高考生物二轮复习（15）基因工程和细胞工程训练含答案

  整合训练(十五)　基因工程和细胞工程

 [全员必做题]

1．[2019·河南省洛阳市统考]草莓营养价值高且有保健功效，但却容易受到病毒的感染。科学家常采用两种方法培育新品种：其一，培育无病毒组培苗；其二，将草莓轻型黄边病毒的外壳蛋白基因(SMYELV－CP)导入草莓基因组中培育出转基因抗病毒草莓。请分析回答下列问题：

(1)若培育无病毒组培苗，通常取植株的________进行组织培养。

(2)利用PCR技术扩增目的基因SMYELV－CP，其前提是________________________，以便根据这一序列合成引物。为维持pH基本不变，需要在PCR反应体系中加入________。

(3)重组载体上应含有特定的________(填“复制原点”、“启动子”或“标记基因”)，它能被受体细胞的________________所识别，以便于催化转录过程。为检测目的基因是否转录出mRNA，常采用分子杂交技术，该技术的具体做法是________________________________________________________________________

________________________________________________________________________。

(4)草莓根系分布浅蒸腾量大，对水分要求严格。我国西北一些地区曾大量种植草莓，但由于降雨量少，致使许多地方的草莓长成半死不活状，其失败的原因主要是违背了________________原理。

解析：(1)植物的茎尖或根尖等分生区细胞几乎不含病毒，因此培育无病毒组培苗通常采用植株茎尖或根尖等分生区进行组织培养。(2)利用PCR技术扩增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物。为维持pH基本不变，需要在PCR反应体系中加入缓冲液。(3)为保证目的基因的表达，重组载体上应含有特定的启动子，它能被受体细胞的RNA聚合酶所识别，以便于催化转录过程。为检测目的基因是否转录出mRNA，常采用分子杂交技术，该技术的具体做法是：从转基因生物中提取mRNA，用标记的目的基因作探针与mRNA杂交。如果显示出杂交带，则表明目的基因转录出了mRNA。(4)我国西北一些地区曾大量种植草莓，但由于降雨量少，致使许多地方的草莓长成半死不活状，其失败的原因主要是没有考虑生物与环境相适应，违背了生态工程遵循的协调与平衡原理。

答案：(1)分生区附近(如茎尖)　(2)要有一段已知目的基因的核苷酸序列　缓冲液　(3)启动子　RNA聚合酶　从转基因生物中提取mRNA，用标记的目的基因作探针与mRNA杂交。如果显示出杂交带，则表明目的基因转录出了mRNA　(4)协调与平衡

2．[2019·安徽滁州高三期末]苹果等果实的果肉细胞液泡中有丰富的无色的多酚类营养物质，其他一些囊泡结构中含有多酚氧化酶(PPO)，催化多酚氧化成褐色物质，此过程称为果实褐变。科学家利用基因沉默技术培育了一种不褐变的转基因苹果。回答下列问题：

(1)将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是__________________，该方法中需将目的基因插入到农杆菌的__________________上。

(2)培育不褐变的苹果采用的是第二代基因工程技术，导入的是苹果细胞原本就有的多酚氧化酶基因(PPO基因)，当细胞内有许多份PPO基因时，PPO基因____________________形成的mRNA之间容易形成双链区而失去________________机会，从而导致多酚氧化酶含量大大减少。基因沉默分为转录水平的沉默(TGS)和转录后水平的沉默(PTGS)，则培育不褐变苹果的转基因沉默属于______________(填“TGS”或“PTGS”)。

(3)可用________________酶从苹果基因组中切取PPO基因，也可用PCR技术从苹果基因组中克隆出PPO基因，则要实现PCR定点克隆DNA片段，最关键的是设计________________。

