辽宁省葫芦岛市绥中县一中2022-2023学年高二生物下学期四月监测试题（Word版附解析）

这是一份辽宁省葫芦岛市绥中县一中2022-2023学年高二生物下学期四月监测试题（Word版附解析），共25页。试卷主要包含了单选题，不定项选择题，非选择题等内容，欢迎下载使用。

2022-2023学年度下学期高二年级四月监测试题生物试卷
一、单选题
1. “古遗六法”中对黄酒酿造作了如是描述：黍米必齐、曲蘖必时、水泉必香、陶器必良、湛炽必洁、火剂必得。下列叙述错误的是（ ）
A. “黍米必齐”是指发酵原材料需优良，为酵母菌发酵提供物质和能量
B. “曲蘖必时”是指制曲时应选择适宜的节气，确保酵母菌繁殖所需的温度等条件
C. “陶器必良”“火剂必得”“湛炽必洁”均指需控制发酵过程的环境条件
D. 通过上述过程酿出的鲜酒成分单一，无需灭菌可直接罐装为成品销售
【答案】D
【解析】
【分析】酵母菌：是一种真核生物，代谢类型为异养兼性厌氧型，发酵温度一般设置为18-30℃，前期酵母菌主要进行无氧呼吸，大量繁殖，后期，酵母菌进行无氧呼吸，生成酒精。
【详解】A、“黍米必齐”是指发酵原材料需优良，为酵母菌发酵提供物质和能量，保证酵母菌正常的生命活动，A正确；
B、“曲蘖必时”是指制曲时应选择适宜的节气，确保酵母菌繁殖所需的温度等条件，大多数酵母菌适宜的发酵温度为18-30℃，B正确；
C、“陶器必良”“火剂必得”“湛炽必洁”均指需控制发酵过程的环境条件，保证无菌操作，C正确；
D、通过上述过程酿出的鲜酒成分多样，存在杂菌污染，需要过滤、消毒等，才可以罐装为成品销售，D错误。
故选D。
2. 下列有关几种发酵食品的发酵温度、发酵时间和发酵菌种等的叙述，错误的是（ ）
A. 葡萄酒发酵时应将温度控制在18～30℃
B. 生产醋酸所用的醋酸菌的最适生长温度为30～35℃
C. 腐乳发酵时，毛霉中蛋白酶的合成只需要核糖体参与
D. 刚装坛密封好的泡菜，夏季的发酵时间比冬季的短
【答案】C
【解析】
【分析】参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。果醋制作的原理:当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸。当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。
【详解】A、由于酵母菌适宜生长的温度是18~30℃，因此制葡萄酒时，要将温度控制在18~30℃，A正确;
B、醋酸菌的最适生长温度为30～35℃，故果醋发酵时温度宜控制在30-35℃，B正确；
C、腐乳发酵时，毛霉中蛋白酶的合成除了需要核糖体参与，还需要线粒体提供能量，C错误；
D、泡菜腌制过程中，温度高更容易发酵，故夏季的发酵时间比冬季的短，D正确。
故选C。
3. 某生物兴趣小组完成了“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”的实验，操作流程如图所示。下列相关叙述正确的是（　　）

A. 应采集地面表层土作为土壤样品
B. 必须在酒精灯火焰旁采集土壤
C. 振荡可使土壤中的微生物充分稀释到水中
D. 若根据图示菌落进行计数，则10克土样中的菌株数约为1.6×106个
【答案】C
【解析】
【分析】活菌计数法：
①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌；
②操作：a、设置重复组，增强实验的说服力与准确性。b、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数；
③计算公式：每克样品中的菌株数=（c÷V）×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。
【详解】A、取距地表约3～8cm的土壤样品，A错误；
B、取样品时不用在酒精灯火焰旁，B错误；
C、振荡的主要目的是使土壤中的微生物充分释放到无菌水中，C正确；
D、图示平板中有16个菌落，该过程中稀释的倍数为10000，最后只取了0.1mL进行涂布稀释，因此由图示菌落计数结果可知10克土样中的菌株数约为16×104÷0.1×10=1.6×107个，D错误。
故选C。
4. 为了观察手掌上附着的微生物，某小组成员将自己的手掌在配制的牛肉膏蛋白胨固体培养基上轻轻按压后，盖上培养皿盖，将平板倒置放在恒温培养箱中培养48 h，结果如图所示。下列说法错误的是（ ）

A. 配制的培养基经高压蒸汽灭菌后，还要调节pH才能用于接种
B. 待高温灭菌后的培养基冷却至50 ℃左右后，再进行倒平板
C. 在超净工作台上和酒精灯火焰旁进行操作，是为了防止杂菌污染
D. 手掌上的某些微生物在该培养基上并没有生长繁殖形成菌落
【答案】A
【解析】
【分析】1、制备牛肉膏蛋白胨培养基：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。
2、培养基除了含有主要营养物质之外，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的需求。例如培养细菌时需将pH调至中性或微碱性，且培养基一般先调节pH后进行灭菌。
【详解】A、配制牛肉膏蛋白胨培养基时，先调节pH，再进行高压蒸汽灭菌，A错误；
B、待高温灭菌后的培养基冷却至50 ℃左右后，再进行倒平板，此温度下培养基不烫手，便于后续操作，且培养基尚未凝固，容易倒出，B正确；
C、超净工作台在使用前经紫外线消毒，而酒精灯火焰附近存在一个无菌区，为了防止杂菌污染，要在超净工作台上和酒精灯火焰附近进行操作，C正确；
D、牛肉膏蛋白胨培养基虽然营养齐全，但并非所有微生物均可在其上生存，如病毒则无法在该培养基上生长繁殖，D正确。
故选A。
5. 下图为酱油的制作流程，其中米曲霉发酵过程的主要目的是使米曲霉充分生长繁殖，大量分泌制作酱油所需的蛋白酶、脂肪酶等，该过程需要提供营养物质、通入空气。下列说法错误的是（ ）

