广东省5校联考2024-2025学年高二下学期4月考试生物（解析版）

这是一份广东省5校联考2024-2025学年高二下学期4月考试生物（解析版），共33页。试卷主要包含了单选题，动物细胞培养的条件等内容，欢迎下载使用。
第Ⅰ卷（选择题，共60分）
一、单选题
1. 大豆发酵食品豆瓣酱是我国传统发酵美食，它能让麻婆豆腐热辣鲜香，也能让回锅肉滋味醇厚，好似舌尖上的时光胶囊，封存着先辈们代代相传的生活智慧。豆瓣酱的制作流程如下图所示，下列叙述错误的是（ ）
A. 保温发酵过程中，酱豆中有机物的种类增加，有机物含量减少
B. 米曲霉发酵过程中，添加面粉主要是为米曲霉的生长提供氮源
C. 米曲霉发酵时需不断翻酱，由此推测米曲霉属于需氧型微生物
D. 后期发酵中乳酸菌产生乳酸，能抑制杂菌生长并赋予豆瓣酱独特酸味
【答案】B
【分析】蚕豆中含有大量蛋白质，主要为微生物的生长提供碳源（提供碳元素）和氮源（提供氮元素）类营养物质；加入的蚕豆经蒸熟、冷却后使用，这样既可以对蚕豆进行消毒，消灭蚕豆表面的杂菌，又能防止蚕豆温度过高导致接种的微生物死亡。
【详解】A、在保温发酵过程中，米曲霉等微生物会分泌多种酶来分解有机物。在分解过程中，复杂的有机物会被逐步分解成小分子有机物，所以有机物的种类会增加。同时，微生物的呼吸作用会消耗有机物来获取能量，导致有机物含量减少，A正确；
B、在米曲霉发酵过程中，添加面粉主要是为米曲霉的生长提供碳源，而不是氮源，B错误；
C、米曲霉发酵时需不断翻酱的目的是为了让米曲霉接触到充足的氧气,由此推断米曲霉是需氧型微生物，C正确；
D、后期发酵中乳酸菌会进行发酵产生乳酸，乳酸可以降低环境的pH值，很多杂菌在酸性环境中生长会受到抑制，同时乳酸也能赋予豆瓣酱独特的酸味，D正确。
故选B。
2. 科研人员发现某个敞口被真菌M污染的培养皿中出现了大部分细菌能正常生长，唯独真菌 M 附近没有细菌生长的现象。科研人员认为这可能是真菌M产生了抑制细菌生长的物质。 为验证该猜想，科研人员做了如图所示的实验。下列有关分析正确的是（ ）

A. 过程①使用了平板划线法接种真菌M， 该过程中接种环至少要灼烧4次
B. 若甲、乙和丙组的滤纸片周围都出现了抑菌圈，则说明上述猜想正确
C. 过程②应取平板a 中的单菌落置于培养基 b 中，其主要目的是选择培养
D. 真菌M 在培养基b 中培养时，培养基中应加入琼脂
【答案】B
【分析】微生物常见的接种的方法：
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
【详解】A、每次划线前均需灼烧接种环，根据图可知过程①使用了平板划线法接种真菌M共画线4次， 且该过程结束时还需要灼烧，所以该过程中接种环至少要灼烧5次，A错误；
B、根据图示信息可知，甲、乙和丙组都是不同种类的细菌，若甲、乙和丙组的滤纸片周围都出现了抑菌圈，则说明真菌M可能产生了抑制细菌生长的物质，B正确；
C、过程②应取平板a 中的单菌落置于培养基 b 中，其主要目的是扩大培养，获得更多的纯培养物，C错误；
D、真菌M 在培养基b中培养时，培养基b是液体培养基，不应加入琼脂，D错误。
故选B。
3. 传统固态发酵食醋过程包括酒曲和麦曲的糖化，然后通过酵母菌、醋酸菌等多菌种的发酵，最终陈酿而成。现代工业化生产食醋是基于传统发酵方法，将菌种接种到大型发酵罐中，并在计算机系统的监测和控制下完成。下列有关食醋发酵的叙述正确的是（ ）
A. 醋酸菌在无氧条件下发酵，能将酒精转化为乙醛，再转化为醋酸
B. 与传统发酵方式相比，食醋的工业化生产需要接种单一菌种进行发酵
C. 醋酸菌可利用充足的糖源和氧气，在其细胞质基质和线粒体中进行发酵
D. 在工业化生产中，发酵罐需要严格消毒，可避免杂菌污染影响食醋品质和风味
【答案】B
【分析】发酵工程是指利用微生物的特定功能，通过现代工程技术，规模化生产对人类有用的产品，主要包括微生物的代谢物、酶及菌体本身。发酵工程一般包括菌种的选育，扩大培养，培养基的配制、灭菌，接种，发酵、产品的分离、提纯等方面。
【详解】A、醋酸菌好氧菌，在有氧条件下发酵，才能将酒精转化为乙醛，再转化为醋酸，无氧条件下不能进行该过程，A错误；
B、传统发酵是多菌种发酵，现代工业化生产需要接种单一菌种进行发酵，B正确；
C、醋酸菌属于原核生物，没有线粒体，其发酵过程在细胞质基质中进行，C错误；
D、在工业化生产中，发酵罐严格灭菌，能避免杂菌污染，因为杂菌可能会与发酵菌种竞争营养物质等，从而影响食醋品质和风味，D错误。
故选B。
4. 酵母菌絮凝是指菌体细胞间通过细胞壁相互粘附、聚集成团的现象。科研人员利用基因工程获得了一株具有较高絮凝能力的酵母菌 M，为探究该菌株絮凝能力高于野生酵母菌的原因，将两种菌放在含有钙荧光白（细胞壁组装抑制剂）的培养基上培养，发现菌株M形成菌落的能力明显高于野生菌株。下列说法错误的是（ ）
A. 菌株M 絮凝能力较高的原因可能是细胞壁组装能力高于野生菌株
B. 含有钙荧光白的培养基需要添加无机盐以调节渗透压，但无需添加琼脂
C. 除基因工程育种外，酵母菌M还可通过诱变育种或从自然界筛选获得
D. 酒精发酵时选用菌株M可节约成本，其原因是发酵结束时细胞和产物更易分离
【答案】B
【分析】菌落：是指由单个微生物细胞或一堆同种细胞在适宜固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度，形成以母细胞为中心的一团肉眼可见的、有一定形态、构造等特征的子细胞集团。各种微生物在一定条件下形成的菌落特征，如大小、形状、边缘、表面、质地、颜色等，具有一定的稳定性，是衡量菌种纯度、辨认和鉴定菌种的重要依据。
【详解】A、题意显示，酵母菌絮凝是指菌体细胞间通过细胞壁相互粘附、聚集成团的现象，据此推测，菌株M 絮凝能力较高的原因可能是细胞壁组装能力高于野生菌株，A正确；
B、在含有钙荧光白的培养基中需要添加无机盐以调节渗透压，同时也需添加琼脂，因为菌落是在固体培养基上长出的，B错误；
C、获取目标菌株的方法有基因工程育种、诱变育种和从自然界中筛选获得，题中的M菌是通过基因工程育种的方法获得的，C正确；
D、酒精发酵时选用菌株M可节约成本，因为菌株M具有较高絮凝能力，因此在发酵结束时细胞和产物更易分离，D正确。
故选B。
5. 柑橘溃疡病由柑橘溃疡病菌引起，对柑橘有严重危害。柑橘黄单胞杆菌（KY）是最常见的柑橘溃疡病菌，其拟核DNA长度约为413bP，用引物对甲、乙、丙三株溃疡柑橘的叶片进行PCR扩增，电泳结果如图1。研究发现从两种真菌J-8和Y-66中获得的提取物对KY有抑菌活性，欲探究抑菌效果最好时的最低浓度（菌落完全不生长的最低浓度），科研人员将不同浓度的J-8和Y-66提取物用丙酮溶解后制备成固体培养基，用其培养KY，48小时后观察菌落生长情况，结果如图2。下列相关分析错误的是（ ）
A. 感染KY的植株最可能为乙植株
B. 对照组用无菌水配制的固体培养基培养KY
C. J-8提取物抑制KY的效果优于Y-66
D. 图2中，Y-66提取物抑菌效果最好时的最低浓度小于或等于2.5mg/mL
【答案】B
【分析】PCR即聚合酶链式反应，是指在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为延伸起点，体系中加入dNTP、Mg2+以及延伸因子、扩增增强因子，通过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程，能快速特异地在体外扩增任何目的DNA。包括变性、退火（复性）、延伸三个过程。
