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江苏省江阴市某校2023-2024学年高二下学期3月学情调研生物试题（原卷版+解析版）
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一、单项选择题：本题包括14小题，每题2分，共28分。每题只有一个选项最符合题意。
1. 下列有关果酒和果醋制作的叙述，错误的是（ ）
A. 为降低杂菌污染，发酵前需要对原料和器具进行灭菌处理
B. 装置密闭发酵过程中，酒精度的变化是先增加后趋于稳定
C. 葡萄酿酒过程中，使用果胶酶利于出汁，还能提高酒的透明度
D. 由果酒制作转为果醋制作时，不仅要升高发酵温度，还要注意通气
【答案】A
【解析】
【分析】在葡萄酒的自然发酵过程中，起主要作用的是附着在葡萄皮上的野生型酵母菌。在发酵过程中，随着酒精度数的提高，红葡萄皮的色素也进入发酵液，使葡萄酒呈现深红色。在缺氧、呈酸性的发酵液中，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到抑制。
【详解】A、为降低杂菌污染，发酵前需要对器具进行消毒处理，而原料不需要消毒，因为菌种来自原料本身，消毒会导致菌种被杀死，A错误；
B、装置密闭发酵过程中，随着发酵的进行酒精积累，酒精度逐渐增大，而在发酵后期由于底物被大量消耗，导致酒精度趋于稳定，B正确；
C、果胶酶能够分解果胶，瓦解植物的细胞壁和胞间层，使葡萄酿酒变得更容易，且果胶酶能够将果胶分解成可溶性的半乳糖醛酸，因此还能提高酒的透明度，C正确；
D、果酒制作需要的菌种是酵母菌，在厌氧条件下将葡萄糖分解为酒精，果酒制作的适宜温度是18～25℃，制作果醋需要的菌种是醋酸菌，为需氧菌，果醋制作的适宜温度是30～35℃，因此由果酒制作转为果醋制作时，不仅要升高发酵温度，还要注意通气，D正确。
故选A。
2. 下列关于制作传统发酵食品的叙述，错误的是（ ）
A. 制作腐乳利用了毛霉等微生物产生的蛋白酶
B. 发酵温度过低可能会导致制泡菜“咸而不酸”
C. 制作果酒时，需每隔一定时间打开瓶盖放气
D. 制作果醋时，醋酸杆菌能以乙醇作为碳源和能源
【答案】C
【解析】
【分析】1、参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。
2、参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。果醋制作的原理：当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸。
【详解】A、参与腐乳制作的微生物主要是毛霉，制作腐乳利用了毛霉等产生的蛋白酶、脂肪酶，A正确；
B、泡菜“咸而不酸”可能是食盐浓度过高，发酵温度过低抑制乳酸菌产生乳酸所致，B正确；
C、果酒发酵时，为了排出产生的气体，需要将瓶盖拧松放气，但不能打开，否则会被杂菌污染，C错误；
D、制作果醋时，当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸，该过程中醋酸杆菌能以乙醇作为碳源和能源，D正确。
故选C。
3. 下列有关“培养”的叙述错误的是（ ）
A. 宜采用通气培养并搅拌以获取更多的紫杉醇
B. 可采用稀释涂布平板法分离纯化培养乳酸菌
C. 可在96孔板上培养和筛选特定的杂交瘤细胞
D. 采集到的卵母细胞需要在体外进行成熟培养
【答案】B
【解析】
【分析】将接种于培养基内，在合适条件下形成的含有特定种类微生物的群体称为培养物。由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物的过程就是纯培养。
【详解】A、植物细胞需要进行有氧呼吸，采用通气培养并搅拌以利于细胞呼吸和获得更多养料，进而获取更多的紫杉醇，A正确；
B、稀释涂布平板法适于分化有氧呼吸的生物，不适合用来分离纯化乳酸菌，B错误；
C、可在96孔板上利用抗原抗体杂交技术，可培养和筛选特定的杂交瘤细胞，C正确；
D、采集到的卵母细胞需要在体外进行成熟培养，培养到减数第二次分裂中期，D正确。
故选B。
4. 下列关于细菌和酵母菌实验的叙述正确的是（ ）
A. 通常酵母菌培养基比细菌培养基有更高的碳氮比
B. 通常细菌的生长速度比酵母菌快，菌落比酵母菌落大
C. 通常细菌培养基用高压蒸汽灭菌法灭菌，酵母菌培养基用过滤除菌法除菌
D. 血细胞计数板既可用于酵母菌的数量测定，也可用于细菌的数量测定
【答案】A
【解析】
【分析】培养基的营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。灭菌常用的方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌。消毒常用的方法有煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药物消毒法等。
【详解】A、细菌是原核生物，酵母菌是真核生物，不同微生物对营养物质的需求是不一样，通常酵母菌培养基比细菌培养基有更高的碳氮比，A正确；
B、通常细菌的生长速度比酵母菌快，但形成的菌落，不一定细菌的大于酵母菌的，与细菌的种类有关，部分细菌的菌落小于酵母菌，B错误；
C、通常细菌和酵母菌的培养基都可以用高压蒸汽灭菌法灭菌，C错误；
D、血细胞计数板适用于真菌的计数，细菌计数板用于细菌的数量测定等，D错误。
故选A。
5. 人们在研究、利用微生物时，需用无菌技术培养获取纯种微生物，并对其进行计数或保存。下列有关叙述正确的是（ ）
A. 用稀释涂布平板法进行微生物计数时，结果往往比实际值低
B. 培养基配制过程是计算、称量、溶化、调pH、定容、灭菌、倒平板
C. 高压蒸汽灭菌后，打开排气阀，待压力表指针降至“0”后开盖取物
D. 获得纯种微生物后，利用涂布平板法接种至斜面培养基上，进行低温保存
【答案】A
【解析】
【分析】1、稀释涂布平板法：将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在，再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。2、平板划线法：把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞，用接种环在平板表面上作多次由点到线的划线稀释而获得较多独立分布的单个细胞，并让其成长为单菌落的方法。
【详解】A、用稀释涂布平板法进行微生物计数时，由于两个或多个细菌常形成一个菌落，因此结果往往比实际值低，A正确；
B、培养基配制过程是计算、称量、溶化、定容、调pH、灭菌、倒平板，B错误；
C、高压蒸汽灭菌后，待压力表指针降至“0”后打开排气阀，开盖取物，C错误；
D、获得纯种微生物后，利用划线分离法接种至斜面培养基上，进行低温保存，D错误。
故选A。
6. 为加速我国北方冬春季秸秆原位还田的腐化过程，研究人员以冻牛粪为材料筛选出耐低温（10℃）的纤维素降解菌。相关叙述正确的是（ ）
A. 选用冻牛粪为材料与其富含纤维素及含耐低温微生物有关
B. 初筛菌种前，要利用固体培养基在37℃条件下扩大培养目标菌种
C. 用于筛选的培养基是加入刚果红染料的牛肉膏蛋白胨培养基
D. 应选择菌落直径与周围透明圈直径比值大的菌落进行纯化
【答案】A
【解析】
【分析】刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不与水解后的纤维二糖、葡萄糖等发生这种反应。当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红与纤维素形成红色复合物；而当纤维素被纤维素分解菌分解后，复合物就无法形成，培养基中会出现以这些菌为中心的透明圈。
【详解】A、筛选耐低温的纤维素降解菌需要到其所生活的环境中寻找，冻牛粪中富含纤维素，有很多微生物，冻牛粪因温度低，故其内的微生物是耐低温微生物，A正确；
B、初筛菌种前，要利用液体培养基10℃条件下扩大培养目标菌种，B错误；
C、用于筛选的培养基以纤维素为唯一的碳源的固体培养基，加入刚果红染料是鉴别作用，C错误；
D、由于刚果红染料与纤维素形成红色复合物，因此出现以因纤维素降解菌为中心的透明圈，菌落直径与透明圈直径比值越小，分解纤维素的能力越强，D错误。
故选A。
7. β苯乙醇是赋予白酒特征风味的物质。从某酒厂采集并筛选到一株产β苯乙醇的酵母菌突变株，然后将该突变株扩大培养后用于白酒生产。下列叙述正确的是（ ）
A. 该培养过程包括配制培养基、灭菌、分离和培养四个步骤
B. 配制培养基时应加入β苯乙醇作为主要能源物质
C. 所用培养基及接种工具分别采用湿热灭菌和干热灭菌
D. 培养阶段需保证培养液适宜的pH和充足的溶氧量
【答案】D
【解析】
【分析】实验室常用的灭菌方法：①灼烧灭菌：将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属工具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌，此外，在接种过程中，试管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通过火焰燃烧来灭菌。②干热灭菌：能耐高温的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等，可以采用这种方法灭菌。③高压蒸汽灭菌：将灭菌物品放置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内，为达到良好的灭菌效果，一般在压力为100kPa,温度为121℃的条件下，维持15～30min。
【详解】A、分离并获得该突变株的培养过程包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤，A错误；
B、分析题意，本实验目的是筛选产β苯乙醇的酵母菌突变株，培养基的主要能源物质应是碳源和氮源，B错误；
C、培养基的灭菌方法是高压蒸汽灭菌（湿热灭菌），接种工具如接种环等应采用灼烧灭菌，C错误；
D、酵母菌培养时应在有氧条件下进行，以使其大量繁殖，故培养阶段需保证培养液适宜的pH和充足的溶氧量，D正确。
故选D。
8. 下列关于发酵工程及其应用的叙述，正确的是（ ）
A. 酵母菌发酵产生的单细胞蛋白，可制成微生物饲料
B. 菌种的选育是发酵工程的中心环节，优良菌种可从自然界筛选出来
C. 酱油制作中利用黑曲霉将原料中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸
D. 啤酒发酵过程中糖的分解和代谢物的生成主要在后发酵阶段完成
【答案】C
【解析】
【分析】发酵工程是指采用现代工程技术手段，利用微生物的某些特定功能，为人类生产有用的产品，或直接把微生物应用于工业生产过程的一种技术。发酵工程的内容包括菌种选育、培养基的配置、灭菌、种子扩大培养和接种、发酵过程和产品的分离提纯等方面。
【详解】A、用单细胞蛋白制成的微生物饲料，其中的单细胞蛋白是微生物菌体，并不是酵母菌发酵产生的单细胞蛋白，A错误；
B、发酵罐内发酵是发酵工程的中心环节，B错误；
C、黑曲霉可产生蛋白酶、脂肪酶等多种酶，酱油制作中利用黑曲霉将原料中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸，C正确；
D、啤酒发酵过程中糖的分解和代谢物的生成主要在主发酵阶段完成，D错误。
故选C。
