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山东省聊城市一中学2022-2023学年高二生物下学期期中考试试题（Word版附解析）
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这是一份山东省聊城市一中学2022-2023学年高二生物下学期期中考试试题（Word版附解析），共25页。试卷主要包含了选择题，非选择题等内容，欢迎下载使用。
2022-2023学年第二学期期中考试
高二生物试题
一、选择题
1. 格瓦斯是一种盛行于俄罗斯等国家含低度酒精的饮料，其传统做法是以俄式大面包为基质，由酵母菌和乳酸菌发酵而成。相关叙述正确的是（ ）
A. 酵母菌和乳酸菌都具有成形的细胞核 B. 发酵时两种菌都产生酒精和CO2
C. 发酵时要保证温度适宜并保持密闭 D. 发酵时两种菌为互利共生的关系
【答案】C
【解析】
【分析】1.酵母菌的新陈代谢类型为异养兼性厌氧型，在利用酵母菌发酵时最好是先通入足够的无菌空气在有氧环境下一段时间使其繁殖，再隔绝氧气进行发酵；酒精发酵的最佳温度是在18℃～25℃，pH最好是弱酸性。
2.乳酸菌的代谢类型是异养厌氧型，在无氧条件下乳酸菌能够将蔬菜中的葡萄糖氧化为乳酸。
【详解】A、酵母菌具有成形的细胞核，而乳酸菌为原核生物，没有成形的细胞核，A错误；
B、发酵时酵母菌产生酒精和CO2，而乳酸菌发酵过程产生的是乳酸，B错误；
C、发酵时过程需要无氧环境，故要保证温度适宜并保持密闭，C正确；
D、发酵过程中，由于营养物质的消耗，加剧了乳酸菌和酵母菌的竞争，D错误。
故选C。
【点睛】
2. 红酸汤是苗族人民的传统食品，它颜色鲜红、气味清香、味道酸爽。以番茄和辣椒为原料的红酸汤制作流程如下。下列相关叙述中正确的是（ ）
A. 红酸汤制作过程中用到的微生物主要是醋酸菌
B. 装坛时加入成品红酸汤是为了增加发酵菌种的数量
C. 装坛时不装满的原因是为了促进微生物繁殖
D. 红酸汤的制作中发酵时间越长，口味越纯正
【答案】B
【解析】
【分析】红酸汤制作需要用到乳酸菌，乳酸菌是一种厌氧菌，在无氧的条件下，乳酸菌发酵产生乳酸，使得菜品有一股特别的风味提升菜品的口感。
【详解】A、红酸汤制作过程中用到的微生物主要是乳酸菌，A错误；
B、装坛时加入成品红酸汤是为了增加发酵菌种的数量，B正确；
C、装坛时坛口留有一点空间而不装满的目的是防止番茄发酵后液体膨胀外溢，C错误；
D、如果发酵时间过长，会影响口感，D错误。
故选B。
3. “筛选”是分离和培养生物新类型常用的手段，下列有关技术中不能筛选成功的是（ ）
A. 在牛肉膏蛋白胨培养基中，筛选大肠杆菌
B. 在以尿素为唯一氮源的固体培养基中，筛选能够分解尿素的微生物
C. 用纤维素为唯一碳源的培养基，筛选能分解纤维素的微生物
D. 在培养基中加入不同浓度的氯化钠，筛选抗盐突变体植物
【答案】A
【解析】
【分析】本题是选择培养基的选择作用，根据选项涉及的培养基进行分析，对选项做出判断。
【详解】A、在牛肉膏蛋白胨培养基中，几乎所有细菌都能生长，不能筛选大肠杆菌，A错误；
B、在以尿素为唯一氮源的固体培养基中，只有能分解尿素的微生物才能生长，不能分解尿素的微生物因缺乏氮源不能生长，能够筛选分解尿素的微生物，B正确；
C、用纤维素为唯一碳源的培养基，只有能分解纤维素的微生物才能生长，不能分解纤维素的微生物因缺乏碳源不能生长，能筛选分解纤维素的微生物，C正确；
D、在培养基中加入不同浓度的氯化钠，能够筛选出抗盐突变体植物，D正确。
故选A。
【点睛】本题的知识点是尿素固体培养基、纤维素为唯一碳源的培养基、加入氯化钠的高盐培养基的选择作用，主要考查 学生对选择培养基的理解与运用。
4. 我国《生活饮用水卫生标准》中关于生活饮用水的细菌标准的具体规定如下：细菌总数1mL水中不超过100个，大肠杆菌数1mL水中不超过3个。为了检验某城市自来水是否达标，某生物兴趣小组进行了相关的实验。下列有关叙述错误的是（ ）
A. 实验过程中应用到涂布器、移液管等操作工具
B. 取样水龙头应用火焰灼烧，打开水龙头一段时间后再取样
C. 检验自来水中大肠杆菌数是否达标，可用稀释涂布平板法来分离并计数
D. 若空白对照组上有6个菌落，则在实验组数据基础上减去6，以获得最准确数据
【答案】D
【解析】
【分析】间接计数法（活菌计数法）：
①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
②操作：a、设置重复组，增强实验的说服力与准确性；b、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。
③计算公式：每克样品中的菌株数=（c÷V）×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。
【详解】A、实验过程中应用到涂布器、移液管等操作工具，A正确；
B、为避免杂菌污染，取样水龙头应用火焰灼烧，打开水龙头一段时间后再取样，是为了防止温度过高杀死目的菌；B正确；
C、稀释涂布平板法可以用于活菌计数，故检验自来水中大肠杆菌数是否达标，可用稀释涂布平板法来分离并计数，C正确；
D、若空白对照组上有6个菌落，则说明该实验失败，实验数据不能采用，D错误。
故选D。
【点睛】
5. 下列关于发酵工程的说法中，不正确的是（ ）
A. 在菌种选育过程中，可以利用人工诱变、自然界中筛选和基因工程等手段
B. 青霉素是抗生素，所以在青霉素生产过程中不需要严格灭菌
C. 在谷氨酸发酵过程中，pH呈酸性时产生谷氨酰胺和N-乙酰谷氨酰胺
D. 发酵工程的产品可以采用过滤、沉淀等方法将菌体分离和干燥
【答案】B
【解析】
【分析】发酵工程是指利用微生物的特定功能，通过现代工程技术，规模化生产对人类有用的产品，主要包括微生物的代谢物、酶及菌体本身。发酵工程一般包括菌种的选育，扩大培养，培养基的配置、火菌，接种，发酵、产品的分离、提纯等方面。发酵过程一般来说都是在常温常压下进行，条件温和、反应安全，原料简单、污染小，反应专一性强，因而可以得到较为专一的产物。
【详解】A、在菌种选育过程中，性状优良的菌种可以利用人工诱变（引起基因突变）、自然界中筛选和基因工程等手段生产，A正确；
B、虽然青霉素是抗生素，可以杀死部分细菌，但不能杀死所有细菌，有些细菌能分泌分解青霉素的酶，故在青霉素生产过程中仍然需要严格灭菌，B错误；
C、谷氨酸棒状杆菌属于好氧型细菌，发酵过程中应进行通气和搅拌，以提高培养液中的溶氧量。当pH呈酸性时，谷氨酸棒状杆菌就会生成乙酰谷氨酰胺；当溶氧不足时，生成的代谢产物就会是乳酸或琥珀酸，C正确；
D、若发酵工程的产品是微生物细胞本身，可在发酵结束后采用过滤、沉淀等方法将菌体分离和干燥，若产品是代谢物，可以根据产物的性质采取蒸馏、萃取、离子交换等方法提取、分离和纯化产品，D正确。
故选B。
6. 植物细胞培养是在植物组织培养技术的基础上发展起来的，下列有关植物细胞培养的叙述，不正确的是（ ）
A. 植物细胞培养技术的目的是为了获得大量有生理活性的次生代谢物
B. 植物细胞培养技术快速、高效，几乎不受季节、天气等的限制
C. 利用生物反应器悬浮培养人参细胞，提取人参皂苷，用于生产保健药品和美容护肤用品
D. 植物细胞培养需要在一定的温度、pH等条件下进行，但不需要进行无菌操作
【答案】D
【解析】
【分析】1、植物组织培养就是在无菌和人工控制的条件下，将离体的植物器官、组织、细胞，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。
2、植物组织培养技术的应用：植物繁殖的新途径（微型繁殖、作物脱毒、人工种子）、作物新品种的培育（单倍体育种、突变体的利用）、细胞产物的工厂化生产。
【详解】A、植物细胞培养技术的目的是为了获得大量有生理活性的次级代谢产物，通过植物细胞培养获得的级代谢产物生物碱、维生素、色素、抗生素以及抗肿瘤药物不下50多个大类，A正确；
B、植物细胞培养技术的条件可以认为控制，具有快速、高效、不受季节、外部环境等条件的限制的特点，B正确；
C、人参是一种名贵中药材，其有效成分主要是人参皂苷，利用生物反应器悬浮培养人参细胞，提取人参皂甙，用于生产保健药品和美容护肤用品，C正确；
D、植物细胞培养需要在一定的温度、pH等条件下进行，也需要进行无菌操作，D错误。
故选D。
7. 某课外活动小组获得了一株性状优良的结球生菜，并利用植物组织培养技术对其进行快速繁殖。下列有关叙述正确的是（ ）
A. 使用体积分数为95%的酒精对外植体进行消毒
B. 为保持结球生菜优良遗传性状，应选用花粉进行培养
C. 在诱导生根时，培养基中应提高细胞分裂素的比例和用量
D. 经再分化产生的不定芽可经人工薄膜包装制成人工种子
【答案】D
【解析】
【分析】植物组织培养是将离体的植物组织在含有营养物质和植物激素等的培养基中无菌培养，使其形成芽、根，并发育成完整植株的技术。植株组织培养的对象是用于培养的植物器官和组织。培养的目的可以是得到完整植株，也可以是愈伤组织或器官等。去分化阶段不需要光照，而在愈伤组织分化成芽和根的过程中需要光照，植株通过光合作用制造有机物。单倍体育种中利用花药的离体培养，就是利用了组织培养技术。
【详解】A、使用体积分数为70%的酒精对外植体进行消毒，A错误；
B、由于产生花粉过程中发生基因分离，故为保持结球生菜的优良遗传性状，应选用体细胞进行培养，B错误；
C、在诱导生根时，培养基中应提高生长素的比例和用量，C错误；
D、用人工薄膜将胚状体、不定芽等分别包装可制成人工种子，故经再分化产生的不定芽可经人工薄膜包装制成人工种子，D正确。
故选D。
8. 下图为杂交瘤细胞制备示意图。骨髓瘤细胞由于缺乏次黄嘌呤磷酸核糖转移酶（HGPRT），在HAT筛选培养液中不能正常合成DNA，无法生长。下列叙述不正确的是（ ）
A. 可用灭活的仙台病毒诱导细胞融合 B. 两两融合的细胞都能在HAT培养液中生长
C. 杂交瘤细胞需进一步筛选才能用于生产 D. 细胞膜的流动性是细胞融合的基础
【答案】B
【解析】
【分析】（1）动物细胞融合的原理是细胞膜的流动性、细胞的增殖，诱导手段有电激、聚乙二醇、灭活的病毒等，结果产生杂交细胞，主要用于制备单克隆抗体。（2）单克隆抗体制备的原理包括：①免疫理：B淋巴细胞能产生特异性抗体；②细胞融合原理：利用病毒对宿主细胞的穿透性使B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合；③动物细胞培养技术：对杂交瘤细胞进行体内、体外培养。（3）制备单克隆抗体过程中的几种细胞：①免疫B细胞（浆细胞）：能产生单一抗体，但不能无限增殖；②骨髓瘤细胞：能无限增殖，但不能产生抗体；③杂交瘤细胞：既能产生单一抗体，又能在体外培养条件下无限增殖。
