江苏省盐城中学2023-2024学年高二下学期3月月考生物试卷(含答案)

这是一份江苏省盐城中学2023-2024学年高二下学期3月月考生物试卷(含答案)，共22页。试卷主要包含了单选题，多选题，读图填空题，实验探究题等内容，欢迎下载使用。


一、单选题
1．研究小组用作物秸秆、小型发酵瓶、纤维素分解菌和酵母菌生产燃料乙醇（葡萄糖的酒精发酵）。下列叙述正确的是( )
A.对秸秆进行灭菌后直接用酵母菌进行酒精发酵
B.接种后采用高压蒸汽灭菌法对培养液进行灭菌
C.发酵过程中需要适时松开瓶口目的是提供氧气
D.酸性重铬酸钾检测酒精时需排除葡萄糖的影响
2．野生铁皮石斛是名贵的中药，因过度利用被列为国家重点保护植物。某科研团队利用植物细胞工程技术进行了种苗培育和有效物质工厂化生产的研究。下列说法错误的是( )
A.愈伤组织再分化形成的芽产生的生长素会抑制愈伤组织生根
B.利用植物组织培养技术能保留植物亲本的优良性状
C.酒精和次氯酸钠处理后用无菌水清洗可降低两者对外植体的伤害
D.生长素和细胞分裂素是启动外植体细胞分裂和脱分化的关键激素
3．研究人员利用胚胎干细胞制造出了不能发育成完整胚胎的“拟原肠胚”模型,可用来研究人类的早期胚胎发育。下列说法错误的是( )
A.动物的早期胚胎、骨髓、神经系统中均存在干细胞
B.对“拟原肠胚”进行胚胎分割,可以提高移植胚胎的利用率
C.该模型可用于研究酒精、药物和病原体对早期胚胎发育的影响
D.利用核移植技术也能获得胚胎干细胞,但其遗传物质主要来自供核体
4．猴痘是一种病毒性人畜共患病，在人类中出现的症状与过去在天花患者身上所看到的症状相似，B6R蛋白是猴痘病毒的抗原。为制备抗B6R蛋白的单克隆抗体，研究人员进行了相关实验，如图所示，其中①~④表示细胞。下列叙述正确的是( )
A.细胞①含有从小鼠的脾中得到的能产生特定抗体的B淋巴细胞
B.诱导细胞①②融合的常用方法与诱导原生质体融合的方法相同
C.④过程需要添加抗生素等物质，以防止病毒污染
D.图中的培养瓶需要置于含有95%O2和5%CO2的混合气体中培养
5．已知限制酶BamHI和BglⅡ的识别位点分别是-G↓GATCC-、-A↓GATCT-。下列有关说法错误的是( )
A.限制酶的识别序列可能由4个、6个、8个或其他数目的核苷酸组成
B.上述两种限制酶切割出的末端只能用E.cliDNA连接酶进行“缝合”
C.上述两种限制酶切割出的末端之间相互连接后可能不会再被两种限制酶识别
D.若用两种限制酶同时切割目的基因和质粒，可提高重组质粒构建的成功率
6．科研人员以抗四环素基因为标记基因，通过基因工程的方法让大肠杆菌生产鼠的β-珠蛋白，治疗鼠的镰刀型细胞贫血症。下列相关实验设计中，合理的是( )
A.基因表达载体中的启动子是DNA聚合酶识别和结合的位点
B.利用小鼠的成熟红细胞提取mRNA可获得β-珠蛋白基因的编码序列
C.常用Ca2+处理大肠杆菌使其成为易于吸收DNA的感受态细胞
D.用含有四环素的培养基筛选出的大肠杆菌一定含有β-珠蛋白基因
7．关于“DNA的粗提取与鉴定”实验， 下列说法错误的是( )
A.过滤液沉淀过程在4℃冰箱中进行是为了防止 DNA 降解
B.DNA 既溶于 2ml/L NaCl 溶液也溶于蒸馏水
C.粗提取的DNA 中含有核蛋白、多糖等杂质
D.将粗提取的 DNA 溶于2ml/L NaCl溶液中， 加入二苯胺试剂 DNA 被染成蓝色
8．PCR扩增仪的温度、时间和循环次数等参数设定不当会影响到基因的扩增结果。下图是PCR扩增目的基因时的参数设定，图中线上、线下分别为温度和时间设定。下列叙述错误的是( )

A.步骤2的温度及时间设定主要依据目的基因的G、C含量
B.步骤3的温度及时间设定主要依据引物的长度及G、C含量
C.步骤4延伸时间的设定主要依据目的基因的碱基数目
D.步骤5除设定循环次数（25次）外，还应将“GOTO”设定为步骤3
9．用A和B两种限制酶同时和分别处理同一DNA片段，限制酶对应切点一定能切开。两种酶切位点及酶切产物电泳分离结果如图1和图2所示。下列叙述错误的是( )
A.用A和B两种限制酶同时处理图中同一DNA片段得到6个游离的磷酸基团
B.图1中X代表的碱基对数为4500，Y是限制酶A的酶切位点
C.电泳凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子大小和构象等有关
D.设计引物从图1中完整DNA片段中扩增出完整X，至少需要3次PCR
