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山东省枣庄市滕州市2023-2024学年高二下学期4月期中生物试题（原卷版+解析版）
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这是一份山东省枣庄市滕州市2023-2024学年高二下学期4月期中生物试题（原卷版+解析版），文件包含山东省枣庄市滕州市2023-2024学年高二下学期4月期中生物试题原卷版docx、山东省枣庄市滕州市2023-2024学年高二下学期4月期中生物试题解析版docx等2份试卷配套教学资源，其中试卷共40页， 欢迎下载使用。
1．答卷前，考生务必用2B铅笔和0.5毫米黑色签字笔（中性笔）将姓名、准考证号、考试科目、试卷类型填涂在答题卡规定的位置上。
2．第I卷每小题选出答案后，用2B铅笔把答题卡上对应的答案标号涂黑；如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其他答案标号。
3．第Ⅱ卷必须用0.5毫米黑色签字笔（中性笔）作答，答案写在答题卡的相应位置上。
一、选择题：本题共15小题，小题给出的四个选项中，只有一个选项是最符合题目要求的。
1. 我国的酿酒技术历史悠久，古人在实际生产中积累了很多经验。《齐民要术》记载：“世人云：米过酒甜，此乃不解法候。酒冷沸止，米有不消者，便是曲势尽。”下列有关叙述不正确的是（ ）
A. “米过酒甜”是因为米中糖类物质过量，发酵停止时仍未被完全消耗
B. “酒冷沸止”说明微生物的代谢产热和释放CO2逐渐停止
C. “曲势尽”的原因可能是米酒中pH或酒精含量升高
D. 酿制米酒所用微生物的呼吸类型为兼性厌氧
2. 下列实验条件的改变，对实验结果影响最小的是（ ）
A. 用伊红代替刚果红制备培养基鉴别土壤中的纤维素分解菌
B. 用解离液代替胰蛋白酶处理幼龄动物组织获取分离的细胞
C. 用2ml/LNaCl溶液代替无水乙醇析出较为纯净的DNA
D. 用乙醇代替葡萄糖作为底物用于醋酸菌制作各种风味的醋
3. 利用传统的纯粮固态发酵工艺生产高品质白酒过程中有多种微生物参与：将谷物中的大分子物质分解为小分子糖类等物质的a类菌种、将糖类发酵产生酒精的b类菌种、将酒精转化为醋酸的c类菌种、将酒精和酸性物质等转化为有香味酯的d类菌种。下列说法正确的是（ ）
A. 产酒过程中需经常搅拌原料以增加b类菌种发酵所需氧气
B. 可以使用以纤维素为唯一碳源的培养基来筛选a类菌种
C. 不同白酒的品质差异只取决于d类菌种
D. 控制温度在18～25℃有利于抑制c类菌种的生长而增加产酒量
4. 微生物的实验室培养，获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌入侵。下列关于微生物培养和利用的操作中，正确的是（ ）
A. 对锥形瓶、塞上棉塞的试管、吸管等，用干热灭菌箱进行灭菌
B. 对操作者的双手、衣着以及操作空间等，采用紫外线进行消毒
C. 接种前要了解固体培养基是否被污染可接种蒸馏水来培育检测
D. 高压蒸汽灭菌锅是以水蒸气为介质。在压力为100KPa、温度为121℃的条件下维持2～3h来灭菌的。
5. 野生型菌株在基本培养基和完全培养基上均可繁殖，而营养缺陷型菌株只能在完全培养基上繁殖。筛选营养缺陷型菌株时，可将含菌株的一层基本培养基置于两层基本培养基中先进行培养，待出现菌落后，再向上层倾倒一层完全培养基继续培养，该方法称为夹层平板法，如图1所示。研究人员对大肠杆菌的菌种进行诱变后，利用该方法筛选其中的营养缺陷型菌株，结果如图2所示。下列说法正确的是（ ）
A. 完全培养基应在灭菌后立即倒入夹层平板中
B. 该实验无需设置未接种的夹层平板作为对照
C. 经培养后，对首次出现的菌落用记号笔标在皿盖
D. 图2中的小型菌落可能为营养缺陷型菌株形成的新生菌落
6. 中国科学家运用合成生物学方法构建了一株嗜盐单胞菌H，其以糖蜜（甘蔗榨糖后的废弃液，含较多蔗糖）为原料，在实验室通过发酵生产出PHA等新型高附加值可降解材料，从而提高了甘蔗的整体利用价值。具体的工艺流程如下图所示。下列说法正确的是（ ）
A. 为提高菌株H对蔗糖的耐受能力和利用效率，应在液体培养基中添加包含蔗糖在内的多种有机物作为碳源，并不断提高蔗糖的浓度
B. 为统计培养液中H菌的数目，可在培养过程中定期取样并采用平板划线法进行菌落计数
C. 若菌株H具有嗜盐、酸碱耐受能力强等特性，则发酵系统不需要进行灭菌处理
D. 若在适宜营养物浓度、温度和pH条件下发酵，菌株H细胞增殖和PHA产量均未达到预期且产生了少量的乙醇，则说明氧气是高密度培养的限制因素