【详解】A、诱导动物细胞融合的方法有电激、聚乙二醇、灭活的病毒（如灭活的仙台病毒）等，A正确；
B、两两融合的细胞包括免疫B细胞与免疫B细胞融合的具有同种核的细胞、骨髓瘤细胞与骨髓瘤细胞融合的具有同种核的细胞、免疫B细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交瘤细胞，骨髓瘤细胞虽然能无限增殖，但缺乏次黄嘌呤磷酸核糖转移酶，免疫B细胞虽然有次黄嘌呤磷酸核糖转移酶，但不能无限增殖，所以在HAT筛选培养液中，两两融合的具有同种核的细胞都无法生长，只有杂交瘤细胞才能生长，B错误；
C、因每个免疫B细胞只分泌一种特异性抗体，因此在HAT筛选培养液中筛选出来的众多的杂交瘤细胞所分泌的抗体，不一定都是人类所需要的，还需要进一步把能分泌人类所需要抗体的杂交瘤细胞筛选出来，C正确；
D、动物细胞融合以细胞膜的流动性为基础，D正确。
故选B。
9. 为研究治疗性克隆技术能否用于帕金森病的治疗，科研人员利用帕金森病模型鼠进行如图实验，相关叙述正确的是（ ）
A. 过程①中选择MII期的卵母细胞不利于细胞核全能性恢复
B. 过程②重构胚培养需对细胞进行一次脱分化和两次胰蛋白酶处理
C. 过程③的关键是利用特定条件诱导胚胎干细胞相关基因表达
D. 过程④对受体小鼠需要注射免疫抑制剂来抑制其细胞免疫功能
【答案】C
【解析】
【分析】动物胚胎发育的基本过程为，①在输卵管完成受精；②卵裂期，受精进行有丝分裂，细胞数量不断增加，但胚胎的总体体积并不增加，或略有减小；③桑葚胚，胚胎细胞数目达到32个左右时，胚胎形成致密的细胞团，形似桑葚，每个细胞都是全能细胞；④囊胚，开始出现分化，聚集在胚胎一端个体较大的细胞称为内细胞团，将来发育成胎儿的各种组织，中间的空腔称为囊胚腔；⑤原肠胚，有了三胚层的分化，具有囊胚腔和原肠腔。
【详解】A、卵母细胞中含激发细胞核全能性的物质，过程①（核移植）中选择M II期的卵母细胞有利于细胞核全能性恢复，A错误；
B、过程②重构胚培养经历了卵裂、桑葚胚、囊胚和原肠胚等胚胎发育过程，不需要进行脱分化和胰蛋白酶处理，B错误；
C、过程③是诱导分化过程，其关键是利用特定条件诱导胚胎干细胞相关基因表达，C正确；
D、过程④移植的神经元细胞是取自该小鼠自身细胞诱导分化而来，不会发生免疫排斥反应，故不需要注射免疫抑制剂来抑制其细胞免疫功能，D错误。
故选C。
10. 中国首例设计试管婴儿的父母均为地中海贫血基因的携带者，为了挽救患有重度地中海贫血的姐姐，用他的脐带血帮助姐姐进行造血干细胞移植。下列相关说法正确的是（ ）
A. 该婴儿的获得运用体外受精、早期胚胎培养、胚胎移植和基因工程等技术
B. 移植前需对胚胎进行遗传学诊断
C. 姐姐健康后所生的孩子不含地中海贫血基因
D. 表明我国放开设计试管婴儿技术的研究与应用
【答案】B
【解析】
【分析】1、试管婴儿技术是指通过人工操作使卵子和精子在体外条件下成熟和受精，并通过培养发育为早期胚胎后，再经移植后产生后代的技术。
2、设计试管婴儿技术是通过体外受精获得许多胚胎，然后从中选择符合要求的胚胎，再经移植后产生后代的技术。
【详解】A、设计试管婴儿运用了体外受精、早期胚胎培养、胚胎移植和遗传学诊断等技术，A错误；
B、移植前需对胚胎进行遗传学诊断，从中选择符合要求的胚胎，B正确；
C、姐姐进行造血干细胞移植没有改变其基因，故姐姐健康后所生孩子仍含地中海贫血基因，C错误；
D、设计试管婴儿会带来伦理道德问题，我国未放开设计试管婴儿技术的研究与应用，D错误。
故选B。
11. 科学家将4个关键基因导入已分化的肌肉细胞中并表达，使这个细胞成为多能干细胞（iPS细胞），该实验过程如图所示。下列有关叙述正确的是（ ）
A. 应用该技术可提高器官移植的成功率
B. iPS细胞所带遗传信息与肌肉细胞相同
C. 关键基因表达使细胞功能趋向专门化，降低了细胞的分化程度
D. 图示过程体现了iPS细胞的全能性
【答案】A
【解析】
【分析】分析题图：图示表示将4个关键基因移植入已分化的体细胞中并表达，使这个细胞成为具有类似干细胞的诱导多能干细胞（iPS细胞）。图中①②③表示细胞分化，其实质是基因的选择性表达。用该技术得到的新生器官替换供体病变器官，属于自体移植，不发生免疫排斥反应，这可以大大提高器官移植成功率。
【详解】A、用该技术得到的新生器官替换供体病变器官，属于自体移植，不发生免疫排斥反应，这可以大大提高器官移植成功率，A正确；
B、iPS细胞导入了外源基因，其遗传信息与肌细胞不同，B错误；
C、关键基因表达过程将改变肌肉细胞的细胞质环境，使细胞成为具有类似干细胞的诱导多能干细胞，C错误；
D、过程①②③表示细胞分化，其实质是基因的选择性表达，该过程并没有体现iPS细胞的全能性，D错误。
故选A。
12. 水稻对盐度变化极为敏感，常规水稻在盐、碱环境无法生长，中国水稻研究所等单位的专家通过农杆菌中的质粒将多种耐盐基因导入水稻，获得了一批耐盐转基因植株。有关耐盐转基因水稻培育的分析正确的是（ ）
A. 该转基因水稻与原野生型水稻存在生殖隔离
B. 只要目的基因进入水稻细胞，水稻就会表现出抗盐性状
C. 该基因工程所需的限制性核酸内切酶可能有多种
D. 可通过将水稻种植到有农杆菌的土壤中观察目的基因是否表达
【答案】C
【解析】
【分析】基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
【详解】A、转基因属于基因重组，未产生新物种，该转基因水稻与原野生型水稻不存在生殖隔离，A错误；
B、目的基因进入水稻细胞后，还要检测目的基因是否表达，如果不表达水稻不会表现出抗盐性状，B错误；
C、不同的目的基因可能需要不同的限制酶进行切割，因此该基因工程所需的限制性核酸内切酶可能有多种，C正确；
D、可通过将水稻种植到盐碱地观察水稻是否表现出抗盐性状，D错误。
故选C。
13. 用PCR方法检测转基因植株是否成功导入目的基因时，得到以下电泳图谱。其中1号为DNA 标准样液（ Marker ），10号为蒸馏水，PCR时加入的模板DNA如图所示。据此作出的分析，不合理的是（ ）
A. PCR产物的分子大小在250-500bp之间
B. 3号样品为不含目的基因的载体DNA
C. 9号样品对应植株不是所需的转基因植株
D. 10号确定反应体系等对结果没有干扰
【答案】B
【解析】
【分析】PCR过程中，可以通过设计特定的引物来扩增特定的DNA片段。4～9号是转基因植株，理论上应包含目的基因。9号PCR结果不包含250～500bp片段，所以不是所需转基因植株。
【详解】A、PCR过程中，可以通过设计特定的引物来扩增特定的DNA片段。4～9号是转基因植株，理论上应包含目的基因，结合2号野生型和10号蒸馏水组的结果，推测包含目的基因的片段大小应为250～500bp，A正确；
B、3号PCR结果包含250～500bp片段，应包含目的基因，B错误；
C、9号PCR结果不包含250～500bp片段，所以不是所需转基因植株，C正确；
D、10号放入蒸馏水，可排除反应体系等对结果的干扰，D正确。
故选B。
14. α1-抗胰蛋白酶缺乏症是北美常见的一种单基因遗传病，患者成年后会出现肺气肿及其他疾病，严重者甚至死亡。利用基因工程技术将控制该酶合成的基因导入羊的受精卵，最终培育出能在乳腺细胞表达人α1-抗胰蛋白酶的转基因羊，从而更容易获得这种酶。
下列关于该过程的叙述中错误的是
A. 载体上绿色荧光蛋白基因（GFP)的作用是便于筛选含有目的基因的受体细胞
B. 将目的基因导入羊膀胱细胞中，将会更加容易得到α1-抗胰蛋白酶
C. 培养出的转基因羊的所有细胞中都含有该目的基因，故该羊有性生殖产生的后代也都能产生α1-抗胰蛋白酶
D. 目的基因与载体重组过程需要DNA连接酶的催化作用
【答案】C
【解析】
【详解】A、根据题意，该基因工程中，载体上绿色荧光蛋白基因（GFP）的作用是便于筛选含有目的基因的受体细胞，A正确；
B、将目的基因导入羊膀胱细胞中，可获得膀胱生物反应器，不受羊的性别限制，将会更加容易得到α1抗胰蛋白酶，B正确；
C、培养出的转基因羊的虽然所有细胞中都含有该目的基因，但由于其为杂合子，故该羊有性生殖产生的后代不一定能产生α1抗胰蛋白酶，C错误；
D、目的基因与载体重组过程需要DNA连接酶的催化作用，D正确。
故选C。
15. 某生物中发现一种基因的表达产物是具有较强抗菌性和溶血性的多肽P1，科研人员预期在P1的基础上研发抗菌性强但溶血性弱的蛋白质药物，下一步要做的是（ ）
A. 构建含目的肽DNA片段的表达载体
B. 合成编码多肽P1的DNA片段
C. 设计抗菌性强但溶血性弱的蛋白质结构
D. 利用抗原-抗体杂交的方法对表达产物进行检测
【答案】C
【解析】
【分析】1、蛋白质工程指以蛋白质的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行基因改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需要。2、蛋白质工程的过程：预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有氨基酸序列→找到对应的脱氧核苷酸序列（基因）。
【详解】蛋白质工程的过程：预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有氨基酸序列→找到对应的脱氧核苷酸序列（基因）。因此，预期蛋白质功能的下一步要做的是设计预期的蛋白质结构，即设计抗菌性强但溶血性弱的蛋白质结构。C正确，ABD错误。
故选C。
二、选择题
16. 聚羟基脂肪酸脂（PHA）是由嗜盐细菌合成的一种胞内聚酯，它具有类似于合成塑料的理化特性，且废弃后易被生物降解，可用于制造无污染的“绿色塑料”。科学家从某咸水湖中寻找生产PHA菌种的流程图如下，下列说法不正确的是（ ）
①取湖水→②接种在培养基上→③培养→④挑取单菌落，分别扩大培养→⑤检测菌的数目和PHA的产量→⑥获得目标菌株
A. 步骤②可用稀释涂布平板法接种到含合成塑料的选择培养基上
B. 挑取菌落时，应取多个菌落并分别测定嗜盐细菌的PHA含量
C. ④所用到的培养基应加入琼脂，以便挑取单菌落获得纯化菌株
D. 扩大培养时，接种后需要将培养基放入恒温箱倒置培养，以防杂菌污染
【答案】ACD
【解析】
【分析】筛选分离目的微生物的一般步骤是：样品取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株，筛选分离生产PHA菌种需要用稀释涂布平板法或平板划线法接种分离。
【详解】A、步骤②可用稀释涂布平板法接种到含盐量较高的选择培养基上，A错误；
B、挑取菌落时，应挑取多个菌落并分别测定嗜盐细菌的PHA含量，选取嗜盐含量最高的菌株作为目标菌株，B正确；