9. 植物组织培养技术越来越多的用于商业化生产。下列相关叙述错误的是（ ）
A. 可利用发酵罐来大规模培养植物细胞以实现代谢产物的工业化生产
B. 脱分化和再分化所用培养基中生长素和细胞分裂素相对含量不同
C. 对试管苗炼苗（驯化）的操作步骤之一是用流水除去根部培养基
D. 用同一植株体细胞离体培养获得的再生苗不会出现变异
【答案】D
【解析】
【分析】植物组织培养过程是：离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织，然后再分化生成根、芽，最终形成植物体。植物组织培养依据的原理是植物细胞的全能性。
【详解】A、可利用发酵罐来大规模培养植物细胞以实现代谢产物的工业化生产，发酵罐培养植物细胞，它不受季节、天气等限制，不占用耕地，A正确；
B、脱分化和再分化所用培养基中生长素和细胞分裂素相对含量不同，脱分化过程中生长素和细胞分裂素比值为1:1，再分化过程生长素和细胞分裂素比值小于1:1时分化为芽，大于1:1时分化为根，B正确；
C、对试管苗炼苗（驯化）的操作步骤之一是用流水除去根部培养基，再将幼苗移植到消毒过后的蛭石或珍珠岩等环境中，C正确；
D、用同一植株体细胞离体培养过程中，在细胞分裂时可能会发生变异，因此获得的再生苗可能会出现变异，D错误；
故选D。
10. 下列关于“菊花的组织培养”的实验，叙述错误的是（ ）
A. 实验材料和用具都要灭菌，接种器械采用干热灭菌法灭菌
B. 在酒精灯火焰旁，将外植体的1/3～1/2插入培养基进行接种
C. 脱分化期间一般不需要光照，再分化过程中需给予适当光照
D. 挑出的愈伤组织先转接到生芽培养基，生芽后再转接到生根培养基
【答案】A
【解析】
【分析】植物组织培养的过程为：离体的植物组织，器官或细胞经过脱分化（避光）形成愈伤组织；愈伤组织经过再分化（需光）过程形成胚状体，进一步发育形成植株。
【详解】A、植物组织培养需要无菌操作，防止杂菌污染，所用器械需灼烧灭菌，实验人员和外植体需消毒操作，A错误；
B、接种时，在酒精灯火焰旁，将外植体的1/3～1/2插入诱导愈伤组织培养基，B正确；
C、脱分化期间一般不需要光照，再分化过程中需给予适当光照，目的是诱导叶绿素的形成，进一步形成叶绿体进行光合作用，C正确；
D、诱导愈伤组织形成试管苗的过程，需要将生长良好的愈份组织先转接到诱导生芽的培养基上，长出芽后，再将其转接到诱导生根的培养基上，进一步诱导生根，D正确；
故选A。
11. 下图是研究2，4-D对红色金钱柳悬浮细胞生长与花青素合成影响的实验结果。相关叙述错误的是（ ）
A. 细胞悬浮培养的主要原理是愈伤组织细胞分裂旺盛
B. 培养基应用葡萄糖、无机盐、激素等配制
C. 本实验中2，4-D具有抑制细胞生长的作用
D. 结果表明一定浓度的2，4-D会促进花青素的合成
【答案】B
【解析】
【分析】植物激素是由植物体内产生，能从产生部位运送到作用部位，对植物的生长发育有显著影响的微量有机物。人们发现的植物激素有生长素、赤霉素、细胞分裂素、脱落酸和乙烯等。
【详解】A、愈伤组织是不定形的薄壁组织团块，愈伤组织细胞分裂旺盛，是细胞悬浮培养的主要原理，A正确；
B、将愈伤组织接种到含有特定激素的培养基上，就可以诱导其再分化成胚状体，长出芽和根，进而发育成完整的植株，愈伤组织的培养基需要添加蔗糖，B错误；
C、2，4－D是生长素类似物，由图可知，生物量随2，4－D浓度的增大而减小，说明本实验中2，4－D具有抑制细胞生长的作用，C正确；
D、当2，4－D的浓度小于0.25mg/L时，花青素的产量高于对照组，说明一定浓度的2，4－D会促进花青素的合成，D正确。
故选B。
12. 下图是生产抗新冠病毒的单克隆抗体的过程。下列有关叙述正确的是（ ）
A. ②过程经细胞融合，获得的杂交瘤细胞只有一种
B. ③过程经过选择培养后，只有自身融合的细胞死亡
C. ④过程进行抗体检测，若结果为阴性，则应重新实验
D. 为保证获得足量相应的B淋巴细胞，①过程应给小鼠注射大量的新冠病毒
【答案】C
【解析】
【分析】题图分析：图示是生产抗新冠病毒的单克隆抗体过程，其中①表示给小鼠注射特定抗原，②表示细胞融合，③表示筛选出杂交瘤细胞，④表示专一抗体检测和克隆化培养。
【详解】A、②过程融合形成的杂交瘤细胞有多种，A错误；
B、③过程经过选择培养后自身融合细胞和未融合的细胞都死亡，B错误；
C、④过程若进行专一抗体检测结果阴性，说明细胞融合失败，需要重新实验，C正确；
D、为保证获得相应B淋巴细胞，①过程应给小鼠注射适量的新冠病毒的相应抗原，D错误。
故选C。
13. 下列有关胚胎工程的叙述，正确的是（ ）
A. 移入子宫的外来胚胎，在受体体内会发生免疫排斥反应
B. 自然条件下，哺乳动物的精子获能发生在睾丸的曲细精管内
C. 受精过程中，透明带处会出现阻止多精入卵的生理反应
D. 对桑椹胚进行胚胎分割移植时，应将内细胞团均等分割
【答案】C
【解析】
【分析】胚胎工程是指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术。包括体外受精、胚胎移植、胚胎分割移植、胚胎干细胞培养等技术。
【详解】A、受体对移入子宫的外来胚胎基本不发生免疫排斥反应，这是胚胎在受体内能够存活的生理基础，A错误；
B、哺乳动物受精前，精子必须在雌性动物生殖道发生相应的生理变化后，才能获得受精能力，该过程被称为精子获能，故精子获能的场所是雌性动物生殖道，B错误；
C、受精作用过程中，透明带反应是阻止多精入卵的第一道屏障，卵黄膜反应是阻止多精入卵的第二道屏障，C正确；
D、胚胎分割的对象是桑椹胚或囊胚，在对囊胚分割时，应注意将内细胞团均等分割，D错误。
故选C。
14. 下列有关细胞工程和胚胎工程的叙述，正确的是（ ）
A. 利用茎尖进行植物组织培养可以增强植物体对病毒的抵抗能力
B. 植物体细胞杂交技术和动物细胞融合技术均可催生出异源多倍体
C. 胚胎移植前需对早期胚胎进行质量检查和对受体进行免疫检查
D. 单克隆抗体的制备、基因工程、杂交育种均涉及到多轮次筛选
【答案】D
【解析】
【分析】植物组织培养是指将离体的植物器官、组织或细胞等，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其形成完整植株的技术。植物体细胞杂交是指将不同来源的植物体细胞，在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成新植物体的技术。动物细胞工程常用的技术包括动物细胞培养、动物细胞融合和动物细胞核移植等，其中动物细胞培养是动物细胞工程的基础。胚胎工程是指对生殖细胞、受精卵或早期胚胎细胞进行多种显微操作和处理，然后将获得的胚胎移植到雌性动物体内生产后代，以满足人类的各种需求。胚胎工程技术包括体外受精、胚胎移植和胚胎分割等。
【详解】A、利用茎尖进行植物组织培养可以获得脱毒苗，使植物不含病毒，但不能增强植物体对病毒的抵抗能力，A错误；
B、目前动物细胞融合技术只能得到杂交细胞，还不能形成完整的个体，B错误；
C、胎移植前需对早期胚胎进行质量检查但不需要对受体进行免疫检查，C错误；
D、单克隆抗体的制备、基因工程、杂交育种均涉及到多轮次筛选，已获得需要的性状，D正确。
故选D。
二、多项选择题：共5题，每题3分，共15分。每题有不止一个选项符合题意。每题全选对者得3分，选对但不全的得1分，错选或不答的得0分。
15. 鱼茶味酸而微咸，富含多种必需氨基酸。鱼茶的发酵菌群主要是乳酸菌，如图是某同学绘制的鱼茶发酵过程中各菌种数量及发酵液pH的变化曲线。下列有关叙述错误的有（ ）
A. 与制作传统泡菜类似，鱼茶发酵也无需严格灭菌
B. 乳酸菌发酵时会积累NADH导致发酵液pH变小
C. 利用显微镜直接计数可快速直观检测微生物数量
D. 醋酸菌和酵母菌消失的原因都是因为氧气已耗尽
【答案】BD
【解析】
【分析】酵母菌新陈代谢类型为异养兼性厌氧型，醋酸菌新陈代谢类型是异养需氧型。
【详解】A、传统泡菜制作和鱼茶发酵过程都是传统发酵过程，一般利用的是自然条件下的微生物，不需要严格灭菌，A正确；
B、乳酸菌发酵不会积累NADH，会积累乳酸导致pH变小，B错误；
C、显微镜直接计数可利用血细胞计数板等快速观察并统计微生物的数量，C正确；
D、酵母菌可进行无氧呼吸，消失的原因是养料耗尽、代谢废物积累等，D错误。
故选BD。
16. 某醋厂和啤酒厂的工艺流程如图所示。酒曲含有霉菌、酵母菌、乳酸菌；醋醅含有醋酸菌；糖化即淀粉水解过程。下列相关叙述正确的有（ ）
A. 糯米“蒸熟”与大米“蒸煮”的目的是利于糖化和灭菌
B. 发酵原理是利用真菌的无氧呼吸与细菌的有氧呼吸
C. 醋酸发酵过程中经常翻动发酵物，可控制发酵温度和改善通气状况
D. 啤酒酿造流程中适当增加溶解氧可缩短发酵时间
【答案】ACD
【解析】
【分析】1.果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧型生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖，在无氧条件下，酵母菌进行酒精发酵。温度是酵母菌生长和发酵的重要条件，20℃左右，酒精发酵时，一般将温度控制在18~30℃，在葡萄酒自然发酵过程当中，其主要作用的是附着在葡萄皮上的野生酵母菌。
2.醋酸菌是一种好氧细菌，只有当氧气充足时，才能进行旺盛的生理活动。醋酸菌对氧气的含量特别敏感，当进行深层发酵时，即使只是短时间中断通入氧气，也会引起醋酸菌死亡。当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。醋酸菌的最适生长温度为30~35℃。
【详解】A、糯米“蒸熟”与大米“蒸煮”的目的均有利于灭菌和糖化过程，A正确；
B、图中制酒用到了酒曲，酒曲含有霉菌、酵母菌、乳酸菌，霉菌属于真菌，其为需氧型，该过程霉菌产生的淀粉酶有利于将糯米中的淀粉分解，其中的乳酸菌进行的是无氧呼吸，酵母菌主要进行无氧呼吸过程完成酿酒的过程，醋酸发酵过程中主要利用了醋酸杆菌的有氧呼吸进行醋酸发酵，B错误；
C、醋酸发酵过程中利用了醋酸菌的有氧呼吸，在发酵过程中经常翻动发酵物，有利于散热，可控制发酵温度和改善通气状况，C正确；
D、啤酒酿造流程中利用的原理是酵母菌的无氧呼吸产生酒精的过程，若适当增加溶解氧有利于酵母菌有氧呼吸产生更多的能量满足酵母菌自身增殖的需要，因而可缩短发酵时间，D正确。
故选ACD。
17. 下列关于动物细胞工程和胚胎工程的叙述正确的是（ ）
A. 培养动物细胞的时候既需要氧气也需要二氧化碳
B. 通常采用培养法或化学诱导法使精子获得能量后进行体外受精
C. 动物克隆涉及体细胞核移植、动物细胞培养、胚胎移植等技术
D. 制备产生单克隆抗体的杂交瘤细胞必须进行克隆化培养和抗体检测
【答案】ACD
【解析】
【分析】单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。
【详解】A、培养动物细胞的时候既需要氧气也需要二氧化碳：95%空气（含有氧气，是细胞代谢必需的）和5%的CO2（维持培养液的pH），A正确；
B、精子获能不等于获得能量，B错误；
C、动物克隆目前主要通过核移植技术实现，动物克隆涉及体细胞核移植、动物细胞培养、胚胎移植等技术，C正确；
D、制备产生单克隆抗体的杂交瘤细胞必须进行克隆化培养，保证获得的抗体纯度高，且扩大细胞的数量，获得更多的抗体，也必需进行抗体检测，选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞，D正确。
故选ACD。
18. 我国科学家利用猴胚胎干细胞首次创造了人工“猴胚胎”，研究流程如图所示。下列相关叙述正确的有（ ）