10．在基因工程的基本操作程序中，不进行碱基互补配对的是( )
A.人工合成目的基因B.目的基因与运载体结合
C.将目的基因导入受体细胞D.目的基因的检测和表达
11．常规PCR只能扩增两引物间的DNA区段，要扩增已知DNA序列两侧的未知DNA序列，可用反向PCR技术。反向PCR技术扩增的原理如图所示。下列叙述错误的是( )

A.酶切阶段，L中不能含有酶切时所选限制酶的识别序列
B.PCR技术的操作步骤依次是高温变性、低温复性、中温延伸
C.图中引物，应选择引物1和引物4，且二者间不能互补配对
D.PCR扩增，每轮循环前应加入限制酶将环状DNA切割成线状
12．下图为培育转基因山羊生产人β-酪蛋白的流程图，下列叙述正确的是( )

A.一般通过口服促性腺激素对性成熟的母羊实行超数排卵处理
B.过程①所用的人β-酪蛋白基因不可以从人cDNA文库中获得
C.过程③可使用胚胎分割技术扩大转基因山羊群体
D.过程④人β-酪蛋白基因在细胞质内进行转录、翻译
13．疫苗是人类预防疾病强有力的手段，疫苗产业也是医疗卫生事业和生物技术产业的重点发展领域之一，目前生产疫苗的两种方法主要有：利用转基因工程菌和借助动物细胞的大规模培养。例如，生产乙肝疫苗时，可以将S基因导入大肠杆菌构建工程菌生产重组乙肝疫苗，或者大规模培养能够表达S蛋白的中国仓鼠卵巢细胞获得乙肝疫苗。下列有关两种方法叙述错误的是( )
A.两种方法都需用转基因技术构建工程菌或工程细胞
B.将S基因导入大肠杆菌构建工程菌时需要使用钙离子处理细胞
C.体外培养中国仓鼠卵巢细胞时要定期更换培养液以创造无菌环境
D.哺乳动物细胞表达的外源蛋白，更接近乙肝病毒的S蛋白
14．重组PCR技术是一项新的PCR技术，通过重组PCR技术能将两个不同的DNA连接成为一个新DNA分子。某科研小组从猪源大肠杆菌中扩增得到LTB和ST1两个基因片段，利用重组PCR技术构建了LTB—ST1融合基因，制备过程如下图1所示。图2是PCR扩增后的电泳结果，据图判断下列说法错误的是( )

A.LTB和ST1基因能够融合的关键之一是引物P2、P3的部分区域能进行碱基互补配对
B.PCR扩增时，完整的引物P2、P3应位于子链的3′端才能保证扩增顺利进行
C.图1中②过程的反应体系中不用额外加入引物
D.LTB—ST1融合基因最可能是图2中的条带3
二、多选题
15．盐害是全球水稻减产的重要原因之一，中国水稻研究所等单位的专家通过农杆菌中的质粒将CMO基因、BADH基因、mtld基因、gutD基因和SAMDC基因5个耐盐基因导入水稻，获得了一批耐盐转基因植株。有关耐盐转基因水稻培育的分析正确的是( )
A.该转基因水稻与原野生型水稻不存在生殖隔离
B.该基因工程所需的限制性核酸内切酶可能有多种
C.只要目的基因进入水稻细胞，水稻就会表现出抗盐性状
D.可通过将水稻种植到有农杆菌的土壤中观察目的基因是否表达
16．某实验室通过提高小鼠胚胎干细胞pSTAT3基因的表达水平，体外制备出桑葚胚样全潜能细胞。该细胞在分子水平及发育潜能上均具有自然胚胎桑葚期细胞特性，并在体外成功模拟了小鼠胚胎发育至原肠胚阶段。根据该研究，下列叙述正确的是( )
注：pSTAT3是调控胚胎发育的关键基因
A.桑葚胚样细胞不可诱导发育至囊胚期
B.诱导桑葚胚样细胞时，基因的碱基序列和表达的情况都发生改变
C.囊胚期细胞重置至桑葚样细胞的过程类似于脱分化
D.据图推测，桑葚胚发育成囊胚的过程中，pSTAT3的表达下降
17．B型血友病患者因缺乏凝血因子IX（FIX）导致凝血功能障碍。某腺病毒（AAV）是一种单链DNA病毒，野生型AAV无致病性、免疫原性弱、有复制缺陷，需要辅助病毒进行复制，可作为B型血友病基因治疗的载体。如图为重组AAV病毒制备及治疗过程示意图（HEK293细胞是人的某种细胞）。下列叙述错误的是( )
A.图中目的基因是FIX基因，质粒1~3可通过农杆菌转化法导入HEK293细胞
B.HEK293细胞为重组AAV病毒的增殖提供了DNA模板、酶、ATP、氨基酸等
C.重组AAV病毒以胞吞方式进入人体的肝细胞，携带的目的基因在细胞核中完成转录
D.质粒上的标记基因有利于筛选含目的基因的细胞和促进目的基因的表达
18．链霉菌是一种异养需氧型的细菌， 为利用链霉菌生产药物 A，研究者构建重组 DNA 并导入链霉菌。重组 DNA 含启动子 P、药物 A 基因和 Ne 基因（卡那霉素抗性基因）。培养和筛选过程如下图所示。
下列叙述不正确的是( )