C、步骤④是扩大培养，不需要加入琼脂，采用液体培养基，C错误；
D、扩大培养应选用液体培养基，不能倒置，D错误。
故选ACD。
17. 人绒毛膜促性腺激素（HCG）是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，制备抗HCG单克隆抗体可用于早孕的诊断。如图是抗HCG单克隆抗体制备流程示意图，下列有关叙述正确的是（ ）
A. ①过程常用灭活的病毒，不可用聚乙二醇
B. ②过程筛选出的杂交瘤细胞都能产生抗HCG抗体
C. ③过程利用的原理是抗原和抗体的特异性结合
D. ④过程需要添加抗生素等物质，以防止病毒污染
【答案】C
【解析】
【分析】分析题图：给小鼠注射HCG，从小鼠的脾脏中获取B淋巴细胞；①过程将该B淋巴细胞与小鼠的骨髓瘤细胞融合；②过程为杂交瘤细胞的筛选与培养；③过程为专一抗体检验并筛选出能产生抗HCG抗体的杂交瘤细胞；④过程为体外培养。
【详解】A、①过程为诱导动物细胞融合，常用的诱导因素有灭活的病毒、聚乙二醇、电激等，A错误；
B、②过程为用特定的选择性培养基筛选杂交瘤细胞，在筛选出的杂交瘤细胞中，有的能产生抗HCG抗体，有的不能产生抗HCG抗体，B错误；
C、③过程是对筛选出的杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，进而筛选出能产生抗HCG抗体的杂交瘤细胞，此过程利用的原理是抗原和抗体的特异性结合，C正确；
D、④过程是借助动物细胞培养技术，将能产生抗HCG抗体的杂交瘤细胞在体外进行大规模培养，在培养过程中需要添加抗生素等物质，以防止杂菌污染，D错误。
故选C。
18. 若要利用某目的基因（图甲）和P1噬菌体载体（图乙）构建重组DNA（图丙），限制性核酸内切酶的酶切位点分别是BglⅡ（A↓GATCT）、EcoRⅠ（G↓AATTC）和Sau3A Ⅰ（↓GATC）。下列分析正确的是（ ）
A. 用EcoRⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体
B. 用BglⅡ和EcoRⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体
C. 用BglⅡ和Sau3AⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体
D. 用EcoRⅠ和Sau3AⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体
【答案】D
【解析】
【分析】
分析题图：用EcoRⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体，产生相同的黏性末端，用DNA连接酶连接时可能会发生反向连接；用BglⅡ和EcoRⅠ切割目的基因切割目的基因会产生两种DNA片段，一种含有目的基因，一种不含目的基因；用BglⅡ和Sau3AI切割目的基因和P1噬菌体载体，也能产生相同的黏性末端，可能会发生反向连接；只有用EcoRⅠ和Sau3AⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体，产生不同的黏性末端，防止发生方向连接，这样目的基因插入运载体后，RNA聚合酶的移动方向肯定与图丙相同。
【详解】A、用EcoRⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体，产生相同的黏性末端，用DNA连接酶连接时可能会发生反向连接，A错误；
B.用BglⅡ和EcoRⅠ切割目的基因切割目的基因会产生两种DNA片段，一种含有目的基因，一种不含目的基因，且有目的基因的片段与运载体结合时容易发生反向连接，B错误；
C、用BglⅡ和Sau3AⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体，也能产生相同的黏性末端，可能会发生反向连接，C错误；
D、只有用EcoRⅠ和Sau3AⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体，产生不同的黏性末端，防止发生反向连接，这样目的基因插入运载体后，RNA聚合酶的移动方向肯定与图丙相同，D正确。
故选D。
19. 利用基因工程技术生产羧酸酯酶（CarE）制剂的流程如图所示，下列叙述错误的是（ ）
A. 过程①需使用DNA聚合酶
B. 过程②需使用解旋酶和PCR获取目的基因
C. 过程③使用的受体细胞可用Ca2+处理制备
D. 过程④可利用PCR技术鉴定目的基因是否已导入受体细胞
【答案】AB
【解析】
【分析】题图分析：图中过程①表示利用mRNA通过反转录法合成相应的cDNA；过程②表示利用PCR技术对目的基因进行扩增；过程③表示将目的基因导入受体细胞；过程④表示通过筛选获得工程菌。
【详解】A、过程①表示利用mRNA通过逆转录合成目的基因，逆转录过程中需要逆转录酶的催化，A错误；
B、过程②表示利用PCR技术对目的基因进行扩增，该过程中不需要利用解旋酶，解旋是通过高温实现的，B错误；
C、过程③由于受体细胞是大肠杆菌，可用Ca2+处理法，利用的Ca2+溶液处理大肠杆菌，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，然后再将重组的基因表达载体导入其中，C正确；
D、过程④可利用通过PCR等技术扩增后，再用DNA分子杂交技术鉴定目的基因是否已导入受体细胞，D正确。
故选AB。
20. 世界首例免疫艾滋病的基因编辑婴儿用到了能够精确定位并修饰基因的基因编辑技术，即基因编辑时用约为头发二十分之一细的针把Cas9蛋白和特定的RNA引导序列注入受精卵中，对CCR5基因进行修改，预期婴儿出生后能天然抵抗人类免疫缺陷病毒，关于该技术的安全性问题，下列说法正确的是（ ）
A. 基因编辑时，引导序列可能发生变异，导致剪切错误，造成不可预知的后果
B. 经过基因编辑的个体，有可能影响基因选择性表达，而导致其他疾病的产生
C. 将基因编辑技术应用于治疗性克隆，符合人类伦理道德
D. 只要加强监管、完善法律法规、完善技术手段，不需担心基因编辑技术的安全性
【答案】ABC
【解析】
【分析】基因编辑技术是指通过核酸酶对靶基因进行定点改造，实现特定DNA的定点敲除、敲入以及突变等，最终下调或上调基因的表达，以使细胞获得新表型的一种新型技术。
【详解】A、基因编辑时的引导序列是RNA，RNA的碱基序列改变可能导致识别错误，导致剪切错误，造成不可预知的后果，A正确；
B、基因编辑后，基因的序列发生改变，基因的表达具有选择性，可以相互影响，基因选择性表达受干扰后，容易导致某些疾病的产生，B正确；
C、依据我国法律，生殖性克隆不符合人类伦理道德，治疗性克隆符合人类伦理道德，C正确；
D、加强监管、完善法律法规、完善技术手段，但基因编辑技术仍存在一定的安全性，所以要理性看待，D错误。
故选ABC。
三、非选择题
21. 太源井晒醋是自贡市的名优土特产品，该产品面市已有150多年的历史。中草药制曲和天然发酵是太源井晒醋与其他食醋的区别。下表表示太源井晒醋不同陈酿方法下的一些理化指标。据表回答下列问题：
项目
自然陈酿
恒温陈酿
总酸（以乙酸计），（g/100mL）≥
6. 50
4. 20
可溶性无盐固形物，（g/100mL）≥
20. 00
5. 00
不挥发酸（以乳酸计），（g/100mL）≥
3. 50
2. 00
还原糖（以葡萄糖计），（g/100mL）≥
3. 00
2. 00
（1）醋的制作需要以_________作为菌种，请写出一个表示制醋原理的反应式__________________。
（2）传统酿醋工艺中，主要是依靠自然界中的菌种，其生产性能不稳定且出醋率低，因而要对菌种进行纯化培养。纯化菌种可用_________法或稀释涂布平板法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。接种前需随机选取若干灭菌后的空白平板先行培养一段时间，其目的是_________。
（3）恒温陈酿时，需将温度控制在_________范围内；由表中数据可知_________法可提高晒醋质量。
【答案】（1） ①. 醋酸菌 ②.
（2） ①. 平板划线 ②. 检测培养基平板是否已彻底灭菌
（3） ①. 30~35°C ②. 自然陈酿
【解析】
【分析】参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。果醋制作的原理：当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的葡萄糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。
【小问1详解】
醋的制作要以醋酸菌为菌种；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸，相关的反应式可表示为：C2H5OH +O2CH3COOH +H2O+能量。
【小问2详解】
微生物纯化的方法是平板划线法和稀释涂布平板法；接种前需随机选取若干灭菌后的空白平板先行培养一段时间，其目的是检测培养基平板是否已彻底灭菌：若培养基灭菌不彻底，则空白平板也会有菌落出现。
【小问3详解】
果醋发酵的适宜温度是30~35°C；据图可知，与恒温陈酿相比，自然陈酿的总酸量、可溶性无盐固形物等含量均相对较高，故自然陈酿法可提高晒醋质量。
22. 产脂肪酶酵母可用于含油废水处理。为筛选产脂肪酶酵母菌株，科研人员开展了相关研究。请回答下列问题：
（1）常规微生物实验中，下列物品及其灭菌方法
编号
①
②
③
④
物品
培养基
接种环
培养皿
涂布器
灭菌方法
高压蒸汽
火焰灼烧
干热
臭氧
正确的是_________（填编号）
（2）称取1. 0g某土壤样品，转入99mL无菌水中，制备成菌悬液，经梯度稀释后，获得细胞密度不同的菌悬液。分别取0. 1ml菌悬液涂布在固体培养基上，其中10倍稀释的菌悬液培养后平均长出了46个酵母菌落，则该样本中每克土壤约含酵母菌_________个。
（3）为了进一步提高酵母菌产酶能力，对分离所得的菌株，采用射线辐照进行诱变育种。将辐照处理后的酵母菌涂布在以_________为唯一碳源的固体培养基上，培养一段时间后，按照菌落直径大小进行初筛，选择直径_________的菌落，纯化后获得A、B两突变菌株。
（4）在处理含油废水的同时，可获得单细胞蛋白，实现污染物资源化。为评价A、B两菌株的相关性能，进行了培养研究，结果如图。据图分析，应选择菌株_________进行后续相关研究，理由是_________.