7. 高压蒸汽条件下持续20分钟会杀死芽孢，因此无菌操作中可利用非致病性的嗜热脂肪杆菌的芽孢作为指示菌来测定灭菌的效果。灭菌时在高压蒸汽灭菌锅的适当位置放置含有生物指示剂的培养液和含芽孢的菌片。灭菌结束后在塑料瓶外挤破含有培养液的玻璃瓶，使嗜热脂肪杆菌菌片浸没在紫色培养液内并进行培养，如下图所示。若芽孢可以生长会使培养液变为黄色。下列叙述错误的是（ ）
A. 嗜热脂肪杆菌的芽孢耐热性较强，常用作指示菌来测定灭菌的效果
B. 灭菌后含有嗜热脂肪杆菌菌片的紫色培养液属于鉴别培养基
C. 湿热灭菌可利用沸水、流通蒸汽或高压蒸汽进行灭菌
D. 若培养液颜色为黄色而阳性对照组颜色没有变化，说明达到灭菌目的
8. 某同学在学习“细胞工程”时，列表比较了动植物细胞工程的有关内容，你认为错误的是（ ）
A. AB. BC. CD. D
9. 花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病。野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用一定剂量的紫外线处理黑芥原生质体可使其染色体片段化，并丧失再生能力。再利用此原生质体作为部分遗传物质的供体与完整的花椰菜原生质体融合，以获得抗黑腐病杂种植株。流程如下图：下列表述正确的是（ ）
A. ③和④过程涉及的激素主要是生长素和赤霉素
B. 用①处理细胞时需要在较高渗透压溶液中进行
C. 灭活是指利用物理或化学手段破坏病毒或细菌的抗原结构进而使其失去感染能力，但是灭活的仙台病毒不可促进②过程
D. 显微镜下供体染色体的存在可作为初步筛选杂种细胞的标志
10. 治疗性克隆对解决供体器官缺乏和器官移植后免疫排斥反应具有重要意义，具体流程如下图所示，下列说法中不正确的是（ ）
A. 个体A提供的卵母细胞通常是指初级卵母细胞
B. 超数排卵是利用外源促性腺激素诱发卵巢排出更多卵子
C. 若将图中获得的组织器官移植至个体A，会发生免疫排斥反应
D. 我国禁止生殖性克隆，主张对治疗性克隆进行有效监管和严格审查
11. CD47是一种跨膜糖蛋白。它可与巨噬细胞表面的信号调节蛋白结合，从而抑制巨噬细胞的吞噬作用。肺癌、结肠癌等多种肿瘤细胞表面的CD47含量比正常细胞高1.6～5倍，导致巨噬细胞对肿瘤细胞的清除效果减弱。为证明抗CD47的单克隆抗体可以解除CD47对巨噬细胞的抑制作用，科学家按照如下图流程进行了实验。下列叙述不正确的是（ ）
A. 多次进行步骤①的目的是获得更多分泌抗CD47抗体的浆细胞
B. 体外培养单个B细胞也可获得大量抗CD47的单克隆抗体
C. 经筛选可得到既能产生抗CD47抗体又能无限增殖的杂交瘤细胞
D. 对照组应在巨噬细胞+正常细胞共培养，体系中不加单克隆抗体
12. 植物细胞壁中存在大量不能被动物消化的多聚糖类物质，研究人员通过生物工程技术培育出含多聚糖水解酶基因猪，主要流程如下图，①～⑤表示操作过程。下列有关说法错误的是（ ）
A. 基因表达载体中构建诱导型启动子，可以利用诱导物激活多聚糖水解酶基因表达
B. 用蛋白酶合成抑制剂激活③过程形成的重构胚使其完成分裂和发育进程
C. 从卵巢中采集的卵母细胞需培养到MⅡ期后用显微操作技术去除核膜包裹的细胞核
D. ④过程的实质是早期胚胎在相同生理环境下空间位置的转移
13. 用限制酶EcRV单独切割某普通质粒，可产生14kb（1kb即1000个碱基对）的长链，而同时用限制酶EcRV、MbI联合切割该质粒，可得到三种长度的DNA片段，见下图（其中*表示EcRV限制酶切割后的一个黏性末端）。下列关于质粒的叙述，正确的是（ ）
A. 质粒是广泛存在于细菌细胞中的一种颗粒状细胞器
B. 质粒是真核细胞或原核细胞中只能在细胞质中进行自我复制的小型环状DNA分子
C. 若用MbI限制酶单独切割该普通质粒，则产生的DNA片段的长度为5.5和8
D. 农杆菌内含有Ti质粒，在自然条件下可侵染双子叶植物和裸子植物
14. HA蛋白是禽流感病毒的重要抗原。鸡卵清蛋白是由输卵管上皮细胞中卵清蛋白基因特异性表达后分泌至输卵管内，参与构成鸡蛋清的蛋白质。下图是利用基因工程技术制备HA蛋白鸡输卵管生物反应器的过程。几种可供选择的限制酶识别序列如下，下列说法错误的是（ ）
A. ①为逆转录过程，该过程需要逆转录酶、4种游离的脱氧核苷酸等组分
B. 启动子是转录的起点，是RNA聚合酶识别和结合的部位
C. 目的基因与鸡卵清蛋白基因启动子拼接前应先在目的基因两端分别引入HindⅢ和EcRI的识别序列
D. 基因表达载体导入受精鸡胚的胚盘可以使用显微注射法
15. 研究发现，胰岛素进入血液循环后容易被降解，糖尿病患者需要反复注射胰岛素才能达到治疗效果。科研人员借助蛋白质工程改变了胰岛素中的某些氨基酸，提高了胰岛素在患者体内的稳定性，延长了其作用时间。下列有关叙述错误的是（ ）
A. 蛋白质工程的实质是在DNA分子水平上进行设计和改造蛋白质
