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生物：四川成华区某校2023-2024学年高二下学期期中考试试题（解析版）
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这是一份生物：四川成华区某校2023-2024学年高二下学期期中考试试题（解析版），共25页。试卷主要包含了单选题等内容，欢迎下载使用。
1. 人工防护林具有防风、固沙及保护农田等作用，对维护区域生态系统稳定具有重要意义。下列叙述正确的是（ ）
A. 防护林通过自组织、自我调节可实现自身结构与功能的协调
B. 防护林建设应选择本地种，遵循了生态工程的循环原理
C. 防护林建成后，若失去人类的维护将会发生初生演替
D. 防护林的防风、固沙及保护农田的作用体现了生物多样性的直接价值
【答案】A
【分析】生物多样性的价值包括直接价值（食用、药用、工业用、旅游观赏、科研、文学艺术等）、间接价值（对生态系统起到的调节功能）和潜在价值（目前不清楚）。
【详解】A、防护林通过自组织、自我调节可实现自身结构与功能的协调，A正确；
B、防护林建设应选择本地种，遵循了生态工程的协调原理，B错误；
C、防护林建成后，若失去人类的维护将会发生次生演替，C错误；
D、防护林的防风、固沙及保护农田的作用体现了生物多样性的间接价值，D错误。
故选A。
2. “一粥一饭，当思来之不易；半丝半缕，恒念物力维艰”体现了日常生活中减少生态足迹的理念，下列选项中都能减少生态足迹的是（ ）
①光盘行动②自驾旅游③高效农业④桑基鱼塘⑤一次性餐具使用⑥秸秆焚烧
A. ①③④B. ①④⑥C. ②③⑤D. ②⑤⑥
【答案】A
【分析】生态足迹：（1）概念:在现有技术条件下，维持某一人口单位生存所需的生产资源和吸纳废物的土地及水域的面积。
（2）意义:生态足迹的值越大,代表人类所需的资源越多,对生态和环境的影响就越大。
（3）特点:生态足迹的大小与人类的生活方式有关。生活方式不同,生态足迹的大小可能不同。
【详解】①光盘行动可以避免食物浪费，能够减少生态足迹，①正确；
②自驾旅游会增大生态足迹，②错误；
③④高效农业、桑基鱼塘，能够合理利用资源，提高能量利用率，减少生态足迹，③④正确；
⑤一次性餐具使用，会造成木材浪费，会增大生态足迹，⑤错误；
⑥秸秆焚烧，使秸秆中的能量不能合理利用，造成浪费且空气污染，会增大生态足迹，⑥错误。
综上可知，①③④正确。
故选A。
3. 下列关于微生物的培养与计数的描述正确的是（ ）
①分离分解尿素的细菌要使用以尿素为唯一氮源的选择培养基
②对微生物计数可以使用平板划线法和稀释涂布平板法接种微生物
③纤维素分解菌鉴定时，在培养基中加入酚红指示剂，如果指示剂变红则能初步鉴定
④在某一浓度下涂布三个平板，若三个平板统计的菌落数差别较大，则需重新进行实验
⑤进行微生物培养时要每隔24h统计一次菌落的数目
⑥获得菌落数目为30~300的平板就说明实验操作成功
A. ①④⑤B. ②③⑥C. ②④⑤D. ③⑤⑥
【答案】A
【分析】稀释涂布平板法：稀释涂布平板法除了可以用于分离微生物外，也常用来统计样品中活菌的数目。当样品的稀释度足够高时培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测样品大约含有多少活菌。
【详解】①分离分解尿素的细菌，要使用以尿素为唯一氮源的选择培养基，进行筛选，①正确；
②对微生物计数可以使用稀释涂布平板法接种微生物，平板划线法无法计数，②错误；
③纤维素分解菌鉴定时，在培养基中加入刚果红染色剂，而不是酚红指示剂，③错误；
④在某一浓度下涂布三个平板，若三个平板统计的菌落数差别较大，则说明实验结果有误，需重新进行实验，④正确；
⑤进行微生物培养时要每隔24h统计一次菌落的数目，以确定培养情况，⑤正确；
⑥获得2个或2个以上菌落数目为30-300的平板，才说明实验操作成功，⑥错误；
综上所述，A正确，BCD错误。
故选A。
4. 金黄色葡萄球菌是一种病原菌，它可耐受质量分数为7.5%的NaCl溶液。金黄色葡萄球菌在添加适量血液的血平板上生长时，可破坏菌落周围的红细胞，使其褪色。为检测鲜牛奶中是否存在金黄色葡萄球菌，科研人员设计了如图所示的流程。下列说法错误的是（ ）
A. 振荡培养时应选用含质量分数为7.5%NaCl溶液的鉴别培养基
B. 振荡培养可使微生物与营养物质充分接触，提高培养液中的氧气含量
C. 若血平板中菌落周围出现透明圈，则初步说明鲜牛奶中存在金黄色葡萄球菌
D. 为使检测更严谨，应设置加灭菌的鲜牛奶但其他操作均与图示相同的对照组
【答案】A
【分析】1、培养基的营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
2、微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
【详解】A、振荡培养时应选用含质量分数为7.5%NaCl溶液的选择培养基，从而将金黄色葡萄球菌筛选出来，A错误；
B、振荡培养可使微生物与营养物质充分接触，且能提高培养液中的氧气含量，因而有利于微生物的繁殖，B正确；
C、若血平板中菌落周围出现透明圈，则初步说明鲜牛奶中存在金黄色葡萄球菌，这是因为金黄色葡萄球菌可破坏菌落周围的红细胞，使其褪色，C正确；
D、为使检测更严谨，应设置加灭菌的鲜牛奶作为空白对照，但其他操作均与图示相同，进而增强实验结果的说服力，D正确。
故选A。
5. 我国传统文化中记载了很多生物学知识。《小雅·信南山》中有“中田有庐，疆場有瓜。是剥是范，献之黄祖”的诗句，其中的“范”的本义指腌菜。北魏的《齐民要术》详细介绍了我们的祖先用白菜（古称“菘”）等原料腌渍酸菜的多种方法。下列说法正确的是（ ）
A. 泡菜中含有亚硝酸盐，而绿色食品中因不含有亚硝酸盐可以放心食用
B. 为了保证泡菜坛内的无氧环境，腌制时应将泡菜坛装满
C. 将切好的新鲜蔬菜、香辛料和冷却好的盐水同时放入泡菜坛中
D. 腌制过程中泡菜坛内液体表面可能出现一层由酵母菌繁殖形成的白膜
【答案】D
【分析】制作泡菜时要用到乳酸菌，乳酸菌是一种厌氧菌，在无氧的条件下，乳酸菌发酵产生乳酸，使得菜呈现一种特殊的风味，还不改变菜的品质。因此泡菜制作的原理是需利用乳酸菌在无氧条件下发酵形成乳酸，然后制作成泡菜。
【详解】A、泡菜中含有亚硝酸盐，而绿色食品中含有亚硝酸盐相对较少，而不是不含有，A错误；
B、制作泡菜所需要的微生物为乳酸菌，为厌氧菌，为保证泡菜发酵过程中的无氧环境，在装坛发酵前后需要检泡菜坛有无裂纹和砂眼，并对泡菜坛进行用水密封坛口处理，制作时应装至八成满即可，B错误；
C、将切好的新鲜蔬菜、香辛料分层放入泡菜坛中，而后将冷却好的盐水缓缓倒入坛中，使盐水没过全部菜料，C错误；
D、由于酵母菌为兼性厌氧型微生物，因此腌制过程中泡菜坛内液体表面可能出现一层由酵母菌繁殖形成的白膜，D正确。
故选D。
6. 利用微生物发酵制作酱油在我国具有悠久的历史。下图为某企业通过发酵制作酱油的流程图。下列相关叙述错误的是（ ）
A. 米曲霉发酵过程中，添加小麦主要是为米曲霉的生长提供氮源
B. 米曲霉发酵过程中，通常会大量分泌制作酱油过程所需的酶类
C. 发酵池发酵阶段，添加的乳酸菌和酵母菌在细胞结构上存在明显不同
D. 发酵池发酵阶段，添加食盐是抑制发酵过程杂菌污染和繁殖重要措施
【答案】A
【分析】微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。对异养微生物来说，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作为营养要素成分时并不是起单一方面的作用。
【详解】A、小麦的主要成分为淀粉，主要是为米曲霉的生长提供碳源，A错误；
B、米曲霉发酵过程中，通常会大量分泌制作酱油过程所需的酶类，从而将大豆、小麦、麦麸等物质中的大分子有机物分解，B正确；
C、乳酸菌为原核生物，酵母菌为真核生物，原核生物的细胞结构中不含核膜包被的细胞核，真核生物的细胞结构中含有核膜包被的细胞核，C正确；
D、食盐具有杀菌作用，发酵池发酵阶段，添加食盐是抑制发酵过程杂菌污染和繁殖重要措施，D正确。
故选A。
7. 下图为培育甘蔗脱毒苗的两条途径，研究发现经②过程获得的幼苗脱毒效果更好。下列叙述正确的是
A. 带叶原基的芽与植物体其他组织中的病毒含量相同
B. 可推测②过程的温度处理有利于组织中的病毒失去活性
C. 过程③、④均属于再分化，所以培养基A和B各成分含量相同
D. 图中获得的脱毒苗与原甘蔗苗相比细胞核遗传物质发生了改变
【答案】B
【分析】分析题图：取芽进行培养是因为芽具有较高的分裂和分化能力，经过热水处理脱毒效果好与阻碍病毒进入有一定的关系，图中③和④为再分化过程。
【详解】A、带叶原基的芽几乎不含病毒，故与植物体其他组织中的病毒含量不同，A错误；
B、经过热水处理脱毒效果好与阻碍病毒进入有关，其作用是使组织中的病毒在图中处理温度下部分或全部失活，B正确；
C、过程③、④所用培养基中生长素和细胞分裂素的含量和比例不同，C错误；
D、上图中脱毒苗的培育过程采用了植物组织培养技术，其体现了植物细胞的全能性，遗传物质不会改变，D错误。
故选B。
8. 乳腺癌被称为“粉红杀手”，其发病率位居女性恶性肿瘤的首位。全新抗体—药物偶联物（ADC）ARX788在中国进行的一项实验达到主要研究终点。HER2蛋白是人类表皮生长因子受体，HER2蛋白过量表达会导致细胞功能紊乱，常与肿瘤的发生发展密切相关。乳腺癌细胞上的HER2蛋白是正常组织中的100倍以上，在单位细胞中的拷贝数接近200万，使其成为理想的肿瘤治疗靶标，可显著改善晚期HER2阳性乳腺癌生存期。下图为ADC的一种作用机制。下列说法错误的是（ ）
A. 通过接头将抗HER2抗体与细胞毒素结合，制备出ADC
B. 溶酶体裂解后释放的药物促使肿瘤细胞非程序性死亡
C. 单克隆抗体除了在ADC中的应用外，还用于疾病的诊断和病原体鉴定
D. ADC在临床应用上的优势是细胞毒素仅杀伤肿瘤细胞，对正常细胞影响小
【答案】B
【分析】据图分析，抗体上带有细胞毒素，抗体与靶细胞膜上的特异性受体结合通过胞吞的方式把细胞毒素一并带进靶细胞，引起靶细胞溶酶体膜的破裂，最后导致细胞凋亡。
【详解】A、由图可知，抗HER2抗体通过接头与细胞毒素结合形成抗体—药物偶联物（ADC），A正确；
B、溶酶体裂解后释放的药物促使肿瘤细胞死亡是正常的生理过程，属于细胞凋亡，是细胞的程序性死亡，B错误；
C、单克隆抗体最广泛的用途是用作体外诊断试剂，它在多种人类疾病及动植物病害的诊断和病原体鉴定是发挥重要的作用，C正确；
D、单克隆抗体具有导向作用，能将药物定向带到肿瘤细胞所在位置，在原位杀死肿瘤细胞，既不损伤正常细胞，又减少用药剂量，D正确。
故选B。
9. 两种远缘植物的细胞融合后会导致一方的染色体被排出。若其中一个细胞的染色体在融合前由于某种原因断裂，形成的染色体片段在细胞融合后可能不会被全部排出，未排出的染色体片段可以整合到另一个细胞的染色体上而留存在杂种细胞中。依据该原理，将普通小麦与耐盐性强的中间偃麦草进行体细胞杂交获得了耐盐小麦新品种，过程如下图所示。下列说法错误的是（ ）
A. 过程①需使用纤维素酶和果胶酶处理细胞
B. 过程②的目的是使中间偃麦草的染色体断裂
C. 过程③中常用灭活的病毒诱导原生质体融合
D. 耐盐小麦的染色体上整合了中间偃麦草的染色体片段
【答案】C
【分析】从图中看出①是去掉植物细胞壁，②是用紫外线诱导染色体变异，③融合形成杂种细胞。