A. 猴的成纤维细胞和胚胎干细胞功能不同，但具有相同的基因组
B. 囊胚细胞②③都由细胞①分裂分化形成，但表达的基因都不同
C. 移植前细胞和囊胚的培养都要放在充满CO₂的培养箱中进行
D. 移植后胚胎的发育受母体激素影响，也影响母体激素分泌
【答案】AD
【解析】
【分析】胚胎干细胞具有全能性，利用猴胚胎干细胞首次创造了人工“猴胚胎”，是利用了胚胎干细胞的全能性。
【详解】A、由于猴的成纤维细胞和胚胎干细胞是由猴胚胎干细胞分裂分化而来，虽然功能不同，但基因组相同，A正确；
B、囊胚细胞②③都由细胞①分裂分化形成，但表达的基因有部分不同，但有部分基因所有细胞都表达（如呼吸酶基因），B错误；
C、动物细胞培养和早期胚胎培养需要在95%空气和5%二氧化碳的环境中培养，C错误；
D、胚胎移植后胚胎的发育受母体激素影响，也影响母体激素分泌，D正确。
故选AD。
19. 草莓是无性繁殖的作物，它感染的病毒很容易传播给后代。病毒在草莓体内逐年积累，会导致产量降低，品质变差。下图是育种工作者选育高品质草莓的流程图。下列有关叙述错误的是（ ）
A. 方法一中，甲常选用茎尖，原因是其几乎未感染病毒
B. 通常采用95％的酒精和5％次氯酸钠溶液对甲进行消毒处理
C. A、C两个过程属于植物组织培养，都经过脱分化和再分化
D. 判断两种选育方法的效果都需要通过病毒接种实验
【答案】BD
【解析】
【分析】植物组织培养的过程是离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织，然后再分化形成根，芽，最终发育成植物体。
根据题图，方法一是采用植物组织培养的方法培育脱毒苗，方法二是通过基因工程手段获得的抗病毒草莓。
【详解】A、植物的分生区附近(如茎尖)的病毒极少，几乎不含病毒，因此对茎尖进行植物组织培养，可以获得脱毒植株，A正确；
B、在植物组织培养中，需要用75％的酒精和5％次氯酸钠溶液对甲进行消毒处理，保证植物组织培养的成功，B错误；
C、A、C两个过程属于植物组织培养，都经过脱分化形成愈伤组织和再分化形成根芽，最终发育成植株，C正确；
D、方法一获得的无病毒苗应根据植株性状检测，不需要接种病毒；方法二获得的抗病毒草莓需要通过接种病毒检测，D错误。
故选BD。
三、非选择题：共5题，共57分。除特别说明外，每空1分。
20. 尿素是一种重要的农业肥料，需经细菌的分解才能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，下列是从土壤中分离分解尿素细菌的有关问题，请回答下列问题。
（1）如图是利用________法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步________到培养基的表面。除此方法外，获得纯培养物的接种方法还有________________。
（2）在培养基上进行划线操作中，在2至5区域每次划线之前都要灼烧接种环的目的是____________。
（3）下面是两种培养基配方：
表1：A培养基配方
表2：B培养基配方
①微生物纯培养的操作步骤：________(用字母顺序回答)。
a. 接种 b. 配制培养基 c. 灭菌 d. 分离和培养
②如果要分离土壤中能分解尿素的细菌，应选择________(填“A”或“B”)配方的培养基，在该培养基中加入________指示剂，可初步鉴定出该种细菌能否分解尿素。
③据B培养基的成分，所培养微生物的同化作用类型是________(填“自养型”或“异养型”)。
（4）三位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数量。在对应稀释倍数为106的培养基中，取0.2 mL稀释液涂布，得到以下统计结果：
甲同学涂布了1个平板，统计的菌落数是260；
乙同学涂布了3个平板，统计的菌落数是210、240和246，取平均值232；
丙同学涂布了3个平板，统计的菌落数是21、212和256，取平均值163；
在三位同学的统计中，________同学的统计结果是相对准确可信的。按照该同学的结果，每毫升原液中的菌体数是________。用这种方法测得的菌体数比实际活菌数量________。
【答案】（1） ①. 平板划线 ②. 稀释 ③. 稀释涂布平板法
（2）灭菌 （3） ①. bcad ②. A ③. 酚红 ④. 异养型
（4） ①. 乙 ②. 1.16×109 ③. 少
【解析】
【分析】微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落；②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
【小问1详解】
据图可知，图示划线方法有多条线条，故是利用平板划线法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释到培养基的表面；除此方法外，常用的微生物接种方法还有稀释涂布平板法。
【小问2详解】
在培养基上进行划线操作中，在2至5区域每次划线之前都要灼烧接种环的目的是使划线的菌种来自上次划线的末端，即要灭菌处理。
【小问3详解】
①微生物纯培养的操作步骤是b配制培养基、c灭菌、a接种 和d分离和培养。
②如果要分离土壤中能分解尿素的细菌，应选择上述以尿素为唯一氮源的培养基，即B培养基；在该培养基中加入酚红指示剂，尿素分解菌能够将尿素分解为氨，从而使酚红指示剂变红，可初步鉴定出该种细菌能否分解尿素。
③B培养基的成分中，碳源为有机物，所培养微生物的同化作用类型是异养型。
【小问4详解】
稀释涂布平板法统计菌落数目时，应选择菌落在30-300之间的，且3个平板数据差距不能过大，在三位同学的统计中，乙同学的统计结果是相对准确可信的；按照该同学的结果，每克样品中的菌落数=平板上菌落数的平均值÷体积×稀释倍数=232÷0.2×106=1.16×109；在用稀释涂布平板法进行涂布获得菌体数目时，当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察的是一个菌落，因此用这种方法测得的菌体数比实际活菌数量少。
21. 科学家用植物体细胞杂交技术，将番茄的原生质体和马铃薯的原生质体融合，成功地培育出了“番茄—马铃薯”杂种植株，培育过程如下图所示，其中①～⑤表示过程，a～f表示细胞、组织或植株。据图回答下列问题：
（1）在植物体细胞杂交技术中，过程①常用__________________酶处理植物细胞以除去细胞壁。
（2）过程②表示______________，依据的生物学原理是_______________________。
（3）与过程③密切相关的具有单层膜结构的细胞器是________。
（4）在利用杂种细胞培育杂种植株的过程中，依据的原理是___________________，其中过程④表示________________过程，过程⑤涉及的细胞分裂方式为________________________。
（5）若番茄细胞内含m条染色体，马铃薯细胞内含n条染色体，则“番茄—马铃薯”杂种植株的体细胞内含________条染色体；若由杂种细胞培育成的“番茄—马铃薯”植株为四倍体，则此杂种植株的花粉经离体培养得到的植株为几倍体？________。
（6）如果形成c的原生质体a、b来源于同一株番茄，那么更常用且有效地得到番茄植株f的处理方法是________。
【答案】（1）纤维素酶和果胶
（2） ①. 诱导原生质体融合 ②. 细胞膜具有一定的流动性
（3）高尔基体 （4） ①. 植物细胞的全能性 ②. 脱分化 ③. 有丝分裂
（5） ①. m＋n ②. 单倍体
（6）用适宜浓度的秋水仙素处理萌发的番茄种子或幼苗
【解析】
【分析】分析题图：过程①是通过酶解法去除细胞壁获得原生质体a和b，过程②通过物理或化学方法诱导原生质体融合成c，过程③是再生细胞壁形成杂种细胞d，过程④是脱分化过程形成愈伤组织e，过程⑤是再分化生成完整植株。
【小问1详解】
植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，根据酶的专一性原理，过程①可使用纤维素酶和果胶酶处理细胞以除去细胞壁，得到原生质体。
【小问2详解】
据图分析，过程②表示通过物理或化学方法诱导原生质体融合，依据的生物学原理是细胞膜具有一定的流动性。
【小问3详解】
过程③是再生细胞壁形成杂种细胞，而细胞壁的形成与高尔基体有关。
【小问4详解】
杂种细胞经过植物组织培养培育成杂种植株，依据的原理是植物细胞的全能性，据图分析可知，其中过程④表示脱分化过程形成愈伤组织e，过程⑤表示再分化过程，涉及的细胞分裂方式为有丝分裂。
【小问5详解】
若番茄细胞内含m条染色体，马铃薯细胞中含n条染色体，则“番茄-马铃薯”细胞内染色体数为两细胞染色体数之和，即m+n条染色体；若杂种细胞培育成为“番茄--马铃薯”植株为四倍体，此杂种植株的花粉是生殖细胞，由生殖细胞直接发育而来的生物体，不管含有一个或多个染色体组，都是单倍体。
【小问6详解】
如果形成c的原生质体a、b来源于同一株番茄，那么该过程形成的是四倍体番茄，而得到四倍体番茄更简单的处理方法是用适宜浓度的秋水仙素处理萌发的番茄种子或幼苗。
【点睛】本题结合图解，考查细胞工程的相关知识，要求考生识记植物体细胞杂交的具体过程及意义，能正确分析题图，能结合所学的知识准确答题。
22. 德尔塔变异株是目前新冠肺炎传播的主要变异株。新型冠状病毒和SARS病毒都会造成肺炎，如图是SARS-CVS蛋白特异性单克隆抗体的制备过程。研究该过程可为治疗新冠带来新希望。回答下列问题：
（1）若只考虑细胞两两融合，图中甲理论上有_____种。
（2）已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基蝶呤阻断。小鼠的淋巴细胞有上述两种途径，但一般不分裂增殖，小鼠的骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能通过D途径不断分裂增殖。根据该原理，在含甲的混合培养液中添加氨基蝶呤_____（填“能”或“不能”）筛选出A，原因是_____。
（3）SARS-CVS蛋白单克隆抗体_____（填“能”或“不能”）对新型冠状病毒发挥作用，理由_____。
（4）为了进一步研究SARS-CVS蛋白单克隆抗体X（以下简称抗体X）的效果及作用机制，科学家开展了如下实验：
实验一：在体外将抗体X与SARS-CVS蛋白混合，检测抗体X对SARS-CVS蛋白的亲和力。实验结果如下表所示。
（注：KD值越小，抗体和蛋白的亲和力越高；抗体Y为一种已知的SARS病毒的抗体。）
实验二：以一定浓度的SARS病毒感染小鼠；一天后向小鼠腹腔分别注射一定剂量的抗体X、Y；14天后测定小鼠存活情况和体重变化。实验结果表明：抗体X的体内治疗效果优于抗体Y。
①实验一结果表明：对SARS-CVS蛋白亲和力更高的抗体是_____。
②分析实验一和实验二的结果差异，研究人员提出假说：抗体除了中和病毒活性之外，还可以通过和巨噬细胞表面的受体相结合，从而增强巨噬细胞的吞噬作用，进而清除被病毒感染的靶细胞。请以巨噬细胞、感染了SARS病毒的肺上皮细胞、细胞培养液、抗体X、抗体Y和无关抗体等为材料，设计实验验证上述假说。写出实验思路_____。
【答案】（1）3##三
（2） ①. 能 ②. 杂交瘤细胞D途径被氨基嘌呤阻断后不能合成DNA，但可通过S途径合成DNA，不断分裂增殖
（3） ①. 不能 ②. 新冠病毒与SARS病毒的抗原不同，SARS-CVS蛋白单克隆抗体只能与SARS-CVS蛋白发生特异性结合