解析：(1)将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是农杆菌转化法，此外还有基因枪法、花粉管通道法等；该方法中，应该将目的基因插入到农杆菌Ti质粒的T－DNA(可转移DNA)上。(2)PPO基因通过转录形成mRNA，若形成的mRNA过多，相互之间容易形成双链区，导致不能正常翻译形成蛋白质(多酚氧化酶)，导致多酚氧化酶含量大大降低；由于以上过程导致翻译不能正常进行，因此属于转录后水平的沉默(PTGS)。(3)PPO基因为目的基因，可以利用限制酶对其进行切割；实现PCR定点克隆DNA片段的技术是PCR，该技术最关键是设计引物序列。

答案：(1)农杆菌转化法　Ti质粒的T—DNA

(2)转录　翻译　PTGS　(3)限制　引物序列

3．[2019·广东省珠海市质量监测]α­抗胰蛋白酶可以治疗肺气肿等疾病。下图是科学家培育含人α­抗胰蛋白酶因子基因(mAAT)的转基因山羊的流程图，请回答下列相关问题：

获取mAAT基因→构建基因表达载体→显微注射导入山羊受精卵→形成胚胎→将胚胎移入受体母羊→发育成转基因山羊

(1)利用PCR技术对mAAT基因进行扩增，前提是要有一段以mAAT基因的核苷酸序列为模板合成的________。扩增过程中，该物质与DNA模板链的3′端结合，理由是

________________________________________________________________________。

(2)目的基因可以直接从生物体分离得到，也可以通过人工合成获取。请推测由mRNA反转录合成人α­抗胰蛋白酶因子基因(mAAT)的大致过程：________________________________________________________________________

________________________________________________________________________(用文字和箭头表述)。

(3)构建基因表达载体的目的是________________________________________________________________________

________________________。为了使mAAT基因只在山羊乳腺中表达，需要在构建表达载体时在mAAT基因前端加上在乳腺中特异性表达的________，同时还需要有标记基因，其作用是________________________________________________________________________

________________________________________________________________________。

(4)胚胎移植中，应选择有________________________的个体作为受体母羊，并对受体母羊进行同期发情处理。

解析：(1)利用PCR技术对mAAT基因进行扩增，前提是要有一段以mAAT基因的核苷酸序列为模板合成的引物。由于DNA合成时只能从3′端延伸，因此扩增过程中，该物质应与DNA模板链的3′端结合。(2)由mRNA反转录合成人α­抗胰蛋白酶因子基因(mAAT)的大致过程：mRNADNA、RNA杂交双链→单链DNA人α­抗胰蛋白酶因子基因(mAAT)。(3)构建基因表达载体的目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在并可遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。启动子是转录过程中RNA聚合酶的识别位点，为了使mAAT基因只在山羊乳腺中表达，需要在构建表达载体时在mAAT基因前端加上在乳腺中特异性表达的启动子；标记基因的作用是将含有目的基因的细胞筛选出来。(4)胚胎移植中，应选择有健康体质和正常繁殖能力的个体作为受体母羊，并对受体母羊进行同期发情处理。

答案：(1)引物　DNA合成只能从3′端延伸　(2)mRNADNA、RNA杂交双链→单链DNA人α­抗胰蛋白酶因子基因(mAAT)　(3)使目的基因在受体细胞中稳定存在并可遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用　启动子　将含有目的基因的细胞筛选出来　(4)健康体质和正常繁殖能力

4．[2019·广东省六校高三联考理综试题]我国某些地区常年干旱少雨，将小麦耐旱基因TaLEA3导入到不耐旱的药用植物丹参中，可提高后者的耐旱性。回答下列问题：

(1)TaLEA3基因是种子成熟后期大量表达的一类基因，请推测该基因所表达蛋白的主要功能是________________________________________________________________________

________________________________________________________________________。(答出两点即可)

(2)为确认该耐旱基因是否在再生植株中正确表达，应检测此再生植株中该基因的________，如果检测结果呈阳性，再在田间试验中检测植株的________是否得到提高。

(3)假如用得到的二倍体转基因耐旱植株自交，子代中耐旱与不耐旱植株的数量比为3：1时，则可推测该耐旱基因的整合情况是________________________________________________________________________。

