表达。