【详解】A、柑橘黄单胞杆菌（KY）的拟核DNA长度约为413bp，而植株乙中PCR扩增出的DNA长度略大于400bp，小于500bp，与KY拟核DNA长度相符，因此感染KY的植株最可能为乙植株，A正确；
B、科研人员将不同浓度的J-8和Y-66提取物用丙酮溶解后制备成固体培养基，用其培养KY，对照组应是用丙酮配制的固体培养基培养KY，B错误；
C、两种真菌J-8和Y-66的提取物对KY有抑菌活性。图2结果显示，提取物浓度较低时，相同浓度下J-8组菌落数相对值低于Y-66组，由此可见J-8提取物抑制KY的效果优于Y-66，C正确；
D、图2中，Y-66提取物在1.25mg/mL时有菌落生长，而在2.5mg/mL时已无菌落生长，说明Y-66提取物抑菌效果最好时的最低浓度大于1.25mg/mL，小于或等于2.5mg/mL，D正确。
故选B。
6. 有研究者利用捐献的人类胚胎，在体外构建了人类胚胎甲状腺类器官(hFTO)培养系统，如图所示。在体外培养体系中通过激活cAMP信号可诱导hFTO成熟为具有甲状腺激素分泌能力的hMTO，从而模拟甲状腺的关键发育事件。下列叙述错误的是（ ）

A. 可利用机械方法将胚胎甲状腺组织分散成单个细胞进行培养
B. 甲状腺细胞应置于95%O₂和5%CO₂的混合气体环境中培养
C. hMTO与hFTO相比,细胞中的RNA和蛋白质发生改变
D. 甲状腺类器官的培养过程中没有体现细胞的全能性
【答案】B
【分析】一、动物细胞培养的概念：从动物体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术。
二、动物细胞培养的条件：（1）培养基中应含有细胞所需要的各种营养物质，如糖类、氨基酸、无机盐、维生素等，由于人们对细胞所需的营养物质尚未全部研究清楚，因此通常需要加入血清等一些天然成分；（2）无菌、无毒的环境；（3）适宜的温度、pH和渗透压；（4）气体环境：95%的空气+5%的CO2。
【详解】A、可利用机械方法将胚胎甲状腺组织分散成单个细胞进行培养，A正确；
B、甲状腺细胞应置于95%空气和5%CO₂的混合气体环境中培养，B错误；
C、激活cAMP信号可诱导hFTO成熟为具有甲状腺激素分泌能力的hMTO，hMTO与hFTO相比，细胞中的RNA和蛋白质发生改变，遗传物质未改变，C正确；
D、细胞的全能性是指已经分化的细胞，仍然具有发育成完整个体的潜能，甲状腺类器官的培养过程中没有体现细胞的全能性，D正确。
故选B。
7. 毛建草含有黄酮和多糖等多种药用成分，可全草入药，具有抗菌、消炎和清热等功效，可用于治疗咳嗽等疾病。科研人员利用其叶片通过植物组织培养的方法快速繁殖。下列叙述错误的是（ ）
A. 利用叶片进行植物组织培养的原理是植物细胞具有全能性
B. 脱分化处理前要对毛建草叶片进行清洗、灭菌等处理
C. 诱导生根时，应适当降低培养基中细胞分裂素与生长素含量的比值
D. 选择毛建草的茎尖作为外植体进行植物组织培养可获得脱毒苗
【答案】B
【分析】一、植物组织培养就是在无菌和人工控制的条件下，将离体的植物器官、组织、细胞，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。二、植物组织培养的条件：①细胞离体和适宜的外界条件（如适宜温度、适时的光照、pH和无菌环境等）；②一定的营养（无机、有机成分）和植物激素（生长素和细胞分裂素）。
【详解】 A、利用叶片进行植物组织培养的原理是植物细胞具有全能性，A正确；
B、脱分化处理前要对毛建草叶片进行清洗、消毒等处理，灭菌会导致组织死亡，B错误；
C、培养基中细胞分裂素与生长素含量的比值高时，诱导生芽，细胞分裂素与生长素含量的比值低时，诱导生根，C正确；
D、茎尖分生区病毒极少，甚至无病毒，常利用茎尖作为外植体培育脱毒苗，D正确。
故选B。
8. 滋养层细胞（TE）置换技术是将受精卵中来源于囊胚的内细胞团（ICM）去除，得到一个没有ICM的空TE，再将来自核移植胚胎的ICM注入这个TE空腔，得到重构胚胎（TE置换胚胎）。某团队以恒河猴的胎猴成纤维细胞为核供体进行体细胞核移植后进行TE置换，再将TE置换胚胎移植到同期发情的受体恒河猴体内。下列说法错误的是（ ）
A. TE置换胚胎移植后得到的恒河猴的染色体组成与供体体细胞完全相同
B. 核移植时若卵母细胞去核不完全，会导致克隆胚胎染色体异常从而发育异常
C. TE置换胚胎移植前需用促性腺激素处理受体恒河猴，以促进同期发情
D. 对TE置换胚胎的滋养层细胞做DNA分析进行性别鉴定，结果无参考价值
【答案】C
【分析】动物核移植是指将动物的一个细胞的细胞核移入一个去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎。在体外将采集到的卵母细胞培养到减数第二次分裂中期才成熟，可以通过显微操作技术去除卵母细胞的核，核移植时，对提供细胞核和细胞质的奶牛不需要进行同期发情处理，使用电刺激等方法可以激活重构胚使其完成细胞分裂和发育。
【详解】A、TE置换胚胎是将核移植胚胎的ICM注入到去除了ICM的空TE中得到的。核移植时，供体细胞（胎猴成纤维细胞）的细胞核进入去核卵母细胞，最终发育成的TE置换胚胎的遗传物质主要来自供体体细胞的细胞核。 由于染色体主要存在于细胞核中，所以TE置换胚胎移植后得到的恒河猴的染色体组成与供体体细胞完全相同，A正确；
B、卵母细胞去核不完全，会使卵母细胞中残留的染色体与供体细胞的染色体共同存在于克隆胚胎中，从而导致克隆胚胎染色体数目异常。 染色体数目异常会影响胚胎的正常发育，导致克隆胚胎发育异常，B正确；
C、同期发情是为了使受体恒河猴的子宫生理状态与供体相同，便于胚胎移植，通常采用的方法是注射孕激素等，而不是促性腺激素，C错误；
D、滋养层细胞将来发育成胎膜和胎盘，取滋养层细胞做DNA分析进行性别鉴定等操作，不会影响胚胎本身的发育。 但题中是将胎猴成纤维细胞作为核供体进行体细胞核移植，性别已经由核供体（胎猴成纤维细胞）决定，对TE置换胚胎的滋养层细胞做DNA分析进行性别鉴定没有必要，结果无参考价值，D正确。
故选C。
9. 某团队通过植物组织培养技术开展东湖菊花种苗快速繁殖及脱毒研究，打造“汕头金菊”产业名片。若取菊花茎段进行组织培养，茎段未能诱导出愈伤组织，其原因不包括（ ）
A. 茎段接种时倒插B. 激素配比不合理
C. 外植体消毒过度D. 培养时遮光处理
【答案】D
【分析】植物组织培养技术是指将离体的植物器官、组织或细胞等，人工配制的培养基上，给予适当的培养条件，诱导其生成完整植株的技术。
【详解】A、将菊花茎段切断形态学下端插入诱导愈伤组织的培养基中，不应倒插，不符合题意，A错误；
B、培养基中植物激素的浓度、比例等都会影响植物细胞的发育方向，如生长素和细胞分裂素比例高时，可以促进生根，比例适中时有利于产生愈伤组织，不符合题意，B错误；
C、外植体需要用70%的酒精消毒30s，立即用无菌水冲洗2-3次；再用5%的次氯酸钠消毒30min后，立即用无菌水冲洗2-3次，若消毒过度会影响植物组织的活性，因而可能导致无愈伤组织产生，不符合题意，C错误；
D、诱导愈伤组织的形成过程通常需要避光处理，这不会导致没有愈伤组织产生，符合题意，D正确。