A.实验所用培养基需要先调 pH 再行高压蒸汽灭菌后才能使用
B.稀释后涂布时应用涂布器沾取少量菌液并均匀地涂布在培养基的表面
C.卡那霉素抗性强弱与药物A基因的表达量呈正相关
D.应选用培养基b 的菌株进一步鉴定以生产药物 A
三、读图填空题
19．从自然界筛选嗜盐菌的一般步骤是：
采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定
(1)培养嗜盐菌的菌样应从__________环境采集。
(2)富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件，使其在群落中的数量大大增加，从而分离出所需微生物的培养方法。对嗜盐产淀粉酶微生物的富集培养应采取的措施是选择以__________为唯一碳源的培养基，并在__________条件下培养。在富集培养过程中，将锥形瓶放在摇床上振荡的目的是：_________、___________。
(3)研究者从热泉中筛选了高效产生高温淀粉酶的嗜热菌，其筛选过程如下图所示。

Ⅰ号培养基按功能分类称为__________培养基。过程①②合称为__________，这是最常用的微生物接种方法之一。若该过程所得平板上的平均菌落数为50个，所用稀释液的体积为0.2mL，稀释倍数为105时，则每毫升样品中的细菌数约为__________个。
(4)国际酶学会议规定的酶活力单位是Kat：在最适条件下，1秒钟能使1摩尔底物转化的酶量。若菌落的大小大致相同，菌落发生的时间也相同，__________（填“能”或“不能”）仅根据菌落周围透明圈的大小来判断该菌落所产生的淀粉酶单位酶量酶活力的高低，理由是__________。
20．传统的人工繁殖兰花的方法是分株繁殖和种子繁殖，随着科学技术的进步，人们开始采用“组织培养繁殖兰花”，如图所示。回答下列问题：

(1)图中①过程为__________，②与④相比，分化程度__________，全能性__________。
(2)兰花的叶肉细胞之所以能培养为新个体，是因为细胞中含有__________、具有发育成完整个体的潜能。
(3)图中①③过程中，培养基的成分通常包括水、无机营养、有机营养和__________等，同时，在培养过程中，除必要的温度、光照和O2等外界条件外，成功的另一个关键是操作过程中必须保证__________操作。培养基的有机营养一般选用蔗糖而不选用葡萄糖的理由是__________。
(4)有人利用植物体细胞杂交技术解决兰花生根速度慢、幼苗生存能力弱的问题，操作后得到“韭菜一兰花”。植物体细胞杂交依据的生物学原理有__________。
(5)若兰花细胞内有m条染色体，韭菜细胞内有n条染色体，则“韭菜—兰花”细胞含__________条染色体。若杂种细胞培育成的“韭菜—兰花”植株为四倍体，则此杂种植株的花粉经离体培育得到的植株属于__________倍体植株。
21．虾青素可由β-胡萝卜素在β-胡萝卜素酮化酶（BKT）和β-胡萝卜素羟化酶（CRTR-B）的作用下转化而来，具有抗衰老、增强免疫、保护心血管等功能，杜氏盐藻是单细胞浮游植物，生长快，易培养，能大量合成β-胡萝卜素，科研人员将BKT基因和CRTR-B基因导入杜氏盐藻，构建杜氏盐藻细胞工厂高效生产虾青素。
(1)获取目的基因：雨生红球藻是天然虾青素重要来源，提取雨生红球藻的总DNA为模板，设计特异性引物扩增BKT基因和CRTR-B基因，此过程需要__________酶的催化。

(2)构建转化载体：“无缝克隆法”是构建重组质粒的新方法，指利用同源重组酶将末端具有一致同源序列的线性化载体和目的基因连接形成重组质粒，图1表示利用“无缝克隆法”向质粒中插入抗除草剂基因的基本过程。
Ⅰ.PCR获取抗除草剂基因过程中，为确保基因两端具有所需同源序列，需在引物的__________端添加对应的同源序列。若要确保抗除草剂基因能够从重组质粒中切除，还需要在基因两侧加入限制酶识别序列，则所需引物（5'-3'）的序列应为：__________。
A.同源序列+特异性扩增引物序列+限制酶识别序列
B.同源序列+限制酶识别序列+特异性扩增引物序列
C.特异性扩增引物序列+限制酶识别序列+同源序列
Ⅱ.科研人员利用“无缝克隆法”同时将BKT基因和CRTR-B基因插入质粒，形成的重组质粒对应部位如图2所示，推测此过程扩增BKT基因所用的引物为__________；扩增CRTR-B基因所用的引物为__________；
