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山西省大同市浑源县七中2022-2023学年高二下学期第三次月考生物试题（解析版+原卷版）
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试题满分：100分 考试时间：90分钟
一、选择题（共 25 小题，每小题 2 分，共 50 分）
1. 动物细胞培养是动物细胞工程的基础技术。下列不属于动物细胞培养的必要条件是（ ）
A. 生长素B. 抗生素C. 血清D. 无机盐
2. “基因剪刀”——限制性内切核酸酶是基因工程中非常重要的一种工具，它所切割的部位是（ ）
A. ①B. ②C. ③D. ④
3. 2017年11月27日，世界上首例体细胞克隆猴“中中”和“华华”在我国诞生。下列技术与“中中”和“华华”的产生无关的是（ ）
A. 胚胎移植B. 体外受精C. 胚胎体外培养D. 核移植
4. 拟采用“取材→消毒→愈伤组织→出芽→生根→移栽”的方法繁殖一种名贵花卉。下列有关叙述错误的是（ ）
A. 该过程为器官发生途径
B. 整个过程需要配制不同的培养基
C 用聚乙二醇处理愈伤组织，可使其发生细胞融合
D. 取材时除了要考虑其优良性状外还需考虑细胞全能性的表达能力
5. 微生物培养过程中十分重视无菌操作，以防止杂菌污染。请分析下列操作正确的是（ ）
A. 实验操作者的双手用75%酒精消毒
B. 接种操作时要打开紫外灯并在酒精灯火焰附近进行
C. 培养工作结束后，所有使用过的器皿都必须洗涤后再高压蒸汽灭菌处理
D. 高压蒸汽灭菌时，灭菌时间应从高压蒸汽灭菌锅开始加热时计时
6. 生物是一门既古老又现代的技术。下列关于生物技术的操作过程、原理或应用的说法错误的是（ ）
A. 基因工程的核心是构建重组DNA分子B. 细胞膜具有流动性是植物体细胞杂交的基础
C. 胚胎分割属于动物有性生殖D. 稀释涂布平板法可用于微生物的分离与纯化
7. 下图为平板划线法接种微生物的示意图，下列说法错误的是（ ）
A. 观察或比较各种细菌菌落形态的最佳区域是④
B. 划线时要注意不能将④区域的划线与①区域相连
C. 每次划线后，都应将接种环放在酒精灯火焰上灼烧
D. 划线结束时即可看到划线末端出现不连续单菌落
8. 海拉（HeLa）细胞是1951年从一位患宫颈癌的美国病人身上分离出来的宫颈癌细胞。虽然该病人已经去世，但海拉细胞直到今天还被用于科学研究。下列说法正确的是（ ）
A. 海拉细胞可利用液体培养基在体外无限传代，在细胞培养过程中会出现接触抑制现象
B. 将癌变的宫颈癌组织分散为单个的细胞，可用胃蛋白酶处理
C. 培养液需定期更换，以便清除代谢废物，防止代谢废物积累对细胞自身造成危害
D. 体外培养海拉细胞时，需提供95％O2和5％CO2的气体环境
9. 病毒感染果蔬后，会借助胞间连丝等结构进行扩散导致果蔬产量和品质退化。利用植物组织培养技术可以快速生产出脱毒苗。下列叙述错误的是（ ）
A. 多种消毒药剂配合使用来消毒植株茎尖切段，可获得良好的消毒效果
B. 形成愈伤组织的过程中，可能会发生染色体变异、基因突变及基因重组
C. 脱毒苗培育过程中适当提高NAA的比例有利于根的分化
D. 植株茎尖细胞中不含病毒的原因可能是该组织胞间连丝不发达
10. 我国科研人员开发了常温下快速检测新冠病毒的新型PCR技术，称为逆转录重组酶聚合酶扩增（RTRPA）技术，原理见下图。重组酶与引物结合，使模板DNA无需变性即可与引物结合。子链延伸的过程中，被置换出的非模板链与单链结合蛋白暂时结合。下列关于RTRPA的叙述错误的是（ ）
A. 需要有逆转录酶将新冠病毒RNA逆转录为新冠病毒DNA
B. 引物能与新冠病毒DNA的特异性序列互补配对
C. 需要通过改变反应温度进行变性复性延伸的循环
D. 该反应体系能实现对模板DNA分子指数扩增
11. 下列关于微生物发酵的叙述正确的是（ ）
A. 制作葡萄酒的过程中，将挤碎的葡萄放入发酵瓶中时，应尽可能装满
B. 为防止杂菌进入，果酒、果醋发酵都需要严格密封
C. 果醋发酵后期，随着醋酸菌数量减少，醋酸含量不断降低
D. 泡菜腌制过程中，可加入已腌制过的泡菜汁来加快发酵进程
利用愈伤组织中的胚性细胞获得转基因植株的流程如图所示，其中①、②、③表示过程。请回答问题。
12. ③过程涉及到植物组织培养技术，下列有关叙述，正确的是（ ）
A. ③过程要经历细胞的脱分化和再分化