故选D。
10. 全球首批机器人成功“孕育”婴儿引起了大家的关注，这是利用西班牙某公司研发的机器人完成的，这个机器人可代替专业人员完成试管婴儿的体外受精过程（体外受精过程之前都是由专业人员完成的，需要使用超薄空心针在显微镜下精细处理精子和卵细胞，难度大，但该机器人操作简单，即使没有生育医学领域工作经验的人也可操作）。下列有关试管婴儿的叙述，错误的是（ ）
A. 试管婴儿和克隆动物的培育原理、操作步骤等不太一致
B. 通常采用相关方法处理采集到的精子，使精子获得能量后进行体外受精
C. 常以观察到卵细胞膜和透明带之间有两个极体或雌、雄原核融合作为受精的标志
D. 体外受精后的早期胚胎培养需要额外提供营养物质
【答案】B
【分析】试管婴儿是指分别将卵子与精子取出后，置于试管内使其受精，再将胚胎前体即受精卵移植回母体子宫内发育成胎儿。试管婴儿是用人工方法让卵子和精子在体外受精并进行早期胚胎发育，然后移植到母体子宫内发育而诞生的婴儿。
【详解】A、试管婴儿属于有性生殖，克隆动物属于无性繁殖，两者的培育原理不一样，操作步骤也不一样，A正确；
B、通常采用相关的方法处理采集到的精子，使精子获得受精的能力后进行体外受精，而不是获得能量，B错误；
C、多数哺乳动物的第一极体不进行减数分裂Ⅱ，因而不会形成两个第二极体，在实际胚胎工程操作中，常以观察到卵细胞膜和透明带之间有两个极体或者雌、雄原核融合作为受精的标志，C正确；
D、体外受精后的早期胚胎培养所需的营养物质与体内的相同，需要氨基酸、无机盐、促生长因子等，还需加入血清等天然成分，故需要额外提供营养物质，D正确。
故选B。
11. 我国野生梅花鹿数量极为稀少，是国家Ⅰ级重点保护野生动物。为保存野生梅花鹿的遗传资源，研究人员以耳缘组织为材料，成功培养了原代梅花鹿细胞，并建立了成纤维细胞系（具备分化成各种细胞的潜力），同时对其进行了冻存保存（过程如图所示）。下列叙述错误的是（ ）
A. 鹿成纤维细胞系细胞类似于干细胞，具有分裂和分化的能力
B. 鹿成纤维细胞系冻存时细胞代谢被抑制，细胞中酶的活性较弱
C. 步骤①中常用胰蛋白酶处理，细胞悬浮液出现贴壁后还需酶处理
D. 在原代培养过程中，培养环境需要不断通入无菌O2，不需要CO2
【答案】D
【分析】动物细胞培养时，取幼龄动物的组织，剪碎后，用胰蛋白酶处理分散成单个细胞，制成细胞悬浮液，转入细胞培养液中进行的培养是原代培养；当细胞贴满瓶壁，在用胰蛋白酶处理分散成单个细胞，制成细胞悬浮液，转入培养液中进行的是传代培养。
【详解】A、成纤维细胞系具备分化成各种细胞的潜力，类似于干细胞，具有分裂和分化的能力，A正确；
B、低温会抑制酶活性，因此鹿成纤维细胞系冻存时细胞代谢被抑制，细胞中酶的活性较弱，B正确；
C、步骤①中常用胰蛋白酶处理使分散成单个细胞，细胞悬浮液出现贴壁后还需胰蛋白酶处理分散成单个细胞，制成细胞悬浮液，再转入培养液中进行传代培养，C正确；
D、细胞培养所需气体主要有O2和CO2，O2是细胞代谢所必需的，CO2的作用是维持培养液的pH，所以在原代培养过程中，要将培养瓶置于95%的空气加5%的CO2的混合气体的培养箱中进行培养，D错误。
故选D。
12. 科研人员利用TALEN基因编辑技术构建RPE65基因编辑的家犬，建立RPE65基因突变动物模型，TALEN编辑体系主要由特异性的DNA识别域和非特异性的FkI内切核酸酶构成，DNA识别域由多个TALE蛋白连接而成。该系统能对DNA靶序列进行剪切，造成DNA双链断裂，诱导DNA产生修复，从而达到对基因序列进行改造的目的。下列说法错误的是（ ）
A. TALE能识别DNA特异位点，发挥靶向作用
B. FkI内切核酸酶作用于DNA的磷酸二酯键
C. 可用显微注射的方式将目的基因导入家犬的受精卵
D. 受精卵通过有丝分裂形成体积增大的桑葚胚
【答案】D
【分析】基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
【详解】A、“TALEN编辑体系主要由特异性的DNA识别域和非特异性的FkI内切核酸酶构成，DNA识别域由多个TALE蛋白连接而成。该系统能对DNA靶序列进行剪切”，这说明TALE确实能识别DNA的特异位点，并发挥靶向作用，A正确；
B、FkI内切核酸酶的作用是切割DNA，而DNA的基本结构单元是核苷酸，核苷酸之间是通过磷酸二酯键连接的。所以，当FkI内切核酸酶切割DNA时，它实际上是在切断磷酸二酯键，B正确；
C、在基因工程中，将目的基因导入动物细胞（如家犬的受精卵）的常用方法是显微注射，C正确；
D、桑葚胚体积没有更大，D错误。
故选D。
13. 将具有抗肿瘤作用的细胞因子IFNγ基因连接到Egr-1基因启动子上后，利用Egr-1基因启动子的放射诱导性，在X射线等电离辐射诱导下，启动Egr-1基因启动子，进而诱导与其连接的IFNγ基因表达。这样在肿瘤部位可以通过射线和IFNγ的双重作用杀伤肿瘤细胞。图示为重组质粒的构建过程，下列叙述正确的是（ ）
A. 重组质粒上的Egr-1基因启动子可以被肿瘤细胞核糖体识别
B. 通过PCR扩增cDNA进行30轮时，共需要消耗的引物数量为230个
C. 将外源IFNγ基因送入到肿瘤细胞的载体还可以是动物的病毒
D. T4DNA连接酶能连接质粒和IFNγ基因双链之间的氢键和磷酸二酯键
【答案】C
【分析】题图分析：图为重组质粒的构建过程，由图可知，IFNγ为目的基因，目的基因两端有NruⅠ和Hind Ⅲ两种限制酶的切割位点，质粒也存在这两种限制酶的切割位点，所以将目的基因插入质粒，需用HindⅢ和BamHⅠ两种限制酶同时酶切质粒和获得目的基因；DNA连接酶按其来源不同，可分为两类，即E·cliDNA连接酶和T4DNA连接酶。
【详解】A、启动子驱动遗传信息转录，是RNA聚合酶识别和结合的位点，A错误；
B、PCR扩增cDNA进行30轮时，产生了230个产物，每条新合成的链都要消耗一个引物，但产物中有两条起始的模板链不含引物，故共需要消耗的引物数量为个，B错误；
C、在基因工程中使用的载体除质粒外，还有噬菌体、动植物病毒等，故将外源IFNγ基因送入到肿瘤细胞的载体还可以是动物的病毒，C正确；
D、T4DNA连接酶连接质粒和IFNγ基因间的磷酸二酯键，D错误。
故选C。
14. 甲型H1N1流感病毒表面的神经氨酸酶有4个抗原决定簇，一种抗原决定簇只能刺激机体产生一种抗体（Ab）。由多种抗原决定簇刺激机体产生的抗体称为多克隆抗体。如图为制备多克隆抗体和单克隆抗体的示意图。下列叙述正确的是（ ）
A. 诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合只能用灭活病毒诱导法
B. ①②都要在96孔板上用相同的选择培养基培养，用相同的方法筛选
C. 多克隆抗体的产生需要多种B细胞参与
D. 甲型H1N1流感病毒部分抗原结构改变后，会出现多抗失效而单抗有效的情况
【答案】C
【分析】题意分析，“一个抗原往往有多个不同的抗原决定簇，一个抗决定簇只能刺激机体产生一种抗体”， 每个抗原决定簇刺激产生的抗体是单抗。
【详解】A、诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合可用PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法，A错误；