Ⅲ.最终形成的重组质粒如图3所示，其中atpA启动子和psbA启动子均为杜氏盐藻叶绿体启动子，选用内源性启动子的目的是__________；
Ⅳ.与传统的酶切法构建重组质粒相比，“无缝克隆法”具备的优势有__________。
(3)目的基因导入及相关检测：采用基因枪法将重组质粒导入杜氏盐藻叶绿体，一段时间后，用含__________的培养基筛选已转化的杜氏盐藻，通过相关技术检测目的基因是否成功表达。
(4)叶绿体转化是植物基因工程的新热点，叶绿体的诸多特点为叶绿体转化提供优势，如叶绿体基因组小，功能清晰，使基因操作方便；叶绿体细胞具有自我复制功能，一个植物细胞可含有多个叶绿体，每个叶绿体中含有多个基因组，可大大提高__________；另外，叶绿体基因位于细胞质中，可有效避免__________。
四、实验探究题
22．我国研究人员在世界上率先利用去甲基化酶（Kd4d）的mRNA，经体细胞核移植技术培育出第一批灵长类动物——食蟹猴，流程如图所示，①～⑥表示过程，该动物可作为研究癌症等人类疾病的动物模型。请据图分析回答：

(1)动物细胞核移植过程中，通常采用卵（母）细胞作为受体细胞，原因可能是其细胞质中__________。用于核移植的供体细胞一般选用传代至10代内的细胞，原因是传至10代内的细胞__________。
(2)进行过程①时，细胞培养的培养液成分与植物组织培养基成分最主要的区别在于前者含有__________，且在进行细胞原代培养时会出现__________现象。
(3)动物细胞核移植技术中普遍使用的去核方法是__________。图中过程⑤用到__________技术，其实质是早期胚胎在__________条件下空间位置的转移。除图中所示外，胚胎的来源还有__________（答出两点）。
(4)研究人员在确定去甲基化酶（Kd4d）的mRNA的作用时，做了两组实验，其中A组用正常培养液培养融合细胞，B组用正常培养液培养注入了Kd4d的mRNA的融合细胞，实验结果如下图所示。分析实验数据可知，Kd4d的mRNA的作用是__________。
(5)有人提出：将经特定抗原刺激的B淋巴细胞核移植到去核骨髓瘤细胞中来产生单克隆抗体，此方法__________（填“能”或“不能”）获得既能分泌抗体、又能无限增殖的细胞。
23．CRISPR-Cas12a系统是第二类用于编辑哺乳动物基因组的CRISPR-Cas系统，该系统主要包含crRNA和Cas12a蛋白两部分，crRNA能特异性识别并结合特定的DNA序列，从而引导Cas12a蛋白到相应位置剪切DNA。某科研团队基于CRTSPR-Cas12a系统对宫颈癌细胞中的KIFC1基因进行敲除，来探讨KIFCI基因在宫颈癌细胞中的功能及对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响。
(1)在CRISPR-Cas12a系统中，crRNA的序列与目的基因特定碱基序列部分结合，结合区域最多含__________种核苷酸；细菌细胞中的__________也能起到类似Cas12a蛋白的作用。若要将KIFCI基因从目标DNA上剪切下来，需要设计__________种crRNA。
(2)为保证目的基因与PX458质粒正确连接，在扩增目的基因时，应在引物端加入相应的限制酶序列，其中P1的碱基序列为5′-__________-3′（写出前9个碱基）。采用PCR技术对一个DNA进行扩增时，第n次循环共需要引物__________个。

(3)在目的基因与PX458质粒连接时，可用__________（填“E.cliDNA连接酶”或“T4DNA连接酶”）进行连接。
(4)将crRNA-Cas12a重组载体成功转染至HeLa细胞，与对照组相比，实验组中KIFCl蛋白表达量如图2所示，细胞数目的变化如图3所示，由此可得出的结论是KIFC1基因可以__________HeLa细胞的增殖，判断依据是敲除细胞株中KIFC1蛋白表达量明显下降，证明HeLa细胞中__________；KIFC1敲除组细胞数目显著__________对照组，表明KIFC1敲除可使HeLa细胞__________。
参考答案
1．答案：D
解析：A、秸秆中含有纤维素，纤维素分解菌将纤维素分解为葡萄糖后酵母菌再利用葡萄糖进行酒精发酵，酵母菌不能分解纤维素，A错误；
B、酒精发酵前需对培养基进行高压蒸汽灭菌，接种后灭菌会将培养液菌体全部杀死，影响发酵，B错误；
C、酵母菌无氧呼吸产生酒精，发酵过程中需要适时松开瓶盖，目的是排出二氧化碳，C错误；