B. ①过程需在低渗溶液中用酶解法处理植物细胞获得原生质体
C. 在植物组织培养过程中无需提供光照
D. MS培养基中通常加入天然植物激素
13. 下列关于获得该转基因植株的整个流程的叙述错误的是（ ）
A. ①过程去除细胞壁可提高②过程中目的基因导入的成功率
B. ③过程体现了植物细胞的全能性
C. 图示途径和植物体细胞杂交都能克服远缘杂交的不亲和性
D. 原生质体的胞质分裂方式与动物细胞类似
14. 限制性内切核酸酶可以在特异的位点将DNA分子剪切开。如图为不同种限制酶识别的序列，箭头所指的是酶切位点，下列叙述错误的是（ ）
A. 能被BamHI识别的序列也一定能被Sau3AI识别
B. 一个DNA分子被EcRI切成两个片段时会发生8个氢键的断裂
C. 质粒作为基因工程的常用载体，通常会有多种限制性内切核酸酶切割位点
D. 用BamHI切割的目的基因和用Sau3AI切割的质粒无法连接
15. 下图是“DNA的粗提取和鉴定”实验中几个重要操作的示意图，下列叙述错误的是（ ）
A. 图①需要用玻璃棒沿一个方向轻缓搅拌，便于DNA析出
B. 图①的原理是DNA不溶于酒精，而某些蛋白质可溶于酒精
C. 实验的操作顺序是③②①④
D. 图④操作后加入二苯胺试剂振荡，可观察颜色变蓝
16. 胚胎工程中各种操作技术如图所示，下列分析正确的是（ ）
A. d可直接移植给受体，形成d的关键是要对a均等分割
B. 从良种公牛体内获得的精子可以直接与卵细胞结合受精
C. 早期囊胚a、b、c基因型相同，但发育得到的个体表型不一定相同
D. 代孕母牛应用孕激素提前做好同期发情处理，避免移植胚胎发生免疫排斥
17. 已知一双链DNA分子，用限制性核酸内切酶Ⅰ切割得到长度为120kb（kb：千碱基对）片段；用限制性核酸内切酶Ⅱ切割得到40kb和80kb两个片段；同时用限制性核酸内切酶Ⅰ和限制性核酸内切酶Ⅱ切割时，得到10kb、80kb和30kb3个片段。据此分析该双链DNA分子结构及酶切位点情况为（ ）
A. B.
C.
D.
18. 野生型大肠杆菌菌株能在未添加某种维生素的基本培养基上生长，氨基酸营养缺陷型突变株无法合成某种氨基酸，只能在添加了多种维生素的完全培养基上生长，下图为纯化某氨基酸营养缺陷型突变株的部分流程图，①②③④代表培养基，A、B、C表示操作步骤，D、E为菌落。下列叙述错误的是（ ）
A. 图中①②④为基本培养基，③为完全培养基
B. 紫外线的目的是提高突变率，增加突变株的数量
C. B的正确操作是用涂布器把菌液均匀地涂布在②表面
D. 经C过程原位影印及培养后，可从④中挑取D进行纯化培养
19. 如表列举了几种限制酶识别序列及其切割位点（箭头表示相关酶的切割位点）。图是酶切后产生的几种末端。下列说法正确的是（ ）
A. BamHⅠ切割的是氢键，AluⅠ切割的是磷酸二酯键
B. Sau3AⅠ和BamHⅠ切割产生的片段能够相连，但连接后的片段两者都不能再切割
C. ②④⑤对应的识别序列均能被Sau3AⅠ识别并切割
D. T4DNA连接酶即能连接①③，也能连接②⑤，但后者连接效率低
20. 花椰菜易受黑腐病病原菌的危害而患黑腐病，野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用一定剂量的紫外线照射黑芥原生质体可使其染色体片段化，并丧失再生能力。再利用此原生质体作为部分遗传物质的供体与完整的花椰菜原生质体融合，可获得抗黑腐病杂种植株，流程如图。据图分析，下列叙述错误的是（ ）
A. 原生质体培养液中需要加入适宜浓度的甘露醇，其作用是有利于保持原生质体的完整性
B. 融合的活细胞中叶绿体的存在可作为初步筛选杂种细胞的标志
C. 原生质体经过细胞壁再生，进而脱分化和再分化形成愈伤组织
D. 对杂种植株进行黑腐病病原菌接种实验，可筛选出具有抗黑腐病能力的杂种植株
21. 下图表示三亲绵羊的培养过程，下列相关说法错误的是（ ）
A. 三亲绵羊细胞中的染色体只来自绵羊甲和绵羊丙
B. 可用紫外线短时间照射的方法对绵羊乙的卵母细胞去核
C. 图示方法可避免携带有线粒体致病基因的绵羊甲产下患该病的子代
D. 受精卵发育成原肠胚再通过胚胎移植的方式在绵羊甲子宫内发育成幼体
22. 金茶花是中国特有的观赏品种，但易得枯萎病。科学家在某种植物中找到了抗枯萎病的基因，通过下图所示的方法培育出了抗枯萎病的新品种，①—⑤分别生物或生物的部分结构代表。下列相关叙述正确的是（ ）
A. ②需插入①的T-DNA片段中，便于整合到金茶花细胞染色体DNA上