B、筛选①是在选择培养基上进行筛选的，在该培养基上未融合的细胞和同种融合的细胞都会死亡，只有杂交瘤细胞能存活，筛选②筛选的是能产生特定抗体的杂交瘤细胞，具体做法是：将杂交瘤细胞多倍稀释，接种在多孔的细胞培养板上，使每孔细胞不超过1个，通过培养让其增殖，因此①②所用的选择培养基种类和筛选方法都不同，B错误；
C、一种抗原决定簇只能刺激机体产生一种抗体（Ab），由多种抗原决定簇刺激机体产生的抗体称为多克隆抗体，因此需要多种B细胞参与，C正确；
D、甲型H1N1流感病毒部分抗原结构改变后，会出现原单抗失效，而对没有改变的其他抗原多抗仍有效，D错误。
故选C。
15. 基因工程在农牧业、医药卫生和食品工业等多方面的应用发展迅速，如图表示利用基因工程技术生产人血清白蛋白的两条途径。下列叙述错误的是（ ）

A. 导入人血清白蛋白基因的绵羊受体细胞是乳腺细胞
B. 利用农杆菌转化法可将含有目的基因的重组质粒整合到植物受体细胞的染色体DNA上
C. 扩增目的基因时，利用耐高温的DNA聚合酶从引物a、b的3'-端进行子链合成
D. 构建基因表达载体是该过程的核心步骤
【答案】A
【分析】将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法，农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可整合到受体细胞的染色体DNA上。基因表达载体常包括目的基因、启动子、终止子、标记基因。标记基因是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。
【详解】A、导入人血清白蛋白基因的绵羊受体细胞不是乳腺细胞，而是受精卵或早期胚胎细胞，A错误；
B、农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上，根据农杆菌的这一特点，将目的基因插入Ti质粒的T-DNA上，通过农杆菌的转化作用，就可以把目的基因的T-DNA整合到植物细胞中染色体的DNA上，B正确；
C、引物的延伸方向为3'端，扩增目的基因时，利用耐高温的DNA聚合酶从引物a、b的3'－端进行子链合成，C正确；
D、构建基因表达载体是基因工程核心步骤，D正确。
故选A。
16. 红薯原产于美洲，在明朝引入中国。红薯的引入和传播，是中外文化交流的一个缩影。红薯在种植过程中易感染病毒（如a病毒和β病毒）而导致减产，培育和栽培脱毒植株是防治的根本措施。下列叙述错误的是（ ）
A. 可切取一定大小的红薯茎尖作为外植体培养脱毒植株
B. 培育的无α病毒马铃薯种苗不具有抗α病毒感染的能力
C. 刚移栽脱毒苗时，应将脱毒苗种苗种植在灭菌土壤中
D. 在脱分化形成愈伤组织的过程中没有发生基因的选择性表达
【答案】D
【分析】感病植株并不是每个部位都带有病毒，植物生长点附近的病毒浓度很低甚至无病毒，利用植物组织培养方法获得脱毒苗，再利用脱毒苗进行繁殖，则种植的作物就不会或极少发生病毒。
【详解】A、茎尖和根尖细胞一般不含病毒或病毒含量少，因此可切取一定大小的红薯茎尖作为外植体培养脱毒植株，A正确；
B、培育的无α病毒马铃薯种苗为无毒苗，但不具有抗α病毒感染的能力，B正确；
C、刚培育的脱毒苗抗病毒感染能力弱，因此刚移栽脱毒苗时，应将脱毒苗种苗种植在灭菌土壤中，避免感染病毒，C正确；
D、在脱分化形成愈伤组织的过程中涉及细胞分裂和分化，该过程中发生基因的选择性表达，D错误。
故选D。
17. 科学家将马铃薯胰蛋白酶抑制剂基因Pin-Ⅱ导入杨树细胞，培育成了抗虫杨树。下图表示含目的基因的DNA分子和农杆菌质粒，图中AmpR表示氨苄青霉素抗性基因，NeR表示新霉素抗性基因，箭头表示识别序列完全不同的4种限制酶的酶切位点。下列叙述不正确的是（ ）
A. 目的基因插入到质粒的T-DNA上，才能整合到受体细胞染色体中
B. 为使目的基因与质粒高效重组，最好选用EcRⅠ和PstⅠ
C. 成功导入重组质粒细胞会表现为不抗氨苄青霉素、抗新霉素
D. 可用PCR技术检测目的基因是否表达
【答案】D
【分析】题图分析：为使目的基因与质粒高效重组，防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，最好选用两种不同的限制酶作用于含目的基因的DNA和质粒，要想切割出目的基因，限制酶应该位于目的基因的两侧；又因为限制酶PstⅠ和限制酶TthⅢⅠ分别位于标记基因AmpR和NeR中，因此限制酶PstⅠ和限制酶TthⅢⅠ不能同时使用，即一定需要用到限制酶EcRⅠ；如果限制酶EcRⅠ和TthⅢⅠ同时使用，会破坏质粒中的标记基因NeR，同时会切除复制原点。因此只能选用EcRⅠ和PstⅠ切割目的基因和质粒，然后再在DNA连接酶的作用下形成重组质粒。。
【详解】A、农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上。因此，将目的基因插入到质粒的T-DNA上，可将目的基因整合到受体细胞的染色体DNA中，A正确；
B、由分析可知，为使目的基因与质粒高效重组，最好选用EcRⅠ和PstⅠ，B正确；
C、用EcRⅠ和PstⅠ切割会破坏氨苄青霉素抗性基因，但不会破坏新霉素抗性基因，因此成功导入重组质粒的细胞会表现为不抗氨苄青霉素，但能抗新霉素，C正确；
D、可用抗虫接种实验进行个体生物学鉴定，检测杨树目的基因是否表达，若杨树抗虫基因表达，则会表现出抗虫性，也可用抗原-抗体检测实验检测相应蛋白质是否合成，进而确定目的基因是否表达，D错误。
故选D。
18. 研究人员将外源鲫鱼Mx基因（该基因产物能抵抗粘液病毒）与质粒相连接构建基因表达载体，利用显微注射的方法将其导入草鱼体内，获得转基因抗病草鱼。下列叙述正确的是（ ）
A. 获得抗粘液病毒草鱼方法的原理是基因重组
B. 重组载体的受体细胞一般是已分化的体细胞
C. 转录Mx基因需要解旋酶和DNA连接酶
D. 构建重组载体的质粒一般是天然质粒
【答案】A
【分析】基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外 DNA 重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。其原理是基因重组。
【详解】A、将外源鲫鱼Mx基因与质粒相连接构建基因表达载体，再导入草鱼体内，这属于基因工程，其原理是基因重组，A正确；
B、重组载体的受体细胞一般是受精卵，因为受精卵具有全能性，更容易发育成完整的个体，而不是已分化的体细胞，B错误；
C、转录Mx基因需要RNA聚合酶，解旋酶用于DNA复制，DNA连接酶用于连接DNA片段，C错误；
D、构建重组载体的质粒一般不是天然质粒，而是经过人工改造的质粒，以满足基因工程的需求，D错误。
故选A。
19. 国家生猪种业工程技术研究中心科研团队在转基因猪生物反应器领域取得重要研究进展。在国际上首次利用转基因猪的唾液腺作为生物反应器，高效合成一种对人的神经性疾病具有良好治疗作用的蛋白——人神经生长因子（hNGF）。生产流程如图所示。下列相关说法错误的是（ ）
A. 可用人hNGF基因与猪成纤维细胞A中唾液淀粉酶基因的启动子等元件构建表达载体
B. 重构胚具有发育成个体的潜能，获得后可直接移植到代孕猪C体内进行分裂和发育
C. 猪卵细胞B需要在体外培养到MⅡ期后通过显微操作去核