【详解】A、过程1是获得植物细胞原生质体，需要用纤维素酶和果胶酶将细胞壁分解，A正确；
B、根据题干信息“将其中一个细胞的染色体在融合前断裂，形成的染色体片段在细胞融合后可能不会被全部排出，未排出的染色体片段可以整合到另一个细胞的染色体上而留存在杂种细胞中，将普通小麦与耐盐性强的中间偃麦草进行体细胞杂交获得了耐盐小麦新品种，”故过程②通过紫外线照射是使中间偃麦草的染色体断裂，B正确；
C、灭活的病毒诱导是动物细胞融合特有的方法，诱导植物原生质体融合常用物理法、化学法，C错误；
D、实验最终将不抗盐的普通小麦和抗盐的偃麦草整合形成耐盐小麦，说明耐盐小麦染色体上整合了中间偃麦草的染色体片段，D正确。
故选C。
10. 动物细胞培养是动物细胞工程的基础，人造皮肤的构建、动物分泌蛋白的规模化生产都离不开动物细胞培养。2023年春季，我国多地爆发了甲型H1N1流感，利用动物细胞培养技术快速生产流感疫苗逐渐成为一种有吸引力的选择。下列说法正确的是（ ）
A. 用胰蛋白酶或胃蛋白酶处理剪碎的动物组织，可使其分散成单个细胞
B. 用培养液培养的甲型H1N1流感病毒对其进行分析，进而加快疫苗的研制
C. 通常将动物组织处理后在培养瓶中的初次培养称为原代培养
D. 在细胞传代培养过程中，都需要重新用胰蛋白酶等处理，使之分散成单个细胞
【答案】C
【分析】动物细胞培养的流程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。
【详解】A、处理动物组织应用胰蛋白酶或者胶原蛋白酶，A错误；
B、甲型H1N1流感病毒营寄生，应用活细胞培养，B错误；
C、原代培养指的是经过剪碎、酶处理后进行的初次培养，C正确；
D、在细胞传代培养过程中，对于贴壁细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，使之分散成单个细胞，而悬浮细胞无需用酶处理，D错误。
故选C。
11. 下列关于细胞工程的叙述，正确的是（ ）
A. 电激可诱导植物原生质体融合，不能诱导动物细胞融合
B. 去除植物细胞壁用酶处理，将动物组织分散成单个细胞不需酶处理
C. 小鼠骨髓瘤细胞和经抗原免疫的B淋巴细胞融合后培养可制备单克隆抗体
D. 动植物细胞培养都需要经过脱分化处理
【答案】C
【分析】据题文和选项的描述可知，该题考查学生对植物体细胞杂交、动物细胞培养及其融合、植物细胞培养、生产单克隆抗体等相关知识的识记和理解能力。
【详解】电激既能诱导植物原生质体融合，也能诱导动物细胞融合，A错误；去除植物细胞壁需要用纤维素酶和果胶酶处理，将动物组织分散成单个细胞需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理，B错误；小鼠骨髓瘤细胞和经抗原免疫的B淋巴细胞融合后培养可制备单克隆抗体，C正确；植物细胞培养需要经过脱分化处理，动物细胞培养不需要经过脱分化处理，D错误。
12. 无论是植物细胞，还是动物细胞，都可以利用一定的方法诱导融合，可用模型图表示细胞融合技术的一些过程，有关叙述错误的是
A. 若该过程表示植物原生质体的融合，则甲、乙细胞可用酶解法获取
B. 若该过程表示动物细胞融合，可用灭活的病毒诱导
C. 若该过程表示制备单克隆抗体，则丙细胞是杂交瘤细胞
D. 以上三个过程体现了细胞的全能性
【答案】D
【分析】比较动、植物细胞融合：
【详解】A、植物细胞须先用酶除去细胞壁，制备原生质体，再诱导细胞融合，A正确；B、诱导动物细胞融合可以用灭活的病毒，B正确；
C、制备单克隆抗体过程中，丙是由浆细胞和骨髓瘤细胞杂交形成的杂交瘤细胞，其既能无限增殖，又能产生特异性抗体，C正确；
D、植物体细胞杂交技术体现了植物细胞的全能性，而其他两个例子都没有培养到个体，都不能体现细胞的全能性，D错误。
故选D。
13. 如图是某动物细胞培养液中活细胞和死亡细胞密度统计结果，叙述错误的是（ ）
A. 实验中要控制胰蛋白酶溶液浓度和处理时间，以免损伤细胞
B. 培养液中应适当加入青霉素、链霉素等抗生素，以避免杂菌污染
C. 曲线bc段变化的主要原因是培养液中营养物质不足及有害代谢产物积累
D. 培养至第6天时，新产生的细胞数等于死亡细胞数
【答案】D
【分析】分析曲线图可知，ab段表示活细胞密度增加，bc段表示活细胞密度减少；培养0～8天时，死细胞密度增加。培养第6天时，活细胞数等于死亡细胞数。
【详解】A、实验中贴壁细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，使之分散成单个细胞，然后再用离心法收集，要控制胰蛋白酶溶液浓度和处理时间，以免损伤细胞，A正确；
B、培养液中应适当加入青霉素、链霉素等抗生素，以避免培养过程中杂菌污染，B正确；
C、曲线bc段表示活细胞密度减少而死细胞密度增加，产生的主要原因是培养液中营养物质不足及有害代谢产物积累等，C正确；
D、图中可以看出培养第6天时，活细胞数等于死亡细胞数，D错误
故选D。
14. 为研制抗病毒A的单克隆抗体，某同学以小鼠甲为实验材料设计了图所示实验流程。下列叙述错误的是：（ ）
A. 筛选1和2所采用的培养基成分不同
B. 筛选1所采用的培养基只有杂交瘤细胞能够生存
C. 筛选2是为筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞
D. 筛选1、2是为分别筛选出B淋巴细胞、骨髓瘤细胞
【答案】D
【分析】单克隆抗体制备过程：（1）制备产生特异性抗体的B淋巴细胞：向免疫小鼠体内注射特定的抗原，然后从小鼠脾内获得相应的B淋巴细胞。（2）获得杂交瘤细胞。①将鼠的骨髓瘤细胞与脾细胞中形成的B淋巴细胞融合；②用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞，该杂种细胞既能够增殖又能产生抗体。
【详解】AD、图中筛选1所采用的培养基属于选择培养基，目的是筛选出由B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合的杂交瘤细胞，图中筛选2含多次筛选得到能产生单克隆抗体的杂交瘤细胞，故两种培养基成分不同，A正确、D错误；
B、筛选1所用培养基为选择培养基，在该培养基上只有杂交瘤细胞能够生存，B正确；
C、图中筛选2含多次筛选得到能产生单克隆抗体的杂交瘤细胞，筛选所依据的基本原理是抗体-抗原特异性结合，C正确。
故选D。
15. 杜泊羊以其生长速度快、肉质好等优点，被称为“钻石级”肉用绵羊。科研工作者通过胚胎工程快速繁殖杜泊羊的流程如下图所示，相关叙述正确的是（ ）
A. 为了获得更多的卵母细胞，需用雌激素对雌性杜泊羊进行处理
B. 从卵巢中采集的卵母细胞可直接与获能的精子进行体外受精
C. 为避免代孕绵羊对植入的胚胎产生排斥反应，应注射免疫抑制剂
D. 为了进一步扩大繁殖规模，可通过胚胎分割技术获得同卵双胎或多胎
【答案】D
【分析】胚胎分割：借助显微操作技术或徒手操作方法切割早期胚胎成二、四等多等份再移植给受体母畜，从而获得同卵双胎或多胎的生物学新技术。
【详解】A、胚胎工程中用促性腺激素来促使雌性个体超数排卵，A错误；
B、从卵巢中采集的卵母细胞为初级卵母细胞，需要培养至减数第二次分裂中期才能与获能的精子进行受精，B错误；
C、胚胎学原理中母体对外来胚胎没有免疫排斥反应，故不需要注射免疫抑制剂，C错误；
D、胚胎分割技术可以获得同卵双胎或同卵多胎，增大了胚胎的数量，进一步扩大了繁殖规模，D正确。
故选D。
16. 图中a、b、c、d表示生物工程的相关技术，①②③分别表示应用a、b、c技术获得的生物个体。下列推测错误的是（ ）
A. 若a是核移植技术，则①的产生体现动物细胞核具有全能性
B. 若b是体外受精技术，则②的发育都在体外进行
C. 若c是胚胎分割技术，则③的产生方式属于无性繁殖
D. d技术实质是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移
【答案】B
【分析】1、胚胎移植是指将雌性动物的早期胚胎，或者通过体外受精及其它方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的其它雌性动物的体内，使之继续发育为新个体的技术。
2、胚胎分割：是指采用机械方法将早期胚胎切割2等份、4等份等，经移植获得同卵双胎或多胎的技术。
【详解】A、动物细胞通过核移植技术获得动物个体能证明动物细胞的细胞核具有全能性，A正确；
B、体外受精是将体外获得的胚胎移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物的体内，使之继续发育为新个体，所以不全是在体外进行，B错误；
C、胚胎分割技术是将一个囊胚或者桑椹胚分割成多分获得多个后代个体，属于无性繁殖系，C正确；
D、d是胚胎移植技术，实质是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移，D正确。
故选B。
17. 小鼠胚胎干细胞经定向诱导可获得多种具有不同功能的细胞，制备流程如图所示。下列相关叙述错误的是（ ）
A. 用胰蛋白酶处理a处的细胞后可获得分散的胚胎干细胞
B. 欲提高胚胎的利用率，可用胚胎分割技术将a处细胞团均等分割
C. 为获得更多的囊胚，采用促性腺激素注射促进雄鼠产生更多的精子
D. a处的细胞与b处的细胞的核基因相同，但mRNA有差异
【答案】C
【分析】分析题图：图中a为内细胞团细胞，b为滋养层细胞，其中内细胞团细胞具有发育的全能性，属于胚胎干细胞。
【详解】A、用胰蛋白酶处理a内细胞团处的细胞后可获得分散的胚胎干细胞，A正确；
B、欲提高胚胎的利用率，可用胚胎分割技术，注意一定将内细胞团均等分割，B正确；
C、为获得更多的囊胚，采用激素（促性腺激素）注射促进雌鼠产生更多的卵母细胞（超数排卵），C错误；
D、a为内细胞团细胞，b为滋养层细胞，a处的细胞与b处的细胞都是由受精卵分裂产生的，含有的基因相同，不同类型的细胞是基因选择性表达的结果，它们的mRNA有差异，D正确。
故选C。
18. “黑寡妇”蜘蛛吐出的丝强过钢丝，用其吐出的丝织成的布比制造防弹背心所用纤维的强度高很多。科学家把“黑寡妇”蜘蛛体内蜘蛛丝蛋白基因，导入到山羊细胞内，培育出转基因“蜘蛛羊”乳腺生物反应器，获得了坚韧程度极强的蜘蛛丝蛋白，取名为“生物钢”，操作过程如下。下列说法错误的是（ ）
A. 在构建基因表达载体时，要在蜘蛛丝蛋白基因序列上游加上能在乳腺中特异性表达的基因的启动子
B. 通过显微注射的方法将含有蜘蛛丝蛋白基因的表达载体导入山羊的受精卵中，进而发育成“蜘蛛羊”
C. “蜘蛛羊”乳腺生物反应器生产“生物钢”会造成环境污染
D. 乳腺生物反应器具有产量高、成本低、产品质量好和易提取等优点
【答案】C
【分析】基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。（4）目的基因的检测与鉴定。
【详解】A、启动子具有特异性，在构建基因表达载体时，要在蜘蛛丝蛋白基因序列上游加上能在乳腺中特异性表达的基因的启动子，A正确；
B、受精卵的全能性较高，通过显微注射的方法将含有蜘蛛丝蛋白基因的表达载体导入山羊的受精卵中，进而发育成“蜘蛛羊”，B正确；
C、“蜘蛛羊”乳腺生物反应器生产的“生物钢”，可以被生物降解，不会造成环境污染，C错误；
D、乳腺生物反应器具有产量高、成本低、产品质量好和易提取等优点，D正确。
故选C。
19. PCR技术在生物工程中应用广泛，PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定。下列有关叙述错误的是（ ）