B. ⑤从培养室取出后直接用流水冲洗掉幼苗根部培养基，再移栽到育苗盘中
C. 抗病金茶花植株不同部位的细胞经培养获得的愈伤组织的基因型一定相同
D. 在⑤幼苗中检测到抗枯萎病基因标志着成功培育新品种
23. 目前临床上诊断新冠感染疑似患者的常用方法是先进行咽拭子取样，再用实时荧光RT-PCR检测。如图为RT-PCR技术的原理，数字①-③为相关步骤。在PCR过程中探针和引物一起与模板结合，探针两侧分别带有荧光基团和淬灭基团（抑制荧光发出），当酶催化子链延伸至探针处时会水解探针，导致荧光基团与淬灭基团分离而发出荧光。下列叙述错误的是（ ）
A. 若检测结果有强烈荧光信号发出，说明被检测者可能感染了病毒
B. 最终监测的荧光强度与起始时反应管内样本DNA的含量呈正相关
C. 荧光基因R连接在DNA探针的3’端，探针可以由新冠病毒的RNA特定序列逆转录获得
D. 该反应体系中虽未加入ATP，但新链的合成还是需要消耗能量的
24. 紫杉醇是红豆杉属植物产生一种次生代谢产物，具有抑制纺锤丝解聚，阻止染色体运动的作用，可用于某些癌症的治疗。某研究小组利用含3H标记的胸腺嘧啶脱氧核苷（3H-TdR）细胞培养液、紫杉醇对乳腺癌细胞（核DNA为2N）进行了培养，如下图所示。下列叙述错误的是（ ）
A. 紫杉醇对正常的细胞不会产生毒副作用
B. 甲、乙两瓶中，核DNA含量为4N的细胞占比较高的是乙瓶
C. 甲瓶中大量的3H-TdR会在S期进入细胞核
D. 培养所用的卡氏瓶有利于乳腺癌细胞的贴壁生长
25. 某单基因遗传病患者的家系如图1，研究人员采集了部分家系成员的DNA，对于该病相关基因的特异性片段（长度400bp，bp代表碱基对）进行PCR扩增，然后用限制性内切核酸酶HhaⅠ对其切割，进行琼脂糖凝胶电泳分析，结果如图2．下列分析错误的是（ ）
A. II-3的致病基因来自I-3
B. 该致病基因片段上没有HhaⅠ酶切点
C. Ⅲ-2成年后进行产前诊断时可参考胎儿的性别判断其患病概率
D. Ⅱ-2与Ⅱ-3再生育两个孩子（非同卵双胞胎），其中一个正常的概率是3/8
二、非选择题（本大题共4小题，除标注外，每空1分，共50分）
26. 滩涂野耐盐大豆细胞具有耐盐特性，普通高产大豆植物具有高产特性。下图是科学家利用这两种植物细胞进行体细胞杂交培育“耐盐-高产大豆”新品种的过程，数字①-⑤为相关过程。请回答下列问题：
（1）愈伤组织是未分化的细胞，具有_____等特点（答出两点）。
（2）图中过程①使用了_____酶和_____酶去除细胞壁，获得植物原生质体。若过程②形成的细胞均为2个细胞融合而来，则经过该过程后，产生的融合细胞最多有_____种。
（3）培养过程运用了多种植物细胞工程技术，其中过程②③涉及_____技术，过程④⑤涉及_____技术。图中试管苗的形成是愈伤组织经过过程⑤_____实现的。
（4）科学家在甲瓶的培养基中加入了0．6%的NaCl，发现仅有部分细胞转变为愈伤组织，未转变为愈伤组织的细胞是_____（填“滩涂野耐盐大豆细胞”“普通高产大豆细胞”或“杂种细胞”）。
（5）除了上述办法，还可以采用其他思路获得“耐盐-高产大豆”新品种，请简要列举一种思路_____。
27. 新型冠状病毒抗原检测试剂盒是相对比较简便、快速的检测方法，抗原检测试剂盒的生产依赖于新型冠状病毒单克隆抗体的制备。制取新型冠状病毒S蛋白的单克隆抗体部分过程如下图所示，请回答下列问题：
（1）图中操作a是指对小鼠注射_____，之后一般从该小鼠的_____中提取淋巴细胞，并在体外让淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合。与诱导植物原生质体融合相比，诱导动物细胞融合的特有方法是_____。
（2）诱导融合后至少要经过两次筛选，图中的筛选1是指利用HAT选择培养基将具有_____特点的_____细胞筛选出来；筛选2需要将细胞接种到多孔培养板上，每个孔接种_____个细胞，取上清液作为待测样本进行抗体阳性检测，检测原理如下图所示：
加入酶标抗体一段时间后，需要将未与_____结合的酶标抗体洗脱。据图可知在抗体检测中，杂交瘤细胞呈阳性的判断依据为_____。
（3）单克隆抗体的优点是_____（答出两点）。利用筛选出的符合要求的细胞生产单克隆抗体，既可以将细胞注入小鼠腹腔内进行生产，也可以在体外生产，两种方式相比，后者的优点是_____。