A. 米曲霉发酵过程中，大豆中蛋白质可为米曲霉的生长提供氮源
B. 米曲霉分泌的酶可将大分子有机物水解为小分子有机物
C. 发酵池发酵阶段应密封进行，酵母菌与米曲霉对氧气需求相同
D. 发酵池中两种主要微生物产生的酒精、乳酸可以抑制杂菌生长
【答案】C
【解析】
【分析】1、微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。对异养微生物来说，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作为营养要素成分时并不是起单一方面的作用。
2、毛霉等微生物产生的蛋白酶可以将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可以将脂肪水解成甘油和脂肪酸。
【详解】A、大豆中的蛋白质含有N，可为米曲霉的生长提供氮源，A正确；
B、米曲霉发酵过程的主要目的是使米曲霉充分生长繁殖，大量分泌制作酱油过程所需的酶类，这些酶中的蛋白酶、脂肪酶能分别将发酵池中的蛋白质和脂肪分解成易于吸收、风味独特的成分，如将蛋白质分解为小分子的肽和氨基酸，B正确；
C、米曲霉发酵过程需要提供营养物质、通入空气，由此可以判断米曲霉属于异养好氧型，而酵母菌属于兼性厌氧生物，C错误；
D、发酵池中两种主要微生物产生的酒精具有抑制杂菌的作用，产生的乳酸会营造酸性环境，也可以抑制杂菌生长，D正确。
故选C。
6. 黑胫病对甘蓝型油菜的危害十分严重，黑芥能抗黑胫病，两者不能直接杂交。为解决该问题，科研人员通过下图所示过程获得抗病品系。据图分析，下列相关叙述不正确的是（　　）

A. 最终获得的抗病植株具有完整的甘蓝型油菜和黑芥的遗传信息
B. 过程③发生脱分化
C. 过程④体现出植物细胞具有全能性
D. 黑芥与甘蓝型油菜存在生殖隔离
【答案】A
【解析】
【分析】据图分析可知，图示为采用植物体细胞杂交技术和植物组织培养技术获得抗黑胫病杂种植株的流程图，图中①表示采用酶解法(纤维素酶和果胶酶)去除细胞壁的过程；②表示诱导原生质体融合的过程。原生质体融合后利用植物组织培养技术得到杂种植株。
【详解】A、黑芥的叶肉细胞原生质体经X射线照射后发生部分染色体结构破坏，因而最终获得的抗病植株不具有完整的黑芥的遗传信息，A错误；
BC、融合后的原生质体经过诱导长出细胞壁，经过程③发生脱分化和过程④再分化后形成抗病植株，由杂种细胞培育成完整植株的过程体现出植物细胞具有全能性，BC正确；
D、根据题意可知，黑芥与甘蓝型油菜不能直接杂交，说明两者存在生殖隔离，D正确。
故选A。
7. 青蒿素是有效的疟疾治疗药物，几乎不溶于水，且对热不稳定，所以提取工艺一直难以突破。下图表示科研人员获得青蒿素含量较高的黄花蒿的植物组织培养流程。下列叙述错误的是（ ）

A. 选取黄花蒿的分生区组织作为外植体更易得到愈伤组织
B. 过程②和过程③的培养基中，过程③的细胞分裂素比例较高
C. 从愈伤组织中提取青蒿素效果不理想，与相关基因的表达情况有关
D. 除向①②过程培养基添加营养物质外，还需添加生长素和细胞分裂素
【答案】B
【解析】
【分析】题图分析：①表示脱分化，②表示再分化诱导生芽，③表示诱导生根，④表示进一步发育成植株。
【详解】A、因为分生区组织生长较为旺盛，分裂能力强，因此选取黄花蒿的分生区组织作为外植体更易得到愈伤组织，A正确；
B、过程②和过程③中，需添加不同比例的细胞分裂素和生长素，以促进愈伤组织分化成根或芽，当细胞分裂素比例较高时，促进生芽，当生长素比例较高时，促进生根，因此过程②中使用的培养基细胞分裂素比例较高，从而有利于生芽，B错误；
C、从愈伤组织中提取青蒿素效果不理想，可能是相关基因没有在愈伤组织中表达，即与相关基因的表达情况有关，C正确；
D、图中①②代表的生理过程分别是脱分化和再分化，此过程除营养物质外，还需要向培养基中添加植物激素，即生长素和细胞分裂素，D正确。
故选B。
8. “不是花中偏爱菊，此花开尽更无花”，菊花因高洁的品质备受人们喜爱。为实现菊花的快速繁殖，研究人员利用其外植体培养出大量幼苗，下列属于该培养过程必需条件的是（　　）
A. 外植体需用纤维素酶果胶酶分散成单个细胞
B. 外植体需经过彻底灭菌处理
C. 外植体细胞具有完整的细胞结构
D. 外植体细胞处于未分化状态
【答案】C
【解析】
【分析】植物组织培养即植物无菌培养技术，又称离体培养，是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官(如根、茎、叶、茎尖、花、果实等）、组织（如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等）或细胞（如大孢子、小孢子、体细胞等）以及原生质体，在无菌和适宜的人工培养基及温度等人工条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株的学科。
【详解】A、植物组织培养过程中外植体无需用酶分散成单个细胞，A错误；
B、植物组织培养过程中，为防止杂菌污染，外植体需消毒处理，B错误；
C、细胞核是遗传和代谢的控制中心，是遗传信息库，含有该种植物完整的遗传信息，故将兰花细胞培养成幼苗过程中植物细胞必须具有完整的细胞核，C正确；
D、植物组织培养的原理是植物细胞具有全能性，其具体过程：外植体脱分化形成愈伤组织，再分化形成胚状体，进而形成新植体，故外植体细胞无需处于未分化状态，D错误。
故选C。
9. 抗PD-L1单克隆抗体能与肿瘤细胞膜表面的PD-L1特异性结合，因而具有治疗某些癌症的作用。下图表示制备抗PD-L1单克隆抗体的流程。下列叙述不正确的是（　　）