B. 氨基酸序列的差异是影响胰岛素在患者体内是否稳定的原因之一
C. 蛋白质工程难度很大与蛋白质发挥功能必须依赖于正确的高级结构有关
D. 改造胰岛素应首先从设计胰岛素基因中脱氧核苷酸序列出发
二、不定项选择题，本题共5小题。每小题给出的四个选项中，有的只有一个选项正确，有的有多个选项正确。
16. 我国有历史悠久的传统发酵技术，以此为基础发展起来的发酵工程实现了发酵食品、药物等工业化生产，极大地改善了人们的生活。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 腐乳鲜味来源于毛霉等微生物分泌的蛋白酶对豆腐中蛋白质的分解
B. 酿制啤酒时，焙烤是为了加热杀死种子胚，终止酶的进一步作用
C. 将乙型肝炎病毒的抗原基因转入酵母菌，再通过发酵可生产乙型肝炎疫苗
D. 利用酵母菌等菌种的发酵工程生产的单细胞蛋白，可作为食品添加剂
17. miRNA是一类真核生物中广泛存在的单链非编码RNA分子．成熟的miRNA与AGO家族蛋白结合形成沉默复合体，该复合体可通过识别和结合靶基因转录出的mRNA并对其进行剪切或抑制其翻译过程，从而调控生物性状。下列相关分析正确的是（ ）
A. miRNA基因的表达包括转录和翻译两个阶段
B. 沉默复合体发挥作用的场所是细胞核
C. 利用PCR技术可检测靶基因转录出的mRNA的相对含量
D. 沉默复合体通过碱基互补配对的方式识别靶基因并抑制其表达
18. 用PCR方法检测转基因植株是否成功导入目的基因时，得到以下电泳图谱，其中1号为DNA标准样液（Marker），10号为电泳缓冲液。进行PCR时加入的模板DNA如图所示。据此做出分析正确的是（ ）
A. 在凝胶中，DNA的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子的大小等有关，与DNA构象无关
B. PCR产物的分子大小在250～500bp之间，9号样品对应植株不是所需的转基因植株
C. 10号的电泳结果能确定反应体系等对实验结果没有干扰
D. 电泳鉴定时，如果扩增结果不止一条条带可能是因为引物设计过短、退火温度过低等原因
19. 新冠病毒可通过表面的刺突蛋白（S蛋白）与人呼吸道黏膜上皮细胞的ACE2受体结合，侵入人体从而引起肺炎．单克隆抗体可阻断病毒的黏附或入侵，抗体药物的研发已成为治疗新冠肺炎的研究热点之一。如图为筛选、制备抗S蛋白单克隆抗体的示意图。下列相关叙述，错误的是（ ）
A. 研制抗S蛋白单克隆抗体，需先注射刺突蛋白对小鼠进行免疫以获得相应抗体
B. 在产生免疫反应的小鼠脾脏细胞中提取B淋巴细胞并诱导其与骨髓瘤细胞融合
C. 经HAT培养基筛选得到杂交瘤细胞经克隆化培养后可直接用于单克隆抗体生产
D. 单克隆抗体可用来制备治疗癌症的“生物导弹”是因为单克隆抗体能杀伤癌细胞
20. PCR引物的3'端为结合模板DNA的关键碱基，5'端无严格限制，可用于添加限制酶切点等序列如下图。下列叙述不正确的是（ ）
A. 当温度下降到65℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合
B. 一个DNA分子经PCR进行4个循环后共消耗了15对引物
C. PCR反应缓冲液中一般要添加镁离子，因为真核细胞和细菌的DNA聚合酶都需要镁离子激活
D. 用图中引物扩增至少四个循环后才能获得两端均添加限制酶切点的目的产物
三、非选择题。
21. 科学家通过诱导黑鼠体细胞去分化获得诱导性多能干细胞（iPS），继而利用iPS细胞培育出与黑鼠遗传特性相同的克隆鼠，流程如图。
（1）从黑鼠体内获得体细胞后，对其进行的初次培养称为____。在培养iPS细胞的过程中，培养基中应含有细胞所需的各种营养物质，并定期更换培养液。定期更换培养液的目的是____。
（2）为提高后代雌性概率，可对可用胚胎的滋养层细胞的DNA进行PCR，选择SRY基因（该基因位于Y染色体上的性别决定基因）____（填“阳性”或“阴性”）的胚胎进行移植。
（3）代孕个体对移入子宫的重构胚____，这为胚胎在受体内的____提供了可能。
（4）胚胎分割可以增加胚胎数量，在对胚胎进行分割时要注意____。
22. 饲养动物常用的植物饲料中含有难溶的植酸钙等物质，很难被动物吸收利用，还影响对其他营养物质的利用。若在饲料中添加植酸酶，则能催化其水解成为可以吸收利用的磷酸盐等。以下是科研人员从作物根部土壤中分离产植酸酶的菌株的过程示意图。请分析作答。
（1）培养基中除了添加____、____以外，应含有碳源、氮源、水、无机盐等基本营养物质。
（2）接种前进行的一系列操作，目的是____。统计平板上的菌落数，就能大致推测出样品中的活菌数。通常每种稀释液需涂布3个平板，取其平均值，若将最后一个试管中的菌液每次吸取0.1mL涂布培养后获得平均值是28，则1g土壤中含有此菌的菌株数是____。该方法统计获得的菌落数比实际的活菌数____，原因是____。