(4)叶绿体内大多数基因的排列方式、转录与翻译系统均与________(填“原核生物”或“真核生物”)相似，将目的基因导入到叶绿体基因组内能避免传统基因工程所带来的基因污染，其原因是________________________________________________________________________

________________________________________________________________________。

解析：(1)TaLEA3基因属于小麦耐旱基因，其表达的蛋白质可以保护细胞中的酶免受细胞脱水而损伤、保护细胞器如线粒体免受细胞脱水而损伤、保护细胞膜免受细胞脱水而损伤。(2)检测耐旱基因是否正确表达，可利用抗原—抗体杂交实验，因此应检测此再生植株中该基因的表达产物。如果检测结果呈阳性，还需要进行个体生物学水平鉴定，即需要在田间试验中检测植株的耐旱性是否真正得到提高。(3)二倍体转基因耐旱植株自交，子代中耐旱与不耐旱植株的数量比为3：1时，说明其亲本为杂合体，则可推测一个耐旱基因整合到了不耐旱植株的一条染色体上，而另一条染色体上无耐旱基因。(4)叶绿体内的DNA未与蛋白质结合形成染色体，与原核生物相似。因此叶绿体大多数基因的排列方式、转录与翻译系统均与原核生物相似。将目的基因导入到叶绿体基因组内能避免传统基因工程所带来的基因污染，其原因是叶绿体基因组不会进入花粉中，随花粉传递，而可能造成的“基因逃逸”问题。

答案：(1)①保护细胞中的酶免受细胞脱水而损伤；②保护细胞器如线粒体免受细胞脱水而损伤；③保护细胞膜免受细胞脱水而损伤

(2)表达产物　耐旱性

(3)一个耐旱基因整合到了不耐旱植株的一条染色体上

(4)原核生物　叶绿体基因组不会进入花粉中，随花粉传递，而可能造成的“基因逃逸”问题

5．[2019·四川省诊考]由于“人—人杂交瘤技术”存在杂交瘤细胞体外传代不稳定、抗体亲合力低等缺陷，目前单克隆抗体大多是鼠源性的，应用于人体治疗时存在诸多问题。科学家通过基因工程技术，可以最大程度降低抗体的鼠源性，降低甚至消除人体对抗体的排斥反应。回答下列问题：

(1)从经过抗原免疫个体的________细胞中提取mRNA，通过________方法获取目的基因。将目的基因在体外大量扩增可以采用________技术。

(2)为防止目的基因与质粒发生自身环化与随意连接，在切割目的基因和质粒时，应该注意________________________________________。为了使重组质粒更易导入受体菌完成转化过程，可以采用________处理受体菌。

(3)检测受体细胞是否合成抗体的方法是________________________。基因工程制备的单抗与杂交瘤技术制备的单抗相比，最突出的优点是________________________________________________________________________。

解析：(1)获取制备单克隆抗体的目的基因，可以从经过抗原免疫个体的浆细胞中提取mRNA，然后通过逆转录的方法获得DNA，将目的基因在体外大量扩增可以采用PCR技术。(2)为防止目的基因与质粒发生自身环化与随意连接，在切割目的基因和质粒时，应该注意使用不同限制酶切割目的基因与质粒，以形成不同的黏性末端。为了使重组质粒更易导入受体菌完成转化过程，可以采用CaCl2处理受体菌。(3)检测受体细胞是否合成抗体的方法是抗原－抗体杂交。基因工程制备的单抗与杂交瘤技术制备的单抗相比，最突出的优点是不具有特异细胞的抗原性、能避免产生排斥反应。

答案：(1)浆　逆转录　PCR　(2)使用不同限制酶切割目的基因与质粒　CaCl2　(3)抗原－抗体杂交　不具有特异细胞的抗原性、能避免产生排斥反应

6．[2019·天津一中高三月考]Bt基因即苏云金芽孢杆菌基因，因其表达产物Bt毒蛋白具有杀虫效果好、安全、高效等优点而成为应用最为广泛的转杀虫基因。下图为培育转Bt基因抗虫棉幼苗的基本操作过程，请分析回答：