A. PCR过程中用到了缓冲液，缓冲液中一般要添加Mg2+用于激活DNA聚合酶
B. PCR反应体系中须加入耐高温的DNA聚合酶，该酶可在延伸过程起作用
C. 若采用PCR技术对一个双链目的基因进行扩增，则第n代复制共需要引物2n个
D. 限制酶切割质粒前后，质粒的长度不变，故无法通过电泳检测质粒是否被切开
【答案】D
【分析】利用PCR可以在体外进行DNA片段的扩增。PCR利用了DNA的热变性原理，通过调节温度来控制DNA双链的解聚与结合。PCR仪实质上就是一台能够自动调控温度的仪器。一次PCR一般要经历30次循环。
【详解】A、PCR过程中用到了缓冲液，缓冲液中一般要添加Mg2+用于激活DNA聚合酶，A正确；
B、PCR反应体系中须加入耐高温的DNA聚合酶，该酶主要在延伸过程起作用，B正确；
C、PCR技术大量扩增目的基因时，第n次复制形成2n-1个DNA，合成一个DNA分子需要两个引物，因此需要的引物数目为2n-1×2=2n，C正确；
D、限制酶切割质粒前后，质粒的长度不变，但质粒可能被切成多个DNA片段，相对分子质量彼此不同，因而可通过电泳检测，D错误。
故选D。
20. 赖氨酸是人类的必需氨基酸，玉米中的赖氨酸含量很低，且在加工过程中易被破坏而缺乏。为提高玉米中赖氨酸的含量，若将天冬氨酸激酶中第352位的苏氨酸变为异亮氨酸，将二氢吡啶二羧酸合成酶中第104位的天冬酰胺变为异亮氨酸，可以使玉米种子中游离赖氨酸含量提高2倍。下列说法错误的是（ ）
A. 蛋白质工程实质是通过改变基因的碱基排列顺序而改变蛋白质的结构
B. 蛋白质工程是分子水平的操作，其过程无需构建基因表达载体
C. 蛋白质工程理论上既能改造现有蛋白质，也能制造新的蛋白质
D. 对基因的改造会经常用到基因的定点突变技术来进行碱基的替换、增添等
【答案】B
【分析】1、蛋白质工程是指以蛋白质的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行基因改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需要；蛋白质工程的实质：定向改造或生产人类所需蛋白质，生产自然界没有的蛋白质；
2、蛋白质工程的基本原理：它可以根据人的需求来设计蛋白质的结构。蛋白质工程的基本途径是：根据预期的蛋白质功能设计预期的蛋白质结构，推测应有的氨基酸序列，推测出相对应的脱氧核苷酸序列或合成新的基因，再经表达过程产生预期蛋白质。
【详解】A、蛋白质工程是通过基因修饰或基因合成，是通过改变基因的碱基排列顺序而改变蛋白质的结构，A正确；
B、基因表达载体的构建是基因工程的核心，基因工程是蛋白质工程的基础，故蛋白质工程都需要构建基因表达载体，B错误；
C、蛋白质工程是通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行基因改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需要，C正确；
D、对蛋白质的改造是指通过基因工程中的定点诱变技术来进行碱基的替换、增添等，有目的改造蛋白质分子中某活性部位的1个或几个氨基酸残基，以改善蛋白质的性质和功能，D正确。
故选B。
二、非选择题：本题共6小题，共60分。
21. 北京传统小吃“豆汁”是一种以绿豆为原料，经过一系列制作工艺流程（如下图）得到的一种以酸味为主、掺杂着些许臭味的糊状流体食品。混浆操作通常是将老浆直接倒入绿豆乳中，混合浆的沉淀与酸化过程实际属于乳酸发酵，其主要产酸微生物为乳酸菌。某研究小组测定了豆汁制作过程中部分化学成分含量变化的有关数据（如下表）。回答下列问题：
（1）混合浆发酵时所需的乳酸菌主要来自___。乳酸发酵过程中，能为乳酸菌同时提供碳源和能源的物质主要是___。
（2）欲测定混合浆中乳酸菌的含量多少，研究小组可采用的接种方法是___（填“平板划线法”或“稀释涂布平板法”），该方法测得的结果通常比实际值___（填“更高”、“更低”或“相同”），原因是___。
（3）分析表中数据，酸浆I中的可溶性蛋白含量比混合浆低得多，推测其原因是___。
（4）为了筛选出产酸能力强的乳酸菌菌种，研究小组将不同稀释倍数的酸豆汁液接种到MRS固体培养基（添加了质量分数1.5%碳酸钙，遇酸发生反应会出现透明圈）上，在适宜条件下培养一段时间后，应挑取___的菌落进一步培养筛选。
（5）为了评估经传统工艺制得的豆汁安全性，研究小组又将不同稀释倍数的豆汁接种到所需培养基上培养，待长出菌落后，可根据___判断是否含有致病菌。
【答案】（1）①. 老浆 ②. （绿豆乳中的）糖类
（2）①. 稀释涂布平板法 ②. 更低 ③. 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落
（3）乳酸菌发酵产生的乳酸使pH值下降，导致可溶性蛋白质变性沉淀；（乳酸菌分泌的）蛋白酶分解了部分可溶性蛋白质
（4）透明圈较大 （5）菌落的形状、隆起程度和颜色等特征
【分析】1、微生物在琼脂固体培养基表面或内部生长，可以形成肉眼可见的菌落。
2、稀释涂布平板法除可以用于分离微生物外，也常用来统计样品中活菌的数目。该方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。
3、传统发酵食品的制作离不开各种各样的微生物。乳酸 菌是厌氧细菌，在无氧的情况下能将葡萄糖分解成乳酸，可用于乳制品的发酵、泡菜的腌制等。乳 酸菌种类很多，在自然界中分布广泛，空气、土壤、植物 体表、人或动物的肠道内都有乳酸菌分布。常见的乳酸菌 有乳酸链球菌和乳酸杆菌传统发酵食品的制作离不开各种各样的微生物。乳酸 菌是厌氧细菌，在无氧的情况下能将葡萄糖分解成乳酸，可用于乳制品的发酵、泡菜的腌制等。乳 酸菌种类很多，在自然界中分布广泛，空气、土壤、植物 体表、人或动物的肠道内都有乳酸菌分布。常见的乳酸菌有乳酸链球菌和乳酸杆菌。
（1）根据题干信息：混浆操作通常是将老浆直接倒入绿豆乳中，则混合浆发酵时所需的乳酸菌主要来自老浆；糖类是细胞生命活动的重要能源物质，乳酸发酵过程中，（绿豆乳中的）糖类能为乳酸菌同时提供碳源和能源的物质。
（2）稀释涂布平板法除可以用于分离微生物外，也常用来统计样品中活菌的数目。欲测定混合浆中乳酸菌的含量多少，研究小组可采用的接种方法是稀释涂布平板法。稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌的实际数目更低，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。
（3）由于乳酸菌发酵产生的乳酸使pH值下降，导致可溶性蛋白质变性沉淀，为此酸浆I中的可溶性蛋白含量比混合浆低得多。
（4）题干信息：碳酸钙遇酸发生反应会出现透明圈，而产酸能力强的乳酸菌，则透明圈越大，故研究小组将不同稀释倍数的酸豆汁液接种到MRS固体培养基（添加了质量分数1.5%碳酸钙，遇酸发生反应会出现透明圈）上，在适宜条件下培养一段时间后，应挑取透明圈较大的菌落进一步培养筛选。
（5）微生物在琼脂固体培养基表 面或内部生长，可以形成肉眼可见的菌落，不同微生物，菌落的性状、颜色等具有差异；故为了评估经传统工艺制得的豆汁安全性，研究小组又将不同稀释倍数的豆汁接种到所需培养基上培养，待长出菌落后，可根据菌落的形状、隆起程度和颜色等特征判断是否含有致病菌。
22. 近年来，水环境中发现的不同程度的抗生素残留，不仅威胁水生生物的生存，还会损害微生物的生态平衡。氧氟沙星（OFL）（C18H2OFN3O4）是一种人工合成的广谱抗菌的氟喹诺酮类药物，某实验小组成功地从废水环境样品中分离得到能降解OFL的菌株A.筛选分离的操作过程如图所示。回答下列问题：
（1）利用细菌处理去除废水中的抗生素，这种方法的不足之处是_______，因此需要筛选抗生素优势降解菌株。
（2）筛选能够降解OFL的菌株时，富集培养基中需要加入_______作为唯一碳源或氮源。用于培养菌株A的固体培养基含有水、蛋白胨、酵母提取物和琼脂等成分，其中蛋白胨主要为菌株A提供碳源、氮源和_______。
（3）过程Ⅱ中的总稀释次数为8次，在过程Ⅲ中，可以每隔24h统计一次菌落的数目，选取_______时的记录作为结果，三个培养基中长出的菌落数量分别是145、163、154，故推测A中1mL培养液中细菌的数量为_______个/mL。
（4）该实验小组欲进一步探究初始OFL浓度对菌株A降解OFL能力的影响，请帮助其设计实验并写出实验思路________。
【答案】（1）抗生素会抑制细菌的生长繁殖
（2）①. OFL ②. 维生素
（3）①. 菌落数目稳定 ②. 1.54×1011
（4）设置含一系列的OFL浓度的培养基，分别接种等量的菌株A，检测OFL的降解程度
【分析】1、稀释涂布平板法：将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在，再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。
2、平板划线法：把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞，用接种环在平板表面上作多次由点到线的划线稀释而获得较多独立分布的单个细胞，并让其成长为单菌落的方法。
（1）抗生素会抑制细菌的生长繁殖，需要筛选抗生素优势降解菌株来处理废水中的抗生素。
（2）筛选能够降解OFL的菌株时，富集培养基中需要加入OFL来作为唯一碳源或氮源；蛋白胨是将肉、酪素或明胶用酸或蛋白酶水解后干燥而成的外观呈淡黄色的粉剂，主要为菌株A提供碳源、氮源和维生素。
（3）据图可知，培养皿中菌落均匀分布，可知利用的接种方法是稀释涂布平板法，此方法用于统计样品中活菌的数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果；A中细菌的数量为（145+163+154）÷3×108÷0.1=1.54×1011个·mL⁻¹。
（4）欲进一步探究初始OFL浓度对菌株A降解OFL能力的影响，自变量是初始OFL浓度，因变量是菌株A的降解效果，因此可设置含一系列的OFL浓度的培养基，分别接种等量的菌株A，检测OFL的降解程度。
23. 科学家将番茄（2N）和马铃薯（4N）利用如图技术得到“番茄——马铃薯”植株。请据图回答下列问题。
（1）从愈伤组织培养到试管苗的过程一般______（填“不需要”或“需要”）提供光照，原因是_____。上图中所示技术的原理是_______和______。
（2）过程Ⅰ使用__________酶去除细胞壁，从而获得有活力的原生质体。c表示______。植物体细胞融合完成的标志是______。
（3）诱导试管f中植株生根过程的培养基中，生长素与细胞分裂素的比值较过程Ⅳ_______（填“高”或“低”），培养基中添加蔗糖的作用_______。
（4）过程Ⅳ和Ⅴ运用的技术还广泛用于细胞产物的工厂化生产，如从红豆杉树皮中分离出具有抗癌活性的紫杉醇。请依据所学知识写出生产紫杉醇的过程图________（用文字和箭头表示）。
【答案】（1）①. 需要 ②. 叶绿素的合成需要光照 ③. 细胞膜具有一定的流动性 ④. 细胞全能性
（2）①. 纤维素酶和果胶 ②. 正在融合的原生质体 ③. 杂种细胞再生出细胞壁
（3）①. 高 ②. 为植物细胞提供能量，调节培养基内的渗透压
（4）豆杉树皮细胞愈伤组织→提取紫杉醇