28. 19世纪末，巴斯德开创了第一次疫苗革命，其特点是接种灭活或减毒的病原微生物。20世纪70年代开始，现代生物技术的迅猛发展开创了第二次疫苗革命，使疫苗的研制进入分子水平。图1是通过基因工程制备乙型肝炎表面抗原（HbsAg）从而获得乙肝疫苗的过程，数字①-⑦为相关步骤。
在图1步骤①和③中，需要用合适的限制酶切割乙肝表面抗原基因和质粒。乙肝表面抗原基因及质粒的部分限制酶的识别序列及位置如图2。启动子是质粒中基因得以正常表达所必需的部分。LacZ基因控制合成某种酶，该酶能将无色染料X-gal变成蓝色，最终能在含无色染料X-gal的培养基上将含该基因的菌落染成蓝色。
（1）在图1步骤④中，使用的基因工程工具酶是_____，将一个乙肝表面抗原基因与一个质粒重组的过程中，游离的磷酸基团数目减少_____个。
（2）根据图2，为了避免自身环化及便于筛选，切割质粒选用的限制酶是_____，获得乙肝表面抗原基因选用的限制酶是_____。
（3）为筛选含有乙肝表面抗原的大肠杆菌细胞，需要将大肠杆菌接种到含_____的固体培养基上，挑选_____的菌落纯化培养。
（4）若运用PCR技术检测乙肝表面抗原基因是否导入，需根据目的基因的序列设计_____，利用待检DNA为模板进行PCR。PCR过程包括多次循环，每个循环分为3个步骤：_____→_____→延伸。若基因导入成功PCR过程中至少复制_____次可以得到两条链等长的目的基因。
（5）利用基因工程生产乙肝疫苗比灭活的乙肝病毒的疫苗安全性更_____，原因是_____。
29. 四尾栅藻具有环境适应能力强和生长速度快等优点，如果能将其进行品种改良，提高含油量，有望解决微藻生物柴油产业化进程的瓶颈。研究人员利用基因工程技术将油料作物紫苏DGAT1基因导入四尾栅藻，获得转基因的产油微藻，利用地热废水培养，不仅能生产生物柴油，还能治理地热废水。操作过程如下图，请回答下列问题：
注：LacZ基因编码产生的酶可以分解物质X-gal，从而使菌落显现出蓝色。若无该基因或该基因被破坏，则菌落呈白色。
（1）将质粒pMD19-DGAT1导入大肠杆菌前，通常先用Ca2+处理大肠杆菌，使细胞处于一种_____________的生理状态。
（2）为了便于筛选含pMD19-DGAT1重组质粒的大肠杆菌，该选择培养基中应添加_____________物质。在培养基中挑取_______________ 颜色的大肠杆菌菌落可提取该质粒并获取目的基因。
（3）由上图推测，用______________和_____________酶切割pMD19-DGAT1获得DGATI基因，并与酶切后的载体pBI121连接再次构建基因表达载体，用这两种酶切割的目的是_____________。
（4）启动子往往具有物种特异性，在载体pBI121质粒中插入紫苏DGAT1基因，其上游启动子应选择______________（填字母）。
A. 紫苏DGAT1基因启动子B. 四尾栅藻启动子C. 大肠杆菌启动子
（5）为了判断DGAT1基因是否导入四尾栅藻细胞，可利用_____________（中文全称）等技术进行检测。
（6）为检测转基因四尾栅藻对地热废水的去污能力，研究人员设计实验并得到相应实验结果如下表。
该实验不能说明转DGAT1基因显著提高了四尾栅藻的去污能力。请进一步完善实验设计_____________________________________________________。
30. 青蒿素是有效的抗疟疾药物，但野生黄花蒿中青蒿素的产量较低。为缓解青蒿素供应不足的状况，科学家将基因tms和tmr导入黄花蒿的愈伤组织，获得了黄花蒿的冠瘿组织，改造过程用到的部分结构如图所示，回答下列问题：
（1）科学家将目的基因导入黄花蒿愈伤组织细胞常用的方法是____。此方法需将目的基因插入黄花蒿愈伤组织细胞Ti质粒的____，通过农杆菌的转化作用将其整合到黄花蒿愈伤组织细胞的____。
（2）图中结构P、T是基因成功转录的保证，其中结构P位于基因的首端，称为____其作用是____。为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，并将含有目的基因的细胞筛选出来，图中还缺少的结构是____。构建重组DNA的目的是____。
（3）要检测目的基因是否导入冠瘿组织细胞的染色体DNA上，可采用____等技术。限制酶
AluI
BamHI
SmaI
Sau3AI
识别序列
指标
总氮（mg/L）
总磷（mg/L）
氟化物（mg/L）