A. 分离B淋巴细胞前，需要对小鼠注射PD-L1
B. 经PEG诱导后融合的细胞即为杂交瘤细胞
C. 图中细胞群a~d既能大量增殖，又能产生抗体
D. 图中细胞群a可用于大规模培养，生产抗PD-L1单克隆抗体
【答案】B
【解析】
【分析】单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体；通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤；用具备这种特性的单个杂交瘤细胞培养成细胞群，可制备针对一种抗原表位的特异性抗体即单克隆抗体。
【详解】A、在分离B淋巴细胞前，需要对小鼠注射PD-L1进行免疫，产生已免疫的B淋巴细胞，A正确；
B、经PEG诱导后融合的细胞，有同种细胞融合的细胞，不是杂交瘤细胞，B错误；
C、图中细胞集落a~d表示杂交瘤细胞，既能大量繁殖，又能产生抗体，C正确；
D、图中细胞集落a能产生抗PD-L1抗体，可扩大化培养生产抗PD-L1单克隆抗体，D正确。
故选B。
10. 人绒毛膜促性腺激素（HCG）是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，制备抗HCG单克隆抗体可用于早孕的诊断。下图是抗HCG单克隆抗体制备流程示意图，下列叙述正确的是（　　）

A. 制备抗HCG单克隆抗体的动物细胞工程技术有细胞核移植、动物细胞培养和动物细胞融合
B. 将纯化HCG注入小鼠的目的是为了从产生免疫反应小鼠的脾脏中获得杂交瘤细胞
C. 杂交细胞经过筛选、克隆化培养后，即可以获得产生抗HCG抗体的杂交瘤细胞
D. 促融剂可以用灭活的病毒
【答案】D
【解析】
【分析】据图分析，给动物注射抗原HCG，产生已免疫的B淋巴细胞，加促融剂，与骨髓瘤细胞融合，用HAT培养基进行筛选，筛选出杂交瘤细胞，再进行克隆化培养和抗体检测，筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，再进行大规模培养。
【详解】A、制备单克隆抗体过程中要用到动物细胞培养B淋巴细胞、骨髓瘤细胞和杂交瘤细胞，动物细胞融合技术将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合成杂交瘤细胞，没有用到细胞核移植技术，A错误；
B、在制备单克隆抗体过程中，首先要将纯化HCG注入小鼠体内，其目的是从产生免疫反应小鼠的脾脏中获得B淋巴细胞，B错误；
C、杂交细胞经过筛选、克隆培养后，筛选出的杂交瘤细胞不一定能产生抗HCG抗体，还需进一步检测，C错误；
D、可以用灭活的病毒促进B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，D正确。
故选D。
11. 羊奶营养丰富，易于吸收，被称为“奶中之王”。如图表示研究人员利用胚胎工程繁育优质高产奶羊的过程，下列说法错误的是（　　）

A. 上图繁育高产奶羊的过程中应用了体外受精、胚胎分割、胚胎移植等技术
B. 进行③过程应选择发育良好、形态正常的桑葚胚或囊胚
C. 进行胚胎性别鉴定时，要选择囊胚的内细胞团细胞进行DNA分析
D. 通过③过程获得两个遗传物质相同的后代，属于无性繁殖
【答案】C
【解析】
【分析】题图分析，图中①表示体外受精，②表示早期胚胎培养，③表示胚胎分割，④胚胎移植，⑤表示妊娠生出。
【详解】A、①过程应用了体外受精技术，③过程应用了胚胎分割技术，④过程应用了胚胎移植技术，A正确；
B、③表示胚胎分割，胚胎分割应选择发育良好、形态正常的桑葚胚或囊胚，B正确；
C、进行胚胎性别鉴定时，要选择囊胚的滋养层细胞进行DNA分析，C错误；
D、③表示胚胎分割，来自同一胚胎的后代具有相同的遗传物质，因此胚胎分割属于无性繁殖，D正确。
故选C
12. 早在2018年，当最后一头雄性北白犀离世那天起，地球上就只剩下2头雌性北白犀。下列利用现代科技帮助它们产生后代的方案中不可行的是（ ）
A. 将北白犀的体细胞与去核卵母细胞融合，利用胚胎移植等技术培育出新个体
B. 将北白犀的卵细胞与保存的精细胞体外受精，通过胚胎分割技术培育更多个体
C. 将北白犀的体细胞与骨髓瘤细胞融合，利用动物细胞培养技术培育出新个体
D. 将北白犀的体细胞诱导成多能干细胞，进而诱导出生殖细胞再繁衍培育新个体
【答案】C
【解析】
【分析】核移植技术指的是将动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体；用核移植的方法得到的动物称为克隆动物，原理是动物细胞核的全能性。
【详解】A、将北白犀的体细胞与去核卵母细胞融合，利用胚胎移植等技术培育出新个体，该过程属于克隆，方案可行，A正确；
B、将北白犀的卵细胞与保存的精细胞体外受精，培养到桑椹胚（桑葚胚）或囊胚阶段后，通过胚胎分割技术培育更多个体，方案可行，B正确；
C、动物细胞全能性受限制，现有技术无法将动物细胞直接培育为完整个体，C错误；
D、将北白犀的体细胞诱导成多能干细胞，进而诱导出生殖细胞，由生殖细胞再繁衍培育新个体属于干细胞技术的应用，该方案可行，D正确。
故选C。
13. 下图为DNA分子在不同酶的作用下所发生的变化，图中依次表示限制性核酸内切酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、解旋酶作用的正确顺序是（　　）

A. ①②③④ B. ①②④③ C. ①④②③ D. ①④③②
【答案】C
【解析】
【分析】分析图解：图①中双链DNA分子切成两段，中间出现了黏性末端，图②中两个具有黏性末端的DNA片段连接成一个完整的DNA分子，图③中DNA分子的双链解开，图④是以解开的单链DNA作为模板形成子链的过程。
【详解】限制性核酸内切酶用于切割DNA片段，故①用的是限制性核酸内切酶；DNA聚合酶用于DNA的复制过程，将单个的脱氧核糖核苷酸连接起来，形成脱氧核糖核苷酸链，故④用的是DNA聚合酶；DNA连接酶用于连接DNA片段，故②用的是DNA连接酶；解旋酶会使DNA双链解旋而分开，故③用的是解旋酶，即C正确，ABD错误。
故选C。
14. 如图是培育转基因大肠杆菌的相关图示，图中标注了相关限制酶的酶切位点。下列相关叙述中正确的是（　　）