（3）若要对上述菌株进行进一步纯化，通常使用的划线工具是____；接种时，在第一区域划线后须将该工具____后再划线。
（4）产植酸酶的菌株会水解植酸钙，菌落的周围将形成透明的区域，根据透明区域的有无，可初步判断该菌是否产植酸酶。实验结果显示A—E五种菌株中，____是产植酸酶最理想的菌株。
23. 蒂蛀虫是荔枝的重要害虫。科研人员培育转基因抗虫荔枝的过程如下图1所示。图2是SalI、HindⅢ和BamHI三种限制酶的识别序列和切割位点。请回答下列问题：
（1）受体农杆菌细胞在导入重组Ti质粒前，需要先用Ca2+处理，其目的是____。外植体（幼嫩的茎段）经过____形成愈伤组织。在愈伤组织形成的过程中，导致外植体被污染的原因可能是____（答出一点即可）。
（2）研究人员采用了如下图3巢式PCR技术获取抗虫基因，巢式PCR是一种变异的聚合酶链反应（PCR），使用两对PCR引物扩增完整的片段。第一对PCR引物（也称外引物）扩增片段和普通PCR相似。第二对引物称为巢式引物（因为他们在第一次PCR扩增片段的内部，也称内引物）结合在第一次PCR产物内部，使得第二次PCR扩增片段短于第一次扩增。
图3
①PCR产物常采用____来鉴定。
②相比于常规PCR，巢式PCR获得错误目标产物概率____，这是因为____。
③为了使抗虫基因定向插入质粒中，第二次PCR扩增时需要在两个引物5'端分别添加的序列是____。
（3）科研人员采用农杆菌转化法将抗虫基因导入荔枝细胞，由于农杆菌中的Ti质粒含有一段____，能携带目的基因进入受体细胞，并将目的基因整合到受体细胞染色体DNA上。
（4）培育出的荔枝是否具有抗虫性状；可采用鉴定方法是____。
24. 人参和西洋参是五加科人参属药用植物，它们含有的人参皂苷具有抗肿瘤等作用。科研人员选用人参和西洋参有性杂交获得的杂种胚细胞以及人参种子胚、西洋参种子胚的愈伤组织进行悬浮细胞培养，建立其单细胞株系并对三者的部分特性进行比较研究，下图1是主要流程：
（1）过程④优化悬浮细胞培养体系，最重要的条件是蔗糖浓度的筛选，蔗糖浓度过低和过高均不利于悬浮细胞的培养，原因是____。
（2）科研人员研究了三种愈伤组织中的人参皂苷Re、Rg3、Rb1和M-Rb1含量，结果见图2，其中Re具有治疗心肌缺血的功能，Rg3具有抗癌作用。若要获得具有抗癌作用的药物应优先选择____的愈伤组织。
（3）科研人员继续研究了Rg3和常见的化疗药物5-FU对肿瘤的抑制效果：
①首先培养胃癌细胞，培养液中加入胎牛血清的目的是____。培养条件中5%CO2的作用是____，温度为37℃。将准备好的胃癌细胞悬浊液皮下接种小鼠裸鼠，每只裸鼠接种0.1mL细胞悬浊液。接种后2周可见背部长出肿块，证明接种成功。
②将上述40只裸鼠随机分为四组，生理盐水组对照组、5-FU组、Rg3组和5-FU+Rg3组（联合给药组）。各组均采用腹腔注射给药，给药前测定肿瘤的体积，给药后每2日测量1次肿瘤体积。请根据图3写出计算肿瘤体积变化的公式：____。根据实验结果可以得出的结论有____。
25. 哺乳动物体内一定含量的w—3多不饱和脂肪酸（LCPUFA）可以起到预防心血管疾病的作用，但LCPUFA在大多数动物体内不能合成，只能从食物中摄取。科研人员从秀丽隐杆线虫中获得LCPUFA合成酶基因fat—1（1229bp），培育转fat-1基因家兔，其部分流程如图一所示。
（1）PCR扩增fat-1基因的前提是____，以用于特异性制备PCR扩增需要的引物。PCR扩增过程中，经过5轮循环后，得到的产物中只含一种引物的DNA分子占比为____。
（2）在构建PEBf质粒时，为确保fat-1基因按正确方向插入，需要双酶切，还需对fat-1基因的引物进行相应设计。已知fat-1基因转录的模板链为a链，与b链结合的引物5端添加了限制酶识别序列GAATTC，则另一引物5’端需添加的限制酶识别序列为____，理由是____。
（3）转染是将外源分子如DNA、RNA等导入真核细胞的技术。为了检验图一家兔成纤维细胞是否转染成功，科研人员分别提取培养液中各细胞的DNA，利用fat-1基因引物进行PCR扩增后电泳，部分结果如图二所示。据图分析，1组和2组分别是____细胞组PCR产物。
（4）检测转基因家兔细胞中是否含有LCPUFA合成酶，可采用____技术。如果fat-1基因已正确插入PEB质粒且成功转染，但在转基因家兔细胞中没有检测到LCPUFA合成酶，从构建基因表达载体的角度分析，可能的原因是____。比较内容
植物体细胞杂交
动物细胞融合
A
特殊处理
用酶解法（纤维素酶和果胶酶）去除细胞壁
用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理可分离出单个细胞