（4） ①. Y ②. 将巨噬细胞及感染了SARS病毒的肺上皮细胞分别加入A、B、C三组细胞培养液中，并向这三组培养液中分别加入无关抗体、抗体X和抗体Y，一段时间后检测并比较肺上皮细胞的裂解百分比
【解析】
【分析】单克隆抗体的制备过程是：对小动物注射抗原，从该动物的脾脏中获取效应B细胞，将效应B细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选出能产生单一抗体的杂交瘤细胞，克隆化培养杂交瘤细胞（体内培养和体外培养），最后获取单克隆抗体。
【小问1详解】
若只考虑细胞两两融合，融合体系中有3种杂交细胞为骨髓瘤细胞与骨髓瘤细胞细胞杂交、淋巴细胞与淋巴细胞融合，以及所需的骨髓瘤细胞与淋巴细胞融合。
【小问2详解】
在含甲的混合培养液中添加氨基嘌呤后，已免疫的B细胞及其彼此融合的细胞能利用S途径进行DNA合成，但是无法进行分裂增殖，骨髓瘤细胞的D合成途径被阻断，所以骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能增殖，只有骨髓瘤细胞与已免疫的B细胞融合形成杂种细胞能利用S途径合成DNA并进行分裂增殖从而存活下来，所以在含甲的混合培养液中添加氨基嘌呤能筛选出杂交瘤细胞A。
【小问3详解】
SARS-CVS蛋白单克隆抗体不能对新型冠状病毒发挥作用，因为新冠病毒与SARS病毒的抗原不同，SARS-CVS蛋白单克隆抗体只能与SARS-CVS蛋白发生特异性结合。
【小问4详解】
①由表格分析可知，抗体Y的KD值低于抗体X，说明抗体Y和SARS-CVS蛋白的亲和力高于抗体X。
实验设计应该遵循单一变量和对照原则，该实验是为了探究抗体除了中和病毒活性之外，还可以通过和巨噬细胞表面的受体相结合，从而增强巨噬细胞的吞噬作用，进而清除被病毒感染的靶细胞。可以通过检测并比较肺上皮细胞的裂解百分比来验证假说。所以实验思路如下：
②实验思路：将巨噬细胞及感染了SARS病毒的肺上皮细胞分别加入A、B、C三组细胞培养液中，并向这三组培养液中分别加入无关抗体、抗体X和抗体Y，一段时间后检测并比较肺上皮细胞的裂解百分比。
【点睛】本题考查了单克隆抗体的制备过程的相关知识，考生掌握单克隆抗体的制备过程及其原理，能够利用动物细胞培养和细胞融合技术对相关问题进行解释，并能理解单克隆抗体的特性是解答本题的关键。
23. Ndrg2基因参与神经系统的发育和退行性疾病的发生和发展，并可参与血管的形成。为研究Ndrg2基因的功能，可利用染色体位点特异性重组酶系统Cre-LxP构建Ndrg2基因敲除小鼠（如下图1、2所示），并对其进行鉴定和表型分析。请回答下列问题：
（1）图1中LxP序列的方向取决于序号___对应的区域。一个LxP序列的内部被Cre重组酶切割后会增加___个游离的磷酸基团。
（2）当两个lxP序列位于同一个DNA分子上且方向相同时，Cre重组酶能将两个切割位点之间的核苷酸序列切除并形成环状而失活，剩余序列会连接起来。据此可知，Cre重组酶在此过程中的作用类似于___酶。当两个LxP序列方向相反时，Cre重组酶使两个lxP间的序列颠倒，由此产生的变异本质上属于___。
（3）构建Ndrg2基因敲除小鼠需要先构建Flx小鼠（该小鼠的Ndrg2基因两侧需插入Lxp序列）。为构建相应的基因表达载体，据图2分析，应选择限制酶___处理含有Ndrg2基因的DNA片段，而在处理质粒时应选用限制酶___。质粒中启动子的作用是___。
（4）将重组质粒导入小鼠___。经胚胎工程获得杂合Flx小鼠（flx/+）,之后雌雄小鼠相互交配可获得纯合Flx小鼠。
（5）构建Ndrg2基因敲除小鼠还需要构建Cre转基因小鼠（cre/+）（Cre基因上游添加有造血干细胞基因启动子EDAG）。已知Ndrg2基因与Cre重组酶基因独立遗传，现将纯合Flx小鼠（flx/flx）与Cre转基因小鼠（cre/+）交配，将F1中的双杂合小鼠雌雄交配，获得造血干细胞中Ndrg2基因完全敲除的小鼠的概率为___。
（6）以下能说明造血干细胞中Ndrg2基因完全敲除小鼠构建成功有___。
①小鼠不同组织中提取的DNA可检测到cre基因
②小鼠造血干细胞中Ndrg2基因的mRNA基本为零
③利用抗原抗体杂交技术在造血干细胞中检测不到有Ndrg2蛋白
【答案】23. ①. ② ②. 2##两##二
24. ①. 限制酶和DNA连接 ②. 染色体结构变异（或倒位）
25. ①. HindIⅢ与Sau3I ②. HindⅢ与BclI ③. （与RNA聚合酶结合，）驱动基因转录出mRNA
26. 受精卵 27. 3/16
28. ②③
【解析】
【分析】 基因工程：目的基因的筛选与获取、构建基因表达载体、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。
【小问1详解】
LxP序列①和③是反向重复序列，因此图1中LxP序列的方向取决于序号②对应的区域。一个LxP序列内部经过切割后会增加两个游离的磷酸基团。
【小问2详解】
Cre重组酶能将两个切割位点之间的核苷酸序列切除并形成环状而失活，剩余序列会连接起来。据此可知，Cre重组酶在此过程中的作用类似于限制酶和DNA连接酶。Cre重组酶使两个lxP间的序列颠倒，由此产生的变异本质上属于染色体结构变异（或倒位）。
【小问3详解】
据图2分析，Ndrg2基因两侧需插入Lxp序列，且方向相同，且需要保证只留下一个抗性基因作为标记基因，应选择限制酶HindⅢ与Sau3I处理含有Ndrg2基因的DNA片段，质粒则需要选择HindⅢ与BclI。质粒中启动子的作用是（与RNA聚合酶结合）驱动基因转录出mRNA。
【小问4详解】
动物基因工程的受体细胞一般选择受精卵。
【小问5详解】
现将纯合Flx小鼠（flx/flx）与Cre转基因小鼠（cre/+）交配，将F1中的双杂合小鼠雌（flx/+、cre/+，一个Ndrg2基因被敲除）雄（flx/+、cre/+，一个Ndrg2基因被敲除）交配，获得造血干细胞中Ndrg2基因完全敲除的小鼠（同时获得父母各一条被敲除Ndrg2基因的染色体）的概率为3/16。
【小问6详解】
Ndrg2基因完全敲除，则该基因无法转录和表达，小鼠造血干细胞中Ndrg2基因的mRNA基本为零，利用抗原抗体杂交技术在造血干细胞中检测不到有Ndrg2蛋白。故选②③。
24. 人绒毛膜促性腺激素是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，由a链和β链（hCGβ）结合而成。近年研究显示，hCGβ可表达于结肠癌等多种恶性肿瘤细胞，与肿瘤的发生、发展及转移有一定关系。研发抗hCGβ疫苗已成为近年来肿瘤生物治疗新的热点，下图1为其制备的基本方案。请分析回答下列有关问题：
注1：甲序列指导合成的信号肽能引导后续合成的肽链进入内质网腔
注2：AOX1为甲醇氧化酶基因的启动子，只能在以甲醇为唯一碳源的培养基中正常表达
（1）图中hCGβ基因需要与甲序列一起构建形成融合基因，其目的是_____________。
（2）当目的基因两侧的小段序列与基因表达载体上某序列相同时，就可以发生同源切割，将目的基因直接插入。同源切割是一种代替_____________将目的基因导入基因表达载体的方法。
（3）阶段Ⅱ将环化质粒导入用_____________处理的大肠杆菌，然后在含有_____________的培养基中筛选得到含hCGβ基因表达载体的大肠杆菌后进行扩增。
（4）为了检验重组质粒是否构建成功，提取大肠杆菌中的质粒为模板，设计相应的引物进行PCR扩增，则最好选择图2中的引物_____________。PCR反应体系中需加入模板、_____________、_____________、引物、Mg2+、缓冲液等，再将扩增产物进行_____________来确定可用于导入酵母菌的重组质粒。
（5）阶段IV需将处理后的酵母菌接种在培养基上培养，该培养基不需要添加以下哪些成分________（a．氨苄青霉素b．组氨酸c．无机盐d．琼脂），可在此培养基上生长的酵母菌即为含有hCGβ基因表达载体的目的菌株。将此菌株扩大培养后，离心取上清液，用_____________进行检测。若上清液中能检测到hCGβ蛋白，则说明hCGβ基因得以表达。
（6）从生产控制的角度分析，选用AOX1作为hCGβ基因启动子的优点是___________。
【答案】（1）有利于hCGβ进入内质网加工
（2）限制酶 （3） ①. CaCl2 ②. 氨苄青霉素
（4） ①. P1和P6 ②. Taq酶 ③. dNTP ④. 电泳##测序
（5） ①. a、b ②. 抗原—抗体杂交法（hCGβ的抗体）
（6）可以通过控制培养液中甲醇作为唯一碳源，来控制hCGβ基因表达
【解析】
【分析】图1中Ⅰ为基因表达载体的构建过程，Ⅱ是将重组DNA导入大肠杆菌，Ⅲ是提取并鉴定所需要的重组质粒，Ⅵ是将选择的重组质粒导入酵母菌内，Ⅴ是筛选符合要求的酵母菌，Ⅵ是提取目的基因的产物。
【小问1详解】
甲序列指导合成的信号肽能引导后续合成的肽链进入内质网腔，因此hCGβ基因需要与甲序列一起构建形成融合基因，其目的是有利于hCGβ进入内质网中加工，并分泌到细胞外。
【小问2详解】
传统重组质粒构建过程需要使用限制酶和DNA连接酶，而该过程是运用同源切割的方式在hCGβ基因两端加上一组同源序列A、B，然后将hCGβ基因与线性质粒载体混合后，在重组酶和DNA连接酶的作用下可形成环化质粒，该过程没有使用限制酶。所以同源切割是一种代替限制酶将目的基因导入基因表达载体的方法。
【小问3详解】
将重组质粒导入大肠杆菌时，应先用CaCl2处理大肠杆菌，使其成为感受态。由于线性质粒上含有氨苄青霉素基因，因此导入环化质粒的大肠杆菌具有氨苄青霉素抗性，因此应在含有氨苄青霉素的培养基中筛选得到含hCGβ基因表达载体的大肠杆菌后进行扩增。
【小问4详解】
融合基因包含了目的基因和AB序列，则进行设计引物的时候应该包括AB序列和目的基因的部分序列，所以图中的引物1和引物6是合适的引物。PCR的反应体系包括模板、引物、Taq酶、dNTP（作为合成DNAD 原料）、缓冲液等，扩增的产物可通过电泳或测序的方法进行鉴定。
【小问5详解】
由于环状质粒中含有组氨酸合成酶基因和氨苄青霉素抗性基因，且筛选重组质粒时大肠杆菌是在含有氨苄青霉素的培养基上培养的，因此为筛选导入重组质粒的酵母菌，培养基中不需要再加入组氨酸和氨苄青霉素，但需要加入无机盐和琼脂，形成固体培养基，以筛选目的菌体。 hCGβ是一种分泌蛋白，可被分泌到细胞外，将培养物离心后分出细胞和培养液两部分，细胞经破碎处理后，再次离心取上清液，可获得较多的hCGβ，用抗hCGβ单克隆抗体分别进行检测，即抗原—抗体杂交法。若培养液及上清液中均能检测到hCGβ蛋白，则说明hCGβ基因在酵母菌细胞中得到表达，并能分泌到细胞外。
【小问6详解】
AOXⅠ为甲醇氧化酶基因的启动子，只能在以甲醇为唯一碳源的培养基中正常表达，因此选用AOX1作为hCGβ基因启动子，可以通过控制培养液中甲醇的有无，来控制hCGβ基因的表达hCGβ蛋白的合成。KH2PO4
Na2HPO4
MgSO4·7H2O
葡萄糖
尿素
琼脂
H2O
1.4 g
2.1 g
0.2 g
10.0 g
1.0 g
15.0 g
1 000 mL
纤维素粉
NaNO3
Na2HPO4·7H2O
KH2PO4
MgSO4·7H2O
KCl
酵母浸膏
H2O
5 g
1 g
1.2 g
0.9 g
0.5 g
0.5 g
0.5 g
1 000 mL
抗体种类
KD
抗体X
5．32×10-9M
抗体Y
1．95×10-9M
限制酶种类
识别序列及切割位置
BamHⅠ
5＇-G↓GATCC-3＇
BclⅠ
5＇-T↓GATCA-3＇
Sau3Ⅰ