【分析】分析题图，图示为植物体细胞杂交过程示意图，其中Ⅰ表示去除细胞壁获得原生质体的过程；Ⅱ表示人工诱导原生质体融合的过程；Ⅲ表示再生出新细胞壁的过程；IV表示脱分化过程；V表示再分化过程。
（1）从愈伤组织培养到试管苗的过程一般需要提供光照，因为叶绿素的合成需要光照。上图示技术的名称是植物体细胞杂交技术，体现了细胞膜具有一定的流动性；将杂种细胞培育成杂种植株需要采用植物组织培养技术，其原理是植物细胞具有全能性。
（2）过程Ⅰ使用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，从而获得有活力的原生质体。c表示正在融合的原生质体；植物体细胞融合完成是杂种细胞再生出细胞壁（形成新的细胞壁）。
（3）当生长素与细胞分裂素的浓度比值小于1时，可以促进芽的分化，当该比值大于1时，可以促进根的分化，故诱导 f 中植株生根过程的培养基中生长素与细胞分裂素的比值较过程IV（脱分化）高；培养基中添加蔗糖的作用一是可以为植物提供能量，二是可以维持培养基的渗透压。
（4）利用植物组织培养技术，能将细胞培养成愈伤组织，再大量培养愈伤组织细胞，从中提取紫杉醇，生产过程图为：离体的 红豆杉树皮细胞 愈伤组织→提取紫杉醇 。
24. 犬细小病毒（CPV）主要感染幼犬，传染性极强，死亡率也高。利用小鼠制备抗CPV单克隆抗体的基本流程如图所示。回答下列问题：
（1）制备单克隆抗体依赖的生物技术有______（答出2点）。步骤①中，用灭活的CPV免疫小鼠需要在一定时间内间隔注射3次，其目的是_____。
（2）经过步骤②后获得的是多种类型的杂交细胞，原因是_______。对杂交细胞等用特定的选择培养基进行筛选得到杂交瘤细胞，对杂交瘤细胞进行______，经过多次筛选才能获得足够数量的能分泌抗CPV抗体的细胞。
（3）体外培养杂交瘤细胞后从培养液中提取到抗CPV单克隆抗体。杂交瘤细胞的培养液中有各种营养物质，还需要添加_____以补充细胞生长所需的未知营养物质和防止杂菌污染。与培养大多数动物体细胞不同，骨髓瘤细胞在培养过程中不会出现_____的现象，只要营养等条件适宜即可一直增殖。
（4）对疑似感染CPV的幼犬进行确诊时，可用获得的抗CPV单克隆抗体进行检测，所依据的原理是_____。
【答案】（1）①. 动物细胞培养、动物细胞融合 ②. 加强免疫，刺激小鼠机体产生更多已免疫的B淋巴细胞
（2）①. 细胞融合是随机的 ②. 克隆化培养和抗体检测
（3）①. 血清和抗生素 ②. 接触抑制
（4）抗原抗体特异性结合
【分析】单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。
（1）制备单克隆抗体依赖的生物技术有动物细胞培养和动物细胞融合（诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合）等技术；步骤①中，灭活的CPV属于抗原，用灭活的CPV免疫小鼠，小鼠会产生体液免疫，产生B淋巴细胞，所以用灭活的CPV免疫小鼠需要在一定时间内间隔注射3次，其目的是加强免疫，刺激小鼠机体产生更多已免疫的B淋巴细胞。
（2）步骤②是诱导细胞融合，由于该过程中细胞融合是随机的，故可能得到多种类型的杂交细胞，如可能得到B细胞-B细胞型、骨髓瘤-骨髓瘤细胞型等；最终筛选得到足够数量的能分泌抗CPV抗体的细胞需要经过两次筛选过程，使用特定的选择培养基培养（第一次筛选）得到杂交瘤细胞。对杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测（利用抗原-抗体的特异性结合原理，出现阳性反应的即可），经过多次筛选才能获得足够数量的能分泌抗CPV抗体的细胞。
（3）为补充细胞生长所需的未知营养物质和防止杂菌污染，需要在培养液中添加血清（含有细胞所必须的物质）和抗生素（避免杂菌污染）。与培养大多数动物体细胞不同，骨髓瘤细胞在培养过程中不会出现接触抑制现象，只要营养等条件适宜即可一直增殖。
（4）对疑似感染CPV的幼犬进行确诊时，可用获得的抗CPV单克隆抗体进行抗原—抗体杂交检测，所依据的原理是抗原抗体特异性结合，若出现杂交带，则证明感染。
25. 樟木牛和阿沛甲咂牛原产于青藏高原，是世界珍稀地方黄牛品种。科研人员采集了樟木牛和阿沛甲咂牛的耳组织，建立了成纤维细胞系，利用体细胞核移植技术，制备了早期胚胎，将胚胎移植到代孕母牛中，经过足月的妊娠，获得了8头克隆牛，这是世界首例克隆西藏濒危牛。获得克隆牛的过程如图所示。回答下列问题：
（1）细胞①取自西藏濒危牛的耳组织细胞，这样取材的好处是_______（答出1点）。
（2）卵母细胞采集后要在体外培养到________期，通过_______法使细胞①与去核卵母细胞融合，形成重构胚，再用电刺激、乙醇等方法激活重构胚，使其发育成早期胚胎，其中细胞②的遗传物质来自_______。
（3）胚胎移植技术的实质是______。为一次获得多个具有同种遗传物质的个体，可对_______时期的胚胎进行_______，该操作的注意事项是_______。
（4）克隆本质上是一种无性繁殖，胚胎移植前，需对供、受体犬进行______处理，为供体胚胎移入受体提供相同的生理环境。
【答案】（1）这样的细胞分裂增殖能力强
（2）①. 减数第二次分裂中 ②. 电融合 ③. 细胞①和卵母细胞
（3）①. 早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移，能保持原来的优良性状 ②. 桑葚胚或囊胚 ③. 胚胎分割 ④. 要注意将内细胞团均等分割
（4）同期发情
【分析】胚胎工程是指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术。包括体外受精、胚胎移植、胚胎分割移植、胚胎干细胞培养等技术。胚胎工程的许多技术，实际是在体外条件下，对动物自然受精和早期胚胎发育条件进行的模拟操作。
（1）动物细胞培养的目的是通过亲代细胞的增殖获得大量的子代细胞，所以需要培养的细胞具有较强的分裂能力。
（2）从活体牛的卵巢中吸取的卵母细胞需要在体外培养到减数第二次分裂中期，通过电融合方法可以使细胞①与去核卵母细胞融合，形成重构胚，激活重构胚的方法有电刺激、乙醇、蛋白酶合成抑制剂等方法；细胞②的细胞质遗传物质来自卵母细胞，细胞核遗传物质来自细胞①。
（3）早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移，能保持原来的优良性状，这是胚胎移植技术的实质；用胚胎分割技术，对发育到桑葚胚或囊胚阶段的早期胚胎进行胚胎分割处理，再植入到受体内，可获得遗传物质完全相同的新个体。在操作过程中，要注意将内细胞团均等分割，否则会影响胚胎的恢复和进一步发育。
（4）克隆本质上是一种无性繁殖，胚胎移植前，需对供、受体犬进行同期发情处理，为供体胚胎移入受体提供相同的生理环境。
26. 宫颈癌是一种由HPV病毒（遗传物质是DNA）引发的癌症，至今已鉴定出200多种HPV类型。尤其是HPV16、HPV18，其检出率在宫颈癌中达到99.7%。2023年1月，国家卫生健康委等十个部门联合发布了《加速消除宫颈癌行动计划（2023—2030年）》，提出了“积极推动HPV疫苗接种”的要求。九价HPV疫苗在中国获批用于9-45岁女性，但却一针难求。将HPV16和HPV18两种病毒的衣壳蛋白基因（目的基因）与质粒连接，导入大肠杆菌表达后，就获得了疫苗的有效成分。
（1）在构建基因表达载体时要将HPV16和HPV18两种病毒的衣壳蛋白基因插入_______和_______之间。PCR反应需要在一定的缓冲溶液中才能进行，缓冲溶液一般要添加Mg2+，原因是______。引物的作用是______，引物长度通常为20~30个核苷酸，过短会导致特异性差。
（2）构建基因表达载体的目的是____。
（3）进行基因表达载体构建有两个方案：方案一：只用EcRⅠ酶同时切割质粒和含目的基因的DNA片段；方案二：使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时切割质粒和含目的基因的DNA片段。你认为哪个方案更好？____。原因是_______。
（4）基因表达载体导入大肠杆菌前，需用______处理大肠杆菌，目的是______。
【答案】（1）①. 启动子 ②. 终止子 ③. 耐高温的DNA聚合酶需要Mg2+激活 ④. 使DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸
（2）让目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给下一代，使目的基因能够表达和发挥作用
（3）①. 方案二 ②. 防止目的基因和质粒的自身环化和反向连接等
（4）①. Ca2+ ②. 使大肠杆菌细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态
【分析】基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成；
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等；
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法；
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因——DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA——分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质——抗原—抗体杂交技术；个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
（1）在构建基因表达载体时要将HPV16和HPV18两种病毒的衣壳蛋白基因插入启动子和终止子之间；PCR反应需要在一定的缓冲溶液中才能进行，缓冲溶液一般要添加Mg2+，以激活耐高温的DNA聚合酶；在此过程中，引物的作用是使DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸。
（2）构建基因表达载体的目的是让目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。
（3）方案二更好，原因是：如果用EcRI对外源DNA和质粒进行酶切，因为黏性末端相同，将多个含有目的基因的DNA片段与多个质粒的酶切产物用DNA连接酶进行连接后，两两连接所形成的产物有空质粒，反向连接的质粒，正向连接的质粒三种。为了防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化和反向连接，使用BamHI和HindⅢ两种限制酶同时切割质粒和含目的基因的DNA片段。
（4）基因表达载体导入大肠杆菌前，需用Ca2+处理大肠杆菌，目的是使大肠杆菌细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，可以提高转化效率。
项目
细胞融合原理
细胞融合方法
诱导手段
用途
植物体细胞杂交
细胞膜的流动性，（细胞的全能性）
去除细胞壁后诱导原生质体融合
离心、电刺激、聚乙二醇等试剂诱导
克服远缘杂交不亲和，获得杂种植物
动物细胞融合
细胞膜的流动性
使细胞分散后，诱导细胞融合
离心、电刺激、聚乙二醇、灭活病毒等试剂诱导
制备单克隆抗体的技术之一