B
诱导融合手段
离心法、电融合法、聚乙二醇融合法等
PEG融合法、电融合法、灭火病毒诱导法等
C
典型应用
培育种间杂种植物
培养克隆动物
D
培养基区别
通常为固体培养基，含蔗糖和植物激素等
液体培养基，含葡萄糖，含有动物血清等
1．答卷前，考生务必用2B铅笔和0.5毫米黑色签字笔（中性笔）将姓名、准考证号、考试科目、试卷类型填涂在答题卡规定的位置上。
2．第I卷每小题选出答案后，用2B铅笔把答题卡上对应的答案标号涂黑；如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其他答案标号。
3．第Ⅱ卷必须用0.5毫米黑色签字笔（中性笔）作答，答案写在答题卡的相应位置上。
一、选择题：本题共15小题，小题给出的四个选项中，只有一个选项是最符合题目要求的。
1. 我国的酿酒技术历史悠久，古人在实际生产中积累了很多经验。《齐民要术》记载：“世人云：米过酒甜，此乃不解法候。酒冷沸止，米有不消者，便是曲势尽。”下列有关叙述不正确的是（ ）
A. “米过酒甜”是因为米中糖类物质过量，发酵停止时仍未被完全消耗
B. “酒冷沸止”说明微生物的代谢产热和释放CO2逐渐停止
C. “曲势尽”的原因可能是米酒中pH或酒精含量升高
D. 酿制米酒所用微生物的呼吸类型为兼性厌氧
2. 下列实验条件的改变，对实验结果影响最小的是（ ）
A. 用伊红代替刚果红制备培养基鉴别土壤中的纤维素分解菌
B. 用解离液代替胰蛋白酶处理幼龄动物组织获取分离的细胞
C. 用2ml/LNaCl溶液代替无水乙醇析出较为纯净的DNA
D. 用乙醇代替葡萄糖作为底物用于醋酸菌制作各种风味的醋
3. 利用传统的纯粮固态发酵工艺生产高品质白酒过程中有多种微生物参与：将谷物中的大分子物质分解为小分子糖类等物质的a类菌种、将糖类发酵产生酒精的b类菌种、将酒精转化为醋酸的c类菌种、将酒精和酸性物质等转化为有香味酯的d类菌种。下列说法正确的是（ ）
A. 产酒过程中需经常搅拌原料以增加b类菌种发酵所需氧气
B. 可以使用以纤维素为唯一碳源的培养基来筛选a类菌种
C. 不同白酒的品质差异只取决于d类菌种
D. 控制温度在18～25℃有利于抑制c类菌种的生长而增加产酒量
4. 微生物的实验室培养，获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌入侵。下列关于微生物培养和利用的操作中，正确的是（ ）
A. 对锥形瓶、塞上棉塞的试管、吸管等，用干热灭菌箱进行灭菌
B. 对操作者的双手、衣着以及操作空间等，采用紫外线进行消毒
C. 接种前要了解固体培养基是否被污染可接种蒸馏水来培育检测
D. 高压蒸汽灭菌锅是以水蒸气为介质。在压力为100KPa、温度为121℃的条件下维持2～3h来灭菌的。
5. 野生型菌株在基本培养基和完全培养基上均可繁殖，而营养缺陷型菌株只能在完全培养基上繁殖。筛选营养缺陷型菌株时，可将含菌株的一层基本培养基置于两层基本培养基中先进行培养，待出现菌落后，再向上层倾倒一层完全培养基继续培养，该方法称为夹层平板法，如图1所示。研究人员对大肠杆菌的菌种进行诱变后，利用该方法筛选其中的营养缺陷型菌株，结果如图2所示。下列说法正确的是（ ）
A. 完全培养基应在灭菌后立即倒入夹层平板中
B. 该实验无需设置未接种的夹层平板作为对照
C. 经培养后，对首次出现的菌落用记号笔标在皿盖
D. 图2中的小型菌落可能为营养缺陷型菌株形成的新生菌落
6. 中国科学家运用合成生物学方法构建了一株嗜盐单胞菌H，其以糖蜜（甘蔗榨糖后的废弃液，含较多蔗糖）为原料，在实验室通过发酵生产出PHA等新型高附加值可降解材料，从而提高了甘蔗的整体利用价值。具体的工艺流程如下图所示。下列说法正确的是（ ）
A. 为提高菌株H对蔗糖的耐受能力和利用效率，应在液体培养基中添加包含蔗糖在内的多种有机物作为碳源，并不断提高蔗糖的浓度
B. 为统计培养液中H菌的数目，可在培养过程中定期取样并采用平板划线法进行菌落计数
C. 若菌株H具有嗜盐、酸碱耐受能力强等特性，则发酵系统不需要进行灭菌处理
D. 若在适宜营养物浓度、温度和pH条件下发酵，菌株H细胞增殖和PHA产量均未达到预期且产生了少量的乙醇，则说明氧气是高密度培养的限制因素
7. 高压蒸汽条件下持续20分钟会杀死芽孢，因此无菌操作中可利用非致病性的嗜热脂肪杆菌的芽孢作为指示菌来测定灭菌的效果。灭菌时在高压蒸汽灭菌锅的适当位置放置含有生物指示剂的培养液和含芽孢的菌片。灭菌结束后在塑料瓶外挤破含有培养液的玻璃瓶，使嗜热脂肪杆菌菌片浸没在紫色培养液内并进行培养，如下图所示。若芽孢可以生长会使培养液变为黄色。下列叙述错误的是（ ）
A. 嗜热脂肪杆菌的芽孢耐热性较强，常用作指示菌来测定灭菌的效果
B. 灭菌后含有嗜热脂肪杆菌菌片的紫色培养液属于鉴别培养基