【答案】（1）①②③ （2）（或460000）
（3） ① 脂肪 ②. 较大
（4） ①. B ②. 该菌株增殖速度快，单细胞蛋白产量高；降解脂肪能力强，净化效果好
【解析】
【分析】1、灭菌指用强烈的物理或化学方法杀灭所有微生物，包括致病的和非致病的，以及细菌的芽孢．常用灭菌方法：灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌法。高压蒸汽灭菌适用于对一般培养基和玻璃器皿的灭菌，干热灭菌适用于空玻璃器皿的灭菌，微生物接种时的金属接种工具和试管口可以用灼烧灭菌。
2、稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释程度的菌液分别涂布到固体培养基的表面，使其均匀分布于平板中的培养基内，经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。
【小问1详解】
培养基一般进行高压蒸汽灭菌，接种环可用火焰灼烧灭菌，培养皿一般通过干热灭菌，涂布器应该用酒精引燃灭菌；故①②③正确。
【小问2详解】
稀释涂布平板法是将样品进行一系列梯度稀释后，获得细胞密度不同的菌悬液，然后涂布到平板上。根据题意，1.0g土壤样品转入99mL无菌水中，制备成菌悬液，稀释了100倍，经系列梯度稀释后，分别取0.1mL菌悬液涂布在固体培养基上，其中10倍稀释的菌悬液培养后长出了46个酵母菌落，则总的稀释倍数为1000倍，故每克土壤中含酵母菌数为46÷0.1×1000=4.6×105个。
【小问3详解】
根据题意，欲提高酵母菌产酶能力，可对分离得到的产脂肪酶酵母菌菌株进行射线辐射，该育种方式为诱变育种。为了能筛选出符合要求的产脂肪酶酵母菌突变株，可配制以脂肪为唯一碳源的培养基，将辐射处理的酵母菌涂布在该固体培养基上，形成单菌落；产脂肪酶能力越强的酵母菌，分解利用脂肪的能力越强，菌落生长越好，一段时间后，按照菌落直径大小进行初筛，选取直径较大的菌落即可。
【小问4详解】
据题图分析可知，相同时间内，菌株B的细胞密度高于菌株A，而菌株B的脂肪剩余量低于菌株A的脂肪剩余量，故进行相关研究可选择菌株B，原因是菌株B增殖速度快，单细胞蛋白的产量也高，同时降解脂肪的能力强，净化效果更好。
23. 应用植物组织培养技术，不仅可实现种苗的快速繁殖、培育无病毒植株，也可加快作物及苗木育种。下面是培育柑橘耐盐植株的实验流程：
回答下列问题
（1）愈伤组织是由离体的茎段经_________过程形成的，愈伤组织经过_________过程形成耐盐植株。在植物组织培养的培养基中除无机营养成分、有机营养成分、琼脂外，还需要添加_________。
（2）对愈伤组织进行了两次处理，处理2中添加的物质X为_________，处理1中γ射线照射的目的是_________，用γ射线不直接处理茎段而是处理愈伤组织，原因是__________________。
（3）植物组织培养技术也被广泛应用于其他作物的育种中。在培育白菜一甘蓝、三倍体无子西瓜、农杆菌转化法获得抗虫棉中，必须用到植物组织培养技术的是__________________。
【答案】（1） ①. 脱分化 ②. 再分化 ③. 植物激素
（2） ①. 氯化钠 ②. 诱导基因突变 ③. 愈伤组织细胞处于不断分裂状态，易受到培养条件和外界压力的影响而产生突变
（3）培育白菜一甘蓝、农杆菌转化法获得抗虫棉
【解析】
【分析】植物组织培养就是在无菌和人工控制的条件下，将离体的植物器官、组织、细胞，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。植物组织培养包括脱分化和再分化两个重要的步骤，这两个步骤都需要植物激素诱导，主要的激素是生长素和细胞分裂素。该激素是植物细胞工程的基础，该技术可以应用微型繁殖、脱毒苗的制备等过程。
【小问1详解】
愈伤组织是离体的茎段脱分化形成的，每个细胞都脱离了原来的分化状态，都具有全能性，愈伤组织经过再分化过程才能形成植株，在植物组织培养过程中，除了加入营养之外，还要加入植物激素，因为植物激素在脱分化和再分化过程中起重要作用。
【小问2详解】
第2次处理是抗盐接种实验，即在培养基中加入氯化钠，适应一定浓度盐的愈伤组织才可以生长，不适应的愈伤组织死亡。γ射线照射的目的是诱导基因突变，使愈伤组织发生突变。因为愈伤组织细胞处于不断地分裂状态，很容易受到培养条件和外界压力的影响而产生突变，因此γ射线不直接处理茎段而是处理愈伤组织，这样可提高突变率。
【小问3详解】
白菜—甘蓝形成的过程中，先要形成杂种细胞，再由杂种细胞形成杂种植株，所以会用到植物组织培养技术；
三倍体无子西瓜的培养过程是：利用秋水仙素处理二倍体西瓜的幼苗，使之变成四倍体植株，再用二倍体西瓜给四倍体西瓜授粉，结出三倍体的种子，第二年将此三倍体的西瓜种子种下去，授以二倍体的花粉，结出三倍体的无子西瓜，整个过程中没有用到植物组织培养技术；
农杆菌转化法获得抗虫棉中，将目的基因导入植物细胞，再通过植物组织培养技术形成植株。
24. 科研人员把猪卵母细胞进行人为的孤雌激活处理，使其发育成胚胎，将胚胎移植到代孕母猪体内，获得世界上第一批成活的孤雌生殖克隆猪。这种克隆猪不同于核移植获得的克隆猪，现将两种技术进行比较.
（1）图中过程①②③④是获得孤雌生殖克隆猪的技术流程，那么获得核移植克隆猪的技术流程是_________（填序号）.
（2）早期胚胎移植时，必须移植到同种且_________的其他雌性动物子宫中，才可能获得成功，要想获得基因型完全相同的胚胎，可采用_________技术。
（3）体细胞核移植技术中也会用到卵母细胞，需要选择_________期的卵母细胞，并用微型吸管吸出_________.
（4）可以从两种不同的克隆猪中提取mRNA进行研究，通过_________方法得到多种cDNA，并通过_________技术扩增产物.
【答案】（1）⑤⑥③④
（2） ①. 生理状态相同 ②. 胚胎分割
（3） ①. MII ②. 细胞核和第一极体
（4） ①. 反转录 ②. PCR
【解析】
【分析】分析题图：图示为体细胞克隆猪的培育流程。其中①表示孤雌激活处理，②表示早期胚胎发育过程，③表示胚胎移植技术，④表示妊娠形成克隆猪，⑤表示核移植过程，⑥表示早期胚胎培养过程。
【小问1详解】
据图可知，①表示孤雌激活处理，②表示早期胚胎发育过程，③表示胚胎移植技术，④表示妊娠形成克隆猪，⑤表示核移植过程，⑥表示早期胚胎培养过程，①②③④过程是获得孤雌生殖克隆猪的技术流程，而⑤⑥③④是获得核移植克隆猪的技术流程。
【小问2详解】
胚胎移植的生理基础之一是动物发情排卵后，同种动物的供、受体生殖器官的生理变化是相同的（受体能为供体胚胎提供相同的生理环境，这是胚胎移植成功的关键），所以早期胚胎移植时，必需移植到同种、生理状态相同的其他雌性动物子宫中，才可能移植成功。受精卵有丝分裂产生的细胞遗传物质相同，利用胚胎分割技术可以获得两个基因型完全相同。
【小问3详解】
因为卵(母)细胞大，容易操作，卵(母)细胞质多，营养丰富，含有促使细胞全能性表达的物质，因此体细胞核移植时，需要选择去核的减数第二次分裂的卵母细胞作为受体细胞，通过显微操作去除卵母细胞中的核，由于减数第二次分裂中期卵母细胞核的位置靠近第一极体，用微型吸管可一并吸出细胞核和第一极体。
【小问4详解】
以mRNA为模板合成cDNA的过程称为反转录，获得DNA后，还可通过PCR技术体外扩增。
25. 中国T2DM（胰岛β细胞功能衰退型糖尿病）的发病率由1979年的1. 00%上升到2019年的4. 37%，补充胰岛素是控制和缓解病情的重要途径。胰岛素（由α、β两条多肽链组成）的生产由提取动物胰岛素发展到了利用基因工程生产重组人胰岛素。
（1）构建完成的表达载体除了目的基因、标记基因以外，还必须有_________等调控组件。
（2）利用大肠杆菌生产重组人胰岛素时，构建表达载体的目的基因应从_________文库中获取，重组大肠杆菌合成的人胰岛素原没有活性，需用_________酶将其加工成含α、β两条多肽链的胰岛素。
（3）利用奶牛设计乳腺生物反应器生产人胰岛素，为使人胰岛素基因在奶牛乳腺中特异表达，构建表达载体时应将目的基因与_________的启动子等调控组件重组在一起，并选用_________为受体细胞.
（4）重组人胰岛素分子容易发生聚合而影响作用效果，可将胰岛素分子的氨基酸序列及结构进行局部调整，形成胰岛素类似物加以避免。请根据上述设想，补充完善其基本研发流程：预期蛋白质功能→设计预期蛋白质的空间结构→推测氨基酸序列→__________________→构建表达载体，转基因获得胰岛素类似物.
【答案】（1）启动子、终止子、复制原点
（2） ①. cDNA ②. 蛋白
（3） ①. 奶牛乳腺蛋白基因 ②. 受精卵
（4）找到相对应的脱氧核苷酸序列（基因）
【解析】
【分析】分析题图：外源DNA分子中含有限制酶SmaⅠ、PstⅠ、AluⅠ的识别序列和切割位点，质粒中含有限制酶SmaⅠ、PstⅠ、AluⅠ、HindⅢ的识别序列和切割位点。
【小问1详解】
一个基因表达载体的构成，除了需要表达的基因以外，还需要启动子、终止子、复制原点和标记基因等，标记基因一般使用某种抗生素的抗性基因以便后期的筛选，因此，基因表达载体的结构组成：启动子、目的基因、终止子、标记基因及复制原点。
【小问2详解】
将真核基因导入原核生物时，一般从cDNA文库中获取目的基因；重组大肠杆菌合成的人胰岛素原没有活性，胰岛素原的化学本质为蛋白质，需用蛋白酶将其加工成含α、β两条多肽链的胰岛素。
【小问3详解】
利用奶牛设计乳腺生物反应器生产人胰岛素，为使人胰岛素基因在奶牛乳腺中特异表达，构建表达载体时应将目的基因与奶牛乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，并选用受精卵为受体细胞。
【小问4详解】
重组人胰岛素分子容易聚合而影响作用效果，可将胰岛素分子的氨基酸序列及结构进行局部调整形成胰岛素类似物加以避免，这需要采用蛋白质工程技术，因此基本研发流程为：预期蛋白质功能→设计预期蛋白质的空间结构→推测氨基酸序列→推测氨基酸序列→找到相对应脱氧核苷酸序列（改造基因）→构建表达载体，转基因获得胰岛素类似物。
26. 四尾栅藻生长周期短、适应性强，是一种高潜力生物柴油新型原料，但油脂产量低。研究人员从含油量高的紫苏中提取DGATl（催化油脂合成的关键酶）基因，并成功导入四尾栅藻细胞内，获得转基因的产油四尾栅藻。其制备流程如图，图中Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，LacZ基因可使细菌分解培养基中的物质X-gal，进而使菌落呈现蓝色，无该基因或该基因被破坏，菌落呈白色。回答下列问题：
（1）从高表达的紫苏组织细胞中提取总的RNA，经_________获得cDNA，用于PCR扩增，PCR扩增DGATl基因时，使反应体系中的模板cDNA解旋为单链的条件是__________________。
（2）在DNA延伸的过程中，使用Taq DNA聚合酶而不使用大肠杆菌DNA聚合酶的主要原因是_____。
（3）构建的pMD19-DGATl导入经CaCl2溶液处理的感受态大肠杆菌细胞中，并通过稀释涂布平板法接种到含_________的培养基中培养。一段时间后，挑选_________色的菌落以提取质粒pMD19-DGATl。