(1)Bt基因可从构建的Bt基因组文库中获取，也可以从其cDNA文库中获取。从前者获取的Bt基因________(含有/不含有)启动子。

(2)若利用PCR技术从cDNA文库中获取Bt基因(基因序列未知)，需根据Bt蛋白中的氨基酸序列设计引物，引物的序列可以有多种，原因是________________________________________________________________________

________________________。在PCR体系中需加入其中的________(全部/任意1种/其中2种)引物。若Bt基因序列已知，则引物的序列通常为________种。

(3)在构建基因表达载体的过程中，为了方便筛选含有目的基因的细胞，作为运载体的Ti质粒应含有________，Ti质粒中能帮助目的基因整合到宿主细胞染色体上的序列称为________________。

解析：(1)某种生物的基因组文库包含了这种生物的所有基因。因此，从Bt基因组文库中获取的Bt基因含有启动子。(2)根据Bt蛋白中的氨基酸序列设计引物，首先要根据基因表达过程推知基因的碱基序列。由于一种氨基酸可能有多种密码子，对应生物DNA碱基序列就会有多种。因此，根据Bt蛋白中的氨基酸序列设计的引物序列会有多种。多种引物中只有两种引物与单链相应互补序列结合，因此，若基因序列未知，在PCR体系中需加入其中的全部引物；若基因序列已知，则通常每条单链对应一种引物，引物的序列为2种。(3)一个基因表达载体包含目的基因、启动子、终止子、标记基因等，标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的受体细胞筛选出来。因此在构建基因表达载体的过程中，为了方便筛选含有目的基因的细胞，作为运载体的Ti质粒应含有标记基因。农杆菌中的Ti质粒上的T－DNA片段(可转移的DNA)可帮助目的基因整合到宿主细胞染色体上。

答案：(1)含有　(2)一种氨基酸可能有多种密码子，对应生物DNA碱基序列就会有多种　全部　2　(3)标记基因　T－DNA(可转移DNA)

[重点选做题]

1．[2019·广东湛江高三综测]目前明星代言药品广告成了人们的热议，某广告声称其有效成分是一种基因工程生产的蛋白质，服用后具有一定的抑癌功效，你认为其不科学之处是__________________。某生物兴趣小组的同学从资料上获知：二氯二乙胺能够与DNA分子发生反应，从而阻止参与DNA复制的酶与DNA相互作用。他们推测：二氯二乙胺能抑制癌细胞的增殖，并就此问题设计实验进行了探究。

实验材料：肝部长有肿瘤的小鼠、二氯二乙胺溶液、蒸馏水、生理盐水、含有全部营养物质的细胞培养液、显微镜、血球计数板、试管、吸管等。

(1)其中某位同学实验操作如下：(请将实验内容补充完整)

①在无菌培养皿中加入适量的培养液，切取肿瘤组织，剪碎并用胰蛋白酶处理，使其分散开来，置于摇床上培养。

②取无菌的试管5支，加入适量的培养液，编号1、2、3、4、5，并在1—4号试管中加入适量的不同浓度的二氯二乙胺溶液，5号试管中加入________________________________________________________________________。

③从培养皿中吸取等量的培养液置于1—5号试管中，振荡后，在冰箱中培养一段时间。

④取出5支试管振荡后，从中吸取等量的培养液置于血球计数板内，在显微镜下计数，记录数据。

(2)请你纠正该同学操作上的错误①________________________________________________________________________；

②______________________。

(3)另一位同学按照正确的方法进行实验，得到的结果如下：

根据实验结果，你能得出的结论是________________________________________________________________________