C. 湿热灭菌可利用沸水、流通蒸汽或高压蒸汽进行灭菌
D. 若培养液颜色为黄色而阳性对照组颜色没有变化，说明达到灭菌目的
8. 某同学在学习“细胞工程”时，列表比较了动植物细胞工程的有关内容，你认为错误的是（ ）
A. AB. BC. CD. D
9. 花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病。野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用一定剂量的紫外线处理黑芥原生质体可使其染色体片段化，并丧失再生能力。再利用此原生质体作为部分遗传物质的供体与完整的花椰菜原生质体融合，以获得抗黑腐病杂种植株。流程如下图：下列表述正确的是（ ）
A. ③和④过程涉及的激素主要是生长素和赤霉素
B. 用①处理细胞时需要在较高渗透压溶液中进行
C. 灭活是指利用物理或化学手段破坏病毒或细菌的抗原结构进而使其失去感染能力，但是灭活的仙台病毒不可促进②过程
D. 显微镜下供体染色体的存在可作为初步筛选杂种细胞的标志
10. 治疗性克隆对解决供体器官缺乏和器官移植后免疫排斥反应具有重要意义，具体流程如下图所示，下列说法中不正确的是（ ）
A. 个体A提供的卵母细胞通常是指初级卵母细胞
B. 超数排卵是利用外源促性腺激素诱发卵巢排出更多卵子
C. 若将图中获得的组织器官移植至个体A，会发生免疫排斥反应
D. 我国禁止生殖性克隆，主张对治疗性克隆进行有效监管和严格审查
11. CD47是一种跨膜糖蛋白。它可与巨噬细胞表面的信号调节蛋白结合，从而抑制巨噬细胞的吞噬作用。肺癌、结肠癌等多种肿瘤细胞表面的CD47含量比正常细胞高1.6～5倍，导致巨噬细胞对肿瘤细胞的清除效果减弱。为证明抗CD47的单克隆抗体可以解除CD47对巨噬细胞的抑制作用，科学家按照如下图流程进行了实验。下列叙述不正确的是（ ）
A. 多次进行步骤①的目的是获得更多分泌抗CD47抗体的浆细胞
B. 体外培养单个B细胞也可获得大量抗CD47的单克隆抗体
C. 经筛选可得到既能产生抗CD47抗体又能无限增殖的杂交瘤细胞
D. 对照组应在巨噬细胞+正常细胞共培养，体系中不加单克隆抗体
12. 植物细胞壁中存在大量不能被动物消化的多聚糖类物质，研究人员通过生物工程技术培育出含多聚糖水解酶基因猪，主要流程如下图，①～⑤表示操作过程。下列有关说法错误的是（ ）
A. 基因表达载体中构建诱导型启动子，可以利用诱导物激活多聚糖水解酶基因表达
B. 用蛋白酶合成抑制剂激活③过程形成的重构胚使其完成分裂和发育进程
C. 从卵巢中采集的卵母细胞需培养到MⅡ期后用显微操作技术去除核膜包裹的细胞核
D. ④过程的实质是早期胚胎在相同生理环境下空间位置的转移
13. 用限制酶EcRV单独切割某普通质粒，可产生14kb（1kb即1000个碱基对）的长链，而同时用限制酶EcRV、MbI联合切割该质粒，可得到三种长度的DNA片段，见下图（其中*表示EcRV限制酶切割后的一个黏性末端）。下列关于质粒的叙述，正确的是（ ）
A. 质粒是广泛存在于细菌细胞中的一种颗粒状细胞器
B. 质粒是真核细胞或原核细胞中只能在细胞质中进行自我复制的小型环状DNA分子
C. 若用MbI限制酶单独切割该普通质粒，则产生的DNA片段的长度为5.5和8
D. 农杆菌内含有Ti质粒，在自然条件下可侵染双子叶植物和裸子植物
14. HA蛋白是禽流感病毒的重要抗原。鸡卵清蛋白是由输卵管上皮细胞中卵清蛋白基因特异性表达后分泌至输卵管内，参与构成鸡蛋清的蛋白质。下图是利用基因工程技术制备HA蛋白鸡输卵管生物反应器的过程。几种可供选择的限制酶识别序列如下，下列说法错误的是（ ）
A. ①为逆转录过程，该过程需要逆转录酶、4种游离的脱氧核苷酸等组分
B. 启动子是转录的起点，是RNA聚合酶识别和结合的部位
C. 目的基因与鸡卵清蛋白基因启动子拼接前应先在目的基因两端分别引入HindⅢ和EcRI的识别序列
D. 基因表达载体导入受精鸡胚的胚盘可以使用显微注射法
15. 研究发现，胰岛素进入血液循环后容易被降解，糖尿病患者需要反复注射胰岛素才能达到治疗效果。科研人员借助蛋白质工程改变了胰岛素中的某些氨基酸，提高了胰岛素在患者体内的稳定性，延长了其作用时间。下列有关叙述错误的是（ ）
A. 蛋白质工程的实质是在DNA分子水平上进行设计和改造蛋白质
B. 氨基酸序列的差异是影响胰岛素在患者体内是否稳定的原因之一
C. 蛋白质工程难度很大与蛋白质发挥功能必须依赖于正确的高级结构有关
D. 改造胰岛素应首先从设计胰岛素基因中脱氧核苷酸序列出发
二、不定项选择题，本题共5小题。每小题给出的四个选项中，有的只有一个选项正确，有的有多个选项正确。