D、由于葡萄糖也能与酸性重铬酸钾反应发生颜色变化，因此酸性重铬酸钾检测酒精时，应将酵母菌的培养时间适当延长以耗尽溶液中的葡萄糖，以排除葡萄糖的影响，D正确。
故选D。
2．答案：A
解析：A、愈伤组织再分化形成的芽产生的生长素会促进愈伤组织生根，A错误；
B、利用植物组织培养技术能保留植物亲本的优良性状，属于无性繁殖，B正确；
C、酒精和次氯酸钠作为消毒剂，长时间处理会毒害外植体，故酒精和次氯酸钠处理后用无菌水清洗可降低两者对外植体的伤害，C正确；
D、生长素促进生根，细胞分裂素促进细胞分裂，生长素和细胞分裂素是启动外植体细胞分裂和脱分化的关键激素，D正确。
故选A。
3．答案：B
解析：A、干细胞是动物和人体内保留的少数具有分裂分化能力的细胞，存在于动物的早期胚胎、骨髓、神经系统中，A正确;B、胚胎分割移植需要选择形态正常，发育良好的桑葚胚或囊胚，B错误;C、根据题意可推知，该模型可以研究酒精、药物和病原体对胚胎发育的影响，C正确;D、利用核移植技术也能获得胚胎干细胞，而核移植技术所得的细胞的遗传物质主要来自供核体，D正确。故选B。
4．答案：A
解析：A、单克隆抗体制备过程中需要将产生特定抗体的浆细胞与骨髓瘤细胞融合，给小鼠注射B6R蛋白的目的是使小鼠针对该抗原产生特异性免疫，从而使体内出现能产生抗B6R蛋白抗体的浆细胞，因此从小鼠脾脏提取的细胞①含有能产生特定抗体的B淋巴细胞，A正确；
B、诱导动物细胞融合特有的方法是灭活的病毒，因此诱导细胞①②融合的常用方法与诱导原生质体融合的方法不完全相同，B错误；
C、抗生素可以抑制细菌的生长，不能抑制病毒的生长，C错误；
D、图中的培养瓶需要置于含有95%空气和5%CO2的混合气体中培养，D错误。
故选A。
5．答案：B
解析：A、不同限制酶识别序列有差异，限制酶的识别序列可能由4个、6个、8个或其他数目的核苷酸组成，A正确；
B、上述两种限制酶切割出的末端为粘性末端，能用E.cliDNA连接酶和T4 DNA连接酶进行“缝合”，B错误；
C、上述两种限制酶切割出的末端之间相互连接后形成的序列为，不会再被两种限制酶识别，C正确；
D、若用两种限制酶同时切割目的基因和质粒，可形成不同的末端，能避免目的基因和质粒自身环化和随意连接，从而提高重组质粒构建的成功率，D正确。
故选B。
6．答案：C
解析：A、基因表达载体中的启动子是RNA聚合酶识别和结合的位点，可用于驱动基因的转录，A错误；
B、哺乳动物的成熟红细胞中没有细胞核和核糖体等结构，所以不能利用小鼠的成熟红细胞提取mRNA，B错误；
C、将目的基因导入微生物细胞常用感受态细胞法，常用Ca2+处理大肠杆菌使其成为易于吸收DNA的感受态细胞，C正确；
D、标记基因的作用是筛选含有目的基因的受体细胞，用含有四环素的培养基筛选出已经导入β-珠蛋白编码序列的大肠杆菌，不一定能产生 β-珠蛋白，D错误。
故选C。
7．答案：D
解析：A、低温时DNA酶的活性较低，过滤液沉淀过程在4℃冰箱中进行是为了防止DNA降解，A正确；
B、DNA 既溶于 2ml/L NaCl 溶液也溶于蒸馏水，且溶解度较高，B正确；
C、粗提取的DNA 中含有核蛋白、多糖等杂质，因此为了获得纯度较高的DNA需要进一步提纯，C正确；
D、将粗提取的 DNA 溶于2ml/L NaCl溶液中， 加入二苯胺试剂 后经过水浴加热可发现DNA 被染成蓝色，D错误。
故选D。
8．答案：D
解析：A、步骤2是变性过程，是在高温条件下使DNA分子解旋的过程，由于G和C之间有3个氢键，热稳定性高，故步骤2的温度及时间设定主要依据目的基因的G、C含量，A正确；
B、步骤3是复性过程，一般情况下，引物的长度越长，G和C比例越高，则复性步骤中的复性温度设定就越高，B正确；
C、步骤4是延伸过程，时长的设置依据目的基因的长度，即主要依据目的基因的碱基数目，C正确；
D、“GOTO”是设置返回的步骤序号，参数应设置为步骤“1”，D错误。
故选D。
9．答案：A
解析：A、由题可知，图2中三列条带分别对应用A和B两种限制酶同时以及单独使用限制酶A、限制酶B处理DNA片段的酶切产物电泳分离结果，再通过①和②的结果结合图1，分析可知①是单独使用限制酶A处理DNA片段的酶切产物电泳分离结果，②是单独使用限制酶B处理DNA片段的酶切产物电泳分离结果。限制酶能够识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。用A和B两种限制酶同时处理图中同一DNA片段最终得到8个游离的磷酸基团，A错误；