________________________________________________________________________。

解析：本题以实验为依托，考查学生对实验结果的分析和处理能力。由题意准确把握实验目的(探究二氯二乙胺能抑制癌细胞的增殖)，据此找出实验变量(自变量、因变量、无关变量)；依据实验设计应遵循的单一变量原则和对照原则等，分析实验步骤的合理性并将其加以修正和完善；依据从表中提取的有效信息，采取对比法认真分析表中数据的变化规律，进而对相应问题进行解答。蛋白质是大分子物质，不能直接被人体吸收；服用后，在消化道中的蛋白酶的催化作用下，蛋白质被水解为氨基酸后，才能被人体吸收利用。(1)实验设置应遵循等量原则、对照原则，所以在实验操作②中，5号试管中应加入等量的生理盐水，和前4只试管进行对照。(2)分析实验步骤可知，在操作过程中有两处错误：①是步骤②中的“适量”不科学，应改为“等量”；②是步骤③中“在冰箱中培养”不科学，应改为在“适宜温度下培养”或“在恒温箱”中培养。(3)表中数据显示：随着二氯二乙胺浓度逐渐增大，每毫升培养液中细胞数目逐渐减小，说明在一定浓度范围(实验浓度范围)内，二氯二乙胺具有抑癌作用，且作用效果随浓度增加而增加。

答案：蛋白质需水解为氨基酸后，才能被人体吸收利用　(1)等量的生理盐水

(2)步骤②中的“适量”不科学　步骤③中“在冰箱中培养”不科学

(3)在一定浓度范围(实验浓度范围)，二氯二乙胺具有抑癌作用；且效果随浓度增加而增加

2．[2019·山东德州高三一模]双特异性单克隆抗体是指可同时与癌细胞和药物结合的特异性抗体。下图是科研人员通过杂交—杂交瘤细胞技术(免疫的B细胞和杂交瘤细胞杂交技术)生产能同时识别癌胚抗原和长春碱(一种抗癌药物)的双特异性单克隆抗体的部分过程。分析回答：

(1)过程①的目的是________________________________________________________________________

________，制备双特异性单克隆抗体的过程中用到的技术有________________________________________________________________________(至少答出两条)。

(2)过程②诱导融合的方法是________________，过程②选用的骨髓瘤细胞________(填“能”或“不能”)在HAT培养基上生长。

(3)经过程③筛选得到的细胞还需转移至多孔培养板中进行过程④，原因是________________________________________________________________________。

(4)请根据所学知识，用箭头和文字在图中方框内补全获取单克隆杂交—杂交瘤细胞的生产过程。

(5)获得的单克隆杂交—杂交瘤细胞在体外条件下培养或__________________，均可提取出大量的双特异性单克隆抗体。

解析：(1)过程①表示给小鼠注射抗原，目的是刺激小鼠产生能分泌识别癌胚抗原抗体的浆细胞(B淋巴细胞)；根据单克隆抗体制备流程可知，该过程涉及到的技术有动物细胞融合技术、动物细胞培养技术。(2)过程②诱导细胞融合的方法有聚乙二醇诱导、电激等；HAT选择培养基的作用是筛选出杂交瘤细胞，而骨髓瘤细胞不能生长。(3)从小鼠体内提取的B淋巴细胞不止一种类型(筛选得到的杂交瘤细胞产生的抗体并不是单克隆抗体)，因此经过程③筛选得到的细胞还需转移至多孔培养板中继续进行过程④。(4)单克隆抗体制备过程为，将获得的B淋巴细胞与单克隆杂交瘤细胞融合→在选择培养基上筛选出杂交—杂交瘤细胞→克隆化培养、抗体检测筛选出单克隆的杂交—杂交瘤细胞。(5)获得的单克隆杂交—杂交瘤细胞在体外条件下培养或注射到小鼠腹腔内增殖，均可提取出大量的双特异性单克隆抗体。

答案：(1)使小鼠产生能分泌识别癌胚抗原抗体的浆细胞(B淋巴细胞)　动物细胞融合、动物细胞培养

(2)聚乙二醇(PEG)诱导、电激等　不能

(3)从小鼠体内提取的B淋巴细胞不止一种类型(筛选得到的杂交瘤细胞产生的抗体并不是单克隆抗体)