（4）用限制酶BamH I和Xba I切割pMD19-DGATl和pBI121，将其连接成重组表达载体pBI121-DGATl， 并将其导入四尾栅藻细胞中。与单酶切相比，双酶切的优点是________。
【答案】（1） ①. 逆转录 ②. 加热至90°C
（2）Taq DNA聚合酶热稳定性高而大肠杆菌DNA聚合酶在高温下失活
（3） ①. X-gal和氨苄青霉素 ②. 白
（4）使DGATl基因能定向插入表达载体，避免载体自身环化
【解析】
【分析】图中获得转基因的产油四尾栅藻过程为：首先提取紫苏细胞的总RNA经逆转录得到的cDNA，再获得DGAT1基因，再将DGAT1基因与克隆质粒pMD19结合，形成重组质粒，然后将其导入到经CaCl2处理后的处于感受态的大肠杆菌细胞，并接种到添加氨苄青霉素和X-gal的培养基培养、筛选。
【小问1详解】
cDNA是逆转录获得的， 在逆转录酶作用下，以mRNA为模板按照碱基互补配对原则合成cDNA。PCR技术中，采用90-95°C高温使双链DNA解螺旋为单链。
【小问2详解】
酶大多都是蛋白质，都需要适宜的温度发挥催化作用，普通的大肠杆菌的DNA聚合酶的最适合温度基本不会超过40度，但是在PCR反应中，加热的温度会高达90度，此时的普通DNA聚合酶会变性失活，无法使用，而Taq 酶是耐热的DNA聚合酶，可以使用。
【小问3详解】
构建的pMD19-DGATI导入到经CaC12溶液处理的感受态大肠杆菌细胞中，基因中含有LacZ基因的大肠杆菌可以利用培养物质中的X-gal来使菌落呈现蓝色，通过稀释涂布平板法将大肠杆菌细胞接种到含氨苄青霉素和X-gal的培养基中培养，LacZ基因成功表达目的基因的菌落呈现蓝色，成功导入基因的大肠杆菌菌落呈现白色，故一段时间后，挑选白色的菌落以提取质粒PMD19-DGATI。
【小问4详解】
单酶切切割后的运载体两端的黏性末端相同，可能会导致目的基因和运载体自身环化和反向连接，采用双切酶切割后的运载体黏性末端不同，故可以控制外源基因插入方向，避免载体自身环化，提高重组效率。
2022-2023学年第二学期期中考试
高二生物试题
一、选择题
1. 格瓦斯是一种盛行于俄罗斯等国家含低度酒精的饮料，其传统做法是以俄式大面包为基质，由酵母菌和乳酸菌发酵而成。相关叙述正确的是（ ）
A. 酵母菌和乳酸菌都具有成形的细胞核 B. 发酵时两种菌都产生酒精和CO2
C. 发酵时要保证温度适宜并保持密闭 D. 发酵时两种菌为互利共生的关系
【答案】C
【解析】
【分析】1.酵母菌的新陈代谢类型为异养兼性厌氧型，在利用酵母菌发酵时最好是先通入足够的无菌空气在有氧环境下一段时间使其繁殖，再隔绝氧气进行发酵；酒精发酵的最佳温度是在18℃～25℃，pH最好是弱酸性。
2.乳酸菌的代谢类型是异养厌氧型，在无氧条件下乳酸菌能够将蔬菜中的葡萄糖氧化为乳酸。
【详解】A、酵母菌具有成形的细胞核，而乳酸菌为原核生物，没有成形的细胞核，A错误；
B、发酵时酵母菌产生酒精和CO2，而乳酸菌发酵过程产生的是乳酸，B错误；
C、发酵时过程需要无氧环境，故要保证温度适宜并保持密闭，C正确；
D、发酵过程中，由于营养物质的消耗，加剧了乳酸菌和酵母菌的竞争，D错误。
故选C。
【点睛】
2. 红酸汤是苗族人民的传统食品，它颜色鲜红、气味清香、味道酸爽。以番茄和辣椒为原料的红酸汤制作流程如下。下列相关叙述中正确的是（ ）
A. 红酸汤制作过程中用到的微生物主要是醋酸菌
B. 装坛时加入成品红酸汤是为了增加发酵菌种的数量
C. 装坛时不装满的原因是为了促进微生物繁殖
D. 红酸汤的制作中发酵时间越长，口味越纯正
【答案】B
【解析】
【分析】红酸汤制作需要用到乳酸菌，乳酸菌是一种厌氧菌，在无氧的条件下，乳酸菌发酵产生乳酸，使得菜品有一股特别的风味提升菜品的口感。
【详解】A、红酸汤制作过程中用到的微生物主要是乳酸菌，A错误；
B、装坛时加入成品红酸汤是为了增加发酵菌种的数量，B正确；
C、装坛时坛口留有一点空间而不装满的目的是防止番茄发酵后液体膨胀外溢，C错误；
D、如果发酵时间过长，会影响口感，D错误。
故选B。
3. “筛选”是分离和培养生物新类型常用的手段，下列有关技术中不能筛选成功的是（ ）
A. 在牛肉膏蛋白胨培养基中，筛选大肠杆菌
B. 在以尿素为唯一氮源的固体培养基中，筛选能够分解尿素的微生物
C. 用纤维素为唯一碳源的培养基，筛选能分解纤维素的微生物
D. 在培养基中加入不同浓度的氯化钠，筛选抗盐突变体植物
【答案】A
【解析】
【分析】本题是选择培养基的选择作用，根据选项涉及的培养基进行分析，对选项做出判断。
【详解】A、在牛肉膏蛋白胨培养基中，几乎所有细菌都能生长，不能筛选大肠杆菌，A错误；
B、在以尿素为唯一氮源的固体培养基中，只有能分解尿素的微生物才能生长，不能分解尿素的微生物因缺乏氮源不能生长，能够筛选分解尿素的微生物，B正确；
C、用纤维素为唯一碳源的培养基，只有能分解纤维素的微生物才能生长，不能分解纤维素的微生物因缺乏碳源不能生长，能筛选分解纤维素的微生物，C正确；
D、在培养基中加入不同浓度的氯化钠，能够筛选出抗盐突变体植物，D正确。
故选A。
【点睛】本题的知识点是尿素固体培养基、纤维素为唯一碳源的培养基、加入氯化钠的高盐培养基的选择作用，主要考查 学生对选择培养基的理解与运用。
4. 我国《生活饮用水卫生标准》中关于生活饮用水的细菌标准的具体规定如下：细菌总数1mL水中不超过100个，大肠杆菌数1mL水中不超过3个。为了检验某城市自来水是否达标，某生物兴趣小组进行了相关的实验。下列有关叙述错误的是（ ）
A. 实验过程中应用到涂布器、移液管等操作工具
B. 取样水龙头应用火焰灼烧，打开水龙头一段时间后再取样
C. 检验自来水中大肠杆菌数是否达标，可用稀释涂布平板法来分离并计数
D. 若空白对照组上有6个菌落，则在实验组数据基础上减去6，以获得最准确数据
【答案】D
【解析】
【分析】间接计数法（活菌计数法）：
①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
②操作：a、设置重复组，增强实验的说服力与准确性；b、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。
③计算公式：每克样品中的菌株数=（c÷V）×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。
【详解】A、实验过程中应用到涂布器、移液管等操作工具，A正确；
B、为避免杂菌污染，取样水龙头应用火焰灼烧，打开水龙头一段时间后再取样，是为了防止温度过高杀死目的菌；B正确；
C、稀释涂布平板法可以用于活菌计数，故检验自来水中大肠杆菌数是否达标，可用稀释涂布平板法来分离并计数，C正确；
D、若空白对照组上有6个菌落，则说明该实验失败，实验数据不能采用，D错误。
故选D。
【点睛】
5. 下列关于发酵工程的说法中，不正确的是（ ）
A. 在菌种选育过程中，可以利用人工诱变、自然界中筛选和基因工程等手段
B. 青霉素是抗生素，所以在青霉素生产过程中不需要严格灭菌
C. 在谷氨酸发酵过程中，pH呈酸性时产生谷氨酰胺和N-乙酰谷氨酰胺
D. 发酵工程的产品可以采用过滤、沉淀等方法将菌体分离和干燥
【答案】B
【解析】
【分析】发酵工程是指利用微生物的特定功能，通过现代工程技术，规模化生产对人类有用的产品，主要包括微生物的代谢物、酶及菌体本身。发酵工程一般包括菌种的选育，扩大培养，培养基的配置、火菌，接种，发酵、产品的分离、提纯等方面。发酵过程一般来说都是在常温常压下进行，条件温和、反应安全，原料简单、污染小，反应专一性强，因而可以得到较为专一的产物。
【详解】A、在菌种选育过程中，性状优良的菌种可以利用人工诱变（引起基因突变）、自然界中筛选和基因工程等手段生产，A正确；
B、虽然青霉素是抗生素，可以杀死部分细菌，但不能杀死所有细菌，有些细菌能分泌分解青霉素的酶，故在青霉素生产过程中仍然需要严格灭菌，B错误；
C、谷氨酸棒状杆菌属于好氧型细菌，发酵过程中应进行通气和搅拌，以提高培养液中的溶氧量。当pH呈酸性时，谷氨酸棒状杆菌就会生成乙酰谷氨酰胺；当溶氧不足时，生成的代谢产物就会是乳酸或琥珀酸，C正确；
D、若发酵工程的产品是微生物细胞本身，可在发酵结束后采用过滤、沉淀等方法将菌体分离和干燥，若产品是代谢物，可以根据产物的性质采取蒸馏、萃取、离子交换等方法提取、分离和纯化产品，D正确。
故选B。
6. 植物细胞培养是在植物组织培养技术的基础上发展起来的，下列有关植物细胞培养的叙述，不正确的是（ ）
A. 植物细胞培养技术的目的是为了获得大量有生理活性的次生代谢物
B. 植物细胞培养技术快速、高效，几乎不受季节、天气等的限制
C. 利用生物反应器悬浮培养人参细胞，提取人参皂苷，用于生产保健药品和美容护肤用品
D. 植物细胞培养需要在一定的温度、pH等条件下进行，但不需要进行无菌操作
【答案】D
【解析】
【分析】1、植物组织培养就是在无菌和人工控制的条件下，将离体的植物器官、组织、细胞，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。
2、植物组织培养技术的应用：植物繁殖的新途径（微型繁殖、作物脱毒、人工种子）、作物新品种的培育（单倍体育种、突变体的利用）、细胞产物的工厂化生产。
【详解】A、植物细胞培养技术的目的是为了获得大量有生理活性的次级代谢产物，通过植物细胞培养获得的级代谢产物生物碱、维生素、色素、抗生素以及抗肿瘤药物不下50多个大类，A正确；
B、植物细胞培养技术的条件可以认为控制，具有快速、高效、不受季节、外部环境等条件的限制的特点，B正确；
C、人参是一种名贵中药材，其有效成分主要是人参皂苷，利用生物反应器悬浮培养人参细胞，提取人参皂甙，用于生产保健药品和美容护肤用品，C正确；
D、植物细胞培养需要在一定的温度、pH等条件下进行，也需要进行无菌操作，D错误。
故选D。
7. 某课外活动小组获得了一株性状优良的结球生菜，并利用植物组织培养技术对其进行快速繁殖。下列有关叙述正确的是（ ）
A. 使用体积分数为95%的酒精对外植体进行消毒
B. 为保持结球生菜优良遗传性状，应选用花粉进行培养
C. 在诱导生根时，培养基中应提高细胞分裂素的比例和用量
D. 经再分化产生的不定芽可经人工薄膜包装制成人工种子
【答案】D
【解析】
【分析】植物组织培养是将离体的植物组织在含有营养物质和植物激素等的培养基中无菌培养，使其形成芽、根，并发育成完整植株的技术。植株组织培养的对象是用于培养的植物器官和组织。培养的目的可以是得到完整植株，也可以是愈伤组织或器官等。去分化阶段不需要光照，而在愈伤组织分化成芽和根的过程中需要光照，植株通过光合作用制造有机物。单倍体育种中利用花药的离体培养，就是利用了组织培养技术。
【详解】A、使用体积分数为70%的酒精对外植体进行消毒，A错误；
B、由于产生花粉过程中发生基因分离，故为保持结球生菜的优良遗传性状，应选用体细胞进行培养，B错误；
C、在诱导生根时，培养基中应提高生长素的比例和用量，C错误；
D、用人工薄膜将胚状体、不定芽等分别包装可制成人工种子，故经再分化产生的不定芽可经人工薄膜包装制成人工种子，D正确。
故选D。