A. 若通过PCR技术提取该目的基因，应该选用引物甲和引物乙
B. 图中质粒和目的基因构建表达载体，应选用BamHⅠ和HindⅢ剪切
C. 若将基因表达载体导入受体细胞中，需用Ca2+处理细胞
D. 在受体细胞中，氨苄青霉素抗性基因和目的基因可同时表达
【答案】C
【解析】
【分析】在转基因工程中，质粒的选择应该有如下特点：有标记基因、有启动子和终止子、能在受体细胞中友好存在。剪切质粒的限制酶和剪切目的基因的限制酶应该是同一种酶。
【详解】A、若通过PCR技术提取该目的基因，应该选用引物甲和引物丙，因为这两种引物将来引导的子代DNA中包含了目的基因，A错误；
B、如果选用BamHⅠ和HindⅢ剪切，两个标记基因都会被破坏，B错误；
C、Ca2+处理可将大肠杆菌细胞变为感受态细胞，有利于外部的DNA进入，C正确；
D、结合图示，剪切质粒和目的基因的限制酶是Bcl1和HindⅢ，则氨苄青霉素抗性基因片段会被限制酶切断，D错误。
故选C。
15. 如图为利用基因工程培育抗虫植物的示意图。以下相关叙述，正确的是（ ）

A. 图示②→③是基因工程的核心步骤
B. ③侵染植物细胞后，重组Ti质粒整合到④的染色体上
C. ④的染色体上若含抗虫基因，⑤可能不具备抗虫性状
D. 检测⑤的抗虫性状，常用的方法是检测其是否含有Bt蛋白
【答案】C
【解析】
【分析】分析题图：图示是利用基因工程培育抗虫植物的示意图，其中①为质粒，作为运载体；②为重组质粒；③为含有重组质粒的农杆菌；④为含有目的基因的植物细胞；⑤为转基因植株。
【详解】A、图示①→②为基因表达载体的构建，才是基因工程的核心步骤，A错误；
B、③→④用农杆菌侵染植物细胞，重组Ti质粒的T-DNA片段整合到植物细胞的染色体上，B错误；
C、含有目的基因的植物细胞④的染色体上含有目的基因，但目的基因也可能不能转录或者不能翻译，或者表达的蛋白质不具有生物活性，故⑤转基因植株可能不具备抗虫性状，需要进行筛选，C正确；
D、转基因植株⑤含有Bt基因，能合成Bt蛋白杀死棉铃虫，要检测其抗虫性，常用方法是在棉地里投放棉铃虫，观察棉铃虫吃了叶片后是否死亡，D错误。
故选C。
二、不定项选择题
16. 为研究多种血糖调节因子的作用，我国科学家开发出胰岛素抵抗模型鼠。为扩增模型鼠数量，科学家通过诱导优良模型鼠体细胞转化获得诱导胚胎干细胞（iPS细胞），继而利用iPS细胞培育出与模型鼠遗传特性相同的克隆鼠，具体步骤如图所示。下列叙述正确的是（　　）

A. 诱导优良模型鼠体细胞转化为iPS细胞的过程类似于植物组织培养的脱分化
B. 为获得更多的双细胞胚，可对白色鼠1注射性激素达到超数排卵的目的
C. 胚胎移植前需要给白色鼠2注射免疫抑制剂
D. 为确定克隆鼠培育是否成功，须对黑色鼠3进行胰岛素抵抗的相关检测
【答案】AD
【解析】
【分析】1、哺乳动物胚胎干细胞是由早期胚胎或原始性腺中分离出来的一类细胞；胚胎干细胞的细胞核一般较大，核仁明显，而细胞质相对较少；在功能上具有发育的全能性。
2、植物组织培养的脱分化：让已经分化的细胞，经过诱导后，失去其特有的结构和功能而转变成未分化细胞的过程。
【详解】A、优良模型鼠体细胞在诱导因子的作用下转化为iPS细胞的过程与植物组织培养中的脱分化过程类似，是组织细胞恢复分裂能力的过程，A正确；
B、用促性腺激素处理，使其超数排卵，而非注射性激素，B错误；
C、胚胎移植时，受体对植入胚胎不会产生排斥反应，因此胚胎移植前不需要给白色鼠2注射免疫抑制剂，C错误；
D、据图示，最终得到了黑色鼠3个体，实验最终目的为“开发出胰岛素抵抗模型鼠”，故为确定克隆鼠培有是否成功，须对黑色鼠3进行胰岛素抵抗的相关检测，D正确。
故选AD。
17. 甲品种青花菜具有由核基因控制的多种优良性状，但属于胞质雄性不育品种。通过体细胞杂交，成功将乙品种细胞质中的可育基因引入甲品种中。下列相关叙述错误的是（ ）