(4)将获得的B淋巴细胞与单克隆杂交瘤细胞融合→在选择培养基上筛选出杂交—杂交瘤细胞→克隆化培养、抗体检测筛选出单克隆的杂交—杂交瘤细胞

(5)注射到小鼠腹腔内增殖

3．[2019·四川达州一诊]现代生物工程技术推动了医药学、免疫学和生态学的发展，依据现代生物工程技术的相关知识和原理回答下列问题：

(1)胚胎移植时，受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生________反应，这为胚胎在受体内的存活提供了可能。通过试管动物技术培养发育成的早期胚胎，再经过________________可产生多个基因型相同的后代。

(2)单克隆抗体的制备中，将经抗原免疫的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，再用特定的________培养基进行筛选，获得杂交瘤细胞后，还需进行________________，经过多次筛选，就能获得能分泌单一抗体的杂交瘤细胞。最后获得的杂交瘤细胞只能产生单一抗体的原因是________________________________________________________________________

________________________________________________________________________。

(3)科学家将生长激素基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，通过________________等方法，导入哺乳动物的受精卵中，获得转基因动物，再利用________________技术获得大量的转基因克隆动物作为乳腺生物反应器，来生产生长激素，用于治疗矮小症。

解析：(1)胚胎移植时，受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应，这为胚胎在受体内的存活提供了可能。通过试管动物技术培养发育成的早期胚胎，再经过胚胎分割和胚胎移植可产生多个基因型相同的后代。(2)单克隆抗体的制备中，将经抗原免疫的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，再用特定的选择性培养基进行筛选，获得杂交瘤细胞后，还需进行克隆化培养和抗体检测，经过多次筛选，就能获得能分泌单一抗体的杂交瘤细胞。获得的杂交瘤细胞只能产生单一抗体的原因是：每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。(3)科学家将生长激素基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，通过显微注射技术等方法，导入哺乳动物的受精卵中，获得转基因动物，再利用动物体细胞核移植技术获得大量的转基因克隆动物作为乳腺生物反应器，来生产生长激素。

答案：(1)免疫排斥　胚胎分割和胚胎移植　(2)选择性　克隆化培养和抗体检测　每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体　(3)显微注射技术　动物体细胞核移植

4．[2019·河北唐山高三一模]内蒙古农业大学生命科学院培育出世界首例转乳糖分解酶基因奶牛，为培育“低乳糖奶牛”新品种提供了重要的技术基础。

(1)乳糖分解酶可以将乳糖分解为________________________________________________________________________。

(2)目的基因的获取方法：从________、人工合成。人工合成目的基因的常用方法有________________________________________________________________________。

(3)乳糖分解酶基因表达载体的组成，必须有______________和标记基因，标记基因的作用是__________________________。将乳糖分解酶基因表达载体导入________(细胞)中，一般导入的方法为________。

(4)培育转乳糖分解酶基因奶牛的过程中，利用了________________________________技术。

解析：(1)乳糖为二糖，乳糖分解酶可以将乳糖分解为半乳糖和葡萄糖。(2)目的基因的获取方法有：从基因文库中获得、PCR扩增和人工合成；人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。(3)乳糖分解酶基因表达载体的组成，必须有乳糖分解酶基因(目的基因)、启动子、终止子和标记基因；其中标记基因的作用是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来；要培育转乳糖分解酶基因奶牛，需要将乳糖分解酶基因表达载体导入(奶牛)受精卵中，一般导入的方法为显微注射法。(4)培育转乳糖分解酶基因奶牛的过程中，利用了基因工程(转基因)、早期胚胎培养(动物细胞培养)和胚胎移植技术。

答案：(1)半乳糖和葡萄糖

(2)基因文库中获得、PCR扩增　反转录法和化学合成法

(3)乳糖分解酶基因(目的基因)、启动子、终止子　为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来　(奶牛)受精卵　显微注射法