16. 我国有历史悠久的传统发酵技术，以此为基础发展起来的发酵工程实现了发酵食品、药物等工业化生产，极大地改善了人们的生活。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 腐乳鲜味来源于毛霉等微生物分泌的蛋白酶对豆腐中蛋白质的分解
B. 酿制啤酒时，焙烤是为了加热杀死种子胚，终止酶的进一步作用
C. 将乙型肝炎病毒的抗原基因转入酵母菌，再通过发酵可生产乙型肝炎疫苗
D. 利用酵母菌等菌种的发酵工程生产的单细胞蛋白，可作为食品添加剂
17. miRNA是一类真核生物中广泛存在的单链非编码RNA分子．成熟的miRNA与AGO家族蛋白结合形成沉默复合体，该复合体可通过识别和结合靶基因转录出的mRNA并对其进行剪切或抑制其翻译过程，从而调控生物性状。下列相关分析正确的是（ ）
A. miRNA基因的表达包括转录和翻译两个阶段
B. 沉默复合体发挥作用的场所是细胞核
C. 利用PCR技术可检测靶基因转录出的mRNA的相对含量
D. 沉默复合体通过碱基互补配对的方式识别靶基因并抑制其表达
18. 用PCR方法检测转基因植株是否成功导入目的基因时，得到以下电泳图谱，其中1号为DNA标准样液（Marker），10号为电泳缓冲液。进行PCR时加入的模板DNA如图所示。据此做出分析正确的是（ ）
A. 在凝胶中，DNA的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子的大小等有关，与DNA构象无关
B. PCR产物的分子大小在250～500bp之间，9号样品对应植株不是所需的转基因植株
C. 10号的电泳结果能确定反应体系等对实验结果没有干扰
D. 电泳鉴定时，如果扩增结果不止一条条带可能是因为引物设计过短、退火温度过低等原因
19. 新冠病毒可通过表面的刺突蛋白（S蛋白）与人呼吸道黏膜上皮细胞的ACE2受体结合，侵入人体从而引起肺炎．单克隆抗体可阻断病毒的黏附或入侵，抗体药物的研发已成为治疗新冠肺炎的研究热点之一。如图为筛选、制备抗S蛋白单克隆抗体的示意图。下列相关叙述，错误的是（ ）
A. 研制抗S蛋白单克隆抗体，需先注射刺突蛋白对小鼠进行免疫以获得相应抗体
B. 在产生免疫反应的小鼠脾脏细胞中提取B淋巴细胞并诱导其与骨髓瘤细胞融合
C. 经HAT培养基筛选得到杂交瘤细胞经克隆化培养后可直接用于单克隆抗体生产
D. 单克隆抗体可用来制备治疗癌症的“生物导弹”是因为单克隆抗体能杀伤癌细胞
20. PCR引物的3'端为结合模板DNA的关键碱基，5'端无严格限制，可用于添加限制酶切点等序列如下图。下列叙述不正确的是（ ）
A. 当温度下降到65℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合
B. 一个DNA分子经PCR进行4个循环后共消耗了15对引物
C. PCR反应缓冲液中一般要添加镁离子，因为真核细胞和细菌的DNA聚合酶都需要镁离子激活
D. 用图中引物扩增至少四个循环后才能获得两端均添加限制酶切点的目的产物
三、非选择题。
21. 科学家通过诱导黑鼠体细胞去分化获得诱导性多能干细胞（iPS），继而利用iPS细胞培育出与黑鼠遗传特性相同的克隆鼠，流程如图。
（1）从黑鼠体内获得体细胞后，对其进行的初次培养称为____。在培养iPS细胞的过程中，培养基中应含有细胞所需的各种营养物质，并定期更换培养液。定期更换培养液的目的是____。
（2）为提高后代雌性概率，可对可用胚胎的滋养层细胞的DNA进行PCR，选择SRY基因（该基因位于Y染色体上的性别决定基因）____（填“阳性”或“阴性”）的胚胎进行移植。
（3）代孕个体对移入子宫的重构胚____，这为胚胎在受体内的____提供了可能。
（4）胚胎分割可以增加胚胎数量，在对胚胎进行分割时要注意____。
22. 饲养动物常用的植物饲料中含有难溶的植酸钙等物质，很难被动物吸收利用，还影响对其他营养物质的利用。若在饲料中添加植酸酶，则能催化其水解成为可以吸收利用的磷酸盐等。以下是科研人员从作物根部土壤中分离产植酸酶的菌株的过程示意图。请分析作答。
（1）培养基中除了添加____、____以外，应含有碳源、氮源、水、无机盐等基本营养物质。
（2）接种前进行的一系列操作，目的是____。统计平板上的菌落数，就能大致推测出样品中的活菌数。通常每种稀释液需涂布3个平板，取其平均值，若将最后一个试管中的菌液每次吸取0.1mL涂布培养后获得平均值是28，则1g土壤中含有此菌的菌株数是____。该方法统计获得的菌落数比实际的活菌数____，原因是____。
（3）若要对上述菌株进行进一步纯化，通常使用的划线工具是____；接种时，在第一区域划线后须将该工具____后再划线。
（4）产植酸酶的菌株会水解植酸钙，菌落的周围将形成透明的区域，根据透明区域的有无，可初步判断该菌是否产植酸酶。实验结果显示A—E五种菌株中，____是产植酸酶最理想的菌株。