A. 获得的融合原生质体需放在无菌水中以防杂菌污染
B. 流程中A处理可使用纤维素酶和果胶酶，B处理可使用聚乙二醇
C. 培养形成的愈伤组织可继续在原培养基中分化形成植株
D. 杂种植株含有控制甲品种青花菜优良性状的基因，并能通过父本进行传递
【答案】AC
【解析】
【分析】植物体细胞杂交技术：就是将不同种的植物体细胞原生质体在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成完整植物体的技术。诱导融合的方法：物理法包括离心、振动、电刺激等．化学法一般是用聚乙二醇（PEG）作为诱导剂。
【详解】A、获得的融合原生质体需放在等渗的无菌溶液中，不能放在无菌水中，否则会吸水涨破，A错误；
B、流程中A为去除细胞壁，可使用纤维素酶和果胶酶分解细胞壁，B过程为诱导原生质体融合，需要用聚乙二醇进行诱导，B正确；
C、形成愈伤组织的脱分化培养基和再分化形成植株的再分化培养基中细胞分裂素和生长素比例不同，C错误；
D、甲品种控制多种优良性状的基因，为核基因，杂种植物细胞核内含有控制甲青花菜优良性状的基因，精子中具有一半核基因，能通过父本（精子）进行传递，D正确。
故选AC。
18. 钙果又名欧李，果实中含有多种对人体有益的矿物质元素，利用其加工成果汁、果酒、果醋等产品。下列有关叙述正确的是（　　）
A. 利用醋酸菌进行钙果果醋发酵时，温度应控制在30~35℃
B. 在钙果果酒发酵期间，为保持无氧环境，不能拧松发酵瓶盖
C. 传统制作钙果果酒、果醋时，应将原料钙果果汁进行高压蒸汽灭菌
D. 钙果果酒的颜色是钙果果皮和果肉中的色素进入发酵液形成的
【答案】AD
【解析】
【分析】1、果酒制作菌种是酵母菌，代谢类型是兼性厌氧型真茵，属于真核细胞，条件是18~25°C、前期需氧，后期不需氧。
2、果醋制作的菌种是醋酸菌，代谢类型是需氧型细菌，属于原核细胞，条件是30~35°C、一直需氧。当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的果糖分解成醋酸：当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。
【详解】A、制作果醋的温度条件是30~35°C，A正确；
B、酵母菌进行无氧呼吸产生酒精和二氧化碳，在发酵过程中密闭，但需要根据发酵进程适时拧松瓶盖放气，B错误；
C、制作果酒时，原料钙果果汁不需要进行灭菌，否则会杀死附着在果皮上的野生型酵母菌，C错误；
D、钙果果酒的颜色是钙果果皮和果肉中的色素进入发酵液形成的，D正确。
故选AD。
19. 实时荧光 RT-PCR可用于RNA病毒的核酸检测，其原理是∶在 PCR复性过程中探针和引物一起与模板结合，探针两侧分别带有荧光基团和抑制荧光发出的淬灭基团，新链延伸过程中，DNA 聚合酶会破坏探针，导致荧光基团与淬灭基团分离而发出荧光。利用 RT-PCR 进行核酸检测的相关过程如图所示。下列说法错误的是（ ）

A. 做 RT-PCR 之前，需要先根据 cDNA 的核苷酸序列合成引物和探针
B. RNA不能作为 PCR扩增的模板，故需要将样本中的 RNA反转录为 DNA后再进行扩增
C. 若检测结果有强烈荧光信号发出，说明被检测者没有感染病毒
D. 病毒的检测还可以检测病毒的物质或病毒引发产生的抗体，其原理都是抗原-抗体杂交
【答案】C
【解析】
【分析】根据题意，通过病毒的RNA进行逆转录产生cDNA，cDNA在PCR过程中解旋后可以和引物一起与模板结合，探针两侧有荧光基团和抑制荧光发出的淬灭基团，延申过程DNA酶破坏了探针使淬灭基团分离后发出荧光而检测到是否有cDNA来判断是否有病毒。
【详解】A、PCR 需要根据目的基因的核苷酸序列合成引物，同时 RT-PCR 还需要探针与待测样本 DNA 混合，A正确；
B、PCR扩增必须以 DNA为模板，RNA 不能作为 PCR 扩增的模板，所以需要将样本中的 RNA 反转录为 DNA后再进行扩增，B 正确；
C、若检测结果有强烈荧光信号发出，说明被检测者极有可能感染了病毒，C 错误；
D、RNA病毒的检测方法有∶①RNA 检测，即检测病毒的遗传物质 RNA；②特异性抗原蛋白检测，即检测病毒表面的一种糖蛋白；③特异性抗体检测，即检测感染者体内通过免疫反应所产生的某种抗体。后两种方法的原理是抗原-抗体杂交，D正确。
故选C。
20. 以下为形成cDNA过程和PCR扩增过程示意图。据图分析，下列说法错误的是（　　）

A. 催化①过程的酶是RNA聚合酶
B. ④过程发生的变化称为复性
C. 催化②⑤过程的酶都是DNA聚合酶，都必须能耐高温
D. 如果RNA单链中A与U之和占该链碱基含量的40%，则一个双链DNA中，A与U之和也占该DNA碱基含量的40%
【答案】ACD
【解析】
【分析】根据题意和图示分析可知：①是由RNA形成单链DNA的过程，为逆转录过程，②是以单链DNA合成双链DNA的过程，是DNA分子复制过程；③④⑤是多聚酶链式反应扩增DNA片段，③是变性、④是复性、⑤是延伸阶段；RNA单链A+U的碱基比例与逆转录形成的DNA分子中A+T的碱基比例相同。
【详解】A、①过程为逆转录过程，故催化①过程的酶是逆转录酶，A错误；
B、④为复性过程，发生的变化是引物与互补DNA链结合，B正确；
C、催化②过程（DNA复制）需要的酶是DNA聚合酶，催化⑤过程（DNA单链延伸）的酶是耐高温DNA聚合酶--Taq酶，⑤过程进行的温度是70℃，因此催化⑤过程的DNA聚合酶耐高温，C错误；
D、根据碱基互补原则A-T，U-A，如果RNA单链中A与U之和占该链碱基含量的40%，则一个双链DNA中，A与T之和也占该DNA碱基含量的40%，DNA中不含有U，D错误。
故选ACD
三、非选择题
21. 营养缺陷型菌株就是在人工诱变或自发突变后，微生物细胞代谢调节机制中的某些酶被破坏，使代谢过程中的某些合成反应不能进行的菌株。以下是实验人员利用影印法初检氨基酸缺陷型菌株的过程。回答下列问题：