废水培养基
23.2
4.32
4.56
培养转基因四尾栅藻11天后
1.9
0.45
0.84
试题满分：100分 考试时间：90分钟
一、选择题（共 25 小题，每小题 2 分，共 50 分）
1. 动物细胞培养是动物细胞工程的基础技术。下列不属于动物细胞培养的必要条件是（ ）
A. 生长素B. 抗生素C. 血清D. 无机盐
2. “基因剪刀”——限制性内切核酸酶是基因工程中非常重要的一种工具，它所切割的部位是（ ）
A. ①B. ②C. ③D. ④
3. 2017年11月27日，世界上首例体细胞克隆猴“中中”和“华华”在我国诞生。下列技术与“中中”和“华华”的产生无关的是（ ）
A. 胚胎移植B. 体外受精C. 胚胎体外培养D. 核移植
4. 拟采用“取材→消毒→愈伤组织→出芽→生根→移栽”的方法繁殖一种名贵花卉。下列有关叙述错误的是（ ）
A. 该过程为器官发生途径
B. 整个过程需要配制不同的培养基
C 用聚乙二醇处理愈伤组织，可使其发生细胞融合
D. 取材时除了要考虑其优良性状外还需考虑细胞全能性的表达能力
5. 微生物培养过程中十分重视无菌操作，以防止杂菌污染。请分析下列操作正确的是（ ）
A. 实验操作者的双手用75%酒精消毒
B. 接种操作时要打开紫外灯并在酒精灯火焰附近进行
C. 培养工作结束后，所有使用过的器皿都必须洗涤后再高压蒸汽灭菌处理
D. 高压蒸汽灭菌时，灭菌时间应从高压蒸汽灭菌锅开始加热时计时
6. 生物是一门既古老又现代的技术。下列关于生物技术的操作过程、原理或应用的说法错误的是（ ）
A. 基因工程的核心是构建重组DNA分子B. 细胞膜具有流动性是植物体细胞杂交的基础
C. 胚胎分割属于动物有性生殖D. 稀释涂布平板法可用于微生物的分离与纯化
7. 下图为平板划线法接种微生物的示意图，下列说法错误的是（ ）
A. 观察或比较各种细菌菌落形态的最佳区域是④
B. 划线时要注意不能将④区域的划线与①区域相连
C. 每次划线后，都应将接种环放在酒精灯火焰上灼烧
D. 划线结束时即可看到划线末端出现不连续单菌落
8. 海拉（HeLa）细胞是1951年从一位患宫颈癌的美国病人身上分离出来的宫颈癌细胞。虽然该病人已经去世，但海拉细胞直到今天还被用于科学研究。下列说法正确的是（ ）
A. 海拉细胞可利用液体培养基在体外无限传代，在细胞培养过程中会出现接触抑制现象
B. 将癌变的宫颈癌组织分散为单个的细胞，可用胃蛋白酶处理
C. 培养液需定期更换，以便清除代谢废物，防止代谢废物积累对细胞自身造成危害
D. 体外培养海拉细胞时，需提供95％O2和5％CO2的气体环境
9. 病毒感染果蔬后，会借助胞间连丝等结构进行扩散导致果蔬产量和品质退化。利用植物组织培养技术可以快速生产出脱毒苗。下列叙述错误的是（ ）
A. 多种消毒药剂配合使用来消毒植株茎尖切段，可获得良好的消毒效果
B. 形成愈伤组织的过程中，可能会发生染色体变异、基因突变及基因重组
C. 脱毒苗培育过程中适当提高NAA的比例有利于根的分化
D. 植株茎尖细胞中不含病毒的原因可能是该组织胞间连丝不发达
10. 我国科研人员开发了常温下快速检测新冠病毒的新型PCR技术，称为逆转录重组酶聚合酶扩增（RTRPA）技术，原理见下图。重组酶与引物结合，使模板DNA无需变性即可与引物结合。子链延伸的过程中，被置换出的非模板链与单链结合蛋白暂时结合。下列关于RTRPA的叙述错误的是（ ）
A. 需要有逆转录酶将新冠病毒RNA逆转录为新冠病毒DNA
B. 引物能与新冠病毒DNA的特异性序列互补配对
C. 需要通过改变反应温度进行变性复性延伸的循环
D. 该反应体系能实现对模板DNA分子指数扩增
11. 下列关于微生物发酵的叙述正确的是（ ）
A. 制作葡萄酒的过程中，将挤碎的葡萄放入发酵瓶中时，应尽可能装满
B. 为防止杂菌进入，果酒、果醋发酵都需要严格密封
C. 果醋发酵后期，随着醋酸菌数量减少，醋酸含量不断降低
D. 泡菜腌制过程中，可加入已腌制过的泡菜汁来加快发酵进程
利用愈伤组织中的胚性细胞获得转基因植株的流程如图所示，其中①、②、③表示过程。请回答问题。
12. ③过程涉及到植物组织培养技术，下列有关叙述，正确的是（ ）
A. ③过程要经历细胞的脱分化和再分化
B. ①过程需在低渗溶液中用酶解法处理植物细胞获得原生质体
C. 在植物组织培养过程中无需提供光照
D. MS培养基中通常加入天然植物激素
13. 下列关于获得该转基因植株的整个流程的叙述错误的是（ ）