8. 下图为杂交瘤细胞制备示意图。骨髓瘤细胞由于缺乏次黄嘌呤磷酸核糖转移酶（HGPRT），在HAT筛选培养液中不能正常合成DNA，无法生长。下列叙述不正确的是（ ）
A. 可用灭活的仙台病毒诱导细胞融合 B. 两两融合的细胞都能在HAT培养液中生长
C. 杂交瘤细胞需进一步筛选才能用于生产 D. 细胞膜的流动性是细胞融合的基础
【答案】B
【解析】
【分析】（1）动物细胞融合的原理是细胞膜的流动性、细胞的增殖，诱导手段有电激、聚乙二醇、灭活的病毒等，结果产生杂交细胞，主要用于制备单克隆抗体。（2）单克隆抗体制备的原理包括：①免疫理：B淋巴细胞能产生特异性抗体；②细胞融合原理：利用病毒对宿主细胞的穿透性使B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合；③动物细胞培养技术：对杂交瘤细胞进行体内、体外培养。（3）制备单克隆抗体过程中的几种细胞：①免疫B细胞（浆细胞）：能产生单一抗体，但不能无限增殖；②骨髓瘤细胞：能无限增殖，但不能产生抗体；③杂交瘤细胞：既能产生单一抗体，又能在体外培养条件下无限增殖。
【详解】A、诱导动物细胞融合的方法有电激、聚乙二醇、灭活的病毒（如灭活的仙台病毒）等，A正确；
B、两两融合的细胞包括免疫B细胞与免疫B细胞融合的具有同种核的细胞、骨髓瘤细胞与骨髓瘤细胞融合的具有同种核的细胞、免疫B细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交瘤细胞，骨髓瘤细胞虽然能无限增殖，但缺乏次黄嘌呤磷酸核糖转移酶，免疫B细胞虽然有次黄嘌呤磷酸核糖转移酶，但不能无限增殖，所以在HAT筛选培养液中，两两融合的具有同种核的细胞都无法生长，只有杂交瘤细胞才能生长，B错误；
C、因每个免疫B细胞只分泌一种特异性抗体，因此在HAT筛选培养液中筛选出来的众多的杂交瘤细胞所分泌的抗体，不一定都是人类所需要的，还需要进一步把能分泌人类所需要抗体的杂交瘤细胞筛选出来，C正确；
D、动物细胞融合以细胞膜的流动性为基础，D正确。
故选B。
9. 为研究治疗性克隆技术能否用于帕金森病的治疗，科研人员利用帕金森病模型鼠进行如图实验，相关叙述正确的是（ ）
A. 过程①中选择MII期的卵母细胞不利于细胞核全能性恢复
B. 过程②重构胚培养需对细胞进行一次脱分化和两次胰蛋白酶处理
C. 过程③的关键是利用特定条件诱导胚胎干细胞相关基因表达
D. 过程④对受体小鼠需要注射免疫抑制剂来抑制其细胞免疫功能
【答案】C
【解析】
【分析】动物胚胎发育的基本过程为，①在输卵管完成受精；②卵裂期，受精进行有丝分裂，细胞数量不断增加，但胚胎的总体体积并不增加，或略有减小；③桑葚胚，胚胎细胞数目达到32个左右时，胚胎形成致密的细胞团，形似桑葚，每个细胞都是全能细胞；④囊胚，开始出现分化，聚集在胚胎一端个体较大的细胞称为内细胞团，将来发育成胎儿的各种组织，中间的空腔称为囊胚腔；⑤原肠胚，有了三胚层的分化，具有囊胚腔和原肠腔。
【详解】A、卵母细胞中含激发细胞核全能性的物质，过程①（核移植）中选择M II期的卵母细胞有利于细胞核全能性恢复，A错误；
B、过程②重构胚培养经历了卵裂、桑葚胚、囊胚和原肠胚等胚胎发育过程，不需要进行脱分化和胰蛋白酶处理，B错误；
C、过程③是诱导分化过程，其关键是利用特定条件诱导胚胎干细胞相关基因表达，C正确；
D、过程④移植的神经元细胞是取自该小鼠自身细胞诱导分化而来，不会发生免疫排斥反应，故不需要注射免疫抑制剂来抑制其细胞免疫功能，D错误。
故选C。
10. 中国首例设计试管婴儿的父母均为地中海贫血基因的携带者，为了挽救患有重度地中海贫血的姐姐，用他的脐带血帮助姐姐进行造血干细胞移植。下列相关说法正确的是（ ）
A. 该婴儿的获得运用体外受精、早期胚胎培养、胚胎移植和基因工程等技术
B. 移植前需对胚胎进行遗传学诊断
C. 姐姐健康后所生的孩子不含地中海贫血基因
D. 表明我国放开设计试管婴儿技术的研究与应用
【答案】B
【解析】
【分析】1、试管婴儿技术是指通过人工操作使卵子和精子在体外条件下成熟和受精，并通过培养发育为早期胚胎后，再经移植后产生后代的技术。
2、设计试管婴儿技术是通过体外受精获得许多胚胎，然后从中选择符合要求的胚胎，再经移植后产生后代的技术。
【详解】A、设计试管婴儿运用了体外受精、早期胚胎培养、胚胎移植和遗传学诊断等技术，A错误；
B、移植前需对胚胎进行遗传学诊断，从中选择符合要求的胚胎，B正确；
C、姐姐进行造血干细胞移植没有改变其基因，故姐姐健康后所生孩子仍含地中海贫血基因，C错误；
D、设计试管婴儿会带来伦理道德问题，我国未放开设计试管婴儿技术的研究与应用，D错误。
故选B。
11. 科学家将4个关键基因导入已分化的肌肉细胞中并表达，使这个细胞成为多能干细胞（iPS细胞），该实验过程如图所示。下列有关叙述正确的是（ ）
A. 应用该技术可提高器官移植的成功率
B. iPS细胞所带遗传信息与肌肉细胞相同
C. 关键基因表达使细胞功能趋向专门化，降低了细胞的分化程度
D. 图示过程体现了iPS细胞的全能性
【答案】A
【解析】
【分析】分析题图：图示表示将4个关键基因移植入已分化的体细胞中并表达，使这个细胞成为具有类似干细胞的诱导多能干细胞（iPS细胞）。图中①②③表示细胞分化，其实质是基因的选择性表达。用该技术得到的新生器官替换供体病变器官，属于自体移植，不发生免疫排斥反应，这可以大大提高器官移植成功率。
【详解】A、用该技术得到的新生器官替换供体病变器官，属于自体移植，不发生免疫排斥反应，这可以大大提高器官移植成功率，A正确；
B、iPS细胞导入了外源基因，其遗传信息与肌细胞不同，B错误；
C、关键基因表达过程将改变肌肉细胞的细胞质环境，使细胞成为具有类似干细胞的诱导多能干细胞，C错误；
D、过程①②③表示细胞分化，其实质是基因的选择性表达，该过程并没有体现iPS细胞的全能性，D错误。
故选A。
12. 水稻对盐度变化极为敏感，常规水稻在盐、碱环境无法生长，中国水稻研究所等单位的专家通过农杆菌中的质粒将多种耐盐基因导入水稻，获得了一批耐盐转基因植株。有关耐盐转基因水稻培育的分析正确的是（ ）
A. 该转基因水稻与原野生型水稻存在生殖隔离
B. 只要目的基因进入水稻细胞，水稻就会表现出抗盐性状
C. 该基因工程所需的限制性核酸内切酶可能有多种
D. 可通过将水稻种植到有农杆菌的土壤中观察目的基因是否表达
【答案】C
【解析】
【分析】基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
【详解】A、转基因属于基因重组，未产生新物种，该转基因水稻与原野生型水稻不存在生殖隔离，A错误；
B、目的基因进入水稻细胞后，还要检测目的基因是否表达，如果不表达水稻不会表现出抗盐性状，B错误；
C、不同的目的基因可能需要不同的限制酶进行切割，因此该基因工程所需的限制性核酸内切酶可能有多种，C正确；
D、可通过将水稻种植到盐碱地观察水稻是否表现出抗盐性状，D错误。
故选C。
13. 用PCR方法检测转基因植株是否成功导入目的基因时，得到以下电泳图谱。其中1号为DNA 标准样液（ Marker ），10号为蒸馏水，PCR时加入的模板DNA如图所示。据此作出的分析，不合理的是（ ）
A. PCR产物的分子大小在250-500bp之间
B. 3号样品为不含目的基因的载体DNA
C. 9号样品对应植株不是所需的转基因植株
D. 10号确定反应体系等对结果没有干扰
【答案】B
【解析】
【分析】PCR过程中，可以通过设计特定的引物来扩增特定的DNA片段。4～9号是转基因植株，理论上应包含目的基因。9号PCR结果不包含250～500bp片段，所以不是所需转基因植株。
【详解】A、PCR过程中，可以通过设计特定的引物来扩增特定的DNA片段。4～9号是转基因植株，理论上应包含目的基因，结合2号野生型和10号蒸馏水组的结果，推测包含目的基因的片段大小应为250～500bp，A正确；
B、3号PCR结果包含250～500bp片段，应包含目的基因，B错误；
C、9号PCR结果不包含250～500bp片段，所以不是所需转基因植株，C正确；
D、10号放入蒸馏水，可排除反应体系等对结果的干扰，D正确。
故选B。
14. α1-抗胰蛋白酶缺乏症是北美常见的一种单基因遗传病，患者成年后会出现肺气肿及其他疾病，严重者甚至死亡。利用基因工程技术将控制该酶合成的基因导入羊的受精卵，最终培育出能在乳腺细胞表达人α1-抗胰蛋白酶的转基因羊，从而更容易获得这种酶。
下列关于该过程的叙述中错误的是
A. 载体上绿色荧光蛋白基因（GFP)的作用是便于筛选含有目的基因的受体细胞
B. 将目的基因导入羊膀胱细胞中，将会更加容易得到α1-抗胰蛋白酶
C. 培养出的转基因羊的所有细胞中都含有该目的基因，故该羊有性生殖产生的后代也都能产生α1-抗胰蛋白酶
D. 目的基因与载体重组过程需要DNA连接酶的催化作用
【答案】C
【解析】
【详解】A、根据题意，该基因工程中，载体上绿色荧光蛋白基因（GFP）的作用是便于筛选含有目的基因的受体细胞，A正确；
B、将目的基因导入羊膀胱细胞中，可获得膀胱生物反应器，不受羊的性别限制，将会更加容易得到α1抗胰蛋白酶，B正确；
C、培养出的转基因羊的虽然所有细胞中都含有该目的基因，但由于其为杂合子，故该羊有性生殖产生的后代不一定能产生α1抗胰蛋白酶，C错误；
D、目的基因与载体重组过程需要DNA连接酶的催化作用，D正确。
故选C。
15. 某生物中发现一种基因的表达产物是具有较强抗菌性和溶血性的多肽P1，科研人员预期在P1的基础上研发抗菌性强但溶血性弱的蛋白质药物，下一步要做的是（ ）
A. 构建含目的肽DNA片段的表达载体
B. 合成编码多肽P1的DNA片段
C. 设计抗菌性强但溶血性弱的蛋白质结构
D. 利用抗原-抗体杂交的方法对表达产物进行检测
【答案】C
【解析】
【分析】1、蛋白质工程指以蛋白质的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行基因改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需要。2、蛋白质工程的过程：预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有氨基酸序列→找到对应的脱氧核苷酸序列（基因）。
【详解】蛋白质工程的过程：预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有氨基酸序列→找到对应的脱氧核苷酸序列（基因）。因此，预期蛋白质功能的下一步要做的是设计预期的蛋白质结构，即设计抗菌性强但溶血性弱的蛋白质结构。C正确，ABD错误。
故选C。
二、选择题
16. 聚羟基脂肪酸脂（PHA）是由嗜盐细菌合成的一种胞内聚酯，它具有类似于合成塑料的理化特性，且废弃后易被生物降解，可用于制造无污染的“绿色塑料”。科学家从某咸水湖中寻找生产PHA菌种的流程图如下，下列说法不正确的是（ ）
①取湖水→②接种在培养基上→③培养→④挑取单菌落，分别扩大培养→⑤检测菌的数目和PHA的产量→⑥获得目标菌株
A. 步骤②可用稀释涂布平板法接种到含合成塑料的选择培养基上
B. 挑取菌落时，应取多个菌落并分别测定嗜盐细菌的PHA含量
C. ④所用到的培养基应加入琼脂，以便挑取单菌落获得纯化菌株