B、结合图1和图2中第一列A+B酶同时处理的电泳条带结果分析可知，图1中X代表的碱基对数为4500，根据图2中①电泳分离结果存在3500bp长度的条带可知①是单独使用限制酶A处理DNA片段的酶切产物电泳分离结果，再根据①电泳分离结果存在500bp长度和6000bp长度的条带可知Y是限制酶A的酶切位点，B正确；
C、电泳凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子大小和构象等有关，C正确；
D、设计引物从图1中完整DNA片段中扩增出完整X，至少需要3次PCR，D正确。
故选A。
10．答案：C
解析：A、人工合成基因形成双链时，需要进行碱基互补配对，A错误；
B、目的基因与运载体结合时，黏性末端之间的连接进行碱基互补配对，B错误；
C、将目的基因导入受体细胞时不进行碱基互补配对，C正确；
D、检测目的基因时需要用到基因探针，进行碱基互补配对；目的基因的表达包括转录和翻译，进行碱基互补配对，D错误。
故选C。
11．答案：D
解析：A、在酶切阶段，已知序列L中不能含有酶切时所选限制酶的识别序列，不然会将已知序列L切断，造成序列识别混乱，A正确；
B、PCR技术的操作步骤依次是高温使DNA变性、低温复性（使DNA单链与引物结合）、中温延伸，B正确；
C、PCR过程需要两种引物，能分别与目的基因两条链的3'端通过碱基互补配对结合，为保证延伸的是已知序列两侧的未知序列，应该选择引物1和引物4，且二者间不能互补配对，C正确；
D、PCR的扩增只需要第一次循环前加入足够的限制酶，并不需要每轮都加入，D错误。
故选D。
12．答案：C
解析：A、促性腺激素的化学本质是蛋白质，不能口服，A错误；
B、由图可知，①过程表示基因表达载体的构建，获取目的基因（人β-酪蛋白基因）的方法之一就是从人cDNA文库中获取， B错误；
C、③表示胚胎分割移植，胚胎分割技术可以得到多个遗传性状相同的个体，在③过程中可以应用，C正确；
D、④表示人β-酪蛋白基因表达，包括转录和翻译两个过程，对于真核生物而言，转录主要发生在细胞核中，翻译过程发生在细胞质中，D错误。
故选：C。
13．答案：C
解析：A、前者生产乙肝疫苗时，需要培养导入了S基因的大肠杆菌，后者生产乙肝疫苗时，需要大规模培养中国仓鼠卵巢细胞，A正确；
B、将S基因导入大肠杆菌构建工程菌时需要使用钙离子处理细胞，钙离子增加细胞的通透性，有利于S基因的导入，B正确；
C、体外培养中国仓鼠卵巢细胞时要定期更换培养液以补充营养，减少代谢废物的积累，C错误；
D、哺乳动物细胞为真核生物细胞，可以对蛋白质进行进一步的加工，乙肝病毒感染真核细胞，因此真核细胞表达的外源蛋白，更接近乙肝病毒的S蛋白，D正确。
故选C。
14．答案：B
解析：A、LTB和ST1基因能够融合的关键是P2和P3两种引物的部分区域能发生碱基互补配对，碱基互补配对区域的碱基之间能够重合在一起，从而将两个基因融合在一起，A正确；
B、DNA的合成方向是从子链的5'端自3'端延伸的，因此PCR扩增时，完整的引物P2、P3应位于子链的5'端才能保证扩增顺利进行，B错误；
C、②过程不需要加入引物，两条母链的起始段位置的碱基序列即为引物，可以作为子链合成的引物，为DNA聚合酶提供3'端，C正确；
D、电泳时DNA的迁移速率主要受核酸片段长度影响，核酸片段长度越长迁移速率越慢，LTB—ST1融合基因相对LTB、ST1基因核酸片段长度大，故最可能是图2中的条带3，D正确。
故选B。
15．答案：AB
解析：A、转基因属于基因重组，未产生新物种，该转基因水稻与原野生型水稻不存在生殖隔离，A正确；
B、不同的目的基因可能需要不同的限制酶进行切割，因此该基因工程所需的限制性核酸内切酶可能有多种，B正确；
C、目的基因进入水稻细胞后，还要检测目的基因是否表达，如果不表达水稻不会表现出抗盐性状，C错误；
D、可通过将水稻种植到盐碱地观察水稻是否表现出抗盐性状，D错误。
故选AB。
16．答案：CD
解析：A、胚胎发育的过程为受精卵→桑椹胚→囊胚→原肠胚→幼体，因此桑葚胚样细胞可诱导发育至囊胚期，A错误；
B、诱导桑葚胚样细胞时，其本质是细胞分化，基因的碱基序列并未发生改变，B错误；
C、胚胎发育至囊胚期即开始了细胞分化，因此囊胚期细胞重置至桑葚样细胞的过程类似于脱分化，C正确；
D、具体分析通过提高小鼠胚胎干细胞pSTAT3基因的表达水平，体外制备出桑葚胚样全潜能细胞，因此推断桑葚胚发育成囊胚的过程中，pSTAT3的表达下降，D正确。