5＇-↓GATC-3＇
HindⅢ
5＇-A↓AGCTT-3＇
EcRⅠ
5＇-G↓AATTC-3＇
一、单项选择题：本题包括14小题，每题2分，共28分。每题只有一个选项最符合题意。
1. 下列有关果酒和果醋制作的叙述，错误的是（ ）
A. 为降低杂菌污染，发酵前需要对原料和器具进行灭菌处理
B. 装置密闭发酵过程中，酒精度的变化是先增加后趋于稳定
C. 葡萄酿酒过程中，使用果胶酶利于出汁，还能提高酒的透明度
D. 由果酒制作转为果醋制作时，不仅要升高发酵温度，还要注意通气
【答案】A
【解析】
【分析】在葡萄酒的自然发酵过程中，起主要作用的是附着在葡萄皮上的野生型酵母菌。在发酵过程中，随着酒精度数的提高，红葡萄皮的色素也进入发酵液，使葡萄酒呈现深红色。在缺氧、呈酸性的发酵液中，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到抑制。
【详解】A、为降低杂菌污染，发酵前需要对器具进行消毒处理，而原料不需要消毒，因为菌种来自原料本身，消毒会导致菌种被杀死，A错误；
B、装置密闭发酵过程中，随着发酵的进行酒精积累，酒精度逐渐增大，而在发酵后期由于底物被大量消耗，导致酒精度趋于稳定，B正确；
C、果胶酶能够分解果胶，瓦解植物的细胞壁和胞间层，使葡萄酿酒变得更容易，且果胶酶能够将果胶分解成可溶性的半乳糖醛酸，因此还能提高酒的透明度，C正确；
D、果酒制作需要的菌种是酵母菌，在厌氧条件下将葡萄糖分解为酒精，果酒制作的适宜温度是18～25℃，制作果醋需要的菌种是醋酸菌，为需氧菌，果醋制作的适宜温度是30～35℃，因此由果酒制作转为果醋制作时，不仅要升高发酵温度，还要注意通气，D正确。
故选A。
2. 下列关于制作传统发酵食品的叙述，错误的是（ ）
A. 制作腐乳利用了毛霉等微生物产生的蛋白酶
B. 发酵温度过低可能会导致制泡菜“咸而不酸”
C. 制作果酒时，需每隔一定时间打开瓶盖放气
D. 制作果醋时，醋酸杆菌能以乙醇作为碳源和能源
【答案】C
【解析】
【分析】1、参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。
2、参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。果醋制作的原理：当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸。
【详解】A、参与腐乳制作的微生物主要是毛霉，制作腐乳利用了毛霉等产生的蛋白酶、脂肪酶，A正确；
B、泡菜“咸而不酸”可能是食盐浓度过高，发酵温度过低抑制乳酸菌产生乳酸所致，B正确；
C、果酒发酵时，为了排出产生的气体，需要将瓶盖拧松放气，但不能打开，否则会被杂菌污染，C错误；
D、制作果醋时，当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸，该过程中醋酸杆菌能以乙醇作为碳源和能源，D正确。
故选C。
3. 下列有关“培养”的叙述错误的是（ ）
A. 宜采用通气培养并搅拌以获取更多的紫杉醇
B. 可采用稀释涂布平板法分离纯化培养乳酸菌
C. 可在96孔板上培养和筛选特定的杂交瘤细胞
D. 采集到的卵母细胞需要在体外进行成熟培养
【答案】B
【解析】
【分析】将接种于培养基内，在合适条件下形成的含有特定种类微生物的群体称为培养物。由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物的过程就是纯培养。
【详解】A、植物细胞需要进行有氧呼吸，采用通气培养并搅拌以利于细胞呼吸和获得更多养料，进而获取更多的紫杉醇，A正确；
B、稀释涂布平板法适于分化有氧呼吸的生物，不适合用来分离纯化乳酸菌，B错误；
C、可在96孔板上利用抗原抗体杂交技术，可培养和筛选特定的杂交瘤细胞，C正确；
D、采集到的卵母细胞需要在体外进行成熟培养，培养到减数第二次分裂中期，D正确。
故选B。
4. 下列关于细菌和酵母菌实验的叙述正确的是（ ）
A. 通常酵母菌培养基比细菌培养基有更高的碳氮比
B. 通常细菌的生长速度比酵母菌快，菌落比酵母菌落大
C. 通常细菌培养基用高压蒸汽灭菌法灭菌，酵母菌培养基用过滤除菌法除菌
D. 血细胞计数板既可用于酵母菌的数量测定，也可用于细菌的数量测定
【答案】A
【解析】
【分析】培养基的营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。灭菌常用的方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌。消毒常用的方法有煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药物消毒法等。
【详解】A、细菌是原核生物，酵母菌是真核生物，不同微生物对营养物质的需求是不一样，通常酵母菌培养基比细菌培养基有更高的碳氮比，A正确；
B、通常细菌的生长速度比酵母菌快，但形成的菌落，不一定细菌的大于酵母菌的，与细菌的种类有关，部分细菌的菌落小于酵母菌，B错误；
C、通常细菌和酵母菌的培养基都可以用高压蒸汽灭菌法灭菌，C错误；
D、血细胞计数板适用于真菌的计数，细菌计数板用于细菌的数量测定等，D错误。
故选A。
5. 人们在研究、利用微生物时，需用无菌技术培养获取纯种微生物，并对其进行计数或保存。下列有关叙述正确的是（ ）
A. 用稀释涂布平板法进行微生物计数时，结果往往比实际值低
B. 培养基配制过程是计算、称量、溶化、调pH、定容、灭菌、倒平板
C. 高压蒸汽灭菌后，打开排气阀，待压力表指针降至“0”后开盖取物
D. 获得纯种微生物后，利用涂布平板法接种至斜面培养基上，进行低温保存
【答案】A
【解析】
【分析】1、稀释涂布平板法：将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在，再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。2、平板划线法：把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞，用接种环在平板表面上作多次由点到线的划线稀释而获得较多独立分布的单个细胞，并让其成长为单菌落的方法。
【详解】A、用稀释涂布平板法进行微生物计数时，由于两个或多个细菌常形成一个菌落，因此结果往往比实际值低，A正确；
B、培养基配制过程是计算、称量、溶化、定容、调pH、灭菌、倒平板，B错误；
C、高压蒸汽灭菌后，待压力表指针降至“0”后打开排气阀，开盖取物，C错误；
D、获得纯种微生物后，利用划线分离法接种至斜面培养基上，进行低温保存，D错误。
故选A。
6. 为加速我国北方冬春季秸秆原位还田的腐化过程，研究人员以冻牛粪为材料筛选出耐低温（10℃）的纤维素降解菌。相关叙述正确的是（ ）
A. 选用冻牛粪为材料与其富含纤维素及含耐低温微生物有关
B. 初筛菌种前，要利用固体培养基在37℃条件下扩大培养目标菌种
C. 用于筛选的培养基是加入刚果红染料的牛肉膏蛋白胨培养基
D. 应选择菌落直径与周围透明圈直径比值大的菌落进行纯化
【答案】A
【解析】
【分析】刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不与水解后的纤维二糖、葡萄糖等发生这种反应。当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红与纤维素形成红色复合物；而当纤维素被纤维素分解菌分解后，复合物就无法形成，培养基中会出现以这些菌为中心的透明圈。
【详解】A、筛选耐低温的纤维素降解菌需要到其所生活的环境中寻找，冻牛粪中富含纤维素，有很多微生物，冻牛粪因温度低，故其内的微生物是耐低温微生物，A正确；
B、初筛菌种前，要利用液体培养基10℃条件下扩大培养目标菌种，B错误；
C、用于筛选的培养基以纤维素为唯一的碳源的固体培养基，加入刚果红染料是鉴别作用，C错误；
D、由于刚果红染料与纤维素形成红色复合物，因此出现以因纤维素降解菌为中心的透明圈，菌落直径与透明圈直径比值越小，分解纤维素的能力越强，D错误。
故选A。
7. β苯乙醇是赋予白酒特征风味的物质。从某酒厂采集并筛选到一株产β苯乙醇的酵母菌突变株，然后将该突变株扩大培养后用于白酒生产。下列叙述正确的是（ ）
A. 该培养过程包括配制培养基、灭菌、分离和培养四个步骤
B. 配制培养基时应加入β苯乙醇作为主要能源物质
C. 所用培养基及接种工具分别采用湿热灭菌和干热灭菌
D. 培养阶段需保证培养液适宜的pH和充足的溶氧量
【答案】D
【解析】
【分析】实验室常用的灭菌方法：①灼烧灭菌：将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属工具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌，此外，在接种过程中，试管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通过火焰燃烧来灭菌。②干热灭菌：能耐高温的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等，可以采用这种方法灭菌。③高压蒸汽灭菌：将灭菌物品放置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内，为达到良好的灭菌效果，一般在压力为100kPa,温度为121℃的条件下，维持15～30min。
【详解】A、分离并获得该突变株的培养过程包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤，A错误；
B、分析题意，本实验目的是筛选产β苯乙醇的酵母菌突变株，培养基的主要能源物质应是碳源和氮源，B错误；
C、培养基的灭菌方法是高压蒸汽灭菌（湿热灭菌），接种工具如接种环等应采用灼烧灭菌，C错误；
D、酵母菌培养时应在有氧条件下进行，以使其大量繁殖，故培养阶段需保证培养液适宜的pH和充足的溶氧量，D正确。
故选D。
8. 下列关于发酵工程及其应用的叙述，正确的是（ ）
A. 酵母菌发酵产生的单细胞蛋白，可制成微生物饲料
B. 菌种的选育是发酵工程的中心环节，优良菌种可从自然界筛选出来
C. 酱油制作中利用黑曲霉将原料中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸
D. 啤酒发酵过程中糖的分解和代谢物的生成主要在后发酵阶段完成
【答案】C
【解析】
【分析】发酵工程是指采用现代工程技术手段，利用微生物的某些特定功能，为人类生产有用的产品，或直接把微生物应用于工业生产过程的一种技术。发酵工程的内容包括菌种选育、培养基的配置、灭菌、种子扩大培养和接种、发酵过程和产品的分离提纯等方面。
【详解】A、用单细胞蛋白制成的微生物饲料，其中的单细胞蛋白是微生物菌体，并不是酵母菌发酵产生的单细胞蛋白，A错误；
B、发酵罐内发酵是发酵工程的中心环节，B错误；
C、黑曲霉可产生蛋白酶、脂肪酶等多种酶，酱油制作中利用黑曲霉将原料中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸，C正确；
D、啤酒发酵过程中糖的分解和代谢物的生成主要在主发酵阶段完成，D错误。
故选C。
9. 植物组织培养技术越来越多的用于商业化生产。下列相关叙述错误的是（ ）
A. 可利用发酵罐来大规模培养植物细胞以实现代谢产物的工业化生产
B. 脱分化和再分化所用培养基中生长素和细胞分裂素相对含量不同