（1）过程①的接种方法为______，平板倒置可以防止培养皿盖上的水珠落入培养基，以免造成污染。用此方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目______。
（2）从培养基成分分析，图中基本培养基与完全培养基存在差异的成分是______。
（3）为了进一步完成对初检的营养缺陷型菌株的鉴定，实验人员进行了如下操作：
①用接种针挑取菌落______（填“A”或“B”）接种于盛有完全培养液的离心管中，28℃振荡培养1～2天后，离心，取沉淀物用无菌水洗涤3次，并制成菌悬液。
【规律提炼】由此可知，营养缺陷菌株在基本培养基和完全培养基上生长的特点是：___________________________________
②吸取1mL菌悬液加入无菌培养皿中，倾注15mL融化并冷却至50℃左右的基本培养基，待其冷凝后用记号笔在______（填“皿盖”或“皿底”）划分A、B、C、D、E五个区域。 ③在划分的五个区域对应的培养基上放入少量分组的氨基酸粉末（如下表所示），经培养后，观察生长圈出现的区域，从而确定属于何种氨基酸缺陷型。
组别
所含氨基酸
A
组氨酸
苏氨酸
谷氨酸
天冬氨酸
亮氨酸
B
精氨酸
苏氨酸
赖氨酸
甲硫氨酸
苯丙氨酸
C
酪氨酸
谷氨酸
赖氨酸
色氨酸
丙氨酸
D
甘氨酸
天冬氨酸
甲硫氨酸
色氨酸
丝氨酸
E
半胱氨酸
亮氨酸
苯丙氨酸
丙氨酸
丝氨酸
在上述鉴定实验中，发现在培养基A、D区域出现生长圈，说明该氨基酸缺陷型菌株属于______缺陷型。
【答案】（1） ①. 稀释涂布平板法 ②. 低
（2）氨基酸 （3） ①. A ②. 氨基酸缺陷型菌株在基本培养基中不能生长，而在完全培养基中能够生长 ③. 皿底 ④. 天冬氨酸
【解析】
【分析】分析题图，图中首先利用稀释涂布平板法分离细菌，然后运用“影印法”将菌种接种到两种培养基中：基本培养基、完全培养基，则在基本培养基中，氨基酸缺陷型菌株不能生长，而在完全培养基中能够生长，因此可以选择出氨基酸缺陷型菌株。
【小问1详解】
根据过程①培养的效果图可以判断，该过程所采用的接种方法为稀释涂布平板法；平板倒置可以防止培养皿盖上的水珠落入培养基，以免造成污染；用稀释涂布平板法接种方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只有一个菌落。
【小问2详解】
在基本培养基中，氨基酸缺陷型菌株不能生长，而在完全培养基中能够生长，因此从完全培养基上可获得相应的营养缺陷型菌株。
【小问3详解】
①在基本培养基中，氨基酸缺陷型菌株不能生长，而在完全培养基中能够生长，因此图中菌落A应该为氨基酸缺陷型菌株，则用接种针挑取菌落A接种于盛有完全培养液的离心管中。
②由于平板倒置，故待其冷凝后用记号笔在皿底划分A、B、C、D、E五个区域。
③表中信息显示：A、D区域含有、其它区域不含有的氨基酸是天冬氨酸，而实验结果只有A、D区域出现生长圈，说明该营养缺陷型菌株属于天冬氨酸缺陷型。
22. 紫花苜蓿是全世界栽培历史最悠久﹑面积最大、利用最广泛的一种豆科牧草，也是研究最多的牧草之一。百脉根由于富含缩合单宁，单独饲喂其鲜草或直接放牧不会引起臌胀病发生。目前，利用体细胞杂交技术将百脉根细胞中控制单宁合成的基因转入紫花苜蓿成为改良苜蓿品质、创造新品种的重要方法和途径。为了便于杂种细胞的 筛选和鉴定，研究人员利用红色荧光和绿色荧光颜料分别标记苜蓿和里奥百脉根的原生质体膜上的蛋白质，再生植株培育过程如图所示，图中①、②、③、④表示相关操作过程。回答下列问题：（注：IOA可抑制植物细胞呼吸第一阶段，R-6G可阻止线粒体的呼吸作用）

（1）植物体细胞杂交依据的生物学原理有_______。过程①常用的酶是_______，细胞融合完成的标志是______。
（2）人工诱导植物原生质体融合的化学法包括______、______等，在鉴定杂种原生质体时可用显微镜观察，根据细胞膜表面荧光颜色不同可观察到______种不同的原生质体（只考虑细胞两两融合的情况）。
（3）过程③和过程④依次为_____、______。
（4）若苜蓿细胞内有m条染色体，里奥百脉根细胞内有n条染色体，则“苜蓿—里奥百脉根"细胞在有丝分裂后期含____条染色体。若杂种细胞培育成“苜蓿—里奥百脉根”植株为四倍体，则此杂种植株的花粉经离体培育得到的植株属于_____植株。
【答案】（1） ①. 细胞膜的流动性、植物细胞的全能性 ②. 纤维素酶和果胶酶 ③. 再生出细胞壁
（2） ①. 聚乙二醇（或PEG） ②. 高Ca2+-高pH
③. 3##三

（3） ①. 脱分化 ②. 再分化
（4） ①. 2（m+n） ②. 单倍体
【解析】
【分析】据图可知：过程 ① 是去除植物的细胞壁获得原生质体，过程 ③ 表示将杂种细胞培养成愈伤组织，属于植物组织培养过程中的脱分化；过程 ④ 表示将愈伤组织培养成植物体，该过程属于再分化。
【小问1详解】
植物体细胞杂交是将不同种植物的体细胞，在一定条件下融合成杂种细胞，再利用植物组织培养技术把杂种细胞培育成新的植物体的技术，植物体细胞杂交依据的生物学原理有细胞膜的流动性（原生质体融合）和植物细胞的全能性（组织培养过程）；细胞融合完成的标志是：杂种细胞再生出新的细胞壁，过程① 是去除植物的细胞壁获得原生质体，需要用纤维素酶和果胶酶除去细胞壁。
【小问2详解】
植物原生质体融合过程，常用的化学法有高Ca2+-高pH融合法和聚乙二醇(PEG)融合法；依题意，科学家利用红色荧光和绿色荧光分别标记苜蓿和里奥百脉根的原生质体膜上的蛋白质，所以融合后根据细胞膜表面的荧光的不同可观察到有 3 种不同类型的原生质体：红色荧光标记的苜蓿原生质体及其融合后的原生质体、绿色荧光标记的里奥百脉根原生质体及其融合后的原生质体、红色荧光和绿色荧光共同存在的苜蓿与里奥百脉根的原生质融合后所形成的原生质体。
【小问3详解】
过程 ③ 表示将杂种细胞培养成愈伤组织，属于植物组织培养过程中的脱分化；过程 ④ 表示将愈伤组织培养成植物体，该过程属于再分化。
【小问4详解】
杂种细胞的染色体数为融合前两种细胞染色体数之和，即（ m+n ），“苜蓿-里奥百脉根”细胞在有丝分裂后期，染色体数目加倍为， 2 （ m+n ）；单倍体是指体细胞含有本物种配子中染色体数目的个体，杂种植株的花粉经离体培养形成的植株属于单倍体。
23. 为降低人的乳腺癌治疗药物的副作用，科研人员尝试在单克隆抗体技术的基础上，构建抗体-药物偶联物（ADC），过程如图所示：