浆状样品
可溶性蛋白/（mg/mL）
游离氨基酸/（mg/mL）
蛋白酶/（U/mL）
混合浆
5.60
0.31
1.19
酸浆I
1.4
0.51
0.16
1. 人工防护林具有防风、固沙及保护农田等作用，对维护区域生态系统稳定具有重要意义。下列叙述正确的是（ ）
A. 防护林通过自组织、自我调节可实现自身结构与功能的协调
B. 防护林建设应选择本地种，遵循了生态工程的循环原理
C. 防护林建成后，若失去人类的维护将会发生初生演替
D. 防护林的防风、固沙及保护农田的作用体现了生物多样性的直接价值
【答案】A
【分析】生物多样性的价值包括直接价值（食用、药用、工业用、旅游观赏、科研、文学艺术等）、间接价值（对生态系统起到的调节功能）和潜在价值（目前不清楚）。
【详解】A、防护林通过自组织、自我调节可实现自身结构与功能的协调，A正确；
B、防护林建设应选择本地种，遵循了生态工程的协调原理，B错误；
C、防护林建成后，若失去人类的维护将会发生次生演替，C错误；
D、防护林的防风、固沙及保护农田的作用体现了生物多样性的间接价值，D错误。
故选A。
2. “一粥一饭，当思来之不易；半丝半缕，恒念物力维艰”体现了日常生活中减少生态足迹的理念，下列选项中都能减少生态足迹的是（ ）
①光盘行动②自驾旅游③高效农业④桑基鱼塘⑤一次性餐具使用⑥秸秆焚烧
A. ①③④B. ①④⑥C. ②③⑤D. ②⑤⑥
【答案】A
【分析】生态足迹：（1）概念:在现有技术条件下，维持某一人口单位生存所需的生产资源和吸纳废物的土地及水域的面积。
（2）意义:生态足迹的值越大,代表人类所需的资源越多,对生态和环境的影响就越大。
（3）特点:生态足迹的大小与人类的生活方式有关。生活方式不同,生态足迹的大小可能不同。
【详解】①光盘行动可以避免食物浪费，能够减少生态足迹，①正确；
②自驾旅游会增大生态足迹，②错误；
③④高效农业、桑基鱼塘，能够合理利用资源，提高能量利用率，减少生态足迹，③④正确；
⑤一次性餐具使用，会造成木材浪费，会增大生态足迹，⑤错误；
⑥秸秆焚烧，使秸秆中的能量不能合理利用，造成浪费且空气污染，会增大生态足迹，⑥错误。
综上可知，①③④正确。
故选A。
3. 下列关于微生物的培养与计数的描述正确的是（ ）
①分离分解尿素的细菌要使用以尿素为唯一氮源的选择培养基
②对微生物计数可以使用平板划线法和稀释涂布平板法接种微生物
③纤维素分解菌鉴定时，在培养基中加入酚红指示剂，如果指示剂变红则能初步鉴定
④在某一浓度下涂布三个平板，若三个平板统计的菌落数差别较大，则需重新进行实验
⑤进行微生物培养时要每隔24h统计一次菌落的数目
⑥获得菌落数目为30~300的平板就说明实验操作成功
A. ①④⑤B. ②③⑥C. ②④⑤D. ③⑤⑥
【答案】A
【分析】稀释涂布平板法：稀释涂布平板法除了可以用于分离微生物外，也常用来统计样品中活菌的数目。当样品的稀释度足够高时培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测样品大约含有多少活菌。
【详解】①分离分解尿素的细菌，要使用以尿素为唯一氮源的选择培养基，进行筛选，①正确；
②对微生物计数可以使用稀释涂布平板法接种微生物，平板划线法无法计数，②错误；
③纤维素分解菌鉴定时，在培养基中加入刚果红染色剂，而不是酚红指示剂，③错误；
④在某一浓度下涂布三个平板，若三个平板统计的菌落数差别较大，则说明实验结果有误，需重新进行实验，④正确；
⑤进行微生物培养时要每隔24h统计一次菌落的数目，以确定培养情况，⑤正确；
⑥获得2个或2个以上菌落数目为30-300的平板，才说明实验操作成功，⑥错误；
综上所述，A正确，BCD错误。
故选A。
4. 金黄色葡萄球菌是一种病原菌，它可耐受质量分数为7.5%的NaCl溶液。金黄色葡萄球菌在添加适量血液的血平板上生长时，可破坏菌落周围的红细胞，使其褪色。为检测鲜牛奶中是否存在金黄色葡萄球菌，科研人员设计了如图所示的流程。下列说法错误的是（ ）
A. 振荡培养时应选用含质量分数为7.5%NaCl溶液的鉴别培养基
B. 振荡培养可使微生物与营养物质充分接触，提高培养液中的氧气含量
C. 若血平板中菌落周围出现透明圈，则初步说明鲜牛奶中存在金黄色葡萄球菌
D. 为使检测更严谨，应设置加灭菌的鲜牛奶但其他操作均与图示相同的对照组
【答案】A
【分析】1、培养基的营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
2、微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
【详解】A、振荡培养时应选用含质量分数为7.5%NaCl溶液的选择培养基，从而将金黄色葡萄球菌筛选出来，A错误；
B、振荡培养可使微生物与营养物质充分接触，且能提高培养液中的氧气含量，因而有利于微生物的繁殖，B正确；
C、若血平板中菌落周围出现透明圈，则初步说明鲜牛奶中存在金黄色葡萄球菌，这是因为金黄色葡萄球菌可破坏菌落周围的红细胞，使其褪色，C正确；
D、为使检测更严谨，应设置加灭菌的鲜牛奶作为空白对照，但其他操作均与图示相同，进而增强实验结果的说服力，D正确。
故选A。
5. 我国传统文化中记载了很多生物学知识。《小雅·信南山》中有“中田有庐，疆場有瓜。是剥是范，献之黄祖”的诗句，其中的“范”的本义指腌菜。北魏的《齐民要术》详细介绍了我们的祖先用白菜（古称“菘”）等原料腌渍酸菜的多种方法。下列说法正确的是（ ）
A. 泡菜中含有亚硝酸盐，而绿色食品中因不含有亚硝酸盐可以放心食用
B. 为了保证泡菜坛内的无氧环境，腌制时应将泡菜坛装满
C. 将切好的新鲜蔬菜、香辛料和冷却好的盐水同时放入泡菜坛中
D. 腌制过程中泡菜坛内液体表面可能出现一层由酵母菌繁殖形成的白膜
【答案】D
【分析】制作泡菜时要用到乳酸菌，乳酸菌是一种厌氧菌，在无氧的条件下，乳酸菌发酵产生乳酸，使得菜呈现一种特殊的风味，还不改变菜的品质。因此泡菜制作的原理是需利用乳酸菌在无氧条件下发酵形成乳酸，然后制作成泡菜。
【详解】A、泡菜中含有亚硝酸盐，而绿色食品中含有亚硝酸盐相对较少，而不是不含有，A错误；
B、制作泡菜所需要的微生物为乳酸菌，为厌氧菌，为保证泡菜发酵过程中的无氧环境，在装坛发酵前后需要检泡菜坛有无裂纹和砂眼，并对泡菜坛进行用水密封坛口处理，制作时应装至八成满即可，B错误；
C、将切好的新鲜蔬菜、香辛料分层放入泡菜坛中，而后将冷却好的盐水缓缓倒入坛中，使盐水没过全部菜料，C错误；
D、由于酵母菌为兼性厌氧型微生物，因此腌制过程中泡菜坛内液体表面可能出现一层由酵母菌繁殖形成的白膜，D正确。
故选D。
6. 利用微生物发酵制作酱油在我国具有悠久的历史。下图为某企业通过发酵制作酱油的流程图。下列相关叙述错误的是（ ）
A. 米曲霉发酵过程中，添加小麦主要是为米曲霉的生长提供氮源
B. 米曲霉发酵过程中，通常会大量分泌制作酱油过程所需的酶类
C. 发酵池发酵阶段，添加的乳酸菌和酵母菌在细胞结构上存在明显不同
D. 发酵池发酵阶段，添加食盐是抑制发酵过程杂菌污染和繁殖重要措施
【答案】A
【分析】微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。对异养微生物来说，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作为营养要素成分时并不是起单一方面的作用。
【详解】A、小麦的主要成分为淀粉，主要是为米曲霉的生长提供碳源，A错误；
B、米曲霉发酵过程中，通常会大量分泌制作酱油过程所需的酶类，从而将大豆、小麦、麦麸等物质中的大分子有机物分解，B正确；
C、乳酸菌为原核生物，酵母菌为真核生物，原核生物的细胞结构中不含核膜包被的细胞核，真核生物的细胞结构中含有核膜包被的细胞核，C正确；
D、食盐具有杀菌作用，发酵池发酵阶段，添加食盐是抑制发酵过程杂菌污染和繁殖重要措施，D正确。
故选A。
7. 下图为培育甘蔗脱毒苗的两条途径，研究发现经②过程获得的幼苗脱毒效果更好。下列叙述正确的是
A. 带叶原基的芽与植物体其他组织中的病毒含量相同
B. 可推测②过程的温度处理有利于组织中的病毒失去活性
C. 过程③、④均属于再分化，所以培养基A和B各成分含量相同
D. 图中获得的脱毒苗与原甘蔗苗相比细胞核遗传物质发生了改变
【答案】B
【分析】分析题图：取芽进行培养是因为芽具有较高的分裂和分化能力，经过热水处理脱毒效果好与阻碍病毒进入有一定的关系，图中③和④为再分化过程。
【详解】A、带叶原基的芽几乎不含病毒，故与植物体其他组织中的病毒含量不同，A错误；
B、经过热水处理脱毒效果好与阻碍病毒进入有关，其作用是使组织中的病毒在图中处理温度下部分或全部失活，B正确；
C、过程③、④所用培养基中生长素和细胞分裂素的含量和比例不同，C错误；
D、上图中脱毒苗的培育过程采用了植物组织培养技术，其体现了植物细胞的全能性，遗传物质不会改变，D错误。
故选B。
8. 乳腺癌被称为“粉红杀手”，其发病率位居女性恶性肿瘤的首位。全新抗体—药物偶联物（ADC）ARX788在中国进行的一项实验达到主要研究终点。HER2蛋白是人类表皮生长因子受体，HER2蛋白过量表达会导致细胞功能紊乱，常与肿瘤的发生发展密切相关。乳腺癌细胞上的HER2蛋白是正常组织中的100倍以上，在单位细胞中的拷贝数接近200万，使其成为理想的肿瘤治疗靶标，可显著改善晚期HER2阳性乳腺癌生存期。下图为ADC的一种作用机制。下列说法错误的是（ ）
A. 通过接头将抗HER2抗体与细胞毒素结合，制备出ADC
B. 溶酶体裂解后释放的药物促使肿瘤细胞非程序性死亡
C. 单克隆抗体除了在ADC中的应用外，还用于疾病的诊断和病原体鉴定
D. ADC在临床应用上的优势是细胞毒素仅杀伤肿瘤细胞，对正常细胞影响小
【答案】B
【分析】据图分析，抗体上带有细胞毒素，抗体与靶细胞膜上的特异性受体结合通过胞吞的方式把细胞毒素一并带进靶细胞，引起靶细胞溶酶体膜的破裂，最后导致细胞凋亡。
【详解】A、由图可知，抗HER2抗体通过接头与细胞毒素结合形成抗体—药物偶联物（ADC），A正确；
B、溶酶体裂解后释放的药物促使肿瘤细胞死亡是正常的生理过程，属于细胞凋亡，是细胞的程序性死亡，B错误；
C、单克隆抗体最广泛的用途是用作体外诊断试剂，它在多种人类疾病及动植物病害的诊断和病原体鉴定是发挥重要的作用，C正确；
D、单克隆抗体具有导向作用，能将药物定向带到肿瘤细胞所在位置，在原位杀死肿瘤细胞，既不损伤正常细胞，又减少用药剂量，D正确。
故选B。
9. 两种远缘植物的细胞融合后会导致一方的染色体被排出。若其中一个细胞的染色体在融合前由于某种原因断裂，形成的染色体片段在细胞融合后可能不会被全部排出，未排出的染色体片段可以整合到另一个细胞的染色体上而留存在杂种细胞中。依据该原理，将普通小麦与耐盐性强的中间偃麦草进行体细胞杂交获得了耐盐小麦新品种，过程如下图所示。下列说法错误的是（ ）
A. 过程①需使用纤维素酶和果胶酶处理细胞
B. 过程②的目的是使中间偃麦草的染色体断裂
C. 过程③中常用灭活的病毒诱导原生质体融合
D. 耐盐小麦的染色体上整合了中间偃麦草的染色体片段
【答案】C
【分析】从图中看出①是去掉植物细胞壁，②是用紫外线诱导染色体变异，③融合形成杂种细胞。
【详解】A、过程1是获得植物细胞原生质体，需要用纤维素酶和果胶酶将细胞壁分解，A正确；
B、根据题干信息“将其中一个细胞的染色体在融合前断裂，形成的染色体片段在细胞融合后可能不会被全部排出，未排出的染色体片段可以整合到另一个细胞的染色体上而留存在杂种细胞中，将普通小麦与耐盐性强的中间偃麦草进行体细胞杂交获得了耐盐小麦新品种，”故过程②通过紫外线照射是使中间偃麦草的染色体断裂，B正确；