故选CD。
17．答案：ABD
解析：A、农杆菌转化法是将目的基因导入植物细胞常用的方法，而HEK293细胞是人的某种细胞，质粒1~3可通过显微注射法导入HEK293细胞，A错误；
B、HEK293细胞无法为重组AAV病毒的增殖提供DNA模板，重组AAV病毒的增殖的模板为其自身的遗传物质，B错误；
C、从图示信息可以看出，重组AAV病毒以胞吞方式进入人体的肝细胞，携带的目的基因在细胞核中完成转录，最终合成FIX，C正确；
D、质粒上的标记基因有利于筛选含目的基因的细胞，没有促进目的基因表达的作用，D错误。
故选ABD。
18．答案：BD
解析：A、培养基应先调pH再进行灭菌，否则会被再次污染，所以在制培养基时，都是要先调pH后高压蒸汽灭菌，A正确；
B、先取少量菌液滴加到培养基表面，再用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面，B错误；
C、药物A基因和Ne基因（卡那霉素抗性基因）共用一个启动子，二者共同表达，所以卡那霉素抗性强弱可反映药物A基因的表达量，二者呈正相关，C正确；
D、诱变处理后将菌液稀释后涂布，在含不同浓度卡那霉素的培养基上各接种等量同一稀释度的培养液，应该选择含卡那霉素浓度最高的培养基（即d）上所长出的菌落，其生产药物A的能力也较强，D错误。
故选BD。
19．答案：(1)高盐
(2)淀粉；高盐；提高营养物质的利用率；增加培养液中的溶氧量
(3)选择；稀释涂布平板；2.5×107个
(4)不能；透明圈的大小可能是不同菌落产生的酶量不同导致
解析：（1）自然界中目的菌株的筛选的依据是根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找，培养噬盐菌的菌样应从海滩等含盐高的环境采集取样。
（2）若要获得目的菌株，需要对嗜盐产淀粉酶微生物的富集培养应选择以淀粉为唯一碳源的培养基，并在高盐条件下培养。在富集培养过程中，需将锥形瓶放在摇床上振荡，一方面使菌株与培养液充分接触，提高营养物质的利用率；另一方面能增加培养液中的溶氧量，从而更有利于该微生物的生长繁殖。
（3）按功能分，图中Ⅰ号培养基是为了选出目的菌株，为选择培养基，该培养基需以淀粉为唯一的碳源。从液体菌种到固体平板的过程及菌落生长均匀可推知，过程①②为稀释涂布平板法。每毫升样品中的细菌数约为50÷0.2×105=2.5×107个。
（4）酶活力相同时，酶量越大，透明圈就越大，透明圈的大小可能由不同菌落产生的酶量不同导致，因此若菌落的大小大致相同，菌落发生的时间也相同，不能仅根据菌落周围透明的大小来判断该菌落所产生的淀粉酶单位酶量酶活力的高低。
20．答案：(1)脱分化；低；高
(2)本物种的全部遗传信息
(3)植物激素；无菌；蔗糖较葡萄糖能更好地调节培养基内的渗透压
(4)细胞膜的流动性、植物细胞的全能性
(5)m+n；单
解析：（1）由图可知：①过程为脱分化，②为愈伤组织，④是胚状体。②与④相比，②的细胞分裂能力强，分化程度低，全能性高。
（2）由于兰花的叶肉细胞含有本物种的全部遗传信息，所以能将离体的兰花叶肉细胞培养为新个体。
（3）①表示脱分化，③表示再分化，在其过程中，培养基的成分通常包括水、无机营养、有机营养和植物激素等，同时，在培养过程中，除必要的温度、光照和O2等外界条件外，成功的另一个关键是操作过程中必须保证无菌操作。培养基的有机营养一般选用蔗糖而不选用葡萄糖的理由是葡萄糖更易被细胞选择性吸收，所以蔗糖较葡萄糖能更好地调节培养基内的渗透压。
（4）植物体细胞杂交经过了植物细胞融合和植物组织培养两个阶段，其原理分别是细胞膜的流动性和植物细胞的全能性，也即植物体细胞杂交的原理。
（5）经过植物体细胞杂交，所得到的“韭菜—兰花”细胞中含有的染色体数目是兰花细胞和韭菜细胞的染色体数目之和，即m+n。四倍体的“韭菜—兰花”植株，经过花药离体培养，得到的植株是单倍体。
21．答案：(1)TaqDNA聚合酶
(2)5'；B；①③/③①；⑥⑧/⑧⑥；确保目的基因能表达；可同时导入多个外源基因；不受限制种识别序列的限制，可在载体的任意位点插入目的基因
(3)除草剂
(4)目的基因的表达量；基因污染
解析：（1）因雨生红球藻是天然虾青素重要来源，是目的基因的来源，故可提取雨生红球藻的总DNA为模板，设计特异性引物扩增其DNA中的BKT基因和CRTR-B基因，因此需要PCR，PCR过程需要TaqDNA聚合酶的催化。