A. ①过程去除细胞壁可提高②过程中目的基因导入的成功率
B. ③过程体现了植物细胞的全能性
C. 图示途径和植物体细胞杂交都能克服远缘杂交的不亲和性
D. 原生质体的胞质分裂方式与动物细胞类似
14. 限制性内切核酸酶可以在特异的位点将DNA分子剪切开。如图为不同种限制酶识别的序列，箭头所指的是酶切位点，下列叙述错误的是（ ）
A. 能被BamHI识别的序列也一定能被Sau3AI识别
B. 一个DNA分子被EcRI切成两个片段时会发生8个氢键的断裂
C. 质粒作为基因工程的常用载体，通常会有多种限制性内切核酸酶切割位点
D. 用BamHI切割的目的基因和用Sau3AI切割的质粒无法连接
15. 下图是“DNA的粗提取和鉴定”实验中几个重要操作的示意图，下列叙述错误的是（ ）
A. 图①需要用玻璃棒沿一个方向轻缓搅拌，便于DNA析出
B. 图①的原理是DNA不溶于酒精，而某些蛋白质可溶于酒精
C. 实验的操作顺序是③②①④
D. 图④操作后加入二苯胺试剂振荡，可观察颜色变蓝
16. 胚胎工程中各种操作技术如图所示，下列分析正确的是（ ）
A. d可直接移植给受体，形成d的关键是要对a均等分割
B. 从良种公牛体内获得的精子可以直接与卵细胞结合受精
C. 早期囊胚a、b、c基因型相同，但发育得到的个体表型不一定相同
D. 代孕母牛应用孕激素提前做好同期发情处理，避免移植胚胎发生免疫排斥
17. 已知一双链DNA分子，用限制性核酸内切酶Ⅰ切割得到长度为120kb（kb：千碱基对）片段；用限制性核酸内切酶Ⅱ切割得到40kb和80kb两个片段；同时用限制性核酸内切酶Ⅰ和限制性核酸内切酶Ⅱ切割时，得到10kb、80kb和30kb3个片段。据此分析该双链DNA分子结构及酶切位点情况为（ ）
A. B.
C.
D.
18. 野生型大肠杆菌菌株能在未添加某种维生素的基本培养基上生长，氨基酸营养缺陷型突变株无法合成某种氨基酸，只能在添加了多种维生素的完全培养基上生长，下图为纯化某氨基酸营养缺陷型突变株的部分流程图，①②③④代表培养基，A、B、C表示操作步骤，D、E为菌落。下列叙述错误的是（ ）
A. 图中①②④为基本培养基，③为完全培养基
B. 紫外线的目的是提高突变率，增加突变株的数量
C. B的正确操作是用涂布器把菌液均匀地涂布在②表面
D. 经C过程原位影印及培养后，可从④中挑取D进行纯化培养
19. 如表列举了几种限制酶识别序列及其切割位点（箭头表示相关酶的切割位点）。图是酶切后产生的几种末端。下列说法正确的是（ ）
A. BamHⅠ切割的是氢键，AluⅠ切割的是磷酸二酯键
B. Sau3AⅠ和BamHⅠ切割产生的片段能够相连，但连接后的片段两者都不能再切割
C. ②④⑤对应的识别序列均能被Sau3AⅠ识别并切割
D. T4DNA连接酶即能连接①③，也能连接②⑤，但后者连接效率低
20. 花椰菜易受黑腐病病原菌的危害而患黑腐病，野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用一定剂量的紫外线照射黑芥原生质体可使其染色体片段化，并丧失再生能力。再利用此原生质体作为部分遗传物质的供体与完整的花椰菜原生质体融合，可获得抗黑腐病杂种植株，流程如图。据图分析，下列叙述错误的是（ ）
A. 原生质体培养液中需要加入适宜浓度的甘露醇，其作用是有利于保持原生质体的完整性
B. 融合的活细胞中叶绿体的存在可作为初步筛选杂种细胞的标志
C. 原生质体经过细胞壁再生，进而脱分化和再分化形成愈伤组织
D. 对杂种植株进行黑腐病病原菌接种实验，可筛选出具有抗黑腐病能力的杂种植株
21. 下图表示三亲绵羊的培养过程，下列相关说法错误的是（ ）
A. 三亲绵羊细胞中的染色体只来自绵羊甲和绵羊丙
B. 可用紫外线短时间照射的方法对绵羊乙的卵母细胞去核
C. 图示方法可避免携带有线粒体致病基因的绵羊甲产下患该病的子代
D. 受精卵发育成原肠胚再通过胚胎移植的方式在绵羊甲子宫内发育成幼体
22. 金茶花是中国特有的观赏品种，但易得枯萎病。科学家在某种植物中找到了抗枯萎病的基因，通过下图所示的方法培育出了抗枯萎病的新品种，①—⑤分别生物或生物的部分结构代表。下列相关叙述正确的是（ ）
A. ②需插入①的T-DNA片段中，便于整合到金茶花细胞染色体DNA上
B. ⑤从培养室取出后直接用流水冲洗掉幼苗根部培养基，再移栽到育苗盘中
C. 抗病金茶花植株不同部位的细胞经培养获得的愈伤组织的基因型一定相同