（1）本实验中，小鼠注射的特定抗原应取自_______；步骤②的细胞必须经过步骤③克隆化培养和_______才能筛选得到符合要求的杂交瘤细胞，杂交瘤细胞的特点是_______；
（2）步骤④是将获得的a_______和b_______这2部分，通过接头结合在一起，从而获得ADC．
（3）研究发现，ADC在患者体内的作用如下图所示。

由图可知，ADC中接头的作用是连接药物分子，其稳定性_______（偏高/偏低），可能会导致药物分子脱落，进而与正常细胞接触，造成“脱靶毒性”，通常情况下ADC对正常细胞无显著毒性；当其进入乳腺癌细胞后，细胞中的溶酶体可将其水解，释放出的药物最终作用于细胞核，可导致_______。
（4）单克隆抗体的优点：_______。
【答案】（1） ①. 人的乳腺癌细胞 ②. 抗体检测 ③. 既能迅速大量增殖，又能产生特定抗体
（2） ①. 单克隆抗体 ②. 治疗乳腺癌的药物
（3） ①. 偏低 ②. 乳腺癌细胞凋亡##细胞凋亡
（4）能准确地识别抗原的细微差别，与特定抗原发生特异性结合，并且可以大量制备
【解析】
【分析】单克隆抗体制备过程：用特定的抗原免疫，从小鼠的脾中得到能产生特定抗体的B淋巴细胞→诱导与培养好的骨髓瘤细胞融合→用特定的选择培养基进行筛选：在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长→对选择培养的杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选，就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞→将抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞在体外大规模培养或者注射小鼠腹腔中增殖→从细胞培养液或小鼠腹水中获取大量的单克隆抗体。
【小问1详解】
结合题干“为降低乳腺癌治疗药物的副作用，科研人员尝试在单克隆抗体技术的基础上”可知该抗体能特异性识别乳腺癌细胞，故本实验中，小鼠注射的特定抗原应取自人的乳腺癌细胞；步骤②的细胞为多种杂交瘤细胞，要想获得分泌所需抗体的癌细胞还需要步骤③克隆化培养和抗体检测，才能筛选得到符合要求的杂交瘤细胞，杂交瘤细胞的特点是既能大量增殖，又能产生特定抗体；杂交瘤细胞可采用注射到小鼠腹腔内培养或进行体外培养的方式进行扩大培养。
【小问2详解】
题图中的a物质呈“Y”形，故a为单克隆抗体，和b治疗乳腺癌的药物这2部分，通过接头结合在一起，从而获得ADC，能准确地释放药物作用于靶细胞，对人体正常组织毒副作用小。
【小问3详解】
接头起到稳定单克隆抗体和药物结合的作用，由图可知，ADC中接头的作用是连接药物分子，其稳定性偏低可能会导致药物分子脱落，进而与正常细胞接触，造成“脱靶毒性”，通常情况下ADC对正常细胞无显著毒性（抗体起靶向作用，较精准定位将药物作用于需要治疗的部位）；当其进入乳腺癌细胞后，细胞中的溶酶体可将其水解，释放出的药物最终作用于细胞核，可导致癌细胞凋亡（利于机体的相对稳定）。
【小问4详解】
单克隆抗体能准确地识别抗原的细微差别，与特定抗原发生特异性结合，并且可以大量制备。单克隆抗体除可以运载药物外，还有作为诊断试剂、治疗疾病等作用。
24. 自1996年世界上第一只体细胞克隆羊多莉诞生以来，人类已经成功克隆了马、牛和猪等大型家畜，但体细胞克隆灵长类动物一直没有取得进展，究其原因主要是灵长类动物的卵细胞极为敏感，极轻微挤压都可能导致异常分裂，且细胞核移植到去核卵细胞后不能完全恢复到分化前的功能状态，导致胚胎发育率低。2017年，我国科 学家利用“聪明的化学方法和操作技巧”成功培育出了体细胞克隆猴“中中”和“华华”， 该成果一经公布轰动了全世界。下图所示为克隆猴的培育过程。