D. 扩大培养时，接种后需要将培养基放入恒温箱倒置培养，以防杂菌污染
【答案】ACD
【解析】
【分析】筛选分离目的微生物的一般步骤是：样品取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株，筛选分离生产PHA菌种需要用稀释涂布平板法或平板划线法接种分离。
【详解】A、步骤②可用稀释涂布平板法接种到含盐量较高的选择培养基上，A错误；
B、挑取菌落时，应挑取多个菌落并分别测定嗜盐细菌的PHA含量，选取嗜盐含量最高的菌株作为目标菌株，B正确；
C、步骤④是扩大培养，不需要加入琼脂，采用液体培养基，C错误；
D、扩大培养应选用液体培养基，不能倒置，D错误。
故选ACD。
17. 人绒毛膜促性腺激素（HCG）是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，制备抗HCG单克隆抗体可用于早孕的诊断。如图是抗HCG单克隆抗体制备流程示意图，下列有关叙述正确的是（ ）
A. ①过程常用灭活的病毒，不可用聚乙二醇
B. ②过程筛选出的杂交瘤细胞都能产生抗HCG抗体
C. ③过程利用的原理是抗原和抗体的特异性结合
D. ④过程需要添加抗生素等物质，以防止病毒污染
【答案】C
【解析】
【分析】分析题图：给小鼠注射HCG，从小鼠的脾脏中获取B淋巴细胞；①过程将该B淋巴细胞与小鼠的骨髓瘤细胞融合；②过程为杂交瘤细胞的筛选与培养；③过程为专一抗体检验并筛选出能产生抗HCG抗体的杂交瘤细胞；④过程为体外培养。
【详解】A、①过程为诱导动物细胞融合，常用的诱导因素有灭活的病毒、聚乙二醇、电激等，A错误；
B、②过程为用特定的选择性培养基筛选杂交瘤细胞，在筛选出的杂交瘤细胞中，有的能产生抗HCG抗体，有的不能产生抗HCG抗体，B错误；
C、③过程是对筛选出的杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，进而筛选出能产生抗HCG抗体的杂交瘤细胞，此过程利用的原理是抗原和抗体的特异性结合，C正确；
D、④过程是借助动物细胞培养技术，将能产生抗HCG抗体的杂交瘤细胞在体外进行大规模培养，在培养过程中需要添加抗生素等物质，以防止杂菌污染，D错误。
故选C。
18. 若要利用某目的基因（图甲）和P1噬菌体载体（图乙）构建重组DNA（图丙），限制性核酸内切酶的酶切位点分别是BglⅡ（A↓GATCT）、EcoRⅠ（G↓AATTC）和Sau3A Ⅰ（↓GATC）。下列分析正确的是（ ）
A. 用EcoRⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体
B. 用BglⅡ和EcoRⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体
C. 用BglⅡ和Sau3AⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体
D. 用EcoRⅠ和Sau3AⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体
【答案】D
【解析】
【分析】
分析题图：用EcoRⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体，产生相同的黏性末端，用DNA连接酶连接时可能会发生反向连接；用BglⅡ和EcoRⅠ切割目的基因切割目的基因会产生两种DNA片段，一种含有目的基因，一种不含目的基因；用BglⅡ和Sau3AI切割目的基因和P1噬菌体载体，也能产生相同的黏性末端，可能会发生反向连接；只有用EcoRⅠ和Sau3AⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体，产生不同的黏性末端，防止发生方向连接，这样目的基因插入运载体后，RNA聚合酶的移动方向肯定与图丙相同。
【详解】A、用EcoRⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体，产生相同的黏性末端，用DNA连接酶连接时可能会发生反向连接，A错误；
B.用BglⅡ和EcoRⅠ切割目的基因切割目的基因会产生两种DNA片段，一种含有目的基因，一种不含目的基因，且有目的基因的片段与运载体结合时容易发生反向连接，B错误；
C、用BglⅡ和Sau3AⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体，也能产生相同的黏性末端，可能会发生反向连接，C错误；
D、只有用EcoRⅠ和Sau3AⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体，产生不同的黏性末端，防止发生反向连接，这样目的基因插入运载体后，RNA聚合酶的移动方向肯定与图丙相同，D正确。
故选D。
19. 利用基因工程技术生产羧酸酯酶（CarE）制剂的流程如图所示，下列叙述错误的是（ ）
A. 过程①需使用DNA聚合酶
B. 过程②需使用解旋酶和PCR获取目的基因
C. 过程③使用的受体细胞可用Ca2+处理制备
D. 过程④可利用PCR技术鉴定目的基因是否已导入受体细胞
【答案】AB
【解析】
【分析】题图分析：图中过程①表示利用mRNA通过反转录法合成相应的cDNA；过程②表示利用PCR技术对目的基因进行扩增；过程③表示将目的基因导入受体细胞；过程④表示通过筛选获得工程菌。
【详解】A、过程①表示利用mRNA通过逆转录合成目的基因，逆转录过程中需要逆转录酶的催化，A错误；
B、过程②表示利用PCR技术对目的基因进行扩增，该过程中不需要利用解旋酶，解旋是通过高温实现的，B错误；
C、过程③由于受体细胞是大肠杆菌，可用Ca2+处理法，利用的Ca2+溶液处理大肠杆菌，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，然后再将重组的基因表达载体导入其中，C正确；
D、过程④可利用通过PCR等技术扩增后，再用DNA分子杂交技术鉴定目的基因是否已导入受体细胞，D正确。
故选AB。
20. 世界首例免疫艾滋病的基因编辑婴儿用到了能够精确定位并修饰基因的基因编辑技术，即基因编辑时用约为头发二十分之一细的针把Cas9蛋白和特定的RNA引导序列注入受精卵中，对CCR5基因进行修改，预期婴儿出生后能天然抵抗人类免疫缺陷病毒，关于该技术的安全性问题，下列说法正确的是（ ）
A. 基因编辑时，引导序列可能发生变异，导致剪切错误，造成不可预知的后果
B. 经过基因编辑的个体，有可能影响基因选择性表达，而导致其他疾病的产生
C. 将基因编辑技术应用于治疗性克隆，符合人类伦理道德
D. 只要加强监管、完善法律法规、完善技术手段，不需担心基因编辑技术的安全性
【答案】ABC
【解析】
【分析】基因编辑技术是指通过核酸酶对靶基因进行定点改造，实现特定DNA的定点敲除、敲入以及突变等，最终下调或上调基因的表达，以使细胞获得新表型的一种新型技术。
【详解】A、基因编辑时的引导序列是RNA，RNA的碱基序列改变可能导致识别错误，导致剪切错误，造成不可预知的后果，A正确；
B、基因编辑后，基因的序列发生改变，基因的表达具有选择性，可以相互影响，基因选择性表达受干扰后，容易导致某些疾病的产生，B正确；
C、依据我国法律，生殖性克隆不符合人类伦理道德，治疗性克隆符合人类伦理道德，C正确；
D、加强监管、完善法律法规、完善技术手段，但基因编辑技术仍存在一定的安全性，所以要理性看待，D错误。
故选ABC。
三、非选择题
21. 太源井晒醋是自贡市的名优土特产品，该产品面市已有150多年的历史。中草药制曲和天然发酵是太源井晒醋与其他食醋的区别。下表表示太源井晒醋不同陈酿方法下的一些理化指标。据表回答下列问题：
项目
自然陈酿
恒温陈酿
总酸（以乙酸计），（g/100mL）≥
6. 50
4. 20
可溶性无盐固形物，（g/100mL）≥
20. 00
5. 00
不挥发酸（以乳酸计），（g/100mL）≥
3. 50
2. 00
还原糖（以葡萄糖计），（g/100mL）≥
3. 00
2. 00
（1）醋的制作需要以_________作为菌种，请写出一个表示制醋原理的反应式__________________。
（2）传统酿醋工艺中，主要是依靠自然界中的菌种，其生产性能不稳定且出醋率低，因而要对菌种进行纯化培养。纯化菌种可用_________法或稀释涂布平板法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。接种前需随机选取若干灭菌后的空白平板先行培养一段时间，其目的是_________。
（3）恒温陈酿时，需将温度控制在_________范围内；由表中数据可知_________法可提高晒醋质量。
【答案】（1） ①. 醋酸菌 ②.
（2） ①. 平板划线 ②. 检测培养基平板是否已彻底灭菌
（3） ①. 30~35°C ②. 自然陈酿
【解析】
【分析】参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。果醋制作的原理：当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的葡萄糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。
【小问1详解】
醋的制作要以醋酸菌为菌种；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸，相关的反应式可表示为：C2H5OH +O2CH3COOH +H2O+能量。
【小问2详解】
微生物纯化的方法是平板划线法和稀释涂布平板法；接种前需随机选取若干灭菌后的空白平板先行培养一段时间，其目的是检测培养基平板是否已彻底灭菌：若培养基灭菌不彻底，则空白平板也会有菌落出现。
【小问3详解】
果醋发酵的适宜温度是30~35°C；据图可知，与恒温陈酿相比，自然陈酿的总酸量、可溶性无盐固形物等含量均相对较高，故自然陈酿法可提高晒醋质量。
22. 产脂肪酶酵母可用于含油废水处理。为筛选产脂肪酶酵母菌株，科研人员开展了相关研究。请回答下列问题：
（1）常规微生物实验中，下列物品及其灭菌方法
编号
①
②
③
④
物品
培养基
接种环
培养皿
涂布器
灭菌方法
高压蒸汽
火焰灼烧
干热
臭氧
正确的是_________（填编号）
（2）称取1. 0g某土壤样品，转入99mL无菌水中，制备成菌悬液，经梯度稀释后，获得细胞密度不同的菌悬液。分别取0. 1ml菌悬液涂布在固体培养基上，其中10倍稀释的菌悬液培养后平均长出了46个酵母菌落，则该样本中每克土壤约含酵母菌_________个。
（3）为了进一步提高酵母菌产酶能力，对分离所得的菌株，采用射线辐照进行诱变育种。将辐照处理后的酵母菌涂布在以_________为唯一碳源的固体培养基上，培养一段时间后，按照菌落直径大小进行初筛，选择直径_________的菌落，纯化后获得A、B两突变菌株。
（4）在处理含油废水的同时，可获得单细胞蛋白，实现污染物资源化。为评价A、B两菌株的相关性能，进行了培养研究，结果如图。据图分析，应选择菌株_________进行后续相关研究，理由是_________.