D. 在⑤幼苗中检测到抗枯萎病基因标志着成功培育新品种
23. 目前临床上诊断新冠感染疑似患者的常用方法是先进行咽拭子取样，再用实时荧光RT-PCR检测。如图为RT-PCR技术的原理，数字①-③为相关步骤。在PCR过程中探针和引物一起与模板结合，探针两侧分别带有荧光基团和淬灭基团（抑制荧光发出），当酶催化子链延伸至探针处时会水解探针，导致荧光基团与淬灭基团分离而发出荧光。下列叙述错误的是（ ）
A. 若检测结果有强烈荧光信号发出，说明被检测者可能感染了病毒
B. 最终监测的荧光强度与起始时反应管内样本DNA的含量呈正相关
C. 荧光基因R连接在DNA探针的3’端，探针可以由新冠病毒的RNA特定序列逆转录获得
D. 该反应体系中虽未加入ATP，但新链的合成还是需要消耗能量的
24. 紫杉醇是红豆杉属植物产生一种次生代谢产物，具有抑制纺锤丝解聚，阻止染色体运动的作用，可用于某些癌症的治疗。某研究小组利用含3H标记的胸腺嘧啶脱氧核苷（3H-TdR）细胞培养液、紫杉醇对乳腺癌细胞（核DNA为2N）进行了培养，如下图所示。下列叙述错误的是（ ）
A. 紫杉醇对正常的细胞不会产生毒副作用
B. 甲、乙两瓶中，核DNA含量为4N的细胞占比较高的是乙瓶
C. 甲瓶中大量的3H-TdR会在S期进入细胞核
D. 培养所用的卡氏瓶有利于乳腺癌细胞的贴壁生长
25. 某单基因遗传病患者的家系如图1，研究人员采集了部分家系成员的DNA，对于该病相关基因的特异性片段（长度400bp，bp代表碱基对）进行PCR扩增，然后用限制性内切核酸酶HhaⅠ对其切割，进行琼脂糖凝胶电泳分析，结果如图2．下列分析错误的是（ ）
A. II-3的致病基因来自I-3
B. 该致病基因片段上没有HhaⅠ酶切点
C. Ⅲ-2成年后进行产前诊断时可参考胎儿的性别判断其患病概率
D. Ⅱ-2与Ⅱ-3再生育两个孩子（非同卵双胞胎），其中一个正常的概率是3/8
二、非选择题（本大题共4小题，除标注外，每空1分，共50分）
26. 滩涂野耐盐大豆细胞具有耐盐特性，普通高产大豆植物具有高产特性。下图是科学家利用这两种植物细胞进行体细胞杂交培育“耐盐-高产大豆”新品种的过程，数字①-⑤为相关过程。请回答下列问题：
（1）愈伤组织是未分化的细胞，具有_____等特点（答出两点）。
（2）图中过程①使用了_____酶和_____酶去除细胞壁，获得植物原生质体。若过程②形成的细胞均为2个细胞融合而来，则经过该过程后，产生的融合细胞最多有_____种。
（3）培养过程运用了多种植物细胞工程技术，其中过程②③涉及_____技术，过程④⑤涉及_____技术。图中试管苗的形成是愈伤组织经过过程⑤_____实现的。
（4）科学家在甲瓶的培养基中加入了0．6%的NaCl，发现仅有部分细胞转变为愈伤组织，未转变为愈伤组织的细胞是_____（填“滩涂野耐盐大豆细胞”“普通高产大豆细胞”或“杂种细胞”）。
（5）除了上述办法，还可以采用其他思路获得“耐盐-高产大豆”新品种，请简要列举一种思路_____。
27. 新型冠状病毒抗原检测试剂盒是相对比较简便、快速的检测方法，抗原检测试剂盒的生产依赖于新型冠状病毒单克隆抗体的制备。制取新型冠状病毒S蛋白的单克隆抗体部分过程如下图所示，请回答下列问题：
（1）图中操作a是指对小鼠注射_____，之后一般从该小鼠的_____中提取淋巴细胞，并在体外让淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合。与诱导植物原生质体融合相比，诱导动物细胞融合的特有方法是_____。
（2）诱导融合后至少要经过两次筛选，图中的筛选1是指利用HAT选择培养基将具有_____特点的_____细胞筛选出来；筛选2需要将细胞接种到多孔培养板上，每个孔接种_____个细胞，取上清液作为待测样本进行抗体阳性检测，检测原理如下图所示：
加入酶标抗体一段时间后，需要将未与_____结合的酶标抗体洗脱。据图可知在抗体检测中，杂交瘤细胞呈阳性的判断依据为_____。
（3）单克隆抗体的优点是_____（答出两点）。利用筛选出的符合要求的细胞生产单克隆抗体，既可以将细胞注入小鼠腹腔内进行生产，也可以在体外生产，两种方式相比，后者的优点是_____。
28. 19世纪末，巴斯德开创了第一次疫苗革命，其特点是接种灭活或减毒的病原微生物。20世纪70年代开始，现代生物技术的迅猛发展开创了第二次疫苗革命，使疫苗的研制进入分子水平。图1是通过基因工程制备乙型肝炎表面抗原（HbsAg）从而获得乙肝疫苗的过程，数字①-⑦为相关步骤。