D. 唾液腺生物反应器与乳腺生物反应器相比具有不受性别限制等特点
【答案】B
【分析】核移植技术指的是将动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体；用核移植的方法得到的动物称为克隆动物，原理是动物细胞核的全能性。
【详解】A、用猪成纤维细胞A中唾液淀粉酶基因的启动子与人hNGF基因构建基因表达载体，能使目的基因在唾液腺细胞中表达，A正确；
B、重构胚需要激活后才可进行分裂和发育，B错误；
C、卵细胞需要培养到减数分裂Ⅱ中期去核，C正确；
D、乳腺生物反应器只能是雌性动物，唾液腺生物反应器可以不受性别的限制，D正确。
故选B。
20. 蝙蝠是一种具有长寿、抗病毒和回声定位等生物学特性的哺乳动物，有重要研究价值。研究者将蝙蝠的诱导多能干细胞（iPS细胞）标上绿色荧光，将其注入到小鼠的囊胚中，发现内细胞团某些细胞带有绿色荧光，将上述胚胎移入雌鼠子宫，发现三胚层的细胞中均有部分带绿色荧光。下列说法错误的是（ ）
A. 可从蝙蝠囊胚的内细胞团中获得其iPS细胞
B. 可通过体外受精和胚胎培养技术获得小鼠囊胚
C. 接受胚胎的小鼠需进行同期发情处理
D. 结果表明蝙蝠iPS细胞在体内仍具有分化能力
【答案】A
【分析】一、哺乳动物的胚胎干细胞简称ES或EK细胞，来源于早期胚胎或从原始性腺中分离出来。二、胚胎干细胞的特点：具有胚胎细胞的特性，在形态上表现为体积小，细胞核大，核仁明显；在功能上，具有发育的全能性，可分化为成年动物体内任何一种组织细胞。另外，在体外培养的条件下，可以增殖而不发生分化，可进行冷冻保存，也可进行遗传改造。三、胚胎干细胞可用于治疗人类的某些顽症，如帕金森综合症。还可培育出人造器官，解决目前临床上存在的供体器官不足和器官移植后免疫排斥的问题。
【详解】A、囊胚的内细胞团具有发育的全能性，不需要诱导形成多能干细胞，可以从蝙蝠囊胚的滋养层中获得其iPS细胞，A错误；
B、可通过体外受精获得受精卵，在通过体外早期培养技术获得囊胚，B正确；
C、胚胎移植时需要对受体即接收胚胎的个体进行同期发情处理，使移植的胚胎处于相同的生理环境，C正确；
D、发荧光的诱导多能干细胞注入到小鼠的囊胚中，发现内细胞团某些细胞带有绿色荧光，再将上述胚胎移入雌鼠子宫，发现三胚层的细胞中均有部分带绿色荧光，由此可说明蝙蝠iPS细胞在体内仍具有分化能力，D正确。
故选A。
21. 位于成都市郊的金凤奶牛养殖场是西南地区规模较大、养殖水平较高的规范化奶牛养殖示范场。该奶牛场从国外引进的良种奶牛，产奶量大，产奶品质高，但其生育率很低，繁殖速度慢。为解决这一问题，科研人员计划采用以下两种方法提高良种奶牛的繁育率。下列相关叙述正确的是（ ）

A. 方法Ⅰ和方法Ⅱ的生殖方式均为无性生殖
B. 对良种奶牛B施用的激素通常为性激素
C. 试管牛E、克隆牛F体内均有两个亲本的遗传物质
D. 可对已发育到原肠胚的胚胎进行分割来进一步增加胚胎数量
【答案】C
【分析】胚胎移植的基本程序主要包括：①对供、受体的选择和处理（选择遗传特性和生产性能优秀的供体，有健康的体质和正常繁殖能力的受体；用激素进行同期发情处理，用促性腺激素对供体母牛做超数排卵处理）；②配种或人工授精；③对胚胎的收集、检查、培养或保存；④对胚胎进行移植；⑤移植后的检查。
【详解】A、方法Ⅰ培育试管牛的生殖方式是有性生殖，方法Ⅱ的生殖方式是无性生殖，A错误；
B、对良种奶牛B施用的激素通常为促性腺激素，使其超数排卵，B错误；
C、克隆牛有少量遗传物质来自供质的亲本，试管牛是体外受精的产物，二者体内均有两个亲本的遗传物质，C正确；
D、胚胎分割时应选择发育良好、形态正常的桑葚胚或囊胚阶段的胚胎进行分割，不能对原肠胚的胚胎进行分割，D错误。
故选C。
22. 2024年世界园艺博览会在成都举行，本次世园会的吉祥物“桐妹儿”的核心创意来自中国特有孑遗植物珙桐。珙桐有“植物活化石”之称，是国家一级重点保护植物。科研人员从珙桐叶中分离出了具有抗肿瘤功效的次生代谢物——槲皮素。野生珙桐资源有限，下图是通过植物细胞工程等技术手段进行珙桐的扩大培养，其中序号代表相应的处理过程。下列相关叙述正确的是（ ）

A. 通过过程①②④可定向改变植株性状
B. ⑤过程需在无菌水中进行
C. 植株乙丙丁的获取都采用了植物组织培养技术
D. 过程⑥体现了愈伤组织全能性高的特点
【答案】C
【分析】植物的组织培养又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织、器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在无菌条件下接种在含有各种营养物质及植物激素的培养基上进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。
【详解】A、过程④是诱发突变，由于基因突变具有不定向性，故①②④不能保证性状的定向改变，A错误；
B、⑤过程是将愈伤组织经过酶解法去除细胞壁形成原生质体，由于失去了细胞壁的保护和支撑作用，原生质体会大量吸水而涨破，因此⑤过程不能在无菌水中进行，需在等渗或稍微高渗的溶液中进行，B错误；
C、植株丁是通过植物体细胞杂交技术获得的杂种植株，将融合的细胞培养为杂种植株应用了植物组织培养技术，植株乙是通过植物组织培养技术将愈伤组织再分化形成的植株，植株丙则是通过植物组织培养技术将愈伤组织时期的细胞诱变，然后在培养为植株，因此植株乙丙丁的获取都采用了植物组织培养技术，C正确；
D、过程⑥是将愈伤组织分瓶培养，为植物细胞培养的过程，并从中获取细胞代谢产物的过程，该过程没有将愈伤组织培养为个体，因此不能体现愈伤组织全能性高的特点，D错误。
故选C。
23. 哺乳动物排出的卵母细胞进一步成熟后会停留在MI期不再继续分裂。受精时，卵母细胞内的Ca2+浓度显著升高，这会破坏细胞内静止因子（CSF）的结构，进而导致成熟促进因子（MPF）的含量下降，最终激活卵子完成减数分裂。利用卵母细胞进行核移植的过程中，需用Ca2+载体等方法处理重构胚，才能激活其完成细胞分裂和发育进程。下列说法错误的是（ ）
A. 被激活的卵子在输卵管中完成减数分裂Ⅱ
B. 未经处理的重构胚内CSF和MPF水平均较低
C. Ca2+载体可能通过提高重构胚内的Ca2+浓度而使其激活
D. 被激活的重构胚通常需培养至囊胚或桑葚胚再进行胚胎移植
【答案】B
【分析】胚胎移植的基本程序主要包括：①对供、受体的选择和处理（选择遗传特性和生产性能优秀的供体，有健康的体质和正常繁殖能力的受体．用激素进行同期发情处理，用促性腺激素对供体母牛做超数排卵处理）；②配种或人工授精；③对胚胎的收集、检查、培养或保存（对胚胎进行质量检查，此时的胚胎应发育到桑椹或胚囊胚阶段）；④对胚胎进行移植；⑤移植后的检查。
【详解】A、动物排出的卵子需要在输卵管中进一步成熟，精子入卵后被激活的卵子完成减数分裂Ⅱ，A正确；
B、分析题干信息可知，卵母细胞内的Ca2+浓度显著升高，会破坏CSF的结构，导致MPF的含量下降，最终激活卵子完成减数分裂，由此说明未经处理的重构胚未被激活，CSF和MPF水平应均较高，B错误；
C、Ca2+载体可能通过提高重构胚内的Ca2+浓度，从而破坏CSF的结构，导致MPF的含量下降使其激活，C正确；