【答案】（1）①②③ （2）（或460000）
（3） ① 脂肪 ②. 较大
（4） ①. B ②. 该菌株增殖速度快，单细胞蛋白产量高；降解脂肪能力强，净化效果好
【解析】
【分析】1、灭菌指用强烈的物理或化学方法杀灭所有微生物，包括致病的和非致病的，以及细菌的芽孢．常用灭菌方法：灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌法。高压蒸汽灭菌适用于对一般培养基和玻璃器皿的灭菌，干热灭菌适用于空玻璃器皿的灭菌，微生物接种时的金属接种工具和试管口可以用灼烧灭菌。
2、稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释程度的菌液分别涂布到固体培养基的表面，使其均匀分布于平板中的培养基内，经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。
【小问1详解】
培养基一般进行高压蒸汽灭菌，接种环可用火焰灼烧灭菌，培养皿一般通过干热灭菌，涂布器应该用酒精引燃灭菌；故①②③正确。
【小问2详解】
稀释涂布平板法是将样品进行一系列梯度稀释后，获得细胞密度不同的菌悬液，然后涂布到平板上。根据题意，1.0g土壤样品转入99mL无菌水中，制备成菌悬液，稀释了100倍，经系列梯度稀释后，分别取0.1mL菌悬液涂布在固体培养基上，其中10倍稀释的菌悬液培养后长出了46个酵母菌落，则总的稀释倍数为1000倍，故每克土壤中含酵母菌数为46÷0.1×1000=4.6×105个。
【小问3详解】
根据题意，欲提高酵母菌产酶能力，可对分离得到的产脂肪酶酵母菌菌株进行射线辐射，该育种方式为诱变育种。为了能筛选出符合要求的产脂肪酶酵母菌突变株，可配制以脂肪为唯一碳源的培养基，将辐射处理的酵母菌涂布在该固体培养基上，形成单菌落；产脂肪酶能力越强的酵母菌，分解利用脂肪的能力越强，菌落生长越好，一段时间后，按照菌落直径大小进行初筛，选取直径较大的菌落即可。
【小问4详解】
据题图分析可知，相同时间内，菌株B的细胞密度高于菌株A，而菌株B的脂肪剩余量低于菌株A的脂肪剩余量，故进行相关研究可选择菌株B，原因是菌株B增殖速度快，单细胞蛋白的产量也高，同时降解脂肪的能力强，净化效果更好。
23. 应用植物组织培养技术，不仅可实现种苗的快速繁殖、培育无病毒植株，也可加快作物及苗木育种。下面是培育柑橘耐盐植株的实验流程：
回答下列问题
（1）愈伤组织是由离体的茎段经_________过程形成的，愈伤组织经过_________过程形成耐盐植株。在植物组织培养的培养基中除无机营养成分、有机营养成分、琼脂外，还需要添加_________。
（2）对愈伤组织进行了两次处理，处理2中添加的物质X为_________，处理1中γ射线照射的目的是_________，用γ射线不直接处理茎段而是处理愈伤组织，原因是__________________。
（3）植物组织培养技术也被广泛应用于其他作物的育种中。在培育白菜一甘蓝、三倍体无子西瓜、农杆菌转化法获得抗虫棉中，必须用到植物组织培养技术的是__________________。
【答案】（1） ①. 脱分化 ②. 再分化 ③. 植物激素
（2） ①. 氯化钠 ②. 诱导基因突变 ③. 愈伤组织细胞处于不断分裂状态，易受到培养条件和外界压力的影响而产生突变
（3）培育白菜一甘蓝、农杆菌转化法获得抗虫棉
【解析】
【分析】植物组织培养就是在无菌和人工控制的条件下，将离体的植物器官、组织、细胞，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。植物组织培养包括脱分化和再分化两个重要的步骤，这两个步骤都需要植物激素诱导，主要的激素是生长素和细胞分裂素。该激素是植物细胞工程的基础，该技术可以应用微型繁殖、脱毒苗的制备等过程。
【小问1详解】
愈伤组织是离体的茎段脱分化形成的，每个细胞都脱离了原来的分化状态，都具有全能性，愈伤组织经过再分化过程才能形成植株，在植物组织培养过程中，除了加入营养之外，还要加入植物激素，因为植物激素在脱分化和再分化过程中起重要作用。
【小问2详解】
第2次处理是抗盐接种实验，即在培养基中加入氯化钠，适应一定浓度盐的愈伤组织才可以生长，不适应的愈伤组织死亡。γ射线照射的目的是诱导基因突变，使愈伤组织发生突变。因为愈伤组织细胞处于不断地分裂状态，很容易受到培养条件和外界压力的影响而产生突变，因此γ射线不直接处理茎段而是处理愈伤组织，这样可提高突变率。
【小问3详解】
白菜—甘蓝形成的过程中，先要形成杂种细胞，再由杂种细胞形成杂种植株，所以会用到植物组织培养技术；
三倍体无子西瓜的培养过程是：利用秋水仙素处理二倍体西瓜的幼苗，使之变成四倍体植株，再用二倍体西瓜给四倍体西瓜授粉，结出三倍体的种子，第二年将此三倍体的西瓜种子种下去，授以二倍体的花粉，结出三倍体的无子西瓜，整个过程中没有用到植物组织培养技术；
农杆菌转化法获得抗虫棉中，将目的基因导入植物细胞，再通过植物组织培养技术形成植株。
24. 科研人员把猪卵母细胞进行人为的孤雌激活处理，使其发育成胚胎，将胚胎移植到代孕母猪体内，获得世界上第一批成活的孤雌生殖克隆猪。这种克隆猪不同于核移植获得的克隆猪，现将两种技术进行比较.
（1）图中过程①②③④是获得孤雌生殖克隆猪的技术流程，那么获得核移植克隆猪的技术流程是_________（填序号）.
（2）早期胚胎移植时，必须移植到同种且_________的其他雌性动物子宫中，才可能获得成功，要想获得基因型完全相同的胚胎，可采用_________技术。
（3）体细胞核移植技术中也会用到卵母细胞，需要选择_________期的卵母细胞，并用微型吸管吸出_________.
（4）可以从两种不同的克隆猪中提取mRNA进行研究，通过_________方法得到多种cDNA，并通过_________技术扩增产物.
【答案】（1）⑤⑥③④
（2） ①. 生理状态相同 ②. 胚胎分割
（3） ①. MII ②. 细胞核和第一极体
（4） ①. 反转录 ②. PCR
【解析】
【分析】分析题图：图示为体细胞克隆猪的培育流程。其中①表示孤雌激活处理，②表示早期胚胎发育过程，③表示胚胎移植技术，④表示妊娠形成克隆猪，⑤表示核移植过程，⑥表示早期胚胎培养过程。
【小问1详解】
据图可知，①表示孤雌激活处理，②表示早期胚胎发育过程，③表示胚胎移植技术，④表示妊娠形成克隆猪，⑤表示核移植过程，⑥表示早期胚胎培养过程，①②③④过程是获得孤雌生殖克隆猪的技术流程，而⑤⑥③④是获得核移植克隆猪的技术流程。
【小问2详解】
胚胎移植的生理基础之一是动物发情排卵后，同种动物的供、受体生殖器官的生理变化是相同的（受体能为供体胚胎提供相同的生理环境，这是胚胎移植成功的关键），所以早期胚胎移植时，必需移植到同种、生理状态相同的其他雌性动物子宫中，才可能移植成功。受精卵有丝分裂产生的细胞遗传物质相同，利用胚胎分割技术可以获得两个基因型完全相同。
【小问3详解】
因为卵(母)细胞大，容易操作，卵(母)细胞质多，营养丰富，含有促使细胞全能性表达的物质，因此体细胞核移植时，需要选择去核的减数第二次分裂的卵母细胞作为受体细胞，通过显微操作去除卵母细胞中的核，由于减数第二次分裂中期卵母细胞核的位置靠近第一极体，用微型吸管可一并吸出细胞核和第一极体。
【小问4详解】
以mRNA为模板合成cDNA的过程称为反转录，获得DNA后，还可通过PCR技术体外扩增。
25. 中国T2DM（胰岛β细胞功能衰退型糖尿病）的发病率由1979年的1. 00%上升到2019年的4. 37%，补充胰岛素是控制和缓解病情的重要途径。胰岛素（由α、β两条多肽链组成）的生产由提取动物胰岛素发展到了利用基因工程生产重组人胰岛素。
（1）构建完成的表达载体除了目的基因、标记基因以外，还必须有_________等调控组件。
（2）利用大肠杆菌生产重组人胰岛素时，构建表达载体的目的基因应从_________文库中获取，重组大肠杆菌合成的人胰岛素原没有活性，需用_________酶将其加工成含α、β两条多肽链的胰岛素。
（3）利用奶牛设计乳腺生物反应器生产人胰岛素，为使人胰岛素基因在奶牛乳腺中特异表达，构建表达载体时应将目的基因与_________的启动子等调控组件重组在一起，并选用_________为受体细胞.
（4）重组人胰岛素分子容易发生聚合而影响作用效果，可将胰岛素分子的氨基酸序列及结构进行局部调整，形成胰岛素类似物加以避免。请根据上述设想，补充完善其基本研发流程：预期蛋白质功能→设计预期蛋白质的空间结构→推测氨基酸序列→__________________→构建表达载体，转基因获得胰岛素类似物.
【答案】（1）启动子、终止子、复制原点
（2） ①. cDNA ②. 蛋白
（3） ①. 奶牛乳腺蛋白基因 ②. 受精卵
（4）找到相对应的脱氧核苷酸序列（基因）
【解析】
【分析】分析题图：外源DNA分子中含有限制酶SmaⅠ、PstⅠ、AluⅠ的识别序列和切割位点，质粒中含有限制酶SmaⅠ、PstⅠ、AluⅠ、HindⅢ的识别序列和切割位点。
【小问1详解】
一个基因表达载体的构成，除了需要表达的基因以外，还需要启动子、终止子、复制原点和标记基因等，标记基因一般使用某种抗生素的抗性基因以便后期的筛选，因此，基因表达载体的结构组成：启动子、目的基因、终止子、标记基因及复制原点。
【小问2详解】
将真核基因导入原核生物时，一般从cDNA文库中获取目的基因；重组大肠杆菌合成的人胰岛素原没有活性，胰岛素原的化学本质为蛋白质，需用蛋白酶将其加工成含α、β两条多肽链的胰岛素。
【小问3详解】
利用奶牛设计乳腺生物反应器生产人胰岛素，为使人胰岛素基因在奶牛乳腺中特异表达，构建表达载体时应将目的基因与奶牛乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，并选用受精卵为受体细胞。
【小问4详解】
重组人胰岛素分子容易聚合而影响作用效果，可将胰岛素分子的氨基酸序列及结构进行局部调整形成胰岛素类似物加以避免，这需要采用蛋白质工程技术，因此基本研发流程为：预期蛋白质功能→设计预期蛋白质的空间结构→推测氨基酸序列→推测氨基酸序列→找到相对应脱氧核苷酸序列（改造基因）→构建表达载体，转基因获得胰岛素类似物。
26. 四尾栅藻生长周期短、适应性强，是一种高潜力生物柴油新型原料，但油脂产量低。研究人员从含油量高的紫苏中提取DGATl（催化油脂合成的关键酶）基因，并成功导入四尾栅藻细胞内，获得转基因的产油四尾栅藻。其制备流程如图，图中Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，LacZ基因可使细菌分解培养基中的物质X-gal，进而使菌落呈现蓝色，无该基因或该基因被破坏，菌落呈白色。回答下列问题：
（1）从高表达的紫苏组织细胞中提取总的RNA，经_________获得cDNA，用于PCR扩增，PCR扩增DGATl基因时，使反应体系中的模板cDNA解旋为单链的条件是__________________。
（2）在DNA延伸的过程中，使用Taq DNA聚合酶而不使用大肠杆菌DNA聚合酶的主要原因是_____。
（3）构建的pMD19-DGATl导入经CaCl2溶液处理的感受态大肠杆菌细胞中，并通过稀释涂布平板法接种到含_________的培养基中培养。一段时间后，挑选_________色的菌落以提取质粒pMD19-DGATl。
（4）用限制酶BamH I和Xba I切割pMD19-DGATl和pBI121，将其连接成重组表达载体pBI121-DGATl， 并将其导入四尾栅藻细胞中。与单酶切相比，双酶切的优点是________。
【答案】（1） ①. 逆转录 ②. 加热至90°C
（2）Taq DNA聚合酶热稳定性高而大肠杆菌DNA聚合酶在高温下失活
（3） ①. X-gal和氨苄青霉素 ②. 白
（4）使DGATl基因能定向插入表达载体，避免载体自身环化
【解析】
【分析】图中获得转基因的产油四尾栅藻过程为：首先提取紫苏细胞的总RNA经逆转录得到的cDNA，再获得DGAT1基因，再将DGAT1基因与克隆质粒pMD19结合，形成重组质粒，然后将其导入到经CaCl2处理后的处于感受态的大肠杆菌细胞，并接种到添加氨苄青霉素和X-gal的培养基培养、筛选。
【小问1详解】
cDNA是逆转录获得的， 在逆转录酶作用下，以mRNA为模板按照碱基互补配对原则合成cDNA。PCR技术中，采用90-95°C高温使双链DNA解螺旋为单链。
【小问2详解】
酶大多都是蛋白质，都需要适宜的温度发挥催化作用，普通的大肠杆菌的DNA聚合酶的最适合温度基本不会超过40度，但是在PCR反应中，加热的温度会高达90度，此时的普通DNA聚合酶会变性失活，无法使用，而Taq 酶是耐热的DNA聚合酶，可以使用。
【小问3详解】
构建的pMD19-DGATI导入到经CaC12溶液处理的感受态大肠杆菌细胞中，基因中含有LacZ基因的大肠杆菌可以利用培养物质中的X-gal来使菌落呈现蓝色，通过稀释涂布平板法将大肠杆菌细胞接种到含氨苄青霉素和X-gal的培养基中培养，LacZ基因成功表达目的基因的菌落呈现蓝色，成功导入基因的大肠杆菌菌落呈现白色，故一段时间后，挑选白色的菌落以提取质粒PMD19-DGATI。
【小问4详解】
单酶切切割后的运载体两端的黏性末端相同，可能会导致目的基因和运载体自身环化和反向连接，采用双切酶切割后的运载体黏性末端不同，故可以控制外源基因插入方向，避免载体自身环化，提高重组效率。
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