(4)基因工程(转基因)、早期胚胎培养(动物细胞培养)、胚胎移植

5．[2019·四川广安市、眉山市、内江市等六市二诊]利用小鼠胚胎干细胞能诱导出多种细胞，进而还可以用于制备单克隆抗体，某研究团队设计的技术流程如图。回答下列问题：

(1)技术流程中的①过程，可用____________酶处理内细胞团获得一个胚胎干细胞；②过程所采用的技术是____________；④过程的核心步骤是________________________________________________________________________。

(2)甲细胞与乙细胞融合形成丙细胞，常采用的生物融合剂是____________，丙细胞的特点是________________________________________________________________________。

(3)图中的乙细胞是从小鼠体内获得的____________细胞。单克隆抗体的应用中，利用____________反应，可以诊断和防治多种疾病，可以研究相应抗原的结构、____________________及其功能。

解析：(1)①过程可用胰蛋白酶处理内细胞团，使细胞相互分离，获得一个胚胎干细胞；②过程是将一个胚胎干细胞培养成胚胎干细胞群，采用的技术是克隆培养法(细胞克隆)；④过程是基因工程，核心步骤是重组DNA的构建。(2)动物细胞融合采用的生物融合剂是灭活的仙台病毒，丙细胞的特点是既能无限增殖，又能产生特异性抗体。(3)图中的乙细胞是从小鼠体内获得的浆细胞。单克隆抗体的应用中，利用抗原—抗体杂交反应，可以诊断和防治多种疾病，可以研究相应抗原的结构、细胞学分布及其功能。

答案：(1)胰蛋白　克隆培养法　重组DNA的构建

(2)灭活的病毒　既能无限增殖，又能产生特异性抗体

(3)浆(B淋巴)　抗原—抗体杂交　细胞学分布

6．[2019·山东济南模考]蓝藻兼具微生物和植物的优点，是一种独特的基因工程受体系统。很多蓝藻含有质粒，但其质粒不能直接作为运载体，需要构建成穿梭质粒表达载体，才能使目的基因在蓝藻中有效的复制和表达。回答下列问题：

(1)据图1推测，与普通基因表达载体相比，穿梭质粒表达载体既能在________中复制，也能在________中复制。为了筛选转入了穿梭质粒表达载体的蓝藻，应在选择性培养基中添加________。

(2)若大肠杆菌作为受体细胞时，应选用________处理使其成为感受态细胞。采用基因枪法将目的基因导入蓝藻前，可使用________(填“纤维素酶和果胶酶”或“溶菌酶”或“胶原蛋白酶”)去除蓝藻的细胞壁。

(3)已知DNA复制时，子链的延伸方向是5′→3′。使用PCR技术检测转基因蓝藻中是否存在人胸腺素基因，可选择图2中1、2、3、4四种单链DNA片段中的________作为引物，此过程还需要________________酶。

解析：(1)据图1推测，与普通基因表达载体相比，穿梭质粒表达载体既能在大肠杆菌中复制，也能在蓝藻中复制。为了筛选转入了穿梭质粒表达载体的蓝藻，应在选择性培养基中添加卡那霉素。(2)若大肠杆菌作为受体细胞时，应选用CaCl2处理使其成为感受态细胞。采用基因枪法将目的基因导入蓝藻前，要先去掉其细胞壁，纤维素酶和果胶酶用于去除植物细胞壁，胶原蛋白酶用于动物细胞培养中使细胞分散开，因此去除蓝藻的细胞壁可用溶菌酶。(3)据图2分析，由于DNA复制时，子链的延伸方向是5′→3′，因此设计引物时应选择2、3，PCR还需要热稳定的DNA聚合酶(或Taq酶)。

答案：(1)大肠杆菌　蓝藻　卡那霉素　(2)Ca2＋　溶菌酶

(3)2和3　热稳定DNA聚合(或Taq)