在图1步骤①和③中，需要用合适的限制酶切割乙肝表面抗原基因和质粒。乙肝表面抗原基因及质粒的部分限制酶的识别序列及位置如图2。启动子是质粒中基因得以正常表达所必需的部分。LacZ基因控制合成某种酶，该酶能将无色染料X-gal变成蓝色，最终能在含无色染料X-gal的培养基上将含该基因的菌落染成蓝色。
（1）在图1步骤④中，使用的基因工程工具酶是_____，将一个乙肝表面抗原基因与一个质粒重组的过程中，游离的磷酸基团数目减少_____个。
（2）根据图2，为了避免自身环化及便于筛选，切割质粒选用的限制酶是_____，获得乙肝表面抗原基因选用的限制酶是_____。
（3）为筛选含有乙肝表面抗原的大肠杆菌细胞，需要将大肠杆菌接种到含_____的固体培养基上，挑选_____的菌落纯化培养。
（4）若运用PCR技术检测乙肝表面抗原基因是否导入，需根据目的基因的序列设计_____，利用待检DNA为模板进行PCR。PCR过程包括多次循环，每个循环分为3个步骤：_____→_____→延伸。若基因导入成功PCR过程中至少复制_____次可以得到两条链等长的目的基因。
（5）利用基因工程生产乙肝疫苗比灭活的乙肝病毒的疫苗安全性更_____，原因是_____。
29. 四尾栅藻具有环境适应能力强和生长速度快等优点，如果能将其进行品种改良，提高含油量，有望解决微藻生物柴油产业化进程的瓶颈。研究人员利用基因工程技术将油料作物紫苏DGAT1基因导入四尾栅藻，获得转基因的产油微藻，利用地热废水培养，不仅能生产生物柴油，还能治理地热废水。操作过程如下图，请回答下列问题：
注：LacZ基因编码产生的酶可以分解物质X-gal，从而使菌落显现出蓝色。若无该基因或该基因被破坏，则菌落呈白色。
（1）将质粒pMD19-DGAT1导入大肠杆菌前，通常先用Ca2+处理大肠杆菌，使细胞处于一种_____________的生理状态。
（2）为了便于筛选含pMD19-DGAT1重组质粒的大肠杆菌，该选择培养基中应添加_____________物质。在培养基中挑取_______________ 颜色的大肠杆菌菌落可提取该质粒并获取目的基因。
（3）由上图推测，用______________和_____________酶切割pMD19-DGAT1获得DGATI基因，并与酶切后的载体pBI121连接再次构建基因表达载体，用这两种酶切割的目的是_____________。
（4）启动子往往具有物种特异性，在载体pBI121质粒中插入紫苏DGAT1基因，其上游启动子应选择______________（填字母）。
A. 紫苏DGAT1基因启动子B. 四尾栅藻启动子C. 大肠杆菌启动子
（5）为了判断DGAT1基因是否导入四尾栅藻细胞，可利用_____________（中文全称）等技术进行检测。
（6）为检测转基因四尾栅藻对地热废水的去污能力，研究人员设计实验并得到相应实验结果如下表。
该实验不能说明转DGAT1基因显著提高了四尾栅藻的去污能力。请进一步完善实验设计_____________________________________________________。
30. 青蒿素是有效的抗疟疾药物，但野生黄花蒿中青蒿素的产量较低。为缓解青蒿素供应不足的状况，科学家将基因tms和tmr导入黄花蒿的愈伤组织，获得了黄花蒿的冠瘿组织，改造过程用到的部分结构如图所示，回答下列问题：
（1）科学家将目的基因导入黄花蒿愈伤组织细胞常用的方法是____。此方法需将目的基因插入黄花蒿愈伤组织细胞Ti质粒的____，通过农杆菌的转化作用将其整合到黄花蒿愈伤组织细胞的____。
（2）图中结构P、T是基因成功转录的保证，其中结构P位于基因的首端，称为____其作用是____。为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，并将含有目的基因的细胞筛选出来，图中还缺少的结构是____。构建重组DNA的目的是____。
（3）要检测目的基因是否导入冠瘿组织细胞的染色体DNA上，可采用____等技术。限制酶
AluI
BamHI
SmaI
Sau3AI
识别序列
指标
总氮（mg/L）
总磷（mg/L）
氟化物（mg/L）
废水培养基
23.2
4.32
4.56
培养转基因四尾栅藻11天后
1.9
0.45
0.84
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