D、桑葚胚及囊胚的内细胞团具有发育的全能性，故被激活的重构胚通常需培养至囊胚或桑葚胚再进行胚胎移植，D正确。
故选B。
24. 乙肝病毒基因工程疫苗的生产和使用流程如图，质粒中LacZ基因可使细菌能够利用物质X-gal，从而使菌落呈现蓝色，若无该基因，菌落则呈白色。下列叙述错误的是（ ）
A. 过程①中目的基因和载体重组的效率与载体和目的基因的浓度及比例等有关
B. 过程②需要在培养基中加青霉素和X-gal以获得呈蓝色的大肠杆菌菌落
C. 大肠杆菌是否成功表达出乙肝病毒外壳，可用抗原—抗体杂交法进行检测
D. 该基因工程疫苗不会出现乙肝病毒感染和增殖的情况，安全性高
【答案】B
【分析】一、题图过程①表示获取目的基因，构建重组质粒，②表示将重组质粒导入受体细胞并筛选，③表示转基因大肠杆菌表达乙肝病毒外壳，④表示将乙肝病毒外壳作为疫苗接种，⑤表示疫苗受试者体内出现抗体的过程。
二、基因工程技术的基本步骤：(1)目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。(2)基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。(3)将目的基因导入受体细胞：根据爱体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。(4)目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：检测转基因生物染色体的DNA是香插入目的基因：DNA分子杂交技术；检测目的基因是否转录出了mNA：分子杂交技术；检测目的基因是否翻译成蛋白质：抗原-抗体杂交技术，个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
【详解】A、①获取目的基因，构建重组质粒过程中，增加载体和目的基因的浓度及比例，可以增加目的基因与质粒碰撞机会，提高目的基因和载体重组的效率，A正确；
B、过程表②示将重组质粒导入受体细胞，培养基中加青霉素和X-gal可以用于筛选含有重组质粒的大肠杆菌，BamHI和EcRI由于破坏了质粒中LacZ基因，却保留了青霉素抗性基因，故白色的大肠杆菌菌落才为所需菌落，B错误；
C、乙肝病毒外壳为蛋白质，可用抗原—抗体杂交法检测大肠杆菌是否成功表达出乙肝病毒外壳，C正确；
D、基因工程疫苗由于只利用了乙肝病毒的外壳，不含其遗传物质，所以不能完成病毒的增殖和感染，D正确。
故选B。
25. 科研人员通过切割pET-SEA质粒上SEA基因和终止子之间的部分序列，将猪流行性腹泻病毒的S基因插入，以构建pET-SEA-S重组质粒，并在大肠杆菌中高效表达SEA-S融合蛋白。目的基因导入受体细胞后，可用PCR技术筛选出成功导入pET-SEA-S融合表达质粒的细菌。下列各项所列引物用来进行筛选最合适的是（ ）
A. 引物1和引物4
B. 引物3和引物4
C. 引物1和引物5
D. 引物2和引物5
【答案】A
【分析】PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术，利用的原理是DNA复制，需要条件有模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶），过程包括：①高温变性：DNA解旋过程（PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶，高温条件下氢键可自动解开）；②低温复性：引物结合到互补链DNA上；③中温延伸：合成子链。
【详解】据题干信息可知，需要用PCR技术筛选出含有pET-SEA-S融合表达质粒的细菌，即扩增出的DNA片段含有SEA基因和S基因，故选引物1和引物4，A正确，BCD错误。
故选A。
26. 我国科学家利用植物体细胞杂交技术培育出了多种柑橘属不同种间的杂种植株，大大地丰富了柑橘的品种。下列有关叙述错误的是（ ）
A. 在进行植物体细胞杂交之前必须利用纤维素酶和果胶酶去除植物细胞壁
B. 两种植物细胞原生质体融合成功的标志之一是融合细胞再生出了细胞壁
C. 可用电融合法、离心法、PEG融合法、灭活病毒法等方法诱导植物细胞融合
D. 植物体细胞杂交技术在打破生殖隔离，实现远缘杂交育种等方面具有优势
【答案】C
【分析】诱导原生质体融合的化学试剂是聚乙二醇；原生质体融合的理论基础是细胞膜的流动性；植物组织培养包括脱分化和再分化，其原理是植物细胞具有全能性，涉及的细胞分裂方式是有丝分裂；植物体细胞杂交的优点是克服远缘杂交不亲和的障碍。
【详解】A、植物细胞壁的成分是纤维素和果胶，所以在进行植物体细胞杂交之前必须利用纤维素酶和果胶酶去除植物细胞壁，A正确；
B、两种植物细胞原生质体融合成功的标志之一是融合细胞再生出新的细胞壁，B正确；
C、灭活病毒法不用于植物细胞融合，C错误；
D、植物体细胞杂交技术的优点在于打破生殖隔离，实现远缘杂交育种，D正确。
故选C。
27. 图1为受精作用的过程以及早期胚胎发育示意图，图I表示早期胚胎发育的某个时期。下列叙述错误的是（ ）

A. 图I中过程②细胞的数量增加，但胚胎的总体积并不增加
B. 胚胎发育的早期，受精卵的卵裂过程是在透明带内完成的
C. 图II处于图I中的a时期，细胞⑥将会发育成胎膜和胎盘
D. 图I中a时期胚胎开始发生细胞分化，b时期发育形成三个胚层
【答案】C
【分析】受精卵形成后即在输卵管内进行有丝分裂，开始发育。胚胎发育早期，有一段时间是在透明带内进行分裂，细胞数量不断增加，但胚胎总体积并不增加，这种受精卵的早期分裂称为卵裂。根据胚胎形态的变化，可将早期发育的胚胎分为以下几个阶段：桑葚胚、囊胚、原肠胚。
【详解】A、图 I 中过程②为早期胚胎发育过程，受精卵发育到桑椹胚阶段细胞数量增加，但胚胎的总体积几乎不变，A正确；
B、胚胎发育早期，受精卵的卵裂过程是在透明带完成的，B正确；
C、图Ⅱ为囊胚，其处于图甲中的 a 时期，细胞⑦为滋养层细胞，将来发育成胎儿的胎膜和胎盘，细胞⑥为内细胞团细胞，将来发育成胚胎的各种组织和器官，C错误；
D、b时期胚胎为原肠胚，该时期发生了细胞的分化，随后发育成外、中、内三个胚层，D正确。
故选C。
28. 利用PCR既可快速扩增特定基因，也可用于检测基因的表达。下列有关PCR的叙述正确的是（ ）
A. PCR过程中需要提供模板DNA、DNA连接酶、Mg2+等
B. 变性过程中DNA双螺旋结构解开必须要解旋酶催化
C. 复性过程中引物与模板链的结合遵循碱基互补配对原则
D. 延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP和4种核糖核苷酸
【答案】C
【分析】PCR技术：
1、概念：PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术。
2、原理：DNA复制。
3、前提条件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一对引物。
4、条件：模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶）。
5、过程：①高温变性：DNA解旋过程（PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶，高温条件下氢键可自动解开）；低温复性：引物结合到互补链DNA上；③中温延伸：合成子链。