C. 对试管苗炼苗（驯化）的操作步骤之一是用流水除去根部培养基
D. 用同一植株体细胞离体培养获得的再生苗不会出现变异
【答案】D
【解析】
【分析】植物组织培养过程是：离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织，然后再分化生成根、芽，最终形成植物体。植物组织培养依据的原理是植物细胞的全能性。
【详解】A、可利用发酵罐来大规模培养植物细胞以实现代谢产物的工业化生产，发酵罐培养植物细胞，它不受季节、天气等限制，不占用耕地，A正确；
B、脱分化和再分化所用培养基中生长素和细胞分裂素相对含量不同，脱分化过程中生长素和细胞分裂素比值为1:1，再分化过程生长素和细胞分裂素比值小于1:1时分化为芽，大于1:1时分化为根，B正确；
C、对试管苗炼苗（驯化）的操作步骤之一是用流水除去根部培养基，再将幼苗移植到消毒过后的蛭石或珍珠岩等环境中，C正确；
D、用同一植株体细胞离体培养过程中，在细胞分裂时可能会发生变异，因此获得的再生苗可能会出现变异，D错误；
故选D。
10. 下列关于“菊花的组织培养”的实验，叙述错误的是（ ）
A. 实验材料和用具都要灭菌，接种器械采用干热灭菌法灭菌
B. 在酒精灯火焰旁，将外植体的1/3～1/2插入培养基进行接种
C. 脱分化期间一般不需要光照，再分化过程中需给予适当光照
D. 挑出的愈伤组织先转接到生芽培养基，生芽后再转接到生根培养基
【答案】A
【解析】
【分析】植物组织培养的过程为：离体的植物组织，器官或细胞经过脱分化（避光）形成愈伤组织；愈伤组织经过再分化（需光）过程形成胚状体，进一步发育形成植株。
【详解】A、植物组织培养需要无菌操作，防止杂菌污染，所用器械需灼烧灭菌，实验人员和外植体需消毒操作，A错误；
B、接种时，在酒精灯火焰旁，将外植体的1/3～1/2插入诱导愈伤组织培养基，B正确；
C、脱分化期间一般不需要光照，再分化过程中需给予适当光照，目的是诱导叶绿素的形成，进一步形成叶绿体进行光合作用，C正确；
D、诱导愈伤组织形成试管苗的过程，需要将生长良好的愈份组织先转接到诱导生芽的培养基上，长出芽后，再将其转接到诱导生根的培养基上，进一步诱导生根，D正确；
故选A。
11. 下图是研究2，4-D对红色金钱柳悬浮细胞生长与花青素合成影响的实验结果。相关叙述错误的是（ ）
A. 细胞悬浮培养的主要原理是愈伤组织细胞分裂旺盛
B. 培养基应用葡萄糖、无机盐、激素等配制
C. 本实验中2，4-D具有抑制细胞生长的作用
D. 结果表明一定浓度的2，4-D会促进花青素的合成
【答案】B
【解析】
【分析】植物激素是由植物体内产生，能从产生部位运送到作用部位，对植物的生长发育有显著影响的微量有机物。人们发现的植物激素有生长素、赤霉素、细胞分裂素、脱落酸和乙烯等。
【详解】A、愈伤组织是不定形的薄壁组织团块，愈伤组织细胞分裂旺盛，是细胞悬浮培养的主要原理，A正确；
B、将愈伤组织接种到含有特定激素的培养基上，就可以诱导其再分化成胚状体，长出芽和根，进而发育成完整的植株，愈伤组织的培养基需要添加蔗糖，B错误；
C、2，4－D是生长素类似物，由图可知，生物量随2，4－D浓度的增大而减小，说明本实验中2，4－D具有抑制细胞生长的作用，C正确；
D、当2，4－D的浓度小于0.25mg/L时，花青素的产量高于对照组，说明一定浓度的2，4－D会促进花青素的合成，D正确。
故选B。
12. 下图是生产抗新冠病毒的单克隆抗体的过程。下列有关叙述正确的是（ ）
A. ②过程经细胞融合，获得的杂交瘤细胞只有一种
B. ③过程经过选择培养后，只有自身融合的细胞死亡
C. ④过程进行抗体检测，若结果为阴性，则应重新实验
D. 为保证获得足量相应的B淋巴细胞，①过程应给小鼠注射大量的新冠病毒
【答案】C
【解析】
【分析】题图分析：图示是生产抗新冠病毒的单克隆抗体过程，其中①表示给小鼠注射特定抗原，②表示细胞融合，③表示筛选出杂交瘤细胞，④表示专一抗体检测和克隆化培养。
【详解】A、②过程融合形成的杂交瘤细胞有多种，A错误；
B、③过程经过选择培养后自身融合细胞和未融合的细胞都死亡，B错误；
C、④过程若进行专一抗体检测结果阴性，说明细胞融合失败，需要重新实验，C正确；
D、为保证获得相应B淋巴细胞，①过程应给小鼠注射适量的新冠病毒的相应抗原，D错误。
故选C。
13. 下列有关胚胎工程的叙述，正确的是（ ）
A. 移入子宫的外来胚胎，在受体体内会发生免疫排斥反应
B. 自然条件下，哺乳动物的精子获能发生在睾丸的曲细精管内
C. 受精过程中，透明带处会出现阻止多精入卵的生理反应
D. 对桑椹胚进行胚胎分割移植时，应将内细胞团均等分割
【答案】C
【解析】
【分析】胚胎工程是指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术。包括体外受精、胚胎移植、胚胎分割移植、胚胎干细胞培养等技术。
【详解】A、受体对移入子宫的外来胚胎基本不发生免疫排斥反应，这是胚胎在受体内能够存活的生理基础，A错误；
B、哺乳动物受精前，精子必须在雌性动物生殖道发生相应的生理变化后，才能获得受精能力，该过程被称为精子获能，故精子获能的场所是雌性动物生殖道，B错误；
C、受精作用过程中，透明带反应是阻止多精入卵的第一道屏障，卵黄膜反应是阻止多精入卵的第二道屏障，C正确；
D、胚胎分割的对象是桑椹胚或囊胚，在对囊胚分割时，应注意将内细胞团均等分割，D错误。
故选C。
14. 下列有关细胞工程和胚胎工程的叙述，正确的是（ ）
A. 利用茎尖进行植物组织培养可以增强植物体对病毒的抵抗能力
B. 植物体细胞杂交技术和动物细胞融合技术均可催生出异源多倍体
C. 胚胎移植前需对早期胚胎进行质量检查和对受体进行免疫检查
D. 单克隆抗体的制备、基因工程、杂交育种均涉及到多轮次筛选
【答案】D
【解析】
【分析】植物组织培养是指将离体的植物器官、组织或细胞等，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其形成完整植株的技术。植物体细胞杂交是指将不同来源的植物体细胞，在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成新植物体的技术。动物细胞工程常用的技术包括动物细胞培养、动物细胞融合和动物细胞核移植等，其中动物细胞培养是动物细胞工程的基础。胚胎工程是指对生殖细胞、受精卵或早期胚胎细胞进行多种显微操作和处理，然后将获得的胚胎移植到雌性动物体内生产后代，以满足人类的各种需求。胚胎工程技术包括体外受精、胚胎移植和胚胎分割等。
【详解】A、利用茎尖进行植物组织培养可以获得脱毒苗，使植物不含病毒，但不能增强植物体对病毒的抵抗能力，A错误；
B、目前动物细胞融合技术只能得到杂交细胞，还不能形成完整的个体，B错误；
C、胎移植前需对早期胚胎进行质量检查但不需要对受体进行免疫检查，C错误；
D、单克隆抗体的制备、基因工程、杂交育种均涉及到多轮次筛选，已获得需要的性状，D正确。
故选D。
二、多项选择题：共5题，每题3分，共15分。每题有不止一个选项符合题意。每题全选对者得3分，选对但不全的得1分，错选或不答的得0分。
15. 鱼茶味酸而微咸，富含多种必需氨基酸。鱼茶的发酵菌群主要是乳酸菌，如图是某同学绘制的鱼茶发酵过程中各菌种数量及发酵液pH的变化曲线。下列有关叙述错误的有（ ）
A. 与制作传统泡菜类似，鱼茶发酵也无需严格灭菌
B. 乳酸菌发酵时会积累NADH导致发酵液pH变小
C. 利用显微镜直接计数可快速直观检测微生物数量
D. 醋酸菌和酵母菌消失的原因都是因为氧气已耗尽
【答案】BD
【解析】
【分析】酵母菌新陈代谢类型为异养兼性厌氧型，醋酸菌新陈代谢类型是异养需氧型。
【详解】A、传统泡菜制作和鱼茶发酵过程都是传统发酵过程，一般利用的是自然条件下的微生物，不需要严格灭菌，A正确；
B、乳酸菌发酵不会积累NADH，会积累乳酸导致pH变小，B错误；
C、显微镜直接计数可利用血细胞计数板等快速观察并统计微生物的数量，C正确；
D、酵母菌可进行无氧呼吸，消失的原因是养料耗尽、代谢废物积累等，D错误。
故选BD。
16. 某醋厂和啤酒厂的工艺流程如图所示。酒曲含有霉菌、酵母菌、乳酸菌；醋醅含有醋酸菌；糖化即淀粉水解过程。下列相关叙述正确的有（ ）
A. 糯米“蒸熟”与大米“蒸煮”的目的是利于糖化和灭菌
B. 发酵原理是利用真菌的无氧呼吸与细菌的有氧呼吸
C. 醋酸发酵过程中经常翻动发酵物，可控制发酵温度和改善通气状况
D. 啤酒酿造流程中适当增加溶解氧可缩短发酵时间
【答案】ACD
【解析】
【分析】1.果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧型生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖，在无氧条件下，酵母菌进行酒精发酵。温度是酵母菌生长和发酵的重要条件，20℃左右，酒精发酵时，一般将温度控制在18~30℃，在葡萄酒自然发酵过程当中，其主要作用的是附着在葡萄皮上的野生酵母菌。
2.醋酸菌是一种好氧细菌，只有当氧气充足时，才能进行旺盛的生理活动。醋酸菌对氧气的含量特别敏感，当进行深层发酵时，即使只是短时间中断通入氧气，也会引起醋酸菌死亡。当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。醋酸菌的最适生长温度为30~35℃。
【详解】A、糯米“蒸熟”与大米“蒸煮”的目的均有利于灭菌和糖化过程，A正确；
B、图中制酒用到了酒曲，酒曲含有霉菌、酵母菌、乳酸菌，霉菌属于真菌，其为需氧型，该过程霉菌产生的淀粉酶有利于将糯米中的淀粉分解，其中的乳酸菌进行的是无氧呼吸，酵母菌主要进行无氧呼吸过程完成酿酒的过程，醋酸发酵过程中主要利用了醋酸杆菌的有氧呼吸进行醋酸发酵，B错误；
C、醋酸发酵过程中利用了醋酸菌的有氧呼吸，在发酵过程中经常翻动发酵物，有利于散热，可控制发酵温度和改善通气状况，C正确；
D、啤酒酿造流程中利用的原理是酵母菌的无氧呼吸产生酒精的过程，若适当增加溶解氧有利于酵母菌有氧呼吸产生更多的能量满足酵母菌自身增殖的需要，因而可缩短发酵时间，D正确。
故选ACD。
17. 下列关于动物细胞工程和胚胎工程的叙述正确的是（ ）
A. 培养动物细胞的时候既需要氧气也需要二氧化碳
B. 通常采用培养法或化学诱导法使精子获得能量后进行体外受精
C. 动物克隆涉及体细胞核移植、动物细胞培养、胚胎移植等技术
D. 制备产生单克隆抗体的杂交瘤细胞必须进行克隆化培养和抗体检测
【答案】ACD
【解析】
【分析】单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。
【详解】A、培养动物细胞的时候既需要氧气也需要二氧化碳：95%空气（含有氧气，是细胞代谢必需的）和5%的CO2（维持培养液的pH），A正确；
B、精子获能不等于获得能量，B错误；
C、动物克隆目前主要通过核移植技术实现，动物克隆涉及体细胞核移植、动物细胞培养、胚胎移植等技术，C正确；
D、制备产生单克隆抗体的杂交瘤细胞必须进行克隆化培养，保证获得的抗体纯度高，且扩大细胞的数量，获得更多的抗体，也必需进行抗体检测，选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞，D正确。
故选ACD。
18. 我国科学家利用猴胚胎干细胞首次创造了人工“猴胚胎”，研究流程如图所示。下列相关叙述正确的有（ ）
A. 猴的成纤维细胞和胚胎干细胞功能不同，但具有相同的基因组
B. 囊胚细胞②③都由细胞①分裂分化形成，但表达的基因都不同
C. 移植前细胞和囊胚的培养都要放在充满CO₂的培养箱中进行