C、灭活的病毒诱导是动物细胞融合特有的方法，诱导植物原生质体融合常用物理法、化学法，C错误；
D、实验最终将不抗盐的普通小麦和抗盐的偃麦草整合形成耐盐小麦，说明耐盐小麦染色体上整合了中间偃麦草的染色体片段，D正确。
故选C。
10. 动物细胞培养是动物细胞工程的基础，人造皮肤的构建、动物分泌蛋白的规模化生产都离不开动物细胞培养。2023年春季，我国多地爆发了甲型H1N1流感，利用动物细胞培养技术快速生产流感疫苗逐渐成为一种有吸引力的选择。下列说法正确的是（ ）
A. 用胰蛋白酶或胃蛋白酶处理剪碎的动物组织，可使其分散成单个细胞
B. 用培养液培养的甲型H1N1流感病毒对其进行分析，进而加快疫苗的研制
C. 通常将动物组织处理后在培养瓶中的初次培养称为原代培养
D. 在细胞传代培养过程中，都需要重新用胰蛋白酶等处理，使之分散成单个细胞
【答案】C
【分析】动物细胞培养的流程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。
【详解】A、处理动物组织应用胰蛋白酶或者胶原蛋白酶，A错误；
B、甲型H1N1流感病毒营寄生，应用活细胞培养，B错误；
C、原代培养指的是经过剪碎、酶处理后进行的初次培养，C正确；
D、在细胞传代培养过程中，对于贴壁细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，使之分散成单个细胞，而悬浮细胞无需用酶处理，D错误。
故选C。
11. 下列关于细胞工程的叙述，正确的是（ ）
A. 电激可诱导植物原生质体融合，不能诱导动物细胞融合
B. 去除植物细胞壁用酶处理，将动物组织分散成单个细胞不需酶处理
C. 小鼠骨髓瘤细胞和经抗原免疫的B淋巴细胞融合后培养可制备单克隆抗体
D. 动植物细胞培养都需要经过脱分化处理
【答案】C
【分析】据题文和选项的描述可知，该题考查学生对植物体细胞杂交、动物细胞培养及其融合、植物细胞培养、生产单克隆抗体等相关知识的识记和理解能力。
【详解】电激既能诱导植物原生质体融合，也能诱导动物细胞融合，A错误；去除植物细胞壁需要用纤维素酶和果胶酶处理，将动物组织分散成单个细胞需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理，B错误；小鼠骨髓瘤细胞和经抗原免疫的B淋巴细胞融合后培养可制备单克隆抗体，C正确；植物细胞培养需要经过脱分化处理，动物细胞培养不需要经过脱分化处理，D错误。
12. 无论是植物细胞，还是动物细胞，都可以利用一定的方法诱导融合，可用模型图表示细胞融合技术的一些过程，有关叙述错误的是
A. 若该过程表示植物原生质体的融合，则甲、乙细胞可用酶解法获取
B. 若该过程表示动物细胞融合，可用灭活的病毒诱导
C. 若该过程表示制备单克隆抗体，则丙细胞是杂交瘤细胞
D. 以上三个过程体现了细胞的全能性
【答案】D
【分析】比较动、植物细胞融合：
【详解】A、植物细胞须先用酶除去细胞壁，制备原生质体，再诱导细胞融合，A正确；B、诱导动物细胞融合可以用灭活的病毒，B正确；
C、制备单克隆抗体过程中，丙是由浆细胞和骨髓瘤细胞杂交形成的杂交瘤细胞，其既能无限增殖，又能产生特异性抗体，C正确；
D、植物体细胞杂交技术体现了植物细胞的全能性，而其他两个例子都没有培养到个体，都不能体现细胞的全能性，D错误。
故选D。
13. 如图是某动物细胞培养液中活细胞和死亡细胞密度统计结果，叙述错误的是（ ）
A. 实验中要控制胰蛋白酶溶液浓度和处理时间，以免损伤细胞
B. 培养液中应适当加入青霉素、链霉素等抗生素，以避免杂菌污染
C. 曲线bc段变化的主要原因是培养液中营养物质不足及有害代谢产物积累
D. 培养至第6天时，新产生的细胞数等于死亡细胞数
【答案】D
【分析】分析曲线图可知，ab段表示活细胞密度增加，bc段表示活细胞密度减少；培养0～8天时，死细胞密度增加。培养第6天时，活细胞数等于死亡细胞数。
【详解】A、实验中贴壁细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，使之分散成单个细胞，然后再用离心法收集，要控制胰蛋白酶溶液浓度和处理时间，以免损伤细胞，A正确；
B、培养液中应适当加入青霉素、链霉素等抗生素，以避免培养过程中杂菌污染，B正确；
C、曲线bc段表示活细胞密度减少而死细胞密度增加，产生的主要原因是培养液中营养物质不足及有害代谢产物积累等，C正确；
D、图中可以看出培养第6天时，活细胞数等于死亡细胞数，D错误
故选D。
14. 为研制抗病毒A的单克隆抗体，某同学以小鼠甲为实验材料设计了图所示实验流程。下列叙述错误的是：（ ）
A. 筛选1和2所采用的培养基成分不同
B. 筛选1所采用的培养基只有杂交瘤细胞能够生存
C. 筛选2是为筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞
D. 筛选1、2是为分别筛选出B淋巴细胞、骨髓瘤细胞
【答案】D
【分析】单克隆抗体制备过程：（1）制备产生特异性抗体的B淋巴细胞：向免疫小鼠体内注射特定的抗原，然后从小鼠脾内获得相应的B淋巴细胞。（2）获得杂交瘤细胞。①将鼠的骨髓瘤细胞与脾细胞中形成的B淋巴细胞融合；②用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞，该杂种细胞既能够增殖又能产生抗体。
【详解】AD、图中筛选1所采用的培养基属于选择培养基，目的是筛选出由B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合的杂交瘤细胞，图中筛选2含多次筛选得到能产生单克隆抗体的杂交瘤细胞，故两种培养基成分不同，A正确、D错误；
B、筛选1所用培养基为选择培养基，在该培养基上只有杂交瘤细胞能够生存，B正确；
C、图中筛选2含多次筛选得到能产生单克隆抗体的杂交瘤细胞，筛选所依据的基本原理是抗体-抗原特异性结合，C正确。
故选D。
15. 杜泊羊以其生长速度快、肉质好等优点，被称为“钻石级”肉用绵羊。科研工作者通过胚胎工程快速繁殖杜泊羊的流程如下图所示，相关叙述正确的是（ ）
A. 为了获得更多的卵母细胞，需用雌激素对雌性杜泊羊进行处理
B. 从卵巢中采集的卵母细胞可直接与获能的精子进行体外受精
C. 为避免代孕绵羊对植入的胚胎产生排斥反应，应注射免疫抑制剂
D. 为了进一步扩大繁殖规模，可通过胚胎分割技术获得同卵双胎或多胎
【答案】D
【分析】胚胎分割：借助显微操作技术或徒手操作方法切割早期胚胎成二、四等多等份再移植给受体母畜，从而获得同卵双胎或多胎的生物学新技术。
【详解】A、胚胎工程中用促性腺激素来促使雌性个体超数排卵，A错误；
B、从卵巢中采集的卵母细胞为初级卵母细胞，需要培养至减数第二次分裂中期才能与获能的精子进行受精，B错误；
C、胚胎学原理中母体对外来胚胎没有免疫排斥反应，故不需要注射免疫抑制剂，C错误；
D、胚胎分割技术可以获得同卵双胎或同卵多胎，增大了胚胎的数量，进一步扩大了繁殖规模，D正确。
故选D。
16. 图中a、b、c、d表示生物工程的相关技术，①②③分别表示应用a、b、c技术获得的生物个体。下列推测错误的是（ ）
A. 若a是核移植技术，则①的产生体现动物细胞核具有全能性
B. 若b是体外受精技术，则②的发育都在体外进行
C. 若c是胚胎分割技术，则③的产生方式属于无性繁殖
D. d技术实质是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移
【答案】B
【分析】1、胚胎移植是指将雌性动物的早期胚胎，或者通过体外受精及其它方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的其它雌性动物的体内，使之继续发育为新个体的技术。
2、胚胎分割：是指采用机械方法将早期胚胎切割2等份、4等份等，经移植获得同卵双胎或多胎的技术。
【详解】A、动物细胞通过核移植技术获得动物个体能证明动物细胞的细胞核具有全能性，A正确；
B、体外受精是将体外获得的胚胎移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物的体内，使之继续发育为新个体，所以不全是在体外进行，B错误；
C、胚胎分割技术是将一个囊胚或者桑椹胚分割成多分获得多个后代个体，属于无性繁殖系，C正确；
D、d是胚胎移植技术，实质是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移，D正确。
故选B。
17. 小鼠胚胎干细胞经定向诱导可获得多种具有不同功能的细胞，制备流程如图所示。下列相关叙述错误的是（ ）
A. 用胰蛋白酶处理a处的细胞后可获得分散的胚胎干细胞
B. 欲提高胚胎的利用率，可用胚胎分割技术将a处细胞团均等分割
C. 为获得更多的囊胚，采用促性腺激素注射促进雄鼠产生更多的精子
D. a处的细胞与b处的细胞的核基因相同，但mRNA有差异
【答案】C
【分析】分析题图：图中a为内细胞团细胞，b为滋养层细胞，其中内细胞团细胞具有发育的全能性，属于胚胎干细胞。
【详解】A、用胰蛋白酶处理a内细胞团处的细胞后可获得分散的胚胎干细胞，A正确；
B、欲提高胚胎的利用率，可用胚胎分割技术，注意一定将内细胞团均等分割，B正确；
C、为获得更多的囊胚，采用激素（促性腺激素）注射促进雌鼠产生更多的卵母细胞（超数排卵），C错误；
D、a为内细胞团细胞，b为滋养层细胞，a处的细胞与b处的细胞都是由受精卵分裂产生的，含有的基因相同，不同类型的细胞是基因选择性表达的结果，它们的mRNA有差异，D正确。
故选C。
18. “黑寡妇”蜘蛛吐出的丝强过钢丝，用其吐出的丝织成的布比制造防弹背心所用纤维的强度高很多。科学家把“黑寡妇”蜘蛛体内蜘蛛丝蛋白基因，导入到山羊细胞内，培育出转基因“蜘蛛羊”乳腺生物反应器，获得了坚韧程度极强的蜘蛛丝蛋白，取名为“生物钢”，操作过程如下。下列说法错误的是（ ）
A. 在构建基因表达载体时，要在蜘蛛丝蛋白基因序列上游加上能在乳腺中特异性表达的基因的启动子
B. 通过显微注射的方法将含有蜘蛛丝蛋白基因的表达载体导入山羊的受精卵中，进而发育成“蜘蛛羊”
C. “蜘蛛羊”乳腺生物反应器生产“生物钢”会造成环境污染
D. 乳腺生物反应器具有产量高、成本低、产品质量好和易提取等优点
【答案】C
【分析】基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。（4）目的基因的检测与鉴定。
【详解】A、启动子具有特异性，在构建基因表达载体时，要在蜘蛛丝蛋白基因序列上游加上能在乳腺中特异性表达的基因的启动子，A正确；
B、受精卵的全能性较高，通过显微注射的方法将含有蜘蛛丝蛋白基因的表达载体导入山羊的受精卵中，进而发育成“蜘蛛羊”，B正确；
C、“蜘蛛羊”乳腺生物反应器生产的“生物钢”，可以被生物降解，不会造成环境污染，C错误；
D、乳腺生物反应器具有产量高、成本低、产品质量好和易提取等优点，D正确。
故选C。
19. PCR技术在生物工程中应用广泛，PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定。下列有关叙述错误的是（ ）
A. PCR过程中用到了缓冲液，缓冲液中一般要添加Mg2+用于激活DNA聚合酶
B. PCR反应体系中须加入耐高温的DNA聚合酶，该酶可在延伸过程起作用
C. 若采用PCR技术对一个双链目的基因进行扩增，则第n代复制共需要引物2n个