【详解】A、PCR过程中需要提供模板DNA、耐高温的DNA聚合酶、Mg2+等，A错误；
B、变性过程中DNA双螺旋结构解旋可以不使用解旋酶，比如高温也可以使DNA解旋，B错误；
C、复性过程中，引物与模板链的结合遵循碱基互补配对原则，C正确；
D、延伸过程中需要耐高温的DNA聚合酶、ATP和4种脱氧核糖核苷酸为原料，D错误。
故选C。
29. 在自然界中，微生物的种类远远超过动植物的种类，而研究和应用微生物的前提是进行微生物的纯培养。工业上大规模生产酸奶时，需先获得单一乳酸菌菌种。下列相关操作正确的是（ ）
A. 培养基灭菌后，需调至中性或弱碱性
B. 培养基需冷却到室温时，才能用来倒平板
C. 采用平板划线法接种，若完成5次划线，需要灼烧接种环5次
D. 接种后的平板需和一个未接种的平板一起放入恒温培养箱中培养
【答案】D
【分析】在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体称为培养物。由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物的过程就是纯培养。微生物的纯培养包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤。
【详解】A、培养细菌时，一般需要将培养基调至中性或弱碱性，调 pH 之后再进行高压蒸汽灭菌，A错误；
B、培养基需冷却到 50℃左右时，此时刚好不烫手，且培养基处于液体态，因此，可能用来倒平板，B 错误；
C、采用平板划线法接种乳酸菌时，若完成 5 次划线，需要灼烧接种环 6 次，每次划线之前及最后一次划线结束之后均需要灼烧，C 错误；
D、接种后的平板需和一个未接种的平板一起放入恒温培养箱中培养，该操作的目的是检验操作过程和平板是否无杂菌感染，D 正确。
故选D。
30. 下图为不同限制性内切核酸酶识别的序列及切割位置（箭头所指），下列叙述错误的是（ ）
A. 图示4种限制酶均不能够识别和切割RNA分子内的核苷酸序列
B. 若DNA上的碱基随机排列，Nt I限制性核酸内切酶切割位点出现频率较其他三种限制性核酸内切酶高
C. 使用两种限制酶同时处理质粒和含目的基因的外源DNA可防止二者发生自身环化
D. 用酶Bgl II切出的目的基因与酶BamH I切割的质粒重组后，不能再被这两种酶切开
【答案】B
【分析】一、常用的运载体：质粒（质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外并具有自我复制能力的双链环状DNA分子）、噬菌体的衍生物、动植物病毒。
二、作为运载体必须具备的条件：①要具有限制酶的切割位点； ②要有标记基因（如抗性基因），以便于重组后重组子的筛选；③能在宿主细胞中稳定存在并复制；④是安全的，对受体细胞无害，而且要易从供体细胞分离出来。
三、天然的质粒不能直接作为载体，基因工程中用到的质粒都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。
【详解】A、酶具有专一性，限制酶是专门切割DNA序列中一定部位的酶，所以图示4种限制性核酸内切酶均不能够识别和切割RNA分子内的核苷酸序列，A正确；
B、由于Nt I限制性核酸内切酶识别的序列比其他三种酶的序列长，若DNA上的碱基随机排列，Nt I限制性核酸内切酶切割位点出现频率较其他三种限制性核酸内切酶低，B错误；
C、两种不同的限制酶可产生不同的黏性末端，所以使用两种限制酶同时处理是为了防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，C正确；
D、用酶BglⅡ切出的目的基因与酶BamHⅠ切割的质粒重组后，重组DNA分子序列为，6个脱氧核苷酸序列既不能被限制酶BglⅡ识别，也不能被BamHⅠ识别，所以不可能被这两种酶切开 ，D正确。
故选B。
二、非选择题。除特殊说明外，每空1分。
31. 酸浆是一种经微生物自然发酵，形成的淡黄色或乳白色的液体。我国食用酸浆和利用酸浆进行农产品加工的历史悠久，西北地区的地方特色食物浆水面就是以蔬菜浆水为主要配料制作而成。蔬菜浆水的制作过程如下图所示。请据图回答：
（1）制作蔬菜浆水时向缸中加入面汤的主要目的是_________。
（2）发酵好的蔬菜浆水呈乳白色，味酸，某研究小组测定其pH值为3.7—4.9，结合其制作过程，你认为发酵过程中发挥主要作用的微生物是_______（填“乳酸菌”或“醋酸杆菌”）。该微生物不能在热烫后马上加入的原因是______。
（3）为验证上述推测是否正确，研究小组用_________法分离蔬菜浆水中的微生物，通过观察菌落特征来鉴别微生物种类。同时，该方法也可用来统计样品中的活菌数，这样的计数方法所得结果比实际值偏小的原因是________。
（4）近期兰州大学的科研团队还从蔬菜浆水中成功筛选出具有尿酸降解能力的菌种。利Gmri六胺银法对尿酸盐染色，会使含有尿酸的培养基呈黑色，而具有尿酸降解能力的菌种周围会出现透明圈，测定菌落直径为d、透明圈直径为D.下表是该研究团队初步筛选出的3种优良菌株，根据实验结果分析，降解能力最强的菌株是_________。
【答案】（1）面汤中含有丰富的糖类，可以为乳酸菌发酵提供碳源和能源
（2）①. 乳酸菌 ②. 防止温度过高，杀死乳酸菌
（3）①. 稀释涂布平板 ②. 当两个或多个细胞连在一起时，平板上只生长有一个菌落
（4）L-1
【分析】选择培养基只允许特定的微生物生长，所以甲图中的选择培养基应以乐果为唯一碳源，培养基冷凝后应将平板倒置，以防冷凝水落入培养基造成污染。平板划线法一般多用于菌种的纯化，对混合菌进行分离；稀释涂布平板法一般多用于筛选菌株，可以计数，可以观察菌落特征。乙图中 D/d越大说明菌株的分解能力越强。
【小问1详解】面汤中含有丰富的糖类，可以为乳酸菌发酵提供碳源和能源。
【小问2详解】 由于酸浆发酵中需要加盖（无氧），而醋酸杆菌是好氧菌，故发酵过程中发挥主要作用的微生物是乳酸菌。该微生物不能在热烫后马上加入的原因是防止温度过高，烫死乳酸菌。
【小问3详解】分离微生物的方法有平板划线法和稀释涂布平板法，而只有稀释涂布平板法同时可以用于计数；这样的计数方法所得结果比实际值偏小的原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上只有一个菌落。
【小问4详解】 根据题意，降解能力最强的菌株应该是D/d值最大的，即L-1菌株。
32. 中医治疗疾病多用复方，三白草和鱼腥草是同科不同属的两种常见药用植物，二者因疗效相近且具有叠加效应常被用作“药对”，在我国全年可采收两次。研究者欲利用原生质体融合技术将复方的配伍（两种或两种以上药物配合使用）提前到个体生长或生产过程，并实现有效成分的工厂化生产，具体操作如图1.
（1）过程①通过酶解法去除________获取原生质体，并向三白草和鱼腥草细胞酶解液中分别加入红、绿荧光色素（带荧光色素的原生质体仍能融合和再生）。过程②利用化学诱导剂_______诱导融合，随后在荧光显微镜下选择带_________的杂种原生质体。此过程的原理为_________。

（2）科研人员研究不同的原生质体密度对三白草和鱼腥草原生质体融合率的影响，结果如图2.