（2）Ⅰ根据PCR扩增的原理，在PCR过程中，为确保基因两端具有所需同源序列，需在5'端添加对应的同源序列；
根据题意，若要确保抗除草剂基因能够从重组质粒中切除，则所需引物（5'一 3'）的序列应为“同源序列十限制酶识别序列十特异性扩增引物序列”。故选B。
根据图2所示，要通过“无缝克隆法”同时将BKT基因和CRTR-B基因插入质粒，则要保证BKT基因一侧有一致同源序列，另一侧能带上CRTR-B基因，因此扩增BKT基因所用的引物为①③。
同理，扩增CRTR-B基因所用的引物为⑥⑧。
启动子是转录的起始信号，选用内源性启动子的目的是防止基因沉默，确保目的基因能表达。
根据题意，与传统的酶切法构建重组质粒相比，“无缝克隆法”具备的优势是“可同时导入多个外源基因”“不受限制酶识别序列的限制”“可在载体的任意位点插入目的基因”等。
（3）筛选已转化的杜氏盐藻的培养基是选择培养基，其中含除草剂。
（4）因每个叶绿体中含有多个基因组，转录翻译效率高，可大大提高目的基因的表达量；且叶绿体基因位于细胞质中，一般不能稳定遗传，因此可避免基因污染。
22．答案：(1)含有促进细胞核发育的物质；保持正常的二倍体核型
(2)血清；细胞贴壁生长和细胞接触抑制
(3)显微操作法；胚胎移植；相同生理环境；体外受精、转基因技术、体内受精、胚胎分割
(4)提高融合细胞发育成囊胚的成功率和囊胚中内细胞团的形成率
(5)不能
解析：（1）用于核移植的供体细胞通常选用传代10代以内的细胞，原因是因为这些细胞遗传物质没有改变，10代以内的细胞能保持正常的二倍体核型。动物细胞培养时，一般利用卵（母）细胞作为受体细胞，原因是：①卵母细胞中含有的细胞质成分更能促进细胞核全能性的表达；②卵母细胞体积大，易操作。
（2）进行过程①时，细胞培养的培养液成分与植物组织培养基成分最主要的区别在于前者含有血清，且在进行细胞原代培养时会出现细胞贴壁生长和细胞接触抑制。
（3）动物细胞核移植技术中普遍使用的去核方法是显微操作法，过程⑤为胚胎移植，胚胎移植是指将雌性动物的早期胚胎或通过体外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物的体内，使之继续发育为个体的技术。胚胎移植的实质是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移。除图中所示外，胚胎的来源还有体外受精、转基因技术、体内受精、胚胎分割。
（4）分析图中数据，将正常培养的A组与向融合细胞中注入去甲基化酶（Kd4d）的mRNA的融合细胞B组数据进行对照分析，后者的融合细胞发育成囊胚的成功率、囊胚中内细胞团的形成率都高于前者，说明Kd4d的mRNA既能提高融合细胞发育成囊胚的成功率，又能提高囊胚中内细胞团的形成率。
（5）将经特定抗原刺激的B淋巴细胞核移植到去核骨髓瘤细胞中来产生单克隆抗体，该技术称为核移植技术，此方法不能获得既能分泌抗体、又能无限增殖的细胞，这是因为无限增殖的基因在小鼠的骨髓瘤细胞核中。
23．答案：(1)8；限制酶；2
(2)CAGCTGCTC； 2n
(3)T4DNA连接酶
(4)促进；成功敲除KIFC1基因；低于； HeLa细胞增殖能力下降
解析：（1）在CRISPR-Cas12a系统中，crRNA的序列与目的基因特定碱基序列部分结合，结合区域既有DNA也有RNA，故最多有种核苷酸（4种脱氧核苷酸和4种核糖核苷酸）；Cas12a蛋白可以到相应位置剪切DNA，其作用相当于限制酶；若要将KIFCI基因从目标DNA上剪切下来，需要有两个切口，而crRNA的识别具有特异性，故需要2种crRNA。
（2）扩增目的基因时，应在引物端加入相应的限制酶序列，引物需要与模板链的3'端结合，按照碱基互补配对原则保证子链从5'向3'延伸，结合图示可知，P1的碱基序列为5′CAGCTGCTC3′；一个DNA分子有两条链，第n次复制形成2n个DNA，相当于新合成2n-1个DNA分子，合成一个DNA分子需要两个引物，因此需要的引物数目为2n-1×2=2n个。
（3）T4DNA连接酶可连接黏性末端和平末端，故在目的基因与PX458质粒连接时，可用T4DNA连接酶连接。
（4）结合图示可知，敲除细胞株中KIFC1蛋白表达量明显下降，证明HeLa细胞KIFC1基因敲除成功：KIFCl敲除组细胞数目显著低于对照组，表明KIFC1敲除可使HeLa细胞增殖能力下降，据此可知，KIFC1基因可以促进HeLa细胞的增殖。