D. 限制酶切割质粒前后，质粒的长度不变，故无法通过电泳检测质粒是否被切开
【答案】D
【分析】利用PCR可以在体外进行DNA片段的扩增。PCR利用了DNA的热变性原理，通过调节温度来控制DNA双链的解聚与结合。PCR仪实质上就是一台能够自动调控温度的仪器。一次PCR一般要经历30次循环。
【详解】A、PCR过程中用到了缓冲液，缓冲液中一般要添加Mg2+用于激活DNA聚合酶，A正确；
B、PCR反应体系中须加入耐高温的DNA聚合酶，该酶主要在延伸过程起作用，B正确；
C、PCR技术大量扩增目的基因时，第n次复制形成2n-1个DNA，合成一个DNA分子需要两个引物，因此需要的引物数目为2n-1×2=2n，C正确；
D、限制酶切割质粒前后，质粒的长度不变，但质粒可能被切成多个DNA片段，相对分子质量彼此不同，因而可通过电泳检测，D错误。
故选D。
20. 赖氨酸是人类的必需氨基酸，玉米中的赖氨酸含量很低，且在加工过程中易被破坏而缺乏。为提高玉米中赖氨酸的含量，若将天冬氨酸激酶中第352位的苏氨酸变为异亮氨酸，将二氢吡啶二羧酸合成酶中第104位的天冬酰胺变为异亮氨酸，可以使玉米种子中游离赖氨酸含量提高2倍。下列说法错误的是（ ）
A. 蛋白质工程实质是通过改变基因的碱基排列顺序而改变蛋白质的结构
B. 蛋白质工程是分子水平的操作，其过程无需构建基因表达载体
C. 蛋白质工程理论上既能改造现有蛋白质，也能制造新的蛋白质
D. 对基因的改造会经常用到基因的定点突变技术来进行碱基的替换、增添等
【答案】B
【分析】1、蛋白质工程是指以蛋白质的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行基因改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需要；蛋白质工程的实质：定向改造或生产人类所需蛋白质，生产自然界没有的蛋白质；
2、蛋白质工程的基本原理：它可以根据人的需求来设计蛋白质的结构。蛋白质工程的基本途径是：根据预期的蛋白质功能设计预期的蛋白质结构，推测应有的氨基酸序列，推测出相对应的脱氧核苷酸序列或合成新的基因，再经表达过程产生预期蛋白质。
【详解】A、蛋白质工程是通过基因修饰或基因合成，是通过改变基因的碱基排列顺序而改变蛋白质的结构，A正确；
B、基因表达载体的构建是基因工程的核心，基因工程是蛋白质工程的基础，故蛋白质工程都需要构建基因表达载体，B错误；
C、蛋白质工程是通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行基因改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需要，C正确；
D、对蛋白质的改造是指通过基因工程中的定点诱变技术来进行碱基的替换、增添等，有目的改造蛋白质分子中某活性部位的1个或几个氨基酸残基，以改善蛋白质的性质和功能，D正确。
故选B。
二、非选择题：本题共6小题，共60分。
21. 北京传统小吃“豆汁”是一种以绿豆为原料，经过一系列制作工艺流程（如下图）得到的一种以酸味为主、掺杂着些许臭味的糊状流体食品。混浆操作通常是将老浆直接倒入绿豆乳中，混合浆的沉淀与酸化过程实际属于乳酸发酵，其主要产酸微生物为乳酸菌。某研究小组测定了豆汁制作过程中部分化学成分含量变化的有关数据（如下表）。回答下列问题：
（1）混合浆发酵时所需的乳酸菌主要来自___。乳酸发酵过程中，能为乳酸菌同时提供碳源和能源的物质主要是___。
（2）欲测定混合浆中乳酸菌的含量多少，研究小组可采用的接种方法是___（填“平板划线法”或“稀释涂布平板法”），该方法测得的结果通常比实际值___（填“更高”、“更低”或“相同”），原因是___。
（3）分析表中数据，酸浆I中的可溶性蛋白含量比混合浆低得多，推测其原因是___。
（4）为了筛选出产酸能力强的乳酸菌菌种，研究小组将不同稀释倍数的酸豆汁液接种到MRS固体培养基（添加了质量分数1.5%碳酸钙，遇酸发生反应会出现透明圈）上，在适宜条件下培养一段时间后，应挑取___的菌落进一步培养筛选。
（5）为了评估经传统工艺制得的豆汁安全性，研究小组又将不同稀释倍数的豆汁接种到所需培养基上培养，待长出菌落后，可根据___判断是否含有致病菌。
【答案】（1）①. 老浆 ②. （绿豆乳中的）糖类
（2）①. 稀释涂布平板法 ②. 更低 ③. 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落
（3）乳酸菌发酵产生的乳酸使pH值下降，导致可溶性蛋白质变性沉淀；（乳酸菌分泌的）蛋白酶分解了部分可溶性蛋白质
（4）透明圈较大 （5）菌落的形状、隆起程度和颜色等特征
【分析】1、微生物在琼脂固体培养基表面或内部生长，可以形成肉眼可见的菌落。
2、稀释涂布平板法除可以用于分离微生物外，也常用来统计样品中活菌的数目。该方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。
3、传统发酵食品的制作离不开各种各样的微生物。乳酸 菌是厌氧细菌，在无氧的情况下能将葡萄糖分解成乳酸，可用于乳制品的发酵、泡菜的腌制等。乳 酸菌种类很多，在自然界中分布广泛，空气、土壤、植物 体表、人或动物的肠道内都有乳酸菌分布。常见的乳酸菌 有乳酸链球菌和乳酸杆菌传统发酵食品的制作离不开各种各样的微生物。乳酸 菌是厌氧细菌，在无氧的情况下能将葡萄糖分解成乳酸，可用于乳制品的发酵、泡菜的腌制等。乳 酸菌种类很多，在自然界中分布广泛，空气、土壤、植物 体表、人或动物的肠道内都有乳酸菌分布。常见的乳酸菌有乳酸链球菌和乳酸杆菌。
（1）根据题干信息：混浆操作通常是将老浆直接倒入绿豆乳中，则混合浆发酵时所需的乳酸菌主要来自老浆；糖类是细胞生命活动的重要能源物质，乳酸发酵过程中，（绿豆乳中的）糖类能为乳酸菌同时提供碳源和能源的物质。
（2）稀释涂布平板法除可以用于分离微生物外，也常用来统计样品中活菌的数目。欲测定混合浆中乳酸菌的含量多少，研究小组可采用的接种方法是稀释涂布平板法。稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌的实际数目更低，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。
（3）由于乳酸菌发酵产生的乳酸使pH值下降，导致可溶性蛋白质变性沉淀，为此酸浆I中的可溶性蛋白含量比混合浆低得多。
（4）题干信息：碳酸钙遇酸发生反应会出现透明圈，而产酸能力强的乳酸菌，则透明圈越大，故研究小组将不同稀释倍数的酸豆汁液接种到MRS固体培养基（添加了质量分数1.5%碳酸钙，遇酸发生反应会出现透明圈）上，在适宜条件下培养一段时间后，应挑取透明圈较大的菌落进一步培养筛选。
（5）微生物在琼脂固体培养基表 面或内部生长，可以形成肉眼可见的菌落，不同微生物，菌落的性状、颜色等具有差异；故为了评估经传统工艺制得的豆汁安全性，研究小组又将不同稀释倍数的豆汁接种到所需培养基上培养，待长出菌落后，可根据菌落的形状、隆起程度和颜色等特征判断是否含有致病菌。
22. 近年来，水环境中发现的不同程度的抗生素残留，不仅威胁水生生物的生存，还会损害微生物的生态平衡。氧氟沙星（OFL）（C18H2OFN3O4）是一种人工合成的广谱抗菌的氟喹诺酮类药物，某实验小组成功地从废水环境样品中分离得到能降解OFL的菌株A.筛选分离的操作过程如图所示。回答下列问题：
（1）利用细菌处理去除废水中的抗生素，这种方法的不足之处是_______，因此需要筛选抗生素优势降解菌株。
（2）筛选能够降解OFL的菌株时，富集培养基中需要加入_______作为唯一碳源或氮源。用于培养菌株A的固体培养基含有水、蛋白胨、酵母提取物和琼脂等成分，其中蛋白胨主要为菌株A提供碳源、氮源和_______。
（3）过程Ⅱ中的总稀释次数为8次，在过程Ⅲ中，可以每隔24h统计一次菌落的数目，选取_______时的记录作为结果，三个培养基中长出的菌落数量分别是145、163、154，故推测A中1mL培养液中细菌的数量为_______个/mL。
（4）该实验小组欲进一步探究初始OFL浓度对菌株A降解OFL能力的影响，请帮助其设计实验并写出实验思路________。
【答案】（1）抗生素会抑制细菌的生长繁殖
（2）①. OFL ②. 维生素
（3）①. 菌落数目稳定 ②. 1.54×1011
（4）设置含一系列的OFL浓度的培养基，分别接种等量的菌株A，检测OFL的降解程度
【分析】1、稀释涂布平板法：将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在，再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。
2、平板划线法：把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞，用接种环在平板表面上作多次由点到线的划线稀释而获得较多独立分布的单个细胞，并让其成长为单菌落的方法。
（1）抗生素会抑制细菌的生长繁殖，需要筛选抗生素优势降解菌株来处理废水中的抗生素。
（2）筛选能够降解OFL的菌株时，富集培养基中需要加入OFL来作为唯一碳源或氮源；蛋白胨是将肉、酪素或明胶用酸或蛋白酶水解后干燥而成的外观呈淡黄色的粉剂，主要为菌株A提供碳源、氮源和维生素。
（3）据图可知，培养皿中菌落均匀分布，可知利用的接种方法是稀释涂布平板法，此方法用于统计样品中活菌的数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果；A中细菌的数量为（145+163+154）÷3×108÷0.1=1.54×1011个·mL⁻¹。
（4）欲进一步探究初始OFL浓度对菌株A降解OFL能力的影响，自变量是初始OFL浓度，因变量是菌株A的降解效果，因此可设置含一系列的OFL浓度的培养基，分别接种等量的菌株A，检测OFL的降解程度。
23. 科学家将番茄（2N）和马铃薯（4N）利用如图技术得到“番茄——马铃薯”植株。请据图回答下列问题。
（1）从愈伤组织培养到试管苗的过程一般______（填“不需要”或“需要”）提供光照，原因是_____。上图中所示技术的原理是_______和______。
（2）过程Ⅰ使用__________酶去除细胞壁，从而获得有活力的原生质体。c表示______。植物体细胞融合完成的标志是______。
（3）诱导试管f中植株生根过程的培养基中，生长素与细胞分裂素的比值较过程Ⅳ_______（填“高”或“低”），培养基中添加蔗糖的作用_______。
（4）过程Ⅳ和Ⅴ运用的技术还广泛用于细胞产物的工厂化生产，如从红豆杉树皮中分离出具有抗癌活性的紫杉醇。请依据所学知识写出生产紫杉醇的过程图________（用文字和箭头表示）。
【答案】（1）①. 需要 ②. 叶绿素的合成需要光照 ③. 细胞膜具有一定的流动性 ④. 细胞全能性
（2）①. 纤维素酶和果胶 ②. 正在融合的原生质体 ③. 杂种细胞再生出细胞壁
（3）①. 高 ②. 为植物细胞提供能量，调节培养基内的渗透压
（4）豆杉树皮细胞愈伤组织→提取紫杉醇
【分析】分析题图，图示为植物体细胞杂交过程示意图，其中Ⅰ表示去除细胞壁获得原生质体的过程；Ⅱ表示人工诱导原生质体融合的过程；Ⅲ表示再生出新细胞壁的过程；IV表示脱分化过程；V表示再分化过程。