（1）动物体细胞核移植难度明显高于胚胎细胞核移植，原因是______。
（2）我国科学家经过多年的反复试验，可以在10s之内对卵母细胞进行去核操作，在15秒之内完成核移植，操作迅速使卵细胞受损极小，在技巧上保证了实验的成功。实际操作中，去核是指去除______；去核前应保证采集的卵母细胞在体外培养至______期；核移植时将供体细胞注入_____，通过电融合法使两细胞融合，供体核进入卵母细胞，形成重构胚；
（3）“聪明的化学方法”也是保证实验成功的条件。我国科学家将组蛋白去甲基化酶（Kdm4d）的mRNA注入重构胚，同时用组蛋白脱乙酰酶抑制剂（TSA）处理重构胚，提高了胚胎的发育率和妊娠率。Kdm4d和TSA的作用机理分别是_____、_____，从而改变组蛋白的表观遗传修饰来调控基因表达。Kdm4d和TSA处理前后基因的碱基序列______（填“会”或“不会”）发生改变。
（4）除操作技巧和化学方法的运用外，克隆猴的成功也得益于每一步严谨科学的实验操作。体外培养重构胚时，培养液中除应含有细胞所需要的各种营养物质外，通常需要加入______等一些天然成分，将其置于含有______混合气体的CO2培养箱中培养。胚胎移植前还需对代孕母猴进行______处理，以保证胚胎能够继续发育。
【答案】（1）体细胞分化程度高，表现全能性十分困难
（2） ①. 纺锤体—染色体复合物 ②. 减数分裂II中（MⅡ） ③. 去核的卵母细胞
（3） ①. 降低组蛋白的甲基化水平 ②. 提高组蛋白的乙酰化水平 ③. 不会
（4） ①. 血清 ②. 95%空气和5%CO2 ③. 同期发情
【解析】
【分析】1、克隆动物概念：将动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物。
2、原理：动物细胞核的全能性。
3、动物细胞核移植可分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植。体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植。原因：动物胚胎细胞分化程度低，恢复其全能性相对容易，动物体细胞分化程度高，恢复其全能性十分困难。
【小问1详解】
体细胞分化程度高，表现全能性困难，而胚胎细胞分化程度低，表现全能性容易，因此动物体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植。
【小问2详解】
去核是指去除纺锤体—染色体复合物；去核前应保证采集的卵母细胞在体外培养至减数分裂II中期；目前动物细胞核移植技术普遍使用的去核方法是显微操作法，核移植的具体操作是将体细胞注入去核卵母细胞，从而得到重构胚。
【小问3详解】
我国科学家将组蛋白去甲基化酶（Kdm4d）的mRNA注入重构胚，同时用组蛋白脱乙酰酶抑制剂（TSA）处理重构胚，这样可降低组蛋白的甲基化水平，提高组蛋白的乙酰化水平，从而改变组蛋白的表观遗传修饰来调控基因表达，激活重构胚，使其完成细胞分裂和发育进程，提高了胚胎的发育率和妊娠率。因为该处理只是对基因表达做出调控，因此，经过Kdm4d和TSA处理前后基因的碱基序列并不发生改变。
【小问4详解】
体外培养重构胚时，培养液中除应含有细胞所需要的各种营养物质外，通常需要加入动物血清等一些天然成分，并将其置于含有95%空气和5%CO2混合气体的CO2培养箱中培养，培养过程中需要定期更换培养基，并创造无菌、无毒环境。胚胎移植前还需对代孕母猴进行同期发情处理，这样可以使移植的胚胎获得相同的生理环境，以保证胚胎能够继续发育。
25. 金属硫蛋白（MT）是一类广泛存在于动植物中具有金属结合能力的蛋白质，决定该蛋白质合成的基因结构如图1所示，其中A链为编码链、B链为模板链。科研人员利用图2所示质粒构建枣树的MT基因重组DNA分子并导入大肠杆菌细胞，获得对重金属镉（Cd）具有吸附能力和耐受能力的MT工程菌。

（注：XhoI、KpnI、PstI为不同限制酶的识别位点：LacZ基因编码产生的β-半乳糖苷酶可以催化无色物质X-gal产生蓝色物质使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色；ampr基因 为氨苄青霉素抗性基因。）回答下列问题：
（1）目的基因的筛选与获取提取枣树细胞的___，经逆转录获得 cDNA：为了使PCR扩增后的产物按照正确的方向与已被酶切的载体连接，克隆MT基因时应选择的引物组合是_____，并在其_____（填“5'”或“3'”）末端分别添加限制酶___的识别序列。
（2）基因表达载体的构建启动子是___识别并结合的部位；基因工程中构建用于原核生物的表达载体时，常用的启动子不包括以下哪一项___。
A．噬菌体基因启动子
B．乳酸菌基因启动子
C．大肠杆菌基因启动子
D．枣树MT基因启动子
（3）导入、筛选和鉴定MT工程菌①将得到的混合物导入到用___处理的大肠杆菌。
②将菌液稀释并涂布在含X-gal和氨苄青霉素的培养基上进行培养后，随机挑取____的单菌落可获得MT工程菌。
③欲进一步对MT工程菌进行鉴定，可将挑取出的MT工程菌与___分别接种至含___的LB液体培养基中，置于恒温培养箱中培养，适宜时间后检测菌种数量。
（4）扩大菌种将MT工程菌接种至发酵罐内进行扩增，培养过程中可定期取样并使用___对菌体进行直接计数，以评估增殖情况。发酵结束后，采用___（答出1项即可）等方法获得所需的发酵产品。
【答案】（1） ①. mRNA ②. 引物Ⅱ和引物Ⅲ ③. 5' ④. KpnI和XhoI
（2） ①. RNA聚合酶 ②. D
（3） ①. Ca2+ ②. 白色 ③. 普通大肠杆菌 ④. （一定浓度重金属）镉
（4） ①. 细菌计数板 ②. 过滤、沉淀、提取、分离、纯化
【解析】
【分析】1、引物是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸。引物能使DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸。用于PCR的引物长度通常为20〜30个核苷酸。
2、启动子是一段有特殊序列结构的DNA片段，位于基因的上游，紧挨转录的起始位点，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终表达出人类需要的蛋白质。
【小问1详解】
枣树细胞中的mRNA在逆转录酶的催化下经过逆转录可获得cDNA。引物能使DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸，故应选择引物方向是从5'→3'延伸，即引物Ⅱ和引物Ⅲ。限制酶序列应添加在基因的外侧，不影响基因的序列，故添加在引物的5'端。因为B链为模板链，转录的方向是沿着模板链的3'→5'，应将MT基因的左端与启动子一侧连接，又目的基因中含有PstI的识别序列，故添加的限制酶序列分别是XhoI和KpnI。
【小问2详解】
启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终表达出人类需要的蛋白质。乳酸菌和大肠杆菌都是原核生物，启动子可以用于构建原核生物的表达载体；噬菌体是寄生于细菌中的病毒，可在特定细菌内繁殖，启动子可用于构建原核生物表达载体；枣树MT基因启动子只能在特定枣树细胞中发挥作用，不适合用于构建原核生物表达载体，故选D。
【小问3详解】
大肠杆菌是原核生物，需要Ca2+处理，使其处于易于吸收外源DNA的状态，完成将基因表达载体导入受体细胞的过程。在含有氨苄青霉素的培养基上，导入了空白质粒和重组质粒的大肠杆菌都可以形成菌落，但导入重组质粒的大肠杆菌LacZ基因被破坏，不能催化无色物质X-gal产生蓝色物质，是白的菌落，故应挑取白色单菌落进行培养。操作获得的是对重金属镉（Cd）具有吸附能力和耐受能力的MT工程菌，因此欲进一步对MT工程菌进行鉴定，可将挑取出的MT工程菌与普通大肠杆菌分别接种到含有（一定浓度的重金属）镉的LB液体培养基中。
【小问4详解】
细菌计数板可对菌体直接计数，不能对菌落进行计数。若要获得发酵产品，可采用过滤、沉淀、提取、分离、纯化等方法。