D. 移植后胚胎的发育受母体激素影响，也影响母体激素分泌
【答案】AD
【解析】
【分析】胚胎干细胞具有全能性，利用猴胚胎干细胞首次创造了人工“猴胚胎”，是利用了胚胎干细胞的全能性。
【详解】A、由于猴的成纤维细胞和胚胎干细胞是由猴胚胎干细胞分裂分化而来，虽然功能不同，但基因组相同，A正确；
B、囊胚细胞②③都由细胞①分裂分化形成，但表达的基因有部分不同，但有部分基因所有细胞都表达（如呼吸酶基因），B错误；
C、动物细胞培养和早期胚胎培养需要在95%空气和5%二氧化碳的环境中培养，C错误；
D、胚胎移植后胚胎的发育受母体激素影响，也影响母体激素分泌，D正确。
故选AD。
19. 草莓是无性繁殖的作物，它感染的病毒很容易传播给后代。病毒在草莓体内逐年积累，会导致产量降低，品质变差。下图是育种工作者选育高品质草莓的流程图。下列有关叙述错误的是（ ）
A. 方法一中，甲常选用茎尖，原因是其几乎未感染病毒
B. 通常采用95％的酒精和5％次氯酸钠溶液对甲进行消毒处理
C. A、C两个过程属于植物组织培养，都经过脱分化和再分化
D. 判断两种选育方法的效果都需要通过病毒接种实验
【答案】BD
【解析】
【分析】植物组织培养的过程是离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织，然后再分化形成根，芽，最终发育成植物体。
根据题图，方法一是采用植物组织培养的方法培育脱毒苗，方法二是通过基因工程手段获得的抗病毒草莓。
【详解】A、植物的分生区附近(如茎尖)的病毒极少，几乎不含病毒，因此对茎尖进行植物组织培养，可以获得脱毒植株，A正确；
B、在植物组织培养中，需要用75％的酒精和5％次氯酸钠溶液对甲进行消毒处理，保证植物组织培养的成功，B错误；
C、A、C两个过程属于植物组织培养，都经过脱分化形成愈伤组织和再分化形成根芽，最终发育成植株，C正确；
D、方法一获得的无病毒苗应根据植株性状检测，不需要接种病毒；方法二获得的抗病毒草莓需要通过接种病毒检测，D错误。
故选BD。
三、非选择题：共5题，共57分。除特别说明外，每空1分。
20. 尿素是一种重要的农业肥料，需经细菌的分解才能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，下列是从土壤中分离分解尿素细菌的有关问题，请回答下列问题。
（1）如图是利用________法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步________到培养基的表面。除此方法外，获得纯培养物的接种方法还有________________。
（2）在培养基上进行划线操作中，在2至5区域每次划线之前都要灼烧接种环的目的是____________。
（3）下面是两种培养基配方：
表1：A培养基配方
表2：B培养基配方
①微生物纯培养的操作步骤：________(用字母顺序回答)。
a. 接种 b. 配制培养基 c. 灭菌 d. 分离和培养
②如果要分离土壤中能分解尿素的细菌，应选择________(填“A”或“B”)配方的培养基，在该培养基中加入________指示剂，可初步鉴定出该种细菌能否分解尿素。
③据B培养基的成分，所培养微生物的同化作用类型是________(填“自养型”或“异养型”)。
（4）三位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数量。在对应稀释倍数为106的培养基中，取0.2 mL稀释液涂布，得到以下统计结果：
甲同学涂布了1个平板，统计的菌落数是260；
乙同学涂布了3个平板，统计的菌落数是210、240和246，取平均值232；
丙同学涂布了3个平板，统计的菌落数是21、212和256，取平均值163；
在三位同学的统计中，________同学的统计结果是相对准确可信的。按照该同学的结果，每毫升原液中的菌体数是________。用这种方法测得的菌体数比实际活菌数量________。
【答案】（1） ①. 平板划线 ②. 稀释 ③. 稀释涂布平板法
（2）灭菌 （3） ①. bcad ②. A ③. 酚红 ④. 异养型
（4） ①. 乙 ②. 1.16×109 ③. 少
【解析】
【分析】微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落；②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
【小问1详解】
据图可知，图示划线方法有多条线条，故是利用平板划线法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释到培养基的表面；除此方法外，常用的微生物接种方法还有稀释涂布平板法。
【小问2详解】
在培养基上进行划线操作中，在2至5区域每次划线之前都要灼烧接种环的目的是使划线的菌种来自上次划线的末端，即要灭菌处理。
【小问3详解】
①微生物纯培养的操作步骤是b配制培养基、c灭菌、a接种 和d分离和培养。
②如果要分离土壤中能分解尿素的细菌，应选择上述以尿素为唯一氮源的培养基，即B培养基；在该培养基中加入酚红指示剂，尿素分解菌能够将尿素分解为氨，从而使酚红指示剂变红，可初步鉴定出该种细菌能否分解尿素。
③B培养基的成分中，碳源为有机物，所培养微生物的同化作用类型是异养型。
【小问4详解】
稀释涂布平板法统计菌落数目时，应选择菌落在30-300之间的，且3个平板数据差距不能过大，在三位同学的统计中，乙同学的统计结果是相对准确可信的；按照该同学的结果，每克样品中的菌落数=平板上菌落数的平均值÷体积×稀释倍数=232÷0.2×106=1.16×109；在用稀释涂布平板法进行涂布获得菌体数目时，当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察的是一个菌落，因此用这种方法测得的菌体数比实际活菌数量少。
21. 科学家用植物体细胞杂交技术，将番茄的原生质体和马铃薯的原生质体融合，成功地培育出了“番茄—马铃薯”杂种植株，培育过程如下图所示，其中①～⑤表示过程，a～f表示细胞、组织或植株。据图回答下列问题：
（1）在植物体细胞杂交技术中，过程①常用__________________酶处理植物细胞以除去细胞壁。
（2）过程②表示______________，依据的生物学原理是_______________________。
（3）与过程③密切相关的具有单层膜结构的细胞器是________。
（4）在利用杂种细胞培育杂种植株的过程中，依据的原理是___________________，其中过程④表示________________过程，过程⑤涉及的细胞分裂方式为________________________。
（5）若番茄细胞内含m条染色体，马铃薯细胞内含n条染色体，则“番茄—马铃薯”杂种植株的体细胞内含________条染色体；若由杂种细胞培育成的“番茄—马铃薯”植株为四倍体，则此杂种植株的花粉经离体培养得到的植株为几倍体？________。
（6）如果形成c的原生质体a、b来源于同一株番茄，那么更常用且有效地得到番茄植株f的处理方法是________。
【答案】（1）纤维素酶和果胶
（2） ①. 诱导原生质体融合 ②. 细胞膜具有一定的流动性
（3）高尔基体 （4） ①. 植物细胞的全能性 ②. 脱分化 ③. 有丝分裂
（5） ①. m＋n ②. 单倍体
（6）用适宜浓度的秋水仙素处理萌发的番茄种子或幼苗
【解析】
【分析】分析题图：过程①是通过酶解法去除细胞壁获得原生质体a和b，过程②通过物理或化学方法诱导原生质体融合成c，过程③是再生细胞壁形成杂种细胞d，过程④是脱分化过程形成愈伤组织e，过程⑤是再分化生成完整植株。
【小问1详解】
植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，根据酶的专一性原理，过程①可使用纤维素酶和果胶酶处理细胞以除去细胞壁，得到原生质体。
【小问2详解】
据图分析，过程②表示通过物理或化学方法诱导原生质体融合，依据的生物学原理是细胞膜具有一定的流动性。
【小问3详解】
过程③是再生细胞壁形成杂种细胞，而细胞壁的形成与高尔基体有关。
【小问4详解】
杂种细胞经过植物组织培养培育成杂种植株，依据的原理是植物细胞的全能性，据图分析可知，其中过程④表示脱分化过程形成愈伤组织e，过程⑤表示再分化过程，涉及的细胞分裂方式为有丝分裂。
【小问5详解】
若番茄细胞内含m条染色体，马铃薯细胞中含n条染色体，则“番茄-马铃薯”细胞内染色体数为两细胞染色体数之和，即m+n条染色体；若杂种细胞培育成为“番茄--马铃薯”植株为四倍体，此杂种植株的花粉是生殖细胞，由生殖细胞直接发育而来的生物体，不管含有一个或多个染色体组，都是单倍体。
【小问6详解】
如果形成c的原生质体a、b来源于同一株番茄，那么该过程形成的是四倍体番茄，而得到四倍体番茄更简单的处理方法是用适宜浓度的秋水仙素处理萌发的番茄种子或幼苗。
【点睛】本题结合图解，考查细胞工程的相关知识，要求考生识记植物体细胞杂交的具体过程及意义，能正确分析题图，能结合所学的知识准确答题。
22. 德尔塔变异株是目前新冠肺炎传播的主要变异株。新型冠状病毒和SARS病毒都会造成肺炎，如图是SARS-CVS蛋白特异性单克隆抗体的制备过程。研究该过程可为治疗新冠带来新希望。回答下列问题：
（1）若只考虑细胞两两融合，图中甲理论上有_____种。
（2）已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基蝶呤阻断。小鼠的淋巴细胞有上述两种途径，但一般不分裂增殖，小鼠的骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能通过D途径不断分裂增殖。根据该原理，在含甲的混合培养液中添加氨基蝶呤_____（填“能”或“不能”）筛选出A，原因是_____。
（3）SARS-CVS蛋白单克隆抗体_____（填“能”或“不能”）对新型冠状病毒发挥作用，理由_____。
（4）为了进一步研究SARS-CVS蛋白单克隆抗体X（以下简称抗体X）的效果及作用机制，科学家开展了如下实验：
实验一：在体外将抗体X与SARS-CVS蛋白混合，检测抗体X对SARS-CVS蛋白的亲和力。实验结果如下表所示。
（注：KD值越小，抗体和蛋白的亲和力越高；抗体Y为一种已知的SARS病毒的抗体。）
实验二：以一定浓度的SARS病毒感染小鼠；一天后向小鼠腹腔分别注射一定剂量的抗体X、Y；14天后测定小鼠存活情况和体重变化。实验结果表明：抗体X的体内治疗效果优于抗体Y。
①实验一结果表明：对SARS-CVS蛋白亲和力更高的抗体是_____。
②分析实验一和实验二的结果差异，研究人员提出假说：抗体除了中和病毒活性之外，还可以通过和巨噬细胞表面的受体相结合，从而增强巨噬细胞的吞噬作用，进而清除被病毒感染的靶细胞。请以巨噬细胞、感染了SARS病毒的肺上皮细胞、细胞培养液、抗体X、抗体Y和无关抗体等为材料，设计实验验证上述假说。写出实验思路_____。
【答案】（1）3##三
（2） ①. 能 ②. 杂交瘤细胞D途径被氨基嘌呤阻断后不能合成DNA，但可通过S途径合成DNA，不断分裂增殖
（3） ①. 不能 ②. 新冠病毒与SARS病毒的抗原不同，SARS-CVS蛋白单克隆抗体只能与SARS-CVS蛋白发生特异性结合
（4） ①. Y ②. 将巨噬细胞及感染了SARS病毒的肺上皮细胞分别加入A、B、C三组细胞培养液中，并向这三组培养液中分别加入无关抗体、抗体X和抗体Y，一段时间后检测并比较肺上皮细胞的裂解百分比
【解析】