（1）从愈伤组织培养到试管苗的过程一般需要提供光照，因为叶绿素的合成需要光照。上图示技术的名称是植物体细胞杂交技术，体现了细胞膜具有一定的流动性；将杂种细胞培育成杂种植株需要采用植物组织培养技术，其原理是植物细胞具有全能性。
（2）过程Ⅰ使用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，从而获得有活力的原生质体。c表示正在融合的原生质体；植物体细胞融合完成是杂种细胞再生出细胞壁（形成新的细胞壁）。
（3）当生长素与细胞分裂素的浓度比值小于1时，可以促进芽的分化，当该比值大于1时，可以促进根的分化，故诱导 f 中植株生根过程的培养基中生长素与细胞分裂素的比值较过程IV（脱分化）高；培养基中添加蔗糖的作用一是可以为植物提供能量，二是可以维持培养基的渗透压。
（4）利用植物组织培养技术，能将细胞培养成愈伤组织，再大量培养愈伤组织细胞，从中提取紫杉醇，生产过程图为：离体的 红豆杉树皮细胞 愈伤组织→提取紫杉醇 。
24. 犬细小病毒（CPV）主要感染幼犬，传染性极强，死亡率也高。利用小鼠制备抗CPV单克隆抗体的基本流程如图所示。回答下列问题：
（1）制备单克隆抗体依赖的生物技术有______（答出2点）。步骤①中，用灭活的CPV免疫小鼠需要在一定时间内间隔注射3次，其目的是_____。
（2）经过步骤②后获得的是多种类型的杂交细胞，原因是_______。对杂交细胞等用特定的选择培养基进行筛选得到杂交瘤细胞，对杂交瘤细胞进行______，经过多次筛选才能获得足够数量的能分泌抗CPV抗体的细胞。
（3）体外培养杂交瘤细胞后从培养液中提取到抗CPV单克隆抗体。杂交瘤细胞的培养液中有各种营养物质，还需要添加_____以补充细胞生长所需的未知营养物质和防止杂菌污染。与培养大多数动物体细胞不同，骨髓瘤细胞在培养过程中不会出现_____的现象，只要营养等条件适宜即可一直增殖。
（4）对疑似感染CPV的幼犬进行确诊时，可用获得的抗CPV单克隆抗体进行检测，所依据的原理是_____。
【答案】（1）①. 动物细胞培养、动物细胞融合 ②. 加强免疫，刺激小鼠机体产生更多已免疫的B淋巴细胞
（2）①. 细胞融合是随机的 ②. 克隆化培养和抗体检测
（3）①. 血清和抗生素 ②. 接触抑制
（4）抗原抗体特异性结合
【分析】单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。
（1）制备单克隆抗体依赖的生物技术有动物细胞培养和动物细胞融合（诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合）等技术；步骤①中，灭活的CPV属于抗原，用灭活的CPV免疫小鼠，小鼠会产生体液免疫，产生B淋巴细胞，所以用灭活的CPV免疫小鼠需要在一定时间内间隔注射3次，其目的是加强免疫，刺激小鼠机体产生更多已免疫的B淋巴细胞。
（2）步骤②是诱导细胞融合，由于该过程中细胞融合是随机的，故可能得到多种类型的杂交细胞，如可能得到B细胞-B细胞型、骨髓瘤-骨髓瘤细胞型等；最终筛选得到足够数量的能分泌抗CPV抗体的细胞需要经过两次筛选过程，使用特定的选择培养基培养（第一次筛选）得到杂交瘤细胞。对杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测（利用抗原-抗体的特异性结合原理，出现阳性反应的即可），经过多次筛选才能获得足够数量的能分泌抗CPV抗体的细胞。
（3）为补充细胞生长所需的未知营养物质和防止杂菌污染，需要在培养液中添加血清（含有细胞所必须的物质）和抗生素（避免杂菌污染）。与培养大多数动物体细胞不同，骨髓瘤细胞在培养过程中不会出现接触抑制现象，只要营养等条件适宜即可一直增殖。
（4）对疑似感染CPV的幼犬进行确诊时，可用获得的抗CPV单克隆抗体进行抗原—抗体杂交检测，所依据的原理是抗原抗体特异性结合，若出现杂交带，则证明感染。
25. 樟木牛和阿沛甲咂牛原产于青藏高原，是世界珍稀地方黄牛品种。科研人员采集了樟木牛和阿沛甲咂牛的耳组织，建立了成纤维细胞系，利用体细胞核移植技术，制备了早期胚胎，将胚胎移植到代孕母牛中，经过足月的妊娠，获得了8头克隆牛，这是世界首例克隆西藏濒危牛。获得克隆牛的过程如图所示。回答下列问题：
（1）细胞①取自西藏濒危牛的耳组织细胞，这样取材的好处是_______（答出1点）。
（2）卵母细胞采集后要在体外培养到________期，通过_______法使细胞①与去核卵母细胞融合，形成重构胚，再用电刺激、乙醇等方法激活重构胚，使其发育成早期胚胎，其中细胞②的遗传物质来自_______。
（3）胚胎移植技术的实质是______。为一次获得多个具有同种遗传物质的个体，可对_______时期的胚胎进行_______，该操作的注意事项是_______。
（4）克隆本质上是一种无性繁殖，胚胎移植前，需对供、受体犬进行______处理，为供体胚胎移入受体提供相同的生理环境。
【答案】（1）这样的细胞分裂增殖能力强
（2）①. 减数第二次分裂中 ②. 电融合 ③. 细胞①和卵母细胞
（3）①. 早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移，能保持原来的优良性状 ②. 桑葚胚或囊胚 ③. 胚胎分割 ④. 要注意将内细胞团均等分割
（4）同期发情
【分析】胚胎工程是指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术。包括体外受精、胚胎移植、胚胎分割移植、胚胎干细胞培养等技术。胚胎工程的许多技术，实际是在体外条件下，对动物自然受精和早期胚胎发育条件进行的模拟操作。
（1）动物细胞培养的目的是通过亲代细胞的增殖获得大量的子代细胞，所以需要培养的细胞具有较强的分裂能力。
（2）从活体牛的卵巢中吸取的卵母细胞需要在体外培养到减数第二次分裂中期，通过电融合方法可以使细胞①与去核卵母细胞融合，形成重构胚，激活重构胚的方法有电刺激、乙醇、蛋白酶合成抑制剂等方法；细胞②的细胞质遗传物质来自卵母细胞，细胞核遗传物质来自细胞①。
（3）早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移，能保持原来的优良性状，这是胚胎移植技术的实质；用胚胎分割技术，对发育到桑葚胚或囊胚阶段的早期胚胎进行胚胎分割处理，再植入到受体内，可获得遗传物质完全相同的新个体。在操作过程中，要注意将内细胞团均等分割，否则会影响胚胎的恢复和进一步发育。
（4）克隆本质上是一种无性繁殖，胚胎移植前，需对供、受体犬进行同期发情处理，为供体胚胎移入受体提供相同的生理环境。
26. 宫颈癌是一种由HPV病毒（遗传物质是DNA）引发的癌症，至今已鉴定出200多种HPV类型。尤其是HPV16、HPV18，其检出率在宫颈癌中达到99.7%。2023年1月，国家卫生健康委等十个部门联合发布了《加速消除宫颈癌行动计划（2023—2030年）》，提出了“积极推动HPV疫苗接种”的要求。九价HPV疫苗在中国获批用于9-45岁女性，但却一针难求。将HPV16和HPV18两种病毒的衣壳蛋白基因（目的基因）与质粒连接，导入大肠杆菌表达后，就获得了疫苗的有效成分。
（1）在构建基因表达载体时要将HPV16和HPV18两种病毒的衣壳蛋白基因插入_______和_______之间。PCR反应需要在一定的缓冲溶液中才能进行，缓冲溶液一般要添加Mg2+，原因是______。引物的作用是______，引物长度通常为20~30个核苷酸，过短会导致特异性差。
（2）构建基因表达载体的目的是____。
（3）进行基因表达载体构建有两个方案：方案一：只用EcRⅠ酶同时切割质粒和含目的基因的DNA片段；方案二：使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时切割质粒和含目的基因的DNA片段。你认为哪个方案更好？____。原因是_______。
（4）基因表达载体导入大肠杆菌前，需用______处理大肠杆菌，目的是______。
【答案】（1）①. 启动子 ②. 终止子 ③. 耐高温的DNA聚合酶需要Mg2+激活 ④. 使DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸
（2）让目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给下一代，使目的基因能够表达和发挥作用
（3）①. 方案二 ②. 防止目的基因和质粒的自身环化和反向连接等
（4）①. Ca2+ ②. 使大肠杆菌细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态
【分析】基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成；
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等；
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法；
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因——DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA——分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质——抗原—抗体杂交技术；个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
（1）在构建基因表达载体时要将HPV16和HPV18两种病毒的衣壳蛋白基因插入启动子和终止子之间；PCR反应需要在一定的缓冲溶液中才能进行，缓冲溶液一般要添加Mg2+，以激活耐高温的DNA聚合酶；在此过程中，引物的作用是使DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸。
（2）构建基因表达载体的目的是让目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。
（3）方案二更好，原因是：如果用EcRI对外源DNA和质粒进行酶切，因为黏性末端相同，将多个含有目的基因的DNA片段与多个质粒的酶切产物用DNA连接酶进行连接后，两两连接所形成的产物有空质粒，反向连接的质粒，正向连接的质粒三种。为了防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化和反向连接，使用BamHI和HindⅢ两种限制酶同时切割质粒和含目的基因的DNA片段。
（4）基因表达载体导入大肠杆菌前，需用Ca2+处理大肠杆菌，目的是使大肠杆菌细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，可以提高转化效率。
项目
细胞融合原理
细胞融合方法
诱导手段
用途
植物体细胞杂交
细胞膜的流动性，（细胞的全能性）
去除细胞壁后诱导原生质体融合
离心、电刺激、聚乙二醇等试剂诱导
克服远缘杂交不亲和，获得杂种植物
动物细胞融合
细胞膜的流动性
使细胞分散后，诱导细胞融合
离心、电刺激、聚乙二醇、灭活病毒等试剂诱导
制备单克隆抗体的技术之一
浆状样品
可溶性蛋白/（mg/mL）
游离氨基酸/（mg/mL）
蛋白酶/（U/mL）
混合浆
5.60
0.31
1.19
酸浆I
1.4
0.51
0.16
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