23. 蒂蛀虫是荔枝的重要害虫。科研人员培育转基因抗虫荔枝的过程如下图1所示。图2是SalI、HindⅢ和BamHI三种限制酶的识别序列和切割位点。请回答下列问题：
（1）受体农杆菌细胞在导入重组Ti质粒前，需要先用Ca2+处理，其目的是____。外植体（幼嫩的茎段）经过____形成愈伤组织。在愈伤组织形成的过程中，导致外植体被污染的原因可能是____（答出一点即可）。
（2）研究人员采用了如下图3巢式PCR技术获取抗虫基因，巢式PCR是一种变异的聚合酶链反应（PCR），使用两对PCR引物扩增完整的片段。第一对PCR引物（也称外引物）扩增片段和普通PCR相似。第二对引物称为巢式引物（因为他们在第一次PCR扩增片段的内部，也称内引物）结合在第一次PCR产物内部，使得第二次PCR扩增片段短于第一次扩增。
图3
①PCR产物常采用____来鉴定。
②相比于常规PCR，巢式PCR获得错误目标产物概率____，这是因为____。
③为了使抗虫基因定向插入质粒中，第二次PCR扩增时需要在两个引物5'端分别添加的序列是____。
（3）科研人员采用农杆菌转化法将抗虫基因导入荔枝细胞，由于农杆菌中的Ti质粒含有一段____，能携带目的基因进入受体细胞，并将目的基因整合到受体细胞染色体DNA上。
（4）培育出的荔枝是否具有抗虫性状；可采用鉴定方法是____。
24. 人参和西洋参是五加科人参属药用植物，它们含有的人参皂苷具有抗肿瘤等作用。科研人员选用人参和西洋参有性杂交获得的杂种胚细胞以及人参种子胚、西洋参种子胚的愈伤组织进行悬浮细胞培养，建立其单细胞株系并对三者的部分特性进行比较研究，下图1是主要流程：
（1）过程④优化悬浮细胞培养体系，最重要的条件是蔗糖浓度的筛选，蔗糖浓度过低和过高均不利于悬浮细胞的培养，原因是____。
（2）科研人员研究了三种愈伤组织中的人参皂苷Re、Rg3、Rb1和M-Rb1含量，结果见图2，其中Re具有治疗心肌缺血的功能，Rg3具有抗癌作用。若要获得具有抗癌作用的药物应优先选择____的愈伤组织。
（3）科研人员继续研究了Rg3和常见的化疗药物5-FU对肿瘤的抑制效果：
①首先培养胃癌细胞，培养液中加入胎牛血清的目的是____。培养条件中5%CO2的作用是____，温度为37℃。将准备好的胃癌细胞悬浊液皮下接种小鼠裸鼠，每只裸鼠接种0.1mL细胞悬浊液。接种后2周可见背部长出肿块，证明接种成功。
②将上述40只裸鼠随机分为四组，生理盐水组对照组、5-FU组、Rg3组和5-FU+Rg3组（联合给药组）。各组均采用腹腔注射给药，给药前测定肿瘤的体积，给药后每2日测量1次肿瘤体积。请根据图3写出计算肿瘤体积变化的公式：____。根据实验结果可以得出的结论有____。
25. 哺乳动物体内一定含量的w—3多不饱和脂肪酸（LCPUFA）可以起到预防心血管疾病的作用，但LCPUFA在大多数动物体内不能合成，只能从食物中摄取。科研人员从秀丽隐杆线虫中获得LCPUFA合成酶基因fat—1（1229bp），培育转fat-1基因家兔，其部分流程如图一所示。
（1）PCR扩增fat-1基因的前提是____，以用于特异性制备PCR扩增需要的引物。PCR扩增过程中，经过5轮循环后，得到的产物中只含一种引物的DNA分子占比为____。
（2）在构建PEBf质粒时，为确保fat-1基因按正确方向插入，需要双酶切，还需对fat-1基因的引物进行相应设计。已知fat-1基因转录的模板链为a链，与b链结合的引物5端添加了限制酶识别序列GAATTC，则另一引物5’端需添加的限制酶识别序列为____，理由是____。
（3）转染是将外源分子如DNA、RNA等导入真核细胞的技术。为了检验图一家兔成纤维细胞是否转染成功，科研人员分别提取培养液中各细胞的DNA，利用fat-1基因引物进行PCR扩增后电泳，部分结果如图二所示。据图分析，1组和2组分别是____细胞组PCR产物。
（4）检测转基因家兔细胞中是否含有LCPUFA合成酶，可采用____技术。如果fat-1基因已正确插入PEB质粒且成功转染，但在转基因家兔细胞中没有检测到LCPUFA合成酶，从构建基因表达载体的角度分析，可能的原因是____。比较内容
植物体细胞杂交
动物细胞融合
A
特殊处理
用酶解法（纤维素酶和果胶酶）去除细胞壁
用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理可分离出单个细胞
B
诱导融合手段
离心法、电融合法、聚乙二醇融合法等
PEG融合法、电融合法、灭火病毒诱导法等
C
典型应用
培育种间杂种植物
培养克隆动物
D
培养基区别
通常为固体培养基，含蔗糖和植物激素等
液体培养基，含葡萄糖，含有动物血清等
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