【分析】单克隆抗体的制备过程是：对小动物注射抗原，从该动物的脾脏中获取效应B细胞，将效应B细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选出能产生单一抗体的杂交瘤细胞，克隆化培养杂交瘤细胞（体内培养和体外培养），最后获取单克隆抗体。
【小问1详解】
若只考虑细胞两两融合，融合体系中有3种杂交细胞为骨髓瘤细胞与骨髓瘤细胞细胞杂交、淋巴细胞与淋巴细胞融合，以及所需的骨髓瘤细胞与淋巴细胞融合。
【小问2详解】
在含甲的混合培养液中添加氨基嘌呤后，已免疫的B细胞及其彼此融合的细胞能利用S途径进行DNA合成，但是无法进行分裂增殖，骨髓瘤细胞的D合成途径被阻断，所以骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能增殖，只有骨髓瘤细胞与已免疫的B细胞融合形成杂种细胞能利用S途径合成DNA并进行分裂增殖从而存活下来，所以在含甲的混合培养液中添加氨基嘌呤能筛选出杂交瘤细胞A。
【小问3详解】
SARS-CVS蛋白单克隆抗体不能对新型冠状病毒发挥作用，因为新冠病毒与SARS病毒的抗原不同，SARS-CVS蛋白单克隆抗体只能与SARS-CVS蛋白发生特异性结合。
【小问4详解】
①由表格分析可知，抗体Y的KD值低于抗体X，说明抗体Y和SARS-CVS蛋白的亲和力高于抗体X。
实验设计应该遵循单一变量和对照原则，该实验是为了探究抗体除了中和病毒活性之外，还可以通过和巨噬细胞表面的受体相结合，从而增强巨噬细胞的吞噬作用，进而清除被病毒感染的靶细胞。可以通过检测并比较肺上皮细胞的裂解百分比来验证假说。所以实验思路如下：
②实验思路：将巨噬细胞及感染了SARS病毒的肺上皮细胞分别加入A、B、C三组细胞培养液中，并向这三组培养液中分别加入无关抗体、抗体X和抗体Y，一段时间后检测并比较肺上皮细胞的裂解百分比。
【点睛】本题考查了单克隆抗体的制备过程的相关知识，考生掌握单克隆抗体的制备过程及其原理，能够利用动物细胞培养和细胞融合技术对相关问题进行解释，并能理解单克隆抗体的特性是解答本题的关键。
23. Ndrg2基因参与神经系统的发育和退行性疾病的发生和发展，并可参与血管的形成。为研究Ndrg2基因的功能，可利用染色体位点特异性重组酶系统Cre-LxP构建Ndrg2基因敲除小鼠（如下图1、2所示），并对其进行鉴定和表型分析。请回答下列问题：
（1）图1中LxP序列的方向取决于序号___对应的区域。一个LxP序列的内部被Cre重组酶切割后会增加___个游离的磷酸基团。
（2）当两个lxP序列位于同一个DNA分子上且方向相同时，Cre重组酶能将两个切割位点之间的核苷酸序列切除并形成环状而失活，剩余序列会连接起来。据此可知，Cre重组酶在此过程中的作用类似于___酶。当两个LxP序列方向相反时，Cre重组酶使两个lxP间的序列颠倒，由此产生的变异本质上属于___。
（3）构建Ndrg2基因敲除小鼠需要先构建Flx小鼠（该小鼠的Ndrg2基因两侧需插入Lxp序列）。为构建相应的基因表达载体，据图2分析，应选择限制酶___处理含有Ndrg2基因的DNA片段，而在处理质粒时应选用限制酶___。质粒中启动子的作用是___。
（4）将重组质粒导入小鼠___。经胚胎工程获得杂合Flx小鼠（flx/+）,之后雌雄小鼠相互交配可获得纯合Flx小鼠。
（5）构建Ndrg2基因敲除小鼠还需要构建Cre转基因小鼠（cre/+）（Cre基因上游添加有造血干细胞基因启动子EDAG）。已知Ndrg2基因与Cre重组酶基因独立遗传，现将纯合Flx小鼠（flx/flx）与Cre转基因小鼠（cre/+）交配，将F1中的双杂合小鼠雌雄交配，获得造血干细胞中Ndrg2基因完全敲除的小鼠的概率为___。
（6）以下能说明造血干细胞中Ndrg2基因完全敲除小鼠构建成功有___。
①小鼠不同组织中提取的DNA可检测到cre基因
②小鼠造血干细胞中Ndrg2基因的mRNA基本为零
③利用抗原抗体杂交技术在造血干细胞中检测不到有Ndrg2蛋白
【答案】23. ①. ② ②. 2##两##二
24. ①. 限制酶和DNA连接 ②. 染色体结构变异（或倒位）
25. ①. HindIⅢ与Sau3I ②. HindⅢ与BclI ③. （与RNA聚合酶结合，）驱动基因转录出mRNA
26. 受精卵 27. 3/16
28. ②③
【解析】
【分析】 基因工程：目的基因的筛选与获取、构建基因表达载体、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。
【小问1详解】
LxP序列①和③是反向重复序列，因此图1中LxP序列的方向取决于序号②对应的区域。一个LxP序列内部经过切割后会增加两个游离的磷酸基团。
【小问2详解】
Cre重组酶能将两个切割位点之间的核苷酸序列切除并形成环状而失活，剩余序列会连接起来。据此可知，Cre重组酶在此过程中的作用类似于限制酶和DNA连接酶。Cre重组酶使两个lxP间的序列颠倒，由此产生的变异本质上属于染色体结构变异（或倒位）。
【小问3详解】
据图2分析，Ndrg2基因两侧需插入Lxp序列，且方向相同，且需要保证只留下一个抗性基因作为标记基因，应选择限制酶HindⅢ与Sau3I处理含有Ndrg2基因的DNA片段，质粒则需要选择HindⅢ与BclI。质粒中启动子的作用是（与RNA聚合酶结合）驱动基因转录出mRNA。
【小问4详解】
动物基因工程的受体细胞一般选择受精卵。
【小问5详解】
现将纯合Flx小鼠（flx/flx）与Cre转基因小鼠（cre/+）交配，将F1中的双杂合小鼠雌（flx/+、cre/+，一个Ndrg2基因被敲除）雄（flx/+、cre/+，一个Ndrg2基因被敲除）交配，获得造血干细胞中Ndrg2基因完全敲除的小鼠（同时获得父母各一条被敲除Ndrg2基因的染色体）的概率为3/16。
【小问6详解】
Ndrg2基因完全敲除，则该基因无法转录和表达，小鼠造血干细胞中Ndrg2基因的mRNA基本为零，利用抗原抗体杂交技术在造血干细胞中检测不到有Ndrg2蛋白。故选②③。
24. 人绒毛膜促性腺激素是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，由a链和β链（hCGβ）结合而成。近年研究显示，hCGβ可表达于结肠癌等多种恶性肿瘤细胞，与肿瘤的发生、发展及转移有一定关系。研发抗hCGβ疫苗已成为近年来肿瘤生物治疗新的热点，下图1为其制备的基本方案。请分析回答下列有关问题：
注1：甲序列指导合成的信号肽能引导后续合成的肽链进入内质网腔
注2：AOX1为甲醇氧化酶基因的启动子，只能在以甲醇为唯一碳源的培养基中正常表达
（1）图中hCGβ基因需要与甲序列一起构建形成融合基因，其目的是_____________。
（2）当目的基因两侧的小段序列与基因表达载体上某序列相同时，就可以发生同源切割，将目的基因直接插入。同源切割是一种代替_____________将目的基因导入基因表达载体的方法。
（3）阶段Ⅱ将环化质粒导入用_____________处理的大肠杆菌，然后在含有_____________的培养基中筛选得到含hCGβ基因表达载体的大肠杆菌后进行扩增。
（4）为了检验重组质粒是否构建成功，提取大肠杆菌中的质粒为模板，设计相应的引物进行PCR扩增，则最好选择图2中的引物_____________。PCR反应体系中需加入模板、_____________、_____________、引物、Mg2+、缓冲液等，再将扩增产物进行_____________来确定可用于导入酵母菌的重组质粒。
（5）阶段IV需将处理后的酵母菌接种在培养基上培养，该培养基不需要添加以下哪些成分________（a．氨苄青霉素b．组氨酸c．无机盐d．琼脂），可在此培养基上生长的酵母菌即为含有hCGβ基因表达载体的目的菌株。将此菌株扩大培养后，离心取上清液，用_____________进行检测。若上清液中能检测到hCGβ蛋白，则说明hCGβ基因得以表达。
（6）从生产控制的角度分析，选用AOX1作为hCGβ基因启动子的优点是___________。
【答案】（1）有利于hCGβ进入内质网加工
（2）限制酶 （3） ①. CaCl2 ②. 氨苄青霉素
（4） ①. P1和P6 ②. Taq酶 ③. dNTP ④. 电泳##测序
（5） ①. a、b ②. 抗原—抗体杂交法（hCGβ的抗体）
（6）可以通过控制培养液中甲醇作为唯一碳源，来控制hCGβ基因表达
【解析】
【分析】图1中Ⅰ为基因表达载体的构建过程，Ⅱ是将重组DNA导入大肠杆菌，Ⅲ是提取并鉴定所需要的重组质粒，Ⅵ是将选择的重组质粒导入酵母菌内，Ⅴ是筛选符合要求的酵母菌，Ⅵ是提取目的基因的产物。
【小问1详解】
甲序列指导合成的信号肽能引导后续合成的肽链进入内质网腔，因此hCGβ基因需要与甲序列一起构建形成融合基因，其目的是有利于hCGβ进入内质网中加工，并分泌到细胞外。
【小问2详解】
传统重组质粒构建过程需要使用限制酶和DNA连接酶，而该过程是运用同源切割的方式在hCGβ基因两端加上一组同源序列A、B，然后将hCGβ基因与线性质粒载体混合后，在重组酶和DNA连接酶的作用下可形成环化质粒，该过程没有使用限制酶。所以同源切割是一种代替限制酶将目的基因导入基因表达载体的方法。
【小问3详解】
将重组质粒导入大肠杆菌时，应先用CaCl2处理大肠杆菌，使其成为感受态。由于线性质粒上含有氨苄青霉素基因，因此导入环化质粒的大肠杆菌具有氨苄青霉素抗性，因此应在含有氨苄青霉素的培养基中筛选得到含hCGβ基因表达载体的大肠杆菌后进行扩增。
【小问4详解】
融合基因包含了目的基因和AB序列，则进行设计引物的时候应该包括AB序列和目的基因的部分序列，所以图中的引物1和引物6是合适的引物。PCR的反应体系包括模板、引物、Taq酶、dNTP（作为合成DNAD 原料）、缓冲液等，扩增的产物可通过电泳或测序的方法进行鉴定。
【小问5详解】
由于环状质粒中含有组氨酸合成酶基因和氨苄青霉素抗性基因，且筛选重组质粒时大肠杆菌是在含有氨苄青霉素的培养基上培养的，因此为筛选导入重组质粒的酵母菌，培养基中不需要再加入组氨酸和氨苄青霉素，但需要加入无机盐和琼脂，形成固体培养基，以筛选目的菌体。 hCGβ是一种分泌蛋白，可被分泌到细胞外，将培养物离心后分出细胞和培养液两部分，细胞经破碎处理后，再次离心取上清液，可获得较多的hCGβ，用抗hCGβ单克隆抗体分别进行检测，即抗原—抗体杂交法。若培养液及上清液中均能检测到hCGβ蛋白，则说明hCGβ基因在酵母菌细胞中得到表达，并能分泌到细胞外。
【小问6详解】
AOXⅠ为甲醇氧化酶基因的启动子，只能在以甲醇为唯一碳源的培养基中正常表达，因此选用AOX1作为hCGβ基因启动子，可以通过控制培养液中甲醇的有无，来控制hCGβ基因的表达hCGβ蛋白的合成。KH2PO4
Na2HPO4
MgSO4·7H2O
葡萄糖
尿素
琼脂
H2O
1.4 g
2.1 g
0.2 g
10.0 g
1.0 g
15.0 g
1 000 mL
纤维素粉
NaNO3
Na2HPO4·7H2O
KH2PO4
MgSO4·7H2O
KCl
酵母浸膏
H2O
5 g
1 g
1.2 g
0.9 g
0.5 g
0.5 g
0.5 g
1 000 mL
抗体种类
KD
抗体X
5．32×10-9M
抗体Y
1．95×10-9M
限制酶种类
识别序列及切割位置
BamHⅠ
5＇-G↓GATCC-3＇
BclⅠ
5＇-T↓GATCA-3＇
Sau3Ⅰ
5＇-↓GATC-3＇
HindⅢ
5＇-A↓AGCTT-3＇
EcRⅠ
5＇-G↓AATTC-3＇
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