由图2可知，双核异核融合体的融合率不能达到100%，可推知该培养液中还存在_______种类型的双核融合体，促进三白草和鱼腥草原生质体融合的最适密度为________。
（3）通常情况下，能增加免疫器官重量表明该物质具有一定的增强免疫力的作用。为判断融合体对动物免疫力的影响，科研人员取同种小鼠30只，雌雄各半，随机均分为三组，实验处理如下表。
①将表格中C组的实验处理补充完整_________。
②若实验结果为__________，则支持利用原生质体融合技术将复方的配伍提前并实现有效成分的工厂化生产。
【答案】（1）①. 纤维素酶、果胶酶 ②. PEG（聚乙二醇） ③. 红、绿荧光色素 ④. 细胞膜的流动性
（2）①. 2种类型的双核融合体 ②. 1×106个/mL ③. C组应用等量的蒸馏水 ④. A、B两组的胸腺重量相同且都大于C组
【分析】题图分析，图1表示三白草和鱼腥草体细胞杂交过程，其中①为去除细胞壁，②为原生质体融合，③为脱分化形成愈伤组织，④为提取代谢产物。图2柱形图中，随着原生质体密度增大，双核异核融合体比例先升高后降低，其中在1×106个/mL-1时， 比例最高。
【小问1详解】过程①通过酶解法去除细胞壁获取原生质体，需要用纤维素酶、果胶酶处理破坏细胞壁；过程②诱导植物细胞融合的方法有利用化学诱导剂PEG（聚乙二醇）诱导融合；由于三百草细胞酶解液中加入了红荧光色素，鱼腥草细胞酶解液中加入了绿荧光色素，所以杂种原生质体应该带红、绿荧光色素。该过程依赖细胞膜的流动性实现，其原理是细胞膜的流动性。
【小问2详解】由图2柱形图可知，在密度为1×106个/mL时， 双核异核融合体比例最高，说明促进三白草和鱼腥草原生质体融合的最适密度为1×106个/mL。双核异核融合体的融合率不能达到100%，可推知该培养液中还存在2种类型的双核融合体（即三白草-三白草、鱼腥草-鱼腥草）。
①本实验目的是判断融合体对动物免疫力的影响，因为C组为对照组，因此根据对A、B两组的处理，C组应用等量的蒸馏水每天一次等量灌胃，连续一周。
【小问3详解】②若实验结果为A、B两组的胸腺重量相同且都大于C组，则支持利用原生质体融合技术将复方的配伍提前并实现有效成分的工厂化生产。
33. 科研人员采用转基因体细胞克隆技术获得转基因绵羊，以便通过乳腺生物反应器生产人凝血因子Ⅸ医用蛋白，其技术路线如图。

（1）由过程①获得的A含有________基因和乳腺中特异性表达的基因的_______等调控元件，A通过_______法导入绵羊胎儿成纤维细胞。
（2）在核移植之前，必须先去掉受体卵母细胞的核，目的是_______。受体应选用_______期卵母细胞。
（3）重组细胞体外培养时，除营养物质外，还需要提供_______（答出2点）等环境条件。
（4）胚胎移植时，一般选择发育至_________阶段的胚胎进行移植。为使代孕母羊处于能接受外来胚胎的时期，一般对其进行_________处理。
【答案】（1）①. 人凝血因子IX医用蛋白##人凝血因子IX ②. 启动子 ③. 显微注射
（2）①. 保证重组细胞核遗传物质来自整合有目的基因的成纤维细胞 ②. MⅡ
（3）无菌、无毒的环境；适宜的温度、pH、渗透压；适宜的气体环境等
（4）①. 桑葚胚或囊胚 ②. 同期发情
【分析】动物细胞培养是指从动物体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术。
【小问1详解】据图可知，过程①表示构建基因表达载体，构建的A为含目的基因的表达载体，应含有人凝血因子IX医用蛋白基因和乳腺中特异性表达的启动子等调控元件，以使目的基因在乳腺细胞，并在特定时期表达，将目的基因导入动物细胞常用显微注射法，故A通过显微注射法导入绵羊胎儿的成纤维细胞。
【小问2详解】在核移植前，之所以先去掉受体卵母细胞的核，其目的是保证重组细胞的核遗传物质只来自整合有目的基因的成纤维细胞，受体应选用处于MⅡ期的卵母细胞，该细胞内含有激发供体细胞核全能性表达的物质，且MⅡ期的细胞才具备受精能力，因此能接受供体细胞核并激发细胞核全能性表达。
【小问3详解】对重组细胞进行培养时，需要满足如下条件：①各种营养物质；②无菌、无毒的环境；③适宜的温度、pH和渗透压；④适宜的气体环境等。
【小问4详解】胚胎移植时，一般选择发育至桑葚胚或囊胚阶段的胚胎，这些时期的胚胎还没有与母体建立联系，处于游离状态。为使代孕母羊处于能接受外来胚胎的时期，一般对其用相关激素进行同期发情处理。
34. 党的二十大对保障粮食安全提出了更高要求。马铃薯块茎富含淀粉，而且其中的维生素是所有粮食中最全的，因此我国科学家对马铃薯这种重要粮食作物开展了大量研究。马铃薯因为自交不亲和，所以只能进行无性繁殖，我国科学家用CRISPR/Cas9基因编辑技术定点敲除二倍体马铃薯的自交不亲和基因获得了二倍体自交系的马铃薯，如下图甲所示。请据图回答：

（1）实验需要通过PCR技术扩增自交不亲和基因，来作为编码特定向导RNA的模板。扩增时需要根据_______的脱氧核苷酸序列设计引物。
（2）CRISPR/Cas9系统能精准识别相关基因，依据的原理是向导RNA与目标DNA发生____：Cas9蛋白相当于_______酶，可催化______（填化学键名称）水解，剪切特定DNA片段。
（3）MAP30蛋白是一种能使I型核酸核糖体失活的蛋白质，实验表明MAP30蛋白具有抗pvx病毒功能，为培育高效表达该基因的马铃薯新品种，科研团队利用农杆菌转化法将MAP30基因导入马铃薯细胞内，如图乙所示，请据图回答：
①选择Ti质粒做载体的原因是______，构建基因表达载体时为避免反向拼接应选择图乙中____识别切割质粒，再用DNA连接酶连接。
②个体水平上，检测转基因马铃薯是否具有抗病毒特性的具体做法是________。
【答案】（1）自交不亲和基因
（2）①. 碱基互补配对 ②. 限制 ③. 磷酸二酯键
（3）①. Ti质粒上的T-DNA可转移到受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上 ②. XbaI和HindIII ③. 向转基因马铃薯植株和非转基因马铃薯植株接种pvx病毒，观察并对比它们的感染情况，如果转基因表达成功，那么病毒对转基因马铃薯几乎没有影响
【分析】基因工程技术的基本步骤：目的基因的筛选与获取；基因表达载体的构建；将目的基因导入受体细胞；目的基因的检测与鉴定。
【小问1详解】PCR扩增目的基因时，引物需要与目的基因两端模板链的部分碱基序列互补，由题干可知，要通过PCR技术扩增自交不亲和基因，因此，扩增时需要根据自交不亲和基因的脱氧核苷酸序列设计引物。
【小问2详解】根据题图及题干信息，向导RNA的识别序列是单链RNA序列，能够利用碱基互补配对原则，特异性识别目标DNA；向导RNA引导Cas9蛋白对特异靶向DNA进行识别和定点敲除，Cas9蛋白能够切割DNA，断裂的是磷酸二酯键，因而Cas9蛋白具有类似限制酶的作用。
【小问3详解】①利用农杆菌转化法可以将目的基因导入马铃薯细胞内，农杆菌中含有Ti质粒，在Ti质粒中含有T-DNA，即可转移的DNA，选择Ti质粒做载体可以将目的基因插入到T-DNA中，Ti质粒上的T-DNA可转移到受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上。构建基因表达载体时需要将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA中，为避免目的基因与质粒的反向拼接（根据图示可知，目的基因的左端应插入靠近质粒启动子的位置），同时为了避免破坏目的基因并将其插入启动子和终止子之间，应选择XbaI和HindIII两种限制酶（选用BamHI切割会破坏目的基因，选用EcRI切割会造成目的基因反接，只用一种酶切割还会造成目的基因和质粒的自连），再用DNA连接酶连接。
②检测转基因马铃薯是否具有抗病毒的特性，在个体水平上可以用接种感染法。向转基因马铃薯植株和非转基因马铃薯植株接种pvx病毒，观察并对比它们的感染情况，如果转基因表达成功，那么病毒对转基因马铃薯几乎没有影响。
菌株
菌落直径为d
透明圈直径为D
L-1
5.3
18.5
L-2
7.9
19.7
L-3
6.9
10.1
组别
A组
B组
C组（空白对照组）
实验处理
三白草和鱼腥草杂种愈伤组织的蒸馏水提取物
三白草和鱼腥草直接混合后的蒸馏水提取物

每天一次等量灌胃，连续一周，检测各组小鼠的胸腺重量